CN102307586A - 用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的化合物及方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种用于治疗和预防由自体反应性T细胞介导的自身免疫性疾病例如多发性硬化症的方法和组合物。施用NOD-1激动剂显示出介导抗炎免疫反应。适用于本发明方法和组合物的NOD-1激动剂包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物，例如，Tri-DAP和M-TriDAP。

Description

用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的化合物及方法

技术领域

本发明涉及用于治疗和预防由T-辅助细胞17(Th17)和/或T-辅助细胞1(Th1)T淋巴细胞(T细胞)介导的疾病状况的组合物和方法。特别地，本发明涉及含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物用于治疗由自体反应性Th17和Th1T淋巴细胞介导的疾病状况的用途。本发明的化合物和方法还在调节免疫反应的方法中有用处，所述调节免疫反应是通过抑制细胞因子白细胞介素17(IL-17)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的产生，同时增强IL-27、IL-10和IL-35的表达。

背景技术

针对特定疾病的保护性免疫依赖于由先天免疫系统的抗原递呈细胞(APC)例如树突细胞(DC)和巨噬细胞对特异性促炎性T细胞(T淋巴细胞)群的区别诱导。负责介导针对广泛病原体的细胞免疫的两个这样的T细胞群体是Th1和Th17细胞。T细胞群体Th1和最近的Th17都被显示为自身免疫性疾病和慢性炎性疾病的介导剂(medicator)，以及因此被用作免疫抑制剂的相关细胞靶。此外，DC，作为T细胞反应的起始物，因此成为设计来对抗炎性疾病的治疗法的第二细胞靶。

多发性硬化症是中枢神经系统(CNS)的炎性自身免疫性紊乱，其特征是CNS中的T细胞、B细胞、巨噬细胞、局灶性脱髓鞘斑块的炎性浸润。已显示Th1和Th17细胞介导的应答在炎性脱髓鞘的发展中发挥了重要作用。来自于MS患者的髓鞘反应性T细胞产生与Th1介导的应答一致的细胞因子，而来自于患者的MS损伤的微点阵研究显示了增加的IL-表达。

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是一种炎性脱髓鞘病的动物模型，其具有多发性硬化症(MS)的临床和神经病理性变化。这样说来，对于仔细分析自身免疫性炎症应答尤其是MS的机制而言，EAE是一种相关的和有用的模型。虽然有显示CD8⁺T细胞在EAE的诱导中的致病作用，但是长久以来，人们认为EAE主要是CD4⁺Th1介导的疾病。然而，最近发现，产生IL-17的T细胞亚群在EAE的发病机制中起到关键作用。尽管在文献中仍然存在一些争论，但很有可能是Th1和Th17细胞协同作用来诱导器官特异性自身免疫的发展。

未成熟的树突细胞从周围组织中的抗原(Ag)采样，并且在抗原捕获后，成熟并迁移到局部淋巴结(LN)，在这里它们递呈抗原至幼稚的CD4⁺T细胞。幼稚的T细胞随后分化并增殖成特异性CD4⁺效应T细胞群体。幼稚的T细胞的结局部分上由细胞因子环境决定，所述细胞因子环境产生于细胞因子从成熟树突细胞产生和输出，该树突细胞存在于T细胞受体(TCR)被Ag-MHC复合物衔接的位点。这样说来，DC可以展现出对响应于病原体所诱导的T细胞反应类型的控制。

先天免疫系统的细胞例如树突细胞表达病原体识别受体(PRR)，该受体识别微生物的分子结构并且在识别这些结构以后活化促炎信号传导途径，该促炎信号传导途径依次控制多种免疫反应基因的表达。PRR可以是膜结合的，例如Toll样受体(TLR)，或者是位于细胞质的，例如，核苷酸结合的寡聚化结构域(NOD)蛋白质。

NOD蛋白质NOD-1和NOD2在先天免疫中具有重要作用，其作为衍生自肽聚糖的微生物成分的细胞内传感器。NOD1识别肽γ-D-谷氨酰-内消旋-二氨基庚二酸(iE-DAP)，并且主要作为革兰氏阴性菌的传感器起作用，而NOD2检测存在于大多数细菌中的胞壁酰二肽(MDP)。iE-DAP是NOD1识别的最小基序。L-Ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)包括iE-DAP二肽和L-Ala残基。与iE-DAP相似，Tri-DAP被NOD1特异性识别。

与其作为PRR的作用相一致，，NOD配体结合通过活化转录因子、核因子-κB(NF-κB)和促细胞分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)家族成员导致促炎症应答的开始。之前已经显示，Tri-DAP展现出比iE-DAP高3倍的活化NF-κB的能力。

发明概述

在产生本发明的工作中，发明人惊人地发现NOD1激动剂Tri-DAP具有免疫抑制活性，并且用作选择性地抑制Th1和Th17(产生IL-17的T细胞)T细胞介导的炎性自身免疫性疾病。这一观察完全是意外的，因为之前显示，体外施用TriDAP增强炎性细胞因子的产生。发明人现在出人意料地鉴别出，体内施用TriDAP介导了抗炎作用。特别的，观察到细胞因子IL-27的表达。不希望被理论束缚，发明人预测，IL-27是由抗原递呈细胞，例如，树突细胞和巨噬细胞表达。抗原递呈细胞表达IL-27使形成的T细胞反应偏离具有T1和T17表型的T细胞的扩增，这些T细胞可以在某些情况下成为介导自身免疫和慢性炎性病症的自体反应性T细胞。

此外，发明人鉴别到，Tri-DAP作为治疗剂是很吸引人的，因为其便于生产。另外，由于其分子量低，发明人鉴别到，TriDAP当施用到人体时不会产生明显的免疫原性。治疗自身免疫性疾病和慢性炎性疾病例如多发性硬化症的当前治疗法主要着眼于甾族化合物和其他NSAID的使用，而这些是非特异性的，并且具有严重的副作用。特别的，某些这类治疗主要作用于抑制TNF-α的表达或功能活性。例如，单克隆抗体英夫利昔单抗(类克(remicade))靶向于TNF-α的功能。虽然在某些患者中有效，但当治疗某些患者或某些自身免疫性病症时，这些抗TNF-α治疗是无效的，或者进一步的，还可以导致不希望的副作用出现。因此，发明人鉴别了本发明在治疗Th1和/或Th17介导的疾病和病症中的效用，尤其是在由于自体反应性Th1和/或Th17T细胞的存在而发生异常Th1和Th17反应时出现的自身免疫或免疫介导的病症。

根据本发明的第一方面，提供了一种治疗或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞引起的自身免疫性疾病的方法，该方法包括如下步骤：

-提供治疗有效量的组合物，该组合物包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物，以及

-以足以抑制T辅助细胞17(Th17T细胞)和/或T辅助细胞1(Th1T细胞)活化的有效量，将所述组合物施用于需要这种治疗的受治疗者。

在某些实施方式中，该组合物抑制T辅助细胞17(Th17)介导的免疫反应和T辅助细胞1(Th1)介导的免疫反应。

在某些实施方式中，由自体反应性T细胞介导的自身免疫性疾病是一种自身免疫性疾病或慢性炎性疾病。“自体反应性T细胞”是指T细胞(T淋巴细胞)，尤其是对自体抗原具有特异性的Th1(CD4+Th 1T辅助细胞)或Th17(CD4+T-辅助细胞)细胞谱系，“自体抗原”是主体表达的抗原，其中该主体的T细胞群体在正常的内环境稳定条件下正常对于该抗原是耐受的(即，不指导免疫反应)。

在某些实施方式中，自身免疫性疾病可以选自由以下组成的组，但不限于：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)、包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的炎性肠病(IBD)、1型糖尿病和牛皮癣。

在某些实施方式中，含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物是Tri-DAP。Tri-DAP还可由TriDAP、Tri_DAP、L-Ala-γ-D-Glu-mDAP或_L-Ala-_D-Glu-内消旋DAP)表示。TriDAP还可称为L-丙氨酰-γ-D-谷氨酰-内消旋-二氨基庚二酸。TriDAP是包括iE-DAP二肽(γ-D-谷氨酰-内消旋-二氨基庚二酸)和L-Ala(丙氨酸)残基的Tri肽。Tri-DAP的化学式为C16H26N4O8。其分子量约为390.39kDa。如本文所定义的，“内消旋DAP”指的是内消旋二氨基庚二酸酯。术语“二氨基庚二基(diaminopimelyl)”指的是内消旋DAP加入到肽链中。

Tri-DAP的分子结构如下式1a所示：

Tri-DAP的化学结构如下式1b所示：

在另外的某些实施方式中，含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物可以是M-TriDAP(MurNAc-L-Ala-γ-D-Glu-mDAP)，还可以称为含有DAP的胞壁酰三肽(胞壁三肽(muratripeptide))，这是可在革兰氏阴性菌中发现的肽聚糖(PGN)的降解产物，。

M-TriDAP的分子结构如下式II所示：

在其中含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物包括胞壁肽的另外的某些实施方式中，该胞壁肽可以是胞壁四肽(murotetrapeptide)，例如，GM-TRIDAP(GlcNAc-MurNAc三肽胞壁肽)。

在另外的某些实施方式中，胞壁四肽可以是式III的M-TetraDAP：

在某些实施方式中，可以基于本发明的含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物提供合成的类似物。此外，在某些实施方式中，可以视情况如下文所述制备应用于本发明的化合物的模拟肽(peptidomimetic)。

在某些实施方式中，本发明这方面的方法可以进一步包括施用至少一种Toll样受体激动剂到受治疗者的步骤。该Toll样受体(TLR)激动剂可以在施用本发明这方面的组合物之前、伴随着(同时)、或之后(相继地)施用。

在某些实施方式中，TLR激动剂是药学上可接受的TLR激动剂。该TLR激动剂可以对任何定义的人类Toll样受体具有特异性。在特别的实施方式中，TLR激动剂是TLR2、TLR4或TLR9中的至少一种的配体。在某些实施方式中，TLR激动剂能够诱导树突细胞的IL-27的产生。在另外的实施方式中，TLR激动剂可以选自LPS(脂多糖)、包括含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)的CpG基序、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys的任意一种或多种。

本发明另一方面提供了用于治疗和/或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病的药物组合物，该组合物包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物，以及可以根据预定的施用途径来选择的至少一种药学赋形剂、稀释剂或载体。

在本发明的多个另外的方面，本发明的组合物和方法可用于抑制或阻抑至少一种细胞因子的产生，该细胞因子选自由白细胞介素17(IL-17)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)组成的组。在某些实施方式中，本发明的组合物和方法可以进一步增强选自IL-27、IL-10和IL-35的至少一种细胞因子的产生。

细胞因子，例如白细胞介素17、干扰素γ或肿瘤坏死因子，在多种疾病状况的发展中以及特定自身免疫性病症中具有确定的作用。相应的，在其他不同方面，本发明扩展到将治疗有效量的TriDAP或相关化合物施用于受治疗者，来治疗、预防或改善所述疾病状况。

本发明的又一方面提供了用于治疗或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病的含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽。

在某些实施方式中，含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽是TriDAP。在某些实施方式中，自身免疫性疾病选自：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)和1型糖尿病，其中，慢性炎性疾病选自炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和牛皮癣。

在某些实施方式中，所述用途还包括施用至少一种Toll样受体激动剂到受治疗者。该至少一种Toll样受体激动剂可以是Toll样受体2、Toll样受体4或Toll样受体9中至少一种的激动剂。Toll样受体激动剂可以选自：LPS(脂多糖)、CpG基序、含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys。

所述组合物可以进一步包括至少一种ERK蛋白激酶抑制剂，可以是PD98059或U0126。

本发明的又一方面提供了含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽在制备药剂中的应用，该药剂用于治疗由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病。

在某些实施方式中，所述药剂可以进一步包括至少一种Toll样受体激动剂(TLR激动剂)，或随同所述至少一种Toll样受体激动剂一起施用。TLR激动剂可能对任何定义的人类Toll样受体具有特异性。在特别的实施方式中，TLR激动剂对于TLR2、TLR4或TLR9具有特异性。在某些实施方式中，TLR激动剂能够诱导DC的IL-27生产。在另外的实施方式中，TLR激动剂可以选自LPS(脂多糖)、包括含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpGODN)的CpG基序、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys的任意一种或多种。不希望被理论所束缚，发明人观察到，基于本文所描述的实验，施用TriDAP可以引起树突细胞产生IL-27。但是，观察到，IL-27和至少一种TLR激动剂的共同施用以协同方式起作用，实质上增强了抗原递呈细胞例如树突细胞生产IL-27。

在某些实施方式中，所述药剂可以进一步包括至少一种ERK(胞外信号调节激酶)抑制剂，或随同所述至少一种ERK抑制剂一起施用。不希望被理论所束缚，发明人预测，进一步施用作为前述定义的本发明的组合物的一部分或随同本发明的组合物的至少一种ERK抑制剂能够上调IL-27细胞因子的产生。还观察到，施用ERK抑制剂能够通过抑制树突细胞生产IL-23和IL-1细胞因子，从而弱化EAE。不论本发明组合物是否随同前文所述的TLR激动剂一同施用，施用至少一种ERK抑制剂导致IL-27上调。在某些实施方式中，ERK抑制剂是ERK蛋白激酶抑制剂，并且可以选自包括但不限于PD98059或U0126的组。

本发明的另一方面提供了一种组合物，其包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽，该组合物用于治疗或预防自身免疫性疾病或慢性炎性疾病。

在某些实施方式中，所述组合物可以进一步包括至少一种Toll样受体激动剂。TLR激动剂可以对于任何定义的人类Toll样受体具有特异性。在特别的实施方式中，TLR激动剂对于TLR2、TLR4或TLR9具有特异性。在某些实施方式中，TLR激动剂能够诱导DC的IL-27生产。在进一步的实施方式中，TLR激动剂可以选自LPS(脂多糖)、包括含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)的CpG基序、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys的任何一种或多种。

在本发明的不同的其他方面，提供了组合药剂，其包括本发明的化合物以及至少一种选自由以下组成的组的化合物：甾族化合物、非甾体抗炎药物(NSAID)或细胞因子抑制剂。所述组合药剂可以用于本发明的治疗自身免疫性疾病或慢性炎性疾病的方法。

在本发明的另一方面，提供了治疗自身免疫性疾病的方法，其中该方法包括调节在NOD-1表达的或反应的细胞和/或组织(例如，抗原递呈细胞，特别是树突细胞)中的功能(例如，调节NOD-1的一种或多种生物活性)。该方法包括将NOD-1反应细胞和/或NOD-1反应组织与NOD-1调节剂例如NOD-1结合剂，(例如，包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽的组合物)接触，调节剂的量足以调节该NOD-1反应细胞或组织的功能(或该细胞或组织中的NOD-1的生物活性)，以致Th1和/或Th17介导的免疫反应被抑制，即具有Th1或Th17表型的T细胞的活化或幼稚CD4+T细胞分化成Th1或Th17T细胞被减弱或抑制。在一个实施方式中，接触步骤可以在体外实施，例如，在细胞溶胞产物或重建系统中。可替代地，目标方法可以例如在体外或活体培养的细胞上执行。例如，细胞(例如，纯化或重组的细胞)可以体外培养，并且接触步骤可以通过将NOD-1调节剂添加到培养基中来实施。通常，NOD-1反应细胞是哺乳动物细胞，例如人类细胞。在某些实施方式中，NOD-1反应细胞是抗原递呈细胞，例如树突细胞，或与其相关的细胞群体，例如前体细胞。在其他实施方式中，所述方法可以对受治疗者中存在的细胞执行，例如，作为体内试验计划的一部分，或在动物受治疗者中(包括，例如，人类受治疗者，或者体内动物模型)存在的细胞执行。体内试验计划可以是治疗性的或预防性的，并且炎症模型可以是，例如，EAE模型，或遗传修饰模型(例如，具有过表达的NOD-1或NOD-1突变或缺失的动物模型)。对于体内方法，NOD-1调节剂，单独或与另一种试剂组合，可以施用于患有自身免疫性疾病的受治疗者，该疾病例如多发性硬化症、类风湿性关节炎或牛皮癣，施用的量足以调节受治疗者中的一种或多种NOD-1介导的活性或功能，通常为促炎性免疫反应，且最特别地是Th1细胞(也称为Th1T淋巴细胞)和/或Th17T淋巴细胞介导的促炎性免疫反应，该免疫反应可以导致慢性炎性疾病或自身免疫性疾病例如多发性硬化症的发病和发展。在某些实施方式中，通过在体外或活体测试改变(例如减少或抑制)一种或多种NOD-1活性(例如，一种或多种本文描述的NOD-1的生物活性)所需的NOD-1调节剂的量，可以在施用前决定NOD-1调节剂施用的量或剂量。任选地，所述体内方法可以包括鉴别(例如，评价、诊断、筛选和/或选择)受治疗者的步骤，该受治疗者具有或有风险具有一种或多种与自身免疫性紊乱或病症相关的症状。

在本发明另外的某些方面，提供了NOD-1调节剂，尤其是抑制Th1T淋巴细胞和/或Th17T淋巴细胞介导的促炎性免疫反应的NOD-1激动剂化合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于治疗自身免疫性疾病或慢性炎性疾病。

在本发明的又一方面，提供了抑制由Th1T淋巴细胞和/或Th17T淋巴细胞介导的促炎性免疫反应的NOD-1调节剂化合物在治疗由自体反应性Th1或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病中的用途。

在某些实施方式中，NOD1调节剂包括肽γ-D-谷氨酰-内消旋-二氨基庚二酸(iE-DAP)或Tri-DAP或M-TriDAP或其类似物、衍生物或模拟肽。

在本发明的另一方面，提供了增强IL-27的产生的NOD-1调节剂在药剂制备中的用途，该药剂通过抑制IL-23和IL-17细胞因子水平和/或产生来治疗自身免疫性疾病。特别的，抑制抗原递呈细胞例如树突细胞或T细胞的IL-23和/或IL-17的生产。

在本发明的又一方面，提供了一种组合物，其包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽，该组合物用于向患有由Th1或Th17表型的自体反应性T细胞介导的自身免疫性疾病的受治疗者施用以抑制或下调Th1和Th17相关的细胞因子IFN-γ、TNF-α、和IL-17中的至少一种的产生。

在另外不同的方面，本发明提供了用于执行本发明治疗方案的药盒。这些药盒可以包括在一个或多个容器中的治疗或预防有效量的药学上可接受的形式的本发明组合物。所述药盒可以进一步包括使用本发明的组合物或操作本发明的方法的说明书，或者可以提供另外的信息以便给医生提供治疗慢性炎性疾病或自身免疫性疾病的适当信息。

本发明的另一方面提供了含有TriDAP或其类似物或由TriDAP或其类似物组成的组合物减少IL-17的生产以治疗自身免疫性疾病或慢性炎性病症的用途。在某些实施方式中，所述组合物进一步包括至少一种Toll样受体激动剂。该组合物还可以进一步增强IL-27细胞因子的水平，并且还可以降低TNF-α和IFN-γ的至少一种的水平，并且可以进一步增强IL-10的水平。细胞因子水平的调节可以通过本领域技术人员使用其熟知的技术例如ELISA试验来测量，以定量样品例如细胞上清液中细胞因子的存在和量。

在另外不同的方面，本发明扩展到依据任何前述方面或实施方式的各部分的方法、组合、剂、用途、药盒系统，其中患者是人类。

在另外的方面，本发明扩展到治疗自身免疫性病症或慢性炎性疾病的任何新颖方法，如本文所述，该病症或疾病由自体反应性Th1和/或Th17T细胞或来自患者体内的IL-17介导的免疫反应引起。

附图简述

图1显示，体内施用NOD1激动剂Tri-DAP减弱实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。

图2显示，NOD1激动剂Tri-DAP减弱实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。

图3显示，NOD1激动剂Tri-DAP在EAE过程中抑制MOG特异性炎性细胞因子，该EAE由用MOG和CFA的免疫所诱导。

图4显示，使用NOD1激动剂Tri-DAP的治疗抑制在患有EAE的小鼠的脑中的表达IL-17和表达IFN-γ的CD3⁺T细胞。

图5显示，使用NOD1激动剂Tri-DAP的治疗抑制在患有EAE的小鼠的脑中的表达IL-17和表达IFN-γ的CD3⁺CD4⁺T细胞。

图6显示，使用NOD1激动剂Tri-DAP的治疗抑制在患有EAE的小鼠的脑中的表达IL-17和表达IFN-γ的CD3⁺CD4^-T细胞。

图7显示，在EAE诱导之后72小时，使用NOD1激动剂Tri-DAP的治疗增强小鼠腹股沟淋巴结中EBI3mRNA的表达。

图8(a)显示，使用NOD-1激动剂Tri-DAP的治疗增强LPS诱导的EBI3在DC中的基因表达。

图8(b)显示，使用NOD-1激动剂Tri-DAP的治疗增强LPS诱导的IL-27p28在DC中的基因表达。

图9(a)显示，抑制ERK增强Tri-DAP与LPS对于DC中EBI3基因表达的协同作用。

图9(b)显示，抑制ERK增强Tri-DAP与LPS对于DC中IL-27p28基因表达的协同作用。

图10(a)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的LPS诱导的DC生成IL-12p40和IL-12p70依赖于p38的活化。

图10(b)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的LPS诱导的DC生成IL-23和IL-10依赖于p38的活化。

图11(a)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的CpG诱导的DC生成IL-12p40和IL-12p70依赖于p38的活化。

图11(b)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的CpG诱导的DC生成IL-23和IL-10依赖于p38的活化。

图12(a)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的LPS诱导的DC生成IL-12p40和IL-12p70部分依赖于ERK的活化。

图12(b)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的LPS诱导的DC生成IL-23和IL-10部分依赖于ERK的活化。

图13(a)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的CpG诱导的DC生成IL-12p40和IL-12p70部分依赖于ERK的活化。

图13(b)显示，在使用Tri-DAP治疗之后，增强的CpG诱导的DC生成IL-23和IL-10部分依赖于ERK的活化。

图14显示使用Nod-1激动剂Tri-DAP治疗的SJL小鼠的临床评分。

图15A显示脾细胞中IFN-γ和IL-17的表达。图15B显示淋巴结中IL-17的产生。

图16A显示，接受或未接受TriDAP治疗的小鼠的腹膜腔渗出细胞上清液中的IL-10的表达，而图16B显示TGF-β的表达。

图17显示4幅图，代表细胞因子IL-10、IL-27和TGF-β以及趋化因子MIP-1α在TLR激动剂活化的脾细胞上清液中的表达水平，该脾细胞来自于用PBS或TriDAP治疗的小鼠。在用TLR激动剂体外刺激后，观察到在来自于TriDAP治疗的小鼠的脾细胞中，IL-10和IL-27的表达水平增强。

图18显示，当用从Tri-DAP治疗的小鼠获得的抗原递呈细胞刺激时，与用从对照小鼠获得的抗原递呈细胞相比，T细胞产生的干扰素γ更少。

图19显示了示出用树突细胞刺激的抗原特异性T细胞的IL-17表达水平的图，该树突细胞在有和没有TriDAP的情况下用抗原和LPS进行脉冲。

图20A显示在人来源的树突细胞中的IL-27的表达水平，该树突细胞在有和没有LPS的情况下用TriDAP刺激，而图20B显示在相同细胞群体中IL-10的表达水平。

发明详述

发明人出人意料地鉴别到，诱导的自身免疫性疾病EAE在施用NOD1激动剂Tri-DAP后的严重性降低并且发病延迟。EAE严重性的降低与Th1和Th17细胞介导的反应的降低是相互关联的。EAE是一种CNS的自身免疫性疾病以及MS的动物模型。像这样，从EAE动物模型实验获得的结果可以被推广到人类受治疗者中的多发性硬化症的治疗。发明人鉴别到，含有Tri-DAP的化合物具有改善病症的效用，所述病症例如自身免疫性疾病和慢性炎性疾病如多发性硬化症，该疾病或病症由异常的Th1和Th17T细胞反应所介导，或者由于T细胞亚群自身引起的病理，或者由于细胞因子驱动的免疫反应，该细胞因子引起所述T细胞的分化和活化。

不希望被理论所束缚，发明人预测，在自身免疫性疾病发病时和/或发病后施用Tri-DAP发生的Th1和Th17介导的促炎性免疫反应的下调是由抗原递呈细胞尤其是树突细胞(DC)在诱导T细胞介导的免疫反应时活性的调节而介导的，所述Th1和Th17介导的促炎性免疫反应是小鼠EAE以及人类自身免疫性疾病例如EAE的病因。特别的，由于在抗原递呈细胞表面II类MHC表达减少以及由此所致的抗原向T细胞递呈减少，施用TriDAP引起抗原递呈细胞的功能被改变。此外，细胞因子IL-27的表达有所增加。因此，至少一种Toll样受体激动剂与TriDAP的共同施用(与TriDAP相继或在其后施用)以协同方式进一步增强IL-27被树突细胞表达。因此，暴露于TriDAP后，抗原递呈细胞行为的调节导致抗原递呈细胞活化记忆T细胞的能力下降，或引起幼稚CD4+T细胞分化成具有Th1或Th17表型的T细胞。

发明人出人意料地鉴别到，结合NOD-1激动剂的NOD-1之后，通过NOD-1介导的信号传导导致介导抗炎性免疫反应的细胞因子谱的产生，所述NOD-1激动剂例如Tri-DAP或相关的含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物。发明人的这种观察完全是预料不到的，因为在所属技术领域中公认的是，由NOD-1激动剂刺激NOD-1将导致细胞因子谱被表达NOD-1的细胞所表达，该表达NOD-1的细胞将介导促炎性免疫反应。

进一步的，发明人鉴别到，在至少一种TLR激动剂存在时，Tri-DAP与抗原递呈细胞例如树突细胞的相互作用增强了抑制性(即，抗炎)细胞因子IL-10和IL-27的生成。发明人还预测，施用TriDAP之后，树突细胞的增强的IL-10和/或IL-27生成导致Th1和Th17介导的T细胞反应被抑制，以及治疗之后对CNS的Th1和Th17细胞浸润有所减少。疾病的发展和病理因此得到减轻。

观察到的Tri-DAP对APC的这种活性已被发明人鉴别为具有治疗和/或预防自身免疫性疾病和慢性炎性疾病的效用，所述自身免疫性疾病和慢性炎性疾病例如，但不限于，多发性硬化症、类风湿性关节炎、包括克罗恩氏病和/或溃疡性结肠炎的炎性肠病和1型糖尿病。已知，IL-10和IL-27的表达都与1型糖尿病的发病有关(Bettini和Vignali.Current Opinion inImmunology.2009.21.612-618)。类风湿性关节炎是一种慢性自身免疫性疾病，其中促炎性细胞因子例如TNF-α、IL-6和IL-1起主要的病理学作用。最近，有人提出，IL-17在RA的诱导和维持中起到另外重要的作用。IL-17主要由T辅助细胞(Th17细胞)产生。通过使DC具备将T细胞分化成Th17表型的能力，TNF-α在体外显示出驱动IL-17的生成。出人意料的是，发明人显示，TriDAP降低树突细胞将抗原递呈给T细胞的能力。此外，TriDAP诱导IL-27的生成，该IL-27防止幼稚T细胞分化成Th17表型。相应的，在刺激细胞因子例如IL-10和IL-27的生成上，显示TriDAP是T细胞生成IL-17和IFN-γ的重要的负调节物，发明人因此提出这形成了限制Th17和Th1反应的强度和/或持续时间的负反馈环路，并因此提供了用于治疗类风湿性关节炎的新颖治疗途径。

L-ala-γ-D-Glu-mDAP(Tri-DAP)是含有二氨基庚二酸的三肽，其存在于由NOD1(NOD-1)特异性识别的革兰氏阴性菌的肽聚糖中。如上所述，NOD1是位于APC例如DC的细胞质中的PRR，其功能主要是在配体结合后启动针对微生物的病原相关的分子模式(PAMP)的免疫反应。由APC响应PRR配体结合启动的免疫反应类型在测定募集的Ag特异性T细胞群体的子型(subsequent type)中发挥关键作用。NOD1配体结合通常与MAPK家族成员和转录因子NF-κB的活化相关。

发明人做出了出人意料的发现，即施用含有Tri-DAP的组合物导致了自身免疫性疾病尤其是由自体反应性T细胞介导的自身免疫性疾病状况的疾病严重性和发展的降低，如通过小鼠的EAE疾病模型所例证的。相应的，在某些实施方式中，本发明扩展到施用治疗有效量的含有Tri-DAP的组合物或其合成的或非合成的类似物，以用于在需要这种治疗的受治疗者中治疗和/或预防自身免疫性和慢性炎性疾病。在进一步的实施方式中，从存在EAE疾病模型的小鼠中可以观察到，Th1和Th17介导的免疫反应的抑制或下调导致临床疾病评分和疾病严重性的降低。

IL-27是由p28和EBI3组成的抑制性细胞因子，其可以有效地在体内抑制EAE的效应阶段，并因此被鉴别为具有针对自身免疫性疾病例如MS的治疗潜力(Fitzgerald等，2007)。IL-27由抗原递呈细胞产生并且通过其受体IL-27R发信号，其受体IL-27R由单核细胞/巨噬细胞、树突细胞、T细胞和B细胞、自然杀伤细胞、肥大细胞和内皮细胞表达。如通过IL-27R缺陷型小鼠的许多严重疾病所显示的，IL-27显示在EAE中起到抑制性作用。外源IL-27有效抑制致脑炎的淋巴结脾细胞转移EAE的能力。IL-27明显地抑制髓鞘反应性T细胞的IL-23驱动的IL-17的生成，从而抑制髓鞘反应性T细胞在过继性转移EAE中的致脑炎性(encephalitogenicity)。此外，当通过皮下渗透泵递送时，显示出IL-27对体内活性EAE的强抑制效果。IL-27治疗的小鼠减少了CNS炎性浸润，以及值得注意的，Th17细胞更低的比例。在本发明中，发明人出人意料地观察到，体外联合施用含有Tri-DAP的化合物与TLR激动剂或体内联合施用含有Tri-DAP的化合物与合适的佐剂导致IL-27被BMDC的生成增强。相应的，在本发明某些实施方式中，含有Tri-DAP的组合物可以与药学上可接受的TLR激动剂联合施用。

在某些实施方式中，Toll样受体(TLR)激动剂对于TLR2、TLR4或TLR9具有特异性。TLR2受体是与Toll样受体1或Toll样受体6共同发现的异源二聚体。细菌酯肽是含有TLR2的受体的主要激动剂。TLR2激动剂的实例包括，但不限于：支原体巨噬细胞活化的脂蛋白-2、高度纯化的可溶肽聚糖、脂磷壁酸、伯氏疏螺旋体的外表面蛋白A、三棕榈酰-半胱氨酰-丝氨酰-(赖氨酰)3-赖氨酸(Pam3CSK4，P3CSK4)、二棕榈酰-CSK4(Pam2CSK4，P2-CSK4)、以及一棕榈酰-CSK4(PCSK4)及脂多糖和灭活的细菌。

TLR4的典型激动剂是细菌脂多糖(LPS)，指的是含有脂质A等的一族物质。LPS的示例形式是大肠杆菌B:O111(Sigma Chemicals)。低毒性的TLR4激动剂是单磷酰脂质A(MPL)化合物。合成的佐剂ASO2(GlaxoSmithKline，United Kingdom)含有成分MPL。

免疫刺激性寡核苷酸或多核苷酸，例如，含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)是典型的TLR9激动剂。更通常的，它们被称为寡脱氧核苷酸的免疫刺激序列(ISS-ODN)，因为许多免疫刺激性寡核苷酸(ODN)不含CpG基序。通常，ODN是硫代磷酸基(thiophosphorylate)连接的合成化合物。但是，许多类型的DNA和RNA可以活化TLR9，包括细菌DNA、脊椎动物脂质体DNA、昆虫DNA、衣原体多核苷酸及其他。

通常TLR激动剂是TLR2、TLR4或TLR9激动剂，其能够诱导树突细胞生成IL-27。在某些实施方式中，TLR激动剂可以选自LPS(脂多糖)、包括含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)的CpG基序、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys中任意一个或多个。

在另外的某些实施方式中，施用含有Tri-DAP的化合物可以伴随施用至少一种ERK抑制剂。ERK抑制剂可以与施用含有Tri-DAP的化合物同时提供，或在之后提供。如上文所述的至少一种TLR激动剂还可以随同含有Tri-DAP的化合物和ERK抑制剂一起施用。

通过激活巨噬细胞的杀微生物活性并且驱动CD8+细胞毒性T细胞的增殖，Th1细胞提供针对细胞内感染的保护，但是还会伴随炎性反应和自身免疫失调。作为促炎介质，过度的Th1细胞反应可能对于宿主细胞是有害的。Th1极化因子包括IL-12、IL-18、I型干扰素和细胞表面表达的细胞间粘附分子1(ICAM1)。Th1细胞产生细胞因子，尤其是IFN-γ。Th17细胞被认为涉及早期的组织特异性炎性反应，导致嗜中性粒细胞的募集和活化。另外，最近Th17细胞被鉴别为特别有效的自身免疫诱导剂。涉及的Th1极化因子迄今为止包括IL-23、IL-6、IL-1、IL-21和TGF-β。Th17细胞产生细胞因子，尤其是IL-17，还有IL-22和TNF-α。

本发明的发明人出人意料地观察到，施用含有Tri-DAP的化合物到患有自身免疫性疾病的动物将分别导致Th1和Th17相关细胞因子IFN-γ和TNF-α、及IL-17的生成的抑制或下调。相应的，在某些实施方式中，在接受本发明的Tri-DAP治疗后，Th1和Th17介导的免疫反应的抑制导致至少一种细胞因子的抑制或下调，该细胞因子选自包括IFN-γ、TNF-α和IL-17的组。在另外的某些实施方式中，在接受本发明的Tri-DAP治疗后，Th1和Th17介导的免疫反应的抑制导致在自身免疫和慢性炎性疾病中浸润CNS的产生IFN-γ和IL-17的T细胞数目降低。

模拟肽和合成的类似物

肽类似物例如模拟肽或肽模拟物(peptide mimetic)是具有模板肽典型性质的非肽化合物。这种肽类似物通常是利用计算机化的分子建模开发的。结构上与具有对NOD1的亲和力和结合特异性的肽例如Tri-DAP相似的模拟肽可以用于介导与确定具有这种Th1和Th17抑制功能的多肽和蛋白质相似的预防和治疗效果。

模拟肽通常与模板肽结构相似，但是具有一个或多个根据现有技术熟知的方法被可替代的键替换的肽键。例如，对NOD1表位具有结合特异性的肽例如Tri-DAP可以被修饰，以使得它包括酰胺键的取代、非肽基序的引入或主链环化。适当的，如果半胱氨酸存在，该残基的硫氢基可以被帽化以防止游离硫酸基团的损害。肽可以进一步从天然序列修饰，以保护肽免受蛋白酶的攻击。

相应的，在本发明中用作NOD1激动剂的肽化合物还可以使用C端和/或N端帽化、和/或半胱氨酸残基帽化中的至少一种进行修饰。此外，用于本发明的肽可以在N端残基处使用乙酰基进行帽化。适当的，本发明的肽或用于本发明的肽可以在C端使用酰胺基帽化。适当的，半胱氨酸的硫氢基使用乙酰氨基甲基帽化。

Tri-DAP的类似物、衍生物、模拟物和变体

本发明扩展到用于本发明的含有Tri-DAP的组合物的类似物、衍生物、片段和变体。如本文定义的Tri-DAP的衍生物、片段或变体可以理解为表示由Tri-DAP的一部分组成的展现出观察到的Tri-DAP的免疫抑制性质的任意化合物、分子或大分子。这些衍生物、片段或变体可以通过本领域技术人员使用本领域技术人员熟知的许多技术中的任何一种进行制备。当在先天免疫系统的细胞上作用时，这些片段、变体、类似物或衍生物与含有Tri-DAP的组合物相比，介导相同或基本上相似的生物学功能。这样，本发明除了含有Tri-DAP和M-TriDAP的组合物的用途外，还涵盖这些化合物的同系物和类似物的用途。在这一背景下，同系物是与上述化合物具有基本结构相似性的分子，类似物是与上述化合物具有基本生物学相似性而不管结构相似性的分子。

在另外的某些实施方式中，本发明化合物可以通过交换或取代特定氨基酸残基来调整。如众所周知的，在氨基酸水平的同源性通常是指氨基酸相似性或同一性。相似性考虑‘保守变化’，例如一个疏水残基取代另一个或一个极性残基取代另一个。

本发明范围内提供了非肽模拟物。在某些实施方式中，本发明的化合物可以用丙氨酸(ala，A)残基取代丝氨酸(ser，S)残基或缬氨酸(val，V)残基进行修饰。在另外的某些实施方式中，谷氨酸(glu，E)残基可以被天冬氨酸(Asp，D)残基替代。

组合药剂

如前文所述，在某些方面，本发明扩展到组合治疗，其中本发明的组合物或方法扩展到施用调节抗原递呈细胞特别是树突细胞的活性的另外的化合物，其中，所述另外的化合物与至少一种TLR激动剂和/或至少一种ERK MAPK抑制剂组合施用。

通常，主要的和次要的治疗组合物被同时给予。在某些实施方式中，同时施用主要的治疗组合物(即，调节APC的功能活性的化合物)和次要治疗剂，所述次要治疗剂可以是例如TLR激动剂。在另外的某些实施方式中，它们被相继施用。

在某些实施方式中，组合治疗可以包括含有Tri-DAP、或其合成的或非合成的类似物、或模拟肽的组合物，随着该组合物共同施用至受治疗者的还有下述的至少一种：TLR激动剂(例如，TLR2、TLR4或TLR9特异性的激动剂)；细胞因子抑制剂(例如，但不限于，IL-1、TNF-α、IL-17、IFN-γ、IL-23、IL-6、TGF-β和IL-12的抑制剂)；ERK抑制剂，例如PD98059或U0126；生长因子抑制剂；免疫抑制剂，例如抗体、抗炎剂、酶抑制剂、甾体、非甾体抗炎药、代谢抑制剂、细胞毒剂或细胞生长抑制剂。

相关领域技术人员将认识到，对受治疗者施用组合治疗可能是有优势的，因为它允许施用更低剂量的治疗剂到受治疗者，以达到和联合有效的治疗效果。施用较低的组合剂量还导致受治疗者暴露于来自所施用的化合物的较低毒性水平。此外，因为作为由本发明提供的组合治疗的一部分的次要治疗化合物靶向于不同路径，所以可能存在该治疗的总体效力的协同改善。效力的改善将再次导致需求更低的施用剂量，以及相应的相关毒性的降低。

药物组合物

本发明扩展到涉及包含一种化合物的药物组合物，其在自身免疫性疾病或慢性炎性疾病中，通过调节APC活性来抑制或下调Th1和Th17细胞介导的反应。根据本发明和用于本发明的药物组合物除了包括活性成分(即，Th1和Th17细胞的抑制剂)，还包括药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲稳定剂或本领域技术人员所熟知的其他材料。适当的药学载体的实例包括水、丙三醇、乙醇等等。

本发明组合物可以施用于需要经由任何适当途径治疗的患者。如本文详述，该组合物优选肠胃外施用。肠胃外施用的优选途径的实例包括，但不限于，静脉内、贲门内、动脉内、腹膜内、肌内、腔内、皮下、透粘膜、吸入或经皮。

施用途径进一步包括局部和肠途径，例如，粘膜(包括肺)、口腔、鼻、直肠的途径。制剂可以是液体，例如，PH在6.8-7.6的含有非磷酸盐缓冲液的生理盐水溶液，或者低压冻干或冷冻干燥的粉末。

在某些实施方式中，该组合物可作为可注射的组合物递送。对于静脉注射，活性成分将是肠胃外可接受的水溶液形式，其无热原且具有合适的PH、等渗性和稳定性。本领域相关技术人员完全能够使用例如等渗媒介物，比如氯化钠注射液、林格氏注射液或乳酸林格氏注射液制备合适的溶液。如果需要，还可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲液、抗氧化剂和/或其他添加剂。

用于口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或液体形式。片剂可以包括固体载体，例如明胶或佐剂。液态的药物组合物通常包括液体载体例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其他糖类溶液或二醇，例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。

以上提及的技术和试验计划的实例以及可根据本发明使用的其他技术和试验计划的实例可在以下书籍中找到，其全部内容通过引用并入本文：Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿氏制药科学，第18版，Gennaro，A.R.，Lippincott Williams & Wilkins；第20版ISBN0-912734-04-3，以及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(药物剂型和药物递送系统)；Ansel，H.C.等第7版ISBN0-683305-72-7。

在特定含有血液的组织中，该组合物还可以通过微球、脂质体、其他微粒递送系统或置于某些组织包括血液中的持续释放制剂施用。

施用方案可包括本发明组合物的单次施用，或该组合物剂量的多次施用。该组合物还可以与其他治疗剂和药剂相继或分开施用，该治疗剂和药物用于治疗施用本发明组合物所治疗的病症。

实际的施用量、以及施用速率和时间过程将依赖于接受治疗的病症的性质和严重性。治疗处方例如剂量的决定等等最终归于全科医生或其他医生的责任和辨别力，并且通常考虑待治疗的疾患、个别患者的病症、递送位点、施用方法和医生已知的其他因素。

定义

除非另做声明，本文所用的所有技术术语和科学术语具有本发明技术领域的技术人员所通常理解的含义。

除非上下文另有要求，否则说明书通篇中，术语“包括(comprise)”或“包含(include)”，或其变化形式，例如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”、“含有(includes)”或“包含(including)”将理解为暗示包含所述的整数或整数组的意思，但不排除任何其他整数或整数组。

如本文所述，术语例如“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包括单个或多个指示物，除非上下文另有明示。因此，例如，提到“一种活性剂”或“一种药理学活性剂”包括一种活性剂以及组合的两种或多种不同活性剂，同样提到“一种载体”包括两种或多种载体的混合物以及单个载体，等等。

本文所用的术语“抗原”是能够刺激免疫反应的任意有机或无机分子。本文所用的术语“抗原”扩展到能够刺激免疫反应的任意肽、多肽、蛋白、核酸分子、糖类分子、有机或无机分子。

本文所用的术语“治疗有效量”是指抑制Th1和/或Th17介导的炎性病症或自身免疫性疾病所需的本发明的试剂、结合化合物、小分子、融合蛋白或模拟肽的量。

本文所用的术语“预防有效量”是指防止Th1和/或Th17介导的炎性病症例如自身免疫性疾病(如多发性硬化症)的初期发病、发展或复发所需的组合物的量。

本文定义的“Th1和/或Th17介导的炎性病症”是指全部或部分由对自体抗原具有特异性的自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的慢性炎性病症或自身免疫性疾病。Th1和/或Th17介导的炎性病症的实例在前文提供，并且包括但不限于，多发性硬化症、类风湿性关节炎、炎性肠病、1型糖尿病和牛皮癣。

本文所用的术语“治疗(treatment)”和相关术语例如“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指Th1和/或Th17介导的自身免疫性疾病或慢性炎性病症或至少一种它们的症状的发展、严重性和/或持续时间的减少，其中所述减少或改善是施用一种化合物的结果，该化合物诱导抑制性细胞因子IL-27尤其是被抗原递呈细胞(APC)，特别是树突细胞(DC)或巨噬细胞生成。IL-27的生成可以防止幼稚T细胞熟化为Th1或Th17表型，或可以防止Th1或Th17T细胞的活化。

术语“治疗”因此指的是可以使受治疗者受益的任意方案。治疗可以关于现有的病症或者可以是预防性的(预防疗法)。疗法可以包括治愈的、减轻的或预防的效果。本文提到的“治疗的”和“预防的”治疗应以其最广泛的含义理解。术语“治疗的”不用必须理解为受治疗者接受治疗直到痊愈。类似的，“预防的”不用必须理解为受治疗者最终没有感染上疾病状况。

如本文所用，术语“免疫细胞”包括造血起源且在免疫反应中起作用的细胞。免疫细胞包括淋巴细胞，例如B细胞和T细胞；自然杀伤细胞；髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜酸性细胞、肥大细胞、嗜碱性细胞和粒细胞。

如本文所用，术语“T细胞”扩展为CD4+T细胞、CD8+T细胞、γδ(gamma delta)T细胞和NK(自然杀伤)T细胞。术语T细胞还包括T辅助细胞1型T细胞和T辅助细胞2型T细胞，以及Th-IL17细胞。

如本文所用，术语“抗原递呈细胞”或“多个抗原递呈细胞”或其缩写“APC”或“APCs”指的是能够吞噬吸附、加工和递呈抗原的一个细胞或多个细胞。该术语包括专职的抗原递呈细胞例如B淋巴细胞、单核细胞、树突细胞(DC)和朗格汉斯细胞，以及其他抗原递呈细胞例如角质化细胞、内皮细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞和少突胶质细胞。术语“抗原递呈”指的是抗原在细胞表面展示为结合MHC分子的肽段。许多不同种类的细胞可以具有APC的功能，例如，巨噬细胞、B细胞、滤泡树突细胞和树突细胞。

如本文所用，术语“免疫反应”包括受到T细胞共刺激的调节影响的T细胞介导的和/或B细胞介导的免疫反应。术语免疫反应进一步包括间接受到T细胞活化影响的免疫反应，例如抗体产生(体液反应)以及细胞因子反应细胞例如巨噬细胞的活化。

如本文所用，术语“树突细胞”或“多个树突细胞”(DC)指的是具有最广泛含义的一个或多个树突细胞并且包括任意能够递呈抗原的DC。该术语包括所有启动免疫反应和/或递呈抗原给T淋巴细胞和/或向T细胞提供刺激免疫反应所需的任何其他活化信号的DC。本文提及的“DC”应当解读为包括展现树突细胞形态、表型或功能活性的细胞以及其突变体或变体。树突细胞的形态学特征可以包括但不限于长胞质突或具有多个精细树突的大细胞。表型特征可以包括但不限于表达一个或多个MHC I类分子、MHC II类分子、CD11c、B220、CD8-α、CD1、CD4。

如本文所述，短语“上调细胞因子生成”或其变体指的是当与之前已知数值相比时增加细胞因子生成的水平。此外，如本文所述，短语“下调细胞因子生成”指的是当与之前已知数值相比时一种试剂引起细胞因子生成的降低。

“受治疗者”在本发明上下文中包括和包涵哺乳动物，例如人类、灵长类和家畜(例如，羊、猪、牛、马、驴)；实验室试验动物，例如小鼠、兔子、大鼠和豚鼠；以及伴侣动物，例如狗和猫。对于本发明的目的，优选哺乳动物为人类。术语“受治疗者”与本文所用的术语“患者”是互换的。

实施例

本发明现在将参考下述实施例进行描述，提供该实施例是为了说明的目的并且并非旨在被理解为对本发明的限制。

实施例1-使用NOD1激动剂Tri-DAP治疗减弱实验性自身免疫性脑脊髓 炎(EAE)

设计该试验以鉴别在小鼠中诱导EAE后Tri-DAP疗法是否能够降低疾病严重性的临床评分。

材料和方法：

在第0天，C57BL/6小鼠通过皮下(s.c)注射150μg MOG_35-55诱导EAE，MOG_35-55存在于添加了4mg/ml H37Ra结核分枝杆菌的CFA中。在第0天和第2天，所有小鼠被腹膜内(i.p.)注射百日咳毒素(PT)。一组小鼠未接受治疗，第二组在第0天以MOG/CFA乳液给予Tri-DAP(100μg/鼠)，并且在第1天、第二天以及之后每两天再次给予。每日评估临床评分并记录体重。疾病严重性被分为以下级：0级：正常；1级：尾部跛行；2级：步态摇摆；3级：后肢虚弱；4级：后肢麻痹；5级：四肢麻痹(tetraparalysis)/死亡。

指示对照小鼠由于EAE疾病的严重性而被处死。

结果：

未治疗小鼠在5-6天后显现出EAE的临床体征，并且第12天疾病的严重性快速上升到临床评分3.5-4(图1和2)。相反，直到接受诱导后的第11天，Tri-DAP治疗的小鼠才显示出疾病的临床体征(图1)，并且疾病严重性比未治疗的对照小鼠中观察到的更低(图1和2)。与Tri-DAP治疗的小鼠相比，对照小鼠体重的急剧降低也显示对照小鼠EAE的加重(图1和2)。

这些结果表明，在EAE诱导时或之后，Tri-DAP治疗减弱了EAE疾病的发展。

实施例2-EAE诱导后使用NOD1激动剂Tri-DAP治疗抑制MOG特异性 炎性细胞因子

设计该试验以测定在EAE诱导后Tri-DAP治疗对Th1和Th17特异性炎性细胞因子生成的影响。

材料和方法：

在第0天，C57BL/6小鼠通过皮下注射150μg MOG_35-55诱导EAE，MOG_35-55存在于添加了4mg/ml H37Ra M.结核分枝杆菌的CFA中。在第0天和第2天，所有小鼠腹膜内注射PT。一组小鼠未接受治疗，第二组在免疫前6小时给予100μg Tri-DAP，第三组在第0天以MOG/CFA乳液给予Tri-DAP(100μg/鼠)，并且在第1、2和4天再次给予。小鼠在第5天被处死，淋巴结细胞用MOG肽(髓鞘少突胶质细胞糖蛋白)(20-100μg/ml)刺激，或仅仅用培养基或PMA和抗CD3分别作为阴性对照和阳性对照。72小时后，移除上清液并且通过ELISA分析其IL-17、TNF-α(TNF-alpha)和IFN-γ(干扰素γ)。

结果：

在EAE诱导后5天，在对照EAE小鼠的腹股沟淋巴结中检测到强烈的MOG-特异性IL-17、IFN-γ和TNF-α反应(图3)。相反，与对照EAE小鼠相比，在EAE诱导前6小时用Tri-DAP治疗的小鼠具有明显降低的抗原特异性T细胞反应。在第0、1、2和4天，Tri-DAP治疗没有可检测出的MOG-特异性T细胞反应(图3)。

这些结果显示，EAE诱导之后，Tri-DAP治疗抑制了小鼠的淋巴结中促炎性细胞因子IL-17、IFN-γ和TNF-α的生成。

实施例3-在具有EAE的小鼠脑中，使用NOD1激动剂Tri-DAP治疗抑 制了表达IL-17和表达IFNγ的T细胞

设计该试验以测定在EAE诱导后Tri-DAP治疗对小鼠脑中的多种产生IFN-γ和IL-17的T细胞群体的影响。

材料和方法：

EAE诱导后12天，从对照EAE或Tri-DAP治疗的EAE小鼠的脑中分离单核细胞。细胞用PMA/离子霉素再刺激过夜，并用布雷菲德菌素A孵育。用抗-CD3(图4)，或抗-CD3和抗-CD4(图5和6)对细胞染色。细胞随后被固定并进行透化处理，用抗-IFN-γ和抗-IL-17进行细胞内染色，并用流式细胞术分析。

结果：

在所有检测的T细胞群体(图4的CD3⁺细胞，图5的CD3⁺CD4⁺细胞和图6的CD3⁺CD4^-细胞)中，Tri-DAP治疗抑制IFN-γ和IL-17的产生(图4-6)。

这些结果显示，EAE诱导后用Tri-DAP治疗抑制小鼠CNS中产生IFN-γ和IL-17的T细胞的浸润。

实施例4-在EAE诱导后72小时的小鼠腹股沟淋巴结中，使用NOD1激 动剂Tri-DAP治疗增强EBI3mRNA的表达

设计该试验以评估在EAE诱导后的小鼠腹股沟淋巴结中，Tri-DAP治疗对EBI3基因表达的影响。

材料和方法：

在第0天，C57BL/6小鼠通过皮下注射150μg MOG_35-55诱导EAE，MOG_35-55存在于添加了4mg/ml H37Ra结核分枝杆菌的CFA中。在第0天和第2天，所有小鼠腹膜内注射PT。一组小鼠未接受治疗，第二组在第0天以MOG/CFA乳液给予Tri-DAP(100μg/鼠)，并且在第1天和第2天再次给予。EAE诱导后72小时，每组取3只小鼠处死。移出腹股沟淋巴结，收集到Trizol中。EBI3mRNA通过标准化到18S rRNA的实时PCR评估。数据显示为幼稚C57BL/6腹股沟淋巴结的倍数诱导(图7)。

结果：

当在对照小鼠和Tri-DAP治疗的小鼠的腹股沟淋巴结中检测EBI3基因表达时，与对照小鼠相比，Tri-DAP治疗小鼠的淋巴结中存在EBI3基因表达的强烈倍数增加(图7)。

这些结果提供了如下证据：Tri-DAP减弱EAE的能力可能依赖于抑制性细胞因子IL-27的生成。

实施例5-使用NOD1激动剂Tri-DAP治疗增强树突细胞中LPS诱导的 EBI3和IL-27p28的表达

设计该试验以评估在Toll样受体(TLR)激动剂刺激的BMDC中，Tri-DAP治疗对于EBI3和IL-27p28基因表达的影响。

材料和方法：

用TLR激动剂LPS(10ng/ml)和CpG(5μg/ml)刺激前，骨髓来源的DC(1x10⁶细胞/ml)用Tri-DAP(100μg/ml)预处理24小时，MOG_35-55肽(20μg/ml)或单独的培养基(对照)预处理6小时。EBI3(图8(a))和IL-27p28(图8(b))mRNA通过标准化到18S rRNA的实时PCR评估。数据显示为对仅在培养基中培养的DC的倍数诱导。

结果：

Tri-DAP处理后，在BMDC中观察到LPS诱导的EBI3(图8(a))和IL-27p28(图8(b))基因表达的增强。这些结果进一步提供了如下证据：DC的Tri-DAP治疗诱导促炎性抑制性细胞因子IL-27的生成。

实施例6-ERK的抑制增强了Tri-DAP与LPS对于诱导DC中EBI3和 IL-27D28基因表达的协同作用

设计该试验以评估BMDC中，ERK活化在Tri-DAP增强LPS诱导的EBI3和IL-27p28基因表达中的作用。

材料和方法：

在用TriDAP(100mg/ml)或单独的培养基刺激之前，BMDC(1×10⁶)用MAPK抑制剂SB203580(5mM)或MEK1/2抑制剂U0126(5mM)预处理30分钟。24小时后，该细胞随后用LPS(脂多糖)(100ng/ml)、CpG(5mg/ml)或单独的培养基刺激。EBI3和IL-27p28mRNA通过标准化到18S rRNA的实时PCR评估。数据显示为对仅在培养基中培养的DC的倍数诱导(图9(a)和图9(b))。

结果：

ERK的抑制大大增强了Tri-DAP与LPS对于EBI3和IL-27p28基因在DC中的表达的协同作用(图9(a)和图9(b))。此外，数据显示，添加ERK抑制剂明显增强了Tri-DAP诱导的或Tri-DAP和TLR激动剂诱导的树突细胞(DC)生成IL-27。

实施例7-Tri-DAP增强TLR激动剂诱导的BMDC中细胞因子的生成依 赖于D38且部分依赖于ERK

设计该试验以评估MAPK p38和ERK在LPS诱导的BMDC生成IL-12p40、IL-12p70、IL-23和IL-10的Tri-DAP介导的增强中的作用。

材料和方法：

在用Tri-DAP(100μg/ml)或单独的培养基刺激之前，BMDC(1×10⁶)用p38抑制剂SB203580(5μM，图10-11)或ERK抑制剂U0126(5μM，图12-13)预处理30分钟。2小时后，该细胞随后用LPS(脂多糖)(100ng/ml，图10和12)、用TLR激动剂CpG(5μg/ml，图11和13)或单独的培养基刺激。24小时后收集上清液，IL-12p40、IL-23、IL-12p70和IL-10的浓度用ELISA定量。

结果：

BMDC用Tri-DAP预处理增强了IL-12家族成员IL-12p40、IL-12p70和IL-23的LPS和CpG的生成(图10-13)。观察到的Tri-DAP与LPS或CpG的协同作用部分依赖于p38(图10-11)。Tri-DAP增强LPS诱导的IL-23生成由于ERK抑制剂U0126(图12(b))的添加而得到抑制。相反，LPS诱导的IL-12p70的增强仅很小程度的受ERK抑制剂存在的影响(图12(a))。Tri-DAP增强了LPS和CpG诱导的DC生成IL-10，并且当p38被抑制后，这种增强被完全废止(图10-11)。当DC受到Tri-DAP与LPS或CpG共同刺激时，可观察到的IL-10生成的协同作用中，ERK明显起到类似的作用。通过Tri-DAP与LPS或与CpG生成IL-10，在ERK抑制剂存在下受到抑制(图12-13)。

这些结果显示了Tri-DAP增强TLR激动剂以依赖MAPK的方式诱导促炎性细胞因子的能力，但是ERK MAPK可能对于Tri-DAP诱导的IL-27的生成具有负面影响。

实施例8-在SJL小鼠复发-缓解型EAE模型中，使用TriDAP治疗减 弱EAE

该实验关注于使用Nod-1激动剂TriDAP的治疗是否减弱SJL小鼠复发-缓解型EAE模型中的EAE。

材料和方法：

在SJL小鼠中通过免疫诱导EAE(实验性自身免疫性脑脊髓炎)，该免疫使用弗氏完全佐剂(CFA)中的蛋白脂质蛋白(PLP)以及随后的百日咳杆菌毒素(PT)。SJL小鼠是1955年James Lambert在Jackson实验室从3个不同来源的Swiss Webster小鼠开发出来的。该品系特征是其对用于多发性硬化症研究的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的敏感性，并由此为评价化合物的治疗可能性提供了改进的模型(MOG(胜于髓鞘少突胶质细胞糖蛋白)模型)。从第12天起，每2天用PBS(对照)或TriDAP(100μg/鼠)治疗小鼠。每日评估临床评分，并记录体重。疾病严重性被分为以下级：0级：正常，1级：尾部跛行，2级：步态摇摆，3级：后肢虚弱，4级：后肢麻痹，5级：四肢麻痹/死亡。

指示对照小鼠由于EAE疾病的严重性而被处死。

结果显示在图14中。结果表示每组5-6只小鼠的平均临床评分。结果显示TriDAP治疗的动物的临床评分降低。

实施例9-在复发-缓解型EAE模型中，TriDAP治疗对PLP-特异性的 IL-17和IFN-γ的影响

该试验关注于在复发-缓解型EAE模型中，使用Nod-1激动剂TriDAP的治疗对PLP-特异性的IL-17和IFN-γ的表达的影响。

材料和方法：

在SJL小鼠中通过免疫诱导EAE，该免疫使用弗氏完全佐剂(CFA)中的蛋白脂质蛋白(PLP)，以及随后的百日咳杆菌毒素(PT)。从第12天起，每2天用PBS(对照)或TriDAP(100μg/鼠)治疗小鼠。在第26天处死小鼠，淋巴结或脾细胞使用PLP(1-25μg/ml)在体外进行再刺激。3天后，IL-17和IFN-γ在上清液中的生成用ELISA进行定量。

结果显示在图15中。图15A显示IFN-γ和IL-17在脾细胞中的表达。图15B显示IL-17在淋巴结中的生成。这些结果显示，Tri-DAP治疗后，IFN-γ和IL-17水平存在进行性的降低。

实施例10-TLR激动剂诱导的IL-27、IL-10和TGF-β在用TriDAP处理的小鼠中的表达

该试验显示，TLR激动剂诱导的IL-27、IL-10、TGF-β的水平被TriDAP处理的小鼠的腹膜腔渗出细胞增强。

材料和方法：

小鼠用PBS或TriDAP(100μg/鼠/天，腹膜内)处理5天。腹膜腔渗出细胞(PEC；1×10⁶/ml)仅用培养基(对照)、或用Toll样受体激动剂刺激，该Toll样受体激动剂选自：TLR4激动剂LPS(脂多糖)(100ng/ml)、TLR9激动剂CpG(5μg/ml)、或TL2激动剂Pam3Csk(500ng/ml)。24小时后收集上清液，细胞因子浓度通过ELISA定量。

结果显示在图16中。图16A显示IL-10在用或未用TriDAP处理的小鼠上清液中的表达，而图16B显示TGF-β的表达。这些结果显示，用TLR激动剂体外再刺激之后，来自在体内使用TriDAP处理的小鼠的PEC会分泌更高浓度的免疫抑制性细胞因子IL-10和TGF-β。

实施例11-来自用TriDAP处理的小鼠的脾细胞的TLR诱导的IL-10和TGF-β

该实验测量了由源自TriDAP处理的小鼠的脾细胞表达的IL-10和TGF-β。

小鼠用PBS或TriDAP(100μg/鼠/天，腹膜内)处理5天。脾细胞(PEC；1×10⁶/ml)单独的培养基(对照)、或用Toll样受体激动剂刺激，该Toll样受体激动剂选自：TLR4激动剂LPS(脂多糖)(100ng/ml)、TLR9激动剂CpG(5μg/ml)、或TLR2激动剂Pam3Csk(500ng/ml)。24小时后收集上清液，细胞因子浓度通过ELISA定量。

结果显示在图17中。图17显示了4幅图，分别表示在使用PBS或TriDAP以及TLR激动剂处理的小鼠的上清液中细胞因子IL-10、IL-27和TGF-β以及趋化因子MIP-1α的表达水平。在脾细胞接受TLR激动剂刺激的地方，可见IL-10和IL-27的表达水平得到增强。这些结果显示，在体外使用TLR激动剂再刺激后，来自在体内用TriDAP处理的小鼠的脾细胞分泌更高浓度的免疫抑制性细胞因子IL-10、IL-27和TGF-β。

实施例12-TriDAP对于抗原递呈细胞的影响

在该试验中评估了抗原递呈细胞(APC)活化用TriDAP处理的小鼠中的记忆T细胞的能力。

材料和方法：

小鼠用PBS或TriDAP(100μg/鼠/天，腹膜内)处理5天。腹膜腔渗出刺激细胞(PEC)接受照射并用作MOG-特异性T细胞的抗原递呈细胞(APC)。来自使用MOG(髓鞘少突胶质细胞糖蛋白)和CFA(1×10⁶/ml)免疫的小鼠的T细胞与PEC(1×10⁶/ml)和MOG(20μg/ml)一起培养。72小时后，收集上清液，用ELISA定量IFN-γ的浓度。

结果显示在图18中，从中可见，当使用来自Tri-DAP处理的抗原递呈细胞刺激时，抗原特异性T细胞比对照(PBS)处理的小鼠分泌更少的IFN-γ。这表明，从TriDAP处理的小鼠中分离的抗原递呈细胞在诱导T细胞活化时具有更少的效力。

实施例13-TriDAP在体外抑制TLR激动剂活化的树突细胞活化Th17细 胞的能力

来自于用MOG和LPS免疫的小鼠的CD4T细胞，在体外与树突细胞一起培养，该树突细胞在KLH(20μg/ml)存在下，在有和没有Tri-DAP(100μg/ml)时使用LPS(10或100ng/ml)刺激。72小时后收集上清液，用ELISA定量IL-17浓度。有和没有Tri-DAP，^*P＜0.05，^***P＜0.001。

结果显示在图19中，图19显示如下图形：其显示用树突细胞刺激的抗原特异性T细胞的IL-17的表达水平，该树突细胞在有和没有TriDAP的情况下用抗原和LPS进行脉冲。结果显示，用Tri-DAP处理树突细胞导致其活化CD4T细胞产生IL-17的能力显著降低。

实施例14-TriDAP诱导IL-10和IL-27并增强TLR-诱导的人类树突细 胞产生IL-10和IL-27

从具有IL-4和GM-CSF的人类PBMC培养的树突细胞使用TriDAP(100μg/ml)、LPS(10或100ng/ml)、LPS和TriDAP或单独的培养基来刺激。24小时后收集上清液，使用ELISA定量IL-27和IL-10的浓度。有TriDAP相对于没有TriDAP，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

结果显示在图20中。图20A显示了使用TriDAP刺激的人源树突细胞的IL-27表达水平，而图20B显示了在相同细胞群体中IL-10的表达水平。结果显示，人源树突细胞在使用TriDAP体外刺激后表达IL-27，这已通过IL-27蛋白水平的测量得到显示。此外，还显示了人类树突细胞的IL-27表达，这与通过鼠源树突细胞的IL-27表达相一致，如之前的实施例所示。最后，结果显示了IL-27可以被人类树突细胞表达，而不需要Toll样受体激动剂的共同刺激。但是，IL-27的表达可以通过至少一种Toll样受体激动剂化合物例如脂多糖共同刺激抗原递呈细胞而显著的增强。相应的，还显示TriDAP起作用独立诱导树突细胞产生IL-27，不仅仅起作用来调节TLR激动剂驱动的在树突细胞中产生IL-27。

本说明书涉及的所有文件通过引用并入本文。对本发明所述的实施方式的各种变更与变化对于本领域技术人员来说是明显的，而不偏离于本发明的范围。虽然已结合特定优选实施方式对本发明进行描述，但是应当理解为，要求保护的本发明不应当不适当地限于这些具体的实施方式。实际上，实现本发明的所述的方式的对本领域技术人员明显的各种变更旨在被本发明所覆盖。本说明书中对任何现有技术的引用不得并且不应该视为如下的承认或任何形式的暗示：这种现有技术形成任一国家中的公知常识的一部分。

Claims (33)

1.一种用于治疗和/或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病的方法，该方法包括如下步骤：

-提供治疗有效量的组合物，所述组合物包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物，以及

-以足以抑制T辅助细胞17(Th17T细胞)和/或辅助性T辅助细胞1(Th1T细胞)的活化的量施用所述组合物于需要这种治疗的受治疗者。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽是Tri-DAP。

3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)和1型糖尿病，或者其中所述慢性炎性疾病选自炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和牛皮癣。

4.如前述任一项权利要求所述的方法，其中该方法还包括施用至少一种Toll样受体激动剂于所述受治疗者的步骤。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述至少一种Toll样受体激动剂是Toll样受体2、Toll样受体4或Toll样受体9中的至少一种的激动剂。

6.如权利要求4或权利要求5所述的方法，其中所述Toll样受体激动剂选自由以下组成的组：LPS(脂多糖)、CpG基序、含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys。

7.如前述任一项权利要求所述的方法，其中该方法还包括施用至少一种ERK蛋白激酶抑制剂于受治疗者的步骤。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述ERK蛋白激酶抑制剂是PD98059或U0126。

9.一种用于治疗和/或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性病症的药物组合物，该组合物包括含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽化合物，以及可以根据预定的施用途径来选择的至少一种药学赋形剂、稀释剂或载体。

10.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽是TriDAP。

11.如权利要求9或权利要求10所述的药物组合物，其中所述自身免疫性疾病选自：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)和1型糖尿病，或者其中所述慢性炎性疾病选自炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和牛皮癣。

12.如权利要求9-11中任一项所述的药物组合物，其中该方法还包括施用至少一种Toll样受体激动剂于受治疗者的步骤。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述至少一种Toll样受体激动剂是Toll样受体2、Toll样受体4或Toll样受体9中的至少一种的激动剂。

14.如权利要求12或权利要求13所述的药物组合物，其中所述Toll样受体激动剂选自由以下组成的组：LPS(脂多糖)、CpG基序、含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys。

15.如权利要求9-14中任一项所述的药物组合物，其中该方法还包括施用至少一种ERK蛋白激酶抑制剂于受治疗者的步骤。

16.如权利要求15所述的药物组合物，其中所述ERK蛋白激酶抑制剂是PD98059或U0126。

17.含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽在用于治疗或预防由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病中的用途。

18.如权利要求17所述的组合物的用途，其中所述含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽是TriDAP。

19.如权利要求17或权利要求18所述的组合物的用途，其中所述自身免疫性疾病选自：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)和1型糖尿病，或者其中所述慢性炎性疾病选自炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和牛皮癣。

20.如权利要求17-19任一项所述的组合物的用途，还包括至少一种Toll样受体激动剂。

21.如权利要求20所述的组合物的用途，其中所述至少一种Toll样受体激动剂是Toll样受体2、Toll样受体4或Toll样受体9中的至少一种的激动剂。

22.如权利要求20或权利要求21所述的组合物的用途，其中所述Toll样受体激动剂选自由以下组成的组：LPS(脂多糖)、CpG基序、含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys。

23.如权利要求17-22任一项所述的组合物的用途，还包括至少一种ERK蛋白激酶抑制剂。

24.如权利要求23所述的组合物的用途，其中所述ERK蛋白激酶抑制剂是PD98059或U0126。

25.含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽在制备用于治疗由自体反应性Th1和/或Th17T细胞介导的自身免疫性疾病或慢性炎性疾病的药剂中的用途。

26.如权利要求25所述的组合物的用途，其中所述含有二氨基庚二酸(DAP)的胞壁肽是TriDAP。

27.如权利要求25或权利要求26所述的组合物的用途，其中所述自身免疫性疾病选自：多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(RA)和1型糖尿病，或者其中所述慢性炎性疾病选自炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和牛皮癣。

28.如权利要求25或权利要求26所述的组合物的用途，还包括至少一种Toll样受体激动剂。

29.如权利要求28所述的组合物的用途，其中所述至少一种Toll样受体激动剂是Toll样受体2、Toll样受体4或Toll样受体9中的至少一种的激动剂。

30.如权利要求28或权利要求29所述的组合物的用途，其中所述Toll样受体激动剂选自由以下组成的组：LPS(脂多糖)、CpG基序、含有CpG的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)、dsRNA、聚肌胞苷酸和Pam-3Cys。

31.如权利要求25-30中任一项所述的组合物的用途，还包括至少一种ERK蛋白激酶抑制剂。

32.如权利要求31所述的组合物的用途，其中所述ERK蛋白激酶抑制剂是PD98059或U0126。

33.NOD-1激动剂在制备用于治疗多发性硬化症的药剂中的用途，该NOD-1激动剂抑制T辅助细胞17(Th17)介导的免疫反应和/或辅助性T辅助细胞1(Th1)介导的免疫反应，该激动剂上调细胞因子IL-27的生产，并且下调细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和IL-23的生产。

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