CN102269752A - 一种药物组合物制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括对乳香、降香和木香药材的专属性薄层鉴别方法；在含量测定方面，选定红花中羟基红花黄色素A作为含量测定指标，经反复试验，发现该检测方法专属性强，重现性好，且阴性无干扰。本发明质量检测方法较在原标准上有了很大提高，简便、灵敏、准确，且重现性好，能更加有效地控制该产品的质量。

Description

一种药物组合物制剂的检测方法

技术领域

本发明涉及一种质量检测方法，特别涉及一种药物组合物制剂的质量检测方法。 

背景技术

如意珍宝丸收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》1995年版藏药第一册第317页，藏药名：桑培努布日布。其功能与主治是：清热，醒脑开窍，舒筋通络，干黄水。用于瘟热、陈旧热症、白脉病，四肢麻木，瘫痪，口眼歪斜，神志不清，痹症，痛风，肢体强直，关节不利。对白脉病有良效。标准记载的配方和制备工艺为：珍珠母100g、沉香100g、石灰华100g、金礞石30g、红花100g、螃蟹50g、丁香40g、毛诃子(去核)100g、肉豆蔻40g、豆蔻40g、余甘子130g、草果30g、香旱芹40g、檀香80g、黑种草子40g、降香330g、荜茇30g、诃子130g、高良姜80g、甘草膏40g、肉桂50g、乳香60g、木香80g、决明子60g、水牛角40g、黄葵子50g、短穗兔耳草150g、藏木香80g、麝香2g、牛黄2g，以上三十味，除牛黄、水牛角、麝香、甘草膏外，其余粉碎成细粉，加入牛黄、麝香、水牛角细粉、过筛，混匀，用甘草膏加适量水泛丸，干燥，即得。每丸重0.5g，一次4～5丸，一日2次。为棕色水丸；气微香，味苦、甘。 

质量控制方面，原标准公开了如下鉴别方法：取本品粉末置显微镜下观察：草酸钙针晶众多，细小，散在于射线细胞中；具缘纹孔导管巨大，完整者直径约至300μm，多破碎，具缘孔也大而清晰，管腔内含棕色或黄棕色分泌物；花粉粒圆形、椭圆形或橄榄形，直径约60μm，具3个萌发孔，外壁有齿状突起。由于该部颁标准只有红花和降香药材的显微鉴别方法，存在一些不足，难以对产品进行更有效的质量控制。 

发明内容

本发明目的在于公开一种药物组合物制剂的质量检测方法。 

技术方案： 

本发明所述药物组合物制剂由下述原料药制成，配比如下(按重量份)： 

珍珠母10-35重量份、沉香10-35重量份、石灰华10-35重量份、金礞石2-10重量份、红花10-35重量份、螃蟹5-18重量份、丁香5-15重量份、去核的毛诃子10-35重量份、肉豆蔻5-15重量份、豆蔻5-15重量份、余甘子20-50重量份、草果2-9重量份、香旱芹5-15重量份、檀香10-30重量份、黑种草子5-15重量份、降香50-100重量份、荜茇2-9重量份、去核的诃子20-50重量份、高良姜10-30重量份、甘草膏5-15重量份、 肉桂5-18重量份、乳香8-18重量份、木香10-30重量份、决明子8-18重量份、水牛角或水牛角浓缩粉5-15重量份、黄葵子5-18重量份、短穗兔耳草20-50重量份、藏木香10-30重量份、人工麝香0.1-1重量份、人工牛黄或体外培育牛黄0.1-1重量份。 

原料药的优选重量比为：珍珠母22.69重量份、沉香22.69重量份、石灰华22.69重量份、金礞石6.81重量份、红花22.69重量份、螃蟹11.34重量份、丁香9.07重量份、去核的毛诃子22.69重量份、肉豆蔻9.07重量份、豆蔻9.07重量份、余甘子29.49重量份、草果6.81重量份、香旱芹9.07重量份、檀香18.15重量份、黑种草子9.07重量份、降香74.86重量份、荜茇6.81重量份、去核的诃子29.49重量份、高良姜18.15重量份、甘草膏9.07重量份、肉桂11.34重量份、乳香13.61重量份、木香18.15重量份、决明子13.61重量份、水牛角或水牛角浓缩粉9.07重量份、黄葵子11.34重量份、短穗兔耳草34.03重量份、藏木香18.15重量份、人工麝香0.45重量份、人工牛黄或体外培育牛黄0.45重量份。 

上述药物组合物可按药剂学常规方法制成各种临床剂型，如丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、咀嚼剂、口服液体制剂等。 

其中本发明片剂(如意珍宝片)可按如下方法制备：以上三十味，除人工牛黄或体外培育牛黄、水牛角或水牛角浓缩粉、人工麝香、甘草膏外，其余粉碎成细粉，超微粉碎，加入人工牛黄或体外培育牛黄、人工麝香、水牛角细粉或水牛角浓缩粉、过筛，混匀，用甘草膏加适量水制粒，干燥，压片，包衣，即得。0.5g/片。一次4-5片，2次/日。 

本发明质量检测方法是针对由上述原料药制成的各种药物组合物制剂，各制剂每日服用剂量所含相当生药量是相同的。 

本发明质量检测方法包括如下鉴别和/或含量测定方法。 

鉴别方法包括如下方法中的一种或几种： 

a.取该组合物制剂2-4g，研细，加乙醇10ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10-20∶0.5-1.5的石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

b.取鉴别a项下的供试品，作为供试品溶液；另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010版一部附录VI B)试验，吸 取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1-3∶0.5-1.5的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1∶8-10的1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 

c.取该组合物制剂2-4g，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-6∶0.5-1.5∶0.5-1.5的石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

含量测定： 

照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定； 

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20-30∶1-3∶50-90的甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000； 

对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20％-30％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得； 

供试品溶液的制备：取该组合物制剂6-9g，研细，取细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20％-30％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率59kHz)20-40分钟，放冷，再称定重量，用20％-30％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用20％-30％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得； 

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得； 

各制剂以每1g含红花以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计，不得少于0.3mg。 

本发明质量检测方法在原标准只有红花和降香药材的显微鉴别方法的基础上进行了提高和完善，增加了组合物中乳香、降香和木香药材的专属性薄层鉴别方法；在含量测定方面，参照大量的文献资料，羟基红花黄色素A为水溶性成分，采用高相液相色谱法，选定红花中羟基红花黄色素A作为含量测定指标，结果发现，在阴性样品中与羟基红花黄色素A相同的保留时间内没有出现杂质峰干扰，经反复试验，发现该检测方法专属性 强，重现性好，且阴性无干扰。由此建立了组合物中红花药材的主要有效成分羟基红花黄色素A的含量测定方法，提高后的标准增加了质量控制指标，方法简便、灵敏、准确，且重现性好，能更加有效地控制该产品的质量。 

附图说明

图1乳香药材薄层鉴别(1、2、3供试品4、5乳香对照药材6、阴性对照品) 

图2降香药材薄层鉴别(365nm荧光检视)(1、2、3供试品4、5降香对照药材6、阴性对照品) 

图3降香药材薄层鉴别显色后检视(1、2、3供试品4、5降香对照药材6、阴性对照品) 

图4木香药材薄层鉴别(1、2、3供试品4、5去氢木香内酯对照品6、阴性对照品) 

图5羟基红花黄色素A图谱 

图6如意珍宝片样品图谱 

图7如意珍宝片阴性样品图谱 

下述实验例和实施例用于进一步说明本发明，但不限于本发明。 

实验例1如意珍宝片中乳香的薄层鉴别 

供试品溶液的制备：取本品6片，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液，备用。 

对照药材溶液的制备：取乳香对照药材(批号：907-200202)0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液，备用。 

乳香阴性对照溶液的制备：按片剂的配方比例及制备工艺，配制不含乳香的阴性对照品，并照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 

层析条件的选择：照薄层色谱法试验，取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，分别以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(15∶1)和石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛试液，在105℃加热至斑点显色清晰，结果采用石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(15∶1)为展开剂层析效果最佳。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性在对照品相应的色谱位置上，无斑点干扰。该方法经多人复核，结果 均同上，证明该方法重现性好，稳定可行，可以作为乳香的专属性薄层鉴别方法。后附照片见图1(其中：1、2、3样品为供试品，4、5为乳香对照药材，6为阴性对照品，日光下检视)。 

实验例2如意珍宝片中降香的薄层鉴别： 

原标准仅收载了降香药材的显微鉴别方法，无该药材的薄层鉴别，本发明增加了本品中降香药材的专属性鉴别方法，经稳定性考察发现，该方法稳定可行，作为质量控制指标，符合简便、灵敏、快速的原则。 

取本品6片，研细，加乙醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取降香对照药材(批号：120952-200304)1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。再取按片剂的配方比例及制备工艺配制成的不含乳香的阴性对照品3g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。再喷以1％香草醛试液与无水乙醇(1∶9)的混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性仍然无干扰。该方法经多人复核，结果均同上，证明该方法重现性好，稳定可行，可以作为降香的专属性薄层鉴别方法。后附照片见图2(其中：1、2、3样品为供试品，4、5为降香对照药材，6为阴性对照品，365nm荧光检视)和图3(其中：1、2、3样品为供试品，4、5为降香对照药材，6为阴性对照品，日光下检视)。 

实验例3如意珍宝片中木香的薄层鉴别： 

木香为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根。其主要有效成分为木香烃内酯和去氢木香烃内酯。本发明增加了本品中木香药材的专属性鉴别方法，经稳定性考察发现，该方法稳定可行，作为质量控制指标，符合简便、灵敏、快速的原则。 

取本品6片，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。再取按片剂的配方比例及制备工艺配制成的不含木香的阴性对照品3g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，取上述溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯(5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的斑点，且阴性无干扰。该方法经多人复核，结果均同上，证明该方法重现性好，稳定可行，可以作为木香的专属性薄层鉴别方法。后附照片见图4(其中：1、2、3样品为供试品，4、5为去氢木香内酯对照品，6为阴性对照品，日光下检视)。 

实验例4红花中羟基红花黄色素A的含量测定方法 

在含量测定方面，本发明选定本品种可以作为含量测定指标的药材有红花(羟基红花黄色素A)、木香(木香烃内酯和去氢木香内酯)、以及荜茇(胡椒碱)等，然而在本品中，红花药材处方含量相对较大，有效成分明确，参照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)和相关资料，采用高相液相色谱对该指标进行了预试验，并同时进行了阴性试验，结果发现样品和对照的分离度较好，且阴性在选定条件下无干扰。经方法学考察发现，该检测方法专属性强，重现性好，由此建立了处方中红花药材的主要有效成分羟基红花黄色素A的含量测定方法，以便能更好的控制该产品的质量，具体如下： 

(1)仪器与试药 

高效液相色谱仪(Agilent公司)：包括LC-295紫外可见检测器，200LC泵，ANAS-TAR色谱工作站；CSF-IB超声波清洗器(上海超声波仪器厂)； 

甲醇、乙腈均为色谱纯，其余为分析纯； 

羟基红花黄色素A购自中国药品生物制品鉴定所(批号为：111637-200201)； 

如意珍宝片为甘肃奇正藏药有限责任公司产品。 

(2)色谱条件 

十八烷基键合硅胶为填充剂；色谱柱：Kromasil-C18柱(4.6×250mm，大连依利特有限公司生产)； 

流动相：甲醇-乙腈-0.7％磷酸(V∶V∶V＝26∶2∶72)； 

流速：0.80ml/min； 

检测波长：403nm； 

柱温：室温。 

3.色谱系统适用性试验 

在该色谱条件下，羟基红花黄色素A与其余杂质峰分离效果较好，理论塔板数以羟基红花黄色素A计算为2500。 

4.提取溶剂、提取方法以及提取时间的选择 

4.1提取溶剂的选择： 

根据资料显示羟基红花黄色素A为水溶性成分，在水和低浓度的甲醇或乙醇中溶解度较大；先后采用25％甲醇、38％甲醇、25％乙醇，50％乙醇以及水作为溶剂进行提取，试 验发现用38％甲醇、25％乙醇、50％乙醇以及水作为溶剂时，样品过滤比较困难，而采用25％甲醇时样品较容易过滤。经反复试验确定以25％甲醇为溶剂，对样品中红花黄色素的溶解度较大。 

4.2、不同提取方法对处方中红花黄色素含量的影响，见表1。 

表1不同提取方法对处方中羟基红花黄色素A含量的影响 

由上表可知，用25％甲醇回流提取和超声提取样品中红花黄色素的含量几乎无影响，但为了提高工作效率，节省检验时间，依照简便、灵敏、快速的原则，选择超声处理的方法对样品进行提取。 

5.对照品溶液与供试品溶液的配制方法 

I、对照品溶液的制备：取羟基红花黄色素A对照品，加25％甲醇适量，制成每1ml含0.3mg的对照品溶液，备用。 

II、供试品溶液的制备：取本品约15片，研细，取细粉5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率59kHz)30分钟，放冷，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液，即得。 

III、阴性供试品溶液的制备：取缺红花药材的阴性样品5g，同法制成阴性供试品溶液，备用。 

6.阴性干扰试验 

精密吸取供试品溶液、阴性供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，由色谱图可知，在与对照品色谱峰保留时间相同的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性供试品溶液在此波长无吸收，对本品中羟基红花黄色素A的含量测定无干扰。见色谱图5、6、7。 

7.线性关系的考察 

精密吸取上述对照品溶液各0.5、1、1.5、2.5、4.5、5.0ml、分别置于10ml容量瓶中，加25％甲醇稀释至刻度，摇匀，备用；取上述对照品溶液各20μl，注入液相色谱 仪，测定峰面积，结果见表2。羟基红花黄色素A在10～100μg/ml内峰面积与对照品的浓度呈良好的线性关系，其回归方程为y＝72397x+28.857(r＝0.9999)。 

表2羟基红花黄色素A对照品浓度与峰面积 

8.精密度试验 

精密吸取同一对照品溶液(0.03mg/ml)，连续进样5次，测定峰面积，结果见表3。 

表3样品精密度试验结果 

试验表明，精密度良好，RSD为0.62％。 

9.稳定性试验 

精密吸取同一供试品(批号20040401)溶液20μl，分别于0、2、4、6、8h进样，测定峰面积，结果见表4。 

表4稳定性试验结果 

试验表明，样品在8小时内测定，结果稳定，RSD为0.44％。 

10.重现性试验 

取本品(批号：20040401)5份，按照样品制备方法进行样品处理，分别进样，计算羟基红花黄色素A的含量及RSD，结果见表5。 

表5重现性试验结果 

试验表明，同一批样品在取样5份测定，结果重现性较好，RSD为1.77％。 

11.回收率试验 

取已知含量(0.64mg/g)的如意珍宝片(批号：20040401)6份，研细，每份约1.5g，精密称定，分别加入羟基红花黄色素A对照品溶液(0.2mg/ml)1ml，依法处理样品，测定峰面积，求得羟基红花黄色素A含量，计算回收率，测定结果见表6。 

表6回收率试验结果 

试验表明，本法回收率好，RSD为1.86％。 

12.样品中羟基红花黄色素A的含量测定 

精密吸取供试品溶液20μl进样，依法测定7批样品的色谱峰峰面积，每批样品处理2份平行样，测定，计算平均值，计算羟基红花黄色素A的含量，结果见表7。 

表7样品中羟基红花黄色素A的含量测定结果 

根据以上7批样品的含量测定结果，如意珍宝片含红花以羟基红花黄色素A计在0.37mg/g～0.755mg/g的范围内，以此为据，暂定本品中每1g含红花以羟基红花黄色素A计，应不得少于0.3mg。 

实施例1本发明片剂的质量检测方法 

珍珠母22.69g、沉香22.69g、石灰华22.69g、金礞石6.81g、红花22.69g、螃蟹11.34g、丁香9.07g、毛诃子(去核)22.69g、肉豆蔻9.07g、豆蔻9.07g、余甘子29.49g、草果6.81g、香旱芹9.07g、檀香18.15g、黑种草子9.07g、降香74.86g、荜茇6.81g、诃子(去核)29.49g、高良姜18.15g、甘草膏9.07g、肉桂11.34g、乳香 13.61g、木香18.15g、决明子13.61g、水牛角9.07g、黄葵子11.34g、短穗兔耳草34.03g、藏木香18.15g、人工麝香0.45g、人工牛黄0.45g。 

制备工艺：以上三十味，除人工牛黄、水牛角、人工麝香、甘草膏外，其余粉碎成细粉，超微粉碎，加入人工牛黄、人工麝香、水牛角细粉、过筛，混匀，用甘草膏加适量水制粒，干燥，压片，包衣，即得。0.5g/片。一次4-5片，2次/日。 

其质量检测方法为： 

【鉴别】(1)取本品6片，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇约1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(15∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(2)取[鉴别](1)项下的供试品，作为供试品溶液。另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇(1∶9)的混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(3)取本品6片，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯(5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；检测波长403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000。 

对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得。 

供试品溶液的制备本品15片，研细，取细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率59kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本品每1g含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于0.3mg。实施例2本发明丸剂的质量检测方法 

【配方】 

【制法】以上三十味，除牛黄、水牛角、麝香、甘草膏外，其余粉碎成细粉，加入牛黄、麝香、水牛角细粉、过筛，混匀，用甘草膏加适量水泛丸，干燥，即得。0.5g/丸。一次4～5丸，一日2次。 

其质量检测方法为： 

【鉴别】(1)取本品6丸，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇约1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(15∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(2)取[鉴别](1)项下的供试品，作为供试品溶液。另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜 色的荧光斑点；再喷以1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇(1∶9)的混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(3)取本品6丸，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯(5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；检测波长403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000。 

对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得。 

供试品溶液的制备本品15丸，研细，取细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率59kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本品每1g含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于0.3mg。 

实施例3本发明胶囊剂的质量检测方法 

珍珠母22.69g、沉香22.69g、石灰华22.69g、金礞石6.81g、红花22.69g、螃蟹11.34g、丁香9.07g、毛诃子(去核)22.69g、肉豆蔻9.07g、豆蔻9.07g、余甘子29.49g、草果6.81g、香旱芹9.07g、檀香18.15g、黑种草子9.07g、降香74.86g、荜茇6.81g、诃子(去核)29.49g、高良姜18.15g、甘草膏9.07g、肉桂11.34g、乳香13.61g、木香18.15g、决明子13.61g、水牛角浓缩粉9.07g、黄葵子11.34g、短穗兔耳草34.03g、藏木香18.15g、人工麝香0.45g、体外培育牛黄0.45g。 

制备工艺：以上三十味，除体外培育牛黄、水牛角浓缩粉、人工麝香、甘草膏外，其余粉碎成细粉，超微粉碎，加入体外培育牛黄、人工麝香、水牛角浓缩粉、过筛，混匀，用甘草膏加适量水制粒，干燥，装入胶囊，即得。0.5g/粒。一次4-5粒，2次/日。 

其质量检测方法为： 

【鉴别】(1)取本品6粒，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇约1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(15∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(2)取[鉴别](1)项下的供试品，作为供试品溶液。另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇(1∶9)的混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

(3)取本品6粒，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-乙酸乙酯(5∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定。 

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相；检测波长403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000。 

对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得。 

供试品溶液的制备本品15粒，研细，取细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率160W，频率59kHz)30分钟，放冷， 再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。 

本品每1g含红花以羟基红花黄色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)计，不得少于0.3mg。 

Claims (5)

1.一种药物组合物制剂的质量检测方法，该药物组合物制剂是由原料药珍珠母10-35重量份、沉香10-35重量份、石灰华10-35重量份、金礞石2-10重量份、红花10-35重量份、螃蟹5-18重量份、丁香5-15重量份、去核的毛诃子10-35重量份、肉豆蔻5-15重量份、豆蔻5-15重量份、余甘子20-50重量份、草果2-9重量份、香旱芹5-15重量份、檀香10-30重量份、黑种草子5-15重量份、降香50-100重量份、荜茇2-9重量份、去核的诃子20-50重量份、高良姜10-30重量份、甘草膏5-15重量份、肉桂5-18重量份、乳香8-18重量份、木香10-30重量份、决明子8-18重量份、水牛角或水牛角浓缩粉5-15重量份、黄葵子5-18重量份、短穗兔耳草20-50重量份、藏木香10-30重量份、人工麝香0.1-1重量份、人工牛黄或体外培育牛黄0.1-1重量份，按药剂学常规方法制成的各种制剂，其特征在于该方法含有如下一种或几种鉴别方法：

a.取该组合物制剂2-4g，研细，加乙醇10ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以10-20∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取鉴别a项下的供试品，作为供试品溶液；另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1-3∶0.5-1.5的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1∶8-10的1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取该组合物制剂2-4g，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4-6∶0.5-1.5∶0.5-1.5的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于该方法含有如下一种或几种鉴别方法：

a.取该组合物制剂3g，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取鉴别a项下的供试品，作为供试品溶液；另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2∶1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1∶9的1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取该组合物制剂3g，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶1的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.如权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定方法：

照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以20-30∶1-3∶50-90的甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加20％-30％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取该组合物制剂6-9g，研细，取细粉5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20％-30％甲醇50ml，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用20％-30％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用20％-30％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；各制剂以每1g含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于0.3mg。

4.如权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定方法：

照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6∶2∶72的甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取该组合物制剂7.5g，研细，取细粉5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；各制剂以每1g含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于0.3mg。

5.一种由珍珠母22.69重量份、沉香22.69重量份、石灰华22.69重量份、金礞石6.81重量份、红花22.69重量份、螃蟹11.34重量份、丁香9.07重量份、去核的毛诃子22.69重量份、肉豆蔻9.07重量份、豆蔻9.07重量份、余甘子29.49重量份、草果6.81重量份、香旱芹9.07重量份、檀香18.15重量份、黑种草子9.07重量份、降香74.86重量份、荜茇6.81重量份、去核的诃子29.49重量份、高良姜18.15重量份、甘草膏9.07重量份、肉桂11.34重量份、乳香13.61重量份、木香18.15重量份、决明子13.61重量份、水牛角或水牛角浓缩粉9.07重量份、黄葵子11.34重量份、短穗兔耳草34.03重量份、藏木香18.15重量份、人工麝香0.45重量份、人工牛黄或体外培育牛黄0.45重量份，按药剂学常规方法制成的各种制剂的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

鉴别：

a.取该组合物制剂3g，研细，加乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材0.5g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶1的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b.取鉴别a项下的供试品，作为供试品溶液；另取降香对照药材1g，加乙醇10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以2∶1的甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以1∶9的1％香草醛硫酸溶液与无水乙醇混合液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取该组合物制剂3g，研细，置具塞锥形瓶中，加乙醚15ml，密塞，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取去氢木香内酯，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5∶1∶1的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以6∶2∶72的甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液为流动相；检测波长403nm；理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A对照品适量，加25％甲醇制成每1ml含30μg的对照品溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取该组合物制剂7.5g，研细，取细粉5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml至10ml容量瓶中，用25％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；各制剂以每1g含红花以羟基红花黄色素A计，不得少于0.3mg。

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