CN102266367B - 一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物。它含有有效成分竹节参总皂苷和竹节参多糖以及在药学上可接受的载体。本发明竹节参总皂苷与多糖组合物可明显改善这些现象，可以非常明显地降低肝功指标；减少肝脏组织中MDA，增强SOD、GSH-Px活性，减少肝脏组织炎性浸润和脂肪空泡的产生。

Description

一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物

【技术领域】

本发明属于中药技术领域。更具体地，本发明涉及一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物。

【背景技术】

在我国，随着社会经济发展、人们工作生活节奏加快和文化风俗的影响，中国酒精消耗量迅速增长，酒精摄入量的激增对我国居民健康状况的威胁日益严峻。早在2006年中国的酒精消耗量已达到180万吨，我国的烈性酒消费市场已跃居全球首位，其中65%饮酒人群为不健康饮酒，其单次饮酒量是国际安全饮用标准的2倍；并且由酒精引起的死亡率和各种疾病的发病率均高于吸烟，个人、社会对酒精伤害者的救治成本已经远远高于酿酒行业产销给国家带来的经济效应。酒精性肝病(Alcoho1ic liver disease，ALD)是由于长期大量饮酒(饮酒史超过5年，折合乙醇量男性≥40g/d，女性≥20g/d)所致的肝脏疾病，初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化；该病是我国常见的肝脏疾病之一，又常和肝炎病毒感染混合存在，起到叠加的致病的作用，更易并发肝硬化及肝癌。

目前，我国广大医药工作者积极挖掘丰富的祖国医学资源，为解决医治酒精性肝病难题进行了大量研究。

例如CN200710025576.公开了野菊花乙醇提取物在制备防治酒精性肝病的药物中的应用，野菊花乙醇提取物既能治标，又能治本，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景；CN200910102475涉及一种防治酒精性肝病的中药保健品制剂，它是由葛花、枳椇子和甘草原料药制成的。所述的中药保健品制剂可有效地阻止乙醇导致肝脏GSH耗竭和MDA升高，减轻肝细胞脂肪变性，具有预防乙醇性肝损伤的功能；CN200910167626涉及一种藏茵陈提取物在制备治疗轻型酒精性肝病药物中的新用途，试验证明藏茵陈对酒精引起的轻型酒精性肝损伤模型有治疗作用，可以促进酒精引起的大鼠轻型酒精性肝损伤的逆转；CN200810305398涉及赶黄草提取物在制备治疗酒精性肝病的药物中的用途，对酒精性肝病有明确的治疗作用。

由这些中药治疗酒精性肝病的专利申请文件可以看出，祖国医学资源医治酒精性肝病方面作用显著。

值得关注的是CN101015642公开了一种降醇护肝复方胶囊。配方是：竹节人参：20％-40％；丝胶：40％-60％；枳椇子：2％-4％；茯苓：2％-4％；芦荟：2％-4％；橘皮：2％-4％；维生素B1：0.5％-2.5％；维生素B2：0.5％-2.5％；维生素C：0.5％-2.5％。主要用于抑制酒精在胃肠道的吸收，预防治疗因长期或急性、大量饮酒所造成肝损伤的中药配方。

该发现提示：我国西南地区民族民间常用中草药—竹节参作为构成降醇护肝复方胶囊成分之一，通过抑制酒精在胃肠道吸收，发挥了抗酒精性肝损伤的作用。

竹节参（rhizoma Panax japonicus）又名竹节三七、竹节人参、白三七等，系五加科人参属植物竹节参Panax japonicus C.A.Meyer的干燥呈竹鞭状根茎，是我国西南地区民间常用中草药，为1977年以后各版《中国药典》所收载。

氧化损伤被认为是酒精性肝损伤重要发病机制之一，在酒精性肝损伤的形成和发展过程中起重要作用。

竹节参的主要有效成分包括皂苷和竹节参多糖两类物质，均具有较好的抗氧化损伤活性。但是竹节参多糖对酒精性肝损伤的保护作用尚未见报道，亦未见到将竹节参总皂苷和竹节参多糖两种有效组分优化组合，协同治疗酒精性肝病的技术。

为此，本发明人经过长期大量试验研究，终于完成了本发明。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物。所述的药物组合物含有有效成分100-400重量份竹节参总皂苷和60-250重量份竹节参多糖。

根据本发明的一种优选实施方式，所述的药物组合物含有有效成分竹节参总皂苷150-350重量份竹节参总皂苷和80-200重量份竹节参多糖。

根据本发明的一种更优选实施方式，所述的药物组合物含有有效成分竹节参总皂苷200-300重量份竹节参总皂苷和100-150重量份竹节参多糖。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的竹节参总皂苷是按照下述方式提取的：

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为5-15用重量百分浓度40-80%乙醇水溶液浸泡1-3h，然后进行加热回流提取2-4次，每次回流提取2-4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的竹节参多糖是按照下述方式提取的：

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后用乙醇脱去脂肪，干燥后用100-120℃水提取1-3次，每次0.5-1h，再用重量百分浓度的70-90%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为20-30%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度50-80℃与0.01-0.1MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的药物组合物还含有在药学上可接受的载体。

根据本发明的另一种优选实施方式，在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂或矫味剂的载体。

所述的填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖或微晶纤维素；所述的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；所述的润湿剂选自水、甘油、乙醇、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素；所述的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠；所述的吸收促进剂是季铵化合物；所述的表面活性剂选自十六烷醇或十二烷基硫酸钠；所述的吸附载体选自高龄土或皂粘土；所述的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的药物组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

下面将更详细地描述本发明。

本发明涉及一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物。所述的药物组合物含有有效成分100-400重量份竹节参总皂苷和60-250重量份竹节参多糖。

通过小鼠酒精性肝损伤模型发现，小鼠酒精肝损伤后肝功指标明显升高；肝脏组织中丙二醛（MDA）含量明显高于空白组，超氧化物歧化酶（SOD），还原性谷胱甘肽酶(GSH-PX)活性明显降低；病理学检测发现肝脏组织出现明显炎性浸润和大量脂肪空泡。竹节参总皂苷、竹节参多糖与它们的组合均可明显改善这些现象，表现为肝功能明显改善；降低肝脏组织中MDA，增强SOD、GSH-PX活性，减少肝脏组织炎性浸润和脂肪空泡的产生。

优选地，所述的药物组合物含有有效成分竹节参总皂苷150-350重量份竹节参总皂苷和80-200重量份竹节参多糖。

更优选地，所述的药物组合物含有有效成分竹节参总皂苷200-300重量份竹节参总皂苷和100-150重量份竹节参多糖。

根据本发明，所述的竹节参总皂苷是按照下述方式提取的：

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为5-15用重量百分浓度40-80%乙醇水溶液浸泡1-3h，然后进行加热回流提取2-4次，每次回流提取2-4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

优选地，所述的竹节参在温度65-75℃下进行干燥25-35分钟。

目前，秋季采收加工后的中药材，通常将其含水量控制在一定限度内，以保证质量不会发生异变。因此，从市场上获得的竹节参一般并不需要进行干燥。但是，如果竹节参药材返潮或从生产地获得的竹节参则需要进行干燥，可以采用干燥机烘干法、远红外加热干燥法或微波干燥法等现代方法进行干燥。

干燥机烘干法是使用真空干燥箱、真空回转干燥器、气流干燥器、喷雾干燥器、沸腾床、流化床、冷冻干燥机等干燥机进行干燥的方法，例如常州市宙峰化工机械有限公司生产的各种干燥机。

远红外加热干燥法是将电能转变为远红外辐射，从而被药材的分子吸收，产生共振，引起分子和原子的振动和转动，导致物体变热，经过热扩散、蒸发和化学变化，最终达到干燥的目的，例如保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器。

微波干燥法是利用微波进行干燥的方法，微波是波长很短、频率很高的电磁波，微波主要利用了微波的热效应。微波所形成的交变电场方向发生着高速的改变，这种改变使处于微波场中的极性分子也处于高速振荡状态。如果富含水分的药材处于2450MHz的微波场中，具有很大极性的水分子的振荡频率将达到0.408亿次/min，分子的快速运动使水分子间的碰撞和摩擦加剧，产生大量的热量，从而能把药材加热和干燥，可以使用例如广州科威微波能有限公司销售的微波干燥设备。

在本发明中，使用在中药材加工中通常使用的粉碎设备，例如使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其干燥竹节参粉碎至20-40目。

优选地，所述乙醇水溶液体积毫升与所述竹节参粉重量克之比为8-12。

更优选地，所述乙醇水溶液体积毫升与所述竹节参粉重量克之比为10。

如果所述乙醇水溶液体积毫升与所述竹节参粉重量克之比低于5，则竹节参粉中的有效成分竹节参总皂苷提取率明显降低，但需要增加提取次数才可改善这种情况。

如果所述乙醇水溶液体积毫升与所述竹节参粉重量克之比高于15，则竹节参粉中的有效成分竹节参总皂苷提取率变化不大，但乙醇用量将会明显增加，从而将显著增加药物的生产成本。

优选地，所述的竹节参粉使用重量百分浓度50-70%乙醇水溶液浸泡1.5-2.5h。

更优选地，所述的竹节参粉使用重量百分浓度60%乙醇水溶液浸泡2.0h。

根据本发明，优选地，所述的竹节参粉使用热回流抽提浓缩器加热回流提取3次，每次回流提取1.5-2.5h。

更优选地，所述的竹节参粉使用热回流抽提浓缩器加热回流提取3次，每次回流提取2.0h。

所述的热回流抽提浓缩器例如是温州市森博轻工机械有限公司生产的热回流抽提浓缩器。

所述分离除去提取剩余物是采用通常的固液分离设备除去提取剩余物，即提取后的竹节参残渣，例如使用辽阳天翔制药机械厂生产的各种管式离心机进行分离。

根据本发明，所述的竹节参多糖是按照下述方式提取的：

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后用乙醇脱去脂肪，干燥后用100-120℃水提取1-3次，每次0.5-1h，再用重量百分浓度的70-90%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为20-30%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度50-80℃与0.01-0.1MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

在竹节参多糖提取步骤中，竹节参干燥、粉碎及其它处理方式与在前面有关竹节参总皂苷提取步骤的相同，在此不再赘述。

根据本发明，所述的乙醇脱去脂肪是一种在本技术领域中普遍采用的脱去脂肪方法，例如在王健，“三七多糖的分离纯化及免疫活性的研究”（浙江大学博士学位论文，2001），以及季宇彬，“中药多糖的化学与药理”（北京:人民卫生出版社.2005.5）中描述的乙醇脱去脂肪方法。

在本发明中，所述的Sevag法是一种在本技术领域中普遍采用的有效除去游离蛋白的方法，即在竹节参水提取液中加入氯仿-正丁醇混合溶液，进行充分搅拌混合，将游离蛋白变性成为不溶性物质，然后采用离心分离除去。

根据本发明，用自来水和蒸馏水透析应该理解是其目的在于除去各种小分子杂质。

根据本发明，所述的药物组合物还含有在药学上可接受的载体。

在本发明中，在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂或矫味剂的载体。

根据本发明，所述的填充剂应该理解是一种用以增加片剂的重量与体积，利于成型和分剂量的辅料。所述的填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖或微晶纤维素。

根据本发明，所述的粘合剂应该理解是当药物原料本身无粘性或粘性不足时，为了药物制粒而加入的一种粘性物质。粘合剂可以用其溶液，也可以用其细粉。

在本发明中，所述的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮。

根据本发明，所述的润湿剂应该理解是一种本身无粘性，但可润湿片剂原辅料并诱发其粘性而能制成颗粒的液体，即与片剂的药物及稀释剂等混匀，加入润湿剂诱发粘性。

在本发明中，所述的润湿剂选自水、甘油、乙醇、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素；

根据本发明，所述的崩解剂应该理解是一种加入片剂中能促进片剂在胃肠液中快速崩解成细小粒子的辅料。人们知道，片剂经过压缩，片剂的硬度大，如果其中不含有可以促进崩解作用的辅料，它在胃肠道中崩解很慢，影响疗效。

在本发明中，所述的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠。

根据本发明，所述的吸收促进剂是一种能可逆地、特异或非特异地显著增强药物经胃肠道吸收，进而起到提高血药浓度和生物利用度作用的一些制剂材料(药物促吸剂)。

在本发明中，所述的吸收促进剂是季铵化合物；所述的表面活性剂选自十六烷醇或十二烷基硫酸钠。

在本发明中，所述的吸附载体选自高龄土或皂粘土。所述的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

在本发明中，在药学上可接受的载体在所述的药物组合物中的含量是常规含量，即本技术领域的技术人员根据现有技术很容易确定的含量。

根据本发明的另一种优选实施方式，所述的药物组合物是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。

根据本发明，这些颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型都是本技术领域的技术人员采用常规方法可以制备得到的。

在本发明中，采用苯酚浓硫酸法检测总糖含量。苯酚浓硫酸法测定糖的方法是在浓硫酸作用下，糖脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，它在485nm波长处有最大的吸收峰，因此可以采用比色法测定其含量。以葡萄糖为标准品，采用苯酚浓硫酸法检测总糖含量为69.70%。

在本发明中，采用DNS法检测还原糖含量。还原糖是指含有自由醛基和酮基的糖类。利用单糖、双糖与多糖溶解度的不同可以将它们分离。还原糖和碱性二硝基水杨酸试剂一起共热，产生一种棕红色的氨基化合物，在一定的浓度范围内，棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此，采用比色法可以测定样品中还原糖以及总糖的量。在采用DNS法检测其提取的竹节参多糖中，还原糖含量为5.82%，多糖含量为64.19%，主链结构为β-D-1→3-甘露聚糖和/或α-D-3→4-甘露聚糖，含半乳聚糖、木聚糖和葡聚糖的杂多糖。

[有益效果]

本发明的有益效果如下：

竹节参总皂苷、竹节参多糖与它们的组合均可明显明显改善肝功能；降低肝脏组织中MDA，增强SOD、GSH-PX活性，减少肝脏组织炎性浸润和脂肪空泡的产生。其中竹节参总皂苷与多糖组合物的效果更佳。

【附图说明】

图1关于对酒精肝损伤小鼠肝脏病理变化影响(HE染色,×400)

图中：A-正常组；B-模型组；C-总皂苷高剂量组；D-总皂苷中剂量组；E-总皂苷低剂量组；F-多糖高剂量组；G-多糖中剂量组；H-多糖低剂量组；I-本发明组合物高剂量组；J-本发明组合物中剂量组；K-本发明组合物低剂量组。

【具体实施方式】

实施例1：本发明颗粒剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，将湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度60℃进行干燥40分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至40目。

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为10用重量百分浓度60%乙醇水溶液浸泡2h，然后进行加热回流提取3次，每次回流提取3h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度60%乙醇水溶液脱去脂肪，干燥后用110℃水提取2次，每次0.6h，再用重量百分浓度的80%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用本申请说明书中描述的Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为25%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度60℃与0.01-0.1MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取100mg得到的竹节参总皂苷与60mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再使用75%乙醇采用常规方法制成颗粒，在温度30℃下进行干燥，包装。

实施例2：本发明颗粒剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：

使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度75℃进行干燥25分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至25目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为5用重量百分浓度40%乙醇水溶液浸泡3h，然后进行加热回流提取4次，每次回流提取4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度65%用乙醇脱去脂肪，干燥后用100℃水提取1次，每次0.5h，再用重量百分浓度的70%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为20%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度50℃与0.1MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取400mg得到的竹节参总皂苷与250mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再用75%乙醇采用常规方法制成颗粒，在温度30℃下进行干燥，包装。

实施例3：本发明颗粒剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度68℃进行干燥32分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至32目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为15用重量百分浓度80%乙醇水溶液浸泡2h，然后进行加热回流提取3次，每次回流提取3h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度80%用乙醇脱去脂肪，干燥后用120℃水提取3次，每次1.0h，再用重量百分浓度的80%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为26%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度80℃与0.04MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取150mg得到的竹节参总皂苷与80mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再用75%乙醇采用常规方法制成颗粒，在温度30℃下进行干燥，包装。

实施例4：本发明胶囊剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度70℃进行干燥30分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至30目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为8用重量百分浓度50%乙醇水溶液浸泡1.5h，然后进行加热回流提取2次，每次回流提取3h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度70%用乙醇脱去脂肪，干燥后用105℃水提取2次，每次0.8h，再用重量百分浓度的70%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为28%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度70℃与0.06MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取350mg得到的竹节参总皂苷与200mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再装入目前市场上销售的胶囊，得到本发明的胶囊剂。

实施例5：本发明片剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度72℃进行干燥28分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至30目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为10用重量百分浓度70%乙醇水溶液浸泡2.5h，然后进行加热回流提取4次，每次回流提取4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度70%用乙醇脱去脂肪，干燥后用115℃水提取1次，每次0.9h，再用重量百分浓度的75%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为30%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度65℃与0.08MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取200mg得到的竹节参总皂苷与100mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再采用常规方法使用制备片剂常用的赋形剂淀粉制成湿颗粒，然后压片，干燥，包装，得到本发明的片剂。

实施例6：本发明丸剂的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度65℃进行干燥35分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至35目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为10用重量百分浓度70%乙醇水溶液浸泡2.5h，然后进行加热回流提取4次，每次回流提取4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度75%用乙醇脱去脂肪，干燥后用115℃水提取3次，每次0.7h，再用重量百分浓度的75%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为22%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度75℃与0.05MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取300mg得到的竹节参总皂苷与150mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再采用常规方法加入炼蜜制成本发明的丸剂。

实施例7：本发明口服液的制备

该实施例按照下述步骤进行：

竹节参预处理：使用保定市三环电源设备有限公司生产的远红外加热器，湖北省恩施自治州出产的竹节参在温度80℃进行干燥20分钟，然后使用使用山东青州市益康中药机械制造有限公司生产的粉碎设备将其粉碎至20目；

然后，得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为12用重量百分浓度55%乙醇水溶液浸泡2h，然后进行加热回流提取3次，每次回流提取3h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷。

得到的竹节参粉用重量百分浓度75%用乙醇脱去脂肪，干燥后用110℃水提取3次，每次0.7h，再用重量百分浓度的85%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为22%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度75℃与0.05MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖。

取300mg得到的竹节参总皂苷与150mg得到的竹节参多糖，混合均匀，再采用常规方法加入矫味剂蜂蜜和稀释剂水制成本发明的口服液。

试验实施例1：通过本试验实施例进一步说明本发明制剂的功效，竹节参对酒精性肝病的保护作用

通过小鼠酒精性肝损伤模型发现，小鼠酒精肝损伤后肝功指标明显升高；肝脏组织中丙二醛（MDA）含量明显高于空白组，超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显降低；病理学检测发现肝脏组织出现炎性浸润和脂肪空泡。竹节参竹节参总皂苷和竹节参多糖可明显改善这些现象，表现为肝功指标明显升高；减少肝脏组织中MDA，增强SOD、GSH-Px活性，减少肝脏组织炎性浸润和脂肪空泡的产生。

实验内容

一、材料与方法

1、药物与试剂：

本申请说明书实施例4提取的竹节参总皂苷，深褐色粉末；实施例4提取的竹节参多糖，褐色半透明晶体状。

国内畅销的某知名品牌白酒。

相关检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，批号分别为：丙二醛（MDA，20100625）、超氧化物歧化酶（SOD，20100324）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px，20100625）。

2、动物与主要仪器

昆明种雄性小鼠110只，体重18-22g，由湖北省疾控中心提供，动物合格证号：SCXK2008-0005。

使用的检测仪器是由天津市金贝儿科技有限公司销售的SFY3-400全自动生化检测仪、上海廷正仪器科技有限公司销售的721可见分光光度计等。

3、动物分组及给药

昆明种小鼠110只，随机分为空白组、模型组、竹节参总皂苷组（下面简称总皂苷组）、竹节参多糖组（下面简称多糖组）、竹节参总皂苷与多糖组合物高中低剂量组（下面简称本发明组合物组），其分组分别为竹节参总皂苷组（400mg,200mg,100mg），竹节参多糖组（250mg,125mg,62.5mg），竹节参总皂苷与多糖组（400+250mg,200+125mg,100+62.5mg）。

总皂苷组、多糖组、本发明组合物组各给一定剂量的药，每日给药两次，连续3天，在最后一次给药后1h，再分别给予模型组、总皂苷组、多糖组和本发明组合物组的小鼠某知名品牌白酒3-9g/kg，每日一次，连续2天，空白组给予等剂量的生理盐水。

4、组织样采集

最后1次给酒后12h，摘小鼠眼球取血，离心分离血清，利用本技术领域普遍采用的常规方法，使用SFY3-400全自动生化仪检测肝功指标，即丙氨酸氨基转移酶（ALT）与谷草转氨酶（AST）。

摘取肝脏，称重切取适量肝脏至于生理盐水中，制成10%匀浆，再以3000r/min离心10分钟，然后取上清液，采用本技术领域普遍采用的比色法检测MDA含量以及SOD、GSH-Px活性。

取剩余肝脏的同一部分肝组织，用10%甲醛固定，逐级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，常规制备石蜡切片待用，进行组织病理学观察。

5、统计学处理

（ALT/AST）转氨酶降低率=模型组转氨酶-药物组转氨酶/模型组转氨酶

按照下述公式计算q值，可以判断两种药物活性组分的组合是否具有增效作用：

q=E_AB/E_A+(1-E_A)*E_B

式中：E_AB为组合物转氨酶降低率或MDA降低率或SOD活性升高率或GSH-Px活性升高率，E_A为A药转氨酶抑制率或MDA降低率或SOD活性升高率或GSH-Px活性升高率，E_A为B药转氨酶抑制率或MDA降低率或SOD活性升高率或GSH-Px活性升高率。

当时，表明两种药物活性组分的作用为简单相加。当q>1.15时，表明两种药物活性组分具有协同增效作用。q<0.85，表明两种药物活性组分具有拮抗作用。

实验数据用SPSS13.0软件处理。以均数±标准差

表示，组间比较采用t检验。

二、实验结果

1、竹节参对酒精性肝损伤小鼠肝功能指标的影响

其实验结果列于表1。酒精性肝损伤小鼠ALT、AST明显升高（P<0.05），揭示肝细胞受损。表1列出的竹节参总皂苷组、竹节参多糖组、本发明组合物组各组数据，说明竹节参总皂苷和竹节参多糖均具有降低肝脏ALT、AST，保护肝细胞的作用，采用上述公式计算，本发明组合物组各组q值均大于1.15，说明竹节参总皂苷和竹节参多糖有良好的协同增效作用，两者组合的效果优于单一组分的效果。

表1：关于对酒精性肝损伤小鼠肝功指标的影响(

n＝10)

表中：^#表示模型组与空白组比较P<0.05，^##表示模型组与空白组比较P<0.01；^*表示与模型组相比，P<0.05，**表示与模型组相比，P<0.01；^※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.05，^※※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.01；^△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.05，^△△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.01。

2、竹节参对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中MDA含量的影响

酒精性肝损伤小鼠MDA含量明显增加(P<0.05)，竹节参总皂苷组、竹节参多糖组、本发明组合物组各组数据说明竹节参总皂苷和竹节参多糖均能降低MDA含量，并且两者的组合物的效果优于比单用组分，具有统计学意义。采用上述公式计算，本发明组合物组各组q值均大于1.15，说明竹节参总皂苷和竹节参多糖有良好的协同增效作用，两者组合的效果优于单一组分的效果。测定结果列于表2。

表2：关于对酒精肝损伤小鼠肝脏组织中MDA含量的影响(

n＝10)

表中：^#表示模型组与空白组比较P<0.05，^##表示模型组与空白组比较P<0.01；^*表示与模型组相比，P<0.05，**表示与模型组相比，P<0.01；^※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.05，^※※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.01；^△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.05，^△△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.01。

3、关于对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中SOD活性的影响

酒精性肝损伤小鼠SOD活性明显降低(P<0.05)，竹节参总皂苷组、竹节参多糖组、本发明组合物组各组数据说明竹节参总皂苷和竹节参多糖均能增加SOD活性，并且两者的组合物的效果优于比单用组分，具有统计学意义。采用上述公式计算，本发明组合物组各组q值均大于1.15，说明竹节参总皂苷和竹节参多糖有良好的协同增效作用，两者组合的效果优于单一组分的效果。测定结果列于表3。

表3：关于对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中SOD活性的影响(

n＝10)

表中：^#表示模型组与空白组比较P<0.05，^##表示模型组与空白组比较P<0.01；^*表示与模型组相比，P<0.05，**表示与模型组相比，P<0.01；^※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.05，^※※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.01；^△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.05，^△△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.01。

4、关于对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中GSH-Px活性的影响

酒精性肝损伤小鼠GSH-Px活性明显减少(P<0.05)，竹节参总皂苷组、竹节参多糖组、本发明组合物组各组数据说明竹节参总皂苷和竹节参多糖均能增加GSH-Px活性，并且两者的组合物的效果优于比单用组分，具有统计学意义。采用上述公式计算，本发明组合物组各组q值均大于1.15，说明竹节参总皂苷和竹节参多糖有良好的协同增效作用，两者组合的效果优于单一组分的效果。测定结果列于表4。

表4竹节参对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织中GSH-Px活性的影响(

n＝10)

表中：^#表示模型组与空白组比较P<0.05，^##表示模型组与空白组比较P<0.01；^*表示与模型组相比，P<0.05，**表示与模型组相比，P<0.01；^※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.05，^※※表示本发明组合物组与同等剂量总皂苷组相比，P<0.01；^△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.05，^△△表示本发明组合物组与同等剂量多糖组相比，P<0.01。

5、关于对酒精性肝损伤小鼠肝脏组织病理变化的影响

由图1可以看出，正常的小鼠肝脏组织肝细胞边界清晰，细胞形态完整、肝细胞索排列整齐，无脂肪空泡和炎性细胞浸润。模型组小鼠肝细胞形态发生明显变化，产生大量脂肪空泡，并伴有炎性细胞浸润。竹节参总皂苷组和竹节参多糖组的肝脏组织形态变化较模型组轻微，脂肪空泡减少以及炎症细胞浸润减少，而本发明组合物组明显减少了肝脏炎性细胞浸润以及脂肪空泡的产生。

通过小鼠酒精性肝损伤模型发现，小鼠酒精肝损伤后肝功指标明显升高；肝脏组织中丙二醛（MDA）含量明显高于空白组，超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性明显降低；病理学检测发现肝脏组织出现炎性浸润和脂肪空泡。MDA是脂质过氧化的代谢产物，因而测定MDA的含量常常能够反映机体脂质过氧化的程度。GSH-Px、SOD是机体清除自由基的重要酶类，也是生物防御体系的关键酶类，在对抗乙醇肝损伤中起着重要的作用。本实验中，小鼠经酒精损伤后肝脏组织中MDA含量的增加说明了自由基对肝损伤的不同程度，模型组尤为严重；模型组、竹节参总皂苷组、多糖组与本发明组合物组可以降低小鼠肝脏组织中MDA含量；增强SOD、GSH-Px的活性，但本发明组合物组的作用更明显的减少自由基的产生，显著减轻脂质过氧化损伤，从而实现对酒精损伤肝脏组织的保护作用。

Claims (3)

1.一种用于治疗酒精性肝损伤的药物组合物，其特征在于它含有有效成分400重量份竹节参总皂苷和250重量份竹节参多糖； 

所述的竹节参总皂苷是按照下述方式提取的： 

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后得到的竹节参粉按照乙醇水溶液体积毫升与竹节参粉重量克之比为5-15用重量百分浓度40-80%乙醇水溶液浸泡1-3h，然后进行加热回流提取2-4次，每次回流提取2-4h，分离除去提取剩余物，得到提取液；使用液体干燥设备将得到的提取液进行蒸发干燥，得到所述的竹节参总皂苷； 

所述的竹节参多糖是按照下述方式提取的： 

让竹节参在温度60-80℃进行干燥20-40分钟，然后将其粉碎至20-40目竹节参粉；然后用乙醇脱去脂肪，干燥后用100-120℃水提取1-3次，每次0.5-1h，再用重量百分浓度的70-90%乙醇溶液进行醇沉一夜，抽滤得到含有多糖的沉淀物，然后用蒸馏水溶解，采用Sevag法除去其中存在的蛋白，再加入体积百分浓度为20-30%H₂O₂水溶液进行脱色，再用自来水和蒸馏水进行透析72h，经透析得到的溶液在温度50-80℃与0.01-0.1MPa真空下干燥得到所述的竹节参多糖； 

它还含有在药学上可接受的载体，所述的在药学上可接受的载体是一种或多种选自在药学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂或矫味剂的载体。 

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖或微晶纤维素；所述的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮；所述的润湿剂选自水、甘油、乙醇、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素；所述的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧 甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠；所述的吸收促进剂是季铵化合物；所述的表面活性剂选自十六烷醇或十二烷基硫酸钠；所述的吸附载体选自高龄土或皂粘土；所述的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶或聚乙二醇。 

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于它是颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。 

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