CN102264892A

CN102264892A - 漆酶及其在低温使用的方法

Info

Publication number: CN102264892A
Application number: CN2009801521573A
Authority: CN
Inventors: W·阿什顿; A·J·克劳尔; J·C·麦考利夫; P·佩里库; 王华明
Original assignee: Danisco USA Inc
Current assignee: Danisco USA Inc
Priority date: 2008-12-24
Filing date: 2009-12-22
Publication date: 2011-11-30
Also published as: EP2376629A1; BRPI0924180A8; CA2747813A1; US20110302722A1; MX2011006779A; KR20110117064A; BRPI0924180A2; JP2012514139A; JP2013241721A; JP5422670B2; WO2010075402A1

Abstract

描述了漆酶和编码此类漆酶的核酸序列。该漆酶可以在用于修饰粗斜纹布织物的颜色的改进方法中与介质联合使用。也描述了使用漆酶的低温和单浴纺织品加工。

Description

漆酶及其在低温使用的方法

优先权

本申请要求2008年12月24日提交的美国临时专利申请系列号61/140,724、2009年2月24日提交的61/154,882和2009年8月27日提交的61/237,532的优先权，所述每一临时专利申请以其整体引入作为参考。

技术领域

本系统、组合物和方法涉及漆酶和编码此类漆酶的核酸序列。该漆酶可以在用于修饰粗斜棉布织物的颜色的改进方法中与介质联合使用。

背景

漆酶是含铜的酚氧化酶，已知其在存在氧的情况下是有效的氧化剂。漆酶发现于微生物、真菌和高等生物中。可以将漆酶用于多种应用，包括纸浆和纸漂白、纸浆废水的处理、脱墨、工业脱色、衣物洗涤剂中的漂白剂、口腔护理牙齿增白剂，以及作为催化剂或促进剂用于聚合和氧化反应。

漆酶可以用于许多工业，包括洗涤剂工业、纸和纸浆工业、纺织品工业和食品工业中的多种应用。在一个应用中，将酚氧化酶用作为洗涤剂洗涤期间去除衣物上的污迹，例如食物污迹的辅助物。大多数漆酶在酸性pH范围内显示出pH最佳值，而在中性或碱性pH中失活。

已知漆酶由多种真菌产生，包括曲霉属(Aspergillus)、脉孢菌属(Neurospora)、柄孢壳属(Podospora)、葡萄孢属(Botrytis)、侧耳属(Pleurotus)、层孔菌属(Fornes)、射脉菌属(Phlebia)、栓菌属(Trametes)、多孔菌属(Polyporus)、葡萄穗霉属(Stachybotrys)、丝核菌属(Rhizoctonia)、双极蠕孢属(Bipolaris)、弯孢霉属(Curvularia)、壳单孢属(Amerosporium)、香茹属(Lentinus)、毁丝霉属(Myceliophtora)、鬼伞属(Coprinus)、梭孢壳属(Thielavia)、下皮黑孔属(Cerrena)、链霉菌属(Streptomyces)和Melanocarpus的物种。然而，仍对在多种应用中具有不同性能谱的漆酶存在需要。

对于许多应用，可以通过使用介质，也称作增强剂，来改进漆酶的氧化效力。本领域已知的包括漆酶和介质的系统是漆酶-介质系统(LMS)。相同的化合物也可以用于活化或起始漆酶的作用。

存在几种已知的在漆酶-介质系统中使用的介质。这些包括HBT(1-羟基苯并三唑)、ABTS[2，2′-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-亚磺酸)]、NHA(N-羟基乙酰苯胺)、NEIAA(N-乙酰基-N-苯基羟胺)、HBTO(3-羟基1，2，3-苯并三嗪-4(3H)-酮)和VIO(紫尿酸)。此外，已经发现了几种可以用作为介质的含有NH-OH或者N-O基团的化合物。

官能团和取代基对介质效率的影响很大。即使是相同种类的化合物，取代基也可以改变漆酶对底物的特异性，从而极大地增加或降低介质的效力。此外，介质可能对一种特定的应用是有效的，但是却不适合于另一种应用。当前的介质的另一缺点是，它们在使用期间倾向于聚合。因此，需要发现用于特定应用的有效介质。此种应用之一是纺织品的漂白，其中介质不会过于昂贵或者危险也是重要的。漆酶-介质系统的其他应用给出如下。

用于在低温使用漆酶的方法提供了节约能源方面的优点，例如，在纺织品加工方法中，其中可以降低用于加热加工浴的能量输入。研发在低温使用漆酶的方法用于应用例如酶促漂白将是期望的。

概述

描述了涉及漆酶的酶氧化系统、组合物和方法。在一个方面，提供了纺织品加工方法，包括在低于40℃，并且在足够造成纺织品的颜色修饰的条件下，将纺织品与漆酶和，任选地，介质接触一段时间。在一些实施方案中，颜色修饰选自颜色的增亮、颜色的改变、色光的改变、再沉积/回染的降低、和漂白。在一些实施方案中，温度是约20℃至低于40℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约35℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约30℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约23℃。在一些实施方案中，温度是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃。在一些实施方案中，温度是自来水的环境温度。

在一些实施方案中，纺织品是靛蓝染色的粗斜棉布。在一些实施方案中，纺织品是硫磺染色的粗斜棉布。在一些实施方案中，在纺织品与漆酶和介质接触前或同时，将粗斜棉布退浆和/或石洗。在一些实施方案中，在同一浴中进行石洗和纺织品与漆酶和介质接触。

在一些实施方案中，该方法进一步包括同时或顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触。在一些实施方案中，顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，并且其中在纺织品与漆酶和介质接触前进行纺织品与纤维素酶接触。在一些实施方案中，在同一浴中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，而无需在纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触之间排干浴液。

在一些实施方案中，纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触在低于40℃的温度进行。在一些实施方案中，温度是约20℃至低于40℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约35℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约30℃。在一些实施方案中，温度是约20℃至约23℃。在一些实施方案中，温度是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃。在一些实施方案中，温度是自来水的环境温度。

在一些实施方案中，纤维素酶与漆酶协同作用以产生具有更大程度的纺织品颜色增亮、颜色改变、色光改变、再沉积/回染降低、和/或漂白的纺织品。在一些实施方案中，纤维素酶与漆酶叠加作用以产生与没有包括纤维素酶的相同方法比较，具有更大程度的纺织品颜色增亮、颜色改变、色光改变、再沉积/回染降低、和/或漂白的纺织品。

在一些实施方案中，漆酶是微生物的漆酶。在一些实施方案中，漆酶来自下皮黑孔属物种。在一些实施方案中，漆酶来自单色下皮黑孔菌(Cerrena unicolor)。在一些实施方案中，漆酶是来自单色下皮黑孔菌的漆酶D。

在一些实施方案中，漆酶具有与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列至少70％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列至少80％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列至少90％或者甚至至少95％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少70％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少80％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少95％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，在即用型组合物中，将漆酶和介质一起提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质以固体形式提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质提供为颗粒。在具体的实施方案中，介质是syringonitrile。

在另一方面，提供了编码此类漆酶的核酸序列和用于表达漆酶的载体以及宿主细胞。在方法中漆酶可以在低温使用，所述方法中能量输入的降低将是所期望的，例如纺织品加工。在一些实施方案中，包含、组成为或基本组成为描述于SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14、16、18、19或20的任一氨基酸序列或者与任一SEQ ID NOs：2、4、6、8、12、14、16、18、19或20具有至少约60％、65％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％同一性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％同一性的氨基酸序列。在仍更特定的实施方案中，漆酶具有SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20的氨基酸序列。优选地，此类多肽具有可以例如，用本文所述的测定法测定的漆酶酶促活性。

在另一方面，提供了包含漆酶的组合物，所述漆酶含有、组成为或或基本组成为任一前述氨基酸序列。在一些实施方案中，组合物进一步包含缓冲系统以维持溶液中的组合物的约5.5至约6.5的pH。在一些实施方案中，组合物进一步包含介质。介质可以选自，例如，乙酰丁香酮、丁香醛、丁香酰胺、甲基丁香酰胺、2-羟乙基丁香酰胺、丁香酸甲酯、二甲基丁香酰胺、丁香酸和4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈(syringonitrile)。在一个实施方案中，介质是4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈。在一些实施方案中，组合物是固体形式。在一些实施方案中，在即用型组合物中，将漆酶和介质一起提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质以固体形式提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质提供为颗粒。在具体的实施方案中，介质是syringonitrile。

在一些实施方案中，将漆酶在约5至约7的pH、约20℃至约30℃的温度、约5∶1至约10∶1的浴比使用约15至约60分钟。

本系统、组合物和方法的这些和其他方面以及实施方案从说明书和附图中是显而易见的。

附图简述

图1显示，如实施例1中所述，在不同温度用漆酶修饰石洗粗斜棉布的颜色的效果。

图2显示，如实施例2中所述，漆酶和介质比率对修饰石洗粗斜棉布的颜色的影响。

图3显示，如实施例3中所述，温度对用“即用型”漆酶组合物修饰石洗粗斜棉布的颜色的影响。

图4显示，如实施例3中所述，温度对石洗粗斜棉布上漆酶的颜色修饰性能的影响。

图5显示，如实施例4-6中所述，与漆酶介导的颜色修饰组合的纤维素酶处理的效果。

发明详述

描述了涉及漆酶的酶氧化系统、组合物和方法。该系统、组合物和方法，例如，对于低温加工纺织品以实现颜色修饰是有用的。该工艺使用比常规纺织品加工技术更少的能量，并涉及更环保的化学试剂。将对该系统、组合物和方法的多个方面和实施方案进行描述。

定义

除非本文另外定义，本文中所用的全部技术术语及科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同意义。Singleton等人，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY，第2版，John Wiley and Sons，New York(1994)和Hale与Markham，THEHARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY，Harper Perennial，NY(1991)提供了本发明中所使用的众多术语的通用字典。定义了以下的术语用于额外说明。

如本文中所用，术语“酶”指催化化学反应的蛋白质。酶的催化功能构成了其“催化活性”或“活性”。酶一般根据其催化反应的类型，例如，酚类的氧化、肽键的水解、核苷酸的掺入等分类。

如本文中所用，术语“底物”指酶在上面执行其催化活性以产生产物的物质(例如，化学化合物)。

如本文中所用，“漆酶”是含多个铜的氧化酶(EC 1.10.3.2)，其通过单电子夺取催化酚类、多酚类和苯胺的氧化，同时在4电子转移过程中将氧还原成水。

如本文中所用，“变体”蛋白质包括相关和衍生蛋白质，其通过少量的氨基酸替换、插入和/或缺失不同于亲本/参考蛋白质。在一些实施方案中，不同的氨基酸的数量是约1、2、3、4、5、10、20、25、30、35、40、45和50个的任一个。在一些实施方案中，变体相差约1至约10个氨基酸残基。在一些实施方案中，变体蛋白质具有与亲本/参考蛋白质至少约35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％的氨基酸序列同一性。

如本文中所用，术语“类似序列”指相对于亲本/参考蛋白质内的序列，提供了相似的功能、三级结构和/或保守残基的蛋白质内的多肽序列。例如，在含有α螺旋或β折叠结构的结构区域中，在类似序列中的取代氨基酸残基保持了相同的结构特征。在一些实施方案中，相对于变体衍生的亲本蛋白质，类似序列导致变体蛋白质显示出类似或改进的功能。

如本文中所用，“同源蛋白质”或“同源物”指与参考蛋白质(例如，来自不同来源的漆酶)具有类似的功能(例如，酶活性)和/或结构的蛋白质(例如，漆酶)。同源物可以来自进化上相关的或不相关的物种。在一些实施方案中，同源物具有与参考蛋白质类似的四级、三级和/或一级结构，因此，可以允许用来自同源物的类似区段或片段取代参考蛋白质中的区段或片段，与用来自非同源蛋白质的序列区段和片段的取代比较，具有参考蛋白质的结构和/或功能的降低的破坏性。

如本文中所用，“野生型”、“天然的”和“天然存在的”蛋白质是那些在自然界发现的蛋白质。术语“野生型序列”指在自然界发现的或天然存在的氨基酸或核酸序列。在一些实施方案中，野生型序列是蛋白质改造项目，例如，产生变体蛋白质的起点。

如本文中所用，“信号序列”指与蛋白质的氨基端部分结合的氨基酸序列，并且其有助于蛋白质的成熟形式从细胞中分泌。胞外蛋白质的成熟形式缺少该信号序列，所述信号序列在分泌过程中被剪切。

如本文中所用，术语“培养”指在合适的条件下，在用于表达目标多肽的液体、半固体或固体培养基中培育微生物细胞群体。在一些实施方案中，如本领域已知，培养在容器或反应器中进行。

如本文中所用，术语“衍生物”指通过添加一个或多个氨基酸到氨基端末端和羧基端之一或二者、在氨基酸序列中的一个或多个不同位点替换一个或多个氨基酸残基、在蛋白质的任一末端或两末端或者在氨基酸序列中的一个或多个位点缺失一个或多个氨基酸残基，和/或在氨基酸序列的一个或多个位点插入一个或多个氨基酸，自亲本/参考蛋白质衍生的蛋白质。通常通过修饰编码天然蛋白质的DNA序列、转化该DNA序列到合适的宿主细胞中并表达该修饰的DNA序列以形成衍生蛋白质来完成蛋白质衍生物的制备。

如本文中所用，术语“表达”指过程，通过其基于基因的核酸序列产生多肽。该过程包括转录和翻译二者。

如本文中所用，术语“表达载体”指含有与能在宿主中实现表达编码序列的一个或多个合适的控制序列有效连接的DNA编码序列(例如，基因序列)的DNA构建体。此类控制序列包括用于实现转录的启动子、用以控制该转录任选的操纵基因序列、编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列和控制转录和翻译的终止的序列。载体可以是质粒、噬菌体颗粒或者简单的潜在基因组插入片段。一旦转化到合适的宿主中，该载体可以独立于宿主基因组复制和发挥功能，或者在一些情况中，可以整合到宿主自身的基因组中。

如本文中所用，术语“宿主细胞”指细胞或细胞系，其中可以将用于产生多肽的重组表达载体转染、转化或者以其他方式导入用于多肽的表达。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，和由于天然、随机或故意突变，与亲本细胞不一定相同(在形态或在总基因组DNA组成)的后代。宿主细胞可以是细菌和真菌的。宿主细胞包括用表达载体在体内转染或转化的细胞。

如本文中所用，术语“导入”，在将核酸序列插入到细胞中的情况下，包括“转染”、“转化”和“转导”，并指掺入核酸序列到真核或原核细胞中，其中将该核酸序列掺入到细胞的基因组(例如，染色体、质粒、质体或线粒体DNA)中，转变成自主复制子或者瞬时表达。

如本文中所用，“清洁组合物”和“清洁制剂”指可用于从待清洁的物品除去不需要的化合物的组合物，所述物品例如织物、餐具、隐形眼镜、毛发(洗发剂)、皮肤(肥皂和乳膏)、牙齿(漱口剂、牙膏)和其他固体和表面。这些术语包括选择用于特定类型的所希望的清洁组合物的任一物质/化合物以及产品的形式(例如，液体、凝胶、颗粒、或喷雾组合物)，只要该组合物与组合物中使用的酶相容。通过考虑待清洁的表面、物品或织物以及在使用期间用于清洁条件的组合物的希望形式，可以容易地进行清洁组合物材料的特定选择。

该术语也指适合于清洁、漂白、消毒和/或杀菌物体和/或表面的任一组合物。该术语意图包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体洗衣剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁制剂，例如用于玻璃、木材、陶瓷的和金属的台面和窗户的清洁制剂；地毯清洁剂；烤箱清洁剂；织物清凉剂；织物软化剂；和纺织品和衣物去斑剂(prespotter)，以及餐具洗涤剂)。

事实上，术语“清洁组合物”和“清洁制剂”包括(除非另外指明)，颗粒或粉末形式的全效或强效洗涤剂，特别是清洁洗涤剂；液体、凝胶的或者糊剂形式的全效洗涤剂，特别是所谓的强效液体(HDL)型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻渍餐具洗涤剂，特别是那些高发泡型；家用和公用的机洗餐具洗涤剂，包括多种片剂、颗粒、液体和助漂洗类型；液体清洁和消毒剂，包括抗菌型手洗洗涤类型、清洁棒、漱口剂、假牙清洁剂、汽车或地毯洗涤剂、浴室清洁剂；洗发剂和染发液；沐浴凝胶和泡沫浴和金属清洁剂；以及清洁助剂例如漂白添加剂和“染色棒”或预处理类型。

如本文中所用，术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于指意图在用于清洁脏物体的洗涤介质中使用的混合物。在一些实施方案中，该术语用于指洗涤织物和/或衣物(例如，“衣物洗涤剂”)。在备选的实施方案中，该术语指其他洗涤剂，例如那些用于清洁盘子、刀叉等的洗涤剂(例如，“餐具清洁洗涤剂”)。除酶外，“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”还包括含有表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、上蓝剂和荧光染料、结块抑制剂、掩蔽剂、酶活化剂、抗氧化剂和助溶剂的洗涤剂。

如本文中所用，短语“洗涤剂稳定性”指在洗涤剂组合物中的酶，和任选地，相关的底物和介质的稳定性。在一些实施方案中，在使用洗涤剂期间评价稳定性，而在其他实施方案中，该术语指储存期间洗涤剂组合物的稳定性。

如本文中所用，术语“硬表面清洁组合物”指用于清洁硬表面例如地板、墙壁、瓷砖、不锈钢容器(发酵罐)、浴室和厨房设备等的洗涤剂组合物。该组合物可以以任一形式提供，包括但不限于固体、液体、乳剂等。

如本文中所用，术语“餐具洗涤组合物”指用于清洁餐具的组合物的所有形式，包括但不限于颗粒和液体形式。

如本文中所用，术语“消毒”指去除或杀死微生物，包括真菌、细菌、孢子等。

如本文中所用，术语“织物清洁组合物”指用于清洁织物的洗涤剂组合物的形式，包括但不限于颗粒、液体和棒状形式。

如本文中所用，术语“多核苷酸”、“核酸”和“寡核苷酸”可以互换地用于指任一长度和任一三维结构的核苷酸的多聚形式，无论是单链的还是多链的(例如，单链的、双链的、三链的等)，其含有脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸类似物或修饰形式，包括修饰的核苷酸或碱基或者它们的类似物。由于遗传密码是简并的，一种以上的密码子可以用于编码一种特定的氨基酸。可以使用任一类型的修饰的核苷酸或核苷酸类似物，包括增加核酸酶抗性的修饰(例如，脱氧、2′-O-甲基、硫代磷酸酯等)，只要该多核苷酸在使用的条件下保留了需要的功能性。对检测或捕获而言，也可以掺入标记，例如，放射性或非放射性标记或者锚定物，例如，生物素。术语多核苷酸也包括肽核酸(PNA)。多核苷酸可以是天然存在的或者非天然存在的。可以通过非核苷酸组分中断核苷酸的序列。可以用备选的连接基团取代一个或多个磷酸二酯键。例如，可以用P(O)S(“硫代酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酯(dithioate)”)、(O)NR₂(“酰胺酯(amidate)”)、P(O)R、P(O)OR′、CO或CH₂(“formacetal”)取代磷酸酯，其中每一R或R′独立地是H或者取代的或非取代的烷基(1-20C)，其任选地含有醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基。在多核苷酸中的并非所有键都需要是相同的。多核苷酸可以是线性的或者环形的或者包含线性和环形部分的组合。

如本文中所用，术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”指由氨基酸(即，氨基酸残基)组成的组合物。使用用于氨基酸残基的常规单字母或三字母密码。多肽可以是线性的或分支的，可以包含修饰的氨基酸，并可以被非氨基酸中断。该术语也包括已经天然修饰或者通过干预修饰的氨基酸多聚体；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任一其他操作或修饰，例如与标记组分缀合。该定义内也包括，例如，含有一个或多个氨基酸类似物(包括，例如，非天然氨基酸等)，以及本领域已知的其他修饰的多肽。

如本文中所用，术语“引物”指寡核苷酸，无论是天然存在的，例如，如在纯化的限制片段中天然存在的，还是合成产生的，其在合适的温度和pH，在核苷酸和聚合酶存在的情况下，当与互补核酸温育时，能作为核酸合成的起始点。引物优选地是单链，但是可以备选地是双链。如果是双链，那么在将引物用于制备延伸产物前，首先应处理引物以使其链分开。优选地，引物是寡脱氧核糖核苷酸。引物的确切长度应取决于许多因素，包括温度、引物的来源和使用的方法。

如本文中所用，术语“回收的”、“分离的”、“纯化的”和“分开的”指从与其天然相关的或者作为异源表达的结果相关的至少一种组分中除去的物质(例如，蛋白质、核酸或细胞)。

如本文中所用，术语“纺织品”指纤维、纱、织物、衣物和非针织材料。该术语包括天然，以及合成的(例如，制造的)材料，以及天然和合成的混合物制造的纺织品。术语“纺织品”指未加工的和加工的纤维、纱、机织或编织织物、非机织物和衣物。在一些事实方案中，纺织品含有纤维素。

如本文中所用，短语“需要加工的纺织品”指需要退浆、洗刷、漂白和/或生物抛光以产生需要的效果的纺织品。

如本文中所用，短语“需要颜色修饰的纺织品”指就颜色而言需要改变的纺织品。这些纺织品可能已经或者可能还没有进行其他处理。类似地，这些纺织品可能需要或者可能不需要随后的处理。

如本文中所用，术语“织物”指纤维和/或纱的生产组装，所述纤维和/或纱具有与其厚度和足够的内聚力有关的大表面面积以产生对组装有用的机械强度。

如本文中所用，术语“颜色修饰”指与统称为纺织品材料的纤维、纱、织物、衣物或非织造材料相关的颜色的色度、饱和度、强度、亮度和/或色调的改变。不被理论所限制，建议通过修饰与纺织品材料相关的生色团产生颜色修饰，从而改变其外观。生色团可以与用于生产纺织品的材料天然接合(例如，棉的白色)或者与特定的整理，例如染色或印刷相关。颜色修饰包括化学修饰生色团，以及化学修饰与生色团连接的材料。颜色修饰的实例包括褪色、漂白和改变色调。对靛蓝染色的粗斜纹布的特定的颜色修饰是褪色成“老式外观”，其比新近染色的粗斜纹布具有更少强烈的蓝色/紫色色调和更柔和的灰色外观。

如本文中所用，术语“漂白”指处理纺织品材料例如纤维、纱、织物、衣物或非织造材料以产生更浅的颜色的方法。该术语包括，例如，在纺织品加工应用的情况下，产生更亮和/或更白的纺织品，以及例如，在清洁应用的情况下，减轻污迹的颜色。

如本文中所用，术语“浆液”和“上浆”指在纺织品工业中使用的化合物，以通过增加纱的耐磨性和强度改进织造性能。浆液通常由淀粉或淀粉样化合物制备。

如本文中所用，术语“退浆”和“退浆”指通常在应用特定的整理剂、染料或漂白剂前，从纺织品中消除/去除浆液(一般是淀粉)的工艺。

如本文中所用，术语“退浆酶”指用于去除浆液的酶。示例性酶是淀粉酶、纤维素酶和甘露聚糖酶。

如本文中所用，术语“％同一性”指编码如本文中所述的漆酶的核酸序列与另一核酸序列之间的核酸序列同一性的水平，或者如本文所述的漆酶与另一氨基酸序列之间的氨基酸序列同一性的水平。可以使用常规的序列比对程序进行比对。核酸和氨基酸序列同一性的示例性水平包括但不限于，与给定序列，例如，如本文中所述的编码漆酶的序列或漆酶的氨基酸序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或甚至至少99％、或者更高的序列同一性。

可以用于鉴定两序列之间的同一性的示例性电脑程序包括但不限于，在互联网www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST上公共可得到的BLAST程序套件，例如，BLASTN、BLASTX和TBLASTX、BLASTP和TBLASTN。也参见，Altschul，等人，1990和ltschul，等人，1997。

当将给定的核酸序列相对于GenBank DNA序列和其他公共数据库中的核酸序列进行评价时，一般使用BLASTN程序实施序列搜索。对BLASTX程序优选由于搜索针对在GenBank蛋白质序列和其他公共数据库中氨基酸序列已经在所有读框翻译的核酸序列。BLASTN和BLASTX二者都使用11.0的开放空位罚分和1.0的延伸空位罚分的默认参数，并使用BLOSUM-62矩阵运行(参见，例如，Altschul，等人，1997)。

为了确定两个或更多序列之间的“％同一性”，可以使用，例如，用包括10.0的开放空位罚分和0.1的延伸空位罚分的默认参数和BLOSUM 30相似性矩阵运行的6.5MacVector版本6.5的CLUSTAL-W程序进行选定序列的比对。

如本文中所用，术语“化学介质”和“介质”可以互换地用于指用作为对显示出氧化酶活性的酶(例如，漆酶)与第二底物或电子供体之间的穿梭电子的氧化还原介质的化学化合物。此类化学介质在本领域也已知为“增强剂”和“促进剂”。

如本文中所用，术语“排干”或“滴下”就织物材料存在的浴而言，指完全或部分排放/排空浴中存在的溶剂和试剂。排干浴一般在工艺阶段之间进行，以使在一个加工步骤中存在的溶剂和试剂不会干扰随后的加工工步骤。排干可以伴随一个或多个漂洗步骤以进一步去除此类溶剂和试剂。

[01]如本文中所用，术语“第二底物”和“电子供体”可以互换地用于指染料、颜料(例如，靛蓝)、生色团(例如，多酚类、花色素苷或类胡萝卜素)或其他第二底物，电子可以通过显示出氧化酶活性的酶在所述底物中来回穿梭。

除非另外说明，以下简称/首字母缩写词具有以下含义：

EC酶学委员会

EDTA乙二胺四乙酸

kDa千道尔顿

MW分子量

w/v重量/体积

w/w重量/重量

v/v体积/体积

wt％重量百分比

℃摄氏度

H₂O水

dH₂O或DI去离子水

dIH₂OMilli-Q过滤去离子水

g或gm克

μg微克

mg毫克

kg千克

μL和μl微升

mL和ml毫升

mm毫米

μm微米

M摩尔

mM毫摩尔

μM微摩尔

U单位

sec和″秒

min和′分钟

hr小时

eq.当量

N正常的

RTU即用型

U单位

owg按商品的重量(on weight of goods)

CIE国际照明委员会(International Commission on Illumination)

数字范围包括定义范围的数字。单数冠词“一个”、“一”、“这个”等，除非上下文清楚指明，包括其复数指代。除非另外说明，多肽以氨基端到羧基端的方向从左向右书写，并且多核苷酸以5′至3′的方向书写。应当理解，描述的具体方法、方案和试剂并不意图限制，因为可以在实施或测试本发明的组合物和方法中使用等同的方法和材料。尽管为了方便读者将说明书分成了几个部分，但是不应将在每部分的标题解释为限制并且一个部分中的描述可应用于另一部分。所有在此引用的出版物明确地引入作为参考。

漆酶和漆酶相关的酶

酶氧化系统、组合物和方法包括一种或多种漆酶或者漆酶相关的酶，在本文中总体上指“漆酶”或“漆酶酶类”。根据国际生物化学与分子生物学联盟(IUBMB)的命名委员会，此类漆酶包括由EC 1.10.3.2所涵盖的任一漆酶。来自微生物和植物来源的漆酶是本领域已知的。微生物漆酶可以来自细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。合适的实例包括衍生自或者可衍生自曲霉属、脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌(N.crassa))、柄孢壳属、葡萄孢属、金钱菌属(Collybia)、下皮黑孔属(Cerrena)(例如，单色下皮黑孔菌(C.unicolor))、葡萄穗霉属、革耳属(Panus)(例如，野生革耳(P.rudis))、梭孢壳属(Thielavia)、层孔菌属(Fomes)、香茹属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、栓菌属(Trametes)(例如，T.villosahe、杂色栓菌(T.versicolor))、丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))、鬼伞属(例如，褶纹鬼伞(C.plicatilis)和灰盖鬼伞(C.cinereus))、小脆柄菇属(Psatyrella)、毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉(M.thermophila))、柱顶孢属(Schytalidium)、射脉菌属(例如，射脉菌(P.radita)(WO 92/01046))或革盖菌属(Coriolus)(例如，毛革盖菌(C.hirsutus)(JP 2238885))、绵皮孔菌属(Spongipellis)、多孔菌属、虫拟蜡菌(Ceriporiopsis subvermispora)、粗皮灵芝(Ganoderma tsunodae)和木霉属(Trichoderma)菌株。

漆酶可以通过培养用包含编码漆酶的核苷酸序列的重组DNA载体转化的宿主细胞产生。该DNA载体可以进一步包含允许漆酶在培养基中表达，并任选地允许漆酶从培养物中回收的核苷酸序列。

可以将含有编码漆酶的多核苷酸序列的表达载体转化到合适的宿主细胞中。宿主细胞可以是真菌细胞，例如丝状真菌细胞，所述丝状真菌细胞的实例包括但不限于木霉属(Trichoderma)(例如，里氏木霉(T.reesei)(以前分类为T.longibrachiatum并且目前也称为红褐肉座菌(Hypocreajecorina))、绿色木霉(T.viride)、康宁木霉(T.koningii)、哈茨木霉(T.harzianum))、曲霉属(例如，黑曲霉(A.niger)、构巢曲霉(A.nidulans)、米曲霉(A.oryzae)和泡盛曲霉(A.awamori))、青霉属(Penicillium)、腐质霉属(Humicola)(例如，特异腐质霉(H.insolens)和灰腐质霉(H.grisea))、镰孢属(Fusarium)(例如，禾赤镰孢(Fusarium graminum)和腹状镰孢(Fusarium venenatum))、脉孢菌属(Neurospora)、肉座菌属(Hypocrea)或毛霉属(Mucor)。表达漆酶的宿主细胞也可以来自下皮黑孔属(例如，单色下皮黑孔菌)。可以通过涉及原生质体形成和原生质体的转化的方法转化真菌细胞，然后使用本领域已知的技术再生细胞壁。

备选地，宿主生物可以来自细菌属物种，例如芽孢杆菌属(Bacillus)[例如，枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)(现在是嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus))和短芽孢杆菌(B.brevis)]、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)(例如，天蓝色链霉菌(S.coelicolor)、浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans))或大肠杆菌。细菌细胞的转化可以通过常规方法，例如，如在Maniatis，T等人，“Molecular Cloning：A Laboratory Manual，”Cold Spring Harbor，1982中所述的方法进行。也可以通过标准方法实施合适DNA序列的筛选和载体的构建(参见上文)。

用于培养转化的宿主细胞的培养基可以是任意适合于培育宿主细胞的常规培养基。在一些实施方案中，将表达的酶分泌到培养基中并可以通过熟知的方法将其回收。例如，如美国专利申请公开号2008/0196173中所述，可以从培养基中回收漆酶。在一些实施方案中，将酶表达在细胞内并在破坏细胞膜后回收。

在具体的实施方案中，表达宿主可以是在CBH1启动子和终止子控制下，具有漆酶编码区的里氏木霉(Trichoderma reesei)(参见，例如美国专利申请号5,861,271)。如在美国专利申请号7,413,887中公开，表达载体可以是，例如，pTrex3g。在一些实施方案中，如美国专利申请公开号2008/0196173或2009/0221030中所述表达漆酶。

以下漆酶基因和漆酶描述于美国公开号2008/0196173：

A.来自CBS115.075菌株的下皮黑孔属漆酶A1基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：1)：

ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATCACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50

AGGCACCGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100

AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCGGTACT AGCTGGGGGC 150

ACATTCCCTG GAGCACTTAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCAACTT 200

GGTTGAATAG AGAAATAAAA GTGACAACAA ATCCTTATAG GGAGACAGCT 250

TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300

ACATCCATTG TGAGTATAAT TTAGGTCCGC TCTTCTGGCT ATCCTTTCTA 350

ACTCTTACCG TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400

GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG CCCTATCGTC ACCGGAAATT 450

CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTTCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500

CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGTG GCCCGTTCGT 550

TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600

GTATGTGCAT CATCATAGAG ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGTGACT 650

GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700

TCGCAAGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTCA CTTATAGTGG 750

TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800

TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850

ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTTATTG AACTCCCGAT TTCTCCATAC 900

ACAGTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTTCGTCT GGTCTCCATC 950

TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000

CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATTC 1050

AAATCTTCGC AGGCCAACGA TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGCACGA 1100

TTACTGCTTC TTTGTCCATT CTCTGACCTG TTTAAACAGC TCCATGCCAA 1150

CCGTCCTGAA AACAACTATT GGATCAGGGC CAAACCTAAT ATCGGTACGG 1200

ATACTACCAC AGACAACGGC ATGAACTCTG CCATTCTGCG ATACAACGGC 1250

GCACCTGTTG CGGAACCGCA AACTGTTCAA TCTCCCAGTC TCACCCCTTT 1300

GCTCGAACAG AACCTTCGCC CTCTCGTGTA CACTCCTGTG GTATGTTTCA 1350

AAGCGTTGTA ATTTGATTGT GGTCATTCTA ACGTTACTGC GTTTGCATAG 1400

CCTGGAAACC CTACGCCTGG CGGCGCCGAT ATTGTCCATA CTCTTGACTT 1450

GAGTTTTGTG CGGAGTCAAC ATTCGTAAAG ATAAGAGTGT TTCTAATTTC 1500

TTCAATAATA GGATGCTGGT CGCTTCAGTA TCAACGGTGC CTCGTTCCTT 1550

GATCCTACCG TCCCCGTTCT CCTGCAAATT CTCAGCGGCA CGCAGAATGC 1600

ACAAGATCTA CTCCCTCCTG GAAGTGTGAT TCCTCTCGAA TTAGGCAAGG 1650

TCGTCGAATT AGTCATACCT GCAGGTGTCG TCGGTGGACC TCATCCGTTC 1700

CATCTCCATG GGGTACGTAA CCCGAACTTA TAACAGTCTT GGACTTACCC 1750

GCTGACAAGT GCATAGCATA ACTTCTGGGT CGTGCGAAGT GCCGGAACCG 1800

ACCAGTACAA CTTTAACGAT GCCATTCTCC GAGACGTCGT CAGTATAGGA 1850

GGAACCGGGG ATCAAGTCAC CATTCGTTTC GTGGTATGTT TCATTCTTGT 1900

GGATGTATGT GCTCTAGGAT ACTAACCGGC TTGCGCGTAT AGACCGATAA 1950

CCCCGGACCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT CGACTGGCAC TTGGAAGCGG 2000

GTCTCGCTAT CGTATTTGCA GAGGGAATTG AAAATACTGC TGCGTCTAAT 2050

TTAACCCCCC GTACGCGGTT TCCCTCACAT CCTGGAGCTA AGCAGCTTAC 2100

TAACATACAT TTGCAGAGGC TTGGGATGAG CTTTGCCCGA AGTATAACGC 2150

GCTCAGCGCA CAAAAGAAGG TTGCATCTAA GAAAGGCACT GCCATCTAAT 2200

TTTTGTAACA AACAAGGAGG GTCTCTTGTA CTTTTATTGG GATTTCTTTC 2250

TTGGGGTTTA TTGTTAAACT TGACTCTACT ATGTTTGGAA GACGAAAGGG 2300

GCTCGCGCAT TTATATACTA TCTCTCTTGG CATCACCTGC AGCTCAATCC 2350

TTCAACCACC TAA 2363

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：2)：

MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50

TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100

AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150

KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200

PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250

SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDSGMNSAI 300

LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350

DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400

VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450

TGDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNLTPQ 500

AWDELCPKYN ALSAQKKLNP STT 523

B.来自CBS154.29菌株的下皮黑孔属漆酶A2基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：3)：

ATGAGCTCAA AGCTACTTGC TCTTATTACT GTCGCTCTCG TCTTGCCACT 50

AGGCACTGAC GCCGGCATCG GTCCTGTTAC CGACTTGCGC ATCACCAACC 100

AGGATATCGC TCCAGATGGC TTCACCCGAC CAGCTGTACT GGCTGGGGGC 150

ACATTCCCCG GAGCACTGAT TACCGGTCAG AAGGTATGGG AGATCGATTT 200

CGTTGAATAG AGAAATACAA CTGAAAACAA ATTCTTATAG GGAGACAGCT 250

TCCAAATCAA TGTCATCGAC GAGCTTACCG ATGCCAGCAT GTTGACCCAG 300

ACATCCATTG TGAGTATAAT ATGGGTCCGC TCTTCTAGCT ATCCTTTCTA 350

ACTCTTACCC TCTAGCATTG GCACGGCTTC TTTCAGAAGG GATCTGCGTG 400

GGCCGATGGT CCTGCCTTCG TTACTCAATG TCCTATCGTC ACCGGAAATT 450

CCTTCCTGTA CGACTTTGAT GTCCCCGACC AACCTGGTAC TTTCTGGTAC 500

CATAGTCACT TGTCTACTCA ATATTGCGAT GGTCTTCGGG GCCCGTTCGT 550

TGTATACGAT CCAAAGGATC CTAATAAACG GTTGTACGAC ATTGACAATG 600

GTATGTGCAT CATCATAAAA ATATAATTCA TGCAGCTACT GACCGCGACT 650

GATGCTGCCA GATCATACGG TTATTACCCT GGCAGACTGG TACCACGTTC 700

TCGCACGAAC TGTTGTCGGA GTCGCGTAAG TACAGTCTGA CTTATAGTGG 750

TCTTCTTACT CATTTTGACA TAGGACACCC GACGCAACCT TGATCAACGG 800

TTTGGGCCGT TCTCCAGACG GGCCAGCAGA TGCTGAGTTG GCTGTCATCA 850

ACGTTAAACG CGGCAAACGG TATGTCATTG AACTCCCGAT TTCTCCATTC 900

ACATTGAAAT GACTGTCTGG TCTAGTTATC GATTCCGTCT GGTCTCCATC 950

TCATGTGACC CTAATTACAT CTTTTCTATC GACAACCATT CTATGACTGT 1000

CATCGAAGTC GATGGTGTCA ACACCCAATC CCTGACCGTC GATTCTATCC 1050

AAATCTTCGC AGGCCAACGC TACTCGTTCG TCGTAAGTCT CTTTGAATGG 1100

TTGGTGCTTT TTCTGTCCAT TCTCTAACCT GTTTATACAG CTCCATGCCA 1150

ACCGTCCTGA AAACAACTAT TGGATCAGGG CCAAACCTAA TATCGGTACG 1200

GATACTACCA CAGACAACGG CATGAACTCT GCCATTCTGC GATACAACGG 1250

CGCACCTGTT GCGGAACCGC AAACTGTTCA ATCTCCCAGT CTCACCCCTT 1300

TGCTCGAACA GAACCTTCGC CCTCTCGTGT ACACTCCTGT GGTATGTTTC 1350

AAAGCGTTGT AATTTGATTG TGGTCATTCT AACGTTACTG CCTTTGCACA 1400

GCCTGGAAAT CCTACGCCTG GCGGGGCCGA TATTGTCCAT ACTCTTGACT 1450

TGAGTTTTGT GCGGAGTCAA CATTCGTAAA GATAAGAGTG TTTCTAATTT 1500

CTTCAATAAT AGGATGCTGG TCGCTTCAGT ATCAACGGTG CCTCGTTCCT 1550

TGATCCTACC GTCCCTGTTC TCCTGCAAAT TCTCAGCGGC ACGCAGAATG 1600

CACAAGATCT ACTCCCTCCT GGAAGTGTGA TTCCTCTCGA ATTAGGCAAG 1650

GTCGTCGAAT TAGTCATACC TGCAGGTGTT GTCGGTGGAC CTCATCCGTT 1700

CCATCTCCAT GGGGTACGTA ACCCGAACTT ATAACAGTCT TGGACTTACC 1750

CGCTGACAAG TGTATAGCAT AACTTCTGGG TCGTGCGAAG TGCCGGAACC 1800

GACCAGTACA ACTTTAACGA TGCCATTCTC CGAGACGTCG TCAGTATAGG 1850

AGGAACCGAG GATCAAGTCA CCATTCGATT CGTGGTATAT ACTTCATTCT 1900

TGTGGATGTA TGTGCTCTAG GATACTAACT GGCTTGCGCG TATAGACCGA 1950

TAACCCCGGA CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATCGACTGG CACTTGGAAG 2000

CGGGTCTCGC TATCGTATTT GCAGAGGGAA TTGAAAATAC TGCTGCGTCT 2050

AATCCAACCC CCCGTATGCG GTTTCCCACA CATTCTGAAT CTAAGCAGCT 2100

TACTAATATA CATTTGCAGA GGCTTGGGAT GAGCTTTGCC CGAAGTATAA 2150

CGCGCTCAAC GCACAAAAGA AGGTTGCATC TAAGAAAGGC ACTGCCATCT 2200

AATCCTTGTA ACAAACAAGG AGGGTCTCTT GTACTTTTAT TGGGATTTAT 2250

TTCTTGGGGT TTATTGTTCA ACTTGATTCT ACTATGTTTG GAAGTAGCGA 2300

TTACGAAAGG GGCTTGCGCA TTTATATACC ATCTTTCTTG GCACCACCTG 2350

CAGCTCAATC CTTCAACCAC CTAA 2374

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：4)：

MSSKLLALIT VALVLPLGTD AGIGPVTDLR ITNQDIAPDG FTRPAVLAGG 50

TFPGALITGQ KGDSFQINVI DELTDASMLT QTSIHWHGFF QKGSAWADGP 100

AFVTQCPIVT GNSFLYDFDV PDQPGTFWYH SHLSTQYCDG LRGPFVVYDP 150

KDPNKRLYDI DNDHTVITLA DWYHVLARTV VGVATPDATL INGLGRSPDG 200

PADAELAVIN VKRGKRYRFR LVSISCDPNY IFSIDNHSMT VIEVDGVNTQ 250

SLTVDSIQIF AGQRYSFVLH ANRPENNYWI RAKPNIGTDT TTDNGMNSAI 300

LRYNGAPVAE PQTVQSPSLT PLLEQNLRPL VYTPVPGNPT PGGADIVHTL 350

DLSFDAGRFS INGASFLDPT VPVLLQILSG TQNAQDLLPP GSVIPLELGK 400

VVELVIPAGV VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GTDQYNFNDA ILRDVVSIGG 450

TEDQVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIE NTAASNPTPQ 500

AWDELCPKYN ALNAQKKLNP STT 523

C.来自CBS115.075菌株的下皮黑孔属漆酶B1基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：5)：

ATGTCTCTTC TTCGTAGCTT GACCTCCCTC ATCGTACTAG TCATTGGTGC 50

ATTTGCTGCA ATCGGTCCAG TCACTGACCT ACATATAGTG AACCAGAATC 100

TCGACCCAGA TGGTTTCAAC CGCCCCACTG TACTCGCAGG TGGTACTTTC 150

CCCGGTCCTC TGATTCGTGG TAACAAGGTA CGCTTCATAA CCGCCCTCCG 200

TAGACGTAGG CTTCGGCTGA CATGACCATC ATCTGTAGGG AGATAACTTT 250

AAAATTAATG TGATTGACGA CTTGACAGAG CACAGTATGC TCAAGGCTAC 300

GTCCATCGTA AGTCCCTGAT TAACGTTTCA CCTGGTCATA TCGCTCAACG 350

TCTCGAAGCA CTGGCATGGG TTCTTCCAGA AGGGAACCAA CTGGGCCGAT 400

GGCCCCGCCT TTGTCACCCA ATGTCCTATC ACATCAGGAA ACGCCTTCCT 450

GTATGATTTC AACGTTCCGG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG TACCACAGCC 500

ATCTCTCTAC ACAGTATTGT GACGGTCTTC GTGGTGCCTT TGTCGTCTAT 550

GATCCTAATG ATCCCAACAA GCAACTCTAT GATGTTGATA ACGGCAAGTT 600

CCTTGCATAT TTCATTTCTA TCATATCCTC ACCTGTATTG GCACAGAAAG 650

CACCGTGATT ACCTTGGCTG ATTGGTATCA TGCCCTTGCT CAGACTGTCA 700

CTGGTGTCGC GTGAGTGACA AATGGCCCTC AATTGTTCAC ATATTTTCCT 750

GATTATCATA TGATAGAGTA TCTGATGCAA CGTTGATCAA CGGATTGGGA 800

CGTTCGGCCA CCGGCCCCGC AAATGCCCCT CTGGCGGTCA TCAGTGTCGA 850

GCGGAATAAG AGGTCAGTTC CATAATTATG ATTATTTCCC GCGTTACTTC 900

CTAACAATTA TTTTTGTATC CCTCCACAGA TATCGTTTCC GATTGGTTTC 950

TATTTCTTGC GACCCTAACT TTATTTTCTC AATTGACCAC CACCCAATGA 1000

CCGTAATTGA GATGGACGGT GTTAATACCC AATCTATGAC CGTAGATTCG 1050

ATCCAAATAT TCGCAGGTCA ACGATATTCA TTTGTCGTAG GTTATTATAA 1100

ACTGCCCACC GATCATCTCT CACGTAACTG TTATAGATGC AAGCCAACCA 1150

ACCAGTTGGA AATTATTGGA TCCGCGCTAA ACCTAATGTT GGGAACACAA 1200

CTTTCCTTGG AGGCCTGAAC TCCGCTATAT TACGATATGT GGGAGCCCCT 1250

GACCAAGAAC CGACCACTGA CCAAACACCC AACTCTACAC CGCTCGTTGA 1300

GGCGAACCTA CGACCCCTCG TCTATACTCC TGTGGTATGT TGTTCTCGTT 1350

ACATATACCA AACCTAATAT GAAGACTGAA CGGATCTACT AGCCGGGACA 1400

GCCATTCCCT GGCGGTGCTG ATATCGTCAA GAACTTAGCT TTGGGTTTCG 1450

TACGTGTATT TCACTTCCCT TTTGGCAGTA ACTGAGGTGG AATGTATATA 1500

GAATGCCGGG CGTTTCACAA TCAATGGAGC GTCCCTCACA CCTCCTACAG 1550

TCCCTGTACT ACTCCAGATC CTCAGTGGTA CTCACAATGC ACAGGATCTT 1600

CTCCCAGCAG GAAGCGTGAT CGAACTTGAA CAGAATAAAG TTGTCGAAAT 1650

CGTTTTGCCC GCTGCGGGCG CCGTTGGCGG TCCTCATCCT TTTCACTTAC 1700

ATGGTGTAAG TATCAGACGT CCTCATGCCC ATATTGCTCC GAACCTTACA 1750

CACCTGATTT CAGCACAATT TCTGGGTGGT TCGTAGCGCC GGTCAAACCA 1800

CATACAATTT CAATGATGCT CCTATCCGTG ATGTTGTCAG TATTGGCGGT 1850

GCAAACGATC AAGTCACGAT CCGATTTGTG GTATGTATCT CGTGCCTTGC 1900

ATTCATTCCA CGAGTAATGA TCCTTACACT TCGGGTTCTC AGACCGATAA 1950

CCCTGGCCCA TGGTTCCTTC ACTGTCACAT TGACTGGCAT TTGGAGGCTG 2000

GGTTCGCTGT AGTCTTTGCG GAGGGAATCA ATGGTACTGC AGCTGCTAAT 2050

CCAGTCCCAG GTAAGACTCT CGCTGCTTTG CGTAATATCT ATGAATTTAA 2100

ATCATATCAA TTTGCAGCGG CTTGGAATCA ATTGTGCCCA TTGTATGATG 2150

CCTTGAGCCC AGGTGATACA TGA 2173

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：6)：

MSLLRSLTSL IVLVIGAFAA IGPVTDLHIV NQNLDPDGFN RPTVLAGGTF 50

PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100

VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150

PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200

NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250

TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300

VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350

FNAGRFTING ASLTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400

IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450

DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500

NQLCPLYDAL SPGDT 515M

D.来自CBS154.29菌株的下皮黑孔属漆酶B2基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：7)：

CACCGCGATG TCTCTTCTTC GTAGCTTGAC CTCCCTCATC GTACTAGCCA 50

CTGGTGCATT TGCTGCAATC GGTCCAGTCA CCGACCTACA TATAGTGAAC 100

CAGAATCTCG CCCCAGATGG TTTAAACCGC CCCACTGTAC TCGCAGGTGG 150

TACTTTCCCC GGTCCTCTGA TTCGTGGTAA CAAGGTACGC TTCATAACCG 200

CCCTCCGTAG ACGTAGGCTT CGGCTGACAT GACCATCATC TGTAGGGAGA 250

TAACTTTAAA ATTAATGTGA TTGACGACTT GACAGAACAC AGTATGCTCA 300

AGGCTACGTC CATTGTAAGT CCCTGATTAA CGTTTCACCT GGTCATATCG 350

CTCAACGTCT CGAAGCACTG GCATGGGTTC TTCCAGAAGG GAACCAACTG 400

GGCCGATGGC CCCGCCTTTG TCACCCAATG TCCTATCACA TCAGGAAACG 450

CCTTCTTGTA TGATTTCAAC GTTCCGGACC AAGCTGGTAC TTTCTGGTAC 500

CACAGCCATC TCTCYACACA GTATTGTGAC GGTCTTCGTG GTGCCTTTGT 550

CGTCTATGAT CCTAATGATC CCAACAAGCA ACTCTATGAT GTTGATAACG 600

GCAAGTCCCT TGCATATTTC AGTTCTATCA TATCCTCACC TGTATTGGCA 650

CAGAAAGCAC CGTGATTACC TTGGCTGATT GGTATCATGC CCTTGCTCAG 700

ACTGTCACTG GTGTCGCGTG AGTGACAAAT GGCCCTTAAT TGTTCACATA 750

TTTTCCTGAT TATCATATGA TAGAGTATCT GATGCAACGT TGATCAACGG 800

ATTGGGACGT TCGGCCACCG GCCCCGCAAA TGCCCCTCTG GCGGTCATCA 850

GTGTCGAGCG GAATAAGAGG TCAGTTCCAT AATTATGATT ATTTCCCGCG 900

TTACTTCCTA ACGATTATTT TTGTATCCCT CCACAGATAT CGTTTCCGAT 950

TGGTTTCTAT TTCTTGCGAC CCTAACTTTA TTTTCTCAAT TGACCACCAC 1000

CCAATGACCG TAATTGAGAT GGACGGTGTT AATACCCAAT CTATGACCGT 1050

AGATTCGATC CAAATATTCG CAGGTCAACG ATATTCATTT GTCGTAGGTT 1100

ATTATAAACT GCCCACCGAT CATCTCTCAC GTAACTGTTA TAGATGCAAG 1150

CCAACCAACC AGTTGGAAAT TATTGGATCC GYGCTAAACC TAATGTTGGG 1200

AACACAACTT TCCTTGGAGG CCTGAACTCC GCTATATTAC GATATGTGGG 1250

AGCCCCTGAC CAAGAACCGA CCACTGACCA AACACCCAAC TCTACACCGC 1300

TCGTCGAGGC GAACCTACGT CCCCTCGTCT ATACTCCTGT GGTATGTTGT 1350

TCTCGTTACA TATACCAAAC CTAATATGAG GACTGAACGG ATCTACTAGC 1400

CGGGACAGCC ATTCCCTGGC GGTGCTGATA TCGTCAAGAA CTTAGCTTTG 1450

GGTTTCGTAC GTGTATTTCA CTTCCCTTTT GGCAGTAACT GAGGTGGAAT 1500

GTATATAGAA TGCCGGGCGT TTCACAATCA ATGGAACATC CTTCACACCT 1550

CCTACAGTCC CTGTACTACT CCAGATCCTC AGTGGTACTC ACAATGCACA 1600

GGATCTTCTT CCAGCAGGAA GCGTGATCGA ACTTGAACAG AATAAAGTTG 1650

TCGAAATCGT TCTGCCCGCT GCGGGCGCCG TTGGCGGTCC TCATCCTTTC 1700

CACTTACATG GTGTAAGTAT CAGACGTCCT CATGCCTATA TTGCTCCGAA 1750

CCTTACACAC CTGATTTCAG CACAATTTCT GGGTGGTTCG TAGCGCCGGT 1800

CAAACCACAT ACAATTTCAA TGATGCTCCT ATCCGTGATG TTGTCAGTAT 1850

TGGCGGTGCA AACGATCAAG TCACGATCCG ATTTGTGGTA TGTATCTCGT 1900

GCCTTGCATT CATTCCACGA GTAATGATCC TTACACTTCG GGTTCTCAGA 1950

CCGATAACCC TGGCCCATGG TTCCTTCACT GTCACATTGA CTGGCATTTG 2000

GAGGCTGGGT TCGCTGTAGT CTTTGCGGAG GGAATCAATG GCACTGCAGC 2050

TGCTAATCCA GTCCCAGGTA AGACTCTCGC TGCTTTGCGT AATATCTATG 2100

AATTTAAAGC ATATCAATTT GCAGCGGCTT GGAATCAATT GTGCCCGTTG 2150

TATGATGCCT TGAGCCCAGG TGATACATGA TTACTCGTAG CTGTGCTTTC 2200

TTATACATAT TCTATGGGTA TATCGGAGTA GCTGTACTAT AGTATGTACT 2250

ATACTAGGTG GGATATGYTG ATGTTGATTT ATATAATTTT GTTTGAAGAG 2300

TGACTTTATC GACTTGGGAT TTAGCCGAGT ACATACTGAT CTCTCACTAC 2350

AGGCTTGTTT TGTCTTTGGG CGCTTACTCA ACAGTTGACT GTTTTTGCTA 2400

TTACGCATTG AACCGCATTC CGGTCYGACT CGTGTCCTCT ACTGTGACTT 2450

GTATTGGCAT TCTAGCACAT ATGTCTCTTA CCTATAGGAA CAATATGTCT 2500

CAACACTGTT CCAAAACCTG CGTAAACCAA ATATCGTCCA TCAGATCAGA 2550

TCATTAACAG TGCCGCACTA ACCTAATACA CTGGCARGGA CTGTGGAAAT 2600

CCCTATAAAT GACCTCTAGA CCGTGAGGTC ATTGCAAGGT CGCTCTCCTT 2650

GTCAAGATGA CCC 2663

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：8)：

MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGLN RPTVLAGGTF 50

PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100

VTQCPITSGN AFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150

PNKQLYDVDN GNTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200

NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250

TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWIRA KPNVGNTTFL GGLNSAILRY 300

VGAPDQEPTT DQTPNSTPLV EANLRPLVYT PVPGQPFPGG ADIVKNLALG 350

FNAGRFTING TSFTPPTVPV LLQILSGTHN AQDLLPAGSV IELEQNKVVE 400

IVLPAAGAVG GPHPFHLHGH NFWVVRSAGQ TTYNFNDAPI RDVVSIGGAN 450

DQVTIRFVTD NPGPWFLHCH IDWHLEAGFA VVFAEGINGT AAANPVPAAW 500

NQLCPLYDAL SPGDT 515

E.来自ATCC20013菌株的下皮黑孔属漆酶B3基因(部分)

多核苷酸序列(SEQ ID NO：9)：

GTGGGGGCGG ATCCCTAACT GTTTCGAATC GGCACCGAAG TATGCAGGTG 50

TGACGGAGAT GAGGCGTTTT TTCATCTTCC ACTGCAGTAT AAAATGTCTC 100

AGGTAACGTC CAGCTTTTTG TACCAGAGCT ACCTCCAAAT ACCTTTACTC 150

GCAAAGGTTT CGCGATGTCT CTTCTTCGTA GCTTGACCTC CCTCATCGTA 200

CTAGCCACTG GTGCATTTGC TGCAATCGGT CCAGTCACTG ACCTACATAT 250

AGTGAACCAG AATCTCGCCC CAGATGGTTT CAACCGCCCC ACTGTACTCG 300

CAGGTGGTAC TTTCCCCGGT CCTCTGATTC GTGGTAACAA GGTACGCTTC 350

ATAACCGCCC TCCGTAGACG TAGGCTTCGG CTGACATGAC CATCATCTGT 400

AGGGAGATAA CTTTAAAATT AATGTGATTG ACGACTTGAC AGAACACAGT 450

ATGCTCAAGG CCACGTCCAT TGTAAGTCCC TGATTAACGT TTCACCTGGT 500

CATATCGCTC AACGTCTCGA AGCACTGGCA TGGGTTCTTC CAGAAGGGAA 550

CCAACTGGGC CGATGGCCCC GCCTTTGTCA CCCAATGTCC TATCACATCA 600

GGAAACTCCT TCCTGTATGA TTTCAACGTT CCGGACCAAG CTGGTACTTT 650

CTGGTACCAC AGCCATCTCT CTACACAGTA TTGTGACGGT CTTCGTGGTG 700

CCTTTGTCGT CTATGATCCT AATGATCCCA ACAAGCAACT CTATGATGTT 750

GATAACGGCA AGTCCCTTGC ATATTTCATT TCTATCATAT CCTCACCTGT 800

ATTGGCACAG AAAGCACCGT GATTACCTTG GCTGATTGGT ATCATGCCCT 850

TGCTCAGACT GTCACTGGTG TCGCGTGAGT GACAAATGGC CCTCAATTGT 900

TCACATATTT TCCTGATTAT CATATGATAG AGTATCTGAT GCAACGTTGA 950

TCAACGGATT GGGACGTTCG GCCACCGGCC CCGCAAATGC CCCTCTGGCG 1000

GTCATCAGTG TCGAGCGGAA TAAGAGGTCA GTTCCATAAT TATGATTATT 1050

TCCCGCGTTA CTTCCTAACA ATTATTCTTG TATCCCTCCA CAGATATCGC 1100

TTCCGATTGG TGTCTATTTC TTGCGACCCT AACTTTATTT TCTCAATTGA 1150

TCACCACCCA ATGACCGTAA TTGAGATGGA CGGTGTTAAT ACCCAATCTA 1200

TGACCGTAGA TTCGATCCAA ATATTCGCAG GTCAACGATA TTCATTTGTC 1250

GTAGGTTATT ATAAACTGCC CACCGATCAT CTCTCACGTA ACTGTTATAG 1300

ATGCAAGCCA ACCAACCRGT TGGAAATTAT TGGATCC 1337

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：10)：

MSLLRSLTSL IVLATGAFAA IGPVTDLHIV NQNLAPDGFN RPTVLAGGTF 50

PGPLIRGNKG DNFKINVIDD LTEHSMLKAT SIHWHGFFQK GTNWADGPAF 100

VTQCPITSGN SFLYDFNVPD QAGTFWYHSH LSTQYCDGLR GAFVVYDPND 150

PNKQLYDVDN GKTVITLADW YHALAQTVTG VAVSDATLIN GLGRSATGPA 200

NAPLAVISVE RNKRYRFRLV SISCDPNFIF SIDHHPMTVI EMDGVNTQSM 250

TVDSIQIFAG QRYSFVMQAN QPVGNYWI 278

F.来自CBS154.29菌株的下皮黑孔属漆酶C基因(部分)

多核苷酸序列(SEQ ID NO：11)：

TGCAATCGGA CCGGTBGCTG ACCTTCACAT TACGGACGAT ACCATTGCCC 50

CCGATGGTTT CTCTCGTCCT GCTGTTCTCG CTGGCGGGGG TTTCCCTGGC 100

CCTCTCATCA CCGGAAACAA GGTAATGCCT AATGGTTGCG TCTTTGTTGG 150

TGCTCTCATT CATCCACGAC ATTTTGTACC AGGGCGACGC CTTTAAACTC 200

AATGTCATCG ATGAACTAAC GGACGCATCC ATGCTGAAGY CGACTTCCAT 250

CGTAAGTCTC GCTGTATTGC TCCTTGAGCC ATTTCATTGA CTATAACTAC 300

AACCAGCACT GGCATGGATT CTTCCAAAAG GGTACTAATT GGGCAGATGG 350

TCCCGCTTTT GTGAACCAAT GCCCCATCAC CACGGGAAAC TCCTTCTTGT 400

ACGACTTCCA GGTTCCTGAT CAAGCTGGTA AGCATGAGAT TACACTAGGA 450

AAGTTTAATT TAATAACTAT TCAATCAGGA ACCTACTGGT ATCATAGTCA 500

TTTGTCTACG CAATACTGTG ATGGTCTCAG AGGTGCATTC GTTGTCTACG 550

ACCCTTCAGA TCCTCACAAG GATCTCTACG ACGTCGACGA CGGTGAGCTT 600

TGCTTTTTTC ATTGGTATCC ATTATCGCTC ACGTGTCATT ACTGCGCCAC 650

AGAAAGTACC GTCATCACTT TGGCTGATTG GTATCATACT TTGGCTCGTC 700

AGATTGTTGG CGTTGCGTGA GTAGTCTTGT ACCGACTGAA ACATATTCCA 750

GTTGCTGACT TCCCCACAGC ATTTCTGATA CTACCTTGAT AAACGGTTTG 800

GGCCGCAATA CCAATGGTCC GGCTGATGCT GCTCTTGCTG TGATCAATGT 850

TGACGCTGGC AAACGGTGTG TCCAGATTAC TATACTCCCC ATGACGTCTC 900

AATGCTGATG TGTACTACTT CCAGGTACCG TTTCCGTCTT GTTTCCATAT 950

CCTGTGACCC CAATTGGGTA TTCTCGATTG ACAACCATGA CTTTACGGTC 1000

ATTGAAGTCG ATGGTGTTAA CAGTCAACCT CTCAACGTCG ATTCTGTTCA 1050

GATCTTCGCC GGACAACGTT ACTCGTTCGT 1080

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：12)：

AIGPVADLHI TDDTIAPDGF SRPAVLAGGG FPGPLITGNK GDAFKLNVID 50

ELTDASMLKX TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPITTG NSFLYDFQVP 100

DQAGTYWYHS HLSTQYCDGL RGAFVVYDPS DPHKDLYDVD DESTVITLAD 150

WYHTLARQIV GVAISDTTLI NGLGRNTNGP ADAALAVINV DAGKRYRFRL 200

VSISCDPNWV FSIDNHDFTV IEVDGVNSQP LNVDSVQIFA GQRYSF 246

G.来自CBS154.29菌株的下皮黑孔属漆酶D1基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：13)：

GATTCTAATA GACCAGGCAT ACCAAGAGAT CTACAGGTTG ACAGACCATT 50

CTTCTAGGCG GCATTTATGC TGTAGCGTCA GAAATTATCT CTCCATTTGT 100

ATCCCACAGG TCCTGTAATA ACACGGAGAC AGTCCAAACT GGGATGCCTT 150

TTTTCTCAAC TATGGGCGCA CATAGTCTGG ACGATGGTAT ATAAGACGAT 200

GGTATGAGAC CCATGAAGTC AGAACACTTT TGCTCTCTGA CATTTCATGG 250

TTCACACTCT CGAGATGGGA TTGAACTCGG CTATTACATC GCTTGCTATC 300

TTAGCTCTGT CAGTCGGAAG CTATGCTGCA ATTGGGCCCG TGGCCGACAT 350

ACACATTGTC AACAAAGACC TTGCTCCAGA TGGCGTACAA CGTCCAACCG 400

TGCTTGCCGG AGGCACTTTT CCTGGGACGT TGATCACCGG TCAGAAAGTA 450

AGGGATATTA GTTTGCGTCA AAGAGCCAAC CAAAACTAAC CGTCCCGTAC 500

TATAGGGTGA CAACTTCCAG CTCAATGTCA TCGATGATCT TACCGACGAT 550

CGGATGTTGA CGCCAACTTC CATTGTGAGC CTATTATTGT ATGATTTATC 600

CGAATAGTTT CGCAGTCTGA TCATTGGATC TCTATCGCTA GCATTGGCAC 650

GGTTTCTTCC AGAAGGGAAC CGCTTGGGCC GACGGTCCCG CCTTCGTAAC 700

TCAGTGCCCT ATAATAGCAG ATAACTCTTT TCTGTATGAC TTCGACGTCC 750

CAGACCAAGC TGGTACTTTC TGGTATCATA GTCATCTATC CACTCAGTAC 800

TGTGACGGTT TACGTGGTGC CTTCGTTGTG TACGATCCTA ACGATCCTCA 850

CAAAGACCTA TACGATGTTG ATGACGGTGG GTTCCAAATA TTTGTTCTGC 900

AGACATTGTA TTGACGGTGT TCATTATAAT TTCAGAGAGC ACCGTGATTA 950

CCCTTGCGGA TTGGTACCAT GTTCTCGCCC AGACCGTTGT CGGCGCTGCG 1000

TGAGTAACAC ATACACGCGC TCCGGCACAC TGATACTAAT TTTTTTTTAT 1050

TGTAGCACTC CTGATTCTAC CTTGATCAAC GGGTTAGGCC GTTCACAGAC 1100

CGGACCCGCT GATGCTGAGC TGGCTGTTAT CAGCGTTGAA CATAACAAAC 1150

GGTATGTCAT CTCTACCCAG TATCTTCTCT CCTGCTCTAA TTCGCTGTTT 1200

CACCATAGAT ACCGTTTCCG TTTGGTTTCG ATTTCGTGCG ACCCCAACTT 1250

TACCTTCTCC GTTGATGGTC ATAATATGAC TGTCATCGAA GTCGATGGTG 1300

TCAACACACG ACCCCTGACC GTTGACTCTA TTCAAATCTT CGCCGGACAG 1350

AGGTATTCCT TTGTCGTAAG TTAATCGATA TATTCTCCTT ATTACCCCTG 1400

TGTAATTGAT GTCAATAGCT CAATGCTAAC CAACCCGAAG ACAATTACTG 1450

GATCCGTGCT ATGCCAAACA TCGGTAGAAA TACAACAACA CTGGACGGAA 1500

AGAATGCCGC TATCCTTCGA TACAAGAATG CTTCTGTAGA AGAGCCCAAG 1550

ACCGTTGGGG GCCCCGCTCA ATCCCCGTTG AATGAAGCGG ACCTGCGTCC 1600

ACTCGTACCT GCTCCTGTGG TATGTCTTGT CGCGCTGTTC CATCGCTATT 1650

TCATATTAAC GTTTTGTTTT TGTCAAGCCT GGAAACGCTG TTCCAGGTGG 1700

CGCAGACATC AATCACAGGC TTAACTTAAC TTTCGTACGT ACACCTGGTT 1750

GAAACATTAT ATTTCCAGTC TAACCTCTCT TGTAGAGTAA CGGCCTCTTC 1800

AGCATCAACA ACGCCTCCTT CACTAATCCT TCGGTCCCCG CCTTATTACA 1850

AATTCTGAGC GGTGCTCAGA ACGCTCAAGA TTTACTTCCA ACGGGTAGTT 1900

ACATTGGCCT TGAACTAGGC AAGGTTGTGG AGCTCGTTAT ACCTCCTCTG 1950

GCAGTTGGAG GACCGCACCC TTTCCATCTT CATGGCGTAA GCATACCACA 2000

CTCCCGCAGC CAGAATGACG CAAACTAATC ATGATATGCA GCACAATTTC 2050

TGGGTCGTCC GTAGTGCAGG TAGCGATGAG TATAACTTTG ACGATGCTAT 2100

CCTCAGGGAC GTCGTRAGCA TTGGAGCGGG GACTGATGAA GTCACAATCC 2150

GTTTCGTGGT ATGTCTCACC CCTCGCATTT TGAGACGCAA GAGCTGATAT 2200

ATTTTAACAT AGACCGACAA TCCGGGCCCG TGGTTCCTCC ATTGCCATAT 2250

TGATTGGCAT TTGGAGGCAG GCCTTGCCAT CGTCTTCGCT GAGGGCATCA 2300

ATCAGACCGC TGCAGCCAAC CCAACACCCC GTACGTGACA CTGAGGGTTT 2350

CTTTATAGTG CTGGATTACT GAATCGAGAT TTCTCCACAG AAGCATGGGA 2400

TGAGCTTTGC CCCAAATATA ACGGGTTGAG TGCGAGCCAG AAGGTCAAGC 2450

CTAAGAAAGG AACTGCTATT TAAACGTGGT CCTAGACTAC GGGCATATAA 2500

GTATTCGGGT AGCGCGTGTG AGCAATGTTC CGATACACGT AGATTCATCA 2550

CCGGACACGC TGGGACAATT TGTGTATAAT GGCTAGTAAC GTATCTGAGT 2600

TCTGGTGTGT AGTTCAAAGA GACAGCCCTT CCTGAGACAG CCCTTCCTGA 2650

GACAGCCCTT CCTGAGACGT GACCTCCGTA GTCTGCACAC GATACTYCTA 2700

AATACGTATG GCAAGATGAC AAAGAGGAGG ATGTGAGTTA CTACGAACAG 2750

AAATAGTGCC CGGCCTCGGA GAGATGTTCT TGAATATGGG ACTGGGACCA 2800

ACATCCGGA 2809

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：14)：

MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50

TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100

AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150

NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200

PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 25O

PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300

LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350

NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400

VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450

GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500

AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

H.来自CBS115.075菌株的下皮黑孔属漆酶D2基因

多核苷酸序列(SEQ ID NO：15)：

GATCTGGACG ATGGTATATA AGACGATGGT ATGAGACCCA TGAAGTCTGA 50

ACACTTTTGC TCTCTGACAT TTCATGGTTC ATACTCTCGA GATGGGATTG 100

AACTCGGCTA TTACATCGCT TGCTATCTTA GCTCTGTCAG TCGGAAGCTA 150

TGCTGCAATT GGGCCCGTGG CCGACATACA CATTGTCAAC AAAGACCTTG 200

CTCCAGATGG TGTACAACGT CCAACCGTGC TCGCCGGAGG CACTTTTCCT 250

GGGACGTTGA TCACCGGTCA GAAAGTAAGG AATATTAGTT TGCGTCAAAG 300

AGCCAACCAA AATTAACCGT CCCGTCCCAT AGGGTGACAA CTTCCAGCTC 350

AATGTCATTG ATGATCTTAC CGACGATCGG ATGTTGACAC CAACTTCCAT 400

TGTGAGCCTA TTATTGTATG ATTTATCCGT ATAGTTTCTC AGTCTGATCA 450

TTGGCTCTCT ATCGCTAGCA TTGGCACGGT TTCTTCCAGA AGGGAACCGC 500

TTGGGCCGAC GGTCCCGCCT TCGTAACTCA GTGCCCTATA ATAGCAGATA 550

ACTCTTTTCT GTATGACTTC GACGTCCCCG ACCAAGCTGG TACTTTCTGG 600

TATCATAGTC ATCTATCCAC TCAGTACTGT GACGGTTTAC GTGGTGCCTT 650

CGTTGTGTAC GATCCTAACG ATCCTCACAA AGACCTATAC GATGTTGATG 700

ACGGTGGGTT CCAAATACTT GACCAAGAAA CATTATATTG ATAGTATCCA 750

CTCTGATTTT CAGAGAGCAC CGTGATTACC CTTGCGGATT GGTACCATGT 800

TCTCGCCCAG ACCGTTGTCG GCGCTGCGTG AGTAACACAT ACACGCGCTC 850

CGGCACACTG ATACTAATTT TTTATTGTAG CACTCCTGAT TCTACCTTGA 900

TCAACGGGTT AGGCCGTTCA CAGACCGGAC CCGCTGATGC TGAGCTGGCT 950

GTTATCAGCG TTGAACATAA CAAACGGTAT GTCATCTCTA CCCATTATCT 1000

TCTCTCCTGC TTTAATTCGC TGTTTCACCA TAGATACCGA TTCCGTTTGG 1050

TTTCGATTTC GTGCGACCCC AACTTTACCT TCTCCGTTGA TGGTCATAAT 1100

ATGACTGTCA TCGAAGTCGA CGGTGTCAAC ACACGACCCC TGACCGTTGA 1150

CTCTATTCAA ATCTTCGCCG GACAGAGGTA TTCCTTTGTC GTAAGTTAAT 1200

CGATATATTC TCCCTATTAC CCCTGTGTAA TTGATGTCAA CAGCTCAATG 1250

CTAACCAACC CGACGACAAT TACTGGATCC GTGCTATGCC AAACATCGGT 1300

AGAAATACAA CAACACTGGA CGGAAAGAAT GCCGCTATCC TTCGATACAA 1350

GAATGCTTCT GTAGAAGAGC CCAAGACCGT TGGGGGCCCC GCTCAATCCC 1400

CGTTGAATGA AGCGGACCTG CGTCCACTCG TACCTGCTCC TGTGGTATGT 1450

CTTGTCGTGC TGTTCCATCG CTATTTCATA TTAACGTTTT GTTTTTGTCA 1500

AGCCTGGAAA CGCTGTTCCA GGTGGCGCAG ACATCAATCA CAGGCTTAAC 1550

TTAACTTTCG TACGTACACC TGGTTGAAAC ATTATATTTC CAGTCTAACC 1600

TCTTGTAGAG TAACGGCCTT TTCAGCATCA ACAACGCCTC CTTCACTAAT 1650

CCTTCGGTCC CCGCCTTATT ACAAATTCTG AGCGGTGCTC AGAACGCTCA 1700

AGATTTACTT CCAACGGGTA GTTACATTGG CCTTGAACTA GGCAAGGTTG 1750

TGGAGCTCGT TATACCTCCT CTGGCAGTTG GAGGACCGCA CCCTTTCCAT 1800

CTTCATGGCG TAAGCATACC ACACTCCCGC AGCCAGAATG ACGCAAACTA 1850

ATCATGATAT GCAGCACAAT TTCTGGGTCG TCCGTAGTGC AGGTAGCGAT 1900

GAGTATAACT TTGACGATGC TATCCTCAGG GACGTCGTGA GCATTGGAGC 1950

GGGGACTGAT GAAGTCACAA TCCGTTTCGT GGTATGTCTC ACCCCTCGCA 2000

TTTTGAGACG CAAGAGCTGA TATATTTTAA CATAGACCGA CAATCCGGGC 2050

CCGTGGTTCC TCCATTGCCA TATTGATTGG CATTTGGAGG CAGGCCTTGC 2100

CATCGTCTTC GCTGAGGGCA TCAATCAGAC CGCTGCAGCC AACCCAACAC 2150

CCCGTACGTG ACACTGAGGG TTTCTTTATA GTGCTGGATT ACTGAATCGA 2200

GATTTCTCCA CAGAAGCATG GGATGAGCTT TGCCCCAAAT ATAACGGGTT 2250

GAGTGCGAGC CAGAAGGTCA AGCCTAAGAA AGGAACTGCT ATTTAAACG 2299

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：16)：

MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADIH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50

TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100

AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150

NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200

PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250

PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPDDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300

LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350

NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400

VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450

GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500

AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

I.来自CBS154.29菌株的下皮黑孔属漆酶E基因(部分)

多核苷酸序列(SEQ ID NO：17)：

TGCAATCGGA CCGGTGGCCG ACCTCAAGAT CGTAAACCGA GACATTGCAC 50

CTGACGGTTT TATTCGTCCC GCCGTTCTCG CTGGAGGGTC GTTCCCTGGT 100

CCTCTCATTA CAGGGCAGAA AGTACGTTAC GCTATCTCGG TGCTTTGGCT 150

TAATTAAACT ATTTGACTTT GTGTTCTCTT AGGGGAACGA GTTCAAAATC 200

AATGTAGTCA ATCAACTGAC CGATGGTTCT ATGTTAAAAT CCACCTCAAT 250

CGTAAGCAGA ATGAGCCCTT TGCATCTCGT TTTATTGTTA ATGCGCCCAC 300

TATAGCATTG GCATGGATTC TTCCAGAAGG GAACAAACTG GGCAGACGGT 350

CCTGCGTTCG TGAACCAATG TCCAATCGCC ACGAACAATT CGTTCTTGTA 400

TCAGTTTACC TCACAGGAAC AGCCAGGTGA GTATGAGATG GAGTTCATCC 450

GAGCATGAAC TGATTTATTT GGAACCTAGG CACATTTTGG TACCATAGTC 500

ATCTTTCCAC ACAATACTGC GATGGTTTGC GAGGGCCACT CGTGGTGTAT 550

GACCCACAAG ACCCGCATGC TGTTCTCTAC GACGTCGACG ATGGTTCGTA 600

CTTCGCATAT CCACGCTCGC TTTCATACAA TGTAAACTTT GTTCCTCCAG 650

AAAGTACAAT CATCACGCTC GCGGATTGGT ATCATACCTT GGCTCGGCAA 700

GTGAAAGGCC CAGCGTAAGG CACTTTAGTG TTTCCTCATA GTCCAAGAAA 750

TTCTAACACG CCTTCTTCAT CAGGGTTCCT GGTACGACCT TGATCAACGG 800

GTTGGGGCGT CACAACAATG GTCCTCTAGA TGCTGAACTA GCGGTGATCA 850

GTGTTCAAGC CGGCAAACGG CAAGTTCAAT TCACACTTTT CACTCTGTAC 900

CTTCTTCCTG ACATTCTTTT CTTGTAGTTA CCGCTTCCGC CTGATTTCAA 950

TTTCATGCGA TCCCAACTAC GTATTCTCCA TTGATGGCCA TGATATGACT 1000

GTCATCGAAG TGGATAGTGT TAACAGTCAA CCTCTCAAGG TAGATTCTAT 1050

CCAAATATTT GCAGGTCAGA GATATTCGTT CGTGGTGAGT CAGATCAGGG 1100

CATATCCTTT TGTCGATACG TCATTGACCA TATAATGCTA CAAGCTGAAT 1150

GCCAACCAAC CAG 1163

翻译的蛋白质序列(SEQ ID NO：18)：

AIGPVADLKI VNRDIAPDGF IRPAVLAGGS FPGPLITGQK GNEFKINVVN 50

QLTDGSMLKS TSIHWHGFFQ KGTNWADGPA FVNQCPIATN NSFLYQFTSQ 100

EQPGTFWYHS HLSTQYCDGL RGPLVVYDPQ DPHAVLYDVD DESTIITLAD 150

WYHTLARQVK GPAVPGTTLI NGLGRHNNGP LDAELAVISV QAGKRQVQFT 200

LFTLYRFRLI SISCDPNYVF SIDGHDMTVI EVDSVNSQPL KVDSIQIFAG 250

QRYSFVLNAN QP 262

可以在本文描述的方法中使用的具有下列氨基酸序列(SEQ ID NO：19；信号序列以斜体标出)的漆酶D：

MGLNSAITSL AILALSVGSY AAIGPVADLH IVNKDLAPDG VQRPTVLAGG 50

TFPGTLITGQ KGDNFQLNVI DDLTDDRMLT PTSIHWHGFF QKGTAWADGP 100

AFVTQCPIIA DNSFLYDFDV PDQAGTFWYH SHLSTQYCDG LRGAFVVYDP 150

NDPHKDLYDV DDGGTVITLA DWYHVLAQTV VGAATPDSTL INGLGRSQTG 200

PADAELAVIS VEHNKRYRFR LVSISCDPNF TFSVDGHNMT VIEVDGVNTR 250

PLTVDSIQIF AGQRYSFVLN ANQPEDNYWI RAMPNIGRNT TTLDGKNAAI 300

LRYKNASVEE PKTVGGPAQS PLNEADLRPL VPAPVPGNAV PGGADINHRL 350

NLTFSNGLFS INNASFTNPS VPALLQILSG AQNAQDLLPT GSYIGLELGK 400

VVELVIPPLA VGGPHPFHLH GHNFWVVRSA GSDEYNFDDA ILRDVVSIGA 450

GTDEVTIRFV TDNPGPWFLH CHIDWHLEAG LAIVFAEGIN QTAAANPTPQ 500

AWDELCPKYN GLSASQKVKP KKGTAI 526

该多肽的成熟加工形式如下(SEQ ID NO：20)：

AIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGGTFPGTLITGQKGDNFQLNVIDDLTDDRMLTPTS

IHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAF

VVYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTGPADAELA

VISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTRPLTVDSIQIFAGQRYSFVL

NANQPEDNYWIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAILRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLV

PAPVPGNAVPGGADINHRLNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSY

IGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFWVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEV

TIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWDELCPKYNGLSASQK

VKPKKGTAI

在一些实施方案中，适合于在本组合物和方法中使用的漆酶是缺少可以用于指导全长多肽从细胞分泌的信号序列的成熟多肽。合适的成熟多肽与选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQID NO：18、SEQ ID NO：19、和SEQ ID NO：20的氨基酸序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或甚至至少99％、或者甚至更多氨基酸序列同一性。优选地，如用本文中所述的测定法和方法测定的，此类多肽具有酶促的漆酶活性。

在一些实施方案中，相对于全长或成熟的亲本/参考序列，适用于在本组合物和方法中使用的漆酶是截短的。此类截短的多肽可以通过全长或者成熟多肽序列的蛋白水解降解或者通过工程化编码截短多肽的多核苷酸产生。相对于选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ IDNO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列，示例性多肽是在氨基端和/或羧基端截短的。截短可以是少量的，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸残基，或者是整个结构域或功能域。合适的截短多肽可以具有与一种或多种以上参考的氨基酸序列的对应部分至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或甚至至少99％或者更多的氨基酸序列同一性。优选地，如用本文中所述的测定法和方法测定的，此类多肽具有酶促的漆酶活性。

介质

在一些实施方案中，酶氧化系统、组合物和方法进一步包括增强漆酶的活性的一种或多种化学介质剂。介质(也称为增强剂或促进剂)是用作为对显示出氧化酶活性的酶与染料、色素(例如，靛蓝)、生色团(例如，多酚类(polyphenolic)、花色素苷或类胡萝卜素)或其他第二底物或电子供体之间有效的穿梭电子的氧化还原介质的化学物。

在一些实施方案中，化学介质是酚类化合物，例如，丁香酸甲酯或相关的化合物，如在例如，PCT申请号WO 95/01426和WO 96/12845中所述。介质也可以是N-羟基化合物、N-肟化合物或N-氧化物化合物，例如，N-羟基苯并三唑、紫尿酸或N-羟基乙酰苯胺。介质也可以是吩

嗪/吩噻嗪化合物，例如，吩噻嗪-10-丙酸。介质可以进一步是2，2′-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)。其他化学介质是本领域熟知的，例如，在PCT申请号WO 95/01426中公开的已知增强漆酶活性的化合物。介质也可以是乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丙酯、丁香酸丁酯、丁香酸己酯或丁香酸辛酯。

在一些实施方案中，介质是4-氰基-2，6-二甲氧基苯酚、4-酰胺基-2，6-二甲氧基苯酚或它们的N-取代的衍生物例如，如，4-(N-甲基酰胺基)-2，6-二甲氧基苯酚、4-[N-(2-羟基乙基)酰胺基]-2，6-二甲氧基苯酚或4-(N，N-二甲基酰胺基)-2，6-二甲氧基苯酚。

在一些实施方案中，介质通过以下通式描述：

其中，A是如-R、-D、-CH＝CH-D、-CH＝CH-CH＝CH-D、-CH＝N-D、-N＝N-D或-N＝CH-D的基团，D选自-CO-E、-SO₂-E、-CN、-NXY和-N⁺XYZ，E是-H、-OH、-R、-OR或-NXY，并且X、Y和Z独立地选自H、-OH、-OR和-R；其中R是C₁-C₁₆烷基，优选地C₁-C₈烷基，所述烷基可以是饱和的或不饱和的、分支的或不分支的并任选地用羧基、磺基或氨基取代；并且B和C独立地选自C_mH_2m+1；1≤m≤5。

在一些实施方案中，上述通式中的A是-CN或-CO-E，其中E可以是-H、-OH、-R、-OR或-NXY，其中X和Y独立地选自-H、-OH、-OR和-R，其中R是C₁-C₁₆烷基，优选地C₁-C₈烷基，所述烷基可以是饱和的或不饱和的、分支的或不分支的并任选地用羧基、磺基或氨基基团取代；并且B和C独立地选自C_mH_2m+1；1≤m≤5。在一些实施方案中，介质是4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈(也称为“syringonitrile”或“SN”)。

在上述通式中值得注意的是，A位于羟基基团的间位，而不是如所示的位于对位。

对于应用例如纺织品加工，介质可以以每g粗斜纹布约0.005至约1,000微摩尔、每g粗斜纹布约0.05至约500微摩尔、每g粗斜纹布约0.1至约100微摩尔、每g粗斜纹布约1至约50微摩尔或每g粗斜纹布约2至约20微摩尔的浓度存在。

介质可以通过本领域技术人员已知的方法，例如在PCT申请号WO97/11217和WO 96/12845和美国专利申请号5,752,980中公开的那些方法制备。其他合适的介质描述于，例如美国专利申请公开号2008/0189871中。

使用的方法

本系统和组合物可以用于在其中酶促的漆酶活性是有用的或需要的应用中。这些应用/方法之一是与纺织品相关的底物的颜色修饰。在一些实施方案中，此类方法包括在低温，例如，约40℃或更低，用合适的底物温育漆酶。在一些实施方案中，温度是约20℃至约40℃之间。在一些实施方案中，温度是约20℃至约35℃之间。在一些实施方案中，温度是约20℃、25℃、30℃或35℃。在一些实施方案中，温度是自来水的环境温度，例如，约20℃至约23℃。温度可以在窄范围内维持或者允许在没有显著影响系统和组合物的性能的情况下波动。

方法考虑了一种或多种本文中所述的漆酶的用途。在一些实施方案中，漆酶来自下皮黑孔属物种，例如单色下皮黑孔菌。在一些实施方案中，漆酶包含、组成为或基本组成为任一本文中所述的单色下皮黑孔菌漆酶的氨基酸序列或者具有与本文中所述的任一单色下皮黑孔菌漆酶至少约35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至99.5％同一性之一的，并具有漆酶酶促活性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，在纺织品加工方法中使用的系统和方法，例如用于修饰纺织产品，包括，例如，纤维、纱、布或完整衣物的颜色的方法。一般而言，该方法涉及将纺织品与漆酶和介质，在足够产生至少一种(即，一种或多种)选自，例如，颜色改变、色光改变、增亮、漂白、褪色、和/或再沉积/回染的降低的可测量的效果的条件下，接触一段时间。在一些实施方案中，该方法用于赋予染色的粗斜纹布产品“老式外观”。在靛蓝染色的粗斜纹布的情况下，该老式外观比新近染色的粗斜纹布具有更少强烈的蓝色/紫色色调和更柔和的灰色外观。在硫磺染色的粗斜纹布的情况下，该老式外观在没有棕色色调的情况下，可以通过次氯酸盐处理产生褪色。因此，使用漆酶获得的颜色修饰的一个方面可以表征为“漂白”效果，但是该术语并没有完全描述可能使用漆酶的颜色修饰。

提供的用于颜色修饰的纺织品可以是纤维素纺织品或者纤维素和合成纤维的混合物。在一些实施方案中，纺织品是用基于靛蓝和/或硫磺染料染色的粗斜纹布。在具体的实施方案中，纺织品是用靛蓝染色的，并且将漆酶和介质用于氧化靛蓝成靛红。可以任选地将粗斜纹布在用漆酶颜色修饰前退浆和/或石洗。

一般而言，假定在纺织品加工方法中具有相同量的磨损，那么与较低温度比较，在较高温度下粗斜纹布的强度降低了更大程度。与常规方法比较，因为本方法可以在较低温度进行，所以与常规方法比较，它们具有在加工期间减少对纺织品损坏的优点。此外，在加工期间，漆酶一般并不与纤维素纺织品纤维反应以降低它们的强度。因此，在一些实施方案中，本方法并不影响粗斜纹布的物理强度，或者降低与常规方法比较物理强度的损失。其中粗斜纹布是包含，例如，弹性纤维(elastane)或弹力纤维的弹力粗斜纹布，并且本方法并不影响纤维的弹力性能，或者降低与常规方法比较的弹力性能的损失。

在一些实施方案中，在纺织品加工方法中使用的漆酶与至少一种其他酶组合。当此类加工是同时的，如本文中所述，可以在低温下进行酶处理。其中加工是顺次的，如本文中所述，可以在低温下使用漆酶，并且任选地在低温下使用其他酶。在一些实施方案中，漆酶同时或者顺次地与纤维素酶组合使用。在一个实施方案中，纺织品同时与漆酶和纤维素酶接触。在另一个实施方案中，纺织品顺次地与漆酶和纤维素酶接触。在一个实施方案中，纺织品首先与纤维素酶接触以实现“石洗”，并然后与漆酶接触以实现颜色修饰。在另一个实施方案中，纺织品首先与漆酶接触，并然后与纤维素酶接触。其中纤维素酶和漆酶处理是顺次的，两个处理步骤可以在同一浴中进行，并且在两个处理之间并没有排干浴。此类方法称为“单浴(single-bath)”方法。

合适的纤维素酶可以来源于已知能产生分解纤维素的酶的微生物，例如，如腐质霉属、嗜热真菌属(Thermomyces)、芽孢杆菌属、木霉属、镰孢属、毁丝霉属、Phanerochaete、耙齿菌属(Irpex)、柱顶孢属(Scytalidium)、裂褶菌属(Schizophyllum)、青霉属、曲霉属或地霉属(Geotricum)的物种。已知能用于产生分解纤维素的酶的物种包括特异腐质霉(Humicola insolens)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)或里氏木霉。合适的纤维素酶的非限制性示例公开于美国专利号4,435,307；欧洲专利申请号0 495 257；PCT专利申请号WO 91/17244；和欧洲专利申请号EP-A2-271004中，所述所有文献在此处引用作为参考。

在一些实施方案中，可以组合使用纤维素酶的酶促“石洗”，使用芳基酯酶的漂白和使用漆酶的颜色修饰以提供全面的酶促纺织品加工系统。此种系统允许纺织品加工者生产具有多种修整的纺织品，而不需要常规的纺织品加工化学物。

漆酶也可以用于纺织品生产的其他方面，一般而言包括纤维的处理、加工、整理、磨光等方面。除修饰染色的粗斜纹布的颜色外，漆酶可以用于脱色染色的废物(包括靛蓝染色的废物)、用于织物染色、用于纺织品漂白处理、用于纤维修饰、用于实现增强的纤维或织物特性等。

在进一步的实施方案中，本系统和组合物也可以用于修饰羊毛的颜色的方法。例如，欧洲专利号EP 0 504 005公开了可以用于染色羊毛的漆酶。漆酶也可以用于皮革工业。例如，漆酶可以用于加工动物生皮，包括但不限于生皮的去毛、浸灰、软化和/或鞣皮。

本系统和组合物也可以用于修饰纸浆或纸产品的颜色的方法。此类方法涉及在足够发生颜色修饰的条件下，将需要颜色修饰的纸浆或纸产品与本文中所述的漆酶接触一段时间。在具体的实施方案中，颜色修饰是漂白。

本系统和组合物也可以用于毛发颜色修饰的方法。据报道，已经发现漆酶对毛发染色是有用的(参见，例如，WO 95/33836和WO 95/33837)。此类方法涉及在适合于改变毛发的颜色的条件下，将具有待修饰颜色的毛发与漆酶接触一段时间。

本系统和组合物也可以用于废水处理领域。例如，可以将漆酶用于有色化合物的脱色；用于酚类组分的去毒；用于抗微生物活性(例如，在水再循环中)；用于生物修复；等。

本系统和组合物也可以用于高分子量聚集体的解聚、脱墨废纸、芳族化合物的聚合、自由基介导的聚合和交联反应(例如，油漆、涂料、生物材料)、染料的活化和偶联有机化合物。

本系统和组合物也可以用于清洁组合物或其组分，或者用于在清洁方法中使用的洗涤剂。例如，可以将漆酶用于清洁、处理或护理衣物物品例如衣服或织物；用于清洁家庭硬表面；用于餐具护理，包括机器餐具洗涤应用；并用于肥皂棒和液体和/或合成的表面活性剂棒和液体。本文提供的酶可以用于，例如，污迹去除/脱色、和/或用于气味去除、和/或用于卫生处理等。也可以将漆酶介质独立地或与漆酶组合地用作为卫生处理和抗微生物剂(例如，木材保护、洗涤剂)。

也可以将漆酶用于个人护理领域的其他方面。例如，可以将漆酶用于制备人类的个人产品例如香水，和用于人类的皮肤护理、毛发护理、口腔卫生、个人洗涤和除臭和/或止汗。可以将漆酶用于，例如，毛发染色和/或漂白、指甲染色和/或漂白；皮肤染色和/或漂白；表面修饰(例如，作为偶联试剂)；作为抗微生物剂；用于气味去除；牙齿增白；等。可以将漆酶用于隐形眼镜清洁领域。例如，可以将漆酶用于隐形眼镜的清洁、贮藏、消毒和/或防腐。

可以将漆酶用于生物材料领域。例如，可以将漆酶用作为多种有机反应的生物催化剂；和/或与生物聚合物结合；与填料物结合；与粘合剂结合；用于表面修饰(活化和偶联剂)；用于伯醇的产生；与生物传感器和/或有机合成物结合；等。使用氧作为电子受体，漆酶能氧化多种具有不同化学结构的有色化合物。

也可以将本发明系统和组合物用于从含木质纤维素的材料中去除木质素(例如，纸浆的去木质作用)、漂白含木质纤维素的材料(即再循环纸的酶促脱墨)和/或处理因生产纸或纤维素产生的废水。此类工艺可以使用与添加的或计量的非芳族氧化还原剂外加酚类和/或非酚类芳族氧化还原化合物组合的漆酶，或者这些酚类和/或非酚类芳族化合物的作用直接氧化的木质素的酚类和非酚类单元，或者通过由这些化合物的氧化作用产生的其他酚类和/或非酚类化合物氧化的木质素。

可以将漆酶用于与纸浆和纸相关的其他方面。例如，可以将漆酶用于生产来自原材料例如木、竹和谷物稻草的纸浆和短纤浆；生产用于印刷和书写、包装、卫生和其他技术用途的纸和纸板；再循环用于制造纸和纸板目的的纤维素纤维；和处理由纸浆厂或造纸厂以及其他特别用于生产纸、纸浆或绒毛的设备产生和处理的废产物。可以将漆酶用于，例如，木材加工；用于纸浆漂白；用于木材纤维修饰；用于对MDF生产的生物胶(木质素活化)；用于增强纸特性；用于墨迹去除；用于纸染色；用于粘合剂(例如，用于碎料板或纤维板的基于木质素的胶)；等。

可以将漆酶用于饲料领域。例如，为了增加用于任一种类的动物例如鸡、奶牛、猪、鱼和宠物的饲料的营养价值的目的，可以将漆酶用作为单独的饲料添加剂或者作为饲料添加剂的部分；和/或为了产生适合作为饲料原材料的材料/产品的目的，作为加工助剂以加工植物材料和食品工业副产品。

可以将漆酶用于淀粉加工领域。例如，可以将漆酶用于加工底物，包括淀粉和/或谷物以得到葡萄糖(葡糖)糖浆、果糖糖浆或任一其他糖浆、醇(可饮的醇或燃料)或糖。该淀粉加工可以包括加工步骤例如底物的液化、糖化、异构化和脱支。

也可以将漆酶用于食品领域。例如，可以将漆酶用于制备、加工用于人类消费的食物例如白脂肪、基于茶的饮料、烹调产品、烘焙和冷冻食物，或者作为其中的活性成分。可以将漆酶，例如，用作为面包改良剂、用于食品防腐、用作为氧清除剂等。可以将漆酶用于降低或消除多种食物(例如，肉)或饲料的微生物负荷。

本文中所述的漆酶的任一方法或用途可以在低温，例如在约40℃以下的温度、例如，低于约40℃、低于约37℃、低于约35℃、低于约32℃、低于约30℃、低于约27℃、低于约25℃和低于约22℃进行。示例性温度范围是从约20℃到低于约40℃。示例性温度是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃。在一些实施方案中，温度是室温或自来水的环境温度，例如，约20℃至约23℃。

本文中所述的漆酶的任一方法和用途可以使用本文中所述的任一漆酶进行，例如，来自单色下皮黑孔菌的漆酶。在一些实施方案中，以约0.005至约5000mg/升、约0.05至约500mg/升、约0.1至约100mg/升或约0.5至约10mg/升的浓度使用漆酶。在一些粗斜纹布加工实施方案中，以每kg的粗斜纹布约0.005至约5000mg、每kg的粗斜纹布约0.05至约500mg、每kg的粗斜纹布约0.1至约100mg或每kg的粗斜纹布约0.5至约10mg的浓度使用漆酶。在一些实施方案中，在约5至约7、约5.5至约6.5、约5至约6或约6的pH使用漆酶。示例性pH值是约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

即用型组合物和试剂盒

如上所述，本组合物包括一种或多种漆酶，和任选地一种或多种介质。在一些实施方案中，该组合物包含含有或组成为或组成基本为选自SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQID NO：19、SEQ ID NO：20或它们的变体或者片段的多肽。在具体的实施方案中，该组合物包含、组成为或组成基本为选自SEQ ID NO：19和20或它们的变体或者片段的多肽。优选地，此类多肽具有可以使用本文中所述的测定法和步骤测定的酶促漆酶活性。

也可以将此类组合物以包含、组成为或组成基本为漆酶和介质的“即用型”(RTU)组合物的形式提供。在一些实施方案中，介质选自乙酰丁香酮、丁香醛、丁香酰胺、甲基丁香酰胺、2-羟乙基丁香酰胺、丁香酸甲酯、syringonitrile、二甲基丁香酰胺、和丁香酸。在一个实施方案中，介质是syringonitrile(4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈)。当该组合物是在溶液中时，该RTU组合物可以进一步含有一种或多种化合物以提供pH缓冲。例如，在一些实施方案中，该组合物含有作为缓冲系统的磷酸二氢钠和己二酸。为了易于贮藏和运输，该RTU组合物可以为固体、颗粒形式。然后用水稀释组合物以提供用于，例如所述用途的水溶液。RTU组合物也可以包括任一数量的额外试剂，例如分散剂、表面活性剂、阻断剂、聚合物、防腐剂等。

提供以下实施例以说明该系统、组合物和方法，并不应以任意方式解释为限制。鉴于说明书，其他方面和实施方案将对技术人员是显而易见的。

实施例

在实施例中使用以下酶的命名：

实施例1温度对石洗粗斜纹布的漆酶介导的颜色修饰的影响

酶

在该实验中使用来自单色下皮黑孔菌的颗粒漆酶D(38,000U/g)。将一个漆酶单位定义为在基于漆酶氧化ABTS(2，2′-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))成其对应的稳定阳离子自由基ABTS⁺的能力的测定条件下，每秒氧化1nmol ABTS底物的漆酶活性的量。自由基的累积造成ABTS转变成深绿色，并在420nm处吸光度的增加。颜色形成与漆酶活性成比例，并针对漆酶标准品进行监测。

介质

4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈(syringonitrile，SN)购自Punjab Chemicals&Crop Protection Limited(Mumbai，印度)。

方法

在以下条件下，在Unimac UF 50洗衣机中，将大约3kg(总共)重量的12条粗斜纹布裤腿退浆：

●用0.5g/l(15g)的

160淀粉酶(Genencor)和0.5g/l(15g)的非离子表面活性剂[例如，Rucogen BFA(RudolfChemie)或Ultravon RW(Huntsman)]在50℃以10∶1的浴比退浆15分钟。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。

退浆后，在以下条件下，在Unimac UF 50洗衣机中石洗粗斜纹布：

●以10∶1的浴比冷漂洗5分钟。

●用1kg的浮石、pH4.5(1g/l柠檬酸三钠二水合物和1g/l柠檬酸一水合物)和1.2g/l2XL纤维素酶(Genencor)在55℃，以10∶1的浴比石洗60分钟。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。

石洗后，根据以下方法在Unimac UF 50洗衣机中进行漆酶处理：

●用(i)单色下皮黑孔菌漆酶D和syringonitrile在pH6(0.7g/l磷酸二氢钠和0.17g/l己二酸)，和40℃、30℃或23℃的温度，或者(ii)

Base 268和

F258在pH 4.8(0.29g/l磷酸二氢钠和0.56g/l的己二酸)和40℃或30℃的温度，以10∶1的浴比处理30分钟。

●在30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。

评价粗斜纹布裤腿

漆酶处理后，用Minolta Chromameter CR 310在具有D 65光源的CIELab色空间中评价粗斜纹布的颜色修饰的量，报告为“漂白”。CIE色空间，也称为CIELUV色空间，在1976年被国际照明委员会(CIE)采用，并涉及如下计算的L^＊、u^＊和v^＊值：

当

\frac{Y}{Y_{0}} > 0.008856

时，

L^{*} = 116 {(\frac{Y}{Y_{0}})}^{\frac{1}{3}} - 16

u^*＝13L^*(u′-u′₀)

v^*＝13L^*(v′-v′₀)

其中

Y：三色值Y(也可使用三色值Y₁₀)

u’，v’：来自CIE 1976 UCS图表的色度坐标

Y₀，u’₀，v’₀：全反射漫射器的三色值Y(或Y₁₀)和色度坐标u’，v’。

对于每一条粗斜纹布裤腿，进行8次测量，并平均来自12条裤腿(共96次测量)的结果。结果显示于表1和2，以及图1中。

表1.使用单色下皮黑孔菌漆酶和syringonitrile的结果

表2.使用来自米曲霉的漆酶和丁香酸甲酯的结果

结果显示单色下皮黑孔菌漆酶和syringonitrile在实现石洗粗斜纹布的颜色改变中的有效性。

实施例2漆酶：介质比率对石洗粗斜纹布的颜色修饰的影响

方法

如实施例1中所述，将大约3kg(总共)重量的12条粗斜纹布裤腿退浆并石洗。石洗后，根据以下方法，在Unimac UF 50洗衣机中进行漆酶处理：

●在40℃，以10∶1的浴比，pH6(0.7g/l磷酸二氢钠和0.17g/l己二酸)用单色下皮黑孔菌漆酶D和syringonitrile处理30分钟。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。

评价粗斜纹布裤腿

如实施例1中所述评价粗斜纹布裤腿的颜色修饰。结果显示于表3和图2中。

表3.以不同比率使用单色下皮黑孔菌漆酶和syringonitrile的结果

结果显示，可以操纵漆酶与介质的比率以改变颜色修饰。

实施例3在石洗的粗斜纹布上温度对含有漆酶和介质的组合物的颜色改变性能的影响

为了研究低温下漆酶介导的颜色修饰性能，如表4所示制备了“即用型”(RTU)组合物。如下所述，在使用的应用中，磷酸二氢钠和己二酸提供了在约pH6的缓冲功能。

表4.即用型制剂

方法

●在如下面的表5和6中所述的浓度和温度，用上述RTU漆酶组合物或

II S(Novozymes)在30℃或没有进入蒸汽的情况下(即，21-22℃的温度)以10∶1的浴比处理30分钟。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟

评价粗斜纹布裤腿

如实施例1中所述评价粗斜纹布裤腿的颜色修饰。结果显示于表5和6，以及图3和4中。

表5.使用单色下皮黑孔菌RTU组合物的结果

*“owg”＝按商品的重量

表6.使用米曲霉漆酶RTU组合物的结果

结果显示，与常规市售漆酶组合物比较，在低温下单色下皮黑孔菌漆酶RTU组合物提供了更优的颜色修饰。

实施例4在30℃一步石洗和颜色修饰

如实施例1中所述，将大约3kg(总共)重量的12条粗斜纹布裤腿在Unimac UF 50洗衣机中退浆。

退浆后，在以下条件下，将粗斜纹布在Unimac UF 50洗衣机中石洗并漂白：

●30℃，以10∶1的浴比，pH6(i)用0.4％owg

Super GX纤维素酶(Genencor)+实施例3中所述的3％owg RTU漆酶组合物(即，“石洗+漂白1-步”)或者(ii)仅用

Super GX纤维素酶(即，“仅石洗”)处理30分钟。

●以31∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。不使用浮石。结果显示于表7和图5中。

表7.一步石洗和颜色修饰的结果

结果显示，可以同时使用漆酶和纤维素酶实现颜色修饰。

实施例5在30℃两步石洗和颜色修饰

退浆后，在以下条件下，将粗斜纹布在Unimac UF 50洗衣机中石洗：

●30℃，以10∶1的浴比，pH5.5，用0.4％owg

Super GX纤维素酶(Genencor)处理30分钟

石洗后，在以下条件下，将粗斜纹布在Unimac UF 50洗衣机中漂白：

●30℃，以10∶1的浴比，pH6，用实施例3中所述的3％owg RTU漆酶组合物处理30分钟。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。不使用浮石。

结果显示于表8和图5中。将两步石洗和颜色修饰结果与如实施例4中所述的仅石洗的结果比较。

表8.两步石洗和颜色修饰的结果

结果显示，在石洗后，可以实现由漆酶处理的颜色修饰。

实施例6在30℃没有石洗的情况下，漆酶介导的粗斜纹布的颜色修饰

退浆后，在以下条件下，将粗斜纹布在Unimac UF 50洗衣机中漂白：

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。不使用浮石。

结果显示与表9和图5中。将颜色修饰结果与如实施例4中所述的仅石洗的结果比较。

表9.在无石洗的情况下的颜色修饰的结果

结果显示，通过漆酶处理而不石洗产生的颜色修饰的量比仅石洗更高。

实施例7在没有浮石的情况下，在单浴浴工艺中使用纤维素酶和漆酶的石洗和颜色修饰

该实施例显示，可以在单浴工艺中使用漆酶和纤维素酶获得有效的石洗和颜色修饰。

酶

EcoFade LT 100漆酶(批号780913616，6,292GLacU/g)。

方法

起始材料是重量约3kg的退浆粗斜纹布(用于评价的压载物(ballast)+2条裤腿)。

在以下条件下，在Renzacci LX 22洗衣机中石洗粗斜纹布：

●50℃，以10∶1的浴比，pH6.5，用0.4％owg的

NeutraL纤维素酶(批号No.40105358001活性5197NPCNU/g)(Genencor)石洗40分钟。

●石洗后，取出1只裤腿并干燥用于评价。

●石洗后，并不排干(即，滴下)浴，在以下条件下，将第二只粗斜纹布裤腿进行颜色修饰：

●40℃，以10∶1的浴比和用1％owg的RTU

EcoFadeLT 100处理40分钟

●冷漂洗2次，每次3分钟

●将粗斜纹布在工业干燥机中干燥

评价粗斜纹布裤腿

在漆酶处理后和纤维素酶处理后，用Minolta Chromameter CR 310在具有D 65光源的CIE Lab色空间评价粗斜纹布裤腿上的颜色修饰和石洗。每一条裤子取6次测量，并将结果平均。

结果总结于表10中。在单浴中顺次(即，两步)添加纤维素酶和漆酶获得的颜色修饰的量比如在实施例4中通过在同一时间加入纤维素酶和漆酶获得的颜色修饰的量更大。

表10

结果显示，在单浴中顺次(即，两步)添加纤维素酶和漆酶获得的颜色修饰的量比如在实施例4中通过在同一时间加入纤维素酶和漆酶获得的颜色修饰的量更大。

实施例8用漆酶和浮石进行颜色修饰

该实施例显示，在单浴工艺中可以使用浮石和漆酶-介质系统获得有效的石洗和颜色修饰。

酶

EcoFade LT 100漆酶(批号7809136160，6,292GLacU/g)。

方法

如实施例1中所述，在Unimac UF 50洗衣机中，将重量约3kg(总共)的12条粗斜纹布裤腿退浆。

●30℃，以10∶1的浴比、3kg的浮石，用3％

EcoFadeLT100(Genencor)石洗30分钟。空白/对照仅用石头在水中进行。

●以30∶1的浴比冷漂洗2次，每次5分钟。

评价粗斜纹布裤腿

在漆酶处理后和石洗处理后，与前面一样，用Minolta ChromameterCR 310在具有D 65光源的CIE Lab色空间评价粗斜纹布裤腿上的颜色修饰。将在每一条裤腿的外面取得的8次测量的平均值报告为漂白水平。将在每一条裤腿的里面取得的4次测量的平均值报告为回染水平。

结果总结于表11和12中。

表11

表12

结果显示，即使存在浮石，漆酶处理也提供了颜色修饰，并进一步显示出回染的降低/去除。

实施例9硫磺染色衣物的石洗和颜色修饰

将100％棉Twill织物制造的测试衣物用硫磺卡其棕染料染色。在以下条件下，将约7kg(总共)重量的21件衣物在25kg belly洗衣机(36转/分钟)中石洗：

●55℃，以18∶1的浴比，pH4.5，用1g/l的

2XL处理45分钟。

●以12∶1的浴比冷漂洗1次3分钟。不使用浮石。

●洗涤后，干燥衣物用于评估。

●在以下条件下，将如上所述石洗的3件衣物(约1kg，总共)用

EcoFade LT 100处理：

●40℃，以50∶1的浴比和1、2或3g/l的EcoFadeLT 100处理15、30或40分钟。空白/对照是将衣物仅用水洗涤15、30或45分钟。

●冷漂洗1次3分钟。

●将粗斜纹布在工业干燥机中干燥。

评价粗斜纹布裤腿

在漆酶处理后和石洗处理后，与前面一样，用Minolta ChromameterCR 310在具有D 65光源的CIE Lab色空间评价硫磺染色衣物的颜色修饰和石洗。对于每一衣物，取10次测量并平均结果。

结果总结与表13中

表13

结果显示，与未处理织物以及空白对照比较，显著地改变了色空间的a值和b值。通过肉眼可以看出对衣物色光的修饰。

实施例10在无石洗的情况下，硫磺染色的衣物的颜色修饰

在以下条件下，将100％棉Twill织物制造的3件衣物用硫磺卡其棕染料染色，并将约1kg(总共)重量的衣物在5kg belly洗衣机(36转/分钟)中处理：

●40℃，以40∶1的浴比和1、2或3g/l的

EcoFadeLT 100处理15、30或40分钟。空白/对照是将衣物仅用水洗涤15、30或45分钟。

●冷漂洗1次3分钟。

●将粗斜纹布在工业干燥机中干燥

评价粗斜纹布裤腿

在漆酶处理后和石洗处理后，用Minolta Chromameter CR 310在具有D 65光源的CIE Lab色空间评价硫磺染色衣物上的颜色修饰和石洗。对于每一衣物，取10次测量并平均结果。

结果总结于表14中

表14

实施例11在表面活性剂和浮石存在的情况下，在单一浴工艺中使用纤维素酶和漆酶的石洗和漂白性能

酶

EcoFade LT 100漆酶(批号780913616，6,292GLacU/g)。

方法

在以下条件下，将大约10kg(总共)重量的并用纯靛蓝染色的12件粗斜纹布衣物在Tupesa正面装料机(36转/分钟)中退浆：

●40℃，以10∶1的浴比，pH 7，和0.5g/l的润滑剂、0.2g/l的分散剂(非离子表面活性剂)，和0.2g/l聚酯阻断剂(非离子亲水共聚物)退浆10分钟。

退浆后，在以下条件下，将粗斜纹布去石洗(destonewash)：

●47℃，以5∶1的浴比，pH 6，用7kg的浮石、4％owg的

Super GX纤维素酶(Genencor)处理30分钟。取出一件衣物用于评价。

●石洗后，在没有排干(滴下)浴的情况下，在以下条件下漂白粗斜纹布：

●47℃，以5∶1的浴比和2％owg的RTU

EcoFadeLT 100漂白30分钟。

●以1∶50的浴比冷漂洗2次，每次2分钟

●在工业干燥机中干燥粗斜纹布。

评价粗斜纹布裤腿

漆酶处理后和纤维素酶处理后，用Minolta Chromameter CR 310在具有D 65光源的CIE Lab色空间中评价粗斜纹布上的颜色修饰和石洗。对于每一条裤腿，取8次测量并平均结果。

结果总结于表15中。

结果显示，在浮石存在的情况下和在表面活性剂存在的情况下，发生了由漆酶处理的颜色修饰。

本文中所述的方面、实施方案和实施例仅是为了说明性目的。多种修饰对技术人员将是显而易见的，并且包括于本申请的精神和范围内，以及所附权利要求的范围内。因此，所有在此处引用的出版物和专利文件都以其整体引入作为参考。

Claims

1.纺织品加工方法，其包括在低于40℃的温度下，并且在足够造成纺织品的颜色修饰的条件下，将纺织品与漆酶和介质接触一段时间。

2.权利要求2的方法，其中所述颜色修饰选自颜色的增亮、颜色的改变、色光的改变、再沉积/回染的降低、和漂白。

3.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述温度是约20℃至低于40℃。

4.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述温度是约20℃至约30℃。

5.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述织物是靛蓝染色的粗斜纹布。

6.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述织物是硫磺染色的粗斜纹布。

7.权利要求1的纺织品加工方法，其中在将所述纺织品与漆酶和介质接触前或同时，将所述粗斜纹布退浆和/或石洗。

8.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述石洗和所述纺织品与漆酶和介质接触在同一浴中发生。

9.权利要求1的纺织品加工方法，其进一步包括将所述纺织品与纤维素酶接触，同时或顺次地将所述织物与漆酶和介质接触。

10.权利要求9的纺织品加工方法，其中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶接触，并且其中在所述纺织品与漆酶和介质接触之前，进行纺织品与纤维素酶接触。

11.权利要求10的纺织品加工方法，其中在同一浴中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，并且在纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触之间不排干浴。

12.权利要求9-11中任一项的纺织品加工方法，其中所述纺织品与纤维素酶接触和所述纺织品与漆酶和介质接触在低于40℃的温度下进行。

13.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶是微生物漆酶。

14.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶来自下皮黑孔菌属物种。

15.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶来自单色下皮黑孔菌。

16.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶是来自单色下皮黑孔菌的漆酶D。

17.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与选自SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列至少70％同一性的氨基酸序列。

18.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与选自SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQID NO：19和SEQ ID NO：20的氨基酸序列至少80％同一性的氨基酸序列。

19.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少70％同一性的氨基酸序列。

20.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少80％同一性的氨基酸序列。

21.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：20至少90％同一性的氨基酸序列。

22.权利要求1-21任一项的方法，其中所述介质是syringonitrile。

23.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是约20℃至约35℃。

24.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是约20℃至约23℃。

25.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是自来水的环境温度。

26.权利要求1-25任一项的方法，其中将所述漆酶和介质在即用型组合物中一起提供。

27.权利要求1-25任一项的方法，其中所述漆酶和介质以固体形式提供。