CN102257959A - 晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法 - Google Patents

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本发明涉及一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法，其特别之处在于，包括如下步骤：(1)培养基基本母液的配制，制备大量元素母液，制备微量元素母液，制备铁盐母液，制备1号有机物母液，制备2号有机物母液；(2)按每L培养基共加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水；(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中；(4)用氢氧化钠或盐酸将pH值调到5.8～6.0；(5)装瓶后高压灭菌即可。本发明的培养基中不仅营养成分减少，而且还用低成本的卡拉胶代替琼脂作为凝固剂，不但试管苗生长旺盛且周期缩短，还有效减少了育苗中的能耗和成本。

Description

晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基及其制备方法。
背景技术
目前我国脱毒马铃薯原原种产业化生产是通过组培快繁技术生产马铃薯脱毒基础苗，再将其进行移栽炼苗生产微型薯。而MS培养基是目前马铃薯脱毒基础苗工业化扩繁广泛采用的培养基，其琼脂用量过高，有的甚至到1.7％，基础苗生长在过硬的基质环境下，茎脆根柔性较差，造成基础苗长势差，基础苗扩繁一代需要25天左右，移栽炼苗前，从瓶中取出基础苗，倒入温水中，将根部周围的琼脂洗掉，琼脂较硬洗根时根易损伤，影响移栽成活率。未按品种成熟期选用培养基，加大的工业化生产成本，使基础苗生长势较差。在培养期间增加了药品成本及用电损耗，且基础苗生长势较差，质量不好，对工业化生产不利。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基，采用该培养基的脱毒基础苗生产周期短、生长旺盛、生产成本低。
本发明的目的之二是提供一种上述晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是。
一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特别之处在于，以1L培养基计算含有：169～171mg的KH2PO4、369～371mg的MgSO4·7H2O、439～441mg的CaCl2·2H2O，22.27～22.23mg的MnSO4·4H2O、0.827～0.833mg的KI、6.17～6.23mg的H3BO3、8.57～8.63mg的ZnSO4·7H2O、0.247～0.253mg的Na2MoO4·H2O、0.0247～0.0253mg的CuSO4·5H2O、0.0247～0.0253mg的CoCl2·6H2O、37.0～37.3mg的Na2·EDTA、26～28mg的FeSO4·7H2O、1.99～2.01mg甘氨酸、0.09～0.11mg的VB1、0.49～0.51mg的VB6，以及0.49～0.51mg的VB5或VPP；余量为水。
其中还含有47～53mg的肌醇。
其中还含有465～485mg的NH4NO、815～835mg的KNO3和24900～25100mg的C源蔗糖。
一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特别之处在于，包括如下步骤：
(1)培养基基本母液的配制
a、制备大量元素母液
取4650～4850mg的NH4NO；8150～8350mg的KNO3、1690～1710mg的KH2PO4、3690～3710mg的MgSO4·7H2O和4390～4410mg的CaCl2·2H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入1L容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
b、制备微量元素母液
取2227～2223mg的MnSO4·4H2O、82.7～83.3mg的KI、617～623mg的H3BO3、857～863mg的ZnSO4·7H2O、24.7～25.3mg的Na2MoO4·H2O、2.47～2.53mg的CuSO4·5H2O、和2.47～2.53mg的CoCl2·6H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
c、制备铁盐母液
取370～373mg的Na2·EDTA和260～280mg的FeSO4·7H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
d、制备1号有机物母液
取199～201mg甘氨酸、9～11mg的VB1、49～51mg的VB6、和49～51mg的VB5或VPP，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
按每升培养基分别量取100mL大量元素母液、铁盐母液，以及10mL微量元素母液和1号有机物母液，放入烧杯中备用；
(2)按每L培养基共加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；
(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2.49～2.51％，卡拉胶质量浓度达到0.5％，加热80-121℃搅拌均匀；
(4)用氢氧化钠或盐酸将pH值调到5.8～6.0，即完成固体培养基的制备；
(5)装瓶后高压灭菌即可。
其中C源为蔗糖，加入量为24900～25100mg。
其中在大量元素母液中还加入4650～4850mg的NH4NO、8150～8350mg的KNO3。
其中在培养基基本母液的配制中还要制备2号有机物母液，具体取470～530mg的肌醇，用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；并按每升培养基分别量取100mL大量元素母液、铁盐母液和2号有机物母液，以及10mL微量元素母液和1号有机物母液，放入烧杯中备用。
其中调节pH值是用1mol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中，滴后搅拌均匀，重复该过程直至pH值调到5.8～6.0，即完成固体培养基的制备。
其中装瓶后高压灭菌是将配好的固体培养基，每瓶装30～40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内，121℃灭菌15～19.5分钟后取出即可。
与背景技术相比，本发明的培养基中不仅营养成分减少，而且还用低成本的卡拉胶代替琼脂作为凝固剂，不但试管苗生长旺盛且周期缩短，还有效减少了育苗中的能耗和成本。
具体实施方式
实施例1：
脱毒晚熟马铃薯试管苗培养基重量组分原料制取如下：
a、大量元素母液(母液1)组成：4650～4850mg硝酸铵(NH4NO3)、8150～8350mg硝酸钾(KNO3)、1690～1710mg磷酸二氢钾(KH2PO4)、369～3710mg硫酸镁(MgSO4·7H2O)、4390～4410mg氯化钙(CaCl2·2H2O)，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入1L容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
b、微量元素母液(母液2)组成：2227～2223mg的MnSO4·4H2O、82.7～83.3mg的KI、617～623mg的H3BO3、857～863mg的ZnSO4·7H2O、24.7～25.3mg的Na2MoO4·H2O、2.47～2.53mg的CuSO4·5H2O、和2.47～2.53mg的CoCl2·6H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
c、铁盐母液组成(母液3)：370～373mg乙二胺四乙酸二钠(Na2·EDTA)、260～280mg硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存、备用；
d、1号有机物母液组成(母液4)：199～201mg甘氨酸、9～11mg的VB1、49～51mg的VB6、和49～51mg的VB5或VPP，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存、备用；
e、2号有机物母液组成(母液5)：470～530mg肌醇，以上物质用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存、备用；
分别按照每升培养基量取100mL母液1、母液3、母液5，量取10mL母液2、母液4，放入烧杯中备用：
(2)按每L培养基共加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；
(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2.49～2.51％，卡拉胶质量浓度达到0.5％，加热80-121℃搅拌均匀；
(4)用1mol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中，滴后搅拌均匀，重复该过程直至pH值调到5.8～6.0，即完成固体培养基的制备；
(5)将配好的培养基，每瓶装30～40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内，121℃灭菌15～19.5分钟，可完成培养基的制备。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重153.0mg、干重9.0mg、株高5.11cm、茎粗1.04mm、叶片数5.5、根条数6.9条、根长4.67cm。
实施例2：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸铵(NH4NO3)为0mg，母液4中肌醇含量为0mg，蔗糖质量浓度为1.5％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重36.0mg、干重2.1mg、株高4.28cm、茎粗0.97mm、叶片数5.2、根条数4.5条、根长1.13cm。
实施例3：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸铵(NH4NO3)为4125mg，母液4中肌醇含量为2500mg，蔗糖质量浓度为1.5％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重135.0mg、干重6.3mg、株高4.67cm、茎粗1.24mm、叶片数6.6、根条数6.3条、根长5.13cm。
实施例4：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为9500mg、硝酸铵(NH4NO3)为0mg，母液4中肌醇含量为2500mg。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重45.0mg、干重3.1mg、株高3.72cm、茎粗0.83mm、叶片数5.3、根条数5.9条、根长5.13cm。
实施例5：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为9500mg、硝酸铵(NH4NO3)为4125mg，蔗糖质量浓度为1.5％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重65.0mg、干重3.3mg、株高3.72cm、茎粗0.87mm、叶片数6.7、根条数4.1条、根长3.25cm。
实施例6：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为9500mg，母液4中肌醇含量为0mg，蔗糖质量浓度为2.0％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重95.0mg、干重5.5mg、株高5.14cm、茎粗1.07mm、叶片数5.4、根条数4.8条、根长2.23cm。
实施例7：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为19000mg、硝酸铵(NH4NO3)为0mg，蔗糖质量浓度为2.0％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重66.0mg、干重4.0mg、株高4.53cm、茎粗0.98mm、叶片数6.2、根条数6.7条、根长3.3cm。
实施例8：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为19000mg、硝酸铵(NH4NO3)为4125mg，母液4中肌醇含量为0mg。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重129.0mg、干重6.7mg、株高5.77cm、茎粗1.14mm、叶片数7.2、根条数7.2条、根长3.31cm。
实施例9：
本实施例与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为19000mg、硝酸铵(NH4NO3)为8250mg，母液4中肌醇含量为2500mg，蔗糖质量浓度为1.5％。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：单株苗鲜重70.0mg、干重9.1mg、株高4.29cm、茎粗1.06mm、叶片数6.4、根条数6.4条、根长3.93cm。
实施例10：
本实施例(MS培养基)与实施例1的区别在于：每升母液1中硝酸钾(KNO3)含量为19000mg、硝酸铵(NH4NO3)为16500mg，母液4中肌醇含量为10000mg。
在此母液制备的培养基上，培养12d时，测定马铃薯脱毒基础苗各农艺性状指标：平均单株苗鲜重152.0mg、干重7.6mg、株高4.03cm、茎粗1.10mm、叶片数3.8、根条数5.4条、根长3.95cm。
经试验证明，本发明的培养基成本低于目前生产上广泛使用的MS(CK)19.5％。

Claims (9)

1.一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于，以1L培养基计算含有：169～171mg的KH2PO4、369～371mg的MgSO4·7H2O、439～441mg的CaCl2·2H2O，22.27～22.23mg的MnSO4·4H2O、0.827～0.833mg的KI、6.17～6.23mg的H3BO3、8.57～8.63mg的ZnSO4·7H2O、0.247～0.253mg的Na2MoO4·H2O、0.0247～0.0253mg的CuSO4·5H2O、0.0247～0.0253mg的CoCl2·6H2O、37.0～37.3mg的Na2·EDTA、26～28mg的FeSO4·7H2O、1.99～2.01mg甘氨酸、0.09～0.11mg的VB1、0.49～0.51mg的VB6，以及0.49～0.51mg的VB5或VPP；余量为水。
2.如权利要求1所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于：其中还含有47～53mg的肌醇。
3.如权利要求1或2所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基，其特征在于：其中还含有465～485mg的NH4NO、815～835mg的KNO3和24900～25100mg的C源蔗糖。
4.一种晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)培养基基本母液的配制
a、制备大量元素母液
取4650～4850mg的NH4NO；8150～8350mg的KNO3、1690～1710mg的KH2PO4、3690～3710mg的MgSO4·7H2O和4390～4410mg的CaCl2·2H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，按其排列顺序依次倒入1L容量瓶中定容，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
b、制备微量元素母液
取2227～2223mg的MnSO4·4H2O、82.7～83.3mg的KI、617～623mg的H3BO3、857～863mg的ZnSO4·7H2O、24.7～25.3mg的Na2MoO4·H2O、2.47～2.53mg的CuSO4·5H2O、和2.47～2.53mg的CoCl2·6H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
c、制备铁盐母液
取370～373mg的Na2·EDTA和260～280mg的FeSO4·7H2O，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
d、制备1号有机物母液
取199～201mg甘氨酸、9～11mg的VB1、49～51mg的VB6、和49～51mg的VB5或VPP，以上各类物质分别用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；
按每升培养基分别量取100mL大量元素母液、铁盐母液，以及10mL微量元素母液和1号有机物母液，放入烧杯中备用；
(2)按每L培养基共加5g称取卡拉胶，按每g卡拉胶加入200ml蒸馏水，加入煮沸至清澈透明，然后停止加热；
(3)将烧杯中的混合母液、C源加入已煮好的卡拉胶中，再加水使培养基C源质量浓度达到2.49～2.51％，卡拉胶质量浓度达到0.5％，加热80-121℃搅拌均匀；
(4)用氢氧化钠或盐酸将pH值调到5.8～6.0，即完成固体培养基的制备；
(5)装瓶后高压灭菌即可。
5.如权利要求4所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于：其中C源为蔗糖，加入量为24900～25100mg。
6.如权利要求4所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于：其中在大量元素母液中还加入4650～4850mg的NH4NO、8150～8350mg的KNO3。
7.如权利要求4所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于：其中在培养基基本母液的配制中还要制备2号有机物母液，具体取470～530mg的肌醇，用蒸馏水充分溶解，定容于1L容量瓶中，再装入贴好浓度标签的试剂瓶中4℃保存备用；并按每升培养基分别量取100mL大量元素母液、铁盐母液和2号有机物母液，以及10mL微量元素母液和1号有机物母液，放入烧杯中备用。
8.如权利要求4所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于：其中调节pH值是用1mol/L的氢氧化钠或盐酸，滴入上一步骤配制好的培养基中，滴后搅拌均匀，重复该过程直至pH值调到5.8～6.0，即完成固体培养基的制备。
9.如权利要求4所述的晚熟马铃薯脱毒基础苗培养基的制备方法，其特征在于：其中装瓶后高压灭菌是将配好的固体培养基，每瓶装30～40mL，封紧瓶口，放入高压灭菌筐内，121℃灭菌15～19.5分钟后取出即可。
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