CN102251015B - 环脂酸芽孢杆菌显色培养基及其使用方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于检测环脂酸芽孢杆菌的显色培养基及其使用方法和用途，该培养基包含A组分、B组分以及C组分，其中，所述A组分包含以重量份计的下述物质：酵母提取物2至4份，葡萄糖5至10份，CaCl₂.2H₂O0.25至0.4份，MgSO₄.7H₂O 0.3至0.5份，(NH₄)₂SO₄ 0.1至0.3份，KH₂PO₄ 2.5至3.5份，所述B组分包含以重量份计的下述物质：琼脂15至20份，β-半乳糖苷酶底物0.08至0.12份，所述C组分为1个重量份，该C组分包含以重量份计的下述物质：ZnSO₄.7H₂O 0.18×10^-3至0.2×10^-3份，CuSO₄.5H₂O0.16×10^-3至0.18×10^-3份，MnSO₄.H₂O 0.15×10^-3至0.17×10^-3份，COCl₂.6H₂O0.18×10^-3至0.2×10^-3份，H₃BO₃ 0.1×10^-3至0.12×10^-3份，NaMoO₄.2H₂O0.3×10^-3至0.5×10^-3份。本发明的显色培养基对环脂酸芽孢杆菌具有良好的生长支持能力，并且能够以高特异性检测出目标菌。

Description

环脂酸芽孢杆菌显色培养基及其使用方法和用途

技术领域

本发明涉及一种微生物显色培养基，特别涉及一种用于检测环脂酸芽孢杆菌的显色培养基，及其使用方法和用途。属于食品卫生微生物安全检验与监测领域，特别是果蔬汁中环脂酸芽孢杆菌的检测。

背景技术

环脂酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus spp.)是广泛存在于自然界中的一群耐热、嗜酸并可形成芽孢的杆菌，该类菌在酸性环境(如果蔬汁中)生长良好，其芽孢能经受酸性条件下的巴氏杀菌过程仍能存活。1971年，Barland和Brock在酸热环境中分离到酸热脂环芽孢杆菌(Bacillusacidocaldarius)，该菌细胞膜中具有独特的ω-环己烷脂肪酸结构，且这种菌只在酸热的环境中存在。1984年Cerny等从腐败的苹果汁中也分离出一株细胞膜中含ω-环己烷脂肪酸结构的芽孢杆菌，经研究确认该菌就是导致果汁腐败的微生物。1992年Wisotzkey等人根据16SrDNA基因序列分析结果，将它们从芽孢杆菌属(Bacillus)中划分出来，创立一个新属，命名为环脂酸芽孢杆菌属(Alicyclobacillus)，又名脂环酸芽孢杆菌(WisotzkeyJ.D.，Peter J.R.，George E.F.等，Compatative sequence analyses on the16SRNA(rDNA) of Bacillus acidocaldariu，Bacillus acidoterrestris，andBacillus cycloheptanicus and proposal for creation of a new genus，Alicyclobacillus gen.nov.Int J Syst Bacteriol，1992，42(2)：263～269.)。尽管该类菌对人类健康并不造成直接危害，但由其形成的芽孢萌发后在代谢过程中产生愈创木酚和卤酚，1×10^-12的含量就能造成果汁风味败坏并产生轻微沉淀，如何消除该菌引起的果汁腐败成为果蔬加工业关注的主要问题(Yvette Smit，Michelle Cameron，Pierre Venter等，Alicyclobacillusspoilage and isolation-A review.Food Microbiology，2011，28(3)：331～349.)。

目前对环脂酸芽孢杆菌的检测以传统方法为主，如日本果汁协会耐酸耐热菌统一检测方法、美国库克实验室耐热耐酸菌的检测方法、国际果汁生产者联盟推荐的方法等，这些检测方法差别不大，主要表现在每种方法采用的培养基不相同，涉及到的培养基包括K氏琼脂、YSG(yeast starchglucose)琼脂、BAT琼脂(Bacillus acidoterrestris agar)、BAM培养基(Bacillus Acidocaldarius medium)、OSA培养基(orange serum agar)、PDA(patato destrose agar)等。BAM培养基是分离出第一株环脂酸芽孢杆菌使用的培养基，主要用于分离柑橘环脂酸芽孢杆菌(A.hesperidum)、环脂酸芽孢杆菌基因种1(A.genomic species 1)、环脂酸芽孢杆菌基因种2(A.genomic species 2)和环庚基环脂酸芽孢杆菌(A.cycloheptanicus)，也用于生长特性测定实验；OSA(orange serum agar)用于分离桔汁中的微生物，也包括环脂酸芽孢杆菌；PDA培养基分离的环脂酸芽孢杆菌具有良好再生性，但必须将pH值调至3.5；YSG用于分离酸性饮料中的环脂酸芽孢杆菌，是目前日本NDM公司采用的培养基(岳田利等，脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)分离鉴定研究进展，2008，29卷，第2期，487-492)；K氏培养基对环酯酸芽孢杆菌属内多个种具有较高回收率，是美国库克实验室、雀巢公司采用的培养基，经AOAC测试，由于它能更快速地得到目标菌而且对菌株有良好的再生性，成为目前应用最为广泛的培养基，也是国际果汁生产者联合会(IFU)标准方法中推荐的培养基(Method on theDetection of Taint Producing Alicyclobacillus in Fruit Juice，InternationalFederation of Fruit Juice Producters，IFU，2007.)。Chang等还对K氏培养基进行了改良，通过优化，改良后的SK琼脂比K氏培养基具有更高灵敏度和低检测限(Chang，S.S，Kang，D.H..Development of novel Alicyclobacillusspp.isolation medium.J.Appl.Microbiol.，2005，99(5)：1051～1060.)。

然而，上述所有培养基的共同点表现在：实验结果判断主要依据环脂酸芽孢杆菌在pH＜4.0时生长良好，而在中性pH值时不生长，但是，实际上在除环脂酸芽孢杆菌以外其他某些芽孢杆菌也能在该pH值条件下生长，这容易导致检测过程中出现假阳性结果；此外，实验过程中如果污染其他耐酸菌如酵母菌等生长后会带来的不必要的后续鉴定工作，因此，目前检测环脂酸芽孢杆菌的培养基存在相同缺陷就是缺乏足够特异性，而且不同培养基在支持环脂酸芽孢杆菌属的各个种的生长方面表现出很大差异，如，应用最为广泛的K氏培养基对引起果汁腐败的主要菌酸土环脂酸芽孢杆菌(A.acidoterrestris)和酸热环脂酸芽孢杆菌(A.acidocaldarius)具有较好的生长支持，但对其他环脂酸芽孢杆菌生长支持则较差。

因此，本领域需要一种对环脂酸芽孢杆菌生长支持能力强且具有高特异性的检测培养基。

发明内容

针对目前用于检测环脂酸芽孢杆菌的培养基生长支持能力弱和特异性差的缺陷，本发明提供了一种对于环脂酸芽孢杆菌生长支持能力强且具有高特异性的培养基及其使用方法和用途。

一方面，本发明提供了一种用于检测环脂酸芽孢杆菌的显色培养基，所述培养基包含A组分、B组分以及C组分，其中，

所述A组分包含以重量份计的下述物质：

酵母提取物              2至4份，

葡萄糖                  5至10份，

CaCl₂.2H₂O              0.25至0.4份，

MgSO₄.7H₂O              0.3至0.5份，

(NH₄)₂SO₄               0.1至0.3份，

KH₂PO₄                  2.5至3.5份，

所述B组分包含以重量份计的下述物质：

琼脂                   15至20份，

β-半乳糖苷酶底物      0.08至0.12份，

所述C组分为1个重量份，该C组分包含以重量份计的下述物质：

ZnSO₄.7H₂O         0.18×10^-3至0.2×10^-3份，

CuSO₄.5H₂O         0.16×10^-3至0.18×10^-3份，

MnSO₄.H₂O           0.15×10^-3至0.17×10^-3份，

COCl₂.6H₂O          0.18×10^-3至0.2×10^-3份，

H₃BO₃               0.1×10^-3至0.12×10^-3份，

NaMoO₄.2H₂O         0.3×10^-3至0.5×10^-3份。

在一种优选的实施方式中，根据上文所述的培养基中包含A组分、B组分以及C组分，其中，

所述A组分包括以重量份计的下述物质：

酵母提取物         3份，

葡萄糖             8份，

CaCl₂.2H₂O         0.3份，

MgSO₄.7H₂O         0.4份，

(NH₄)₂SO₄          0.2份，

KH₂PO₄             3份，

所述B组分包括以重量份计的下述物质：

琼脂                 18份，

β-半乳糖苷酶底物    0.1份，

所述C组分包括以重量份计的下述物质：

ZnSO₄.7H₂O           0.19×10^-3份，

CuSO₄.5H₂O           0.17×10^-3份，

MnSO₄.H₂O            0.16×10^-3份，

COCl₂.6H₂O           0.19×10^-3份，

H₃BO₃                0.11×10^-3份，

NaMoO₄.2H₂O          0.4×10^-3份。

优选地，本发明使用的β-半乳糖苷酶底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷。

另一方面，本发明提供了使用本发明所述的培养基检测环脂酸芽孢杆菌的方法，所述方法包括下述步骤：

(1)制备显色平板：将本发明所述的培养基添加至水中，加热溶解，调节pH值至2.5至6，高压灭菌，冷却后制板；

(2)样品接种培养：将样品处理液或经增菌过的样品处理液涂布或划线接种于步骤(1)制得的显色平板上，45至50℃的温度下培养24至48小时；

(3)结果分析：若平板上出现浅绿色或绿色菌落，说明样品中存在环脂酸芽孢杆菌。

在一种优选的实施方式中，根据上文所述检测环脂酸芽孢杆菌的方法中，所述步骤(1)中制备显色平板的步骤包括下述操作过程：

将本发明所述的培养基的A组分添加至水中，加热溶解，调节pH值至2.5至6，然后高压灭菌；

将本发明所述的培养基的B组分添加至水中，加热溶解，然后高压灭菌；

按照如下配比配制本发明所述的培养基的C组分的母液：

ZnSO₄.7H₂O    0.18至0.2份，

CuSO₄.5H₂O    0.16至0.18份，

MnSO₄.H₂O     0.15至0.17份，

COCl₂.6H₂O    0.18至0.2份，

H₃BO₃         0.10至0.12份，

NaMoO₄.2H₂O   0.3至0.5份。

水            1000份，

过滤除菌获得C组分的母液，

将经高压灭菌的所述A组分和所述B组分进行混合，然后添加1个重量份的所述C组分母液，进一步混合，用于制板。

优选地，根据上文所述检测环脂酸芽孢杆菌的方法所述步骤(1)中，将所述培养基的pH值调节至4。

优选地，根据上文所述检测环脂酸芽孢杆菌的方法所述步骤(1)中按照如下配比配制本发明所述的培养基的C组分的母液：

ZnSO₄.7H₂O    0.19份，

CuSO₄.5H₂O    0.17份，

MnSO₄.H₂O     0.16份，

COCl₂.6H₂O    0.19份，

H₃BO₃         0.11份，

NaMoO₄.2H₂O   0.4份，

水            1000份，

过滤除菌获得C组分的母液。

优选地，根据上文所述检测环脂酸芽孢杆菌的方法所述步骤(2)中的培养温度为50℃和/或培养时间为48小时。

又一方面，本发明提供了本发明所述的培养基用于检测果蔬汁中环脂酸芽孢杆菌的用途。优选地，本发明所述的培养基用于检测苹果汁中的环脂酸芽孢杆菌。

本发明通过选择对环脂酸芽孢杆菌具有良好营养支持能力的组分，并根据环脂酸芽孢杆菌在生长代谢过程中会产生β-半乳糖苷酶的特性，选用β-半乳糖苷酶底物作为代谢指示剂，与支持环脂酸芽孢杆菌生长的多种营养物质组合使用开发出了对环脂酸芽孢杆菌具有良好支持能力并且具有高特异性的环脂酸芽孢杆菌显色培养基，使目标菌在分离的同时得到有效鉴别，该培养基操作简便，价格低廉，具有很好的应用推广前景。

具体实施方式

本发明所述用于检测环脂酸芽孢杆菌的显色培养基中，酵母提取物为环脂酸芽孢杆菌的生长提供丰富的维生素，葡萄糖提供了环脂酸芽孢杆菌生长所需的碳源，痕量矿物质可以进一步刺激环脂酸芽孢杆菌的生长。β-半乳糖苷酶底物为该培养基的特异性指示剂。已知的β-半乳糖苷酶底物有2-羟苯基-β-D-半乳糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷、6-氯-3-吲哚氧基-β-D-半乳糖苷以及5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷等。本发明使用的β-半乳糖苷酶底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-β-D-gal)，菌落色泽对比明显，通用性较强，在国内外未曾用于环脂酸芽孢杆菌的检测。另外，在检测过程中低pH一方面满足环脂酸芽孢杆菌对低pH的需求，同时也可抑制其他细菌的生长。

另外，本发明还使用了三种培养基(BAT、YSG以及K氏)作为对照以验证本发明显色培养基的效果，该三种培养基均为目前使用较广泛且对于环脂酸芽孢杆菌营养支持能力较强的培养基。

本发明使用了如下实验材料与设备：

所有环脂酸芽孢杆菌均来自美国模式培养物集存库(American typeculture collection，缩写：ATCC)。

对照用培养基：

BAT        北京奥博星生物技术有限公司

YSG        北京奥博星生物技术有限公司

K氏培养基  北京奥博星生物技术有限公司

上述BAT肉汤、YSG肉汤以及三种对照用培养基均根据制造商提供的说明书进行配制。

培养箱     日本三洋

下面结合实施例来描述本发明。

实施例

实施例1：本发明环脂酸芽孢杆菌显色培养基的配制

按下表1所列的A组分各亚组分物质用量数据来配制四份A组分(分别编为1-4号)，分别添加去离子水至终体积为500mL，加热溶解，用1NH₂SO₄或者1N NaOH调节pH值至表2中所述数值，然后121℃高压灭菌15分钟后取出备用。

表1：A组分用量

按下表2中的B组分各亚组分用量数据来配制四份B组分(分别编为1-4号)。分别添加去离子水至终体积为500mL，加热溶解，然后121℃高压灭菌15分钟后取出备用。

表2：B组分用量

按下表3中的数据来配制C组分母液，分别编为4个编号。分别添加1000mL去离子水，使用孔径0.22μm的过滤器过滤除菌后备用。

表3：C组分用量

待上述配制的各A组分和B组分冷却至50℃时，按照相同编号顺序充分混合，再按照相同编号无菌操作下加入上述各C组分母液1mL，混合均匀，倾注平板，每块15mL，凝固后即可使用，得到编号为1-4的显色培养基。

实施例2：本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基应用温度

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并编为1-4号，取每一编号的显色培养基各6块，分为3组(每组2块)。

2、接种培养

选择下表4中的环脂酸芽孢杆菌的各代表性菌株，使用BAT肉汤45℃培养48小时增菌后用接种环取一环划线接种于各显色培养基上，翻转平板，将第1组放置在45℃培养箱中，第2组放置在48℃培养箱中培养，第3组放置在50℃培养箱中培养，48小时后观察菌落形态。

表4：不同温度下环脂酸芽孢杆菌的生长状况和菌落特征

从上表4中的试验结果可以看出，本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基在45℃、48℃以及50℃的温度条件下生长均良好，其中在45℃生长最佳。

实施例3：本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基应用时间

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并编为1-4号，取每一编号的显色培养基各6块，分为3组(每组2块)。

2、接种培养

选择下表4中的环脂酸芽孢杆菌的各代表性菌株，使用BAT肉汤45℃培养48小时增菌后用接种环取一环划线接种于各显色培养基上，翻转平板，50℃在培养箱中培养，第1组培养24小时，第二组培养48小时，第三组培养36小时，之后观察菌落形态。

表5：不同培养时间下环脂酸芽孢杆菌的生长状况和菌落特征

从上表5中的试验结果可以看出，本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基在48和36小时后生长均良好，至少需要培养24小时。

实施例4：不同前增菌培养基增菌后环脂酸芽孢杆菌在本发明的显色培养基上的生长情况

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并编为1-4号，取每一编号的显色培养基各2块(计算时取平均值)。

2、菌株处理

将环脂酸芽孢杆菌菌株ATCC 43030和ATCC 49025分别接种于BAT肉汤和YSG肉汤，45℃培养48小时，然后取0.1mL培养液加入到10mL0.85％灭菌生理盐水制成10^-2菌悬液，然后进行10倍梯度稀释，稀释至10^-6浓度。

3、接种培养

取上述梯度稀释的10^-4至10^-6浓度菌液各0.1mL分别涂布于本发明的显色培养基平板上，翻转平板于45℃培养48小时。取菌落数范围在25-250cfu之间的平板，将菌落数转换成对数值后进行统计学分析(见下表5)。

表6：增菌后的环脂酸芽孢杆菌在各培养基上的菌落数的对数值(log cfu)

经统计学分析，无显著差异(p＜0.05)。说明在使用本发明的显色培养基检测前可以使用BAT或YSG肉汤进行增菌。应理解的是，本领域技术人员也可以根据具体需要选择其他增菌用培养基。

实施例5：本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基对环脂酸芽孢杆菌生长支持能力的评价

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并编号为1-4，取每一编号的显色培养基各2块(计算时取平均值)。

2、接种培养

将下表6的环脂酸芽孢杆菌不同种参考菌株接种于BAT肉汤，45℃培养48小时，然后取0.1mL培养液加入到10mL 0.85％灭菌生理盐水制成10^-2菌悬液，然后用接种环取一环划线接种于所制备的显色培养基和对照培养基BAT、K氏培养基以及YSG上四区划线，翻转平板于45℃培养48小时。

3、结果判断

划线区分别为4个区，4个区全部生长计“++++”，依次类推，如果仅在其中1区生长计“+”，同时在其中2个区生长计“++”，同时在其中3个区生长计“+++”，4个区中均不生长则计“-”。

表7：环脂酸芽孢杆菌的生长状况和菌落色泽

根据表7中的结果可以看出，本发明的显色培养基对于环脂酸芽孢杆菌的生长支持能力最强，BAT、YSG以及K氏培养基对环脂酸芽孢杆菌的生长支持能力依次较弱。

实施例6：本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基的特异性验证

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并编号为1-4，取每一编号的显色培养基各1块。

2、接种培养

将下表8的环脂酸芽孢杆菌菌株ATCC 43030和ATCC 49025接种于BAT肉汤，45℃培养48小时，然后取0.1mL培养液加入到10mL 0.85％灭菌生理盐水制成10^-2菌悬液，然后用接种环取一环划线接种于所制备的显色培养基和对照培养基BAT、K氏培养基以及YSG上四区划线，翻转平板于45℃培养48小时。将其他参考菌株接种于TSB肉汤，35℃培养48小时，余下操作步骤与环脂酸芽孢杆菌菌株相同。

3、结果判断

观察各实验菌株在试验培养基上的生长情况及菌落色泽，评价标准参考实施例5中所述。

表8：环脂酸芽孢杆菌及其他参考菌株生长特征

根据表8实验结果，环脂酸芽孢杆菌在本发明培养基上呈现特征性绿色菌落，而在BAT、K氏培养基以及YSG上均为无色菌落，枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、大肠杆菌、植物乳杆菌以及恶臭假单胞菌在本发明的培养基上均不生长，说明本发明的环脂酸芽孢杆菌培养基具有较好的特异性。

实施例7：滤膜法处理样品后在本发明所述的显色培养基生长效果

1.根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并按上文所述编号为1-4，取每一编号的显色培养基各1块。

2.接种

取实施例4中的参考菌株ATCC45025和ATCC43030 10^-2稀释度的菌悬液，用直径0.45μm的滤膜进行过滤，用20mL无菌去离子水冲洗滤膜后，无菌取出滤膜，将滤膜置于显色培养基上，避免气泡产生。45℃培养48小时。

3.结果分析

培养48小时后，滤膜上生长出绿色菌落，说明本发明所述的环脂酸芽孢杆菌显色培养基可以用滤膜法实现对环脂酸芽孢杆菌的检测，以进一步提高检测的敏感度。

实施例8：本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基用于果汁样品的检测

1、制备本发明的环脂酸芽孢杆菌显色培养基

根据上文实施例1所述制备环脂酸芽孢杆菌显色培养基，并按上文所述编号为1-4，取每一编号的显色培养基各1块。

2、样品检测

(1)样品的稀释

使用无菌工具和容器无菌采集来自不同厂家的6种样品(其中四种为浓缩苹果汁，两种为常规苹果汁饮料)，每一样品平行取6份，每份10g，用蒸馏水以100mL总体积稀释成10^-1稀释度(也可用YSG肉汤来稀释)。

(2)热处理

将上述样品稀释液置于80℃±1℃恒温水浴锅中，水面高度须超过样品高度，使样品稀释液温度5分钟内上升至79℃至80℃，加热10分钟。取出样品稀释液，自然冷却至40℃至45℃(也可用含冰的凉水进行冷却)。

(3)滤膜法计数

取上述热处理过的样品稀释液，用直径0.45μm的滤膜进行过滤，用20mL清洗液(如无菌去离子水)冲洗滤膜后，无菌取出滤膜，分别将滤膜置于BAT琼脂、YSG琼脂以及本发明的四组显色培养基上，避免气泡产生。与此同时，取菌株ATCC45025和ATCC43030在相同平板上划线作为阳性对照。

(4)直接涂布平板计数

取0.1mL上述各热处理样品，分别使用接种环划线接种于YSG琼脂、BAT琼脂和本发明的四组显色培养基上。与此同时，取菌株ATCC45025和ATCC43030在相同平板上划线作为阳性对照。

3、结果及分析

经标准方法(Method on the Detection of Taint ProducingAlicyclobacillus in Fruit Juice，国际果汁生产者联合会(InternationalFederation of Fruit Juice Producters)，IFU，2007)验证，显色培养基上生长的浅绿色或绿色菌落为环脂酸芽孢杆菌，且检出率优于YSG培养基。

表9：环脂酸芽孢杆菌显色培养基用于苹果汁样品检测

注：“+”为有菌生长；“-”为无菌生长。

对于本领域技术人员来说，应理解的是，虽然该实施例中仅使用了苹果汁进行了验证试验，本发明的显色培养基还可以用于其他果蔬汁的检测。

尽管已经对本发明的具体实施方案进行了描述，但是本领域技术人员应认识到，在不偏离本发明的范围或精神的前提下可以对本发明进行多种改变与修饰。因而，本发明意欲涵盖落在权利要求书及其同等物范围内的所有这些改变与修饰。

Claims (9)

1.一种用于检测环脂酸芽孢杆菌的显色培养基，其特征在于，所述培养基包含A组分、B组分以及C组分，其中，

所述A组分包含以重量份计的下述物质：

酵母提取物  2至4份，

葡萄糖      5至10份，

CaCl₂.2H₂O  0.25至0.4份，

MgSO₄.7H₂O  0.3至0.5份，

(NH₄)₂SO₄   0.1至0.3份，

KH₂PO₄      2.5至3.5份，

所述B组分包含以重量份计的下述物质：

琼脂              15至20份，

β-半乳糖苷酶底物 0.08至0.12份，

所述C组分为1个重量份，该C组分包含以重量份计的下述物质：

ZnSO₄.7H₂O    0.18×10^-3至0.2×10^-3份，

CuSO₄.5H₂O    0.16×10^-3至0.18×10^-3份，

MnSO₄.H₂O     0.15×10^-3至0.17×10^-3份，

COCl₂.6H₂O    0.18×10^-3至0.2×10^-3份，

H₃BO₃         0.1×10^-3至0.12×10^-3份，

NaMoO₄.2H₂O   0.3×10^-3至0.5×10^-3份。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包含A组分、B组分以及C组分，其中，

所述A组分包括以重量份计的下述物质：

酵母提取物   3份，

葡萄糖       8份，

CaCl₂.2H₂O   0.3份，

MgSO₄.7H₂O   0.4份，

(NH₄)₂SO₄    0.2份，

KH₂PO₄       3份，

其所述B组分包括以重量份计的下述物质：

琼脂              18份，

β-半乳糖苷酶底物 0.1份，

所述C组分为1个重量份，该C组分包含以重量份计的下述物质：

ZnSO₄.7H₂O  0.19×10^-3份，

CuSO₄.5H₂O  0.17×10^-3份，

MnSO₄.H₂O   0.16×10^-3份，

COCl₂.6H₂O  0.19×10^-3份，

H₃BO₃       0.11×10^-3份，

NaMoO₄.2H₂O 0.4×10^-3份。

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，其中所述β-半乳糖苷酶底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷。

4.一种使用权利要求1至3任一项所述的培养基检测环脂酸芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

（1）制备显色平板；

（2）样品接种培养：将样品处理液或经增菌过的样品处理液涂布或划线接种于步骤（1）制得的显色平板上，45至50℃的温度下培养24至48小时；

（3）结果分析：若平板上出现浅绿色或绿色菌落，说明样品中存在环脂酸芽孢杆菌；

其中，所述步骤（1）中制备显色平板的步骤包括下述操作过程：

将权利要求1至3任一项所述培养基的A组分添加至水中，加热溶解，调节pH值至2.5至6，然后高压灭菌；

将权利要求1至3任一项所述培养基的B组分添加至水中，加热溶解，然后高压灭菌；

按照如下配比配制权利要求1至3任一项所述培养基的C组分的母液：

ZnSO₄.7H₂O   0.18至0.2份，

CuSO₄.5H₂O   0.16至0.18份，

MnSO₄.H₂O    0.15至0.17份，

COCl₂.6H₂O   0.18至0.2份，

H₃BO₃        0.1至0.12份，

NaMoO₄.2H₂O  0.3至0.5份，

水           1000份，

过滤除菌获得C组分的母液，

将经高压灭菌的所述A组分和所述B组分进行混合，然后添加1个重量份的所述C组分母液，进一步混合，用于制板。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中将所述培养基的pH值调节至4。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中制备显色平板的步骤包括按照如下配比配制权利要求1至3任一项所述培养基的C组分的母液：

ZnSO₄.7H₂O  0.19份，

CuSO₄.5H₂O  0.17份，

MnSO₄.H₂O   0.16份，

COCl₂.6H₂O  0.19份，

H₃BO₃       0.11份，

NaMoO₄.2H₂O 0.4份，

水           1000份，

过滤除菌获得C组分的母液。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的培养温度为50℃和/或培养时间为48小时。

8.权利要求1至3任一项所述的培养基用于检测果蔬汁中环脂酸芽孢杆菌的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述果蔬汁为苹果汁。