CN102250991A

CN102250991A - 一种通过添加谷氨酰胺提高林可霉素产量的生产方法

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Publication number: CN102250991A
Application number: CN2011101847505A
Authority: CN
Inventors: 叶蕊芳; 乔现婷; 张宏周; 毛全贵; 吕和平; 刘守强; 王美珠
Original assignee: TIANFANG PHARMACEUTICAL CO Ltd HENAN; East China University of Science and Technology
Current assignee: TIANFANG PHARMACEUTICAL CO Ltd HENAN; East China University of Science and Technology
Priority date: 2011-07-04
Filing date: 2011-07-04
Publication date: 2011-11-23

Abstract

本发明涉及一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，其特征在于，在发酵过程中加入谷氨酰胺，谷氨酰胺加入量为0.04～0.06％，是指谷氨酰胺占培养基的重量百分比；谷氨酰胺加入时间为72～96h。本发明的优点：通过在发酵过程中添加并不作为林可霉素合成前体物质的谷氨酰胺可明显提高林可霉素的产量。

Description

一种通过添加谷氨酰胺提高林可霉素产量的生产方法

【技术领域】

本发明涉及生物技术技术领域，具体地说，是一种在发酵过程中通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法。

【背景技术】

林可霉素(Lincomycin，简称LCM)又称洁霉素，属于林可胺类抗生素，是1962年从内布拉斯加州林肯市附近土壤中分离得到一种放线菌，并从该菌的培养液中分离出林可酰胺类抗菌剂。林可霉素对革兰氏阳性需氧菌的抗性较强，对已存在的抗生素不存在交叉感染，而且毒性较低，因此，在临床上被用作治疗革兰氏阳性菌引起的疾病的重要药物。

林可霉素的主要成分为林可霉素A、林可霉素B、林可霉素C、林可霉素D和林可霉素S，一般所说的林可霉素指的是其A组分，其化学名称为6-[1-甲基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷甲酰胺基]-1-硫代-6，8-二脱氧-D-赤式-a-D-半乳辛吡喃糖苷。其分子结构是由一分子的丙基脯氨酸(PPL)和一分子的甲硫基林可糖胺(MTL)通过一个肽键连接起来的。其分子结构如图1所示，其合成途径如图2所示。

国外研究发现，在发酵过程中添加林可霉素的关键前体，例如丙基脯氨酸，可以明显提高林可霉素A组分的产量，并且减少了林可霉素B组分的产量。同时，国内研究发现，在发酵过程中添加生长代谢或生产代谢过程中的关键物质，例如金属离子、氨基酸、生物素等，可明显提高林可霉素的产量。但对于在发酵过程中添加的谷氨酰胺，能否提高林可霉素的产量却未有报道。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，其特征在于，在发酵过程中加入谷氨酰胺；谷氨酰胺加入量为0.04～0.06％，是指谷氨酰胺占培养基的重量百分比，加入时间为72～96h，发酵周期为168h，从发酵开始时算起。

一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，配制发酵培养基，按一定的接种量向发酵瓶中接入种子液，放在摇床上进行发酵，共需发酵168h，在发酵过程中(即0～168h)添加一定浓度的谷氨酰胺，考察其对林可霉素产量的影响。发酵结束后，离心得到上清液，用杯碟法进行林可霉素产量的测定。

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

使用本发明所提供的方法，通过在发酵过程中添加并不作为林可霉素合成前体物质的谷氨酰胺可明显提高林可霉素的产量。

【附图说明】

图1是林可霉素的分子结构；

图2是林可霉素的合成方法示意图。

【具体实施方式】

以下提供本发明一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法的具体实施方式。

请参见附图1和2，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆：实验手册》(New York：Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件或生产厂商推荐的条件下进行。

在本发明的下述实施例中，使用的林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)已于2008年04月25日提交位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏号为CCTCC M 208064。

除特别说明外，以下实施例中所使用的％，‰均为重量比。

在本发明的实施例中，发酵培养基的配方为：0.8％(NH₄)₂SO₄，0.8％NaNO₃，0.5％NaCl，0.02％K₂HPO₄，3％黄豆饼粉，0.2％玉米浆，0.8％CaCO₃，5％葡萄糖，pH 7.0。

在本发明的实施例中，林可霉素的效价采用杯碟法进行检测，中国药典2010版(二部)。

实施例1～5

谷氨酰胺的添加量对林可霉素生物合成的影响

在配制林可霉素发酵培养基时，向培养基中添加重量比为0.005％、0.02％、0.04％、0.06％、0.1％的谷氨酰胺，并用不添加谷氨酰胺的培养基作为对照，即对照例1，接入林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)，发酵168小时后，取样测定林可霉素的效价，结果如表1所示。

表1、谷氨酰胺的添加量对林可霉素生物合成的影响

由表1的结果可见，向发酵培养基中添加谷氨酰胺可明显提高林可霉素的产量，优选的添加量为0.04～0.06％。

实施例6～9

谷氨酰胺的添加时间对林可霉素生物合成的影响

配制林可霉素发酵培养基，接入林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)，进行发酵培养，分别在72、96、120、144小时向发酵培养基中添加重量比为0.04％的谷氨酰胺，同时以不添加谷氨酰胺的培养基作为对照，发酵168小时后，取样测定林可霉素的效价，结果如表2所示。

表2、谷氨酰胺的添加时间对林可霉素生物合成的影响

由表2的结果可见，在发酵0小时向培养基中添加谷氨酰胺可明显提高林可霉素的产量，优选的添加时间为72～96小时。

综上所述，在林可链霉菌的发酵过程中添加谷氨酰胺，可明显提高林可霉素的产量，产量提高了14％；其最适添加量、最适添加时间分别为72～96h添加0.04～0.06％的谷氨酰胺。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。

Claims

1.一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，其特征在于，在发酵过程中加入谷氨酰胺。

2.如权利要求1所述的一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，其特征在于，谷氨酰胺加入量为0.04～0.06％，是指谷氨酰胺占培养基的重量百分比。

3.如权利要求1所述的一种通过添加谷氨酰胺来提高林可霉素产量的生产方法，其特征在于，谷氨酰胺加入时间为72～96h。