CN102220107A - 一种测序仪毛细管清洗试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于测序仪上毛细管清洗和修复的试剂及其使用方法，本试剂包括：甲基纤维素、聚乙烯醇、Tris-硼酸-EDTA缓冲液（即TBE缓冲液）、氢氧化钠等化学组分。使用本发明所述试剂，可以对使用多次后电泳分离效果降低、出现测序杂峰信号的毛细管进行清洗，消除残留的荧光信号，并修复毛细管内部涂层，使其恢复良好的电泳分离效果，解决基因测序过程中杂峰信号过高的问题，并可使废旧的毛细管重新利用，从而降低基因测序的成本。
Description
技术领域
本发明属于化学领域，涉及一种用于测序仪毛细管清洗和修复的化学试剂。
背景技术
毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）是一种以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型分离技术。相对于其他分离技术，毛细管电泳具有分离效率高、分析时间短、样品消耗低等优点，近年来得到迅速发展，广泛应用于测序仪（遗传分析仪）上。
毛细管的缺点在于价格昂贵。此外，毛细管使用次数增加，分离效果将下降。以DNA测序为例，新、旧毛细管最显著的差别就是测序峰图中杂峰信号的有无和高低。一般来说，毛细管使用时间越长，内部涂层破坏越严重，电泳分离的效果就越差，测序峰图中的杂峰信号就越强。这是两方面原因产生的，首先，每次测序都有的荧光信号残留在毛细管内，日积月累，将产生过高的杂峰信号；其次，毛细管内部有涂层，以抑制电渗作用。在电泳操作时，毛细管置于高压下，大量产热，管内充满的高分子凝胶介质，在摄氏60℃左右的弱碱性条件下可对毛细管内部涂层产生损伤。随着使用次数的增加，内部涂层将逐渐被破坏，电泳分离的效果日益下降。
通常，在毛细管使用数百次之后，若发现测序效果变差，需要更换新的毛细管，而旧的毛细管将直接被丢弃，由于毛细管的价格昂贵，从而造成基因测序成本过高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，针对毛细管使用次数过多，分离效果下降，杂峰信号偏高，以及旧毛细管直接丢弃，造成浪费和测序成本过高等现象，提供一种试剂，通过对毛细管进行清洗，消除残余荧光信号，修复内部涂层，使其恢复电泳能力，从而提高测序效果，降低DNA测序成本。
为了实现以上目的，本发明通过下述技术方案予以实现：
本发明提供了一种用于测序仪毛细管清洗和修复的试剂及使用方法，清除毛细管内部残余荧光信号，修复毛细管的内部涂层，使其电泳效果提高。本发明试剂配方及使用操作简单，成本低廉，与传统的直接丢弃废旧毛细管相比，可以降低DNA测序成本。
本发明所述试剂包含如下成分：
甲基纤维素；
聚乙烯醇；
Tris-硼酸-EDTA缓冲液（即TBE缓冲液，具体配制方法参考《分子克隆实验指南》第三版）；
氢氧化钠（NaOH）。
本发明所述试剂的配制方法如下：
将300g甲基纤维素，100g聚乙烯醇（聚合度500～2000，醇解度75-99%），加入800ml的1×TBE缓冲液中，75℃加热搅拌溶解，冷却至室温后以NaOH溶液调节pH值至8.0，以超纯水定容至1L。
本发明所述试剂对毛细管清洗和修复的使用方法包括如下步骤：
1）将毛细管预处理；
2）将毛细管以本发明所述试剂进行清洗和修复。
附图说明
图1是毛细管使用清洗试剂前后的测序效果对比。其中上面部分（1.abi）为使用清洗试剂前的测序效果图，下面部分（2.abi）为使用清洗试剂后的测序效果图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。需要指出的是，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常参照常规条件，例如《分子克隆实验指南》（第三版，科学出版社2002 [美] J.萨姆布鲁克，D.W 拉塞尔著，黄培堂等译）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非特别说明，本发明使用的各种试剂均可以商购，也可以采用本领域常用的方法制备。
实施例一：毛细管清洗试剂的配制。
将300g甲基纤维素，100g聚乙烯醇（聚合度500～2000，醇解度75-99%），加入800ml的1×TBE缓冲液中，75℃加热搅拌溶解，冷却至室温后以NaOH溶液调节pH值至8.0，以超纯水定容至1L。
实施例二：毛细管的预处理。
陈旧的毛细管测序效果如图1上面部分所示，出现杂峰，干扰测序数据读取。
此时，用NaOH溶液（1mol/L）将电泳效果不好的毛细管完全浸没，2小时后将毛细管用擦镜纸擦干，接着分别以水和甲醇浸泡毛细管30分钟，每次保证毛细管被完全浸没，并用擦镜纸擦干，最后以真空干燥仪干燥。
实施例三：毛细管清洗和修复。
将干燥后的待处理的毛细管装回测序仪，在测序仪的胶瓶中注入实施例一所制备的毛细管清洗试剂，通过测序仪的灌胶装置将清洗试剂灌入毛细管中，维持30分钟，然后将清洗试剂排出，将毛细管取下放入真空干燥仪干燥。
将干燥后的毛细管在只有电泳缓冲液的状况下进行电泳，直到电流和检测基线稳定，即完成毛细管的清洗和修复。
修复后的毛细管测序效果如图1下面部分所示，基线平整，背景清晰，基本没有杂峰。
Claims (3)
1.一种用于测序仪毛细管清洗和修复的试剂，其特征在于，它至少由如下组分组成：
1）甲基纤维素；
2）聚乙烯醇；
3）Tris-硼酸-EDTA缓冲液（即TBE缓冲液）；
4）氢氧化钠（NaOH）。
2.根据权利要求1所述试剂，其中，各组分具体用量和试剂的配制方法为：
将300g甲基纤维素，100g聚乙烯醇（聚合度500～2000，醇解度75-99%），加入800ml的1×TBE缓冲液中，75℃加热搅拌溶解，冷却至室温后以NaOH溶液调节pH值至8.0，以超纯水定容至1L。
3.一种基于权利要求1所述试剂，对测序仪毛细管进行清洗和修复的方法，其特征在于，它至少由如下两个步骤组成：
1）将毛细管预处理；
2）将毛细管以权利要求1所述试剂进行清洗和修复。
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