CN102219745B - 2-芳基取代苯并咪唑类衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类具有多靶点蛋白激酶抑制活性的苯并咪唑类化合物及其制备方法与应用。该化合物的结构式如式I所示。本发明提供的化合物经过肿瘤细胞系测试(肝癌细胞)以及多种蛋白激酶测试(VEGFR-2、EGFR、HER-2、PDGFR-α、PDGFR-β等)，证明式I所示化合物是一种潜在的以多种蛋白激酶为靶点的抗肿瘤药物。本发明提供的化合物原料易得，制备方法简单，实验证明其有良好的抗癌效果，在抗肿瘤药物设计研发领域有着良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及2-芳基取代苯并咪唑类衍生物及其制备方法与应用。
背景技术
2008年数据表明，肝癌已成为世界上第三大致死性疾病(占总数9.2％)，在所有癌症中排第五位(男性)和第七位(女性)。肝癌因其高致死率和病人存活时间短而备受关注。通过多年的研究，科学家发现肿瘤属于多基因疾病，信号通路系统错综复杂，相互关联，高选择性的单靶点药物容易因为肿瘤信号通路的相互补偿作用而产生耐药性，很难达到预期效果且毒性大。多靶点药物已成为近年抗癌药物的研究热点，因其能同时作用于信号通路的多个靶点，使各靶点产生协同作用，而使药效达到最佳状态。肿瘤组织周围有充足的血管供应氧和营养物质，从而使其能迅速增生和转移。现有一种方式通过抑制血管增生而达到治疗肿瘤的目的，因此控制血管增生的受体酪氨酸激酶(RTKs)备受关注，现已有抑制RTKs的多靶点药物上市。
已有的报道证实，苯并咪唑类化合物具有较广泛的生物活性，如抗病毒、抗高血压、抗菌、抗氧化、抗炎和抗癌等活性。Astemizole、Micardis、Omepraxole等上市药都含苯并咪唑结构。2-芳基苯并咪唑类衍生物属于苯并咪唑类化合物的一种修饰，其在抗肿瘤方面的研究较少，且没有文献报道其作为蛋白激酶抑制剂的应用。
发明内容
本发明的目的是提供一类具有多靶点蛋白激酶抑制活性的苯并咪唑类化合物及其制备方法。
本发明所提供的苯并咪唑类化合物，其结构式如式I所示：
(式I)
式I中，Z为CH2或CH2CH2；R2为Cl或选自下述基团中的任意一种：
R1为式III或式II所示基团，式III基团中，R7为H或CH3；
(式II) (式III)
式II基团中，X1、X2、X3及R2、R3、R4、R5、R6所代表的基团分为下述四种情况：
A)当X1、X2、X3均为C时，R2、R3、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
B)当X1为N，X2，X3均为C时，R2取代基不存在，R3、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
C)当X2为N时，X1，X3均为C时，R3取代基不存在，R2、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
D)当X3为N时，X1，X2均为C时，R4取代基不存在，R2、R3、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2。
制备式I所示化合物(R2＝Cl)的方法，包括下述步骤：
1)以无水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂，在焦亚硫酸钠的催化下，使式IV所示化合物与式V或式VI所示化合物进行反应，得到式VII所示化合物；
(式IV) (式V) (式VI)
(式VII)
其中，式V中的X1、X2、X3及R2、R3、R4、R5、R6与式II相同，式VI中R7与式III相同，式VII中R1与式I相同；
2)以乙醇为溶剂，使式VII所示化合物与无水二氯亚锡进行硝基还原反应，得到式VIII所示化合物；
3)将式VIII所示化合物在氯乙酰氯或3-氯丙酰氯溶液中进行回流反应，得到IX所示化合物，即式I中R2为Cl的式I所示化合物；
(式VIII) (式IX)
其中，式IX中的Z与式I相同。
制备式I所示化合物(R2为除氯外的其它基团)的方法，包括下述步骤：
4)以无水四氢呋喃(THF)为溶剂，碘化钾为引发剂，使式IX所示化合物与下述二级胺中任何一种反应：N-乙基哌嗪、N-甲基哌嗪、哌啶、吗啡啉和吡咯烷，得到式I所示化合物。
其中，步骤1)中式IV与式V(或式VI所示化合物)与焦亚硫酸钠的摩尔比依次为(1∶1.2∶2.5)，所述反应的反应温度可为90-120℃，反应时间可为15-18小时。
步骤2)中，式VII所示化合物与无水二氯亚锡的摩尔比为(1∶2.5)。所述反应的反应温度可为70-80℃，反应时间可为3-4小时。
步骤3)中，所述回流反应的温度可为120-125℃，反应时间可为3-4小时。
步骤4)中，式IX所示化合物、KI与二级胺的摩尔比依次为(1∶1∶15)，所述反应的反应温度可为40-45℃，反应时间可为3-4小时。
本发明制备的化合物经过高分辨质谱，核磁共振，熔点等测试，证明所制备的化合物正确无误，为通式I所示化合物。
式I所示化合物药学上可接受的盐、酯或其溶剂合物也属于本发明的保护范围。
本发明的再一个目的是提供式I所示化合物的应用。
本发明所提供的式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物可用于制备VEGFR-1、VEGFR-2、SRC、EGFR、HER-2、PI3K-α、Abl-1、IGF1R、PDGFR-α、PDGFR-β、Aurora A、C-Kit等蛋白激酶抑制剂。
式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物也可用于制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂。
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为肝癌细胞；所述肝癌细胞具体可为人肝癌细胞HepG-2。
本发明式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物也可用于制备预防和/或治疗的肿瘤药物。
所述肿瘤为癌；所述癌为肝癌。
以式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物为有效成分制备的预防和/或治疗肿瘤的药物，也属于本发明的保护范围。
所述预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
用式I化合物或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明提供的化合物经过肿瘤细胞系测试(肝癌细胞)以及多种蛋白激酶测试(VEGFR-2、EGFR、HER-2、PDGFR-α、PDGFR-β等)，证明式I所示化合物是一种潜在的以多种蛋白激酶为靶点的抗肿瘤药物。本发明提供的化合物原料易得，制备方法简单，实验证明其有良好的抗癌效果，在抗肿瘤药物设计研发领域有着良好的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均从商业途径获得。
实施例1、制备式VIII所示中间体2-芳基-5-氨基-1H苯并咪唑
在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(50mL)中加入4-硝基邻苯二胺(4g，26.14mmol)和芳基甲醛(31.37mmol)，在室温下搅拌5分钟后，再加入焦亚硫酸钠(12.4g，65.36mmol)。在120℃下搅拌15小时，反应混合物冷却后用减压蒸馏的方式蒸掉DMF。用乙醇(100mL)溶解反应物，再加入无水二氯亚锡(13.47g，71mmol)，在70℃条件下回流3小时。反应混合物冷却后用饱和氢氧化钠溶液调pH值为碱性，至有大量白色固体析出。过滤掉固体，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后用柱层析色谱分离，得到所需化合物。
1)2-(4-甲基苯基)-5-氨基-苯并咪唑(式VIII中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R4＝CH3，其他取代基均为H)
化合物结构确证数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.95(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J＝8.0Hz，2H)，7.25(d，J＝8.4Hz，1H)，6.67(d，J＝1.2Hz，1H)，6.52(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，2.36(s，3H)。
2)2-(3，5-二甲氧基苯基)-5-氨基-苯并咪唑(式VIII中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R3＝R5＝OCH3，其他取代基均为H)
化合物结构确证数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.48(d，J＝8.4Hz，1H)，7.14(s，2H)，6.84(s，1H)，6.69(d，J＝8.4Hz，1H)，6.52(s，1H)，3.83(s，6H)。
3)2-(4-溴苯基)-5-氨基-苯并咪唑(式VIII中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R4＝Br，其他取代基均为H)
化合物结构确证数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(d，J＝8.4Hz，2H)，7.55(d，J＝8.4Hz，2H)，7.44(t，J＝8.2Hz，2H)，6.82(d，J＝9.6Hz，1H)，6.68(d，J＝8.4Hz，1H)。
4)2-(2-氟苯基)-5-氨基-苯并咪唑(式VIII中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R2＝F，其他取代基均为H)
化合物结构确证数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.44(td，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，7.43-7.34(m，1H)，7.33-7.24(m，1H)，7.19(ddd，J＝12.4，8.3，1.0Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.71(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)。
5)2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-氨基-苯并咪唑(式VIII中，R1为式III所示基团，其中R7＝CH3)
化合物结构确证数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41(d，J＝8.4Hz，1H)，6.80(s，1H)，6.78(t，J＝8.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，6.58(dd，J＝4.0，1.6Hz，1H)，6.19(dd，J＝3.8，2.6Hz，1H)，4.11(s，3H)。
实施例2、制备2-氯-N-苯并咪唑基乙酰胺
将2-芳基-5-氨基-1H苯并咪唑(200mg)加入到氯乙酰氯(5mL)中，120℃回流4小时。反应液冷却后倒入水中，用饱和氢氧化钠溶液调pH值为8～9。用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后用柱层析色谱分离，得到所需化合物。
1)2-氯-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺(式IX中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R4＝CH3，其他取代基均为H；Z为CH2)
产率84％；熔点180-184℃；高分辨质谱(ESI)计算值C16H15ClN3O [M+H]+为300.0904，实验值为300.0903；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.79(s，1H)，8.30(s，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，2H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.51(d，J＝8.4Hz，2H)，4.34(s，2H)，2.44(s，3H)。
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ165.29，149.07，144.03，136.92，132.40，130.41，128.50，128.06，120.71，118.55，114.50，103.67，43.79，21.45。
2)2-氯-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺(式IX中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R2＝F，其他取代基均为H；Z为CH2)
产率62％；熔点182-186℃；高分辨质谱(ESI)计算值C15H12ClFN3O[M+H]+为304.0653，实验值为304.0650；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.54(s，1H)，10.37(s，1H)，8.22(t，J＝7.2Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.72-7.48(m，2H)，7.48-7.36(m，2H)，7.30(s，1H)，4.29(s，2H)。
3)2-氯-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺(式IX中，R1为式III所示基团，其中R7＝CH3，Z为CH2)
产率64％；熔点102-106℃；高分辨质谱(ESI)计算值C14H14ClN4O[M+H]+为289.0856，实验值为289.0855；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.40(s，1H)，8.04(d，J＝1.2Hz，1H)，7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，7.26(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.03-7.02(m，1H)，6.88(dd，J＝3.8，1.8Hz，1H)，6.17(dd，J＝3.8，2.6Hz，1H)，4.29(s，2H)，4.08(s，3H)。
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ164.55，146.61，133.74，127.75，122.46，115.04，112.14，108.27，43.92，36.66。
实施例3、3-氯-N-苯并咪唑基丙酰胺
将2-芳基-5-氨基-1H苯并咪唑(200mg)加入到3-氯丙酰氯(5mL)中，120℃回流4小时。反应液冷却后倒入水中，用饱和氢氧化钠溶液调pH值为8～9。用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后用柱层析色谱分离，得到所需化合物。
1)3-氯-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺(式IX中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R4＝CH3，其他取代基均为H；Z为CH2CH2)
产率79％；熔点248-252℃；高分辨质谱(ESI)计算值C17H17ClN3O[M+H]+为314.1060，实验值为314.1051；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.38(d，J＝1.2Hz，1H)，8.17(d，J＝8.4Hz，2H)，7.77(d，J＝8.8Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.54(d，J＝8.0Hz，2H)，3.93(t，J＝6.2Hz，2H)，2.91(t，J＝6.2Hz，2H)，2.45(s，3H)。
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ168.63，148.80，143.97，137.43，132.38，130.39，128.05，120.69，118.41，114.35，103.31，40.95，21.44。
2)3-氯-N-(2-(4-溴苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺(式IX中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R4＝Br，其他取代基均为H；Z为CH2CH2)
产率51％；高分辨质谱(ESI)计算值C16H14 79BrClN3O[M+H]+为378.0009，C16H14 81BrClN3O[M+H]+为379.9988，实验值为378.0007，379.9976；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(s，1H)，8.35(d，J＝1.2Hz，1H)，8.21(d，J＝8.8Hz，2H)，7.94(d，J＝8.8Hz，2H)，7.75(d，J＝9.2Hz，1H)，7.58(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，3.93(t，J＝6.2Hz，2H)，2.90(t，J＝6.2Hz，2H)。
3)3-氯-N-(2-(3，5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺(式IX中，R1为式II所示基团，其中X1、X2、X3均为C，R3＝R5＝OCH3，其他取代基均为H，Z为CH2CH2)
产率46％；熔点190-194℃；高分辨质谱(ESI)计算值C18H19ClN3O3[M+H]+为360.1115，实验值为360.1106；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.43(s，1H)，8.31(s，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，1H)，7.51(d，J＝8.8Hz，1H)，7.46(d，J＝2.0Hz，2H)，6.77(s，1H)，3.92(t，J＝6.2Hz，2H)，3.88(s，6H)，2.89(t，J＝6.2Hz，2H)。
4)3-氯-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺(式IX中，R1为式III所示基团，其中R7＝CH3，Z为CH2CH2)
产率59％；熔点102-106℃；高分辨质谱(ESI)计算值C15H16ClN4O[M+H]+为303.1013，实验值为303.1011。
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.10(s，1H)，8.04(d，J＝1.2Hz，1H)，7.47(s，J＝8.4Hz，1H)，7.24(dd，J＝8.6Hz，J＝1.2Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.84(dd，J＝3.6Hz，J＝1.6Hz，1H)，6.16(t，J＝3.2Hz，1H)，3.92(t，J＝6.2Hz，2H)，2.85(t，J＝6.2Hz，2H)。
13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ167.78，146.72，134.10，127.36，122.95，114.66，111.58，108.11，41.20，36.68。
实施例4、
在四氢呋喃(THF)中加入2-氯-N-苯并咪唑基乙酰胺(0.334mmol)，碘化钾(50mg，0.334mmol)和亚胺(5.015mmol)，40℃回流4小时。反应混合物冷却后，蒸掉溶剂，水洗，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后用柱层析色谱分离，得到所需化合物。
1)2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率56％；熔点233-237℃；高分辨质谱(ESI)计算值C22H28N5O[M+H]+为378.2294，实验值为378.2292；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.35(s，1H)，8.36(s，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，2H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，6.98(d，J＝7.6Hz，1H)，3.19(s，2H)，2.82-2.45(m，10H)，2.39(s，3H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.35，152.49，139.98，132.34，129.33，127.08，126.42，115.01，61.68，53.04，52.52，51.97，21.18，11.51。
2)2-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率33％；熔点234-237℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H26N5O[M+H]+为364.2137，实验值为364.2129；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.34(s，1H)，8.35(s，1H)，7.99(d，J＝7.6Hz，2H)，7.61(d，J＝7.6Hz，1H)，7.22(d，J＝7.6Hz，2H)，6.99(s，1H)，3.18(s，2H)，2.80-2.60(m，4H)，2.60-2.40(m，4H)，2.40(s，3H)，2.36(s，3H)；
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.40，152.60，139.94，132.25，129.31，127.13，126.46，115.01，61.66，54.97，53.14，45.65，29.44，21.17。
3)2-(N-吗啡啉)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率61％；熔点273-277℃；高分辨质谱(ESI)计算值C20H23N4O2[M+H]+为351.1821，实验值为351.1819；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.25(s，1H)，8.30(s，1H)，7.97(d，J＝8.0Hz，2H)，7.61(d，J＝8.4Hz，1H)，7.26(d，J＝6.4Hz，2H)，7.05(d，J＝7.6Hz，1H)，3.80(t，J＝4.6Hz，4H)，3.19(s，2H)，2.65(t，J＝4.6Hz，4H)，2.40(s，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ140.26，132.53，129.45，126.31，66.83，62.28，53.63，21.19。
4)2-(N-哌啶)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率27％；熔点245-249℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H25N4O[M+H]+为349.2028，实验值为349.2023；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.57(s，1H)，8.33(s，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，2H)，7.62(d，J＝8.4Hz，1H)，7.26(d，J＝4.8Hz，2H)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H)，3.17(s，2H)，2.61(m，4H)，2.40(s，3H)，1.68-1.66(m，4H)，1.51(s，2H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.62，152.28，139.99，132.58，129.34，126.93，126.42，115.14，62.39，54.70，29.45，25.90，23.29，21.18。
5)2-(N-吡咯烷)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率22％；熔点229-233℃；高分辨质谱(ESI)计算值C20H23N4O[M+H]+为335.1872，实验值为335.1867；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.36(s，1H)，8.34(s，1H)，7.98(d，J＝8.4Hz，2H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.27(d，J＝5.6Hz，2H)，7.04(s，1H)，3.37(s，2H)，2.75(m，4H)，2.40(s，3H)，1.88(m，4H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.87，152.20，139.98，132.67，129.38，127.00，126.32，115.20，59.49，58.20，54.43，23.87，21.17，18.19。
6)2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率39％；熔点112-116℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H25FN5O[M+H]+为382.2043，实验值为382.2037；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.91(s，1H)，9.33(s，1H)，8.40(t，J＝7.2Hz，2H)，7.68(s，1H)，7.43-7.37(m，1H)，7.31-7.23(m，1H)，7.17(dd，J＝11.8，8.6Hz，1H)，7.02(s，1H)，3.18(s，2H)，3.07-2.11(m，10H)，1.11(t，J＝7.2Hz，3H).
7)2-(N-吗啡啉)-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率16％；熔点197-199℃；高分辨质谱(ESI)计算值C19H20FN4O2[M+H]+为355.1570，实验值为355.1567；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.57(s，1H)，9.25(s，1H)，8.43(t，J＝7.6Hz，2H)，7.73(s，1H)，7.44-7.39(m，1H)，7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，7.19(dd，J＝12.0，8.4Hz，1H)，7.00(s，1H)，3.80(t，J＝4.6Hz，4H)，3.19(s，2H)，2.65(t，J＝4.6Hz，4H)。
8)2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
产率61％；熔点104-107℃；高分辨质谱(ESI)计算值C20H27N6O[M+H]+为367.2246，实验值为367.2236；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.33(s，1H)，8.38(s，1H)，7.61(s，1H)，6.86(s，1H)，6.77(s，1H)，6.72(d，J＝3.6，1H)，6.17(s，1H)，4.12(s，3H)，3.19(s，2H)，2.69-2.45(m，10H)，1.11(t，J＝7.2Hz，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.69，147.19，132.33，126.72，123.43，111.20，108.08，61.89，53.45，52.97，52.25，36.67，11.96。
实施例5、
在四氢呋喃(THF)中加入3-氯-N-苯并咪唑基丙酰胺(0.334mmol)，碘化钾(0.334mmol)和亚胺(5.015mmol)，40℃回流4小时。反应混合物冷却后，蒸掉溶剂，水洗，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，有机相蒸干后用柱层析色谱分离，得到所需化合物。
1)3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率39％；熔点193-195℃；高分辨质谱(ESI)计算值C23H30N5O[M+H]+为392.2450，实验值为392.2444；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.20(s，1H)，8.34(s，1H)，7.99(d，J＝7.6Hz，2H)，7.60(d，J＝8.0Hz，1H)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H)，6.98(s，1H)，2.81-2.43(m，14H)，2.38(s，3H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.83，152.56，140.04，133.76，129.54，127.41，126.66，53.63，52.85，52.21，52.10，32.43，21.44，11.89。
2)3-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率34％；熔点209-213℃；高分辨质谱(ESI)计算值C22H28N5O[M+H]+为378.2294，实验值为378.2285；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.22(s，1H)，8.38(s，1H)，7.99(d，J＝8.0Hz，2H)，7.61(s，1H)，7.22(d，J＝7.6Hz，2H)，6.94(s，1H)，2.74-2.52(m，12H)，2.38(s，3H)，2.34(s，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.62，152.37，139.77，133.50，129.28，127.24，126.44，54.98，53.42，51.99，45.67，32.19，21.20。
3)3-(N-吗啡啉)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率41％；熔点207-211℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H25N4O2[M+H]+为365.1978，实验值为365.1971；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.04(s，1H)，8.30(s，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，2H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，6.99(d，J＝7.3Hz，1H)，3.82(s，4H)，2.75(t，J＝5.8Hz，2H)，2.62(s，4H)，2.57(t，J＝5.6Hz，2H)，2.39(s，3H)。
4)3-(N-哌啶)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率42％；熔点188-191℃；高分辨质谱(ESI)计算值C22H27N4O[M+H]+363.2185为363.2185，实验值为363.2186；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.72(s，1H)，8.53(s，1H)，8.02(d，J＝8.0Hz，2H)，7.67(s，1H)，7.24(d，J＝8.0Hz，2H)，6.86(s，1H)，2.70-2.54(m，8H)，2.39(s，3H)，1.72-1.70(m，4H)，1.55(s，2H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.99，152.35，139.83，133.89，129.42，127.45，126.54，58.30，54.25，53.55，32.40，26.13，24.12，21.31，18.33。
5)3-(N-吡咯烷)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率22％；熔点134-138℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H25N4O[M+H]+3为349.2028，实验值为349.2020；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.43(s，1H)，8.29(s，1H)，8.01(d，J＝8.0Hz，2H)，7.57(d，J＝7.6Hz，1H)，7.21(d，J＝7.6Hz，2H)，6.92(s，1H)，2.88(t，J＝5.8Hz，2H)，2.69(s，4H)，2.60(t，J＝5.6Hz，2H)，2.36(s，3H)，1.88(s，4H)。
6)3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(3，5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率53％；熔点61-65℃；高分辨质谱(ESI)计算值C24H32N5O3[M+H]+为438.2505，实验值为438.2500；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.28(s，1H)，8.36(s，1H)，7.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.32(d，J＝2.0Hz，2H)，6.98(s，1H)，6.49(t，J＝2.2Hz，1H)，3.75(s，6H)，2.87-2.41(m，14H)，1.12(t，J＝7.2Hz，3H)。
7)3-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(3，5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率55％；熔点172-176℃；高分辨质谱(ESI)计算值C23H30N5O3[M+H]+为424.2349，实验值为424.2343；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.25(s，1H)，8.35(s，1H)，7.60(s，1H)，7.30(d，J＝2.0Hz，2H)，6.96(s，1H)，6.48(s，1H)，3.72(s，6H)，2.80-2.40(m，12H)，2.33(s，3H)。
8)3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-溴苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率14％；熔点205-209℃；高分辨质谱(ESI)计算值C22H27 79BrN5O[M+H]+为456.1399，C22H27 81BrN5O[M+H]+为458.1379，实验值为456.1396，458.1377；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.46(s，1H)，8.55(s，1H)，7.96(d，J＝8.4Hz，2H)，7.68(d，J＝4.4Hz，1H)，7.54(d，J＝8.8Hz，2H)，6.82(s，1H)，2.75-2.46(m，14H)，1.13(t，J＝7.4Hz，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.75，151.11，133.79，131.73，129.07，127.99，123.83，58.15，53.40，52.78，52.10，32.20，11.81。
9)3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
产率32％；熔点165-168℃；高分辨质谱(ESI)计算值C21H29N6O[M+H]+为381.2403，实验值为381.2398；
所得化合物谱图数据为：
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.41(s，1H)，7.60(s，1H)，6.78-6.77(m，2H)，6.72-6.71(m，1H)，6.19-6.17(m，1H)，4.12(s，3H)，3.06-2.20(m，14H)，1.13(t，J＝7.2Hz，3H)。
13C NMR(100MHz，CDCl3)δ170.83，146.92，133.64，126.57，123.58，111.00，108.04，53.72，53.01，52.28，36.65，32.47，12.04。
实施例6、MTT法细胞增殖抑制活性筛选
体外细胞增殖抑制实验采用MTT法，采用细胞系：人肝癌细胞HepG-2。
HepG-2细胞为贴壁生长细胞，用含体积分数为10％的胎牛血清的DMEM培养液，在37℃、体积分数为5％的CO2条件下常规培养。
取对数生长期的HepG-2细胞，接种于96孔板中，密度是1.5×105个/mL，99μL/well，每孔加入样品溶液1μL，使药物作用终浓度为0.5，1，5，10，25，50μM。每种样品设五个复孔，并且设置阳性对照和空白对照。作用72h后加入MTT溶液，10μL/well，继续培养4小时后，2000rpm，4℃，离心5分钟，吸去上清后加入DMSO，100μL/well，37℃保温约10分钟，并用微量振荡器振荡约5分钟使结晶溶解完全，用酶标仪于490nm处测量OD值，按如下公式计算细胞增殖抑制率(Inhibition Rate，IR％)：
IR％＝(对照OD-样品OD)/(对照OD-空白OD)×100％
经过计算，得到本发明所制备的化合物的体外细胞增殖抑制活性，结果见表1，
表1 为实施例2、3、4、5制备的化合物的体外细胞增殖抑制活性
实施例7、本发明所提供的化合物进行体外激酶筛选试验
准备部分：
配制反应液：HEPES 25mM，MgCl2 10mM，TritonX-100 0.01％，BSA 100μg/ml，DTT 2.5mM，调节PH值为7.4，其中HEPES，MgCl2和TritonX-100首先混合均匀，然后加入BSA和DTT。
反应底物：
表2 实验所用激酶和底物
将待测化合物(与表1中化合物标号对应)以及阳性对照化合物Staurosporine(星形孢菌素)，用DMSO配制成5mM溶液，取2μL 5mM溶液，加入18μL反应液，稀释化合物至500μM(10X)溶液。ATP稀释为4X，用反应液将底物稀释至4X，用反应液将激酶稀释至2.5X。布置好384孔板，其中：HPE(全抑制对照)为不加激酶和化合物，加ATP，底物和1％DMSO；ZPE(零抑制对照)为不加化合物，加激酶，ATP，底物和1％DMSO；阳性对照化合物孔为加激酶，ATP，底物和不同浓度阳性化合物；待测化合物孔为加激酶，ATP，底物和待测化合物。
实验部分：
在每个孔中加入1μL 10X化合物(待测化合物或阳性对照物)溶液，全抑制对照及零抑制对照孔加入1μL反应液，每孔加入4μL 2.5X激酶溶液，全抑制对照孔加入4μL反应液。将检测板1000rpm离心以混匀，将4X ATP溶液与4X底物溶液等体积混合，得到2X ATP-底物溶液，按照布置每孔加入5μL上述2X ATP-底物溶液。将检测板1000rpm离心以混匀，置于30℃反应1小时。每孔加入10μL Kinase glo plus或ADP-Glo反应试剂，27℃放置20分钟，每孔加入20μL Kinase Detection试剂，27℃放置30分钟。用Envision读取荧光数值。
化合物抑制系数＝(化合物孔荧光值-零对照孔荧光值)/(全抑制对照孔荧光值-零对照孔荧光值)×100％
经过计算，得到本发明所制备化合物在50μM浓度下，对EGFR、PDGFR-α、PDGFR-β、VEGFR-2和HER-2蛋白激酶的抑制率，抑制率如表三所示。
表三、化合物在50μM下，对EGFR、PDGFR-α、PDGFR-β、VEGFR-2和HER-2蛋白激酶的抑制率
Claims (9)
1.式I所示化合物或其药学上可接受的盐：
式I中，Z为CH2或CH2CH2；R2为Cl或选自下述基团中的任意一种：
R1为式III或式II所示基团，式III基团中，R7为H或CH3；
式II基团中，X1、X2、X3及R2、R3、R4、R5、R6所代表的基团分为下述四种情况：
A）X1、X2、X3均为C，R2、R3、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
B）X1为N，X2，X3均为C，R2取代基不存在，R3、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
C）X2为N，X1，X3均为C，R3取代基不存在，R2、R4、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2；
D）X3为N，X1，X2均为C，R4取代基不存在，R2、R3、R5，R6均选自下述基团中的任意一种：H、F、Cl、Br、I、CH3、OCH3、OH和NH2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：式I所示化合物为下述任意一种化合物：
1）2-氯-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
2）2-氯-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
3）2-氯-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
4）3-氯-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
5）3-氯-N-(2-(4-溴苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
6）3-氯-N-(2-(3,5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
7）3-氯-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
8）2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
9）2-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
10）2-(N-吗啡啉)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
11）2-(N-哌啶)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
12）2-(N-吡咯烷)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
13）2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
14）2-(N-吗啡啉)-N-(2-(2-氟苯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
15）2-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)乙酰胺
16）3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
17）3-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
18）3-(N-吗啡啉)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
19）3-(N-哌啶)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
20）3-(N-吡咯烷)-N-(2-(4-甲基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
21）3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(3,5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
22）3-(4-甲基哌嗪)-N-(2-(3,5-二甲氧基苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
23）3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(4-溴苯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺
24）3-(4-乙基哌嗪)-N-(2-(N-甲基-2-吡咯基)-5-苯并咪唑基)丙酰胺。
3.制备权利要求1或2中式I所示化合物的方法，包括下述步骤：
1）以无水N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，在焦亚硫酸钠的催化下，使式IV所示化合物与式V或式VI所示化合物进行反应，得到式VII所示化合物；
其中，式V中的X1、X2、X3及R2、R3、R4、R5、R6与式II相同，式VI中R7与式III相同，式VII中R1与式I相同；
2）以乙醇为溶剂，使式VII所示化合物与无水二氯亚锡进行硝基还原反应，得到式VIII所示化合物；
3）将式VIII所示化合物在氯乙酰氯或3-氯丙酰氯溶液中进行回流反应，得到IX所示化合物，即式I中R2为Cl的式I所示化合物；
其中，式IX中的Z与式I相同；
4）以无水四氢呋喃为溶剂，碘化钾为引发剂，使式IX所示化合物与下述二级胺中任何一种反应：N-乙基哌嗪、N-甲基哌嗪、哌啶、吗啡啉和吡咯烷，得到式I中R2为除氯外的其它基团的式I所示化合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤1）中，式IV、式V或式VI所示化合物、与焦亚硫酸钠的摩尔比依次为1:1.2:2.5，所述反应的反应温度为90-120℃，反应时间为15-18小时。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：步骤2）中，式VII所示化合物与无水二氯亚锡的摩尔比为1：2.5；所述反应的反应温度为70-80℃，反应时间为3-4小时。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤3）中，所述回流反应的温度为120-125℃，反应时间为3-4小时；
步骤4）中，式IX所示化合物、KI与二级胺的摩尔比依次为1:1:15，所述反应的反应温度为40-45℃，反应时间为3-4小时。
7.权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐在制备下述产品中的应用：1）蛋白激酶抑制剂；2）真核生物肿瘤细胞增殖的抑制剂；3）预防和/或治疗肿瘤的药物；
所述蛋白激酶选自下述至少一种：EGFR、PDGFR-α、PDGFR-β、VEGFR-2和HER-2；
所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为肝癌细胞；
所述肿瘤为肝癌。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述肝癌细胞为人肝癌细胞HepG-2。
9.一种预防和/或治疗肿瘤的药物，其活性成分为权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐；
所述肿瘤为肝癌。
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