CN102190716B - 四季开花性状相关蛋白及其编码基因 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种四季开花性状相关蛋白及其编码基因。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物四季开花性状相关的由序列1衍生的蛋白质。所述蛋白的编码基因在四季开花的月月红和现代月季品种，与一季开花的玫瑰、野蔷薇和其它蔷薇属原种的表达有显著差异，是控制四季开花性状的功能基因。RT-PCR、Real-time PCR表达分析的结果都表明，该基因在四季开花的月月红和现代月季品种中不表达或表达极少，是控制四季开花性状的功能基因。

Description

四季开花性状相关蛋白及其编码基因

技术领域

本发明涉及一种四季开花性状相关蛋白及其编码基因。

背景技术

蔷薇属是蔷薇科一个具有重要观赏和经济价值的属，包括现代月季、玫瑰及150多种野生蔷薇。其中现代月季是由蔷薇属的月季花(Rosa chinenesis Jacq.)、巨花蔷薇(Rosa gigantia Collett ex Crep.)、突厥蔷薇(Rosa damascene Mill.)、法国蔷薇(Rosa gallica L.)等15种蔷薇属原种经多次复合杂交而育成的，表现了与其它蔷薇原种不同的四季开花习性，成为极少数能四季开花的木本植物之一。这种四季开花习性是由原产中国的月季花提供的；其它蔷薇一般一年只开一季花。对观赏植物来说，四季开花既是重要的观赏性状，又是关键的生产性状，既丰富了园林植物的四季景观，促进了切花月季的周年供应，又极大地节约了促成栽培的生产成本。

TFL1基因是从拟南芥中克隆的花序分生组织特性基因，与金鱼草的Centroradialis(CEN)基因属于同一个家族，目前已从番茄、烟草、柑桔、葡萄等植物中分离出来同源基因。TFL1编码的序列与磷脂酰乙醇胺结合蛋白具有同源性，该蛋白在动物中与膜蛋白复合物有关联。TFL1是通过抑制LFY和AP1在茎尖中央区域的表达和活性，来维持花序分生组织的特性，抑制花的发育。拟南芥tfl1突变体的表型：一是顶端成花，无限花序变有限花序；二是花期提前，童期缩短。

发明内容

本发明的目的是提供一种四季开花性状相关蛋白及其编码基因。

本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)的蛋白质：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物四季开花性状相关的由序列1衍生的蛋白质。

所述蛋白质中，(b)具体可为由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

编码所述蛋白的基因也属于本发明的保护范围。

所述基因具体可为如下1)或2)或3)或4)或5)或6)的DNA分子：

1)序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列3所示的DNA分子；

3)序列表中序列5所示的DNA分子；

4)序列表中序列6所示的DNA分子；

5)在严格条件下与1)或2)或3)或4)限定的DNA序列杂交且编码与植物四季开花性状相关蛋白的DNA分子；

6)与1)或2)或3)或4)或5)限定的DNA序列具有90％以上同源性，且编码与植物四季开花性状相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

含有所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。

扩增所述基因的全长或其任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

本发明同时保护所述基因在辅助筛选具有不同开花性状的蔷薇属植物中的应用，是检测待测蔷薇属植物中所述基因的表达量，具有四季开花性状的蔷薇属植物中所述基因的表达量低于不具有四季开花性状的蔷薇属植物。

本发明同时保护所述基因在辅助鉴定蔷薇属植物的开花性状中的应用，是检测待测蔷薇属植物中所述基因的表达量，具有四季开花性状的蔷薇属植物中所述基因的表达量低于不具有四季开花性状的蔷薇属植物。

所述蛋白或所述基因可应用于调节植物四季开花性状。

所述蛋白或所述基因可应用于在植物育种，如用于培育具有四季开花性状的植物。

本发明属于植物基因工程领域。从月月红、玫瑰、野蔷薇中分离得到了RTFL1c(Rosa Terminal FLower 1c)基因，该基因在四季开花的月月红和现代月季品种，与一季开花的玫瑰、野蔷薇和其它蔷薇属原种的表达有显著差异，是控制四季开花性状的功能基因。以野蔷薇、玫瑰、‘月月红’3种植物不同花发育阶段的花芽为材料，通过实时定量Real-time PCR和RT-PCR，分析了3个RTFL1同源基因在不同开花习性蔷薇属植物中阶段表达的差异，揭示了RTFL1c是控制四季开花习性的基因。从蔷薇属植物中分离得到的RTFL1c基因，在野蔷薇、玫瑰和月月红中各有1、2、3个拷贝。RT-PCR、Real-time PCR表达分析的结果都表明，该基因在四季开花的月月红和现代月季品种中不表达或表达极少，是控制四季开花性状的功能基因。

附图说明

图1为应用兼并引物的PCR产物电泳图；1、以‘白玉堂’基因组DNA为模板，TFL1-F-1/TFL1-R-1为引物所得片段；2、以‘白玉堂’基因组DNA为模板，TFL1-F-2/TFL1-R-2为引物所得片段；3、以玫瑰基因组DNA为模板，TFL1-F-1/TFL1-R-1为引物所得片段；4、以玫瑰基因组DNA为模板，TFL1-F-2/TFL1-R-2为引物所得片段；5、以‘月月红’基因组DNA为模板，TFL1-F-1/TFL1-R-1为引物所得片段；M(Marker)。

图2为蔷薇(RmTFL1c)与玫瑰(RrTFL1c)的TFL1c基因及其编码蛋白序列对比图。

图3为TFL1c基因Southern blot结果。

图4为TFL1c基因的RT-PCR结果；1：‘白玉堂’1阶段；2：‘白玉堂’2阶段；3：‘白玉堂’3阶段；4：‘白玉堂’4阶段；5：玫瑰1阶段；6：玫瑰2阶段；7：玫瑰3阶段；8：玫瑰4阶段；9：‘月月红’1阶段；10：‘月月红’2阶段；11：‘月月红’3阶段；12：‘月月红’4阶段；13：Marker。

图5为RTFL1基因的相对表达量。

图6为蔷薇属植物RTFL1c基因的相对表达量；1：‘索尼亚’；2：‘西方大地’；3：‘瓦尔特大叔’；4：‘御用马车’；5：‘光谱’；6：‘同情’；7：‘红成功’；8：‘红双喜’；9：‘至高无上’；10：大马士革蔷薇；11：木香花；12：樱草蔷薇；13：红果蔷薇；14：刺梨。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的植物材料均购自中国农科院蔬菜花卉所，都是常见品种，从北京植物园或河南南阳月季基地(公司)及北京市三环路等绿地均可采样。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。图5和图6中不同字母表示差异显著。

表1PCR引物(5’-3’)

TFL1-F-1	AATGGCCATGAGCTCTTTCCTTC	TFL1c-F-1	GAGCGATACAGGGATTCCAATTG
				TFL1-R-1	AACGYCTKCKRGCGGCRGTTTC	TFL1c-R-1	CACAAACATTCACGTACAGCTCTCTT
TFL1-F-2	TCCTGGCCCTAGTGA(T/C)CCTTAT	TFL1c-F-2	TCTTTGATATTTGTACGACCTTCTCTC
				TFL1-R-2	GCGC(A/G)TTGAAGTA(A/G)A(C/G)GGCAG	TFL1c-R-2	ACCGTTATAGCATGGAATCTTTTG
B-SP2-F	GCCGAGGCCAAACATAGGGATCC	TFL1c-F-3	TTTGATATTTGTACGACCTTCTCTCCTCTCTC
				C-SP3-R	TCAAATAAGGGTCACTAGGGCCAGGAA	TFL1c-R-3	CATTGAAGACGAGTTTGGTGTTGTAAGTGAC
AD2	NGTCGA(G/C)(A/T)GANA(A/T)GAA
				AD4	(G/C)TTGNTA(G/C)TNCTNTGC

实施例1、RTFL1c基因的获得

植物材料：‘白玉堂’(Rosa multiflora Thunb.var.albo-plena Yüet Ku)、玫瑰(Rosa rugosa)和‘月月红’(Rosa chinensis cv.Slaters Crimson China)。

一、RTFL1c基因的克隆及其序列分析

分别以‘白玉堂’、玫瑰、‘月月红’花发育后期的花芽为材料，提取植物的基因组DNA，以基因组DNA为模板。

TFL1同源基因已经先后在金鱼草、拟南芥和烟草等28种植物中被成功克隆。利用已知基因的同源序列，设计两对兼并引物TFL1-F-1/TFL1-R-1和TFL1-F-2/TFL1-R-2。利用两对兼并引物进行PCR，琼脂糖凝胶电泳检测到清晰的条带(见图1)。用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收纯化，连接于PGEM-T vector(Promega公司)、转化大肠杆菌JM109感受态细胞，菌落PCR检测的阳性克隆送英骏公司(Invitrogen公司)测序，获得了蔷薇属的TFL1同源片段，命名为RTFL1c-frag。

根据RTFL1c-frag的序列，设计Tail-PCR的SP引物，选用Tail-PCR的AD引物进行Tail-PCR，扩增基因两端的序列，将获得的阳性重组克隆送英骏公司测序。最终以AD2和C-SP3-R、AD4和B-SP2-F两对引物获得了RTFL1c-frag的两端序列。

通过拼接得到基因的全长序列，以基因的两端序列设计特异引物(TFL1c-F-1和TFL1c-R-1)，进行PCR，将PCR产物进行测序，得到了基因的全长序列。

以‘白玉堂’为模板，得到的核苷酸序列如序列表的序列2所示，该基因编码序列表的序列1所示的蛋白。以玫瑰为模板，得到的核苷酸序列如序列表的序列5(所示，该基因编码序列表的序列4所示的蛋白。将序列1所示的蛋白质命名为RmTFL1c蛋白，将RmTFL1c蛋白的编码基因命名为RmTFL1c基因。将序列4所示的蛋白质命名为RrTFL1c蛋白，将RrTFL1c蛋白的编码基因命名为RrTFL1c基因。RmTFL1c和RrTFL1c的比对情况见图2。将“月月红”中的相应蛋白命名为RcTFL1c蛋白，将RcTFL1c蛋白的编码基因命名为RcTFL1c基因。

三、Southern blot

分别以‘白玉堂’、玫瑰、‘月月红’幼嫩叶片为材料，使用illustra NucleonPhytopure Genomic DNA Extraction Kits(Code：RPN8510)(GE Healthcare UKLimited.，白金汉郡，英国)分别提取基因组DNA。

基因组DNA采用Takara公司限制性内切酶HindIII与PstI进行酶切。酶切体系为：30μL 10×buffer，3μL 100×BSA，100μg DNA，4.5μL Spermidine，300U限制性内切酶，加水补足300μL。于37℃水浴中酶切过夜。乙醇沉淀DNA片段，溶于25μL水。

通过0.7％琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。电泳分离DNA之后先后置于0.25M HCl中浸泡10分钟，0.4M NaOH中30分钟。DNA变性之后，放入0.4M NaOH，将3M滤纸条两端浸入转移缓冲液中。凝胶底面向上置于滤纸中央，依次叠加尼龙膜、三层3M滤纸、10cm纸巾、500g重物，保证各层之间紧密贴合，没有气泡。转膜12小时。取出尼龙膜，2×SSC溶液洗膜2分钟，将与凝胶贴合一面向上，于紫外灯下照射使DNA交联到膜上。杂交管中加入5ml杂交液，放入尼龙膜，与凝胶贴合一面向里，65℃预杂交2小时。利用Prime-a-Gene标记系统(Promega，威斯康星州，美国)制备探针(以目的基因为探针)，用d-³²P-dCTP标记，加入杂交管中，65℃杂交过夜。2×SSC及0.1％SDS溶液洗膜三次，每次20分钟。放在X光片暗夹中用X光片于-70℃曝光48小时。

X光片结果显示，RTFL1c基因在‘白玉堂’、玫瑰和月月红中分别有1、2、3个拷贝(图3)。

四、cDNA序列的获得

分别采集‘白玉堂’、玫瑰、‘月月红’三种植物的4个不同时期的花芽：2008年3月12日(休眠芽)、3月26日(花发育早期)、4月9日(花发育中期)、和4月22日(花发育后期；显蕾)，提取RNA反转录为cDNA。

采用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒(盖宁生物科技(北京)有限公司)提取总RNA。以oligo(dT)18(Takara公司)为引物，用SuperScript^TM III ReverseTranscriptase反转录酶(Invitrogen公司)反转录cDNA。

根据已得到的DNA序列设计cDNA引物(TFL1c-F-2和TFL1c-R-2)，以cDNA为模板采用cDNA引物进行RT-PCR，获得cDNA序列。

RmTFL1c蛋白的cDNA序列如序列表的序列3所示。RrTFL1c蛋白的cDNA序列如序列表的序列6所示。

实施例2、RTFL1c基因在不同花芽发育期的表达差异

分别采集‘白玉堂’、玫瑰、‘月月红’三种植物4个不同时期的花芽：2008年3月12日(休眠芽；1阶段)、3月26日(花发育早期；2阶段)、4月9日(花发育中期；3阶段)和4月22日(花发育后期；显蕾；4阶段)。

分别以花发育4个阶段的花芽为材料，采用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒(盖宁生物科技(北京)有限公司)提取总RNA。以oligo(dT)18(Takara公司)为引物，用SuperScript^TM III Reverse Transcriptase反转录酶(Invitrogen公司)反转录cDNA。

以cDNA为模板采用cDNA引物(TFL1c-F-2和TFL1c-R-2)进行半定量RT-PCR，分析RTFL1c基因的表达模式。半定量RT-PCR的结果见图4。RTFL1c基因在‘白玉堂’的1、2阶段表达量较低，3、4阶段表达量很高，在玫瑰花发育的4个阶段一直很高，在‘月月红’未见表达。

实施例3、Real-time RT-PCR表达分析

分别采集‘白玉堂’、玫瑰、‘月月红’三种植物4个不同时期的花芽：2008年3月12日(休眠芽；I)、3月26日(花发育早期；II)、4月9日(花发育中期；III)、和4月22日(花发育后期；显蕾；IV)。

分别以花发育4个阶段的花芽为材料，采用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒(盖宁生物科技(北京)有限公司)提取总RNA。以oligo(dT)18(Takara公司)为引物，用SuperScript^TM III Reverse Transcriptase反转录酶(Invitrogen公司)反转录cDNA。

根据cDNA序列设计Real-time RT-PCR的引物对(TFL1c-F-3和TFL1c-R-3)。

以cDNA为模板，采用引物对(TFL1c-F-3和TFL1c-R-3)，采用Takara公司“

Green Realtime PCR Master Mix”试剂盒(Code：QPK-201)，在Real-time PCR仪(MJ Research Incorporated，DNA engine

Continuous fluorescenceDetector)进行Real-time RT-PCR。反应体系为：1μL反cDNA，12.5μL 2×SYBR GreenPCR mix，TFL1c-F-3和TFL1c-R-3各0.5μL，用水补足至25μL。Real-time RT-PCR的反应步骤：95℃预热3min；接下来94℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，共44个循环。在分析扩增片段的熔解曲线的基础上，根据RTFL1基因的CT值，分析其RNA的表达模式。

Real-time PCR的结果见图5(以玫瑰I期的表达量为100％)。‘白玉堂’和玫瑰RTFL1c基因的表达都呈现两头低，中间高的趋势，但是玫瑰明显的高于‘白玉堂’。‘月月红，的RTFL1c基因在花发育的整个阶段一直都未见表达。可见，RTFL1c基因与开花习性的关系很大。

实施例4、蔷薇属植物TFL1c相对表达量的real-time定量分析

5种原种蔷薇：大马士革蔷薇、木香花、樱草蔷薇、红果蔷薇、刺梨；

9个现代月季品种(四季开花)：‘索尼亚’、‘西方大地’、‘瓦尔特大叔’、‘御用马车’、‘光谱’、‘同情’、‘红成功’、‘红双喜’、‘至高无上’。

各材料于2009年6月19日分别采集枝条顶端嫩叶，立即用锡箔纸包裹置于液氮中，每种3份，于-80℃超低温冰箱中保存备用。于-80℃超低温冰箱中取出植物材料置于液氮中，采用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒(盖宁生物科技(北京)有限公司)提取总RNA。以oligo(dT)18(Takara公司)为引物，用SuperScript^TM III ReverseTranscriptase反转录酶(Invitrogen公司)反转录cDNA。

使用引物对(TFL1c-F-3和TFL1c-R-3)，以反转录产物为模板，采用美国应用生物系统公司的“Power

Green PCR Master Mix(2×)”试剂(P/N 4367659)，在Real-time PCR仪(MJ Research Incorporated，DNA engine

Continuousfluorescence Detector)进行Real-time RT-PCR。反应体系为：4μL 25倍稀释反转录产物，12.5μL

Green PCR mix(2×)，TFL1c-F-3和TFL1c-R-3各1μL，加水(去离子水，灭菌3遍)补足至25μL。Real-time RT-PCR的反应步骤：95℃预热3min；接下来94℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，35-40个循环。

分析扩增片段的熔解曲线，根据TFL1c基因和Actin基因的CT值，分析其RNA的表达模式。利用Excel计算3次生物学重复结果平均值及样本标准偏差，并绘制柱形图，见图6。结果显示，包括5种原种蔷薇TFL1c基因相对表达量普遍高于其它9个现代月季品种，T-test结果也证明，在P＝0.05水平上除了大马士革蔷薇，其他4种原种蔷薇与现代月季品种之间TFL1c基因相对表达量存在显著差异。

序列表

<110>中国农业大学

<120>四季开花性状相关蛋白及其编码基因

<130>CGGNARY102123

<160>6

<210>1

<211>172

<212>PRT

<213>‘白玉堂’(Rosa multiflora Thunb.var.albo-plena Yüet Ku)

<400>1

Met Ala Arg Met Ser Glu Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Asp

1               5                   10                  15

Val Leu Asp Tyr Phe Thr Pro Ala Thr Lys Met Ile Val Thr Tyr Ser

            20                  25                  30

Thr Lys Leu Val Phe Asn Gly His Glu Leu Phe Pro Ser Ala Val Thr

        35                  40                  45

Ala Lys Pro Arg Val Glu Ile Gln Gly Gly Asp Met Arg Ser Phe Phe

    50                  55                  60

Thr Leu Val Met Thr Asp Pro Asp Val Pro Gly Pro Ser Asp Pro Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Lys Glu His Leu His Trp Ile Val Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr

                85                  90                  95

Asp Val Thr Phe Gly Arg Glu Met Val Ser Tyr Glu Met Pro Arg Pro

            100                 105                 110

Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Lys Gln Lys Arg

        115                 120                 125

Arg Gln Ser Val Asn Pro Pro Ser Ser Arg Asp His Phe Asn Thr Arg

    130                 135                 140

Ser Phe Ala Ala Glu Asn Asp Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr

145                 150                 155                 160

Phe Asn Ala Gln Arg Glu Thr Ala Ala Arg Arg Arg

                165                 170

<210>2

<211>629

<212>DNA

<213>‘白玉堂’(Rosa multiflora Thunb.var.albo-plena Yüet Ku)

<400>2

tctttgatat ttgtacgacc ttctctcctc tctcgctttt gagtactaaa aatggcaaga   60

atgtcggaac ctttagttgt tggaagagtc ataggagatg ttcttgatta ctttacccca  120

gctactaaaa tgattgtcac ttacagcacc aaactcgtct tcaatggaca tgagctcttc  180

ccatctgcag tcaccgccaa acctagagtt gagattcaag gaggagacat gagatcattc  240

ttcactctgg tgatgacaga cccagatgtt cctggcccca gtgatcctta tttgaaggag  300

cacctgcact ggattgtgac agacattcca ggcaccacag atgttacatt tggaagagag  360

atggtgagct acgagatgcc aaggccaaac ataggaatcc ataggtttgt gtttgttctt  420

ttcaagcaga aacgaaggca gtcggtgaac ccaccttcct caagggatca cttcaacacc  480

cgaagcttcg cagccgaaaa cgacctcggt cttcctgttg cggccgttta cttcaatgcg  540

cagagagaaa cggcagcaag aagacgctag ctagctaggc agctagcagg aggcaggtcc  600

gaccccaaaa gattccatgc tataacggt                                    629

<210>3

<211>1544

<212>DNA

<213>‘白玉堂’(Rosa multiflora Thunb.var.albo-plena Yüet Ku)

<400>3

cctcctctta tatactcttc ttcttctcaa gagatctaaa gcaattctag ttgcgtactt   60

gagatcacta taaatacaga gcgatacagg gattccaatt gcaagcaaag gaaaatatta  120

gaagtacaat ccttccttcc ttttatctat ctttgatatt tgtacgacct tctctcctct  180

ctcgcttttg agtactaaaa atggcaagaa tgtcggaacc tttagttgtt ggaagagtca  240

taggagatgt tcttgattac tttaccccag ctactaaaat gattgtcact tacagcacca  300

aactcgtctt caatggacat gagctcttcc catctgcagt caccgccaaa cctagagttg  360

agattcaagg aggagacatg agatcattct tcactctggt acggtacaca tcgttttttt  420

tttttttttt tttttctggg ctccattgtt cgccgattgt gttttatcag atctacgaaa  480

tcgctaagtt aattgatttt gattcacagg tgatgacaga cccagatgtt cctggcccca  540

gtgatcctta tttgaaggag cacctgcact ggtataactt actgtatata ttctctacta  600

ccaaacctag aaacgaaaaa acaaagacaa taaacatgca gttaattaaa ttcagactat  660

tgtcagagaa ataaaagcaa gtaaagagta catattatgg catagggtat cgattccttt  720

tcacatccta catcaacttt tttgtcatag actaccaatt ctaaaagcaa gtaggaagta  780

catattatgg cataaactct gaattagaaa agctagcaaa caataattat ggagtacata  840

cataccaagc taggagctaa catttttgcc ttgaaattgg tctatacagg attgtgacag  900

acattccagg caccacagat gttacatttg gtaggttaat tcactagttc agctaccagt  960

tatatacttc attaacacta atattgttca tcgttctggt cttaacacta atacttcatt 1020

acggctagtg atgatcagca ctaatattgt tcatcgttct ggtcttaact tgaatgaatt 1080

atatacttca ttaacaggaa gagagatggt gagctacgag atgccaaggc caaacatagg 1140

aatccatagg tttgtgtttg ttcttttcaa gcagaaacga aggcagtcgg tgaacccacc 1200

ttcctcaagg gatcacttca acacccgaag cttcgcagcc gaaaacgacc tcggtcttcc 1260

tgttgcggcc gtttacttca atgcgcagag agaaacggca gcaagaagac gctagctagc 1320

taggcagcta gcaggaggca ggtccgaccc caaaagattc catgctataa cggtataacc 1380

acaacaccta attaaataaa agaaaagtgt gattaatgaa ttattcctcc ctatggctag 1440

gttatcaggc taaaattact cggatgttac cacaataatt tccccaaaga gagctgtacg 1500

tgaatgtttg tgtgactctc atttagttgt tggtctctct ccgt                  1544

<210>4

<211>172

<212>PRT

<213>玫瑰(Rosa rugosa)

<400>4

Met Ala Arg Met Ser Glu Pro Leu Val Val Gly Arg Val Ile Gly Asp

1               5                   10                  15

Val Leu Asp Tyr Phe Thr Pro Thr Thr Lys Met Ile Val Thr Tyr Asn

            20                  25                  30

Thr Lys Leu Val Phe Asn Gly His Glu Leu Phe Pro Ser Ala Val Thr

        35                  40                  45

Ala Lys Pro Arg Val Glu Ile Gln Gly Gly Asp Met Arg Ser Phe Phe

    50                  55                  60

Thr Leu Val Met Thr Asp Pro Asp Val Pro Gly Pro Ser Asp Pro Tyr

65                  70                  75                  80

Leu Lys Glu His Leu His Trp Ile Val Thr Asp Ile Pro Gly Thr Thr

                85                  90                  95

Asp Val Thr Phe Gly Arg Glu Met Val Ser Tyr Glu Met Pro Arg Pro

            100                 105                 110

Asn Ile Gly Ile His Arg Phe Val Phe Val Leu Phe Lys Gln Lys Arg

        115                 120                 125

Arg Gln Ser Val Asn Pro Pro Ser Ser Arg Asp His Phe Asn Thr Arg

    130                 135                 140

Cys Phe Ala Ala Glu Asn Asp Leu Gly Leu Pro Val Ala Ala Val Tyr

145                 150                 155                 160

Phe Asn Ala Gln Arg Glu Thr Ala Ala Arg Arg Arg

                165                 170

<210>5

<211>796

<212>DNA

<213>玫瑰(Rosa rugosa)

<400>5

tacaatcctt ccttccttag tcttatctat ctttgatatt tgtacgacct tctctcctct     60

ctcgcttttg agtactaaaa atggcaagaa tgtcggaacc cttagttgtt ggaagagtca    120

taggagatgt tcttgattac tttaccccaa ctactaaaat gattgtcact tacaacacca    180

aactcgtctt caatggacat gagctcttcc catctgcagt caccgccaaa cctagagttg    240

agattcaagg aggcgacatg agatcattct tcactctggt gatgacagac ccagatgttc    300

ctggccccag tgatccttat ttgaaggagc acctgcactg gattgtgaca gacattccag    360

gcaccacaga tgttacattt ggaagagaga tggtgagcta cgagatgcca aggccaaaca    420

taggaatcca caggtttgtg tttgttcttt tcaagcagaa acgaaggcag tcggtgaacc    480

caccttcctc aagggatcac ttcaacaccc gatgcttcgc agccgaaaat gacctcggtc    540

ttcctgttgc cgccgtttac ttcaatgcgc agagagaaac ggcagcaaga agacgctagc    600

tagctaggca gctagcagga ggcaggtccg accccaaaag attccatgct ataacggtat    660

aaccacaaca cctaattaaa taaaagaaaa gtgtgattaa tgaattattc ctccctatgg    720

ctaggttatt aggctaaaat tactcggatg ttaccacaat aatttcccca aagagagctg    780

tacgtgaatg tttgtg                                                    796

<210>6

<211>1511

<212>DNA

<213>玫瑰(Rosa rugosa)

<400>6

cctcctctta tatactcttc ttcttctcaa gagatctaaa gcaactagtt gcgtacttga     60

gatcactata aatacagagc gatacaggga ttccaattgc aagcaaagga aaatattaga    120

agtacaatcc ttccttcctt agtcttatct atctttgata tttgtacgac cttatctcct    180

ctctcgcttt tgagtactaa aaatggcaag aatgtcggaa cccttagttg ttggaagagt    240

cataggagat gttcttgatt actttacccc aactactaaa atgattgtca cttacaacac    300

caaactcgtc ttcaatggac atgagctcta cccatctgca gtcaccgcca aacctagagt    360

tgagattcaa ggaggcgaca tgagatcatt cttcactctg gtacggtaca catcgttttt    420

tttttttttt tctgggctcc tttgttcgcc gattgtgttt gatcagatct acgaaatcgc    480

taagttaatt gattttgatt cacaggtgat gacagaccca gatgttcctg gccccagtga    540

tccttatttg aaggagcacc tgcactggta taacttacag tatatattct ctactatcaa    600

acctagaaac gaaaaaacaa agacaataaa cattcagtta attaaattca gactattgtc    660

agagaaataa aagcaagtaa agagtaaata ttatggcata gggtgtggct attggcaccc    720

tatcaattca ttttcacatc ctacatcaac ttttttgtca tagactacca attctaaaag    780

caagtaggaa ctaggaagta catattatgg catatataga ctctgaatta gaaaagctag    840

caaacaataa ttatggagta tatacatacc aagctaggag ctaacatttt tgccttgaaa    900

ttggactata caggattgtg acagacattc caggcaccac agatgttaca tttggtaggt    960

taattcacta gttcagctac cagttatacg gctagtgatg atcagcacta atattgttca   1020

tcgttctggt cttaacttga atgaattata tacttcatta acaggaagag agatggtgag   1080

ctacgagatg gcaaggccaa acataggaat ccacaggttt gtgtttgttc ttttcaagca   1140

gaaacgaagg cagtcggtga acccaccttc ctcaagggat cacttcaaca cccgatgctt   1200

cgcagccgaa aatgacctcg gtcttcctgt tgctgccgtt tacttcaatg cgcagagaga   1260

aacggcagca agaagacgct agctagctag gcagctagca ggaggcaggt ccgaccccaa   1320

aagattccat gctataacgg tataaccaca acacctaatt aaataaaaga aaagtgtgat   1380

taatgaatta ttcctcccta tggctaggtt attaggctaa aattactcgg atgttaccac   1440

aataatttcc ccaaagagag ctgtaagtga atgtttgtgt gactctcatt tagttgttgg   1500

tctctctccg t                                                        1511

Claims (1)

1.一种蛋白质，是如下（a）或（b）的蛋白质：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2、编码权利要求1所述蛋白的基因。

3、如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下1）或2）或3）或4）的DNA分子：

1）序列表中序列2所示的DNA分子；

2）序列表中序列3所示的DNA分子；

3）序列表中序列5所示的DNA分子；

4）序列表中序列6所示的DNA分子。

4、含有权利要求2或3所述基因的重组载体、表达盒或重组菌。

5、扩增权利要求2或3所述基因的引物对。

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