CN101990435A - Toll样受体3的选择性激动剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种错配双链核糖核酸，所述错配双链核糖核酸是Toll样受体3(TLR3)的激动剂，并在体内或体外用作抗微生物剂、抗增殖剂和/或免疫刺激剂。聚(I:C11-14U)是比聚(I:U)更具有选择性的TLR3激动剂，虽然这两种双链RNA在结构上类似。

Description

TOLL样受体3的选择性激动剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2008年2月15日提交的申请第6I/029,307号和2008年5月8日提交的申请第61/051,606号的权益。
技术领域
本发明涉及提供一种TOLL样受体3(TLR3)的激动剂，所述激动剂用作抗感染剂(例如，用于治疗或预防由至少一种或多种细菌、原生动物或病毒引起的感染)、抗增殖剂(例如用于至少治疗包括病毒诱导的癌在内的癌)和/或免疫刺激剂(例如用于通过在使用或不使用预防接种时刺激免疫而治疗至少传染病或癌)。本发明还提供医学治疗方法和药物制备方法。
背景技术
如聚(I:C)(poly(I:C))等双链RNA已被用作TLR3激动剂。但其作为药物的有用性受其毒性限制。因此寻求改进的药物，所述改进药物可以通过特异性靶向TLR3、而不靶向属于该家族的其它受体而用作抗感染剂、抗增殖剂、和/或免疫刺激剂。例如，理想的药物会具有较高的治疗指数(例如产生毒性作用的剂量除以产生治疗作用的剂量之比，如LD50除以ED50)，以用于治疗初期感染或已建立的感染、治疗前癌性或癌性病况，而不会引起过度的由TLR3介导的促炎性响应。
双链核糖核酸(dsRNA)通过dsRNA依赖性细胞内抗病毒防御机制(包括2′，5′-寡腺苷酸合成酶/RNA酶L和p68蛋白激酶途径)触发先天性免疫(例如产生宿主防御)。但聚(I:C)还激活TLR3，并由此诱导促炎性趋化因子和细胞因子的分泌。参见WO2006/060513第3-4页。这会引发或增强有害的炎症过程，而不是选择性激活TLR3从而介导有益免疫的发展。据认为聚(I:C)引起与以下病况相关的坏死：炎症、系统性炎症反应综合征、感染相关的急性细胞因子风暴和诸如类风湿性关节炎和炎性肠病等慢性自身免疫疾病。WO2006/060513教导使用TLR3拮抗剂作为用于各种适应症的药物会是有益的。因此，令人惊奇的是，在本发明中发现了TLR3的选择性激动剂作为药物的应用。
来自
Figure BPA00001234700900021
Biopharma的
Figure BPA00001234700900022
poly(I:C12U)是特别构造的dsRNA，其具有抗病毒性和免疫刺激性，但展示出较低的毒性。
Figure BPA00001234700900023
poly(I:C12U)通过多效活性(pleiotropic activities)抑制病毒和癌细胞生长：如同其它dsRNA分子那样，其调节2′，5′-寡腺苷酸合成酶/RNA酶L和p68蛋白激酶途径。本发明人现已发现，本发明的经特别构造的dsRNA通过充当TLR3的特异性激动剂而在体内介导其效应。令人惊奇的是，与仅对特定微生物有效的其它化学治疗剂(例如，抗细菌的青霉素、抗疱疹的碘苷和抗疟疾的氯喹)不同，本发明教导指出，聚(I:C11-14U)作为通过直接作用于免疫系统而对治疗细菌、病毒和原生动物有效的抗微生物化学治疗剂上具有广泛应用。施用聚(I:C11-14U)避免了对于聚(I:C)观察到的副作用，例如引发或增强有害炎症过程。
本发明的目的在于为需要抗感染剂、抗增殖剂和/或免疫刺激剂的患者提供治疗。与聚(I:C)相比，本发明特别构造的dsRNA是TLR3的更具有选择性的激动剂，虽然这两种双链RNA结构相似。由此对选择性TLR3激动剂的长期以来的需要得到解决。本发明还提供了用于治疗受试对象的方法和药物(特别是涉及传染病、细胞增殖和/或预防接种的药物)的制备方法。以下描述其它目的和优点。
发明内容
本发明可用于治疗罹患初期或已建立的微生物感染、特征在于异常细胞增殖(例如赘生物或肿瘤)的病理性状况的受试对象(例如，人类或动物)，或用作免疫刺激剂以治疗受试对象的由感染、异常细胞增殖或者因自身免疫或神经退行性变所致细胞损伤中的至少一者引起的疾病或病况。优选的是，所用的错配双链核糖核酸(dsRNA)的量足以结合受试对象免疫细胞上的TOLL样受体3(TLR3)。可以由此触发先天性免疫或适应性免疫。具体而言，可以使用特别构造的dsRNA来激活TLR3而不会激活诸如TLR4等其它Toll样受体或诸如RIG-I或mda-5等RNA解旋酶，或不会引起如采用非选择性TLR3激动剂聚(I:C)所看到的过度的促炎性响应。
受试对象可以被至少一种或多种细菌、原生动物或病毒感染。对受试对象施用由其量足以结合TLR3的特别构造的dsRNA组成的药物组合物。因此与未用特别构造的dsRNA治疗的受试对象相比，如对于恢复时间的降低、免疫提高(例如，增加的抗体滴度、淋巴细胞增殖、受感染细胞的杀伤或自然杀伤(NK)细胞活性)、微生物分裂或生长的减少或者其任意组合所检测，受试对象的感染得以减少或消除。优选治疗所诱导的免疫对微生物具有特异性。
受试对象可以罹患异常细胞增殖(例如，赘生物或肿瘤、其它转化细胞)。对受试对象施用由其量足以结合TLR3的特别构造的dsRNA组成的药物组合物。因此与未用特别构造的dsRNA治疗的受试对象的情况相比，如对于发病率或死亡率的改善、免疫的提高(例如，增加的抗体滴度、淋巴细胞增殖、增殖细胞或转化细胞的杀伤、NK细胞活性)、增殖细胞或转化细胞的分裂或生长的减少或者其任意组合的检测，受试对象中的疾病得以减少或消除。
可以在受试对象中诱导树突细胞成熟。可以将能够摄取抗原的未成熟的树突细胞诱导分化成能够呈递抗原和启动适应性免疫响应的更成熟的树突细胞(例如抗原特异性T细胞)。在从未成熟树突细胞转化为成熟树突细胞期间，其至少可以：主要组织相容性复合物(MHC)分子、共刺激分子(costimulatory molecule)、粘附分子或趋化因子受体的细胞表面表达的改变；抗原摄取的减少；趋化因子、细胞因子或蛋白酶分泌的增加；树突过程的生长；其细胞骨架的重组(reorganize)；或这些方面的组合。可以诱导树突细胞通过血液或淋巴迁移到炎症或淋巴样组织的位点，从而接近微生物、赘生物或肿瘤细胞或其它转化细胞。
可以针对至少一种感染或癌对受试对象进行预防接种。有时，可以治疗例如病毒诱导的癌、同时治疗感染和癌。即临接种前、接种期间或接种后即刻(例如，接种10天内)，对受试对象施用由其量足以结合TLR3的特别构造的dsRNA组成的药物组合物。由此刺激针对疫苗或树突细胞制剂的免疫响应。疫苗或树突细胞制剂可以包含：杀死的、固定的或减毒的全微生物或细胞(例如增殖或转化的细胞)；微生物或细胞(例如增殖或转化的细胞)的裂解物或纯化组分；一种或多种分离的微生物抗原(例如，天然的、化学合成的或重组产生的)；或一种或多种分离的肿瘤抗原(例如，天然的、化学合成的或重组产生的)。原位接种可以通过在某位点或朝向该位点的循环处的受试对象的抗原(例如，天然感染或细胞生长中产生的抗原、或脱落抗原(shed antigen))的生成而实现，并且特别构造的dsRNA在其上充当佐剂。
抗原呈递细胞(例如B淋巴细胞、树突细胞、巨噬细胞)和粘膜组织(例如胃上皮和呼吸道上皮)是特别构造的dsRNA的优选体内靶标。可以呈递微生物抗原或肿瘤抗原，并且所述抗原应该易受专一地充当TLR3激动剂的特别构造的dsRNA的单独作用的影响。微生物、癌细胞或其它转化细胞可能易受由专一地充当TLR3激动剂的特别构造的dsRNA激活的特定细胞因子响应模式的影响。优选通过以下方式施用特别构造的dsRNA：静脉内输注；皮内注射、皮下注射或肌内注射；鼻内吸入或气管内吸入；或者口咽施用或舌下施用。
本发明还提供了药物的应用和制备方法。然而，应该注意，涉及产品的权利要求不必受这些方法限制，除非在产品权利要求中陈述了方法的特定步骤。
根据以下对具体实施方式的描述和权利要求以及对其的概括，本发明的其它方面将对本领域技术人员变得显而易见。
附图说明
图1显示使用5μg α-DEC-gag和50μg聚(I:C)的初免-加强免疫提供针对痘苗gag病毒(vaccinia gag virus)的气道攻击(airway challenge)的保护性免疫。(A)平均体重减损和(B)肺中的痘苗空斑形成(plaque-forming)滴度以来自六个实验(BALB/c和C57BL/6小鼠各3个(除对照Ig-p24外；BALB/c中n＝2))的攻击后平均值±SD表示。使用指定疫苗以6周的间隔对小鼠进行初免和加强。对另一组仅在加强时使用α-DEC-p24和聚(I:C)进行免疫。加强后6周～8周，使用5×104PFU痘苗-gag对小鼠在鼻内进行攻击。(C)平均体重减损和(D)肺中的痘苗空斑形成滴度以来自两个类似实验之一(使用α-DEC-p41对C57BL/6、DEC-205-/-和TLR3-/-小鼠各5只进行免疫)的攻击后平均值±SD表示。加强后6周～8周，使用5×104PFU痘苗-gag对小鼠在鼻内进行攻击。
图2显示聚(I:C12U)充当TLR3依赖性方式的5μgα-DEC-p24疫苗的CD4+T细胞免疫的佐剂。(A)对CxB6F1小鼠腹膜内注射α-DEC-p24以及梯度剂量的聚(I:C)、聚(I:C12U)或PBS的任一种，然后6周后用相同的条件进行加强。加强后一周响应于HIV gag p17或p24混合物的产生IFN-γ的和增殖CD3+CD4+T细胞的百分比以平均值±SD表示(n＝4只小鼠)。(B)在用两次剂量的α-DEC-p24以及50μg聚(I:C)或250μg聚(I:C12U)进行免疫的野生型、TLR3-/-和MDA5-/-小鼠中由CD4+脾细胞的响应于HIVgag p24肽的IFN-γ分泌。
图3显示对用α-DEC p24和聚(I:C12U)进行初免-加强免疫的HIV gag特异性CD4+T细胞响应进行的表征。对C57BL/6小鼠皮下注射5μg的α-DEC-p24以及聚(I:C12U)(2μg、10μg或50μg)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，然后6周后用相同的条件进行加强。对另一组仅在加强时用5μg的α-DEC-p24和50μg聚IC进行免疫。两周后，对响应于HIV gag p24肽混合物的门控(gated)CD3+脾T细胞中IFN-γ+、TNF-α+、IL-2+、CD4+T细胞的频率进行分析。(A)各疫苗组的产生IFN-γ、TNF-α或IL-2的CD4+T细胞的总频率。(B)通过饼图图示的各疫苗组中表达所有3种细胞因子的CD4+T细胞(红色)、表达任何2种细胞因子的CD4+T细胞(蓝色)和表达任何1种细胞因子的CD4+T细胞(绿色)占总细胞因子响应的百分比。显示出产生细胞因子的CD4+T细胞的总频率。
具体实施方式
可以治疗由微生物引起的感染。它们可以感染人类或动物受试对象。感染可以是初期感染或已建立的感染。微生物可以是细菌、原生动物或病毒；特别是引起疾病的那些微生物(即，病原性微生物)。这里，术语“微生物(microbe)”和“微生物体(microorganism)”相互替换地使用。
细菌可以是以下属的种：芽孢杆菌属(Bacillus)(例如，炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus))、巴尔通氏体属(Bartonella)(汉氏巴尔通氏体(B.henselae))、博德特氏菌属(Bordetella)(例如，百日咳博德特氏菌(B.pertussis))、疏螺旋体属(Borrelia)(例如，布氏疏螺旋体(B.burgdorferi))、布鲁氏菌属(Brucella)(例如，流产布鲁氏菌(B.abortus))、弯曲杆菌属(Campylobacter)(例如，空肠弯曲杆菌(C.jejuni))、衣原体属(Chlamydia)(例如，肺炎衣原体(C.pneumoniae))、梭菌属(Clostridium)(例如，肉毒梭菌(C.botulinum)、艰难梭菌(C.difficile)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)、破伤风梭菌(C.tetani))、棒杆菌属(Corynbacterium)(例如，无枝菌酸棒杆菌(C.amycolatum)、白喉棒杆菌(C.diphtheriae))、埃希氏菌属(Escherichia)(例如，大肠埃希氏菌(E.coli O175:H7))、嗜血菌属(Haemophilus)(例如，流感嗜血菌(H.influenzae))、螺杆菌属(Heliobacter)(例如，幽门螺杆菌(H.pylori))、克雷伯氏菌属(Klebsiella)(肺炎克雷伯氏菌(K pneumoniae))、军团菌属(Legionella)(例如，嗜肺军团菌(L.pneumophila))、利斯特氏菌属(Listeria)(例如，单核细胞增生利斯特氏菌(L.monocytogenes))、分枝杆菌属(Mycobacterium)(例如，鸟分枝杆菌(M.avium)、牛分枝杆菌(M.bows)、布兰德里分枝杆菌(M.branderi)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、结核分枝杆菌(M.tuberculosis))、支原体属(Mycoplasma)(例如，生殖支原体(M.genitalium)、肺炎支原体(M.pneumoniae))、奈瑟氏球菌属(Neisseria)(例如，淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrheae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis))、肺孢子虫属(Pneumocystis)(例如，卡氏肺孢子虫(P.carinii))、假单胞菌属Pseudomonas)(铜绿假单胞菌(P.aeruginosa))、立克次氏体属(Rickettsia)(例如，立氏立克次氏体(R.rickettsis)、斑疹伤寒立克次氏体(R.typhi))、沙门氏菌属(Salmonella)(例如，肠沙门氏菌(S.enterica))、志贺氏菌属(Shigella)(例如，痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae))、葡萄球菌属(Staphylococcus)(例如，金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis))、链球菌属(Streptococcus)(例如，肺炎链球菌(S.pneumoniae)、酿脓链球菌(S.pyogenes))、密螺旋体属(Treponema)(例如，苍白密螺旋体(T.pallidum))、弧菌属(Vibrio)(例如，霍乱弧菌(V.cholerae)、创伤弧菌(V.vulnificus))或耶尔森氏菌属(Yersinia)(例如，鼠疫耶尔森氏菌(V.pestis))。这些细菌包括革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌、衣原体、螺旋菌、分枝杆菌和支原体。
原生动物可以是以下属的种：隐孢子虫属(Cryptosporidium)(例如，人隐孢子虫(C.hominis)、微小隐孢子虫(C.parvum))、内阿米巴属(Entamoeba)(例如，溶组织内阿米巴(E.histolytica))、贾第鞭毛虫属(Giardia)(例如，肠贾第鞭毛虫(G.intestinalis)、蓝氏贾第鞭毛虫(G.lamblia))、利什曼原虫属(Leishmania)(例如，亚马逊利什曼原虫(L.amazonensis)、巴西利什曼原虫(L.brasiliensi)、杜氏利什曼原虫(L.donovani)、墨西哥利什曼原虫(L.mexicana)、热带利什曼原虫(L.tropica))、疟原虫属(Plasmodium)(例如，恶性疟原虫(P.falciparum)、问日疟原虫(P.vivax))、弓形虫属(Toxoplasma)(例如，刚地弓形虫(T.gondii))、或锥虫属(Trypanosoma)(例如，布氏锥虫(T.bruci)、克氏锥虫(T.cruzi))。
病毒可以是感染人类和动物的DNA或RNA病毒。DNA病毒包括属于以下科的病毒：腺病毒科(Adenoviridae)、虹彩病毒科(Iridoviridae)、乳头瘤病毒科(Papillomaviridae)、多瘤病毒科(Polyomavirididae)和痘病毒科(Poxviridae)(第I组双链DNA病毒)；细小病毒科(Parvoviridae)(第II组单链DNA病毒)。RNA病毒包括属于以下科的病毒：双核糖核酸病毒科(Birnaviridae)和呼肠孤病毒科(Reoviridae)(第III组双链RNA病毒)；动脉炎病毒科(Arteriviridae)、星状病毒科(Astroviridae)、杯状病毒科(Caliciviridae)、肝炎病毒科(Hepeviridae)和杆状套病毒科(Roniviridae)(第IV组正单链RNA病毒)；和沙粒病毒科(Arenaviridae)、博尔纳病毒科(Bornaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、纤丝病毒科(Filoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)和弹状病毒科(Rhabdoviridae)(第V组负单链RNA病毒)。还已知特别构造的双链核糖核酸(dsRNA)能治疗由来自疱疹病毒科(Herpesviridae)的DNA病毒以及来自黄病毒科(Flaviviridae)、肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)和披膜病毒科(Togaviridae)的RNA病毒引起的感染；这些科的病毒可以包括在本发明的范围内，也可以不包括在本发明的范围内。
经历异常增殖的受试对象的细胞可以是赘生物或肿瘤(例如癌、肉瘤、白血病、淋巴瘤)，特别是由肿瘤病毒(例如，携带转化基因或癌基因的DNA病毒或RNA病毒)转化的细胞或是被与癌相关的病毒感染的细胞。例如，Epstein-Barr病毒(EBV)与鼻咽癌、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤和其它B细胞淋巴瘤相关；人类乙型肝炎和丙型肝炎病毒(HBV和HCV)与肝癌相关；人类疱疹病毒8(HHV8)与卡波西肉瘤相关；人类乳头瘤病毒(例如，HPV6、HPV11、HPV16、HPV18或其组合)与子宫颈癌、肛门癌和生殖器疣相关；嗜人T淋巴细胞病毒(human T-lymphotrophic virus，HTLV)与T细胞白血病或淋巴瘤相关。癌包括源自以下器官系统的癌：胃肠器官系统(例如，食道、结肠、小肠、回肠、直肠、肛门、肝、胰、胃)、泌尿生殖器官系统(例如，膀胱、肾、前列腺)、肌肉骨骼器官系统、神经器官系统、肺器官系统(例如肺)或生殖器官系统(子宫颈、卵巢、睾丸)。
聚(核糖肌苷)会与聚((核糖胞嘧啶)12尿嘧啶)部分杂交，并且能够表示为rIn·r(C12U)n。其它的可以使用的特别构造的dsRNA基于选白聚(CnU)和聚(CnG)(其中n为4～29的整数)的共聚核苷酸，或是聚核糖肌苷酸和聚核糖胞苷酸的复合物的错配类似物，其通过对rIn·rCn进行修饰以便沿聚核糖胞苷酸(rCn)链并入未配对碱基(尿嘧啶或鸟嘌呤)而形成。作为另一种选择，错配dsRNA可以通过对聚核糖肌苷酸(rIn)的核糖基主链进行修饰(例如通过包括进2′-O-甲基核糖基残基)而从r(I)·r(C)dsRNA衍生。错配dsRNA可以与诸如赖氨酸纤维素等稳定RNA的聚合物配合。在rIn·rCn的这些错配类似物中，优选的错配类似物具有通式rIn·r(C11-14U)n，并描述于美国专利4,024,222和4,130,641中；通过参考将其并入。其中描述的dsRNA通常适于本发明的应用。也见美国专利5,258,369。
可以以任何合适的局部或系统途径施用特别构造的dsRNA，所述局部或系统途径包括：经肠施用(例如，口服、饲管、灌肠)、局部施用(例如，作用于上皮(epicutaneously)的贴剂、作用于直肠或阴道的栓剂)和胃肠外施用(例如，透皮贴剂；皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射、皮内注射或腹膜内注射；颊部施用、舌下施用或透粘膜施用；鼻内或气管内吸入或滴注)。可以将核酸微粉化以用于吸入，溶解于载体(例如，无菌缓冲盐水或水)以用于注射或滴注，或包封于脂质体或其它载剂以用于定向输送。优选的是可以将核酸靶向位于抗原呈递细胞或上皮上的TLR3受体的载剂。例如，未成熟树突细胞可以与皮肤、粘膜或淋巴样组织接触。可以理解，优选途径可能根据受试对象的状况和年龄、感染性疾病或赘生性疾病的性质以及所选择的活性成分而有所不同。
所述核酸的推荐剂量取决于治疗病毒性感染或负荷肿瘤期间受试对象的临床状态和医师或兽医师的经验。可以将特别构造的dsRNA以约200mg～约400mg的剂量通过静脉内输注对70kg的受试对象以每周两次的方案施用，但剂量和/或频率可以由医师或兽医师根据受试对象的状况而改变。表达TLR3的细胞或组织是所述核酸优选的输送位点，特别是抗原呈递细胞(例如，树突细胞和巨噬细胞)和内皮(例如，呼吸系统和胃系统)。特别构造的dsRNA的影响可以通过TLR3基因突变(例如，缺失)、其表达的下调(例如，siRNA)、与TLR3配体结合位点的竞争剂(例如，中和抗体)或受体拮抗剂的结合、或TLR3信号传导途径的下游成分(例如，MyD88或TRIF)的干扰而受到抑制或阻断。
poly(I:C12U)为剖析TLR3激活对免疫系统的影响提供了此前未获得的选择性试剂。诸如TLR适体MyD88和TRIF等其它试剂分别通过所有TLR或TLR3/TLR4介导信号传导。因此，通过MyD88或TRIF的信号传导的激活或抑制不会将生物学效应限制于由TLR3介导的那些效应。由于TLR3的存在和其信号传导是
Figure BPA00001234700900092
poly(I:C12U)充当受体激动剂的必要条件，可以在施用该激活剂之前，检测受试对象的细胞或组织中的TLR3突变的缺乏、TLR3蛋白的存在、无损的TLR3介导信号传导或其任何组合。可以在施用所述激动剂之前、期间或之后进行TLR3活性的这种确认。所述激动剂可用于将免疫响应限制于激活TLR3而不激活其它Toll样受体或RNA解旋酶。例如，异常细胞因子(例如，IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12)的产生或共刺激分子(例如，CD80、CD83、CD86)的信号传导可以由微生物引起的感染、异常细胞增殖、自身免疫损伤或神经退行性变中的至少一者引起。可以通过使用聚(I:C12U)作为TLR3的特异性激动剂来对这种异常进行再调节。可以通过抗原(或其肽类似物)与配体(或受体)的缀合改进抗原呈递，所述配体(或受体)特异性地结合到一种或多种抗原呈递细胞的细胞表面(特别是内体-吞噬体内化途径(internalizing pathway)的成分)。所述特异性结合分子可以是细胞表面分子的抗体或其衍生物(例如，Fab、scFv)。
实施例
实施例1
人类受试对象
通过带知情同意书招募人类患者，并由研究负责人选择作为用于进行额外的血清细胞因子水平和树突细胞成熟标记物表达的分析的潜在志愿者。患者可以是新参加者，或是重新开始聚(I:C12U)治疗者。
免疫调查组的表现
我们的免疫调查组(Immune Panel)由细胞因子血清水平(干扰素、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12)和血细胞上的免疫标记物(CD80、CD83、CD86)的测定组成。对于同意这些测定的患者，在起始输注200mg聚(I:C12U)和随后输注400mg聚(I:C12U)之前以及在输注后4±1/2小时、24±2小时和72±2小时，从新参加的受试对象和重新开始聚(I:C12U)输注的受试对象收集血液样品。选择指定的收集时间以包含聚(I:C12U)输注之间的时间点。对这些样品进行免疫调查。对于细胞因子分析，将来自血液样品的血清在-70℃冷冻，然后在冷冻状态从研究地点运输到Hemispherx Biopharma，Inc.(New Brunswick，NJ)。还将肝素化全血样品在常温从研究地点过夜运送，以由Celldex Therapeutics，Inc.(Phillipsburg，NJ)进行CD80、CD83和CD86的流式细胞分析。
使用酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒根据制造商说明测定干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)和炎性细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12p70)水平。
ELISA试剂盒
所检测细胞因子  制造商                        批号
IFN-α          PBL Biomedical Laboratories   3659
IFN-β          BioSource                     GL61204
IFN-γ          BioSource                     1373742B
TNF-α          BioSource                     063704
IL-6            BioSource                     064004B
IL-10           BioSource                     064405C
IL-12p70        BioSource                     065004
试剂盒来自PBL Biomedical Laboratories，Piscataway，NJ和BioSource International，Camarillo，CA。
Celldex Therapeutics，Inc.(Phillipsburg，NJ)承办CD80、CD83和CD86表达的流式细胞分析。过夜运送后，在接收到1小时内进行血液样品的染色。使用标准流式细胞法来进行细胞标记物分析和血红细胞裂解。基于单核细胞、淋巴细胞和NK细胞标记物的低表达水平以及高HLA-DR表达来鉴定树突细胞。还根据CD11c和CD123的表达来表征树突细胞。通过侧向散射分析和单核细胞谱系标记物的表达来鉴定单核细胞。在细胞类型鉴定后进行对CD80、CD83和CD86表达的分析。来自健康志愿者的测定值充当对照，并且指示出成熟DC的标记物(例如CD80、CD83和CD86)表达的正常分布和水平。
结果
细胞因子水平：对各患者的细胞因子分析的结果示于表1和表2。对于相对于空白标准物吸光度为负值的结果、或在制造商报告的试剂盒检出限(DL)以下的结果使用0为值。如果制造商未规定DL或指出DL小于给定值，则使用所有结果。如果制造商提供了预期的正常细胞因子范围，则将其包含作为参考。
表1.聚(I:C12U)输注后干扰素水平的动力学
Figure BPA00001234700900111
NR，正常范围；NP，试剂盒制造商未提供
表2.聚(I:C12U)输注后细胞因子水平的动力学
Figure BPA00001234700900122
NR，正常范围；NP，试剂盒制造商未提供
计算平均值和标准偏差(SD)。但是由于患者的数量少和数据可变性，对平均值的解读受到限制。不同患者之间的细胞因子水平基线变化很大。这并不让人惊奇，因为免疫系统激活指标的不一致是经诊断患有慢性疲劳综合征(CFS)的患者的特征，并且使得难以开展诊断测试。为了便于数据解释，以每个患者为基础给出细胞因子数据。给出了对数据的描述性讨论。未进行统计分析。
四个患者中的三个具有升高的输注前IFN-α和IFN-γ水平，并且四个中的两个具有高的输注前IFN-β水平。考虑IFN-α水平的变化，一个患者(LDM-010)在输注后所有后续时间点具有比输注前低的水平，一个患者(JOG-020)在所有时间点具有不可检测的水平，并且两个患者在至少一个输注后的时间点具有增加的水平。IFN-α的最大增加比输注前水平高2％～15％。在所有时间点具有不可检测的IFN-α水平的同一患者(JOG-020)还具有不可检测的IFN-β水平。所有其它患者在至少一个时间点具有增加的IFN-β水平，但一个患者(DMM-111)的IFN-β水平的增加显著低于(约0.1％)对其它患者所测定的水平。其它两个患者的IFN-β的最大增加比输注前水平高出4.3％～12％。除了一个患者之外的所有患者展示出在至少一个输注后时间点的IFN-γ增加；第四个患者(LDM-010)在所有时间点具有不可检测的水平。对于所述患者中的两个，IFN-γ的最大增加比输注前水平高3.7％～21％。一个患者(DMM-111)展示出在输注后4小时比输注前水平增加397％，但随后的测定值低于输注前基线。所有患者在输注后72小时具有的IFN-α、IFN-β和IFN-γ的水平是输注前水平或低于输注前水平。
基于健康个体0～20pg/mL的预期范围，所有患者具有正常的TNF-α输注前水平。相对于输注前水平，所有患者在输注后各时间点都表现出TNF-α的小幅增加，虽然一个患者(DMM-111)在72小时时间点的水平相对于4小时和24小时时间点水平降低，但所有患者保持在正常范围。TNF-α的最大增加比输注前水平高32％～241％。如同TNF-α一样，在各时间点的IL-10平均结果在预期的正常浓度之下。两个患者(LDM-101、JOG-020)表现出在预期范围内的升高，两个患者(JLC-109、DMM-111)增加到预期浓度之上。仅一个患者(DMM-111)的IL-10水平在72小时时在预期浓度之上；该患者的IL-10水平在72小时时比输注前水平的3倍更高。所有患者具有升高的IL-12p70输注前水平(预期范围为至多0.79pg/mL)，除了一个患者之外的所有患者在所有时间点表现出相对输注前水平的持续增加。唯一的IL-12p70未持续增加的患者(DM-111)在72小时时的水平减少至比输注前水平低2.2％。IL-12p70的最大增加比输注前水平高32％～158％。
四个患者中的三个的IL-6输注前水平升高。一个患者(JOG-020)的IL-6水平在所有输注后时间点相对于输注前降低。对于输注前IL-6不可检测的一个患者(DMM-111)，该水平在输注后4小时时增加至较高水平，然后返回基线。同一患者在输注后4小时表现出IFN-γ和TNF-α的峰值。仅一个患者(LDM-010)的IL-6水平在72小时时比输注前高。仅一个患者(DMM-111)具有可检测的IL-10输注前水平，并且该水平未极大地增加超过预期浓度(低于1pg/mL)。
细胞因子分析的结果表明，IL-12p70的输注前水平升高和输注聚(I:C12U)后72小时的适度增加。然而，在监视的输注后期间在IFN-α、IFN-β和IFN-γ水平上无明显差异，平均TNF-α和IL-10水平在各时间点均在预期的正常范围内，对于四个患者中的3个在输注后72小时IL-6响应降低到输注前水平。总之，未证实细胞因子水平(包括促炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-12)调节的实质模式。
树突细胞成熟标记物
除非另外指出，DC成熟标记物分析的结果由阳性染色细胞的百分比和表达水平(平均荧光强度，MFI)表示，并且表示为平均值(SD)。未用聚(I:C12U)治疗的健康志愿者的数据作对照报导。由于CD80、CD83和CD86数据的较大可变性，所包括的表格基于每个个体来详细描述结果。未进行统计分析。
CD123+DC、CD11+DC和单核细胞的平均值(SD)百分比示于表3。将健康志愿者的值作为正常值包括在内(参见表4)。未进行统计分析。健康志愿者不接受聚(I:C12U)输注。报道CFS患者相对于聚(I:C12U)输注的指定时间点的值。计算所有患者在各时间点的所有测定的平均值。
表3.聚(I:C12U)对细胞群的作用
Figure BPA00001234700900151
a健康志愿者不接受聚(I:C12U)输注。
表4.健康志愿者中树突细胞类型百分比的个体结果
Figure BPA00001234700900152
Figure BPA00001234700900161
CFS患者的输注前的值与健康志愿者水平相当，CD11+细胞的百分比处于由平均值和SD限定的健康志愿者范围的下限。CD123+细胞在输注后4小时，和CD11+细胞和单核细胞在输注后24小时，平均值低于对健康志愿者的测定值。由于样品群体较小，一个患者所经历的变化会显著地影响结果。例如，患者DMM-111从输注前到输注后4小时经历了CD123+细胞的百分比的10倍下降(参见表5)。一个一致变化为由CFS患者在输注后24小时所表现出的单核细胞百分比的降低。单核细胞数量在输注后72小时恢复(参见表5)。总体而言，CD123+细胞、CD11+细胞和单核细胞(mono)的百分比稍微偏低，但未超出健康志愿者值的范围。
一般而言，使用聚(I:C12U)的治疗使得表达成熟DC标记物CD80、CD83和CD86的细胞的百分比降低，但是增加其表达水平。与不接受聚(I:C12U)的健康志愿者相比，CFS患者倾向于在开始时具有更多的表达水平较低的阳性细胞。因此，聚(I:C12U)降低阳性细胞数量的能力和增加DC成熟标记物表达水平的能力使得CFS患者的情况正常化，因此它们更接近于健康志愿者的情况。
Figure BPA00001234700900171
个体患者结果倾向于反映出表6～8中所示的平均值变化，即在输注后24小时和72小时时间点时阳性细胞比例降低和表达水平增加。该模式存在一些例外。例如，在CD11+细胞中，表达CD80和CD86的细胞的百分比的下降不如在CD123+细胞中那样显著。另外，来自CFS患者的单核细胞与来自健康志愿者的单核细胞在表达CD86的细胞的百分比和在CD86的表达水平方面类似。
表6.聚(I:C12U)输注后CD123+树突细胞中的成熟标记物表达的动力学
Figure BPA00001234700900181
a未接受聚(I:C12U)的健康志愿者；bMFI，平均荧光强度
表7.聚(I:C12U)输注后CD11+树突细胞中的成熟标记物表达的动力学
Figure BPA00001234700900182
a未接受聚(I:C12U)的健康志愿者，bMFI，平均荧光强度
表8.聚(I:C12U)输注后单核细胞中的成熟标记物表达的动力学
a未接受聚(I:C12U)的健康志愿者，bMFI，平均荧光强度
总之，聚(I:C12U)输注不显著影响CD123+DC、CD11+DC或单核细胞的数量。聚(I:C12U)治疗后，CFS患者经历了表达成熟标记物的DC的百分比和CD成熟标记物表达水平的正常化。在所有四个患者中一致性地观察到这些趋势、特别是CD成熟标记物的增加，揭示出一种尚未认识到的截然不同的细胞因子水平调节模式。
实施例2.DsRNA诱导持久保护性的适应性免疫
CD4+Th1型免疫涉及对全球传染病的抗性。为了改善由HIV疫苗诱导的T细胞免疫的功效，开发出一种基于蛋白的直接利用无损淋巴样组织中的树突细胞(DC)的功能的方法。通过靶向DEC-205(一种抗原呈递受体)的抗体，将抗原蛋白选择性地输送到树突细胞。DsRNA独立地充当佐剂，以使得靶向DC的蛋白在粘膜表面(即气道)处诱导保护性CD4+T细胞响应。在施用两剂量靶向DEC的HIV gag p24以及dsRNA后，免疫CD4+T细胞具有与保护性功能相关的定性特征。T细胞可以同时在更长的时间内大量地产生IFN-γ、TNF-α和IL-2。T细胞还响应于HIV gag p24而进行增殖并继续分泌IFN-γ。聚(I:C)的佐剂作用需要TLR3和MDA5受体，但类似的聚(I:C12U)仅需要TLR3(参见以下结果)。当与靶向DC的疫苗一起使用以诱导丰富的具有诸如多功能性和增殖能力等特征的CD4+Th1细胞时，聚(I:C)和聚(I:C12U)都是安全的佐剂。
T细胞介导的免疫涉及对诸如HIV、疟疾和肺结核等全球传染病的抗性。关键成分是CD4+Th1辅助细胞，其能够产生大量的IFN-γ和TNF-α、发挥对MHC II+类靶标的细胞裂解活性以及维持功能性CD8+T记忆细胞。
树突细胞是诱导较强的基于T细胞的响应的抗原呈递细胞。例如，当将抗原离体加载至表达胞吞受体DEC-205(″DEC″)的树突细胞亚类并再输注到小鼠中时，树突细胞扩增主要产生IFN-γ的抗原特异性辅助T细胞。在体内，DEC+树突细胞对MHC I类和II类产物都介导抗原呈递，分别导致杀伤细胞和T辅助细胞的克隆扩增。为了在疫苗设计中更好地利用DC生物学，我们已经开发出将抗原直接靶向胞吞受体DEC-205的方法。
随着抗原的摄入，树突细胞必须分化或成熟化，以对外源抗原免疫。可以使用佐剂来实现这种成熟化，所述佐剂包括用于诸如Toll样受体(TLR)等模式识别受体的经化学限定的配体。TLR配体的类型影响免疫响应的结果。就小鼠和猴中的抗原特异性CD4+和CD8+免疫而言，包括TLR7/8配体与HIV gag p41的缀合物的TLR配体充当活性佐剂。
尚未评价作为使用靶向DC的HIV疫苗的基于T细胞的保护性免疫的潜在安全佐剂的模式识别受体用配体。将dsRNA作为佐剂单独导入，以表明其辅助靶向DC的疫苗诱导CD4+T细胞免疫，所述CD4+T细胞免疫根据现有标准是定量和定性地强健的、并且在肺感染模型中具有保护性。
发展对外来蛋白的免疫需要共施用佐剂。据显示，DsRNA是诱导针对α-DEC-HIV gag p24的强CD4+T细胞响应的优异佐剂，即，分泌IFN-γ的T细胞的频率对应于0.2％～6％的总CD3+CD4+T细胞。但是在疫苗的初免和加强剂量中都需要聚(I:C)。
本领域长期以来的需要是定义天然感染或预防接种期间高质量保护性T细胞的标准。为了评价通过使用dsRNA作为佐剂诱导的CD4+T细胞的质量，将α-DEC-p24和梯度剂量的聚(I:C)在6周中给药。一组仅在加强时接受α-DEC-p24和聚(I:C)。加强后2周，两剂量的α-DEC-p24mAb和50μg聚(I:C)，产生IFN-γ、TNF-α或IL-2的gag特异性CD4+T细胞的频率最高。
对个体gag特异性T细胞分泌多种细胞因子的能力进行了检验。这种多功能性T细胞会更有效地有助于保护性免疫，从而选择感染性病原体(包括HIV)。使用α-DEC-p24和50μg聚(I:C)进行初免-加强免疫后2周，约50％的gag特异性CD4+T细胞产生所有三种细胞因子:IFN-γ、TNF-α和IL-2。若使用两剂量的α-DEC-p24和10μg聚(I:C)、或采用单剂量的α-DEC-p24和50μg聚(I:C)，细胞因子产生者的总频率较低。评估由gag响应性细胞生成的各细胞因子的量(中位荧光强度或MFI)，因为该参数与利什曼原虫(L.major)模型中的保护性CD4+免疫极其相关。产生三种细胞因子(即，IFN-γ、TNF-α和IL-2)的细胞的MFI高于产生两种细胞因子或仅产生一种细胞因子的细胞的MFI。因此，使用α-DEC-p24和dsRNA诱导的效应物CD4+T细胞具有目前与优异的Th1免疫相关的特性(如多功能性和高细胞因子生成)。
为了评价使用α-DEC-p24以及聚(I:C)的初免-加强免疫后HIV gag特异性、生成细胞因子的(“效应物”)CD4+T细胞的持久性，加强后2周～7周进行分析。当总结在BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠中各三次实验的数据时，据显示适应性效应物CD4+T细胞持续至少7周。令人感兴趣的是，产生所有三种细胞因子(即，IFN-γ、TNF-α和IL-2)的细胞的百分比在加强后2周～7周保持稳定。因此，使用dsRNA辅助进行初免-加强免疫后，CD4+效应物T细胞持续数周。
最近的发现表明，CD4+Th1细胞增殖和产生抗HIV-1的IFN-γ的能力与较低的HIV-1RNA和前病毒DNA负荷密切相关。因此，评价了靶向DC的疫苗是否能够诱导这些T细胞特性。加强后2周，CD4+T细胞通过增殖和产生IFN-γ而特异性地响应于gag p24。对阴性对照(即，gagp17肽的混合物)不存在响应。使用两剂量的α-DEC-p24及10μg或2μg的聚(I:C)或单剂量的α-DEC-p24及50μg聚(I:C)时，所见的响应性CD4+T细胞更少。因此，使用α-DEC-p24和dsRNA的初免-加强免疫诱导增殖性CD4+T细胞。
然后评价了使用α-DEC-p24和聚(I:C)的初免-加强后增殖性HIV gag特异性CD4+T细胞的持久性。来自BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠中各三次实验的结果表明，这些CD4+T细胞在脾中维持至少7周。因此，使用α-DEC-p24和50μg聚(I:C)的初免加强诱导了寿命较长的、增殖性的分泌IFN-γ的CD4+T细胞。
另外，聚(I:C)还充当CD4+T细胞对α-DEC-nef响应的佐剂。增殖性的分泌IFN-γ的CD4+T细胞由免疫产生。它们表明，当使用dsRNA作为佐剂时，质量和数量均较好的CD4+T细胞会响应于HIV抗原(nef和gag两者)。
为了确定dsRNA是否能够在粘膜表面产生长期持续的保护性免疫，对BALB/c和C57BL/6小鼠进行接种，然后在用α-DEC-gag和聚(I:C)初免-加强免疫后6周～8周用重组痘苗-gag病毒在鼻内攻击。在最初的保护实验中，剂量为50μg的聚(I:C)给出最佳保护并减少肺中病毒滴度。使用该剂量的聚(I:C)进行了更详细研究。来自BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠中各三次实验的结果表明，在6天～7天中注射有阴性对照(即，PBS)的小鼠体重减损，并且发展出较高的肺中病毒滴度(＞108PFU/ml)。根据两个标准(体重减损的减少和病毒生长)，两剂量的α-DEC-p24和50μg聚(I:C)相对于两剂量的对照Ig-p24或一剂量的α-DEC-p24及聚(I:C)提供了更好的保护。因此，使用α-DEC-gag和dsRNA的初免-加强免疫在粘膜表面引发保护。
当在用痘苗-gag攻击之前CD4+细胞从接种小鼠中耗尽时，通过痘苗攻击验证CD4+T细胞有助于保护。还进行使用DEC-/-null小鼠的攻击实验。观察到保护的缺乏，表明DEC对于发展靶向DC的保护性免疫至关重要。然而，TLR3-/-null小鼠在使用两剂量的α-DEC-p41和聚(I:C)接种后完全受到抵抗痘苗-gag攻击的保护。因此，虽然当使用聚(I:C)作为佐剂时TLR3对于保护不是必需的，但是TLR对于聚(I:C12U)的作用至关重要。
此外，对作为聚(I:C)的类似物的聚(I:C12U)的佐剂活性进行了评价，这是因为聚(I:C12U)即使在高剂量下也显示出极小毒性，但是却具有与聚(I:C)共同的某种免疫调节性。对CxB6 F1小鼠注射两剂量的α-DEC-p24以及剂量增加的聚(I:C)或聚(I:C12U)。加强后一周测定CD3+CD4+T细胞响应于HIV gag p24肽的增殖。两种形式的dsRNA都诱导剂量依赖性和抗原特异性的CD4+T细胞响应。
为了确定使用聚(I:C)和聚(I:C12U)的佐剂活性所需的模式识别受体，比较了野生型小鼠、TLR3-/-null小鼠或MDA5-/-null小鼠的遗传背景。聚(I:C)在TLR3-/-null小鼠中显示出一定的佐剂活性，而令人惊奇的是，聚(I:C12U)在相同的遗传背景下不能产生CD4+IFN-γ分泌型T细胞。两种佐剂在MDA5-/-null小鼠中都引发响应。综上，数据表明，TLR3对于聚(I:C12U)的佐剂作用至关重要，但是聚(I:C)可能既能利用细胞表面受体TLR3也能利用胞浆传感器(cytosolic sensor)MDA5。
树突细胞是T细胞介导的免疫的强力诱导剂。因此，当寻求疫苗功效的改善时，它们是有吸引力的靶标。举例而言，当通过具有靶向抗原蛋白的抗体的缀合物将所述抗原蛋白选择性地输送到APC特异性表面分子时，相对于非靶向抗原，抗原呈递和免疫响应以高得多的效力发展。这里所用的一种受体是胞吞受体DEC-205或CD205，其在T细胞区域中的树突细胞上表达。单独使用dsRNA作为DC成熟刺激物，并且研究CD4+T细胞免疫的质量的几个特点，包括记忆。数据显示，dsRNA具有充当初免-加强的蛋白疫苗佐剂的潜力，所述蛋白疫苗诱导质量和数量优异的寿命较长的保护性Th1CD4+T细胞。
使用dsRNA作为佐剂的CD4+T细胞响应的质量首先通过其多功能性显现，即，T细胞以较大量产生诸如IFN-γ、TNF-α和IL-2等多种细胞因子。还发现靶向DEC的疫苗诱导高频率的产生IFN-γ的和增殖性CD4+T细胞，T细胞免疫的这个特点在现有技术中尚未被其它疫苗方法证明。目前认为增殖性和多功能性CD4+T细胞的频率增加是Th1免疫的宝贵特点，并且与更好的HIV控制和在利什曼原虫模型中更好的保护相关。
使用靶向DC的HIV gag p24的另一令人感兴趣的结果是抵抗痘苗-gag的长期保护性CD4+T细胞免疫以DEC依赖性方式受到诱导。检测CD4+T细胞抵抗痘苗的保护的贡献。既然IFN-γ在抵抗感染中具有关键作用，高水平的IFN-γ以及由CD+Th1辅助细胞引起的受感染的MHC II+靶标的裂解都可有助于由靶向DEC的蛋白连同dsRNA诱导的抗性。
聚(I:C)可以被TLR3内体和MDA5胞浆受体识别。发现TLR3和MDA5都有助于使用聚(I:C)的佐剂作用和保护性免疫。相反，TLR3为聚(I:C12U)的佐剂作用所专有地需要。另外，dsRNA诱导I型干扰素，I型干扰素促进树突细胞导致的交叉呈递和CD8+T细胞的存活。
虽然已经使用dsRNA作为佐剂来在小鼠中加强对疫苗蛋白的免疫原性，此前尚未证明其也具有诱导保护性CD4+T细胞响应的能力。dsRNA-辅助的疫苗蛋白对树突细胞及其胞吞受体DEC-205的靶向应该有助于发展特定类型的Th1CD4+T细胞免疫，该Th1CD4+T细胞免疫涉及几种全球传染病的抗性。
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在陈述数值范围时，应该理解成也描述了该范围内的所有值(例如，1～10还包括1～10之间的每一个整数值以及所有中间范围，例如2～10、1～5和3～8)。术语“约”可指与测定值相关的统计不确定性或数量的可变性，本领域技术人员理解这不会影响本发明的实施或其专利性。
在权利要求含义和其合法等效物范围内的所有修改和替换都包含于本发明范围内。叙述“包括”的权利要求使得可以将其它要素包括在权利要求的范围内；还通过使用连接词“基本上由......组成(即，权利要求范围内允许包括不会在实质上影响本发明实施的其它要素)”或“由......组成(即，除了通常与本发明有关的杂质或无关紧要的活性物之外，仅允许权利要求中列举的要素)”代替术语“包括”进行叙述的这些权利要求来描述本发明。这三个连接词中任何一个都可用于保护本发明。
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另外，除非在权利要求中明确叙述了权利要求的限定之间的关系，否则不会预期权利要求的限定之间存在特定关系(例如，产品权利要求中的组件的排列或方法权利要求中的步骤顺序不是对权利要求的限制，除非特别如此指明)。本文所公开的各要素的所有可能组合或排列都被认为是本发明的方案。类似地，认为对本发明描述的概括是本发明的一部分。
由上述可知，对本领域技术人员显而易见的是，在不背离本发明精神或实质特性的情况下可以将本发明实施为其它具体形式。应该认为描述的实施方式仅是说明性而不是限制性的，这是由于为本发明所提供的合法保护范围由所附权利要求而不是说明书限定。

Claims (16)

1.一种启动仅由Toll样受体3(TLR3)介导的先天性免疫响应的方法，所述方法包括对受试对象至少施用聚(I:C11-14U)，所述聚(I:C11-14U)的量足以激活TLR3而不激活其它Toll样受体或RNA解旋酶，或不会诱导过量的一种或多种促炎性细胞因子。
2.如权利要求1所述的方法，其中，受试对象中由自身免疫损伤或神经退行性病变启动的至少细胞因子产生或共刺激分子信号传导受聚(I:C11-14U)再调节。
3.一种治疗受微生物感染的受试对象的方法，所述方法包括施用由聚(I:C11-14U)组成的药物组合物，所述聚(I:C11-14U)的量足以与Toll样受体3(TLR3)结合并且减少或消除所述微生物对所述受试对象的感染。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述受试对象受到选自由细菌、原生动物或病毒组成的组的微生物感染。
5.一种治疗带有肿瘤或其它转化细胞的受试对象的方法，所述方法包括施用由聚(I:C11-14U)组成的药物组合物，所述聚(I:C11-14U)的量足以与Toll样受体3(TLR3)结合并且减少或消除所述受试对象中的所述肿瘤或其它转化细胞的增殖。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述受试对象被致癌病毒感染。
7.一种治疗至少受微生物感染或者带有肿瘤或其它转化细胞的受试对象的方法，所述方法包括施用由聚(I:C11-14U)组成的药物组合物，所述聚(I:C11-14U)的量足以诱导树突细胞成熟。
8.一种针对微生物或肿瘤对受试对象进行预防接种的方法，所述方法包括施用：(i)诱导针对所述微生物或肿瘤的免疫响应的疫苗或树突细胞制剂，和(ii)由聚(I:C11-14U)组成的药物组合物，所述聚(I:C11-14U)的量足以与Toll样受体3(TLR3)结合并且在所述受试对象中刺激所述疫苗或树突细胞制剂的针对微生物或肿瘤抗原的免疫响应。
9.如权利要求3～8中任一项所述的方法，其中，所述微生物或癌或其它转化细胞易受专一地充当TLR3激动剂的聚(I:C11-14U)的单独作用的影响。
10.如权利要求3～8中任一项所述的方法，其中，所述微生物或癌或其它转化细胞易受由专一地充当TLR3激动剂的聚(I:C11-14U)激活的特定细胞因子响应模式的影响。
11.如权利要求3～10中任一项所述的方法，其中，所述微生物或癌或其它转化细胞表达抗原，所述抗原被聚(I:C11-14U)自发性选择为原位标靶从而启动针对所述抗原的免疫响应。
12.如权利要求3～11中任一项所述的方法，其中，由受试对象中所述微生物或癌或其它转化细胞启动的至少细胞因子产生或共刺激分子信号传导受聚(I:C11-14U)再调节。
13.如权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，所述受试对象是人类。
14.如权利要求1～13中任一项所述的方法，其中，将聚(I:C11-14U)静脉内输注。
15.如权利要求1～14中任一项所述的方法，其中，通过以下方式施用聚(I:C11-14U)：皮内注射、皮下注射或肌内注射；鼻内吸入或气管内吸入；或者口咽施用或舌下施用。
16.错配双链核糖核酸(dsRNA)在制备用于与受试对象免疫细胞上的Toll样受体3(TLR3)结合的药物中的应用，所述受试对象受微生物感染、带有癌细胞或其它转化细胞、或者进行了针对微生物、癌细胞或其它转化细胞的预防接种。
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