CN101978992A

CN101978992A - 具有抗肿瘤作用的黑胡椒提取物及其药物制剂

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Publication number: CN101978992A
Application number: CN2010105461152A
Authority: CN
Inventors: 林秀坤; 曹寿松; 刘海洲; 魏鉴腾; 刘明
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-11-17
Filing date: 2010-11-17
Publication date: 2011-02-23

Abstract

本发明公开了黑胡椒提取物在抗肿瘤方面的医药新用途，同时也公开了黑胡椒提取物的制备方法，即以黑胡椒为原料，用水和/或有机溶剂提取得到，以及用黑胡椒提取物为原料制备成片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂等临床上可接受的药物制剂，其中含有重量百分比为1%-99%的黑胡椒提取物和99%-1%的药用赋形剂(包括其它配伍用的药物)。本发明提供的黑胡椒提取物及其药物制剂具有很好的抗肿瘤作用。表现在：对体外人肺癌、人胰腺癌、人肝癌、人结肠癌4种肿瘤细胞具有明显的抑制活性，并对此4种肿瘤细胞的裸鼠移植瘤具有显著的抑瘤活性。此外，由于该药物制剂的主要活性成分为中药提取物，因而相对化学治疗药物而言具有毒副作用小的优点。

Description

具有抗肿瘤作用的黑胡椒提取物及其药物制剂

一、技术领域

本发明涉及黑胡椒提取物在制备抗肿瘤药物中的应用及其药物制剂，属于中药领域。

二、背景技术

黑胡椒（Black Pepper）是胡椒科的一种开花藤本植物，它的果实在晒干后通常可作为香料和调味料使用。味辛辣，是人们最早使用的香料之一。医药上主要用作驱风药和用于刺激胃分泌。

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，抗癌药物的开发已成为本世纪新药研究的重大课题。目前，从植物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物，已成为国内外抗肿瘤药物研究的重点。我们在筛选抗肿瘤药物过程中发现黑胡椒提取物具有很强的抑制肿瘤细胞和实体瘤生长的作用。

在本发明之前未见以黑胡椒提取物为原料制备药物剂型并用于预防和治疗肿瘤疾病的报道。

三、发明内容

本发明的目的之一是提供了黑胡椒提取物的制备方法；

本发明的目的之二是提供了黑胡椒提取物的药物制剂；

本发明的目的之三是提供了黑胡椒提取物的抗肿瘤新用途。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的黑胡椒提取物是按照如下方法制备：用水和/或有机溶剂作为提取剂，从黑胡椒的果实中提取得到黑胡椒提取物。其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取剂优选体积百分含量为60%-99%的乙醇水溶液，最好选择体积百分含量为80%-95%的乙醇水溶液。所述提取可为回流提取，提取温度可为60-100℃，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时。

本发明的药物制剂含有1%-99%的黑胡椒提取物和99%-1%的赋形剂（包括其它配用的药物），优选含有20%-80%的黑胡椒提取物和80%-20%的赋形剂（包括其它配用的药物），最好含有40%-60%的黑胡椒提取物和60%-40%的赋形剂（包括其它配用的药物）。

按药剂学方法，可以将本发明的黑胡椒提取物制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。

本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明的抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物，指的是以有效剂量的黑胡椒提取物为一定的药物原料，再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。上述预防和/或治疗肿瘤药物的用量一般为200-1000mg黑胡椒提取物/kg体重/天，疗程为10至15天。

本发明的黑胡椒提取物药物制剂具有抗肿瘤作用，是通过以下的药效学试验得到证实的。

试验例1 考察了黑胡椒提取物对体外4种肿瘤细胞的抑制作用

细胞：人肺癌细胞（A549）、人胰腺癌上皮细胞（PANC-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）、人结肠癌细胞（HT-29）。以上细胞均为中科院海洋所海洋药物实验室提供。

药品及试剂：黑胡椒提取物：中科院海洋所海洋药物实验室提供，膏状物；5-氟脲嘧啶（5-FU）江苏南通精华制药有限公司产品，批号为100402； MTT（SIGMA，USA）；DMSO（SIGMA，USA）；胰蛋白酶（SIGMA，USA）；RPMI1640（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；DMEM（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；优级胎牛血清（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；特级胎牛血清Fetal Bovine Serum（Hyclone）。

仪器：超低温冰箱（Nature，USA），细胞培养箱（SANYO，Japan），倒置显微镜（NIKON，Japan），酶标仪（Bio-Tek Instruments，Inooski，VT，USA），PH计（Thermo orion，USA），超净工作台（FLC-哈尔滨东联仪器厂）。

实验方法MTT法：各种人的肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度5×10⁴个/ml左右。将细胞悬液加入96孔培养板中，每个孔加入180 μl，置于37℃恒温培养箱中培养24 h后。分别将黑胡椒提取物和5-FU用细胞培养基配成不同浓度的溶液，实验组加入各浓度黑胡椒提取物（以5-FU作为阳性对照组）20 μl/孔，每组各设4个平行孔，并分别设空白孔（细胞培养基）以调零。在培养箱37℃，培养48 h后，用移液枪将96孔板中液体洗净后每孔加入MTT（1 mg/ml）30 μl，置CO₂培养箱37℃ 培养4 h，弃去上清，每孔加入DMSO 150 μl，置摇床摇匀30 min，用酶标仪在492 nm下检测，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC₅₀。

实验结果表明，经SPSS软件统计，黑胡椒提取物对用于试验的4种肿瘤细胞（A549、PANC-1、BEL-7402、HT-29）均有不同程度的抑制作用，并且呈一定的剂量依赖关系，不同浓度的黑胡椒提取物对各种肿瘤细胞的抑制率、IC₅₀值详见表1。

表1 不同浓度的黑胡椒提取物对4种肿瘤细胞的抑制率

试验例2 黑胡椒提取物对4种裸鼠移植瘤的抑瘤作用

实验动物：BALB/c裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，共100只，7~9周龄，体重20~22g，均为雄鼠。动物饲养及实验为无特殊病原菌级屏障系统，饲养于青岛大学医学院实验动物中心。

肿瘤细胞接种：分别取对数生长期的人肺癌细胞（A549）、人胰腺癌上皮细胞（PANC-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）、人结肠癌细胞（HT-29）制成瘤细胞悬液（1×10⁷个/ml），分别植入BALB/c雄性裸鼠腋部皮下（约0.3ml/只），接种后定期观察小鼠精神、饮食及排便等情况。传代一次后，将肿瘤组织无菌取出并切成大小相同2mm³的小块，用套管针接种在裸鼠腋部皮下。

实验分组及方法：游标卡尺测量肿瘤结节的长径（a）、短径（b），按公式V=a×b²×0.52计算肿瘤体积，当皮下移植瘤长到100 mm³后，挑选肿瘤大小一致的裸鼠，将裸鼠称重用随机数字表法分成3组，每种肿瘤细胞对应的裸鼠均有阴性对照组、阳性对照组、黑胡椒提取物组各5只裸鼠，即每种肿瘤细胞对应15只裸鼠。分别将黑胡椒提取物和5-FU用细胞培养基配成不同浓度的溶液，药物浓度及具体分组如下：（1）阴性对照组：腹腔注射0.2ml生理盐水；（2）阳性药物对照组：腹腔注射30mg/kg的5-FU；（3）黑胡椒提取物组：50mg/kg腹腔注射。每3天注射一次，连续注射10次，于末次给药24 h 后，取出瘤块，测定瘤重，最后计算平均肿瘤抑制率。采用SPSS软件统计，试验数据以（平均数±标准差）表示，P小于0.01为统计学差异显著性意义标准。

（1）、黑胡椒提取物对A549裸鼠移植瘤的抑制作用。试验结果见表2。

表2 黑胡椒提取物对A549裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果（`X ±SD）

注：与对照组比较，**P<0.01 *P<0.05

（2）、黑胡椒提取物对BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用。试验结果见表3。

表3 黑胡椒提取物对BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果（`X ±SD）

注：与对照组比较，**P<0.01 *P<0.05

（3）、黑胡椒提取物对PANC-1裸鼠移植瘤的抑制作用。试验结果见表4。

表4黑胡椒提取物对PANC-1裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果（`X ±SD）

注：与对照组比较，**P<0.01 *P<0.05

（4）、黑胡椒提取物对HT-29裸鼠移植瘤的抑制作用。试验结果见表5。

表5 黑胡椒提取物对HT-29裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果（`X ±SD）

注：与对照组比较，**P<0.01 *P<0.05

由表2~5可见，黑胡椒提取物治疗组与5-FU治疗组的各裸鼠移植瘤较对照组均受到了不同程度的抑制，并且黑胡椒提取物组对裸鼠体重的影响很小，表明黑胡椒提取物无明显毒副作用。

上述离体试验和整体试验表明，黑胡椒提取物对离体和整体肿瘤细胞（A549、PANC-1、BEL-7402、HT-29）均具有明显的抑制作用，且无明显毒副作用，提示黑胡椒提取物是一种很有前景的抗肿瘤药物。

四、具体实施方式

实施例1、黑胡椒提取物的制备

取黑胡椒（青岛北京同仁堂药店，货号100911）500g，将其以1:3（黑胡椒：95%乙醇）的重量份数比与95%乙醇（乙醇：水=95:5，体积比）混合，60℃回流提取3h，抽滤，收集提取液；将滤渣中加入与第一次等量的95%乙醇，60℃再回流提取3h，收集提取液，与第一次合并；滤渣加入与第一次等量95%乙醇，60℃再一次回流提取3h，抽滤，收集第三次回流提取液，与前两次回流提取液合并，将所得的提取液进行真空减压浓缩、真空干燥（去除乙醇和水）至恒重，得到4.1g黑胡椒提取物。

实施例2 黑胡椒提取物药物制剂的制备

（1）片剂的制备

黑胡椒提取物 100g，药用淀粉 100g，混合均匀，用适量乙醇作为粘合剂制粒，干燥，经整粒机整粒，压片，每片0.30g，口服，每次1-2片，每日两次。

（2）胶囊剂的制备

黑胡椒提取物 100g，药用淀粉 100g，混合均匀，用适量乙醇作为粘合剂制粒，干燥，过120目筛整粒，装0#胶囊，每粒0.300g，每次口服1-2粒，每日两次。

（3）滴丸剂的制备

聚乙二醇₄₀₀₀ 1200g，在水浴上熔化，加入黑胡椒提取物原料750g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90℃下滴入冷却过的液体石蜡中（温度±4℃），滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再加入少量滑石粉，混匀，得黑胡椒提取物滴丸 10000粒。每次口服1-2粒，每日两次。

（4）颗粒剂的制备

黑胡椒提取物原料100g，淀粉1000g，糖粉500g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装即得。口服，一次5g，一日两次。

（5）注射剂的制备

黑胡椒提取物 40g，丙二醇 50ml，聚乙二醇400 100ml，注射用水600ml，混合，水浴加热30分钟，加苯甲醇90ml，再用注射用水加至1800ml，在超声波中处理10分钟，再在水浴上加热30分钟，调pH值为5.5-6.5，过滤，灌封，灭菌即得。每支3ml，肌肉注射，一次3ml，一日两次。

Claims

1.具有抗肿瘤作用的黑胡椒提取物，所述黑胡椒提取物按照如下方法制备：用水和/或有机溶剂作为提取剂，从黑胡椒果实中提取得到黑胡椒提取物。

2.根据权利要求1所述的黑胡椒提取物，其特征在于：所述的提取剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的黑胡椒提取物，所述提取为回流提取，提取的温度为60-100℃，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时。

4.一种用于肿瘤治疗的药物制剂，其特征在于含有治疗有效剂量的黑胡椒提取物和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与黑胡椒提取物组方的其它药物。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有1%-99%的黑胡椒提取物和99%-1%的药用赋形剂或其它可组方的药物。

6.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于所说的药物制剂是口服制剂或非肠道给药的剂型。

7.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的任何一种。

8.黑胡椒提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。

9.根据权利要求8的用途，其特征在于所说的抗肿瘤是指抑制肿瘤细胞和实体瘤的生长。

10.根据权利要求9的用途，其特征在于所说的肿瘤细胞为以下4种：人肺癌细胞（A549）、人胰腺癌上皮细胞（PANC-1）、人肝癌细胞（BEL-7402）、人结肠癌细胞（HT-29），所说的实体瘤为上述4种肿瘤细胞的裸鼠移植性肿瘤。