CN101962616B - 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法 - Google Patents

一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101962616B
CN101962616B CN2010102950477A CN201010295047A CN101962616B CN 101962616 B CN101962616 B CN 101962616B CN 2010102950477 A CN2010102950477 A CN 2010102950477A CN 201010295047 A CN201010295047 A CN 201010295047A CN 101962616 B CN101962616 B CN 101962616B
Authority
CN
China
Prior art keywords
protective material
prescription
chlor
sodium
freeze
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN2010102950477A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101962616A (zh
Inventor
陈合
王磊
马齐
舒国伟
秦涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Yuanda Biological Pharmaceutical Co., Ltd.
Original Assignee
Shaanxi University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi University of Science and Technology filed Critical Shaanxi University of Science and Technology
Priority to CN2010102950477A priority Critical patent/CN101962616B/zh
Publication of CN101962616A publication Critical patent/CN101962616A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101962616B publication Critical patent/CN101962616B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，将嗜酸乳杆菌加到培养基中培养嗜酸乳杆菌；离心收集菌体后，用生理盐水清洗菌体，离心弃去清夜；用保护剂I将菌体配制成菌悬液后，加入保护剂II，最后进行冷冻干燥，所述保护剂I的配方为海藻糖10-20g/L，甘油10-20mL/L，牛血清蛋白5-15g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，蔗糖60-100g/L，所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉150-250g/L，葡萄糖10-40g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，抗坏血酸0.2-0.3g/L。由本发明方法制得的菌粉的存活率最高达99.9％。

Description

一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法
技术领域
本发明涉及一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法。
背景技术
随着奶业市场的发展，特别是人们健康意识的逐步增强，食品、保健品及医药等的安全性越来越受到人们的关注。含有益生菌的微生态制剂正作为一个新的领域逐步被研究和开发。嗜酸乳杆菌作为益生菌的一种，在促进人体健康和预防疾病方面具有重要作用，并日益成为乳品科学研究的热点。嗜酸乳杆菌菌粉已广泛应用于食品、医药等行业中，已经成为现代重要工业原料
真空冷冻干燥(简称冻干)是制备和保存生物材料最有效的方法之一，冻干是冷冻和干燥技术的有机结合。然而，真空冷冻干燥会造成生物细胞的损伤、死亡及某些酶蛋白分子的钝化。为了提高真空冷冻干燥后微生物的存活率，人们进行了大量的研究。影响乳酸菌冻干效果的因素有很多，如菌株、细胞大小及形状、生长阶段及速率、初始细胞浓度、pH值、保护剂种类与配比、预冻温度、降温速率、冷冻干燥条件、细胞含水量、细胞膜成份等，其中保护剂种类与配比的影响最为突出。保护剂在细胞周围可以避免细胞膜的冷冻损伤，提高冻干存活率。然而，如果保护剂的选择或添加比例不当，亦导致大量细胞失活。合适配比的保护剂因菌种而异，保护剂中各成分的配比及浓度达到协调时，才能达到最佳保护效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，由本发明制得的菌粉的存活率最高达99.9％。
为实现上述目的，本发明提供了一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，将嗜酸乳杆菌于MRS培养基中培养，然后离心收集菌体后，用生理盐水清洗菌体，离心弃去上清液，接着，用保护剂I将菌体配制成8±1×1010cfu/mL菌悬液后，静置30-40min，再加入保护剂II，均匀混合，其中，所述保护剂II与保护剂I的体积比为(1-2)∶(2-1)，然后，静置20-30min后装于冻干管中进行冷冻干燥，所述保护剂I的配方为：海藻糖10-20g/L，甘油10-20mL/L，牛血清蛋白5-15g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，蔗糖60-100g/L，所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉150-250g/L，葡萄糖10-40g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，抗坏血酸0.2-0.3g/L；所述冷冻干燥时，首先于-35～-40℃下预冻24h，然后移转入真空冷冻干燥机中，于温度为-56℃，真空度为4-6Pa的条件下冻干24h；所述培养基中进一步添加有微孔滤膜除菌的复合抗冷冻因子；所述复合抗冷冻因子的配方为：肌醇0.1-0.2g/L、氯化钠3-4g/L、牛血清蛋白0-0.07g/L、丙氨酸0.03-0.06g/L。
作为本发明的优选实施例，所述保护剂I的配方为：海藻糖10-15g/L，甘油10-15mL/L，牛血清蛋白5-10g/L，氯化钠6.5-7.5g/L，蔗糖60-80g/L；
作为本发明的优选实施例，所述保护剂I的配方为：海藻糖15-20g/L，甘油15-20mL/L，牛血清蛋白10-15g/L，氯化钠7.5-8.5g/L，蔗糖80-100g/L；
作为本发明的优选实施例，所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉150-200g/L，葡萄糖10-30g/L，氯化钠6.5-7.5g/L，抗坏血酸0.2-0.25g/L；
作为本发明的优选实施例，所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉200-250g/L，葡萄糖30-40g/L，氯化钠7.5-8.5g/L，抗坏血酸0.25-0.3g/L；
作为本发明的优选实施例，所述保护剂I与保护剂II的体积比为1∶1；
作为本发明的优选实施例，所述保护剂I与保护剂II的体积比为1∶2；
与现有技术相比，本发明真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法至少具有以下优点：本发明干燥方法中采用两种不同的保护剂I和保护剂II，且其体积比为(1-2)∶(2-1)，如此，制得的菌粉的存活率最高达99.9％。
具体实施方式
实施例一：
将嗜酸乳杆菌于MRS培养基中培养24h，然后以转速为6000r/min离心10min，收集菌体，然后，用生理盐水清洗菌体2次，离心弃去上清液；用保护剂I将菌体配制成8±1×1010cfu/mL菌悬液后，静置30-40min，再加入保护剂II均匀混合，其中，所述保护剂II与保护剂I的体积比为1∶1，然后，静置20-30min后装于冻干管中，装样高度0.3-0.5cm，接着放入-35～-40℃的冰箱中预冻24h后，移转入真空冷冻干燥机中，于温度为-56℃，真空度为4-6Pa的条件下冻干24h；最后，用生理盐水复溶，MRS固体培养基计数，测定菌粉活性和菌体存活率。
上述保护剂I和保护剂II的配方如下表1所述：
表1不同配方的保护剂对冷冻干燥制备菌粉效果的验证
Figure GDA0000135448500000031
Figure GDA0000135448500000041
实施例2
实施例2与实施例1步骤相同，只是，在无菌的MRS培养基中首先添加微孔滤膜除菌的复合抗冷冻因子，然后培养嗜酸乳杆菌，其中，添加的保护剂I的配方为：海藻糖10g/L+甘油20mL/L+牛血清蛋白10g/L+氯化钠8.5g/L+蔗糖80g/L；添加的保护剂II的配方为：脱脂奶粉150g/L+葡萄糖10g/L+氯化钠8.5g/L+抗坏血酸0.2g/L，所述复合抗冷冻因子的配方如下表2所示：
表2添加不同配比的复合抗冷冻因子发酵得到的菌体进行冻干的存活率的验证结果
Figure GDA0000135448500000042
Figure GDA0000135448500000051
实施例3
实施例3的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌的方法与实施例2完全相同，其中，复合抗冷冻因子的配方采用：肌醇0.1g/L、氯化钠3g/L、牛血清蛋白0.07g/L、丙氨酸0.03g/L；保护剂I的配方采用：海藻糖10g/L+甘油20mL/L+牛血清蛋白10g/L+氯化钠8.5g/L+蔗糖80g/L；保护剂II的配方采用：脱脂奶粉150g/L+葡萄糖10g/L+氯化钠8.5g/L+抗坏血酸0.2g/L，所述保护剂I与保护剂II的体积比如下表3所示：
表3菌悬液的保护剂I与保护剂II不同体积配比对冻干制备嗜酸乳杆菌菌粉存活率的验证结果
  配成菌悬液的保护剂I∶保护剂II   存活率(％)   菌粉活性(×1011cfu/g)
  1∶2   99.8～99.9   1.53～1.79
  1∶1   75.3～76.5   1.77～1.97
  2∶1   67.2～68.1   1.15～1.34
以上所述仅为本发明的一种实施方式，不是全部或唯一的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。

Claims (7)

1.一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：将嗜酸乳杆菌于MRS培养基中培养，然后离心收集菌体后，用生理盐水清洗菌体，离心弃去上清液，接着，用保护剂I将菌体配制成8±1×1010cfu/mL菌悬液后，静置30-40min，再加入保护剂II，均匀混合，其中，所述保护剂II与保护剂I的体积比为(1-2)∶(2-1)，然后，静置20-30min后装于冻干管中进行冷冻干燥，所述保护剂I的配方为海藻糖10-20g/L，甘油10-20mL/L，牛血清蛋白5-15g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，蔗糖60-100g/L，所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉150-250g/L，葡萄糖10-40g/L，氯化钠6.5-8.5g/L，抗坏血酸0.2-0.3g/L；所述冷冻干燥时，首先于-35～-40℃下预冻24h，然后移转入真空冷冻干燥机中，于温度为-56℃，真空度为4-6Pa的条件下冻干24h；所述培养基中进一步添加有微孔滤膜除菌的复合抗冷冻因子；所述复合抗冷冻因子的配方为：肌醇0.1-0.2g/L、氯化钠3-4g/L、牛血清蛋白0-0.07g/L、丙氨酸0.03-0.06g/L。
2.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂I的配方为：海藻糖10-15g/L，甘油10-15mL/L，牛血清蛋白5-10g/L，氯化钠6.5-7.5g/L，蔗糖60-80g/L。
3.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂I的配方为：海藻糖15-20g/L，甘油15-20mL/L，牛血清蛋白10-15g/L，氯化钠7.5-8.5g/L，蔗糖80-100g/L。
4.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉150-200g/L，葡萄糖10-30g/L，氯化钠6.5-7.5g/L，抗坏血酸0.2-0.25g/L。
5.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂II的配方为：脱脂奶粉200-250g/L，葡萄糖30-40g/L，氯化钠7.5-8.5g/L，抗坏血酸0.25-0.3g/L。
6.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂I与保护剂II的体积比为1∶1。
7.如权利要求1所述的真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法，其特征在于：所述保护剂I与保护剂II的体积比为1∶2。
CN2010102950477A 2010-09-29 2010-09-29 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法 Active CN101962616B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010102950477A CN101962616B (zh) 2010-09-29 2010-09-29 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2010102950477A CN101962616B (zh) 2010-09-29 2010-09-29 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101962616A CN101962616A (zh) 2011-02-02
CN101962616B true CN101962616B (zh) 2012-06-27

Family

ID=43515671

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010102950477A Active CN101962616B (zh) 2010-09-29 2010-09-29 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101962616B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109234205A (zh) * 2018-11-07 2019-01-18 福建傲农生物科技集团股份有限公司 一种嗜酸乳杆菌的保存保护剂及冷冻干燥保存方法

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102329759B (zh) * 2011-10-13 2014-07-09 陕西农产品加工技术研究院 一种提高嗜酸乳杆菌冻干存活率的方法
CN104152371A (zh) * 2014-06-05 2014-11-19 杭州娃哈哈科技有限公司 一种直投式乳酸菌发酵乳用发酵剂的制作方法
CN108559717A (zh) * 2017-11-30 2018-09-21 天津生机集团股份有限公司 一种嗜酸乳杆菌高密度发酵培养基及其菌粉制备方法
CN114836337B (zh) * 2022-03-04 2024-04-02 广东省实验动物监测所 一种用于嗜肺巴斯德杆菌的冻干保护剂、冻干粉及其制备方法
CN115369040B (zh) * 2022-09-27 2024-04-02 福建傲农生物科技集团股份有限公司 一种副猪嗜血杆菌菌株的保存试剂、试剂盒以及保存方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101486986A (zh) * 2009-02-12 2009-07-22 上海谱莱生物技术有限公司 一种嗜酸乳杆菌冻干菌粉的制备方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101486986A (zh) * 2009-02-12 2009-07-22 上海谱莱生物技术有限公司 一种嗜酸乳杆菌冻干菌粉的制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘小艺.乳酸菌冻干保护剂的作用原理以及研究方法的进展.《纪念中国农业工程学会成立三十周年暨中国农业工程学会2009年学术年会(CSAE2009)论文集》.2009, *
徐丽萍.嗜酸乳杆菌冻干菌粉保护剂选择的研究.《食品工业科技》.2007,第28卷(第5期), *
袁亚宏等.冻干嗜酸乳杆菌菌粉制备及特性研究.《西北农林科技大学学报（自然科学版）》.2003,第31卷(第6期), *
赵瑞香等.嗜酸乳杆菌冷冻干燥过程中保护剂的选择.《食品科学》.2004,第25卷(第11期), *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109234205A (zh) * 2018-11-07 2019-01-18 福建傲农生物科技集团股份有限公司 一种嗜酸乳杆菌的保存保护剂及冷冻干燥保存方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN101962616A (zh) 2011-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101962616B (zh) 一种真空冷冻干燥制备嗜酸乳杆菌菌粉的方法
CN106047709B (zh) 一种植物乳杆菌冻干粉及其制备方法
CN105420111A (zh) 一种提高植物乳杆菌冻干存活率的复合保护剂及其制备方法
CN105105146A (zh) 一种益生菌的活性保持方法及其在固态脂质食品中的应用
CN105132318A (zh) 植物乳杆菌Grx16及其应用
CN101693882B (zh) 嗜酸乳杆菌冻干复合保护剂及其应用方法
CN101869149B (zh) 一种制酸浆豆腐用菌粉的生产方法
CN111647510A (zh) 一种婴儿双歧杆菌冻干粉、制备方法及其所用复合保护剂
CN107312732A (zh) 一种益生菌饲料添加剂
Wang et al. Polysaccharides can improve the survival of Lactiplantibacillus plantarum subjected to freeze-drying
CN102329759B (zh) 一种提高嗜酸乳杆菌冻干存活率的方法
CN101974427A (zh) 含有植物甾醇的活性植物乳杆菌活菌制剂及其制备方法
CN102283334A (zh) 可改善小型犬肠道微生态的复合益生菌微胶囊
CN107475117A (zh) 一种用于罗伊氏乳杆菌的冻干保护剂及冻干保存方法
CN107287136A (zh) 一种具有益生功能的益生固态乳酸菌菌剂的制备方法
CN104498401A (zh) 一种动物双歧杆菌及其组合物
CN103141723B (zh) 一种干酪乳杆菌大豆酸乳直投式发酵剂的制备方法
CN103141722B (zh) 一种鼠李糖乳杆菌大豆酸乳直投式发酵剂的制备方法
CN101606552B (zh) 一种双歧杆菌深层冷冻直投发酵剂及其复合冷冻保护剂
CN112195103B (zh) 冻干保护剂、粪菌冷冻干燥产物及其制备方法
CN107227274A (zh) 植物乳杆菌st及其在酸茶加工中的应用
CN102524794A (zh) 一种降血清胆固醇马克斯克鲁维酵母冻干菌粉的制备方法
CN101875911A (zh) 一种嗜酸乳杆菌冷冻干燥过程中的保护剂
CN104212733A (zh) 一种光合细菌冻干保护剂
CN112795558A (zh) 一种提升乳酸菌稳定性的三层包埋方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: HANGZHOU LONGDA XINKE BIOLOGICAL PHARMACY INC.

Free format text: FORMER OWNER: SHAANXI UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY

Effective date: 20130906

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 710021 XI AN, SHAANXI PROVINCE TO: 310019 HANGZHOU, ZHEJIANG PROVINCE

TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20130906

Address after: 310019 Jianggan District, Hangzhou, No. nine Ring Road, No. 63, No.

Patentee after: HANGZHOU LONGDA XINKE BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO., LTD.

Address before: 710021 Shaanxi province Xi'an Weiyang University Park No. 1

Patentee before: Shaanxi University of Science and Technology

C56 Change in the name or address of the patentee
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 310019 Jianggan District, Hangzhou, No. nine Ring Road, No. 63, No.

Patentee after: Hangzhou Yuanda Biological Pharmaceutical Co., Ltd.

Address before: 310019 Jianggan District, Hangzhou, No. nine Ring Road, No. 63, No.

Patentee before: HANGZHOU LONGDA XINKE BIOLOGICAL PHARMACEUTICAL CO., LTD.