CN101953869A - 一种用于抗心肌缺血和耐缺氧的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于抗心肌缺血及耐缺氧的药物组合物，由菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1：1的重量比配制而成。上述菊花总黄酮中总黄酮的含量不低于60%(UV法测定)，木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.3%(HPLC法测定)。上述法菲亚参总皂苷中总黄酮含量不低于70%(UV法测定)。本发明能够降低心肌梗死程度，具有明显的抗心肌缺血及明显的延长小鼠耐缺氧时间的作用。

Description

一种用于抗心肌缺血和耐缺氧的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种用于抗心肌缺血和耐缺氧的药物组合物。

背景技术

菊花系菊科植物Chrysanthemummorifoliumat．)Tzvel的干燥头状花序。菊属植物全世界有30余种，中国约17种，但栽培供药用的主要是菊花一种，药用类群经过长期人工栽培选育和不同的生态环境，加之特殊的加工方法，形成了各具特色的药用品种，如滁菊、毫菊、济菊、怀菊、杭菊、贡菊、祁菊、黄菊等。菊花为常用中药, 具有疏风,清热,明目,解毒功效。临床上用于治疗高血压与冠心病。菊花的主要活性成分为挥发油和黄酮类成分，菊花中的总黄酮的含量高。药理研究表明菊花粗提物具有抗菌、抗炎、镇痛、抗病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗诱变、增加离体豚鼠心脏冠脉流量、抗肝脏脂质过氧化作用、增强免疫功能等多种药理作用。但是菊花总黄酮（总黄酮的含量不低于60%）作为有效成份用于抗心肌缺血和耐缺氧的药理活性未见报道。

法菲娅参为艾苋科(Amaranthaceae)法菲亚属(PfaffiaPedersen)植物，主要生长于亚马孙河流域，1826年首次有植物学记载，有壮阳、镇静、抗肿瘤、治疗溃疡、风湿性关节炎和降血糖等功效。法菲西含有多种氨基酸及维生素，微量矿物质包括铁、镁、钴、硅、锌及高含量的锗，含有超过其干重11%的皂苷成分，包括法菲西酸(pfaffic acid)及其苷类(如法菲西苷pfaffosides A-F),三萜类(nortriperpene)及其苷类,脱皮甾醇类激素(如蜕皮甾酮ecdysterone )、蕨甾酮( pterosterone )、足甾酮(podecdysone)、豆甾醇(stigmasterol)、谷甾醇(sitostero)及其苷类等。文献报道巴西人参粗提取物具有抗肿瘤、壮阳、对血液系统的作用、抗炎、镇痛活等药理作用。但是，法菲娅参总皂苷（黄酮含量不低于70%）作为有效成份抗心肌缺血和耐缺氧的药理活性未见报道。

已知多种中药如三七、丹参、葛根、川芎、灯盏花素等的有效部位可从改善心脏血流动力学、血液流变学、调节血管活性物质及钙平衡、保护线粒体、清除自由基、促进血管新生等多方面机制产生抗心肌缺血及耐缺氧的作用，提示中药在不同层次、多靶点发挥抗心肌缺血及耐缺氧的作用特点，为进一步开发出具有抗心肌缺血及耐缺氧作用的中药新药提供了新的思路。从文献上看，目前中药有效成分抗实验性心肌缺血及耐缺氧药理作用研究多采用单味中药有效部位，很少进行中药复方有效部位的研究。但是临床上中药多以复方入药，因此开发出复方中药抗心肌缺血及耐缺氧的有效部位组合物，并进行作用机制的研究，是今后中药新药研究的重要方向。 

发明内容

   本发明的目的提供一种在抗心肌缺血和耐缺氧方面均有良好的药理活性的药物组合物。

本发明由是菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1：1的重量比配制而成。

上述菊花总黄酮有市售，也可采用常规的乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化方法自制。本发明优选总黄酮含量不低于60%（UV法测定），木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.3%(HPLC法测定)的菊花总黄酮。

上述法菲亚参总皂苷有市售，也可采用常规的乙醇热回流提取，大孔吸附树脂纯化方法自制，制备原料为国产栽培法菲亚参。本发明优选总黄酮含量不低于70%（UV法测定）的法菲亚参总皂苷中。

本发明将菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷进行合理的配伍，使两种有效成份协同作用，能够降低心肌梗死程度，具有明显的抗心肌缺血作用及耐缺氧作用。 

具体实施方式

1.药物的制备

1.1菊花总黄酮的制备： 

取江苏产白白菊花,粉碎,加入10倍重量70%乙醇回流提取2次(6倍,4倍),每次2小时,合并提取液,回收溶剂至相对密度为1.2流浸膏,加水稀释成每毫升相当0.2g生药.过滤,滤液备用（测得总黄酮含量为15.07mg.mL-1）经过预处理的D101大孔吸附树脂，湿法装柱，装柱体积为100mL（湿重66g，干重18g），径高比为1:8， 精密吸取上柱液400mL上柱，控制流速为6 mL/min。再分别用3倍柱体积量纯化水和1倍柱体积量的20%乙醇洗脱杂质，控制流速为6 mL/min再用3倍柱体积量的60%乙醇洗脱菊花总黄酮，控制流速为6 mL/min。收集洗脱液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得菊花总黄酮。总黄酮含量60%（UV法测定）；木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷0.3%(HPLC法测定)。

1.2法菲亚参总皂苷的制备： 

将国产法菲亚参粉碎过60目筛，加10倍重量70%乙醇，热回流提取两次，每次1小时，提取液放冷，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释成0.2g生药每毫升，此为上柱液。

将处理过的大孔吸附树脂D101装入柱子，柱子径高比为1：5，将三倍于树脂体积的上柱液上柱，控制流速为每小时三倍树脂体积，再用三陪树脂体积量的去离子水洗脱杂质后，再用三倍树脂体积量70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液上离子交换树脂柱D941（树体积与前柱相同），收集过柱液，再用70%乙醇洗脱至醋酐-浓硫酸反应呈阴性，合并过柱液和洗脱液，减压浓缩，真空干燥至恒重，即得法菲亚参总皂苷，总皂苷含量70%（UV法测定）。

1.3 将上述菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1：1的重量比进行复配。

1.4 上述药物组合物每100mg中，含菊花总黄酮不低于30mg（相当于菊花原药材1.25g），法菲娅参总皂苷不低于35mg（相当于法菲娅参原药材0.7g）。

  

2.1本发明所述药物组合物抗心肌缺血的作用的实验

2.1.1实验动物

成年健康SD大鼠，雄性，体重（260±20）g。饲养于室内通风柜内，恒温（22±2）℃，自然昼夜，自由食水。动物合格证编号SCXK(京)2004－0001。

 2.1.2分组及给药

大鼠按体重分组，随机分为6组，每组10只。

1）正常对照组；  

2）假手术组；   

3）模型组；

4）受试药高剂量组：菊花总黄酮+法菲亚参总皂苷=40mg/kg+40mg/kg

5）受试药中剂量组：菊花总黄酮+法菲亚参总皂苷=20mg/kg+20mg/kg

6）受试药低剂量组：菊花总黄酮+法菲亚参总皂苷=10mg/kg+10mg/kg

给药方法：术前禁食过夜，自由饮水。术后给药7天，末次给药后1h取材。

 2.1.3动物模型制备

动物以戊巴比妥腹腔注射麻醉（30mg/kg），仰位固定，以标准II导联监测动物心电图；切开气管，插入气管插管，接动物人工呼吸机行人工呼吸（90次/分，呼吸比值1.5:1）；左侧第4～5肋间开胸，破开心包膜，暴露心脏，于冠状动脉前降支根部穿线（3/8弧带 针缝合线，0/3尼龙线），备结扎用；穿线后稳定10分钟，结扎（无ST段及T波改变者淘汰），缝合胸壁，恢复自然呼吸。

 2.1.4主要实验仪器

16道生理记录仪( MP-150，美国BIOPAC)；AE200型电子分析天平（上海，梅特勒-托利多仪器有限公司）。

 2.1.5统计学处理

用SPSS10.0软件包进行统计学分析，数据用（                                                ）表示，组间比较应用t检验，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为非常显著性差异。

 2.1.6检测指标

大鼠心肌梗塞面积的测定：

末次给药后1h取材，摘取心脏，放置-20℃冰箱30min后取出，沿心脏结扎线以下横切6片，置1%红四氮唑(TTC)磷酸缓冲液中染色10-15min(37℃水浴)。肉眼观察，梗死区呈灰白色，未梗死区呈红色。沿坏死组织边缘分离将梗死心肌组织与未梗死心肌组织分别称重，以梗死心肌占整个心脏重量的百分比表示梗死范围。

 2.1.7实验结果                      

对大鼠心肌梗塞面积的影响：

大鼠结扎冠状动脉前降支后心肌缺血明显，模型组大鼠心肌坏死区重量分别占左心室和全心脏重量的17.87％，14.07％，给予受试药物7天后, 与模型组比较，高、中剂量组的心肌缺血情况均有不同程度的改善（P<0.01；P<0.05）。见表1,表2。

表1  受试药物对大鼠心肌梗塞面积的影响（

，N=10）

表2  受试药物对大鼠心肌梗塞面积的影响（

，N=10）

注： 与模型组比较 *P<0.05；** P<0.01。

  

采用结扎大鼠冠状动脉前降支造成心肌缺血模型，灌胃给受试药物（1：1配比）7天（按着80 mg/kg、40mg/kg、20 mg/kg剂量）。结果显示：药物在80 mg/kg 、40 mg/kg剂量下都能够减轻心肌缺血程度，与模型组比较差异显著（P<0.01；P<0.05）。

  

2.2本发明所述药物组合物耐缺氧作用的实验

2.2.1实验材料

2.2.1.1动物

KM小鼠，雌雄各半，20-22g。由中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK（京）2005-0013。

 2.2.1.2药品

本发明所述药物组合物。

心得安（10mg/片），天津力生制药股份有限公司生产，批号0411015。

 2.2.1.3试剂

凡士林，天津市石油化学实验厂，批号071019。

钠石灰，上海市纳辉干燥试剂厂，批号20040724。

 2.2.2实验方法

组合物对小鼠常压耐缺氧的影响

动物及分组：小鼠60只，雌、雄各半，按体重、性别随机分为6组，每组10只。分别设空白对照组、组合物给药组、阳性对照药心得安50mg/kg组。组合物设四个剂量组。给药剂量为80（40+40）mg/kg、40（20+20）mg/kg、20（10+10）mg/kg、10（5+5）mg/kg。组合物在实验前用0.9%的氯化钠配制成相应浓度的溶液，浓度分别为4.0mg/ml、2.0mg/ml、1.0mg/ml、0. 5mg/ml,心得安浓度为2.5mg/ml。按体重0.2ml/10g腹腔给药，每日一次，连续给药7天，空白对照组给予等体积的0.9%氯化钠。于末次给药后0.5h，取各组体重相近小鼠各一只，作为同批检测动物。将小鼠迅速放入盛有15g钠石灰的250ml广口磨口瓶内，每瓶一只（密封），立即秒表计时，记录小鼠因缺氧而死亡时间。以最后一次张口喘气为死亡时间，观察小鼠的存活时间，计算存活时间延长百分率^[1]。

存活时间延长百分率=

2.2.3统计方法

实验数据以均数±标准差（

）表示，组间比较采用t检验，显著水平以0.05和0.01为标准。

 2.2.4实验结果

组合物对小鼠常压耐缺氧的影响

药物腹腔给药7天，与空白对照组比较，其中80mg/kg、40mg/kg组均不同程度延长小鼠常压耐缺氧时间, 延长率分别为36.06%、29.46%（P<0.05-0.01）。心得安能够明显延长小鼠常压耐缺氧时间，延长率为70.83%（P<0.01）。结果见表2。

    表1  对小鼠常压耐缺氧的影响（

）（n=10）

注：与空白对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

 2.2.5结论

在本实验条件下，组合物在80mg/kg、40mg/kg剂量下，与空白对照组比较，对小鼠均呈现出不同程度的延长耐缺氧存活时间的作用。

以上实验表明，本发明所述药物组合物能够减轻实验鼠心肌梗死面积，能够降低心肌梗死程度，具有明显的抗大鼠心肌缺血作用及明显的延长小鼠耐缺氧时间的作用。

Claims (4)

1.一种用于抗心肌缺血及耐缺氧的药物组合物，其特征在于由菊花总黄酮和法菲亚参总皂苷按1：1的重量比配制而成。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于菊花总黄酮中总黄酮的含量不低于60%，木樨草素-7-O-D-葡萄糖苷不低于0.3%。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于法菲亚参总皂苷中总黄酮含量不低于70%。

4.权利要求1所述药物组合物在制备治疗抗心肌缺血及耐缺氧的药物中的应用。