CN101953839B - 一种具有抗急性髓性白血病作用的复方药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种具有抗急性髓性白血病作用的复方药物组合物，其特征是它的活性成分由甘草次酸和冬凌草甲素组成。药理试验证明两者联合用药具有较强的协同治疗白血病的用途。

Description

一种具有抗急性髓性白血病作用的复方药物组合物

技术领域

本发明涉及天然药物领域，公开了一种含甘草次酸、冬凌草甲素的复方药物组合物及其医药用途。

背景技术

白血病是一种严重危及生命的恶性肿瘤疾病，目前公认化疗是急性白血病的主要治疗手段。从上世纪40年代发现氮芥抗肿瘤作用以来，化疗药物的发展已有60多年历史。目前，急性白血病的传统化疗药物包括烷化剂、抗代谢药、抗生素类以及从植物中提取的生物碱类。但这些化疗药物在杀伤白血病细胞的同时，常常对正常细胞、组织也有毒性损伤。绝大部分急性白血病患者在化疗过程中，会产生不同程度的消化道黏膜损害，心脏毒性、肾毒性等多系统毒副作用。抗癌药发展到今天，人们开始寻求高效低毒、安全性好、来源广泛的新药。近年来，研究中草药中有效的抗癌成分及其有效组方成为新的热点之一。

甘草次酸(glycyrrhetic acid，简称GA)为我国常用配伍中药甘草(Glycyrrhiza uralensisFisch.)在体内的主要活性成分之一，为五环三萜类化合物。近年来对GA的药理研究不断深入，发现GA除了传统的止咳平喘，抗炎，抗溃疡，抗过敏，抗病毒等作用外，对鼠肝细胞癌、艾氏腹水癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、人乳腺癌细胞、人肝癌细胞等有显著的抑制作用。毒理学研究表明，GA具有极低的毒作用，口服昆明种小白鼠的急性毒性LD₅₀＞300mg/kg。最近有极少数文献报道GA可以通过下调Mcl-1诱导白血病U937细胞凋亡[Cancer Biol Ther.2010；9(2)：109-10.]。

冬凌草甲素(Oridonin，简称Ori)是从唇形科香茶菜属(Rabdosia rubescens Hemsl.Hara)植物中分离出的化学结构为对映贝壳杉烯二萜类有机化合物。自20世纪70年代研究证实了Ori的药用抗肿瘤特性，并得到广泛的关注。我国是该属植物资源最丰富的国家。Ori味苦、甘、性微寒，具有清热解表、消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤等作用。有相关研究报道Ori可以通过激活Fas/FasL-ERK信号途径诱导U937和L929肿瘤细胞凋亡，诱导HeLa、MCF-7、L929、HT1080细胞的自噬、引起肿瘤细胞坏死、抑制肿瘤血管发生以及促进UV诱导肿瘤细胞凋亡和自噬，其相关的抗肿瘤信号途径涉及NF-κB，MAPKs，ROS，酪氨酸激酶(PTKs)等[ZhongguoZhong Yao Za Zhi.2005；30(23)：1856-9.Biol Pharm Bull.2006；29(9)：1873-1879.J Pharmacol Sci.2005；98(4)：361-371.Biol Pharm Bull.2005；28(3)：461-467.]。

发明内容

本发明公开了一种甘草次酸和冬凌草甲素的复方药物组合物，药理试验证明该复方药物组合物具有协同抗白血病作用。

本发明同时也提供了一种治疗白血病的方法，即施用治疗有效量的甘草次酸和冬凌草甲素组合物，该治疗方法可用于包括人在内的哺乳动物。

发明人在对GA和Ori配伍药理活性的研究中发现，将甘草次酸和冬凌草甲素组合给药，特别是当两者摩尔比为1∶1-4∶1配伍时具有很好抗白血病细胞的协同作用。发明人分别对人急性髓系白血病U937为模型进行体外MTT筛选，发现其具有很强的抗增殖活性并呈良好的时效与量效关系，结合经典联合给药分析原理(Median-effect Principle)和统计分析，结果表明其具有协同作用，尤其是在fa＜0.5时可明显产生协同效应抑制U937细胞增殖，这说明GA和Ori组合物可在低剂量配伍时产生GA或Ori单药高剂量的生物学效应，从而可以大大降低药物的毒副作用产生，具有良好的临床用药开发前景。

以下结合实施例对GA和Ori组合物的药理活性做进一步阐述。

附图说明

图1为1∶2摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲线

图2为1∶1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲线

图3为2∶1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲线

图4为4∶1摩尔比比例GA和Ori组合药物的抑制效应-联合用药指数指数曲线

具体实施方式

实施例1

U937细胞筛选优化GA和Ori组合物

取对数生长期的细胞，分别接种3×10⁴个细胞/孔于96孔板上，待生长6小时后，离心弃上清，然后按以下分组给药：肿瘤细胞设不加药组和加药组，其中加药组发GA和Ori单药组、GA与Ori联合用药不同摩尔比例组，每组设4-6个复孔，培养24小时，弃上清，加入100μl含0.5mg/ml的MTT(四氮唑盐)无血清培养液培养4小时，加入100μl DMSO(二甲亚砜)，放置于微型振荡仪上振荡10min，再置于酶标仪上570nm处检测OD值。结果按照以下抑制率公式计算每种情况下肿瘤细胞生长的抑制率，具体结果见表1-3。

抑制率＝(1-加药组OD值/对照组OD值)

表1为GA和Ori单独给药作用细胞24小时后不同浓度的抑制率，发现随着浓度的增加，抑制率呈浓度依赖性，其中GA的IC₅₀约为37.6μM，Ori的IC₅₀约为16.7μM。

表2为GA和Ori按摩尔比1∶2和1∶1配伍组合时的抑制情况，其中当摩尔比为1∶2时，GA和Ori配伍的浓度分别为2.5，5，7.5，10μM和5，10，15，20μM；当摩尔比为1∶1时，两者的浓度均取2.5，5，10和20μM。从其中我们可以获得随着配伍浓度的增加，其抑制率呈浓度依赖性。

表3为GA和Ori按摩尔比2∶1和4∶1配伍组合时的抑制情况，其中当摩尔比为2∶1时，GA和Ori配伍的浓度分别为5，10，20，30μM和2.5，5，10，15μM；当摩尔比为4∶1时，两者的浓度分别为10，20，40，60μM和2.5，5，10，15μM。其中我们发现随着配伍浓度的增加，其抑制率呈浓度依赖性。

表1  GA和Ori单药作用24小时IC₅₀

表2  GA和Ori按摩尔比1∶2和1∶1配伍作用24小时抑制情况

表3  GA和Ori按摩尔比2∶1和4∶1配伍作用24小时抑制情况

实施例2

GA和Ori联合给药效应分析

以Median-effect Principle(中效原理或Chou-Talalay联合指数法)为评价基础，应用CombiDrug统计软件绘制剂量-效应曲线及不同效应下的合用指数曲线(fa-C曲线)，从两药合用的效应与合用指数的关系图表(见表1，2，3和图1，2，3，4)定量评价两药之间是协同、拮抗或相加关系。具体步骤如下：

药物作用效应即抑制率(fa)＝1-(试验组平均OD570值/肿瘤细胞空白对照组平均OD570)根据中效方程式fa/fu＝(D/Dm)^m，两边取对数logfa/fu＝mlogD-mlogDm，设a＝-mlogDm，b＝m，x＝logD，y＝logfa/fu，代入中效方程式得y＝bx-a；其中fa为药物作用效应，fu＝1-fa，D为药物浓度，m为斜率，Dm为中效浓度，即50％效应时的药物浓度。依上述公式，计算出两种抗癌药单用及合用时各自的中效浓度Dm(logDm＝-a/m)，再计算出单用及两药合用时在各种效应时所需药物浓度〔D＝Dm(fa/fu)1/m〕，可计算出两药合用时在各种效应时的合用指数〔CI＝D1/DX1+D2/DX2+α(D1D2)/(DX1DX2)，D1、D2为两药合用时产生X效应时两药各自所需浓度，DX1、DX2为两药单独使用时产生X效应时两药各自浓度〕。α＝0为两种相互排斥性药物，α＝1为两种相互非排斥性药物。因GA与Ori作用机制不同，故本实验中取α＝0。当CI＜1，两药合用效应为协同；CI＝1，两药合用效应相加；CI＞1，两药合用效应拮抗。

经过软件分析，本发明的复方药物组合物具有良好的协同作用，具体效应见表5，根据Median-effect Principle评价效应的原则，即CI指数＜0.1时具有很强的协同作用(Very strongsynergism)；CI指数为0.1-0.3时为强协同效应(Strong synergism)；CI指数为0.3-0.7具有协同效应(Synergism)；CI指数为0.7-0.85具有中度协同效应(Moderate synergism)；CI指数为0.85-0.90区间时具有弱协同效应(Slight synergism)；CI指数为0.90-1.10区间时具有近叠加效应(Nearly additive)；CI指数＞1.10及以上时具有拮抗效应。表4可见，GA和Ori配伍具有协同效应；尤其是当两者摩尔比为1-4∶1配伍时具有良好的协同效应，当两者摩尔比为2∶1时协同效应最强。

表4  GA和Ori不同配伍组合作用24小时的联合指数CI比较

实施例3

处方：

甘草次酸                277.5克

冬凌草甲素              107.5克

微晶纤维素              72克

淀粉                    15克

羧甲基淀粉钠            20克

硬脂酸镁                2.5克

10％淀粉浆              5.5克

                        压制1000片

制备工艺：

将药物和辅料分别过80目筛，将甘草次酸与48克微晶纤维素和12克羧甲基淀粉钠充分混合，10％淀粉浆制软材，18目筛制粒，60℃下干燥，得颗粒1。将冬凌草甲素与24克微晶纤维素、15克淀粉和8克羧甲基淀粉钠充分混合，10％淀粉浆制软材，18目筛制粒，60℃下干燥，得颗粒2。按等量递增原则，将颗粒1和颗粒2充分混合，16目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，片重500mg。

Claims (5)

1.一种用于治疗急性髓性白血病的复方药物组合物，其特征是：活性成分由甘草次酸和冬凌草甲素组成。

2.权利要求1的复方药物组合物，其中甘草次酸和冬凌草甲素的摩尔比为1∶1～4∶1。

3.权利要求2的复方药物组合物，其中甘草次酸和冬凌草甲素的摩尔比为1∶1～2∶1。

4.权利要求1的复方药物组合物，还含有药物上可接受的载体。

5.权利要求1的复方药物组合物用于制备治疗急性髓性白血病的药物的用途。

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