CN101947230B

CN101947230B - 5’-amp用于治疗痛风性关节炎的用途

Info

Publication number: CN101947230B
Application number: CN201010261859A
Authority: CN
Inventors: 苗志敏; 李长贵; 王云龙
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-08-25
Filing date: 2010-08-25
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2030-08-25
Also published as: CN101947230A

Abstract

本发明公开了一种5’-AMP在制备用于治疗痛风性关节炎的药物中的用途。有关试验证明了5’-AMP用于治疗痛风性关节炎一是能够显著降低痛风性关节炎关节腔肿胀程度，二是能够显著降低痛风性关节炎关节腔内结缔组织炎症细胞的浸润。5’-AMP作为注射用药治疗痛风性关节炎，对动物无明显损害，未发现有不良副作用，是一种安全可靠的能够用于治疗痛风性关节炎的药物。

Description

5’-AMP用于治疗痛风性关节炎的用途

技术领域

本发明涉及5’-AMP用于治疗疾病的新用途，具体地说是涉及5’-AMP用于治疗痛风性关节炎的用途。

背景技术

痛风是长期嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少所引起的一组异质性、代谢性疾病。痛风的临床特点为高尿酸血症、反复发作的急性关节炎、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形，累及肾脏引起慢性间质性肾炎和肾结石等，常并发心脑血管疾病而危及生命，好发男性、绝经期女性。痛风分原发性(遗传、酶缺陷等)和继发性(慢性溶血性贫血、甲状旁腺功能亢进、各种肾病等)两种，其发病的先决条件是高尿酸血症，高尿酸血症是指37℃时血清中尿酸含量男性超过416μmol/L(70mg/L)、女性超过357μmol/L(60mg/L)，超过此浓度时尿酸盐可沉积在组织中，造成组织学改变。5％～12％的高尿酸血症患者最终发展成为痛风，高尿酸血症患者只有出现尿酸盐结晶沉积、关节炎、肾病、肾结石等才称为痛风。因此，痛风主要是尿酸盐沉积而引起的炎性反应。血液或滑囊液中的尿酸盐浓度达到饱和后，即会出现结晶沉淀，这是痛风形成的基础。尿酸盐晶体在关节腔内会被单核细胞吞噬，激活NALP3复合体，随之NALP3与ASC蛋白结合激活capase1，capase1是一种IL-1β转化酶，可以剪切IL-1β前体使之形成有活性的IL-1β，然后IL-1β与IL-1受体复合物结合，通过MyD88启动NFκB触发继发性的炎性细胞因子转录，最终导致炎症反应。

大量研究证实，轻度低温(Mild hypothermia)又称为亚低温，其在脑缺血等疾病的发生发展过程中有明显的治疗作用，主要通过降低代谢反应、酶活性以及炎症反应等发挥作用。

临床上较为常见的急性脑血管病脑缺血，缺血后造成局部过度的炎症反应是脑缺血性损伤的主要原因之一。研究显示，轻度低温可以通过下调粘附分子的表达而降低血管内白细胞的迁移及浸润到脑局部缺血部位，最终抑制脑缺血性损伤导致的炎症反应。同时，轻度低温也可以通过抑制炎症通路中的NFκB激酶的激活而降低炎症反应。NFκB是炎症反应中最重要的调控因子之一，介导多种信号引起的炎症反应，包括炎症因子、细菌及病毒产物、缺氧再充氧以及辐射等，同时其也是基因诱导性表达的重要调控因子之一，包括免疫、细胞粘附、细胞生长、死亡等。NFκB也激活许多基因，参与到缺血性损伤的急性期及其导致的炎症反应，比如诱生型一氧化氮合酶、IL-1β、TNF-α、胞间粘附分子(ICAM-1)、环氧合酶以及IL-6等。

轻度低温能够抑制中风导致的炎症反应中NFκB信号通路，降低了NFκB的转运及结合活性，同时也通过抑制NFκB抑制蛋白(IκB-α)及IκB激酶降低IKK活性来影响NFκB调节蛋白的水平。另外，低温能抑制两种NFκB靶基因的表达：诱生型一氧化氮合酶及TNF-α的表达。

5’-AMP是5’-腺苷酸的英文别名，其中文别名还有如腺苷-5’-磷酸(+4℃)、腺苷5’-磷酸、5’-磷酸腺苷、5’-腺苷-磷酸等，至今并未发现有关5’-AMP用于治疗痛风性关节炎的用途的报道。目前临床上治疗急性痛风性关节炎的特效药物秋水仙碱其副作用较大，易出现胃肠道症状、骨髓抑制等不良反应，因此，亟需开发一种特效且副作用相对较小的药物。

发明内容

本发明在于提供5’-AMP用于治疗疾病的一种新用途。

其技术解决方案是：

5’-AMP在制备用于治疗痛风性关节炎的药物中的用途。

5’-AMP应用在用于能降低痛风性关节炎关节腔肿胀程度的药物。

5’-AMP应用在用于能降低痛风性关节炎关节腔内结缔组织炎症细胞浸润的药物。

本发明5’-AMP在制备用于治疗痛风性关节炎的药物中的用途，其有益技术效果如下：证明了5’-AMP用于治疗痛风性关节炎一是能够显著降低痛风性关节炎关节腔肿胀程度，二是能够显著降低痛风性关节炎关节腔内结缔组织炎症细胞的浸润。5’-AMP作为注射用药治疗痛风性关节炎，对动物无明显损害，未发现有不良副作用，是一种安全可靠的能够用于治疗痛风性关节炎的药物。

附图说明

下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步说明：

图1、图2为开展本发明试验过程中所需人工尿酸盐晶体生成状态图，其中图1为在非偏振光下所观察到的尿酸盐晶体形态，图2为偏振光下所观察到的尿酸盐晶体形态。

图3为开展本发明实验过程中大鼠腹腔在注射5’-AMP后，体温随时间变化柱状图。

图4为开展本发明实验过程中痛风性关节炎动物模型经低温干预后关节腔肿胀程度变化状态图。

图5、图6、图7示出了痛风性关节炎动物模型组经低温干预后关节腔内缔结组织病理变化状态图，其中图5示出了痛风性关节炎模型组之情形，图6示出了低温干预组之情形，图7示出了空白对照组之情形。

具体实施方式

本发明应用5’-AMP诱导低温治疗痛风性关节炎，通过观察关节腔的肿胀程度以及炎症细胞的浸润，为临床上针对痛风性关节炎新药研发提供可能的理论指导和依据。

内容与要求：

应用大鼠痛风性关节炎动物模型、病理切片H&E染色等技术方法首次将低温应用于痛风性关节炎的研究，测量关节腔的肿胀程度，关节腔内结缔组织进行常规病理分析。

技术指标：

1、利用尿酸及氢氧化钠制备尿酸盐晶体，偏振光显微镜镜检，确定有晶体生成，参见图1与图2。

2、大鼠腹腔注射5’-AMP后，1.5h大鼠体温即达到16度左右，注射后18h后恢复到正常体温，表明大鼠低温模型构建成功，参见图3。

3、将痛风性关节炎动物模型经低温干预，测定关节腔肿胀程度，与痛风性关节炎模型组相比，低温干预组能明显降低关节腔的肿胀程度，参见图4。

4、将痛风性关节炎动物模型经低温干预，取关节腔内结缔组织进行常规病理分析，结果证实低温干预组能明显抑制炎症细胞的浸润，参见图5、图6与图7。

具体试验步骤为：

1)尿酸盐晶体的制备：194ml蒸馏水加入6ml 1M NaOH，煮沸，调节pH值至7.2，冷却至室温，置4℃冰箱中过夜，滤纸滤出沉淀，干燥，过250um网筛，偏振光显微镜下鉴定。

2)选取雄性wistar大鼠，体重200g左右，剃毛机去毛。

3)腹腔注射5’-AMP，剂量按每千克体重选用0.5克5’-AMP的比例计算，将大鼠置于已达到4度的人工气候箱内。

4)每隔1h检测一次大鼠肛温，测量一次关节腔周径，待其体温达到16度左右(大约注射5’-AMP两个小时后)，调节人工气候箱，使其温度达到16度，同时将制备好的尿酸盐晶体溶于0.9％的生理盐水中，加入Tween 80，使其达到10％，混匀后注射入大鼠关节腔内。

5)注射5’-AMP 10h后，将大鼠处死，取关节腔内结缔组织于福尔马林溶液中固定。

6)标本固定后进行脱水处理，分别经过80％、90％、95％、100％等浓度的乙醇两小时。

7)标本脱水后，利用石蜡进行包埋，使液体石蜡浸入组织中，石蜡凝固后，组织即被包在其中。

8)将切片机厚度调节器4-6um，将包埋好的蜡块进行切片。

9)铺片：用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40-45℃的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。

10)贴片、烘片：待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处，置于60-65℃恒温箱内烤片15-30分钟，脱去融化组织间隙的石蜡。

11)将处理好的标本用苏木素-伊红染色。

经试验验证，应用5’-AMP治疗痛风性关节炎在轻度低温即亚低温条件下注射给药，治疗效果较为显著。

Claims

1.5’-AMP在制备用于治疗痛风性关节炎的药物中的用途。

2.权利要求1的用途，其中所述5’-AMP应用在用于能降低痛风性关节炎关节腔肿胀程度的药物。

3.权利要求1的用途，其中所述5’-AMP应用在用于能降低痛风性关节炎关节腔内结缔组织炎症细胞浸润的药物。