CN101942430A - 一种提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法 - Google Patents
一种提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法。该方法将红豆杉细胞接种在B5培养基中培养至细胞成熟，将成熟的细胞收集，进行紫外辐射。通过紫外辐射的红豆杉细胞，其紫杉醇含量大幅度提高，提高幅度为60％-140％。本发明采用的方法，操作简单，成本极低，是提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的有效方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用紫外辐射提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法。
背景技术
红豆杉系红豆杉科(Taxaceae)红豆杉属(Taxus)的一类乔木和灌木，全世界共11种，从欧亚大陆和北美的亚北极区到中美和东南亚的亚热带甚至热带地区均有分布。紫杉醇是一种二萜类生物碱，经临床证明对治疗卵巢癌、肺癌、结肠癌、转移性乳腺癌、黑色素瘤、白血病等多种癌症有特效，致使紫杉醇成为当前最热门的抗癌药物之一。
目前紫杉醇主要从树皮中获取，来源极其有限，这不仅破坏了红豆杉资源和生态平衡，也根本无法满足人们对紫杉醇日益增长的需求。利用植物组织细胞培养的方法，培养红豆杉细胞生产紫杉醇及其类似物是保护红豆杉资源、扩大紫杉醇来源的一条有效途径。但是，红豆杉细胞内紫杉醇含量少，工业化成本高。因此，如何提高红豆杉中紫杉醇的含量成为人们十分管住的问题，同时也是一个难度较大的问题。
植物体内有一套防御系统来生成一类抗病蛋白来地狱外来病菌、害虫和损伤等不良环境，这些抗病蛋白可用于增加细胞壁强度，形成愈伤瘤、或作为一种溶菌酶，以及合成植物抗生素等。植物抗生素主要包括两大类：萜类和已黄素类。紫杉醇是二萜类化合物，与植物防卫系统对抗昆虫和病原菌侵袭产生植保素的合成路径有部分重叠，作为诱导子的紫外辐射能够通过刺激植物防伪系统二促进其中一些此生代谢的生物转化。紫外辐射的主要作用是可以调节代谢过程中的某些酶活性，并能对某些关键酶在转录水平上进行调节。
本发明的目的就是提供一种简便、快速提高红豆杉细胞中紫杉醇含量60％-140％的方法。
发明内容
本发明的目的，在于提供一种提高红豆杉细胞中紫杉醇的含量的方法，该方法可以明显提高紫杉醇的含量。
本发明通过以下技术方案实现。将红豆杉细胞接种于B5固体培养基上，在24-26摄氏度及黑暗条件下培养细胞，红豆杉细胞生长周期为50-55天。50-55天后，收集成熟的红豆杉细胞，对其进行紫外辐射。其技术特征在于：培养50-55天的细胞收集照射紫外线。其技术特征在于：其特征在于紫外线波长为256nm-365nm，辐射时间为16-20小时。
配制B5培养基，将红豆杉细胞接种于B5培养基上，培养细胞的生长条件为：24-26摄氏度，暗培养。
细胞生长至50-55天进行紫外辐射，照射条件为：紫外线波长256nm-365nm；辐射时间为16-20小时。
紫外辐射后，将红豆杉细胞晾晒烘干获得成品，对干细胞采用高效液相色谱测定紫杉醇的含量。通过对比试验，验证本发明的效果。
本发明的效果是十分显著的。以东北红豆杉细胞进行实验，其结果是：细胞中紫杉醇含量，进行紫外辐射的细胞含量是常规培养细胞含量0.6-1.4倍。本发明的优点在于，操作简单可靠，结果明显，过程不污染环境。
具体实施方式
1、制备B5培养基。
2、在B5培养基中接种东北红豆杉细胞组织，接种比为：细胞鲜重∶培养基＝5g∶50ml。
3、红豆杉细胞暗培养50-55天后，对其进行紫外辐射，紫外线波长256nm-365nm；辐射时间为16-20小时。
4、光照结束后，收集红豆杉细胞，并干燥。
5、检测结果
采用高效液相色谱的方法对不同紫外辐射时间的细胞进行检测，确定进行16-20小时辐射的红豆杉细胞其紫杉醇含量提高量较多。
表1紫外线照射实验
| 紫外照射时间(小时) | 含量(‰) | 取样瓶数(瓶) | 干重(克) | 平均干重(克/瓶) |
| 0 | 0.098 | 30 | 11 | 0.367 |
| 8 | 0.891 | 30 | 10 | 0.333 |
| 10 | 1.057 | 30 | 10 | 0.333 |
| 12 | 1.699 | 30 | 12 | 0.40 |
| 14 | 1.246 | 30 | 10 | 0.333 |
| 16 | 4.855 | 30 | 10 | 0.333 |
| 18 | 2.334 | 30 | 11 | 0.367 |
| 20 | 1.675 | 30 | 10 | 0.333 |
Claims (2)
1.一种提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法，是将红豆杉细胞接种于B5固体培养基中，在温度为24℃-26℃及黑暗的条件下培养红豆杉细胞；红豆杉细胞生长周期为50-55天。50-55天后，收集成熟的红豆杉细胞，对其进行紫外辐射；其技术特征在于：收集培养50-55天的红豆杉细胞，收集起来的细胞照射紫外线。
2.按权利要求1所述的提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法，其特征在于紫外线波长为256nm-365nm，辐射时间为16-20小时，效果最佳。
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| CN2010102248906A CN101942430A (zh) | 2010-07-13 | 2010-07-13 | 一种提高红豆杉细胞中紫杉醇含量的方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108841778A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-11-20 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种红豆杉细胞组织培养物 |
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2010
- 2010-07-13 CN CN2010102248906A patent/CN101942430A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108841778A (zh) * | 2018-04-28 | 2018-11-20 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种红豆杉细胞组织培养物 |
| CN108841778B (zh) * | 2018-04-28 | 2022-05-17 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种红豆杉细胞组织培养物 |
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