发明内容
本发明提供了一种含多尼培南和氨基酸的组合物,其中氨基酸选自丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或苏氨酸中的一种或一种以上的混合氨基酸,优选苏氨酸。其中多尼培南与氨基酸的质量比为1∶0.1~1∶5,优选1∶0.5~1∶2。
本发明提供的组合物可以是液态的或固态的,优选固态形式。其中,液态形式的组合物为透明稳定的溶液,在溶液中无任何不溶物,优选为含多尼培南和氨基酸的水溶液。其中,固态形式优选含多尼培南结晶和氨基酸结晶的组合物。
制备本发明的组合物时,可以按照本领域的常规方法。如制备液态组合物时,可将多尼培南、氨基酸和溶剂先后或同时加入到器皿中,通过搅拌等手段得到澄清透明溶液,这里的溶剂可为注射用水或者适合注射用的等渗剂如氯化钠溶液或葡萄糖溶液等。在制备固态组合物时,可以从含多尼培南和氨基酸的水溶液中析出得到,优选以重结晶的方式析出结晶组合物。
本发明提供的含多尼培南和氨基酸的液态组合物的制备方法包括将多尼培南和氨基酸溶解于溶剂中,形成溶液的过程。其中多尼培南与氨基酸的质量比在1∶0.1~1∶5之间,优选1∶0.5~1∶2之间;其中氨基酸选自丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或苏氨酸中的一种或一种以上的混合氨基酸,优选苏氨酸。在制备过程中,溶解多尼培南、氨基酸的顺序不受限制,可以先后或同时进行溶解操作,优选的,先制备氨基酸的溶液,然后加入多尼培南溶解;其中多尼培南可以为无水形式也可以为其水合物,其可以为多尼培南的粗品也可以是已经纯化过的多尼培南;在溶解的过程中,可以适当加热加快溶解,加热的温度在40~55℃之间,优选45~50℃。在制备得到多尼培南和氨基酸的溶液后,视需要,可加入活性炭进行搅拌脱色,或经微孔膜过滤得到无菌溶液。优选的溶剂为水、氯化钠溶液或葡萄糖溶液。
本发明提供的含多尼培南和氨基酸的固态组合物的制备方法包括以下步骤:
(1)将多尼培南和氨基酸溶解于溶剂中,得到含多尼培南和氨基酸的溶液;
(2)从(1)所得的溶液中析出多尼培南和氨基酸;
(3)将(2)所得固体分离、干燥。
上述制备方法中,其中多尼培南在溶剂中的浓度为0.02~0.2g/mL,优选0.05~0.1g/mL;多尼培南与氨基酸的质量比在1∶0.3~1∶3之间,优选1∶0.5~1∶1.5之间;其中氨基酸选自丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或苏氨酸中的一种或一种以上的混合氨基酸,优选苏氨酸。
其中,在步骤(1)溶液的制备过程中,溶解多尼培南、氨基酸的顺序不受限制,可以先后或同时进行溶解操作,优选的,先制备氨基酸的溶液,然后加入多尼培南溶解;其中多尼培南可以为无水形式也可以为其水合物,其可以为多尼培南的粗品也可以是已经纯化过的多尼培南;在溶解的过程中,溶液加热或维持在40~55℃之间,优选45~50℃。在制备得到多尼培南和氨基酸的溶液后,视需要,可加入活性炭进行搅拌脱色,或经微孔膜过滤得到无菌溶液。优选的溶剂为水、氯化钠溶液或葡萄糖溶液。
步骤(2)中,可以通过冷却使多尼培南和氨基酸从溶液中析出,优选以固态结晶的形式析出。可以辅以搅拌、加入晶种等任何有利于析晶的方法。对本领域人员而言,可以通过水浴或者自然降温等方法来冷却。优选的,在搅拌状态下,在约0~30℃下冷却;较优选的,在搅拌状态下,约0~10℃下冷却;更优选的,在搅拌状态下,在约0~5℃下冷却。在结晶析出后,优选保持溶液温度继续搅拌1~10h熟化,更好1~3h。
步骤(3)中的分离操作可以为离心分离或过滤等本领域常用的分离方法,优选过滤;视需要,分离后对多尼培南和氨基酸的结晶组合物进行洗涤,洗涤可以用醇或醇的水溶液;干燥的条件为20~60℃下减压干燥1~10小时,压力为20~30mmHg;优选在30℃下减压干燥4小时。得到的组合物中,多尼培南与氨基酸的质量比为1∶0.1~1∶5,优选1∶0.5~1∶2。该组合物的含水量取决于其中多尼培南的含水量,干燥条件的不同,其中多尼培南的含水量为4~8%。
优选的,本发明制备含多尼培南和氨基酸的固态组合物的方法包括以下步骤:
(1)将多尼培南和氨基酸溶解于溶剂中,得到含多尼培南和氨基酸的溶液;
(2)从(1)所得的溶液中析出多尼培南和氨基酸;
(3)向(2)中继续添加醇类溶剂;
(4)将(3)所得固体分离、干燥。
上述制备方法中,其中多尼培南在溶剂中的浓度为0.02~0.2g/mL,优选0.05~0.1g/mL;多尼培南与氨基酸的质量比在1∶0.3~1∶3之间,优选1∶0.5~1∶1.5之间;其中氨基酸选自丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或苏氨酸中的一种或一种以上的混合氨基酸,优选苏氨酸。
其中,在步骤(1)溶液的制备过程中,溶解多尼培南、氨基酸的顺序不受限制,可以先后或同时进行溶解操作,优选的,先制备氨基酸的溶液,然后加入多尼培南溶解;其中多尼培南可以为无水形式也可以为其水合物,其可以为多尼培南的粗品也可以是已经纯化过的多尼培南;在溶解的过程中,溶液加热或维持在40~55℃之间,优选45~50℃。在制备得到多尼培南和氨基酸的溶液后,视需要,可加入活性炭进行搅拌脱色,或经微孔膜过滤得到无菌溶液。优选的溶剂为水、氯化钠溶液或葡萄糖溶液。
步骤(2)中,可以通过冷却使多尼培南和氨基酸从溶液中析出,优选以固态结晶的形式析出。可以辅以搅拌、加入晶种等任何有利于析晶的方法。对本领域人员而言,可以通过水浴或者自然降温等方法来冷却。优选的,在搅拌状态下,在约0~30℃下冷却;较优选的,在搅拌状态下,约0~10℃下冷却;更优选的,在搅拌状态下,在约0~5℃下冷却。在结晶析出后,优选保持溶液温度继续搅拌1~10h熟化,更好1~3h。
步骤(3)中的醇类溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、异戊醇等中的一种或者几种的混合溶剂,优选乙醇、异丙醇中的一种或两种的混合溶剂,最优选乙醇。其中醇类溶剂与水溶液的体积比为0.1∶1~20∶1,优选为2∶1~5∶1。视需要,醇在加入之前可先脱除热源,加入醇类溶剂的过程中优选在搅拌状态下缓慢加入,例如滴加。加入醇类溶剂后搅拌1~10h熟化,优选1~3h。搅拌时溶液的温度应保持在0~10℃,优选0~5℃。
步骤(4)中的分离操作可以为离心分离或过滤等本领域常用的分离方法,优选过滤;视需要,分离后对多尼培南和氨基酸的结晶组合物进行洗涤,洗涤可以用醇或醇的水溶液;干燥的条件为20~60℃下减压干燥1~10小时,压力为20~30mmHg;优选在30℃下减压干燥4小时。得到的组合物中,多尼培南与氨基酸的质量比为1∶0.1~1∶5,优选1∶0.5~1∶2。该组合物的含水量取决于其中多尼培南的含水量,干燥条件的不同,其中多尼培南的含水量为4~8%。
本发明还提供一种药物制剂,它包含治疗有效量的上述多尼培南和氨基酸的组合物。
本发明的组合物可用于制备各种药物制剂,合适的药物制剂包括片剂、包衣片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、丸剂、口服液、糊剂、胶体、膏剂、喷雾剂、乳剂、注射用溶液剂、注射用无菌粉等;优选的药物制剂为片剂、胶囊、注射用溶液剂、注射用无菌粉;更优选的药物制剂为注射用溶液剂和注射用无菌粉;最优选的药物制剂为注射用无菌粉。在制备上述的药物制剂时,可加入一种或多种药学上可接收的载体或赋形剂如填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、注射用水、注射用等渗剂或冻干保护剂等,并通过本领域的公知技术来制备。例如,在制备注射用溶液时,可加入注射用水、注射用等渗剂如葡萄糖溶液和氯化钠溶液等。优选按照实施例的方法通过灭菌溶剂结晶法来制备得到无菌结晶性粉末,然后通过分装供临床使用,在使用时,可将在药学上可接受和可注射的任何介质中溶解再制备成溶液使用。
本发明所述的丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和苏氨酸可为D型、L型或者DL型中的一种或一种以上的混合物,优选L型、DL-型中一种或两种。所述的多尼培南可以为无水形式、水合物或其混合物。本发明中当涉及到质量比时,多尼培南均换算成其无水物来计算。
本发明的组合物和含有本发明组合物的药物制剂可以用于制备治疗细菌性感染的药物。
本发明将氨基酸加入多尼培南后,提高了多尼培南的稳定性,特别是提高了多尼培南在溶液中的稳定性。例如,提高了多尼培南在结晶或重结晶过程中稳定性,提高了多尼培南制备成溶液后的贮存稳定性。此外,从多尼培南和氨基酸的液态组合物中析出的固态组合物,特别是结晶组合物,其粉体的流动性优于未加入氨基酸的多尼培南结晶,更有利于将多尼培南的无菌粉进行分装。
具体实施方式
通过下述实施例将有助于理解本发明,但并不限制本发明的内容。
以下各实施例中产品纯度采用HPLC方法测定,具体测定条件如下:
仪器:安捷伦高效液相色谱仪1100
色谱柱:美国费罗门C18 ODS 250×4.6
柱温:25℃
波长:220nm
流动相:10mmol/L KH2PO4溶液(pH=5.8)∶乙腈=95∶5,面积归一法。
含量也采用上述HPLC方法测定,相对含量采用峰面积与多尼培南对照品峰面积比值确定。
实施例1(多尼培南粗品的制备)
100克DN-8(参见文献organic process research & development 2003,7,649-654方法制备)溶解于水(450ml)和THF(800ml),加入100克Pd/C(含水量66%),加热至25℃下,20-24kg压力下,反应2小时,加氢过程中放热,维持反应温度在30-40℃间反应,反应完毕,抽滤,用150ml(THF∶水=2∶1)洗涤钯碳,用乙酸乙酯(750ml×2)洗涤水层,正丁醇(500ml×2)洗涤水层,水层降温至0℃,有淡黄色固体析出,保温0-5℃搅拌过夜,抽滤,25℃下减压干燥15小时,得多尼培南粗品(32克,收率65%,纯度96.2%)。
实施例2
将多尼培南粗品(1.0g)溶解于蒸馏水溶液(22ml)中,搅拌下加热,至55℃下溶解,将其溶液维持在50~55℃,加入活性炭(50mg)搅拌脱色5min,过滤,脱除热源,取滤液冷却至0~5℃搅拌,约10小时有固体析出,保持0~5℃熟化2小时。将经脱热源的乙醇(30ml)在约1小时内滴入其中,保持0~5℃熟化2小时,然后滤出所得结晶。所得结晶用80%乙醇水溶液(5ml)洗涤后,在30℃水泵(20-30mmHg)减压条件下干燥4小时,得到多尼培南0.62g(纯度98.51%)。
实施例3
将多尼培南粗品(1.0g)和L-苏氨酸(0.9g)溶解于蒸馏水溶液(15ml)中,搅拌下加热,至50℃下溶解,将其溶液维持在50℃,加入活性炭(50mg)搅拌脱色5min,过滤,脱除热源,取滤液冷却至0~5℃搅拌,约1小时内有固体析出,保持0~5℃熟化2小时。将经脱热源的乙醇(30ml)在约1小时内滴入其中,保持0~5℃熟化2小时,然后滤出所得结晶。所得结晶用80%乙醇水溶液(5ml)洗涤后,在30℃水泵(20-30mmHg)减压条件下干燥4小时,得到多尼培南和L-苏氨酸组合物1.7g(多尼培南纯度99.68%,多尼培南与L-苏氨酸的质量比为1∶1)。
实施例4
将多尼培南粗品(1.0g)和L-苏氨酸(0.5g)溶解于蒸馏水溶液(15ml)中,搅拌下加热,至50℃下溶解,将其溶液维持在50℃,加入活性炭(50mg)搅拌脱色5min,过滤,脱除热源,取滤液冷却至0~5℃搅拌,约1小时内有固体析出,保持0~5℃熟化2小时。将经脱热源的乙醇(30ml)在约1小时内滴入其中,保持0~5℃熟化2小时,然后滤出所得结晶。所得结晶用80%乙醇水溶液(5ml)洗涤后,在30℃水泵(20-30mmHg)减压条件下干燥4小时,得到多尼培南和L-苏氨酸组合物1.3g(多尼培南纯度99.42%,多尼培南与L-苏氨酸的质量比为1∶0.43)。
实施例5
将多尼培南粗品(1.0g)和L-苏氨酸(0.7g)溶解于蒸馏水溶液(15ml)中,搅拌下加热,至50℃下溶解,将其溶液维持在50℃,加入活性炭(50mg)搅拌脱色5min,过滤,脱除热源,取滤液冷却至0~5℃搅拌,约1小时内有固体析出,保持0~5℃熟化2小时。将经脱热源的乙醇(30ml)在约1小时内滴入其中,保持0~5℃熟化2小时,然后滤出所得结晶。所得结晶用80%乙醇水溶液(5ml)洗涤后,在30℃水泵(20-30mmHg)减压条件下干燥4小时,得到多尼培南和L-苏氨酸组合物1.4g(多尼培南纯度99.55%,多尼培南与L-苏氨酸质量比为1∶0.59)。
实施例6
将多尼培南粗品(1.0g)和L-苏氨酸(0.3g)溶解于蒸馏水溶液(15ml)中,搅拌下加热,至50℃下溶解,将其溶液维持在50℃,加入活性炭(50mg)搅拌脱色5min,过滤,脱除热源,取滤液冷却至0~5℃搅拌,约1小时内有固体析出,保持0~5℃熟化2小时。将经脱热源的乙醇(30ml)在约1小时内滴入其中,保持0~5℃熟化2小时,然后滤出所得结晶。所得结晶用80%乙醇水(5ml)洗涤后,在30℃水泵(20-30mmHg)减压条件下干燥4小时,得到多尼培南和L-苏氨酸组合物1.7g(多尼培南纯度99.13%,多尼培南与L-苏氨酸的质量比为1∶0.2)。
实施例7 多尼培南粉体流动性的考察
测定实施例2-6多尼培南粉体的休止角,结果如下:
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实施例2 |
实施例3 |
实施例4 |
实施例5 |
实施例6 |
休止角(θ) |
46° |
35° |
35° |
37° |
38° |
上述结果显示,加入氨基酸后,减小了多尼培南粉体的休止角,使其在30°~40°之间,改善了粉末的流动性,能满足大生产时分装设备的要求,保证装量差异在合格范围。
实施例8 溶液稳定性考察
将实施例2中所得到的多尼培南,实施例3、实施例4所得多尼培南和L-苏氨酸的组合物,分别配制成浓度(以无水多尼培南计)为10mg/ml水溶液,分别置于室温25℃、40℃、60℃环境下,分别取1h,2h,4h后的溶液经HPLC检测,以室温0h峰面积作为100%对照,计算相对峰面积比,测得相对含量,从而确定其溶液稳定性。
上述结果显示,多尼培南和氨基酸组合物的溶液稳定性要优于多尼培南溶液的稳定性,尤其在较高温度时,说明氨基酸可显著增加多尼培南在结晶或重结晶过程中的稳定性。