CN101891166A - 氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种矿石提取技术，具体地说是涉及一种从湖北铜山口铜矿土样中分离得到一株氧化硫硫杆菌At.t和从湖北铜禄山铜矿酸性水坑中分离获得一株氧化亚铁硫杆菌At.f构成的混合菌，应用于低品位磷矿的混合菌浸磷方法。本发明方法包括如下步骤：1)从湖北铜山口铜矿土样取土样和从湖北铜禄山铜矿酸性水坑中取样；2)氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌菌株的富集分离及驯化；3)磷的浸出。本发明方法的有益效果是：该混合菌株活性高浸磷率高达88.75％，成本低：如10％的接种量，远远低于氧化硫硫杆菌现有技术的20％～30％的量，降低了大量昂贵药剂配置培养液的成本；周期短、效率高。4.环境友好：使用的酸性菌液量少，有利于减少环境污染。
Description
技术领域
本发明涉及一种矿石提取技术，具体地说是涉及一种从湖北铜山口铜矿土样中分离得到一株氧化硫硫杆菌At.t和从湖北铜禄山铜矿酸性水坑中分离获得一株氧化亚铁硫杆菌At.f构成的混合菌，应用于低品位磷矿的混合菌浸磷方法。
背景技术
我国磷矿资源丰富，资源总量约500亿吨，分布在26个省。我国的磷矿资源虽然丰富，但分布过于集中，而且中低品位磷矿多、富矿少。随着工业化进程的发展，人们对原料的需求不断扩大，高品位富矿已经开发殆尽，我们不得不去利用这些含量多的低品位、难处理又较为分散的贫矿资源。目前我国的低品位磷矿的开发利用研究工作相对滞后，随着磷矿资源的贫化，高纯和高附加值磷化工产品需求增加，如何利用低品位磷矿生产高质量产品的问题也就显现出来，而利用微生物浸矿的方法来处理低品位磷矿不失为方法中的上选。
传统的采冶工艺在处理低品位复杂矿产资源时，表现为效率低、流程长、生产成本高、环境污染严重。而生物冶金技术(又称生物浸矿技术)正是一种低成本、环境友好、高效加工矿产资源的技术。其是利用某些微生物或其代谢产物对某些矿物(主要为硫化矿物)和元素所具有的氧化、还原、溶解、吸收(吸附)等作用，从矿石中溶浸金属或从水中回收(脱除)有价(有害)金属的湿法冶金过程。其发展已经有数十年的历史，世界各国生物冶金成功地应用于工业化生产的主要是铀、铜和金银等矿山，使用范围从堆浸法逐步扩展到了地浸发和原地破碎浸矿法，正在向铜、铀、金、锰、铅、镍、铬、钴、铁、砷、锌、铝等几乎所有硫化矿的浸出扩大。关于磷矿的微生物浸出，国内外已经有一些报道。根据生理生化特性，能用于磷矿浸出的微生物可分为化能异养微生物和化能自养微生物。异养菌分解磷矿的速度缓慢，浸出率低，实验工业化生产十分困难。而化能自养微生物，它们可从无机物的氧化过程中获得能量，并以二氧化碳作为主要碳源和以无机含氮化合物作为氮源合成细胞物质。这类自养微生物又可分为硫化细菌、氢细菌、贴细菌和硝化细菌四种生理亚群。在生物浸矿中应用的最多为硫化细菌中的硫杆菌属。硫化细菌在生长过程中把元素硫或还原态的硫化物氧化成SO4 2-，并从中获得能量，在此过程中产生硫酸，可用于溶解磷矿。由于硫酸具有较强的溶磷作用，而且自养菌的培养不需要有机营养物，而以磷矿中伴生的或加入的还原态硫或铁矿物为能源自养生长，因此具有工业化生产的可能性。如氧化亚铁硫杆菌能氧化还原性的硫和Fe2+为Fe3+，而Fe3+是常用的氧化剂，它也可以氧化还原态的硫化物。氧化亚铁硫杆菌可以黄铁矿为自养能源，用于磷矿的浸出，目前认为其对黄铁矿的浸矿机理主要有直接作用和间接作用两种理论，一般认为以间接作用为主。直接作用是细菌吸附于黄铁矿颗粒的表面，通过细胞特有的酶体系来氧化金属硫化物使其溶解，与此同时，细菌获得生长繁殖所需的能量。主要发生的总反应表示为：2FeS2+7O2+2H2O-→2FeSO4+2H2SO4，4FeSO4+O2+2H2SO4-→2Fe2(SO4)3+2H2O，这里细菌为催化剂，O2为电子受体。而间接作用是黄铁矿在有菌条件下，能够快速地被氧化，生成大量Fe3+，硫被氧化为H2SO4，Fe3+是有效的矿物氧化剂和浸出剂。Fe3+浸出有价金属后成为Fe2+，而细菌又可以将Fe2+氧化为Fe3+，并提供酸性环境，而使磷矿在酸性环境下，通过Fe3+的作用而发生溶解浸出。
目前国内外对磷矿粉中磷的单一氧化亚铁硫杆和氧化硫硫杆菌的浸出研究有少量报道。从已发表的文章来看，存在如下缺点：氧化亚铁硫杆的浸出时间长、速率慢，浸出率低；氧化硫硫杆菌的菌液用量大、培养基成本高，资源利用率低，如两者均缺乏对磷矿中伴生的黄铁矿的综合利用。为了解决上述困难，本发明提出一种用氧化亚铁硫杆菌和氧化硫硫杆菌形成的混合菌浸出低品位磷矿的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种从湖北铜山口铜矿土样中分离得到一株氧化硫硫杆菌At.t和从湖北铜禄山铜矿酸性水坑中分离获得一株氧化亚铁硫杆菌At.f构成的混合菌，应用于低品位磷矿的混合菌浸磷方法。
本发明一种氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌用于浸出低品位磷矿的方法通过下述技术方案予以实现：本发明一种氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法包括如下步骤：
1)含氧化硫硫杆菌土样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从湖北铜山口铜矿取土样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回，称取10g土样到100mL无菌水中，加入磁力搅拌子搅拌1小时，然后静置；
2)氧化硫硫杆菌富集、分离及纯化：吸取上述上清液10mL到盛有100mL已灭菌的Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在30℃、120r/min的恒温摇床中，此过程需要7d；吸取第一次培养后的菌液10mL到盛有100mL Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在和上述条件相同的情况下再次振荡培养，如此反复振荡培养5次，然后将菌液采用固体培养基稀释涂布平板法分离、纯化；纯化菌种在Starkey固体培养基上培养7-10d出现圆形凸起状直径1mm左右的小菌落，将单独小菌落挑起，接种到装有10mL液体培养基的小锥形瓶或试管中，以纱布封口，培养条件同上，直到小锥形瓶或试管的液体均匀浑浊；重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离4次，最后分离出纯化菌株再进行分子学鉴定确认为氧化硫硫杆菌；
液体培养基采用Waksman培养基：(NH4)2SO4 0.2g/L，K2HPO4·3H2O 3.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.126g/L，S0 10.0g/L，蒸馏水1000mL用50％H2SO4调pH值至2.0。
固体培养基采用Starky-Na2S2O3-琼脂培养基：(NH4)2SO4 2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.25g/L，KH2PO4 3.0g/L，FeSO4·7H2O0.001g/L，Na2S2O3 10g/L，琼脂3.0g/L，蒸馏水1000mL；
3)含氧化亚铁硫杆菌水样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从酸性水坑中取样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回；
4)氧化亚铁硫杆菌的富集分离及纯化：
富集分离：将采集到的水样在无菌条件下以10％的接种量接入置入温度为30℃，转速为140r/min的恒温摇床中震荡培养；当9K基础培养基溶液的颜色由浅绿色开始变为红棕色时，取出菌液10mL转接到新鲜的9K液体培养基中继续培养，如此反复4～5次；经过富集后的细菌仍含有大量的杂菌，进行同液交替培养，分离纯化；将菌种采用平板划线法在固体培养基上涂布，置于30℃、140r/min的恒温培养箱中培养，长出菌落后，挑选单菌落于液体中扩大培养，如此反复4次，得到纯菌种再进行分子学鉴定确认为氧化亚铁硫杆菌；
9K液体培养基：分为基础培养基A和能源培养基B；
基础培养基A液的成分：(NH4)2SO4 3.00g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O 0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，加蒸馏水700mL使之溶解，用1∶1硫酸调pH值到2.0，于121℃，灭菌20min；
能源培养基B液：FeSO4·7H2O 44.7g，加蒸馏水300mL，过滤除菌。待A液冷却至室温后，与B液混合；
固体培养基A液：(NH4)2SO4 1.50g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，琼脂15g，蒸馏水600mL，pH2.0，121℃，灭菌15min；
B液：FeSO4·7H2O 44.0g，蒸馏水400mL，用50％H2SO4调pH1.5，过滤除菌；把A，B液混合倒在平板上；
浸矿培养基：无磷无铁9K液体培养基
5)混合菌的浸磷方法：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.0～2.0，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，15％，其混合比例分别为At.t∶At.f＝1∶9，2∶8，5∶5，加入0.001～0.03g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天，从锥形瓶取1mL浸出液，用磷钼黄比色法测定溶液中可溶性总磷的浓度，根据实验前后溶液中磷含量的变化，计算磷矿石中磷的浸出率80.42％～89.20％。
本发明一种氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法筛选纯化得到的混合菌比起现有报道中出现的菌株相比有如下优点：该混合菌株活性高浸磷率高达88.75％，而绝大多数现有技术的氧化亚铁硫杆单一菌浸磷率在10％～60％；成本低：如10％的接种量，远远低于氧化硫硫杆菌现有技术的20％～30％的量，降低了大量昂贵药剂配置培养液的成本；周期短、效率高：达到同样浸出率的时间要比氧化亚铁硫杆单一缩短近20天；资源利用率高：充分利用了磷矿石自身伴生的黄铁矿和磷矿中磷作为细菌生长能源物和营养物，有利于磷矿中伴生资源的循环和高效利用，且对能源物的消耗少；环境友好：使用的酸性菌液量少，有利于减少环境污染。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明一种氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法技术方案作进一步描述。
本发明氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法包括如下步骤：
1)含氧化硫硫杆菌土样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从湖北铜山口铜矿取土样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回，称取10g土样到100mL无菌水中，加入磁力搅拌子搅拌1小时，然后静置；
2)氧化硫硫杆菌富集、分离及纯化：吸取上述上清液10mL到盛有100mL已灭菌的Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在30℃、120r/min的恒温摇床中，此过程需要7d；吸取第一次培养后的菌液10mL到盛有100mL Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在和上述条件相同的情况下再次振荡培养，如此反复振荡培养5次，然后将菌液采用固体培养基稀释涂布平板法分离、纯化；纯化菌种在Starkey固体培养基上培养7-10d出现圆形凸起状直径1mm左右的小菌落，将单独小菌落挑起，接种到装有10mL液体培养基的小锥形瓶或试管中，以纱布封口，培养条件同上，直到小锥形瓶或试管的液体均匀浑浊；重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离4次，最后分离出纯化菌株再进行分子学鉴定确认为氧化硫硫杆菌；
液体培养基采用Waksman培养基：(NH4)2SO4 0.2g/L，K2HPO4·3H2O 3.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.126g/L，S0 10.0g/L，蒸馏水1000mL用50％H2SO4调pH值至2.0。
固体培养基采用Starky-Na2S2O3-琼脂培养基：(NH4)2SO4 2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.25g/L，KH2PO4 3.0g/L，FeSO4·7H2O0.001g/L，Na2S2O3 10g/L，琼脂3.0g/L，蒸馏水1000mL；
3)含氧化亚铁硫杆菌水样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从酸性水坑中取样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回；
4)氧化亚铁硫杆菌的富集分离及纯化：
富集分离：将采集到的水样在无菌条件下以10％的接种量接入置入温度为30℃，转速为140r/min的恒温摇床中震荡培养；当9K基础培养基溶液的颜色由浅绿色开始变为红棕色时，取出菌液10mL转接到新鲜的9K液体培养基中继续培养，如此反复4～5次；经过富集后的细菌仍含有大量的杂菌，进行固液交替培养，分离纯化；将菌种采用严板划线法在固体培养基上涂布，置于30℃、140r/min的恒温培养箱中培养，长出菌落后，挑选单菌落于液体中扩大培养，如此反复4次，得到纯菌种再进行分子学鉴定确认为氧化亚铁硫杆菌；
9K液体培养基：分为基础培养基A和能源培养基B；
基础培养基A液的成分：(NH4)2SO4 3.O0g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O 0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，加蒸馏水700mL使之溶解，用1∶1硫酸调pH值到2.0，于121℃，灭菌20min；
能源培养基B液：FeSO4·7H2O 44.7g，加蒸馏水300mL，过滤除菌。待A液冷却至室温后，与B液混合；
固体培养基A液：(NH4)2SO4 1.50g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，琼脂15g，蒸馏水600mL，pH2.0，121℃，灭菌15min；
B液：FeSO4·7H2O 44.0g，蒸馏水400mL，用50％H2SO4调pH1.5，过滤除菌；把A，B液混合倒在平板上；
浸矿培养基：无磷无铁9K液体培养基
5)混合菌的浸磷方法：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.0～2.0，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，15％，其混合比例分别为At.t∶At.f＝1∶9，2∶8，5∶5，加入0.001～0.03g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天，从锥形瓶取1mL浸出液，用磷钼黄比色法测定溶液中可溶性总磷的浓度，根据实验前后溶液中磷含量的变化，计算磷矿石中磷的浸出率为80.42％～89.20％。
所述的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌用于浸出低品位磷矿的方法工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.5，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，混合比例分别为At.t∶At.f＝8∶2，加入0.01g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天。磷浸出率为89.20％。
实施例1。
本实施例说明在混合菌比例v/v为10％，At.t∶At.f＝9∶1的浸磷效果。
本实施例的矿石性质为胶磷矿，含P2O5为21.98％，属于低品位，磷矿中其他元素的化学成分和含量为(wt％)：SiO2 24.94，Fe2O3 2.52，CaO 33.55，MgO 1.27，Al2O35.08，S 1.45，F 2.09等；主要物相组成为(wt％)磷灰石+胶磷矿53.00，黄铁矿3.85，碳质2.50，长石+石英30.50，此外，还有方解石、白云石，碳质粘土等。黄铁矿中TFe38.77％(wt)，粒度为-200目占90.2％。
采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.5，依实验需要分别接入纯化At.t菌种9mL和At.f，菌1mL，加入0.01g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养，9天浸出率88.15％。
实施例2。
本实施例说明在混合菌比例v/v为10％，At.t∶At.f＝8∶2的浸磷效果。
本实施例的矿石性质、矿物组成和使用的黄铁矿与实施例1相同。
采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH2.0，依实验需要分别接入纯化At.t菌种8mL和At.f，菌2mL，加入0.01g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养，9天浸出率85.36％。
实施例3。
本实施例说明在混合菌比例v/v为10％，At.t∶At.f＝5∶5的浸磷效果。
本实施例的矿石性质、矿物组成和使用的黄铁矿与实施例1相同。采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化业铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.0，依实验需要分别接入纯化At.t菌种5mL和At.f，菌5mL，加入0.001g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养，9天浸出率84.42％。
实施例4。
本实施例说明在混合菌比例v/v为15％，At.t∶At.f＝4∶1的浸磷效果。
本实施例的矿石性质、矿物组成和使用的黄铁矿与实施例1相同。
采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，调节初始pH2.0，依实验需要分别接入纯化At.t菌种12mL和At.f菌3mL，加入0.03g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养，9天浸出率80.42％。
实施例5。
本实施例说明在混合菌比例v/v为15％，At.t∶At.f＝5∶5的浸磷效果。
本实施例的矿石性质、矿物组成和使用的黄铁矿与实施例1相同。
采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，调节初始pH1.5，依实验需要分别接入纯化At.t菌种7.5mL和At.f菌7.5mL，加入0.001g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天浸出率81.72％。
实施例6。
本实施例说明在混合菌比例为v/v为10％，At.t∶At.f＝5∶5的浸磷效果。
本实施例的矿石性质、矿物组成和使用的黄铁矿与实施例1相同。
采用本发明方法取样、富集分离及纯化后的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌构成的混合菌浸磷。本实施例的工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.5，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，混合比例分别为At.t∶At.f＝8∶2，加入0.01g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天磷浸出率为89.20％。
Claims (2)
1.一种氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
1)含氧化硫硫杆菌土样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从湖北铜山口铜矿取土样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回，称取10g土样到100mL无菌水中，加入磁力搅拌子搅拌1小时，然后静置；
2)氧化硫硫杆菌富集、分离及纯化：吸取上述上清液10mL到盛有100mL已灭菌的Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在30℃、120r/min的恒温摇床中，此过程需要7d；吸取第一次培养后的菌液10mL到盛有100mL Waksman培养基的250mL锥形瓶中，在和上述条件相同的情况下再次振荡培养，如此反复振荡培养5次，然后将菌液采用固体培养基稀释涂布平板法分离、纯化；纯化菌种在Starkey固体培养基上培养7-10d出现圆形凸起状直径1mm左右的小菌落，将单独小菌落挑起，接种到装有10mL液体培养基的小锥形瓶或试管中，以纱布封口，培养条件同上，直到小锥形瓶或试管的液体均匀浑浊；重复在液体培养基中扩大培养和在平板上反复分离4次，最后分离出纯化菌株再进行分子学鉴定确认为氧化硫硫杆菌；
液体培养基采用Waksman培养基：(NH4)2SO4 0.2g/L，K2HPO4·3H2O 3.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.126g/L，S0 10.0g/L，蒸馏水1000mL用50％H2SO4调pH值至2.0。
固体培养基采用Starky-Na2S2O3-琼脂培养基：(NH4)2SO4 2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，CaCl2·2H2O 0.25g/L，KH2PO4 3.0g/L，FeSO4·7H2O0.001g/L，Na2S2O3 10g/L，琼脂3.0g/L，蒸馏水1000mL；
3)含氧化亚铁硫杆菌水样取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从酸性水坑中取样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回；
4)氧化亚铁硫杆菌的富集分离及纯化：
富集分离：将采集到的水样在无菌条件下以10％的接种量接入置入温度为30℃，转速为140r/min的恒温摇床中震荡培养；当9K基础培养基溶液的颜色由浅绿色开始变为红棕色时，取出菌液10mL转接到新鲜的9K液体培养基中继续培养，如此反复4～5次；经过富集后的细菌仍含有大量的杂菌，进行固液交替培养，分离纯化；将菌种采用平板划线法在固体培养基上涂布，置于30℃、140r/min的恒温培养箱中培养，长出菌落后，挑选单菌落于液体中扩大培养，如此反复4次，得到纯菌种再进行分子学鉴定确认为氧化亚铁硫杆菌；
9K液体培养基：分为基础培养基A和能源培养基B；
基础培养基A液的成分：(NH4)2SO4 3.00g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O 0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，加蒸馏水700mL使之溶解，用1∶1硫酸调pH值到2.0，于121℃，灭菌20min；
能源培养基B液：FeSO4·7H2O 44.7g，加蒸馏水300mL，过滤除菌。待A液冷却至室温后，与B液混合；
固体培养基A液：(NH4)2SO4 1.50g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，琼脂15g，蒸馏水600mL，pH2.0，121℃，灭菌15min；
B液：FeSO4·7H2O 44.0g，蒸馏水400mL，用50％H2SO4调pH1.5，过滤除菌；把A，B液混合倒在平板上；
浸矿培养基：无磷无铁9K液体培养基
5)混合菌的浸磷方法：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.0～2.0，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，15％，其混合比例分别为At.t∶At.f＝1∶9，2∶8，5∶5，加入0.001～0.03g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天，从锥形瓶取1mL浸出液，用磷钼黄比色法测定溶液中可溶性总磷的浓度，根据实验前后溶液中磷含量的变化，计算磷矿石中磷的浸出率80.42％～89.20％。
2.根据要求1所述的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌混合菌浸出低品位磷矿的方法，其特征在于：所述的氧化硫硫杆菌和氧化亚铁硫杆菌的混合菌用于浸出低品位磷矿的方法工艺条件为：在盛有80mL浸矿培养基的250mL锥形瓶中，分别加入1g硫粉，1.0g黄铁矿和磨矿时间为20min的磷矿1.0g，用1+1硫酸调节初始pH1.5，依实验需要接入纯化菌种v/v，10％，混合比例分别为At.t∶At.f＝8∶2，加入0.01g表面活性剂Tween80，用浸矿培养基补充至100mL，在设定温度30℃和转速150r/min的恒温摇床中培养9天磷浸出率为89.20％。
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