CN101805778A

CN101805778A - 一种检测嗜铁细菌的检测剂

Info

Publication number: CN101805778A
Application number: CN 201010163639
Authority: CN
Inventors: 余贤美; 周广芳; 艾呈祥; 沈广宁
Original assignee: Shandong Institute of Pomology
Current assignee: Shandong Institute of Pomology
Priority date: 2010-04-28
Filing date: 2010-04-28
Publication date: 2010-08-18

Abstract

一种检测嗜铁细菌的检测剂，按重量比，含有0.0057％-0.0059％铬天青S、0.0070％-0.0074％HDTMA、2.79％-3.19％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.07％-0.11％FeCl₃·6H₂O、0.49％-0.89％琼脂粉；由于低浓度的凝固剂使微生物产生的嗜铁素迅速扩散，因此缩短检测时间。

Description

一种检测嗜铁细菌的检测剂

一、技术领域

本发明涉及一种检测嗜铁细菌的检测剂和检测方法，尤其是一种适应用于从植物根系土壤的检测嗜铁细菌的检测剂。

二、背景技术

嗜铁菌作为一类重要的植物根际促生菌，主要通过分泌嗜铁素，螯合环境中的铁离子，增加土壤中铁的生物有效性，满足微生物和植物生长需要，促进植物生长；同时使环境中的铁的浓度进一步降低，病原微生物由于缺乏铁而不能生长繁殖，进而达到控制植物病害的目的。目前嗜铁素的检测及嗜铁菌的筛选主要采用通用CAS检测平板法。CAS蓝色检测液是由铬天青(Chrome AzurolSulphonate，CAS)、溴化十六烷基三甲铵(Hexadecyltrimethyl-ammoniumbromide，HDTMA)和铁离子组成的一种复合物，呈亮蓝色。当蓝色检测平板中的铁离子被微生物分泌的嗜铁素夺走时，即可在微生物生长的菌落周围形成橘黄色晕圈。CAS检测平板法可用于大多数细菌和真菌分泌的嗜铁素检测，适合于初步筛选产嗜铁素的菌株，还可根据菌落周围晕圈的大小初步判定产嗜铁素的能力大小，该方法相对比较简单、方便。但是，该方法检测平板制作烦琐，且检测剂使用量大。双层平板法，下层为通用CAS检测平板，上层为相应的微生物固体培养基，下层为通用CAS检测平板，可以解决微生物生长限制的问题，但制作步骤烦琐。Milagres等对检测方法进行了改良，将检测平板一分为二，一部分用于培养待测菌，另一部分用于检测嗜铁素的产生。经改良的检测平板可用于所有微生物嗜铁素的检测，然而，该方法耗时太长(需培养15天左右)，待培养物长满培养用培养基，方可查看结果，而且一个平板仅限于对一个分离物的检测。

三、发明内容

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种检测嗜铁细菌的检测剂和检测方法，缩短检测时间。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：按重量比，含有0.0057％-0.0059％铬天青S、0.0070％-0.0074％HDTMA、2.79％-3.19％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.07％-0.11％FeCl₃·6H₂O、0.49％-0.89％琼脂粉。

由于在检测嗜铁细菌的检测剂中使用了0.49％-0.89％的琼脂粉作为凝固剂，低浓度的凝固剂使微生物产生的嗜铁素迅速扩散，缩短检测时间。

本发明设计了，1升重量为1010g的检测嗜铁细菌的检测剂中含有58.5-60.5mg铬天青S、70.9-74.9mg HDTMA、28.24-32.24mg哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.8-1.2mM FeCl₃·6H₂O、5-9g琼脂粉。

由于在1升重量为1010g的检测嗜铁细菌的检测剂中使用了5-9g琼脂粉作为凝固剂，低浓度的凝固剂使微生物产生的嗜铁素迅速扩散，缩短检测时间。

四、附图说明

附图为本发明的实施例一的1小时后的显色结果示意图。

五、具体实施方式

本发明的第一个实施例，按重量比，检测嗜铁细菌的检测剂中含有0.0057％铬天青S、0.0070％HDTMA、2.79％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.07％FeCl₃·6H₂O、0.49％琼脂粉。

本发明的第二个实施例，按重量比，检测嗜铁细菌的检测剂中含有0.0059％铬天青S、0.0074％HDTMA、3.19％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.11％FeCl₃·6H₂O、0.89％琼脂粉。

本发明的第三个实施例，按重量比，检测嗜铁细菌的检测剂中含有0.0058％铬天青S、0.0072％HDTMA、3.10％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.09％FeCl₃·6H₂O、0.61％琼脂粉。

本发明的第四个实施例，以1升重量为1010g为例，含有60.5mg铬天青S、72.9mg HDTMA、30.24mg哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、1mM FeCl₃·6H₂O(溶于10mL 10mMHCl)、7g琼脂粉。

本发明的第五个实施例，以1升重量为1010g为例，含有58.5mg铬天青S、70.9mg HDTMA、28.24mg哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.8mM FeCl₃·6H₂O(溶于10mL 10mMHCl)、5g琼脂粉。

本发明的第六个实施例，以1升重量为1010g为例，含有62.5mg铬天青S、74.9mg HDTMA、32.24mg哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、1.2mM FeCl₃·6H₂O(溶于10mL 10mMHCl)、9g琼脂粉。

先将微生物(已分离获得的微生物或平板稀释法分离的微生物平板)接种于最适培养基中，等培养好后，使用1.5-2mL将检测剂覆盖一薄层于培养物上，15分钟内即可看到覆盖层上颜色的变化。显色后，用灭菌牙签穿过覆盖层将产生晕圈的菌落挑出，接种于相应液体培养基进行振荡培养后接种于相应的固体平板上。

本发明具有以下特点：

1、检测剂中低浓度的凝固剂便于微生物产生的嗜铁素迅速扩散，并缩短显色时间，以快速检测出平板中微生物产生的嗜铁素。

2、而且只需在培养好的微生物平板上覆盖一薄层检测剂，既满足了微生物生长的需求，减少了检测剂的用量，同时还便于目标分离物的挑取以纯化培养。

3、不仅能简化CAS检测平板制作的步骤，而且还能以少量的检测液快速检测出微生物产生的嗜铁素，并筛选出平板中的嗜铁菌。

Claims

1.一种检测嗜铁细菌的检测剂；其特征是：按重量比，含有0.0057％-0.0059％铬天青S、0.0070％-0.0074％HDTMA、2.79％-3.19％哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.07％-0.11％ FeCl₃·6H₂O、0.49％-0.89％琼脂粉。

2.根据权利要求1所述的检测嗜铁细菌的检测剂；其特征是：1升重量为1010g的检测嗜铁细菌的检测剂中含有58.5-60.5mg铬天青S、70.9-74.9mgHDTMA、28.24-32.24mg哌嗪-1，4-二乙磺酸(Piperazine-1，4-bis(2-ethanesulfonic acid)，PIPES)、0.8-1.2mM FeCl₃·6H₂O、5-9g琼脂粉。