CN101790996A - 一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，该农药是将紫茎泽兰粉末通过有机溶剂浸提、旋转蒸发、定容后得到的提取物，该提取物的质量浓度为1g/ml，该生物农药按以下步骤制备，(1)紫茎泽兰鲜叶经阴干，烘至恒重，粉碎为粉末；(2)在紫茎泽兰粉末中按体积比为1∶10加入有机溶剂后浸提得到滤液；(3)将步骤(2)得到的滤液旋转蒸发为膏状物提取物；(4)将(3)步的膏状提取物定容得到质量浓度为1g/ml的紫茎泽兰提取物。本发明的技术方案解决已有传统化学试剂农药在防治植物病毒时会对环境造成破环的缺陷，且制备方法简单，生产成本低，无任何毒害污染。

Description

一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药及其制备方法

技术领域

本发明属于生物农药技术领域，具体来说是涉及一种利用紫茎泽兰来制造抗烟草花叶病毒的生物农药及其制备方法。

背景技术

在农业生产中病毒病是仅次于真菌的第二大类植物病害(赵善欢(主编).植物化学保护(第三版)[M].北京农业出版社，2000.)，世界各地的绝大部分作物都不同程度受其危害，由于防治困难，素有“植物癌症”之称。据相关资料报道(吴拒文，陈建峰.植物源农药及其安全性[J].植物保护，2002，28(4)：39-41.)，20世纪80年代初，仅美国每年因植物病毒病造成的农业经济损失就高达15～20亿美元，而全世界每年因此造成的经济损失更是高达200亿美元左右。植物病毒种类繁多，分布广泛，我国植物病毒病害在各省区都较为普遍，给农业生产造成极大损失，严重影响农民增收和农业发展。

烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus，TMV)，病毒粒体为直杆状，直径18nm，长300nm；粒体分子量为40X107，由外壳蛋白包围着一个核糖核酸中心轴组成。每个粒体有2130个蛋白亚基，以左旋螺旋排列成130圈。RNA为单分子线性、正链ssRNA，在距螺旋中心4.0nm处以螺旋形式回旋于蛋白亚基中。TMV增殖的最适温度为28-30℃，温度在37℃以上时即停止增殖，其毒力和抗逆力均较强。粒体非常稳定，稀释限点为10-6-10-7，致死温度为90-93℃，体外保毒期达2个月以上。干燥叶片中病毒经140℃的高温处理30分种才丧失侵染力，在自然条件下经52年仍有致病力。但在碱性条件下，病毒粒体即发生降解，从而失去侵染力。TMV引起的花叶病是烟草、番茄等作物上十分重要的病害，世界各地发生普遍，损失严重。如在烟草上自苗期至大田期可连续发生，幼苗被侵染后，新叶的叶脉颜色变浅，成半透明的“明脉症”，而后形成黄绿相间的花叶症；苗期侵染的植株发育缓慢，几乎没有经济价值。大田期植株发病，除显示明脉、花叶症状外，病叶上会形成疱斑，厚薄不匀：叶形也会出现各种畸形，如叶缘反卷、皱缩扭曲，叶缘缺刻或成带状。

TMV主要靠病汁液接触传播，在农事操作中沾染了病株汁液的手或工具通过接触烟苗的微伤口侵入。由于病毒的抗逆能力很强，混有病株残体的肥料、种子、土壤和带病的其他寄主植物及野生植物，甚至烤过的烟叶、烟末都可以成为病害的初侵染来源。这些初侵染源或移入大田的病苗，通过各种接触媒介引起再侵染，使病害在田间扩展蔓延。病害发生与品种的抗病性有密切关系，在干旱少雨、气温偏高时发病重，晚栽的比适时早栽的发病重，前茬或本茬套种马铃薯、番茄、油菜、萝卜等地块发病重(许志刚主编.普通植物病理学[M].中国农业出版社，1997.)。TMV寄主范围非常广，其寄主有33科236种，除侵染烟草外，还危害番茄、马铃薯、茄子、辣椒、菠菜、地黄和油菜等作物，人工接种可侵染十字花科、觅科、茄科、菊科、豆科等36科，350余种物。

当今植物病毒病的防治主要是依靠化学制剂，虽然具有一定的控制作用，但容易产生药害和抗药性，严重影响抗植物病毒制剂在农业生产中的应用。随着生活水平的提高、环保意识的加强，植物源农药的研究与开发广泛受到人们重视。我国地域辽阔，植物资源丰富，因而在我国进行植物源生物农药的研制具有明显的优势和广阔的应用前景。植物源活性物质易降解，造成环境污染和毒性残留问题较小，因此，充分利用丰富的植物资源，研究开发高效、无毒或低毒、广谱的抗植物病毒剂和真菌抑制剂具有重要的意义。

植物源抗病毒剂的开发研究始于20世纪初，1913年ALLARD首次发现TMV侵染商陆(Phytolaccacea)后，不能用它的汁液摩擦接种到烟叶上，其后又发现CMV侵染商陆后不能接种到黄瓜上(候玉霞，李重九，马力新.中草药中抗植物病毒TMV活性物质PZ1作用机理研究.中国农业大学学报，2000，5(1)；21-24.)。1925年DUGGER发现商陆中有一种抗病毒物质，用它来处理TMV或黄瓜花叶病毒(Cucumber MosaicVirus，CMV)，就能使病毒失去对非商陆寄主的侵染力，由此引发了对病毒浸染活性抑制的一系列研究，并将植物病毒病的防控引向了生物防治的轨道。到1988年已发现180多种被子植物具有强烈的抑制植物病毒侵染作用，它们主要分布于商陆科、藜科、苋科、紫茉莉科等植物中(邱并生，王敏.植物病毒学研究进展.中国病毒学，2004，19(3)：309-312)，20世纪90年代以来又不断有新的发现。我国科研工作者已从500余种中草药中筛选出近30种对植物病毒病有明显治疗和保护作用的品种。

紫茎泽兰(Eupatorium adenophrum)又名飞机草，属菊科泽兰属，原产于美洲的墨西哥至哥斯达黎加一带，现已广泛分布于亚、澳、美大陆和加列那等群岛的70多个国家，成为危害严重的世界性恶性杂草。紫茎泽兰大约在20世纪40年代由中缅边境传入我国云南南部，目前在云南、贵州、广西、四川、西藏、台湾、重庆等7个省(市、区)的108个县、市(区)发生并造成严重危害，是国家环保局公布的我国首批16种外来入侵性有害生物之一，其入侵性位居前列(候太平，刘世贵.有毒植物紫茎泽兰研究进展[J].国外畜牧学-草原与牧草，1999，(4)：8.)。

由于紫茎泽兰具有广泛的适应性、适生性、竞争性、抗逆性和毒害性，因此对农业、林业和畜牧业及生态环境造成了极大的危害。紫茎泽兰在入侵耕地、轮歇地后造成耕作困难，成本加大，入侵田边地埂与庄稼争水、争肥、争阳光，造成粮食减产；入侵林地后，导致更新造林保存率明显下降，影响苗木生长，经济林推迟投产；侵占草场后，造成牧草严重减产，载畜量下降，天然草地失去放牧利用价值，给畜牧业发展造成了极大的阻碍。目前人们主要采取人工防除、植被替代、化学防除、昆虫控制、病原菌防除等几种方法对紫茎泽兰进行治理。同时也积极地寻求方法对紫茎泽兰进行利用，现阶段已经运用紫茎泽兰成功研制了杀虫剂，制作染料，生产人造板、精油、白僵菌等。

而随着对植物源生物农药的不断研究与开发，又为紫茎泽兰的利用提供了新的思路。由于该外来入侵生物的抗逆性强，体内含有多种生物活性物质，因此可以考虑利用其活性物质来开发生物农药而防治我国主要的病毒病。目前，已有关于此方面的初步研究(傅军，宋启示，方绮军.紫茎泽兰化学成分及其生物学活性研究进展.云南农业大学学报，1999，14(4)：411-414.)，对生长紫茎泽兰的土壤所作的抑菌分析表明：它对土壤中细菌类抑制作用最大，真菌次之，这表明紫茎泽兰中确实存在生物活性物质；另据报道(李丽，尹芳.张无敌.紫茎泽兰不同水提物抑制植物病原菌的研究.农业技术与装备，2008(4)：22-23.)，利用紫茎泽兰提取物来防治病虫害也具有较好的杀毒作用；戴元宁等用紫茎泽兰为原料开发生物农药，已完成小试和中试(戴元宁，紫茎泽兰生物农药的制造，2003)。实际应用中，有关利用紫茎泽兰提取物来抑制植物病原菌的报道还比较少，张培花等利用紫茎泽兰汁液及其萃取物对马铃薯晚疫病菌的抑制作用进行了研究；云南师范大学云南省农村能源工程重点实验室研究发现紫茎泽兰提取液对某些植物病原菌具有很好的抑制效果；田宇等发现紫茎泽兰挥发油提取液在浓度为3000mg/kg时对4种真菌的抑制率均大于60％，其中对番茄灰霉菌抑制作用最强，其EC50值为580.15mg/kg(田宇，何兰，曹坳程.紫茎泽兰挥发性成分及抑菌活性研究.农药学学报，2007，9(2)：137-142.)。但目前国内外尚未见有关紫茎泽兰提取物抗植物病毒活性研究的报道，因此有必要利用紫茎泽兰不同有机相提取物对植物病毒进行更加深入的探究，研发出新型的抗病毒制剂，为丰富植物源的生防制剂品种，综合开发利用紫茎泽兰提供重要的理论依据。

发明内容

本发明的目的是为了解决已有传统化学试剂农药在防治植物病毒时会对环境造成破环，且农药本身不易降解；而现有的一些植物来源的生物农药本身并不是一些入侵性的植物，对环境和农林业生产并未有严重威胁，应用价值意义不大的缺陷，提供一种利用侵入性植物紫茎泽兰来制作的生物农药及其制备方法。

实现上述目的本发明的技术方案为，一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，该农药是将紫茎泽兰粉末通过有机溶剂浸提、旋转蒸发、定容后得到的提取物，该提取物是质量浓度为1g/ml。

对紫茎泽兰粉末浸提采用的有机溶剂可以是乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、氯仿或二氯甲烷。

该紫茎泽兰的提取物用水稀释后可以用于防治烟草花叶病毒，用水稀释的浓度以2倍为最佳。

本发明的技术方案还包括一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药的制备方法，该生物农药按以下步骤制备，

(1)紫茎泽兰鲜叶经阴干，烘至恒重，粉碎为粉末；

(2)在紫茎泽兰粉末中按体积比为1∶10加入有机溶剂后超声波浸提得到滤液；

(3)将步骤(2)得到的滤液旋转蒸发为膏状物提取物；

(4)将(3)步的膏状提取物定容得到质量浓度为1g/ml的紫茎泽兰提取物。

上述步骤(1)中的紫茎泽兰粉末是40目。

上述步骤(2)中的浸提次数为3次，每次浸提时间是30分钟。

上述步骤(2)中浸提有机溶剂可以采用乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、氯仿或二氯甲烷，其中，经过乙醇浸提后得到的紫茎泽兰提取物防治烟草花叶病毒的效果最佳。

本发明的技术方案具有以下优点，利用本发明所述的来源于紫茎泽兰来源的生物农药，对烟草花叶病毒枯斑寄主抑制率高，易重复。本发明所述农药的实施中，对烟草花叶病毒系统寄主进行了抗病毒活性试验和田间小试以及抗病机理分析，证明该来源生物农药可成功的进行对烟草花叶病毒的防治，本发明所述来源紫茎泽兰的生物农药，制备方法简单，生产成本低，无任何毒害污染。

附图说明

具体实施方式

图1是紫茎泽兰提取物与TMV病毒钝化前的结构照片图；

图2是紫茎泽兰提取物与TMV病毒钝化30min的结构照片图；

图3是紫茎泽兰提取物与TMV病毒钝化60min的结构照片图；

图4是紫茎泽兰提取物与TMV病毒钝化90min的结构照片图；

下面对本发明的技术方案进行具体描述，(1)来源紫茎泽兰生物农药的制备过程，紫茎泽兰鲜叶阴干处理后，60℃烘干至恒重，粉碎机粉碎后过40目筛，得到的粉末于4℃保存备用。取10g紫茎泽兰粉末加入10倍体积(100ml)的供试有机试剂，实验中分别采用了乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、氯仿和二氯甲烷9种有机试剂分别实验，超声波提取30min，之后用循环式真空泵进行抽滤，收集滤液，然后再向滤渣中注入100ml有机溶剂，进行第二次提取，超声波浸提30min后抽滤，收集滤液，按照同样的方法共提取三次，之后合并滤液，用旋转蒸发仪将有机溶剂蒸发掉得到膏状物，再将其定容到10ml，即得到质量浓度为1g/ml的紫茎泽兰提取物，保存于4℃备用。(2)紫茎泽兰提取物抗病毒活性测定，利用半叶枯斑法进行紫茎泽兰提取物抗病毒活性测定，具体操作如下：选取生长一致，6-8叶期的三生烟，用湿润的纱布包裹住叶柄位置，用喉头喷雾器对准叶脉中央喷洒200目金刚砂，之后左半叶接种处理液，右半叶接种对照液，每个处理作10个重复，3天后待枯斑颜色和数目稳定后统计枯斑数目，计算抑制率。其中病毒粗提液是将TMV病叶加10倍体积PBS缓冲液研磨过滤制得，而处理液是将病毒粗提液与不同稀释倍数的紫茎泽兰提取液混合配成，以清水代替紫茎泽兰提取液作为对照。抑制率＝(对照半叶枯斑数-处理半叶枯斑数)/对照半叶枯斑数X100％

具体不同有机溶剂的提取结果对抑制率的影响如下表：

由上表可以看出，在供试浓度为0.5g/ml时，紫茎泽兰各有机相提取物对TMV病毒均表现出一定的钝化作用，乙醇、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和氯仿提取液抑制率在50％以上，其它石油醚、丙酮、甲醇和二氯甲烷等四种提取物的抑制率在50％以下。其中效果最弱的是丙酮提取物，抑制率为35.7％；而钝化效果最好的是乙醇提取物，抑制率达到了92.8％。因此，紫茎泽兰来源抗烟草花叶病毒生物农药最佳剂型为乙醇且其可有效在体外对烟草花叶病毒进行钝化。

对来源紫茎泽兰生物农药的抗烟草花叶病毒有效性进行验证

2.1紫茎泽兰提取物对系统寄主的预防效果试验

2.1.1方法

选取生长健壮的TMV系统寄主普通烟植株，喷洒不同浓度的紫茎泽兰乙醇提取液进行第一次处理，5天后喷洒药剂进行第二次处理，再过5天进行第三次处理，3次处理后的第2天接种TMV病毒，3周后调查病级，计算病情指数和防效。

病情指数＝∑[(各级病叶数×相对级数值)]/(调查总叶数×9)×100％

防治效果(％)＝(CK 0-pt1)/CK0×100％

CK0：空白对照药后病情指数

pt1：药剂处理药后病情指数

2.1.2结果

稀释倍数    病情指数           预防效果             平均预防效果

          1     2     3      1      2       3

2倍       39.77 38.01 33.33 33.98％ 31.58％ 42.31％ 35.96％

5倍       43.86 37.22 37.22 27.18％ 33.00％ 35.58％ 31.92％

10倍      46.20 40.35 42.78 23.30％ 27.37％ 25.96％ 25.54％

CK        60.23 55.56 57.78 ---     ----    ----    ----

2.2紫茎泽兰提取物对系统寄主的治疗效果试验

2.2.1方法

选取生长健壮的TMV系统寄主普通烟植株，接种TMV病毒，第二天喷洒不同浓度的紫茎泽兰乙醇提取液作为第一次处理，5天后喷洒药剂进行第二次处理，再过5天进行第三次处理，3周后调查病级，计算病情指数和防效。

2.2.2结果

稀释倍数    病情指数        治疗效果               平均治疗效果

         1     2     3     1       2       3

2倍      43.21 39.18 35.80 31.37％ 31.01％ 38.30％ 33.56％

5倍      47.53 40.35 38.01 24.51％ 28.95％ 34.49％ 29.32％

10倍     48.77 43.82 42.78 22.55％ 22.83％ 26.28％ 23.89％

CK       62.96 56.79 58.02 ----    ----    ----    ----

综合以上对系统寄主的治疗和预防试验结果，可见在适宜的条件下施用紫茎泽兰可以达到35.96％的防效。这样的防效的确比国内报导的商品抗病毒药剂都低，但是商品抗病毒药剂的防治效果大多是大田应用数据，并且药剂经过复配，存在多种成分。大田施用，因为接种不均一或无人为接种等原因，会导致药剂防治效果偏高。而最为一种新的植物源抗TMV制剂，其在温室接种TMV条件下能达到35.96％的防治效果，应该说是一种十分有希望的抗TMV药剂，在今后的大田施用中将可能会有很高的应用价值。

2.3紫茎泽兰提取物对烟草花叶病毒病的大田防病试验

2.3.1方法

在田间选取生长健壮的TMV寄主番茄若干株，喷洒不同浓度紫茎泽兰乙醇提取物进行处理，每隔5天喷洒一次，共处理4次，以不喷洒药剂的的作为对照，最后一次喷洒后待其在田间自然发病，调查病级计算病情指数和防效。

2.3.2结果

植株数 0    1    3    5    7    9    病情指数     防效

2倍    0    7    5    3    0    0    27.41        53.16％

5倍    0    6    4    3    1    1    36.30        37.97％

10倍   0    4    4    5    2    0    40.74        30.38％

CK     0    2    3    3    5    2    58.52        ----

由上表可以看出，紫茎泽兰乙醇提取物对TMV番茄大田防效随着提取液浓度的增大而增强，将提取液进行10倍稀释时，防效为30.38％；5倍稀释时，防效为37.97％；2倍稀释时，防效可达53.16％，可见紫茎泽兰乙醇提取物的大田实施效果较好。

此试验结果表明，紫茎泽兰提取物大田实施效果要好于温室对系统寄主的防效，这也与之前的预测结果一致，可能由于田间无人为接种而是待其自然发病的原因，导致药剂防治效果比温室对系统寄主的防效偏高，这一结果也为继续利用紫茎泽兰来源的生物农药提供了一种新的可能。

2.4紫茎泽兰提取物对烟草花叶病毒粒子形态的影响

2.4.1方法

取已稀释的提纯病毒滴于parafilm上，将铺有Formar膜的铜网倒置在液滴上，吸附5min后用滤纸吸去多余液体，双蒸水洗涤；铜网(有膜的一面向上)用2％磷钨酸(PTA)负染3-5min，吸去多余溶液。待铜网干燥后立即置JEM-1200EX型透射电镜下观察病毒粒体形态。

其中紫茎泽兰提取物与TMV病毒钝化时间进行一个梯度试验，钝化时间分别为30min、60min、90min。

2.4.2结果

如图1、图2、图3和图4所示，经紫茎泽兰乙醇提取物处理后，TMV病毒粒子受到一定程度破坏，粒体明显变短，有解聚现象，且随着时间的增长作用效果越明显。这可能是破坏了某些化学键，从而影响了TMV病毒粒子对寄主的侵入和病毒的复制。

2.5紫茎泽兰提取液对病毒外壳蛋白的影响

2.5.1紫茎泽兰提取物对病毒外壳蛋白抗原结合位点的影响

2.5.1.2方法

提纯TMV粒体与紫茎泽兰提取液混合作为抗原，将TMV病毒与等体积蒸馏水混合作为阳性对照，将紫茎泽兰提取液与等体积蒸馏水混合作为阴性对照，以ELISA法测定紫茎泽兰提取物对TMV外壳蛋白抗原位点的影响

2.5.1.2结果

ELISA法测定阳性对照与处理OD405值之比均大于2，结果表明，紫茎泽兰提取物对TMV外壳蛋白抗原位点有明显作用，可能影响其抗原簇，使TMV抗体与抗原之间的反应受阻。

2.5.2紫茎泽兰提取物对病毒外壳蛋白体外脱衣壳作用的影响

提纯TMV与紫茎泽兰提取液混合经RNase处理后，用半叶枯斑法接种，结果表明，RNase处理后TMV的侵染率为65.54％，枯斑抑制率为34.46％，表明紫茎泽兰提取液对TMV的外壳蛋白具有明显的破坏作用，使TMV的RNA暴露而被降解。

2.5.3紫茎泽兰提取物对病毒外壳蛋白体外聚合作用的影响

2.5.3.1方法

将外壳蛋白用磷酸钾缓冲液配成相应浓度，将紫茎泽兰提取液加入到外壳蛋白溶液中，以等浓度的病毒外壳蛋白溶液作对照，在UV-1600紫外分光光度计下测定320nm处的OD值，在10℃-40℃之间，每隔5℃测定一次OD320值

2.5.3.2结果

结果表明，随着温度的升高，对照组TMV外壳蛋白在320nm下的吸光值逐渐升高，体外聚合作用明显，而在紫茎泽兰提取物处理后，随着温度的升高，TMV-CP吸光值虽有升高，但幅度没有对照明显，由此可见，紫茎泽兰提取物对TMV-CP的体外聚合作用可能具有一定程度的影响。

2.6.紫茎泽兰提取物对病毒复制过程的影响

2.6.1不同浓度提取物抑制病毒增殖作用测定

2.6.1.1方法

在健康的普通烟上接种病毒24h后，用打孔器从叶肉部分打取直径为12mm的圆片，分别飘浮于1g/ml，0.5g/ml，0.25g/ml，0.125g/ml，4个浓度提取物和蒸馏水中作为处理和对照，同时设置健康叶圆片飘浮于蒸馏水中作阴性对照，48h后用抽提缓冲液研磨叶圆片，以ELI SA法测定OD405值，计算抑制率

2.6.1.2结果

以叶碟法测定不同浓度紫茎泽兰提取物对TMV增殖的抑制作用，结果表明，紫茎泽兰提取物对TMV在系统侵染普通烟体内的增殖有很强的抑制活性，浓度为1g/ml时，紫茎泽兰提取物对TMV增殖的抑制率达到100％，与抑制TMV侵染枯斑寄主三生烟一样，紫茎泽兰提取物对TMV增殖的抑制作用也呈现明显的剂量-效应相关性，浓度越低，抑制活性越弱。

2.6.2接种病毒不同时间后提取物抑制病毒增殖作用测定

2.6.2.1方法

在普通烟上接种病毒12h，24h，36h和48h后，用打孔器从叶肉部分打取直径为12mm的圆片，分别用紫茎泽兰提取物和蒸馏水作为处理和阳性对照，同时设置健康叶圆片飘浮于蒸馏水中作阴性对照，48h后用抽提缓冲液研磨叶圆片，以ELISA法测定OD₄₀₅值，计算抑制率

2.6.2.2结果

在接种病毒12h，24h，36h和48h后的抗病毒作用测定结果表明，紫茎泽兰提取物在接种病毒后12-36h以内处理对病毒增殖均有明显的抑制作用，抑制率都在70％以上，随着时间的延长，提取物对病毒增殖的抑制作用逐渐下降，在接种48小时之后处理，提取物对病毒增殖的抑制率仅为56％。由此可见，紫茎泽兰提取物可能主要作用于病毒增殖的早期阶段，对病毒增殖后期抑制效果则不理想。

上述技术方案仅体现了本发明技术方案的优选技术方案，本技术领域的技术人员对其中某些部分所可能做出的一些变动均体现了本发明的原理，属于本发明的保护范围之内。

 

Claims (9)

1.一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，其特征在于该农药是将紫茎泽兰粉末通过有机溶剂浸提、旋转蒸发、定容后得到的提取物。

2.根据权利要求1所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，其特征在于，将紫茎泽兰粉末中加入有机溶剂后浸提、旋转蒸发得到的膏状物进行定容为质量浓度是1g/ml液体。

3.根据权利要求1所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，其特征在于，对紫茎泽兰粉末浸提采用的有机溶剂可以是乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、氯仿或二氯甲烷。

4.根据权利要求1所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，其特征在于，该紫茎泽兰的提取物用水稀释后可以用于防治烟草花叶病毒。

5.根据权利要求4所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药，其特征在于，用于防治烟草花叶病毒的紫茎泽兰提取物用水稀释的浓度以2倍为最佳。

6.一种来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药的制备方法，其特征在于，该生物农药按以下步骤制备，

(1)紫茎泽兰鲜叶经阴干，烘至恒重，粉碎为粉末；

(2)在紫茎泽兰粉末中按体积比为1∶10加入有机溶剂后浸提得到滤液；

(3)将步骤(2)得到的滤液旋转蒸发为膏状物提取物；

(4)将(3)步的膏状提取物定容得到质量浓度为1g/ml的紫茎泽兰提取物。

7.根据权利要求6所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药的制备方法，其特征在于，步骤(1)中的紫茎泽兰粉末是40目。

8.根据权利要求6所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的浸提次数为3次，每次浸提时间是30分钟。

9.根据权利要求6所述的来源紫茎泽兰的抗病毒生物农药的制备方法，其特征在于，步骤(2)中浸提有机溶剂可以采用乙醇、石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、氯仿或二氯甲烷，其中，经过乙醇浸提后得到的紫茎泽兰提取物防治烟草花叶病毒的效果最佳。

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