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Abstract

本发明涉及一种植物提取物作为饲料添加剂的应用,具体为一种对畜禽(特别是鸡)具有诱食作用的天然植物提取物饲料添加剂,对热应激厌食也具有明显的缓解作用。该植物提取物作为饲料添加剂的应用,植物提取物用来制作对鸡具有诱食作用的饲料添加剂,所述的植物提取物是从一枝黄花(Solidago decurrens Lour)、温郁金和多香果(Pimenta officinalis)中提取。

Description

一种植物提取物作为畜禽添加剂的应用
技术领域
本发明涉及一种植物提取物作为饲料添加剂的应用,具体为一种对畜禽(特别是鸡)具有诱食作用的天然植物提取物饲料添加剂,对热应激厌食也具有明显的缓解作用。
背景技术
畜禽(包括鸡)通过采食饲料,将饲料中营养物质转化为人们所需的肉、蛋和奶等畜产品,畜禽采食饲料量对生产性能的发挥至关重要。在过去相当长时间内,对畜禽营养与饲养技术的研究与应用大多集中在提高营养物质的利用效率上,取得了显著的效果和效益,但是,畜禽对营养物的进一步利用已经出现生理性限制,通过提高饲料营养物质的利用效率来改善畜禽的生产性能已经出现了技术瓶颈。同时,饲养密度、环境温度和疾病等应激可使畜禽产生厌食反应,导致生产性能下降甚至丧失,降低了生产效益。
在改善饲料营养物质的利用效率的同时,提高饲料的采食量可以有效地突破现有技术瓶颈,达到增产增效的目的。尽管在饲料行业已有添加剂中,有不少具有一定诱食作用,但大多数其诱食功能是附属的,且效果不稳定,目前还没有专用的畜禽诱食性饲料添加剂。本发明在研究鸡采食调控技术的基础上,研制了对鸡具有诱食作用的专用饲料添加剂,能有效提高鸡的生产性能,实现增产增效。本发明添加剂来自于天然植物提取物,因而安全绿色。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够提高正常饲养采食量,而且能缓解热应激的厌食反应,提高畜禽的生产性能的植物提取物作为饲料添加剂的应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该植物提取物作为饲料添加剂的应用,植物提取物用来制作对鸡具有诱食作用的饲料添加剂,所述的植物提取物是从一枝黄花(Solidago decurrens Lour)、温郁金和多香果(Pimenta officinalis)中提取。
作为优选,本发明所述的植物提取物为倍半萜烯类化合物。
作为优选,本发明所述的倍半萜烯类化合物为榄香烯。
作为优选,本发明所述的饲料添加剂利用脱脂米糠作为载体充分吸附,逐级稀释后直接添加到饲料中。
作为优选,本发明所述的饲料添加剂的使用量为:肉鸡饲料中的添加范围为50-250ppm/吨,蛋鸡饲料中的添加范围为100-350ppm/吨。
作为优选,本发明所述的饲料添加剂与氨基酸、维生素和微量元素复配成添加剂使用。
作为优选,本发明所述的植物提取物经过乳化处理,乳化处理的步骤为:将天然植物提取物先与12mg/ml的大豆卵磷脂等比例混合,然后通过超声波仪乳化3-5分钟,最后,与0.9%盐水溶液1∶1混合,得到乳化液。
作为优选,本发明所述的饮水的时间为与上午第一次喂料同步。
作为优选,本发明所述的乳化好的饲料添加剂的使用方法为:乳化好的饲料添加剂与清凉干净的水按照1∶50-100配比,用喷雾器直接对鸡进行喷雾。
作为优选,本发明所述的喷雾量为每羽鸡0.5-10毫升。
本发明同已有的技术相比,具有以下优点和特点:
1.本发明通过促进畜禽下丘脑内参与诱食调控基因的表达获得显著的诱食效果;
2.本发明从天然植物一枝黄花、温郁金和多香果中提取,绿色安全;
3.本发明与维生素、氨基酸和矿物质等营养物质,以及抗生素等不存在配伍问题;
4.本发明除了具有显著诱食作用外,还具有利尿、抗炎、抗氧化和增强免疫力等作用,可增强畜禽的抗病能力;
5.以加拿大一枝黄花为代表的外来植物在我国长江以南地区大量逸生,已经威胁到生态系统的生物多样性和农业生产安全,本发明可大量利用一枝黄花等外来植物,变废为宝,减轻生态危害。
本发明的技术方案,能够大幅度提高畜禽的采食量,增加饲料的利用率,显著提高生产性能和效益。而且对热应激鸡厌食也有显著作用。
附图说明
图1为天然植物提取物添加剂主要功能物质δ-(A)和β-(B)榄香烯的化学结构式;
图2为天然植物提取物添加剂制作工艺流程图;
图3侧脑室(ICV)微注射示意图;
图4采食调控中枢下丘脑部位示意图;
图5为天然植物提取物ICV微注射对鸡采食量(A)和下丘脑内NPY及其Y1和Y5受体基因mRNA水平的影响的柱状图;
图6为在饲料中添加本发明添加剂对鸡采食量、生产性能和效益的影响的柱状图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。
以下对本发明方案进行更为详细的说明。
本发明的天然植物提取物饲料添加剂从一枝黄花中用水蒸汽法提取,其主要功能物质为榄香烯等倍半萜烯类化合物,包括δ-和β-榄香烯等;δ-和β-榄香烯为同分异构体(图1),分子式为C15H24,相对分子量为204。经GC/MS联用法分析,一枝黄花挥发油含有榄香烯28.64%,其中δ-榄香烯(21.72%),β-榄香烯(6.92%)。
1制作工艺
本发明饲料添加剂的制作工艺见图2。具体天然植物提取物与脱脂米糠按照1∶4(重量比)混合,让脱脂米糠充分吸附,不使用霉变、氧化的脱脂米糠作载体,质量必须符合国家对饲料原料质量要求。混合物在50℃左右的烘箱中干燥5小时左右,冷却后粉碎,30目过筛,分装后密封,避光保存。上述工艺制作的添加剂含天然植物提取物的浓度为20%,如果需要较高浓度的添加剂,可以通过调整与麸皮载体的比例,或者重复吸附与干燥过程得到。
乳化处理:液体状天然植物提取物原液先与12mg/ml的大豆卵磷脂(Sigma公司)等比例混合,通过超声波仪(XL2000,美国Microson公司)在70W乳化3-5分钟,然后与0.9%盐水溶液1∶1混合保存。
2使用方法
2.1饲料中添加
根据鸡不同饲养阶段和饲养季节添加不同的量,一般而言,饲养后期的添加量大于前期,高温的添加量大于低温。肉鸡饲料中的添加范围为50-250ppm/吨,蛋鸡为100-350ppm/吨。可通过逐级稀释直接添加到饲料中,也可与氨基酸、维生素和微量元素等复配添加剂使用。
2.2饮水
一年四季使用均有效果。具体方法:经乳化处理的液体状天然植物提取物原液与干净的饮用水按照1∶20-50配比,直接让鸡饮水,饮水的最好时间是与上午第一次喂料同步。
2.3喷雾
夏季高温干燥时,采用喷雾方式具有较好效果。具体方法:经乳化处理的液体状天然植物提取物原液与清凉干净的水按照1∶50-100配比,可用喷雾器直接对鸡进行喷雾,喷雾量为每羽鸡0.5-10毫升,喷雾时间最好在温度最高时。
3保存方法
在避光、干燥处,夏季的保存时间为15-20天,春秋季为30-40天,冬季为2个月。在夏季,如要延长保存时间,可置于冷库或添加适量饲用抗氧化剂,冷藏或使用200ppm EMQ等抗氧化剂,可延长保存20-30天,冷冻则可延长4-6个月。
效果试验:通过下面试验对本发明的使用效果进行论证和描述。
1侧脑室(ICV)微注射试验
1.1试验动物
5日龄健康哈巴德肉鸡32羽,平均分成2组,一组为对照组,另一组为ICV微注射试验组。对照组和试验组均饲喂相同的饲料,配方为:玉米60%,豆粕35%,添加剂5%,营养水平为:ME:11.58MJ/kg,CP:20.15%。自由饮水和采食。
1.2乳化处理
液体状天然植物提取物原液先乳化后,与0.9%Ringer溶液(147mM NaCl,4mM KCl,3mM CaCl2)混合。ICV微注射前1小时,与0.2%的伊文思蓝溶液混匀。
1.3ICV微注射
用手固定鸡头,按照图3示意的方法,用25μl注射器吸取10μl经预处理过的添加剂混合物,缓缓注入鸡侧脑室(时间为20秒左右)。对照组注射等容量的大豆卵磷脂、Ringer溶液和伊文思蓝溶液混合物,试验组每羽鸡注射的10μl经预处理过的添加剂混合物中,实际含有原液量为10-2μl。图3为鸡脑纵切面图,注射部位为鸡未闭合的脑门处(A8.0),深度约为0.5厘米。
1.4测定指标
对照组和试验组各一本试验鸡用于测定采食量,分别测定注射后30、60、90、120分钟每羽鸡采食量;另一半用于测定大脑采食调控中心(下丘脑)内参与诱食调节的NPY及其Y1和Y5受体基因的mRNA水平。
1.5mRNA水平测定
1.5.1总RNA提取
下丘脑组织的摘取根据本发明人建立的方法,注射后60分钟,将鸡处死取脑,并迅速在粉末状干冰冻结中,将冷冻的鸡脑用干冰直立固定在载玻片上,用手术刀片从嗅球部分开始,沿中线切除脑组织直到包含前交叉的横截面消失。参照Kunzel描绘的鸡脑断面图,以视交叉、第三脑室和侧前脑束作为确定鸡下丘脑的标记,用手术刀摘取下丘脑(图4)。图4中,阴影部分为下丘脑,摘取的下丘脑大小为:2毫米(长)×1.5毫米(宽)×1.5毫米(深)。
下丘脑组织总RNA提取参考RNeasy Lipid Tissue Mini Kit试剂盒说明书。将摘出的下丘脑核团组织迅速放入QLAzol Lysis Reagent中,匀浆30秒后,加200μl氯仿并剧烈震荡15秒,4℃12000rpm离心15min,吸取上清与600μl 70%的乙醇溶液混合后过柱,加80μlRNase-free water分2次将结合在柱上的总RNA冲洗下来。分离得到的总RNA测定其OD260/280,-70℃保存备用。
1.5.2RT-PCR
下丘脑基因mRNA水平用本发明人建立的RT-PCR方法测定。本发明人设计的TaqMan探针和引物由上海英骏生物技术有限公司合成。探针和引物序列如下:
NPY基因:上游引物5’-CTACTCGGCTCTGAGGCACTACA-3’
         下游引物5’-TCAGTGTCTCTGGGCTTGATCTC-3’
         探针5’-FAM-CAACCTCATCACCAGGCAGAGATATGGAA-TAMRA-3’
Y1基因:上游引物5’-GAGAAGAACTCGCAGATCTTGCA-3’
        下游引物5’-CCAGAGACTCCCAGAATTATCACA-3’
        探针5’-FAM-TGCCTTTGGCCATGGTCTTCACCTT-TAMRA-3’
Y5基因:上游引物5’-TGGCCTTTTCTGACATCTTAGTTG-3’
        下游引物5’-CATCCACCGATCAAGGAGTACAG-3’
        探针5’-FAM-CCTATTTTGTTCTCCTTTCACGC-TAMRA-3’
18srRNA(看家基因):上游引物5’-CTCCGACTTTCGTTCTTGATTAATG-3’
        下游引物5’-ATTGTGCCGCTAGAGGTGAAAT-3’
        探针5’-FAM-CTTTAGTTCGTCTTGCGCCGGTCCA-TAMRA-3’
RT-PCR反应体系(40μl)组成:5μl RNA模板(NPY、Y1和Y5含50ng,18s rRNA含1ng)、20μl 2×Master mix w/o UNG、10μl 40×MultiScrible and Rnase Inhibitor、200nmTaqMan probe(5μM)、300nM Forward primer(100μM)、900nM Reverse primer(100μM)。反应程序为:48℃反转录30min;95℃预变性10min;95℃变性15sec;60℃退火/延伸1min;共45个循环。
1.4结果分析
ICV微注射经乳化处理的本发明添加剂原液混合物,显著提高注射60分钟以后鸡的采食量(图5A),注射后60、90和120分钟采食量提高幅度分别为:31.13%、44.74%和48.25%,其中90和120分钟采食量与对照组比有显著统计差异。但是注射后30分钟的采食量没有影响。本发明添加剂原液混合物显著抬高了下丘脑内具有诱食调节功能的NPY及其Y1和Y5受体基因的mRNA水平(图5B)。结果表明,本发明添加剂原液对鸡具有显著的诱食作用,其诱食作用的机理是通过促进采食调节中枢(下丘脑)内参与诱食调节的NPY系统功能实现的。图5中,*:表示试验组和对照组比较,有显著的统计差异,P<0.05。
2饲喂试验
2.1试验动物
119羽14日龄AA肉鸡,称重后分成2组,即对照组(32♂,28♀)和试验组(32♂,27♀),对照公母鸡平均体重分别为247.2±7.5克和247.8±5.6克,试验组为251.9±6.6克和241.9±5.9克,对照组和试验组对应的公母鸡间体重没有统计差异。公母分群饲养,自由饮水和采食。试验从14日龄开始至49日龄结束。
2.2试验饲料
试验的基础饲料配方为:中期料(14-41日龄投喂;营养水平为ME:11.76MJ/kg,CP:18.33%):玉米65%,豆粕30%,添加剂5%;后期料(42日龄以后投喂;营养水平为ME:11.93MJ/kg,CP:16.51%):玉米70%,豆粕25%,添加剂5%。对照组饲喂基础饲料,试验组在5%常规添加剂中增加100ppm/吨饲料的本发明添加剂。
2.3测定指标
每天称重饲料投喂量和剩余量,记录死亡鸡情况,测定49日龄试验末鸡体重。
2.4结果分析
添加本发明添加剂,试验公母鸡平均采食量为2.78千克,比对照组增加19.31%,死亡率为6.78%(59羽试验鸡中死亡4羽),比对照组下降49.14%(图6A);试验公母鸡49日龄平均体重达到2.24千克和1.89千克,分别比对照组提高11.28%和9.62%,具有显著的统计差异(图6B);按照中期鸡和后期饲料价格分别为2.59元/千克和2.51元/千克,活鸡价格按8.6元/千克计算(2009年6-7月份浙江宁波地区饲料原料价格和活鸡核算),试验组每羽鸡平均利润为1.38元,比对照组的0.46元增效2倍(图6C)。*:表示试验组公母鸡分别和对照组比较,有显著的统计差异,P<0.05。取得了显著的饲养效果和经济效益。
此外,需要说明的是,本说明书中所描述的具体实施例,其配方、工艺所取名称等可以不同。凡依本发明专利构思所述的构造、特征及原理所做的等效或简单变化,均包括于本发明专利的保护范围内。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,只要不偏离本发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围,均应属于本发明的保护范围。
虽本发明已以实施例公开如上,但并非用以限定本发明的保护范围,任何熟悉该项技术的技术人员,在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰,均应属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种植物提取物作为饲料添加剂的应用,植物提取物用来制作对鸡具有诱食作用的饲料添加剂,所述的植物提取物是从一枝黄花(Solidago decurrens Lour)、温郁金和多香果(Pimenta officinalis)中提取。
2.根据权利要求1所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的植物提取物为倍半萜烯类化合物。
3.根据权利要求2所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的倍半萜烯类化合物为榄香烯。
4.根据权利要求1、2、3所述的饲料添加剂利用脱脂米糠作为载体充分吸附,逐级稀释后直接添加到饲料中。
5.根据权利要求1、2、3所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的饲料添加剂的使用量为:肉鸡饲料中的添加范围为50-250ppm/吨,蛋鸡饲料中的添加范围为100-350ppm/吨。
6.根据权利要求1、2、3所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的饲料添加剂与氨基酸、维生素和微量元素复配成添加剂使用。
7.根据权利要求1、2、3所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的植物提取物经过乳化处理,乳化处理的步骤为:将天然植物提取物先与12mg/ml的大豆卵磷脂等比例混合,然后通过超声波仪乳化3-5分钟,最后,与0.9%盐水溶液1∶1混合,得到乳化液。
8.根据权利要求7所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的乳化好的饲料添加剂的使用方法为:乳化好的饲料添加剂与干净的饮用水按照1∶20-50配比,直接让鸡饮水,所述的饮水的时间为与上午第一次喂料同步。
9.根据权利要求7所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的乳化好的饲料添加剂的使用方法为:乳化好的饲料添加剂与清凉干净的水按照1∶50-100配比,用喷雾器直接对鸡进行喷雾。
10.根据权利要求9所述的植物提取物作为饲料添加剂的应用,其特征是:所述的喷雾量为每羽鸡0.5-10毫升。
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