CN101773068B - 一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法 - Google Patents
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Abstract
一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法，即对枣树枝条进行重度短截，在截面的形成层进行愈伤组织诱导，进而利用秋水仙素处理愈伤组织，通过愈伤组织再生快速获得同质多倍体。选择健壮枝条进行短截，在截面形成层上覆盖脱脂棉并迅速滴加含有TDZ(5.0mg/L)、AgNO3(2.0mg/L)的药液，采用塑料袋+湿泥+塑料袋三层覆盖；当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微弱愈伤出现时，用0.05％的秋水仙素(含有0.1％二甲基亚砜)处理愈伤组织24h；当截面愈伤组织上长出新芽后，及时去除覆盖物和检测新生芽的染色体倍性。该技术应用于枣树多倍体育种实践，方法简单便捷，可快速获得同质多倍体并应用于生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法。
背景技术
枣树(Ziziphus jujuba Mill.)是原产我国的特色优势果树，无论栽培面积还是年产量都已成为我国第一大干果树种。我国枣树品种有900多个，但基本上都是传统的地方品种或从其自然变异中优选出的品种。生产上迫切需要创新程度高、具有更新换代价值的新品种。然而，由于枣花很小、人工去雄非常困难，加之多数枣树优良品种的胚败育现象严重，导致常规杂交育种因难于获得杂交后代而进展十分缓慢。
果树多倍体在果实大小、抗逆性等方面通常会表现出一定的优势，多倍体育种在果树上受到越来越多的重视。在枣树的种质资源中，已经发现自然三倍体品种赞皇大枣，表现出果个大、丰产、适应性强等优点；枣树的近缘种毛叶枣(Ziziphus mauritiana Lam.)的栽培品种多为四倍体，也都表现为果个大、适应性强。因此，对枣树进行多倍体诱导前景广阔。在枣树倍性育种方面，田间茎尖诱变和组培条件下的茎尖、愈伤组织诱变已取得明显进展，但是茎尖诱变后，多获得嵌合体，分离纯化所需周期长；组培条件下通过愈伤组织和胚状体途径诱导多倍体，虽然可以快速获得同质多倍体，但存在玻璃化现象严重、诱变成功后到田间开花结果周期较长等问题。而在田间通过愈伤组织途径不仅可以快速诱导同质多倍体，而且获得的同质多倍体枝条当年即可开花结果，并且用于嫁接扩繁，从而可以大大缩短多倍体育种周期。
发明内容
采用枣树枝条短截的方法，诱导截口处产生愈伤组织，采用秋水仙素对愈伤组织进行诱变处理，快速获得枣树同质多倍体，大大加速了枣树多倍体育种进程。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：首先对枣树枝条进行短截，采用激素诱导截口产生愈伤组织，然后利用秋水仙素对愈伤组织进行诱变处理，快速获得同质多倍体(纯多倍体)。
本发明的具体内容，即在田间快速获得枣树同质多倍体的方法如下：
(1)截干于生长季，将枣树上粗壮的枝条进行短截，尽量保持截面光滑、无毛边。
(2)愈伤组织的诱导枝条短截后，迅速用脱脂棉覆盖截面的形成层，将含有TDZ(5.0mg/L)、AgNO3(2.0mg/L)的药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为佳，覆上塑料袋，然后将湿泥覆盖在塑料袋上，以避免温度剧烈变化，促进愈伤组织形成，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口。
(3)愈伤组织的诱变当截面泛红褐色、形成层开裂、有透明微弱愈伤出现时，去除塑料袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织，将0.05％的秋水仙素(含有0.1％二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住并绑紧袋口。24h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，绑紧袋口。当愈伤组织上有新芽长出后，去除所有覆盖物，对新芽进行染色体倍性检测。
本发明专利的有益效果是，通过田间愈伤组织途径，诱导出的多倍体为同质多倍体，不需要进一步分离纯化，同时可以直接开花结果或用于嫁接扩繁。该技术应用于枣树多倍体育种实践，方法简单便捷，诱变效率高，可大大缩短育种周期。
附图说明
图1秋水仙素处理时的愈伤组织状态
图2愈伤组织上出芽的状态
图3获得的四倍体枝条
具体实施方式：
在田间，以二倍体‘月光’枣的初果期树为试材，5月份将其上粗壮的枝条进行短截，迅速用脱脂棉覆盖截面上的形成层，将6-10滴含有TDZ(5.0mg/L)、AgNO3(2.0mg/L)的药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为度，覆上塑料袋，然后将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口；5d后，当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微弱愈伤出现时，去除塑料袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织，把6～10滴0.05％的秋水仙素(含有0.1％二甲基亚砜)滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口；24h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，用塑料绳收紧袋口；当截面愈伤组织上长出新芽后，去除所有覆盖物；采用流式细胞仪检测新芽的染色体倍数，四倍体变异株率达19.7％。
Claims (1)
1.一种在田间快速获得枣树同质多倍体的方法，其特征在于对枣树枝条进行重度短截，在截面的形成层诱导愈伤组织，进而利用秋水仙素处理愈伤组织，通过愈伤组织再生快速获得同质多倍体，包括以下几个步骤：
（1）截干 在枣树生长季，对其粗壮的枝条短截，尽量保持截面光滑、无毛边；
（2） 愈伤组织的诱导 截干后，迅速用脱脂棉覆盖截面的形成层，将含有5.0mg/L TDZ、2.0mg/L AgNO3的药液滴加在脱脂棉上，以浸湿脱脂棉为度，覆上塑料袋，然后将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，绑紧袋口；
（3）愈伤组织的诱变 当截面泛红褐色，形成层开裂，有透明微弱愈伤出现时，去除塑料袋、泥、脱脂棉等覆盖物，露出愈伤组织，用脱脂棉覆盖愈伤组织，把含有0.1%二甲基亚砜的0.05%秋水仙素滴加到脱脂棉上，迅速覆上塑料袋，将湿泥覆盖在塑料袋上，最外面用塑料袋全部套住，用塑料绳收紧袋口；24h后，去除脱脂棉，用湿泥直接覆盖愈伤组织，再用塑料袋套住，绑紧袋口；当愈伤组织上有新芽长出后，去除所有覆盖物，对新芽进行染色体倍性检测。
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