CN101766137A - 常见滩涂贝类核心选择群的建立方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，由如下步骤组成：a、建立滩涂贝类家系：b、筛选生长、抗逆性状优良的家系F₂：c、确定滩涂贝类优良性状家系基础群：d、建立滩涂贝类的核心选择群：整个步骤简单，操作方便，容易控制，整个过程成本低，效果好。

Description

常见滩涂贝类核心选择群的建立方法

技术领域

本发明涉及一种常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，具体的说是在建立 的滩涂贝类家系基础群中筛选出2-4个生长、抗逆性状优良的家系F2，按10％比例对2-4个家系上选，确定滩涂贝类优良性状家系基础群，在家系基础群中开展家系建立、回交、家系内群体自繁，不同盐度温度试养实验等研究，获得一系列具有优良生长和抗逆性状的近交家系、杂交家系、回交家系、耐低盐和抗高温家系，这些家系组成滩涂贝类的核心选择群。

背景技术

近年来，水产动物的遗传改良已成为国内外水产科学工作者研究的热点领域，如鲑鳟鱼类(Oncorhynchus kisutch)、尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)；中国对虾(Fennero penaeuschinensis)、细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris)、凡纳滨对虾(Penaeusvannamei)；太平洋牡蛎(Crassosea gigas)、硬壳蛤(Mercenaria mercenaria)、海湾扇贝(Argopecten irradians)等水产经济品种已取得了显著的成绩。数量遗传学在水产动物遗传育种中具有重要的指导作用，这是一门研究数量性状(在群体中呈连续的正态分布并由多个微效基因控制)遗传规律的学科。贝类的繁殖力高，体外受精、发育等特点为其数量遗传研究提供了便利，大大加快了优良品种选育的进程。随着人民生活水平的提高，滩涂贝类在国内外市场均供不应求，市场潜力巨大。目前，滩涂贝类在养殖中出现种质资源基础状况不清、品质下降、抗逆性差、个体小型化、单位产量降低等不良现象。而且养殖对象均为野生型，没有人工培育的高产、抗逆优良品种。因此，对滩涂贝类进行遗传改良，培育出生长速度快，抗逆性强的新品种是解决这些问题的重要途径。建立滩涂贝类的核心选择群是新品种培育的首选途径，核心选择群囊括了生长、抗逆性状的优良基因，可以做为新品种培育的基础亲本，也可有针对性的对选育的滩涂贝类新品种某一退化性状进行复壮。在滩涂贝类高产、抗逆优良品种培育中起核心作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种方法简单、好操作、易控制、成本低的常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，克服现有技术的不足。

本发明的常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，由如下步骤组成：

a、建立滩涂贝类家系：

在滩涂贝类繁殖季节，选择壳无损伤、壳型规整、活力强、无病害的二龄野生型个体作为育种的原始材料，个体数量为500-1000枚；用阴干和性诱导方法使所述的原始材料产卵排精；抓取正在排精产卵的个体，用淡水洗净，放入盛有海水容器中单独产卵排精，分别收集精卵；将收集的精卵取样在显微镜下观察，选择活力强的精子，质量好且未受精的卵子留用；1个父本与3-5个母本单对单交配，建立至少30个家系；对各家系苗种进行培育及养成，并保持水环境和培育饲养密度一致；

b、筛选生长、抗逆性状优良的家系F₂：

通过上步滩涂贝类家系建立和生长发育比较及遗传参数估计，筛选出生长、抗逆性状优良的家系F₁，进行群体自繁获得家系F₂，通过对家系F₂生长发育比较及近交衰退估计，选取2-4个生长、抗逆性状优良的家系F₂；

c、确定滩涂贝类优良性状家系基础群：

测量上步2-4个家系中的滩涂贝类壳长大小，每个家系按10％比例上选，确定滩涂贝类优良性状家系基础群；

d、建立滩涂贝类的核心选择群：

在上步家系基础群中开展家系建立、回交、家系内群体自繁，不同盐度温度试养，评估各家系生长和抗逆性状的近交、杂交、回交效应，得到具有优良生长和抗逆性状的近交家系、杂交家系、回交家系、耐低盐和抗高温家系，形成滩涂贝类的核心选择群。

本发明的常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，整个步骤简单，操作方便，容易控制，整个过程成本低，效果好。

附图说明

图1是D×G杂交组幼虫期生长比较示意图；

图2是D×G杂交组稚贝和养成期生长比较示意图；

图3是具体实验框图。

具体实施方式

本发明的方法由如下步骤组成：

a、建立滩涂贝类家系：

在滩涂贝类繁殖季节，选择壳无损伤、壳型规整、活力强、无病害的二龄野生型个体作为育种的原始材料，个体数量为500-1000枚；用阴干和性诱导方法使所述的原始材料产卵排精；抓取正在排精产卵的个体，用淡水洗净，放入盛有海水容器中单独产卵排精，分别收集精卵；将收集的精卵取样在显微镜下观察，选择活力强的精子，质量好且未受精的卵子留用；1个父本与3-5个母本单对单交配，建立至少30个家系；对各家系苗种进行培育及养成，并保持水环境和培育饲养密度一致；

b、筛选生长、抗逆性状优良的家系F₂：

通过上步滩涂贝类家系建立和生长发育比较及遗传参数估计，筛选出生长、抗逆性状优良的家系F₁，进行群体自繁获得家系F₂，通过对家系F₂生长发育比较及近交衰退估计，选取2-4个生长、抗逆性状优良的家系F₂；

c、确定滩涂贝类优良性状家系基础群：

测量上步2-4个家系中的滩涂贝类壳长大小，每个家系按10％比例上选，确定滩涂贝类优良性状家系基础群；

d、建立滩涂贝类的核心选择群：

在上步家系基础群中开展家系建立、回交、家系内群体自繁，不同盐度温度试养，评估各家系生长和抗逆性状的近交、杂交、回交效应，得到具有优良生长和抗逆性状的近交家系、杂交家系、回交家系、耐低盐和抗高温家系，形成滩涂贝类的核心选择群。

下面以菲律宾蛤仔为例进一步说明本发明，但不构成对本发明的限制。

第一步、建立菲律宾蛤仔家系：于2007年7月按步骤一方法建立菲律宾蛤仔11个父系半同胞，33个母系全同胞家系。在各家系苗种培育及养成中，保持水环境和培育饲养密度一致。

第二步、筛选生长、抗逆性状优良的家系F₂代：以2007年建立的33个菲律宾蛤仔家系为材料，从中选择出具有优良表型性状的9个家系(A₁，B₁……I₁)，采用家系内近交和家系间混交的方式建立了9个近交家系(A₂，B₂……I₂)和1个混交系(O₂)。结果表明，各近交家系间D型幼虫差异显著(P＜0.05)。E₂孵化率(91.67±1.53％)最高，与其它实验组(除F₂外)比较差异显著(P＜0.05)。在幼虫期，各近交家系幼虫生长普遍小于混交系，生长性状发生了近交衰退现象(近交系数，F＝0.25)，近交衰退率为0.81～16.05％。E₂存活率最高，未表现出近交衰退；而其它近交家系幼虫的存活率都普遍小于混交家系，出现了不同程度的近交衰退现象，近交衰退率为0.73～26.09％。在稚贝期，C₂、E₂生长性状出现了近交衰退，近交衰退率分别为1.66％，6.47％，E₂存活率最高，未出现近交衰退，其它近交家系存活性状都出现不同程度的近交衰退现象，近交衰退率为1.72％～26.88％。在养成期，I₂壳长(4.87±1.59mm)最大，E₂壳长(2.57±1.18mm)最小，且分别与其它实验组存在显著差异(P＜0.05)。C₂，E₂，F₂生生长性状发生了近交衰退现象，近交衰退率分别为12.79％，26.46％，23.20％；E₂的存活率最高，与其它实验组均存在显著差异(P＜0.05)；A₂，D₂，G₂存活性状近交衰退，分别为0.70％，1.40％，16.20％。综合9个近交家系的表型特征，I₂，E₂分别继承了亲本(I₁，E₁)生长快、抗逆性强的优良性状。

第三步、确定菲律宾蛤仔优良性状家系基础群：测量步骤二中2个家系的壳长大小，按10％比例上选，确定菲律宾蛤仔优良性状家系基础群。

第四步、建立滩涂贝类的核心选择群：在家系基础群中开展、回交、杂交家系建立，家系内群体自繁，不同盐度温度试养实验等研究，评估各家系生长和抗逆性状的近交、杂交、回交效应，从而获得一系列具有优良生长和抗逆性状的近交家系、杂交家系、回交家系、耐低盐和抗高温家系，这些家系组成滩涂贝类的核心选择群。

如图3所示：具体实验如下：

1、家系E₂个体选择研究

按10％的选择压力对存活率高的家系E₂子三代进行上选。结果表明：在浮游阶段，上选组的选择反应(SR)和现实遗传力(h² _R)分别为0.32±0.08、0.18±0.05；室内培育阶段，上选组的选择反应(SR)和现实遗传力(h² _R)分别为0.13±0.02、0.07±0.01；上选效果显著，获得遗传改进量为22.90％。

2、家系E₂回交研究

家系E₂的F₁代和F₂代为材料，采用2×2双列杂交，对家系E₂生长特性，遗传特征进行研究。结果表明：在浮游阶段，回交组♀F₁×♂F₂具有明显的生长优势Hg_F1F2＝5.39±2.76，生长速度较自交组♀F₁×♂F₁提高了8.03％，而回交组♀F₂×♂F₁未表现出生长优势；在室内养成阶段，回交组♀F₁×♂F₂生长优势得到了进一步的提高Hg_F1F2＝15.58±5.50，生长速度较自交组♀F₁×♂F₁提高22.4％，而回交组♀F₂×♂F₁表现为生长劣势；回交组♀F₁×♂F₂也表现出了明显的存活优势，浮游阶段和室内培育阶段的存活优势率分别为9.26±2.17、7.78±1.57。

3、家系E₂杂交研究

以白蛤(W)、家系E₂(O)、斑块花纹蛤仔(N)为实验材料进行3×3双列杂交，实验由3个自交组W×W、O×O、N×N和3个杂交组W×O、O×N、W×N。结果表明：浮游期间，三个杂交组合均表现出明显的杂种优势，总的杂种优势为Hg＝4.61±0.62，W×O、O×N、W×N三个杂交组的生长优势分别为Hg_w×O＝3.51±1.51、Hg_O×N＝4.69±1.89，Hg_w×N＝4.60±2.67，六个正反交组中除WN没有生长优势外，其它五组均表现出明显的生长优势，其中NW组生长优势最大Hg_NW＝9.69±1.89；室内培育阶段，W×O杂交组合依旧表现出明显的生长优势，Hg_W×O＝5.63±3.03，其它杂交组合未表现出明显的杂种优势，在六个正反交组中只有WO表现出了明显的生长优势，为Hg_w×z＝17.22±5.50。

4、不同盐度温度试养

以家系E₂的F₂代一龄蛤仔为材料，在10、15、20、25、30盐度的水环境中试养，在盐度10的情况下，5天内全部死亡，在15、20、25、30盐度的水环境试养2个月后，其存活率分别为45.26％、53.47％、56.87％、34.62％，生长速度无显著差异。橙色家系F₃在水温20-25℃，盐度10、15、20、25、30的水中试养，结果见表1：

表1.家系E₂的F₃代存活、变态及生长情况

家系E₂的F₃代在水温30-33℃，盐度10、15、20、25、30的水中试养，结果见表2。家系E₂表现出良好的耐低盐和抗高温性能。

表2.家系E₂的F₃代存活、变态及生长情况

5、家系间杂交实验

生长速度快的两个家系为亲本，以蛤仔的壳色和壳面花纹作为遗传标记，以确保所选亲本来自同一个家系。进行家系间杂交。结果表明：在D×G杂交组合的生长比较发现(如图1、2)，♂D×♀G的生长优势明显，♂D×♀G的壳长生长除9日龄外，在各日龄一直最快，杂种优势在3、6、9、30、60、100日龄分别为13.28、7.71、-21.51、33.56、42.93、11.41。、通过不同阶段的杂交家系的生长比较，杂种优势、配合力的计算，得到♂D×♀G杂交组的杂交效果最好。

Claims (1)

1.一种常见滩涂贝类核心选择群的建立方法，其特征在于：由如下步骤组成：

a、建立滩涂贝类家系：

在滩涂贝类繁殖季节，选择壳无损伤、壳型规整、活力强、无病害的二龄野生型个体作为育种的原始材料，个体数量为500-1000枚；用阴干和性诱导方法使所述的原始材料产卵排精；抓取正在排精产卵的个体，用淡水洗净，放入盛有海水容器中单独产卵排精，分别收集精卵；将收集的精卵取样在显微镜下观察，选择活力强的精子，质量好且未受精的卵子留用；1个父本与3-5个母本单对单交配，建立至少30个家系；对各家系苗种进行培育及养成，并保持水环境和培育饲养密度一致；

b、筛选生长、抗逆性状优良的家系F₂：

通过上步滩涂贝类家系建立和生长发育比较及遗传参数估计，筛选出生长、抗逆性状优良的家系F₁，进行群体自繁获得家系F₂，通过对家系F₂生长发育比较及近交衰退估计，选取2-4个生长、抗逆性状优良的家系F₂；

c、确定滩涂贝类优良性状家系基础群：

测量上步2-4个家系中的滩涂贝类壳长大小，每个家系按10％比例上选，确定滩涂贝类优良性状家系基础群；

d、建立滩涂贝类的核心选择群：

在上步家系基础群中开展家系建立、回交、家系内群体自繁，不同盐度温度试养，评估各家系生长和抗逆性状的近交、杂交、回交效应，得到具有优良生长和抗逆性状的近交家系、杂交家系、回交家系、耐低盐和抗高温家系，形成滩涂贝类的核心选择群。

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