CN104396836B - 一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种河川沙塘鳢定向交配和家系培育的方法，包括以下步骤：一)亲本的选择及暂养，二)亲本的定向配组及强化培育，三)亲鱼的产卵和受精卵孵化，四)家系的仔、稚和幼鱼培育，五)家系后期培育及池塘养殖。本发明方法设计合理，可操作性强，通过对河川沙塘鳢家系建立及早期生长比较的研究，为进行大规模家系构建和选育奠定了基础，有助于选育具有生长快速等优良生长性状的新品种，改变现有情况下苗种只能靠从天然水域捕捞或者是依靠上一年养殖的留塘河川沙塘鳢进行自繁自育和累代繁育的状况，形成系统的河川沙塘鳢良种保持和选育技术体系。

Description

一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法

技术领域

本发明涉及淡水鱼育种技术领域，具体涉及一种控制河川沙塘鳢定向交配和家系培育的方法。

背景技术

河川沙塘鳢(Odontobutispotamophila)属鲈形目(Perciformes)，沙塘鳢科(Odontobutidae)，沙塘鳢属(Odontobutis)，俗称：虎头鲨、虎头呆子等。在我国广泛分布于长江中下游、钱塘江、闽江等水系，属中国特有种。该鱼为淡水底栖小型肉食性鱼类，肉质细嫩，系餐桌名肴。近些年，由于自然水域的污染加剧，河川沙塘鳢的生存环境不断恶化，产卵环境屡遭破坏，其野生资源急剧衰退，部分地区已难觅踪迹。目前该鱼主要靠捕捞供应市场，但远不能满足需求，价格不断攀升，已发展成为一个非常具有潜力的水产养殖新品种。全国各地已经零星开展了河川沙塘鳢养殖，但仍以混养、套养为主，主养面积小，产量总体水平很低，远不能满足市场的需求。目前用于人工养殖的河川沙塘鳢苗种主要是捕自天然水域或者是依靠上一年养殖的留塘河川沙塘鳢进行自繁自育和累代繁育，苗种的生长速度、抗病能力和其它养殖性能等还未达到良种化的程度，良种问题已成为制约河川沙塘鳢养殖业稳定发展的主要“瓶颈”之一。因此，对河川沙塘鳢进行遗传改良，选育出具有生长快速等优良生长性状的新品系，是保障河川沙塘鳢养殖业可持续发展的必要条件。

家系选育是选择育种中最常用的方法之一，它是指在相同或相近的环境条件下，建立若干个家系，并对各家系进行比较和观察，以整个家系作为一个选择单位，其选择标准为家系被选择性状的平均值，家系平均值高则家系内所有成员留作种用，家系均值低则全部淘汰，由此逐代提高品种的遗传纯合性，即能选出具有稳定优良性状的新品种。现在已经有不少关于家系构建方法及生长比较的研究，如Garber等对大西洋鳕鱼73个全同胞和半同胞家系的生存、生长性状进行了比较研究；田永胜等建立了63个牙鲆家系并对其生长性能进行了测定和比较分析，最终筛选出8个生长快速的家系；马爱军等采用巢式设计方法和人工采卵授精技术，对大菱鲆大规模家系的构建与培育技术进行了研究；目前将家系选育运用于河川沙塘鳢的良种选育尚处于起步阶段。

由此可见，进行一个物种的家系选育首先要解决该物种家系构建的技术，而物种不同相应的构建方法也会存在差异，同时家系也是进行遗传分析的重要材料，对于深入分析不同亲本的遗传背景和构建遗传连锁图谱十分重要。由于河川沙塘鳢苗种培育的特殊性，有关河川沙塘鳢家系建立和选育的研究尚未见报道，本专利首次发明了河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，以期为河川沙塘鳢大规模家系选育奠定基础。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，通过以下技术方案加以实现：

所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于包括以下步骤：

一)亲本的选择及暂养

有针对性的选取来源我国不同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较强的健康雌、雄河川沙塘鳢作为繁殖亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准备好的亲鱼培养池内进行暂养，放养密度为30尾/m²，培育期间亲鱼饵料为糠虾和青虾。

二)亲本的定向配组及强化培育

采用定向交尾法进行配组，不同地理群体间河川沙塘鳢亲鱼两两组合可获得若干个不同的组合配对，将对应的雌雄个体一雄一雌单独放入室内培育缸内，进行自然交配，培育缸底内放入一个两个半圆柱形瓦片对接形成的圆柱形产卵巢，所用的长度20～25cm，内径为10～15cm。水温维持在25±1℃，保持定向配组期间处于较暗的光线及安静的环境下，强化培育期间亲鱼饵料为青虾和麦穗鱼。

三)亲鱼的产卵和受精卵孵化

每天检查产卵巢的情况，待雌雄交配完成后，发现雌鱼在产卵巢外，雄鱼在产卵巢内进行护巢时，将雌鱼和饵料从培育缸移出，雄鱼护巢直至仔鱼出膜，期间孵化水温维持在25±1℃。待仔鱼全部出膜后，将雄鱼也移出培育缸。

四)家系的仔、稚和幼鱼培育

将家系苗种培育分为3个阶段：出膜到苗种规格1.5cm之间为第一阶段，1.5cm到3cm之间为第二阶段，3cm以上为第三阶段。整个阶段期间为了最大限度的减少循环水流对鱼苗的影响，培育缸中放置2到3个亲鱼产卵时所用的瓦片，给鱼苗提供一个躲避水流的场所，同时也增大了鱼苗的栖息面积，并投入田螺，可起到消除残饵净化水质的作用，整个苗种培育过程中定期加入益生菌和聚维酮碘。

1)第一阶段：使用人工孵化的丰年虫开口并培育，日投喂三次，投喂密度为3～5个/mL，每天吸污一次；待家系育苗的平均规格到达1.5cm时进入第二阶段。

2)第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入新的培育桶中继续培育，并放置瓦片和人工水草，供幼鱼躲避和栖息，此阶段第一个星期采用丰年虫和水蚯蚓混合投喂，丰年虫投喂密度为1～3个/mL，水蚯蚓投喂情况视吃食情况而定，一星期后全部投喂水蚯蚓，期间水温为25±1℃，每天吸污一次。

3)第三阶段：待家系鱼苗的规格达到3cm时进入第三阶段，此时开始投喂赤眼鳟幼苗至培育结束。期间水温为常温，每两天吸污一次。

五)家系后期培育

第二阶段中各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入到新的培育桶中，进行标准化养殖和生长对比试验，期间每隔45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通过数据分析和处理，挑选出生长快速的优秀家系。将分析所得的优秀家系进行不同的荧光标记处理，放入事先准备好的池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶段，进行新一轮的配组、孵化、育苗，继续进行家系选育。

所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤一)和步骤二)中青虾和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm以内，数量一直保证在亲鱼数3倍以上，及时添补饵料。

所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四)中培育缸中放置的半圆柱形瓦片为2到3个，所用的长度20～25cm，内径为10～15cm，同时投入田螺10只。

所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四)中第一阶段投喂饵料为丰年虫，投喂密度为3～5个/mL，每天投喂三次，第二阶段和第三阶段为水蚯蚓和赤眼鳟幼苗，一直保证足量，及时添加。浸泡水蚯蚓的盐水浓度为7‰，加入的土霉素浓度和硫醚沙星浓度为分别为2ppm和1ppm。

所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤五)中标准化养殖是指将河川沙塘鳢幼苗放养于800L的培育桶中，常温，水位保持60～70cm，放养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，以供幼鱼躲避和栖息，前期喂食水蚯蚓，3cm后喂食赤眼鳟幼苗，一直保证足量，不间断充气和循环水，每天吸污一次。

本发明方法设计合理，可操作性强，通过对河川沙塘鳢家系建立及早期生长比较的研究，为进行大规模家系构建和选育奠定了基础，有助于选育具有生长快速等优良生长性状的新品种，改变现有情况下苗种只能靠从天然水域捕捞或者是依靠上一年养殖的留塘河川沙塘鳢进行自繁自育和累代繁育的状况，形成系统的河川沙塘鳢良种保持和选育技术体系。

具体实施方式

通过以下具体实例对本发明作进一步详述，具体参数为说明本发明技术方案所需，不应理解为对本发明保护范围的限制。

2014年3月5日至15日，有针对性的选取来源于浙江建德新安江流域、安徽当涂县运粮河段、江苏射阳镇宋泾河流域、江苏苏州太湖东西山侧等4个不同地理群体健康的雌、雄河川沙塘鳢作为繁殖亲本，在南京市水产科学研究所禄口基地的实验室内进行了河川沙塘鳢定向交配及家系培育的工作，具体内容如下：

一)亲本的选择及暂养

河川沙塘鳢的基础群体来源于浙江建德新安江流域、安徽当涂县运粮河段、江苏射阳镇宋泾河流域、江苏苏州太湖东西山侧等4个不同地理群体，有针对性的选取来源不同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较强的健康雌、雄河川沙塘鳢作为繁殖亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准备好的亲鱼培养池内进行强化培育，培养池的规格为2.5m×1.5m×0.6m，水深40cm，放养密度为30尾/m²，水温15-20℃，循环微流水和充气，水流为10L/min，培育期间亲鱼饵料为糠虾和青虾，糠虾和青虾为活体，体长规格在5cm以内，数量一直保证在亲鱼数量3倍以上，及时添补饵料。

二)亲本的定向配组及强化培育

于2014年3月中旬采用定向交尾法进行配组，4个不同地理群体间两两组合可得16个不同的组合，每个组合设置3个平行，共配组48个，按照每个组合将对应的雌雄个体一雄一雌单独放入室内培育缸(容积130L,规格为76cm×40cm×48cm)内，水深约40cm，自然交配，缸内放一个PVC管(内径20cm，长度25cm)和半圆形的瓦片(长度20cm)作为交配和产卵场所，水温维持在25±1℃，不间断充气，溶解氧保持在3mg/L以上，水流为5L/min，保持整个培育缸处于较暗的光线及安静的环境下，以防止对亲鱼进行干扰，强化培育期间亲鱼饵料为青虾和麦穗鱼，青虾和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm以内，数量一直保证在亲鱼数量3倍以上，及时添补活饵料。

三)亲鱼的产卵和受精卵孵化

配组完成后，每天检查3次各个培育缸的情况，如有亲鱼死亡现象，及时换取新的亲鱼，待有交配现象发生且交配结束后,将雌鱼和饵料(青虾和麦穗鱼)取出，雄鱼护巢直至仔鱼出膜，期间孵化水温维持在25±1℃，溶解氧3mg/L以上。产卵时间于3月27号开始，到4月8号全部结束，共计有45个培育缸开始产卵，全为全同胞家系。在恒定25±1℃的水温下，河川沙塘鳢仔苗的出膜时间为14天左右，开始至孵化完成经历1～2d，共有40个培育缸成功孵化出河川沙塘鳢仔苗，孵化成功率为88.89％，单个培育缸孵化出仔苗数都在1000尾以上，最大孵化出仔苗数3000尾左右。

四)家系的仔、稚和幼鱼培育

当雄鱼不在人工产卵巢内护巢，即仔鱼全部出膜后，将雄鱼移出培育缸，刚出膜的仔鱼约6mm左右。可将苗种的培育分为3个阶段：出苗到平均规格1.5cm为第一阶段，1.5cm到3cm之间为第二阶段，3cm以上为第三阶段。整个阶段期间为了最大限度的减少循环水流对幼苗的影响，培育缸中放置2到3个产卵时所用的瓦片，给幼苗提供一个躲避水流的场所，同时也增大了幼苗的栖息面积，同时可投入少量田螺，可起到消除残饵净化水质的作用，整个过程中定期加入益生菌和聚维酮碘。

1)第一阶段：使用人工孵化的丰年虫开口并培育，上午8点和晚上8点各投喂一次，投喂密度为3～5个/mL，投喂期间每天加入0.3mL的益生菌，以消化水中残留的饵料，防止水质变坏；期间水温为25±1℃，每天吸污两次，每星期换1/3的新水。经过45天的培育，仔苗规格可到1.5cm。待家系的平均规格到达1.5cm时进入第二阶段。

2)第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾放入新的800L的培育桶中继续培育，期间除了继续放置瓦片外，也适当放置一些人工水草，以供幼鱼躲避和栖息，由于部分亲本配合力不高等因素，培育至第二阶段时，部分家系死亡或数量急剧下降，自此淘汰了6个家系，实际共得到了34个家系，此阶段第一个星期采用丰年虫和水蚯蚓混合投喂，丰年虫投喂密度为1～3个/mL，水蚯蚓投喂情况视吃食情况而定，一星期后全部投喂水蚯蚓，期间水温为常温，每天吸污一次，每星期换1/3的新水。喂食水蚯蚓之前用7‰盐水浸泡处理5分钟，喂食过程中每3天加入一次2ppm的土霉素和1ppm的硫醚沙星，以预防幼苗肠炎的发生。经过40天的培育，仔苗规格可到3cm。

3)第三阶段：待家系的平均规格达到3cm时进入第三阶段，此时开始投喂赤眼鳟幼苗至培育结束。投喂的赤眼鳟幼苗平均规格为1.5cm左右，期间水温为常温，每两天吸污一次，每星期换1/3的新水。

五)家系培育及池塘养殖

第二阶段中得到的34个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入到新的培育桶中，进行标准化养殖和生长对比试验，试验在800L的培育桶中进行，常温，水位保持60～70cm，放养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，以供幼鱼躲避和栖息，前期喂食水蚯蚓，平均规格3cm后喂食赤眼鳟幼苗，一直保证足量，不间断充气和循环水，水流为10L/min，每天吸污一次。试验时间为2014年6月1号至8月30号，期间每隔45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通过Excel和SPSS18统计软件进行数据分析和处理，挑选出了家系1、16、29、35和36等5个生长快速的优秀家系(见表1)。表1中全长多重比较表明，生长最快的五个河川沙塘鳢家系是家系1、家系16、家系29、家系35和家系36，生长最慢的五个家系是家系12、家系27、家系37、家系26和家系34。体重多重比较表明，生长最快的五个家系是是家系1、家系16、家系29、家系35和家系36，生长最慢的五个家系是家系12、家系37、家系28、家系26和家系33。多数家系河川沙塘鳢幼苗生长差异不明显，但生长最快与生长最慢的家系之间生长差异显著。

将各家系分别按全长和体重进行降序排序，可知是家系1、家系16、家系29、家系35和家系36，在两种排列方式中均排在前五，由此初步判断这五个家系的河川沙塘鳢幼苗生长性状较好，为5个生长迅速的优秀家系，可以作为下一步遗传选育的基础群体。同时将分析所得的5个优秀家系和之后的13个较好的家系进行红、橙、黄三种荧光标记处理，标记部位为鱼体鳃盖边缘，放入事先准备好的6个池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶段，进行新一轮的配组、孵化、育苗，继续进行家系选育。后备亲鱼的池塘养殖在南京市水产科学研究所周岗基地进行。

表1河川沙塘鳢34个家系早期生长对比

注：同一列中，相同上标字母表示差异不显著，不同上标字母表示差异显著(p<0.05)。

Claims (5)

1.一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于包括以下步骤：

一)亲本的选择及暂养

有针对性的选取来源不同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较强的健康雌、雄河川沙塘鳢作为繁殖亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准备好的亲鱼培养池内进行暂养，放养密度为30尾/m²，水温15-20℃，不间断的流水和充气，暂养期间亲鱼饵料为活的糠虾和青虾；

二)亲本的定向配组及强化培育

采用定向交尾法进行配组，不同地理群体间河川沙塘鳢亲鱼两两组合可获得若干个不同的组合配对，将对应的雌雄个体一雄一雌单独放入室内培育缸内，进行自然交配，培育缸内放一个人工产卵巢，水温维持在25±1℃，保持定向配组期间处于较暗的光线及安静的环境下，强化培育期间亲鱼饵料为青虾和麦穗鱼；

三)亲鱼的产卵和受精卵孵化

每天上午检查产卵巢的情况，待雌雄交配完成后，雌鱼在产卵巢外，雄鱼在产卵巢内进行护巢，将雌鱼和饵料移除，雄鱼护巢直至仔鱼出膜，期间孵化水温维持在25±1℃；待仔鱼全部出膜后，将雄鱼移出；

四)家系的仔、稚和幼鱼培育

将家系苗种培育分为3个阶段：出膜到规格1.5cm为第一阶段，1.5cm到3cm之间为第二阶段，3cm以上为第三阶段；整个阶段期间为了最大限度的减少循环水流对鱼苗的影响，培育缸中放置2到3个亲鱼产卵时所用的瓦片，给鱼苗提供一个躲避水流的场所，同时也增大了鱼苗的栖息面积，并投入田螺，可起到消除残饵净化水质的作用，整个苗种培育过程中定期加入益生菌和聚维酮碘；

1)第一阶段：使用人工孵化的丰年虫开口并培育，日投喂三次，投喂密度为3～5个/mL，每天吸污一次；待家系苗种的平均规格到达1.5cm时进入第二阶段；

2)第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入新的培育桶中继续培育，并放置瓦片和人工水草，供幼鱼躲避和栖息，此阶段第一个星期采用丰年虫和水蚯蚓混合投喂，丰年虫投喂密度为1～3个/mL，水蚯蚓投喂情况视吃食情况而定，一星期后全部投喂水蚯蚓，期间水温为25±1℃，每天吸污一次，每星期换1/3的新水；水蚯蚓在喂食之前要进行千分之七的盐水浸泡处理，喂食过程中也要定时加入土霉素和硫醚沙星，以预防幼苗肠炎的发生；

3)第三阶段：待家系苗种的规格达到3cm时进入第三阶段，此时开始投喂赤眼鳟幼苗至培育结束；期间水温为常温，每两天吸污一次；

五)家系后期培育及池塘养殖

第二阶段中各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入到新的培育桶中，进行标准化养殖和生长对比试验，期间每隔45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通过数据分析和处理，挑选出生长快速的优秀家系；将分析所得的优秀家系进行不同的荧光标记处理，放入事先准备好的池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶段，进行新一轮的配组、孵化、育苗，继续进行家系选育。

2.根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤二)中青虾和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm以内，数量一直保证在亲鱼数量3倍以上，及时添补饵料。

3.根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四)中培育缸中放置2-3个产卵时所用的长度20～25cm半圆形瓦片，同时投入田螺10只。

4.根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四)中第一阶段投喂饵料为丰年虫，投喂密度为3～5个/mL，每天投喂三次；第二阶段为丰年虫和水蚯蚓，水蚯蚓一直保证足量，及时添加；第三阶段为赤眼鳟幼苗，一直保证足量，及时添加；浸泡水蚯蚓的盐水浓度为7‰，加入的土霉素浓度和硫醚沙星浓度为分别为2ppm和1ppm。

5.根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤五)中标准化养殖是指将河川沙塘鳢幼苗放养于800L的培育桶中，常温，水位保持60～70cm，放养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，以供幼鱼躲避和栖息，前期喂食水蚯蚓，3cm后喂食赤眼鳟幼苗，一直保证足量，不间断充气和循环水，每天吸污一次；荧光标记为红、橙、黄三种标记，打入鱼体鳃盖边缘进行不同河川沙塘鳢家系鉴别标记。