CN101747995A - 百里香精油生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例涉及一种百里香精油生产方法，包括对通过种子获得的百里香无菌苗进行不定芽诱导培养、增殖培养后获得百里香组培苗，然后去除百里香组培苗表面的水分，并对去除水分后的百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取，得到萃取混合物，以及从所述萃取混合物中挥发掉所述有机溶剂，对所述挥发处理后的萃取混合物通过有机系滤膜过滤，得到百里香精油。采用本发明实施例的百里香精油生产方法，对环境的污染低，生产周期较短，从百里香中提取百里香精油成本低，且百里酚纯度较高。
Description
技术领域
本发明涉及一种百里香精油生产方法。
背景技术
百里香精油主要成份是百里酚和香芹酚。百里香精油的主要功能有抗菌、消炎、防腐，起主要作用的也是百里酚和香芹酚，可广泛运用在医疗、美容、烹饪及食品等领域。人们利用百里香精油的历史悠久，埃及人用来防腐尸体，罗马人用来抗菌，希腊人用来帮助消化，地中海人用来治疗呼吸困难及顽强的皮肤病等等，我国西部人民早已有用百里香除去牛羊肉膻气的传统。随着对百里香研究的不断深入，百里香精油具有较大的开发潜力，其潜在应用价值体现于对霉菌有良好的抑制作用、刺激白细胞增殖、强化神经、活化脑细胞、提高记忆力和注意力，也能提振低落的情绪、筋疲力竭的感觉、以及挫败的沮丧感等。
目前，生产百里香精油的主要方法是有机合成法，这种方法虽然操作简单，但是极易造成环境的污染，从百里香中提取成本较大而且很难得到较纯的百里酚。
发明内容
本发明实施例所要解决的技术问题在于，提供一种百里香精油生产方法，对环境的污染低，生产周期较短，从百里香中提取百里香精油成本低，且百里酚纯度较高。
为解决上述技术问题，本发明实施例采用如下技术方案：
一种百里香精油生产方法，包括：
通过百里香种子发芽得到百里香无菌苗；
将百里香无菌苗切成带有腋芽的茎段；
将所述茎段接种于不定芽诱导培养基中，得到不定芽；
将所述不定芽切成小段；
将所述小段接入增殖培养基中，得到所述百里香组培苗；
去除所述百里香组培苗表面的水分；
对去除水分后的百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取，得到萃取混合物；
从所述萃取混合物中挥发掉所述有机溶剂；
对所述挥发处理后的萃取混合物采用有机系滤膜过滤，得到百里香精油。
本发明实施例的有益效果是：
通过提供一种百里香精油生产方法，对通过种子获得的百里香无菌苗进行不定芽诱导培养、增殖培养后获得的百里香组培苗，然后去除百里香组培苗表面的水分，并对去除水分后的百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取，得到萃取混合物，以及从所述萃取混合物中挥发掉所述有机溶剂，对所述挥发处理后的萃取混合物采用有机系滤膜过滤，得到百里香精油。采用本发明实施例的百里香精油生产方法，对环境的污染低，生产周期较短，从百里香中提取百里香精油成本低，且百里酚纯度较高。
下面结合附图对本发明实施例作进一步的详细描述。
附图说明
图1是本发明实施例的百里香精油生产方法的流程图；
图2是实生苗百里香精油的气质联用图；
图3是组培苗百里香精油的气质联用图。
具体实施方式
如图1所示，本发明实施例提供了一种百里香精油生产方法，其主要采用如下步骤进行：
101，通过百里香种子发芽得到百里香无菌苗，具体地，要获得百里香无菌苗，可将百里香种子发芽得到，取适量种子置于75％乙醇消毒30s，无菌水冲洗1次，再用0.1％HgCl或者活性氯含量为8-9％的NaClO消毒3min，无菌水冲洗5次，消毒后的种子接种于适宜培养基，该培养基为混合有1/2MS、20g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第一培养基中，并置于25℃温度、12h/12h光照条件下进行发芽，百里香种子2-3天后即得到所述百里香无菌苗，其中1/2MS为将MS培养基中大量元素减半而其他成分不变得到，MS培养基是目前使用最普遍的培养基，由两位科学家Miller和Skoog设计的，现在大家公认其为MS培养基；
102，通过对百里香无菌苗的离体培养，获得百里香组培苗，可通过如下两个步骤获得：
第一步骤：从上述培养6周左右获得的生长健康的百里香无菌苗中，选取一部分百里香无菌苗，将其切成3cm左右且带有腋芽的茎段，将茎段接种于不定芽诱导培养基中，4-6周后可得到大量不定芽，其中，每瓶不定芽诱导培养基中设置有3个外植体，每个外植体对应一个茎段，不定芽诱导培养基具体为混合有MS、0.23-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.25-1.0mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第二培养基，优选地，第二培养基采用混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，或者为混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，诱导效果最好；
第二步骤：将上述第一步骤得到的不定芽切成1.00cm左右的小段，将小段接入增殖培养基中，4-6周后可得到大量百里香组培苗，其中，每瓶增殖培养基中接种0.20g左右的小段，增殖培养基具体为混合有MS、0-1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0-1.0mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第三培养基，优选地，第三培养基采用混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，或者为混合有MS、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，增殖效果最好，增殖倍数可分别达到46.2、39.05；
103，对获得的百里香组培苗去除其表面的水分(吸干或稍微烘干等)，为了对百里香实生苗(另行培养得到)获得百里香精油的情况、百里香组培苗获得百里香精油的情况进行对比，可分别称取去除水分后的2.00g百里香实生苗和2.00g百里香组培苗；
104，对去除水分后的百里香实生苗、百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取，分别得到两种萃取混合物，具体地，有机溶剂可为正己烷、3-氯甲烷或乙醇，但是由于正己烷对于提取挥发性物质效果很好，因此一般采用正己烷，这样，可采用体积比为1∶5的去处水分后的2.00g百里香实生苗和正己烷进行48h的萃取处理，得到萃取混合物，同样，采用体积比为1∶5的去处水分后的2.00g百里香组培苗和正己烷进行48h的萃取处理，得到另一萃取混合物；
105，从两种萃取得到的萃取混合物中分别挥发掉有机溶剂，具体地，可在60℃的温度条件下挥发掉上述两种萃取混合物中的正己烷至干；
106，对两种挥发处理后的萃取混合物定容，具体地，分别对两种挥发处理后的萃取混合物中加1ml正己烷定容；
107，对两种所述定容处理后的萃取混合物采用有机系滤膜过滤，分别得到两种百里香精油，具体地，分别对两种定容后的萃取混合物采用0.22μm有机系滤膜进行过滤，分别得到实生苗百里香精油、组培苗百里香精油，然后均密封低温保存，可用于后续的精油成分测定。
精油成分测定可采用气质联用分析技术，具体地，可采用气质联用仪器(型号为Agilent GC5975-MS6890)进行百里香精油提取物的分析，采用气质联用仪器所带有标准数据库(型号为NIST05.L)搜索鉴定其中分离的物质，具体参数如下：
升温程序：起始温度90℃，保持1min；5℃/min升至150℃，保持1min；10℃/min升至220℃，保持1min；20℃/min升至280℃，保持1min；
色谱柱：HP-5MS；
分流比：30.9∶1；
进样量：1μl，
这样得到的实生苗百里香精油的气质联用图、组培苗百里香精油的气质联用图可分别如图2、图3所示，很容易得知，百里香的器官离体培养(通过不定芽诱导培养、增殖培养)获得百里香组培苗，生产周期短、繁殖系数大，实现工厂化生产百里香精油，环境污染小，节省了宝贵的土地资源，经济效益和社会效益显著。另外，百里香器官离体培养便于实施诱导处理，这样还可以增加一些次生代谢物的积累。
以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种百里香精油生产方法，其特征在于，包括：
通过百里香种子发芽得到百里香无菌苗；
将百里香无菌苗切成带有腋芽的茎段；
将所述茎段接种于不定芽诱导培养基中，得到不定芽；
将所述不定芽切成小段；
将所述小段接入增殖培养基中，得到所述百里香组培苗；
去除所述百里香组培苗表面的水分；
对去除水分后的百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取，得到萃取混合物；
从所述萃取混合物中挥发掉所述有机溶剂；
对所述挥发处理后的萃取混合物采用有机系滤膜过滤，得到百里香精油。
2.如权利要求1所述的百里香精油生产方法，其特征在于，百里香种子发芽后得到所述百里香无菌苗具体为：
取适量百里香种子置于75％乙醇消毒30s，无菌水冲洗1次，再用0.1％HgCl或者活性氯含量为89％的NaClO消毒3min，无菌水冲洗5次，消毒后的种子接种于适宜培养基，该培养基为混合有1/2MS、20g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第一培养基中，并置于25℃温度、12h/12h光照条件下进行发芽，得到所述百里香无菌苗。
3.如权利要求1所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基具体为混合有MS、0.23-2.0mg/L的6苄基腺嘌呤、0.25-1.0mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第二培养基。
4.如权利要求3所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述第二培养基为混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，或者为混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基。
5.如权利要求1所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述增殖培养基具体为混合有MS、0-1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0-1.0mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的第三培养基。
6.如权利要求5所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述第三培养基为混合有MS、0.25mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基，或者为混合有MS、0.25mg/L的吲哚乙酸、30g/L的蔗糖和6g/L的琼脂的培养基。
7.如权利要求1所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述有机溶剂为正己烷、3-氯甲烷或乙醇。
8.如权利要求7所述的百里香精油生产方法，其特征在于，当所述有机溶剂为正己烷时，对去除水分后的百里香组培苗利用有机溶剂进行萃取具体为：
采用体积比为1∶5的去除水分后的百里香苗株和正己烷进行48h的所述萃取处理，
从所述萃取混合物中挥发掉所述有机溶剂具体为：
在60℃的温度条件下挥发掉正己烷。
9.如权利要求1所述的百里香精油生产方法，其特征在于，所述有机系滤膜为0.22μm有机系滤膜。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102295994A (zh) * | 2011-07-12 | 2011-12-28 | 深圳职业技术学院 | 一种百里香精油的生产方法 |
| CN102295995A (zh) * | 2011-07-12 | 2011-12-28 | 深圳职业技术学院 | 一种百里香精油的生产方法 |
| EP2621505B1 (de) * | 2010-12-20 | 2016-06-01 | Maria Clementine Martin Klosterfrau Vertriebsgesellschaft mbH | Verfahren zur herstellung alkoholfreier zusammensetzungen auf pflanzlicher basis sowie auf diese weise hergestellte zusammensetzungen und deren verwendung |
| CN110668922A (zh) * | 2019-04-19 | 2020-01-10 | 江西阿尔法高科药业有限公司 | 一种麝香草脑的精制方法 |
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