CN101743238A

CN101743238A - 3-(咪唑基)-吡唑并[3,4-b]吡啶

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Publication number: CN101743238A
Application number: CN200880024760A
Authority: CN
Inventors: 李连发; A·M·K·朋内尔; 张朋烈
Original assignee: Chemocentryx Inc
Current assignee: Chemocentryx Inc
Priority date: 2007-05-22
Filing date: 2008-05-21
Publication date: 2010-06-16
Anticipated expiration: 2028-05-21
Also published as: CA2687625C; CN101743238B; EP2155712B1; EA200901572A1; KR101534661B1; HUE032273T2; AU2008256862A8; KR20100022998A; US20120010214A1; MX2009012567A; CL2008001493A1; IL202248A0; JO3319B1; WO2008147815A1; UA99619C2; IL202248A; US20080300257A1; US8481545B2; EA015529B1; AR110128A2

Abstract

提供了作为CCR1受体的有效拮抗剂、且具有体内抗炎活性的化合物。该化合物是3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶衍生物且用于药物组合物、治疗CCR1介导的疾病的方法中、且在鉴别竞争性CCR1拮抗剂的测定中作为对照使用。

Description

3-(咪唑基)-吡唑并[3，4-b]吡啶

相关申请的交叉引用

本申请要求序列号为60/932,948的美国临时申请的权益，其内容通过引用整体并入本文。

关于在联邦赞助的研究和开发下所作出的发明的权利的声明

不适用

发明背景

本发明提供化合物、包含该化合物或其药学上可接受的盐中的一种或多种的药物组合物，其有效抑制各种趋化因子(例如，MIP-1α、白细胞诱素(leukotactin)、MPIF-1及RANTES)与CCR1受体的结合。作为CCR1受体的拮抗剂或调节剂，该化合物及组合物可用于治疗炎性及免疫病状及疾病。

人类健康取决于身体检测并破坏可消耗来自个体的宝贵资源和/或诱发疾病的外来病原体的能力。免疫系统是身体的防御系统，其包括白细胞(leukocyte，white blood cell(WBC)：T淋巴细胞和B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞及免疫源性细胞(例如，破骨细胞)、淋巴组织及淋巴管。为对抗感染，白细胞在整个身体中循环以检测病原体。一旦检测到病原体，先天免疫细胞且尤其细胞毒性T细胞募集至感染位点以破坏该病原体。趋化因子作为分子信标用于免疫细胞(例如，淋巴细胞、单核细胞及粒细胞)的募集及活化、存在病原体的位点的鉴别。

尽管免疫系统调节病原体，但可产生某些不适当的趋化因子信号转导且其归因于炎性病症(例如，类风湿性关节炎、多发性硬化症及其它病症)的触发或持续。举例而言，在类风湿性关节炎中，聚集于骨关节中的失调趋化因子吸引且活化浸润性巨噬细胞及T-细胞。这些细胞的活性诱导滑膜细胞增殖，这至少部分地导致炎症且最终骨及软骨损失(参见DeVries，M.E.等人，Semin Immunol 11(2)：95-104(1999))。一些脱髓鞘病(例如，多发性硬化症)的特点是趋化因子介导的单核细胞/巨噬细胞及T细胞至中枢神经系统的募集(参见Kennedy等人，J.Clin.Immunol.19(5)：273-279(1999))。趋化因子将破坏性WBC募集至移植物已经暗示其随后的排斥。参见DeVries，M.E.等人，ibid。由于趋化因子在炎症及淋巴细胞发育中起关键作用，故特定操控其活性的能力对改善及延缓目前还没有满意治疗方法的疾病有巨大影响。此外，可将移植排斥降至最少而无昂贵的免疫抑制药物的普遍及复杂影响。

趋化因子(40个以上的小肽(7-10kD)的群)连接主要表达于WBC或免疫源性细胞上的受体，并藉助G-蛋白-偶联信号转导级联发信号来介导其化学引诱物及化学刺激物功能。受体可结合一个以上的配体；例如，受体CCR1连接RANTES(调节活化正常T细胞表达)、MIP-1α(巨噬细胞炎性蛋白)、MPIF-1/CKβ8及白细胞诱素趋化因子(尤其具有较小亲和力者)。迄今为止，已得知24个趋化因子受体。免疫细胞上趋化因子的绝对数量、多配体结合受体、及不同受体谱允许紧密控制和特异性免疫应答。参见Rossi等人，Ann.Rev.Immunol.18(1)：217-242(2000)。趋化因子活性可藉助调节其相应受体来控制，这治疗相关炎性及免疫疾病且使得能够进行器官及组织移植。

受体CCR1及其趋化因子配体(包括例如MIP-1α、MPIF-1/CKβ8、白细胞诱素及RANTES)代表重要治疗靶(参见Saeki等人，CurrentPharmaceutical Design 9：1201-1208(2003))，因为其涉及类风湿性关节炎、移植排斥(参见DeVries，M.E.等人，ibid.)、及多发性硬化症(参见Fischer等人，J Neuroimmunol.110(1-2)：195-208(2000)；Izikson等人，J.Exp.Med.192(7)：1075-1080(2000)；和Rottman等人，Eur.J.Immunol.30(8)：2372-2377(2000))。实际上，已经发现，一些功能阻断抗体、经修饰的趋化因子受体配体及小有机化合物已成功证实预防或治疗一些趋化因子介导的疾病(在Rossi等人，ibid.中综述)。值得注意地，在类风湿性关节炎的实验模型中，当施用信号转导阻断性的经修饰的RANTES配体时疾病发展减缓(参见Plater-Zyberk等人，Immunol Lett.57(1-3)：117-120(1997))。尽管功能阻断性抗体及小肽治疗剂具有前途，但其具有降解、施用后半衰期极短、及开发和制造的昂贵费用的风险，这是大多数蛋白质的特性。小有机化合物由于其通常在体内具有较长半衰期、需要较少剂量见效、通常可经口施用且因此较便宜而是优选的。先前已经阐述CCR1的一些有机拮抗剂(参见Hesselgesser等人，J.Biol.chem.273(25)：15687-15692(1998)；Ng等人，J.Med.Chem.42(22)：4680-4694(1999)；Liang等人，J.Biol.chem.275(25)：19000-19008(2000)；及Liang等人，Eur.J.Pharmacol.389(1)：41-49(2000))。鉴于在动物模型中对于疾病的治疗展示效力(参见Liang等人，J.Biol.chem.275(25)：19000-19008(2000))，故继续该研究以鉴别可用于治疗由CCR1信号转导所介导的疾病的另外的化合物。

发明概述

本发明涉及具有下式I的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物：

在式I中，R¹为C_1-4烷基或C_1-4卤代烷基，且下标m是0至1的整数。R^2a、R^2c、R^2d各自是独立选自由氢、卤素、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基、-O-C_1-4卤代烷基及C_1-4卤代烷基组成的组的成员，且R³是选自由氢和C_1-4烷基组成的组的成员。

除本文所提供的化合物以外，本发明进一步提供包含所述化合物中的一种或多种的药物组合物、以及主要使用这些化合物治疗与CCR1、CCR2和/或CCR3信号转导活性相关的疾病的方法。

附图简述

无

发明详述

I.缩写及定义

除非另有说明，否则术语″烷基″其自身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基团(即，C_1-4是指1-4个碳)。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基和仲丁基。

术语″烷氧基″是使用其常规含义，且是指经由氧原子连接至分子其余部分的烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、及诸如此类。

除非另有说明，否则术语″卤基″或″卤素″其自身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。此外，诸如″卤代烷基″等术语意欲包括单卤代烷基及多卤代烷基。举例而言，术语″C_1-4卤代烷基″意欲包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、及诸如此类。

″保护基团″是指除烷基以外当连接至分子中的反应性基团时掩蔽、减少或阻碍其反应性的部分。保护基团的实例可在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基团)，第3版，John Wiley & Sons，New York，1999、及Harrison和Harrison等人，Compendium of Synthetic Organic Methods，第1-8卷(John Wiley和Sons，1971-1996)中找到，其整体内容皆以引用的方式并入本文中。代表性羟基保护基团包括酰基、苄基及三苯甲基醚、四氢吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚及烯丙基醚。代表性胺基保护基团包括甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基、苄氧羰基(CBZ)、叔丁氧羰基(BOC)、三甲基甲硅烷基(TMS)、2-三甲基甲硅烷基-乙烷磺酰基(SES)、三苯甲基及经取代的三苯甲基、烯丙基氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)、硝基-藜芦基氧基羰基(NVOC)、及诸如此类。

″氨基酸偶合试剂″是指诸如HBTU(六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓)等试剂，其将与氨基酸的羧酸基团反应以形成可用于与各种亲核试剂(例如胺、醇和硫醇)缩合以产生其它酯、硫酯或酰胺基团的活化的中间体。

术语″药学上可接受的盐″意欲包括利用相对无毒酸或碱制得的活性化合物的盐，这取决于在本文所述化合物上所发现的特定取代基。当本发明化合物包含相对酸性的官能团时，可藉由使该化合物的中性形式与足够量的纯净或于适宜惰性溶剂中的期望碱接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐及诸如此类。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯胺、仲胺及叔胺(包括经取代的胺、环状胺、天然存在的胺及诸如此类)的盐，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基胺基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇及诸如此类的盐。当本发明化合物包含相对碱性的官能团时，可藉由使该化合物的中性形式与足够量的纯净或于适宜惰性溶剂中的期望酸接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自以下无机酸的那些盐：如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸(monohydrogencarbonicacid)、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸、或亚磷酸及诸如此类；以及衍生自以下相对无毒的有机酸的盐：如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲烷磺酸、及诸如此类。亦包括氨基酸的盐，例如精氨酸盐及诸如此类，及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric acid)及诸如此类等有机酸的盐(参见，例如Berge，S.M.等人，″Pharmaceutical Salts″，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本发明的某些具体化合物包含允许将化合物转化成碱或酸加成盐的碱性和酸性官能团。

该化合物的中性形式可藉由使盐与碱或酸接触并以常规方式分离出母体化合物来重新产生。化合物的母体形式在某些物理性质(例如在极性溶剂中的溶解度)方面不同于各种盐形式，然而所述盐出于本发明目的在其它方面却与化合物的母体形式等效。

除盐形式以外，本发明提供呈前药形式的化合物。本文所述化合物的前药是在生理条件下易于经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。此外，前药可藉由化学或生物化学方法在离体环境中转化成本发明化合物。举例而言，当将前药与适宜的酶或化学试剂一起放置于经皮贴片贮器(reservoir)中时，前药可缓慢转化成本发明化合物。

本发明的某些化合物可以非溶剂化形式及溶剂化形式(包括水合形式)存在。通常，溶剂化形式与非溶剂化形式等效且意欲被涵盖于本发明的范围内。本发明的某些化合物可以多晶型或非晶形形式存在。通常，所有物理形式对于本发明所期望的用途而言是等效的且意欲在本发明范围内。

本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体、区域异构体(regioisomer)及单种异构体(例如，分开的对映异构体)均意欲涵盖于本发明范围内。本发明化合物亦可在构成该化合物的一个或多个原子处包含异常比例的原子同位素。举例而言，化合物可利用放射性同位素(诸如，例如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C))进行放射性标记。本发明化合物的所有同位素变化形式(无论是否具有放射性)均意欲涵盖于本发明范围内。

II.概述

本发明是源于式I化合物作为CCR1受体的有效拮抗剂的发现。该化合物具有体内抗炎活性且具有优良的药物代谢动力学性质。因此，本文提供的化合物用于药物组合物、治疗CCR1介导的疾病的方法中、且作为对照用于鉴别竞争性CCR1拮抗剂的测定中。

III.化合物

在一个方面中，本发明提供式I的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物：

在式I中，R¹是C_1-4烷基或C_1-4卤代烷基，且下标m是0至1的整数。在式I中，R^2a、R^2c、R^2d各自是独立选自由氢、卤素、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基、-O-C_1-4卤代烷基和C_1-4卤代烷基组成的组的成员；R³是选自由氢和C_1-4烷基组成的组的成员；且R⁴是C_1-4烷基，且下标n是0-2的整数。在一个实施方案中，R³是氢。在另一实施方案中，R³为氢且下标n为0。在另一实施方案中，式I中的R¹为甲基、三氟甲基或乙基且下标m为1。在另一实施方案中，下标m为0。在又一实施方案中，R^2a、R^2c和R^2d各自独立选自由氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基组成的组。在又一实施方案中，R^2a为氢且R^2c和R^2d各自独立选自由氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基组成的组。

在一个优选的实施方案中，本发明化合物具有下式Ia或Ib。

在一个实施方案中，式Ia或Ib中的R^2a和R^2c各自独立选自由氟、氯、溴和碘组成的组；且R^2d是选自由甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基组成的组。

在具体实施方案中，式Ia或Ib的化合物是选自由以下组成的组：

在另一优选实施方案中，本发明化合物具有下式Ic或Id：

在式Ic和Id中，在某些实施方案中，R^2c是选自由氟、氯、溴和碘组成的组；且R^2d是选自由甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基组成的组。

在具体实施方案中，式Ic或Id的化合物是选自由以下组成的组：

在本发明再一实施方案中，式Id化合物具有以下结构：

在又一实施方案中，本发明式I化合物是选自由表1中所述化合物组成的组。

表1

1.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

2.1-[4-(4-氯-3-乙氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

3.1-{4-[4-氯-3-(2-氟-乙氧基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

4.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

5.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

6.1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

7.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

8.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

9.1-{4-[4-氯-3-(2-氟-乙氧基)-苯基]-2-甲基-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

10.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

11.1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

12.1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

13.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

14.1-[4-(4-氯-3-乙氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

15.1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟-乙氧基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

16.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

17.1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

18.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮

化合物的制备

下文的图解提供某些合成途径，可根据其获得本发明某些化合物。其它途径或下文所示途径的修改对熟练的技术人员而言将是很显然的且在本发明范围内。

图解1示出经3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表无干扰取代基，例如，诸如保护基团或羧基酯。如图解1中所示，NH₂OH与3-氰基吡唑并[3，4-b]吡啶i的反应将提供羟基脒化合物ii。使用氢气和催化剂(例如，Pd/C或Pd(OH)₂)还原ii将产生脒产物iii。藉由用氯乙醛处理使iii环化将产生咪唑产物iv。

图解1

图解2示出经3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表无干扰取代基，例如，诸如保护基团或羧基酯。在图解2中，3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶与乙二胺反应产生环化咪唑啉产物v，将其氧化将产生咪唑vi。

图解2

图解3示出经3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表无干扰取代基(例如，诸如保护基团或羧基酯)，或式I化合物的其余部分(亦参见实施例18)。如图解3中所示，使用金属转移方法可将3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶vii转化成3-甲酰基-吡唑并[3，4-b]吡啶viii，将其用乙二醛处理来环化以形成3-咪唑基-吡唑并[3，4]吡啶ix。

图解3

可用于形成本发明化合物的氨基酸偶合程序示于图解4中。在图解4中，R、R″代表无干扰取代基。例如，本发明化合物可藉由3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶的羧酸衍生物x与哌嗪衍生物xi使用任何氨基酸偶合试剂(例如，HBTU、HATU、pyBOP等)来偶合以形成本发明的3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶(xii)而制备。

图解4

III.药物组合物

除以上所提供的化合物以外，用于调节人类和动物中的CCR1、CCR2和CCR3活性的组合物通常将包含药物载体或稀释剂。

本文所用术语″组合物″意欲涵盖包含特定量的特定成份的产品以及任何直接或间接地由特定量的特定成份组合而成的产品。″药学上可接受的″意指载体、稀释剂或赋形剂必须与调配物的其它成份相容且对其接受者无害。

用于施用本发明化合物的药物组合物可方便地以单位剂型提供且可藉由药学及药物递送领域中熟知的任何方法制备。所有方法均包括使活性成份与构成一种或多种辅助成份的载体结合的步骤。一般而言，药物组合物是藉由使活性成份与液体载体或微细固体载体或两者均匀且紧密结合且随后(若需要)使产物成形为所需调配物来制备。在药物组合物中，活性目标化合物是以足以对疾病的过程或状况产生期望效果的量纳入。

包含活性成份的药物组合物可呈适宜口服应用的形式，例如片剂、糖锭(troche)、锭剂(lozenge)、水性或油性悬浮液、可分散粉剂或颗粒、乳液及自乳化(如美国专利第6,451,339号中所述)、硬或软胶囊、糖浆、酏剂、溶液、口腔贴片、口服凝胶、口香糖、可咀嚼片剂、泡腾粉剂和泡腾片剂。欲口服使用的组合物可根据本领域任何已知用于制造药物组合物的方法制备，且此类组合物可包含一种或多种选自由甜味剂、矫味剂、着色剂、抗氧化剂和防腐剂组成的组的试剂以提供药学上美观且适口的制剂。片剂包含活性成份与适于制造片剂的无毒、药学上可接受的赋形剂的混合物。这些赋形剂可为，例如惰性稀释剂，例如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒及崩解剂，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如，PVP、纤维素、PEG、淀粉、凝胶或阿拉伯树胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。该片剂可无包衣，或其可以肠溶方式或者藉由已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，且藉此可长时间提供持续作用。举例而言，可采用诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯等延时材料。其亦可藉由美国专利第4,256,108号；第4,166,452号；及第4,265,874号中所阐述的技术包衣，以形成控制释放的渗透性治疗片剂。

用于口服应用的调配物亦可为硬明胶胶囊形式，其中活性成份与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或其可为软明胶胶囊形式，其中活性成份与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。此外，乳液可利用非水混溶成份(例如，油)制备并利用表面活性剂(例如，单-二甘油酯、PEG酯及诸如此类)稳定。

水性悬浮液包含活性材料与适于制造水性悬浮液的赋形剂的混合物。所述赋形剂是诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶等悬浮剂；分散剂或润湿剂可为诸如卵磷脂等天然存在的磷脂、或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物(例如，十七乙烯氧基鲸蜡醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇的部分酯的缩合产物(例如，聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇酐的部分酯的缩合产物(例如，聚乙烯山梨醇酐单油酸酯)。水性悬浮液亦可包含一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂，及一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。

油性悬浮液可藉由将活性成份悬浮于诸如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油等植物油中或悬浮于诸如液体石蜡等矿物油中来调配。油性悬浮液可包含诸如蜂蜡、硬石蜡或十六烷醇等增稠剂。可加入甜味剂(如以上所述的那些)及矫味剂以提供适口的口服制剂。所述组合物可藉由加入抗氧化剂(例如抗坏血酸)保存。

适于藉由加入水制备水性悬浮液的可分散粉剂及颗粒提供了活性成份与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合物。适宜分散剂或润湿剂以及悬浮剂是由上述已提及的那些来举例说明。亦可存在诸如甜味剂、矫味剂以及着色剂等额外赋形剂。

本发明药物组合物亦可呈水包油乳液形式。油相可是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)或这些的混合物。适合乳化剂可是天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)、及衍生自脂肪酸与己糖醇酐的酯或部分酯(例如山梨醇酐单油酸酯)及所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯)。乳液亦可包含甜味剂和矫味剂。

糖浆及酏剂可使用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖)调配。此类调配物亦可包含缓和剂、防腐剂以及矫味剂和着色剂。口服溶液可结合例如环糊精、PEG和表面活性剂来制备。

药物组合物可为无菌可注射水性或油性悬浮液形式。此悬浮液可根据已知技术使用上文已提及的那些适宜分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配。无菌可注射制剂亦可为于无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为于1，3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受媒介物及溶剂尤其为水、林格氏溶液(Ringer′s solution)以及等渗氯化钠溶液。此外，通常使用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。任何温和的不挥发性油(包括合成单甘油酯或二甘油酯)均可用于此目的。此外，诸如油酸等脂肪酸可用于可注射剂的制备中。

本发明化合物亦可以栓剂形式施用以经直肠施用药物。这些组合物可藉由将药物与适宜无刺激赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体且因而将在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可油及聚乙二醇。此外，化合物可借助溶液或软膏经由眼睛递送来施用。另外，目标化合物的经皮递送可借助离子导入贴片及诸如此类来实现。对于局部使用而言，使用含本发明化合物的乳霜、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。本文所用局部应用亦意欲包括使用漱口水及漱口药。

本发明化合物可经调配以沉积于医学装置上，该装置可包括任何各种常用移植物、支架，包括支架移植物、导管、球囊、篮或其它可部署或永久植入身体管腔中的装置。作为特定实例，将期望具有可将本发明化合物递送至身体藉由介入技术治疗的区域的装置和方法。

在示例性实施方案中，本发明的抑制剂可沉积于医学装置(例如支架)内并递送至治疗位点用于身体一部分的治疗。

支架已经作为治疗剂(即，药物)的递送媒介物。血管内支架通常永久性地植入冠状或外周血管中。支架设计包括美国专利第4,733,655号(Palmaz)、第4,800,882号(Gianturco)、或第4,886,062号(Wiktor)中的那些。此类设计包括金属和聚合物支架二者、以及自扩张及球囊扩张式支架。支架亦可用于将药物递送至与脉管系统接触的位点处，例如美国专利第5,102,417号(Palmaz)及国际专利申请案第WO 91/12779号(Medtronic公司)及WO 90/13332(Cedars-Sanai Medical Center)、美国专利第5,419,760号(Narciso，Jr.)及美国专利第5,429,634号(Narciso，Jr.)中所揭示。支架亦已用于将病毒递送至管腔壁用于基因递送，如美国专利申请案序列第5,833,651号(Donovan等人)中所揭示。

术语″经沉积″是指藉由本领域已知方法使抑制剂涂布、吸附、放置、或者纳入所述装置。举例而言，可将抑制剂埋入涂布或覆盖医学装置的聚合物材料中并自其中释放(″基质型″)或由其环绕并穿过其释放(″贮器型″)。在后一实例中，抑制剂可使用一种或多种本领域中已知用于产生此类材料的技术截留于聚合物材料内或偶合至聚合物材料。在另一调配物中，抑制剂可借助可移除键连接至不需涂层的医学装置的表面并随时间流逝释放，可藉由有效机械或化学过程去除，或呈在植入位置处提供抑制剂的永久固定形式。

在一个实施方案中，抑制剂可在形成医学装置(例如支架)的生物相容涂层期间纳入聚合物组合物中。由这些组份产生的涂层通常均匀且用于涂布许多设计用于植入的装置。

聚合物可为生物稳定或生物可吸收聚合物，其取决于期望释放速率或期望聚合物稳定程度，但生物可吸收聚合物由于其不像生物稳定聚合物一样其植入后将不会长期存在而造成任何不利、慢性局部反应，故其用于此实施方案是优选的。可使用的生物可吸收聚合物包括但不限于聚(L-乳酸)、聚己内酯、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLLA/PGA)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基丁酸酯-共-戊酸酯)、聚二氧杂环己酮、聚原酸酯、聚酸酐、聚(乙醇酸)、聚(D-乳酸)、聚(L-乳酸)、聚(D，L-乳酸)、聚(D，L-丙交酯)(PLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(乙醇酸-共-三亚甲基碳酸酯)(PGA/PTMC)、聚环氧乙烷(PEO)、聚二氧杂环己酮(PDS)、聚磷酯、聚磷酯氨基甲酸酯、聚(氨基酸)、氰基丙烯酸酯、聚(三亚甲基碳酸酯)、聚(亚氨基碳酸酯)、共聚(醚-酯)(例如，PEO/PLA)、聚草酸亚烷基酯(polyalkyleneoxalate)、聚磷腈及生物分子(例如，纤维蛋白、纤维蛋白原、纤维素、淀粉、胶原和透明质酸)、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物、及本领域中已知的其它适宜生物可吸收聚合物。而且，可使用具有相对低慢性组织反应的生物稳定聚合物(例如，聚氨基甲酸酯、聚硅氧烷、及聚酯)，且其它聚合物若可溶解及在医学装置上固化或聚合，则亦可使用，例如，聚烯烃、聚异丁烯及乙烯-α烯烃共聚物；丙烯酸聚合物及共聚物、乙烯基卤化物聚合物及共聚物，例如聚氯乙烯；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯基醚，例如聚乙烯基甲基醚；聚亚乙烯卤化物，例如聚亚乙烯氟化物及聚亚乙烯氯化物；聚丙烯腈、聚乙烯基酮；聚乙烯基芳族化合物(例如聚苯乙烯)、聚乙烯基酯(例如聚乙酸乙烯酯)；乙烯基单体与彼此及烯烃的共聚物，例如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂、及乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；吡喃共聚物；聚羟基-丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚；聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚；聚环氧乙烷-聚经棕榈酰基残基取代的赖氨酸；聚酰胺，例如Nylon 66及聚己内酰胺；醇酸树脂、聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂、聚氨基甲酸酯；人造丝；人造丝-三乙酸酯；纤维素、乙酸纤维素、丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；玻璃纸；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；及羧甲基纤维素。

聚合物及半渗透聚合物基质可形成成型物品，例如瓣膜、支架、输液管、人工器官及诸如此类。

在本发明一个实施方案中，本发明的抑制剂偶合至形成为支架或支架-移植物装置的聚合物或半渗透聚合物基质。

通常，藉由旋涂、浸渍或喷射将聚合物施加于可植入装置的表面。亦可使用本领域中已知的额外方法用于此目的。喷射方法包括传统方法以及利用喷墨型分配器的微沉积技术。此外，可使用光图案化将聚合物沉积于可植入装置上以使该聚合物仅在该装置的特定部分上。装置的此涂布提供围绕装置的均匀层，其允许藉助装置涂层获得各种分析物的改良的扩散。

在本发明优选实施方案中，抑制剂被调配为自聚合物涂层释放至医学装置所放置的环境中。优选地，抑制剂是以控制方式在延长时间期(例如历时数月)内释放，其使用许多涉及聚合物载体或层以控制流出的公知技术中的至少一种来达成。这些技术中的一些先前已经阐述于美国专利申请案第20040243225A1号中。

而且，如美国专利第6,770,729号中所述，可控制聚合物组合物的反应物及反应条件，以便控制抑制剂自聚合物涂层的释放。举例而言，可调节一个或多个聚合物涂层的扩散系数以控制抑制剂自聚合物涂层的释放。在针对此主题的变化中，可控制一个或多个聚合物涂层的扩散系数，以调节医学装置所放置的环境中所存在分析物(例如，促进一部分聚合物分解或水解的分析物)接近聚合物组合物中一种或多种组份的能力(且例如，藉此调节抑制剂自聚合物涂层的释放)。本发明的又一实施方案包括具有多个聚合物涂层的装置，各装置具有多个扩散系数。在本发明的此类实施方案中，可藉由多个聚合物涂层调节抑制剂自聚合物涂层的释放。

在本发明再一实施方案中，抑制剂自聚合物涂层的释放是藉由调节聚合物组合物的一种或多种性质来控制，例如一种或多种内源或外源化合物的存在、或者聚合物组合物的pH。举例而言，某些聚合物组合物可经设计以随聚合物组合物pH的降低而释放抑制剂。或者，某些聚合物组合物可经设计以随过氧化氢的存在而释放抑制剂。

IV.治疗由CCR1、CCR2和/或CCR3调节的疾病的方法

在又一方面中，本发明提供治疗CCR1-、CCR2-和/或CCR3介导的病状或疾病的方法，该方法是藉由向患有此疾病或病状的受治疗者施用治疗有效量的以上式I化合物。在本文中″受治疗者″定义为包括动物，例如，哺乳动物，其包括但不限于灵长类动物(例如，人类)、牛、羊、山羊、马、狗、猫、兔子、大鼠、小鼠及诸如此类。

CCR1提供用于干扰或促进免疫细胞功能的特定方面、或更一般而言与表达于哺乳动物(例如人类)中宽范围细胞类型上的CCR1相关的功能的靶。抑制CCR1的化合物用于治疗目的尤其用于调节单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞、及某些免疫源性细胞(例如，破骨细胞)功能。因此，本发明涉及用于预防和/或治疗各种炎性及免疫调节病症及疾病的化合物(参见Saeki等人，Current PharmaceuticalDesign 9：1201-1208(2003))。

举例而言，可施用抑制CCR1的一种或多种功能的本发明化合物以抑制(即，减少或防止)炎症或与免疫病症相关的细胞浸润。由此，可抑制一种或多种炎性过程，例如白细胞迁移或浸润、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组胺)、或炎性介体释放。举例而言，根据本发明方法可抑制单核细胞浸润至炎性位点(例如，在关节炎中受伤关节、或在MS中的CNS中)。

同样地，施用促进CCR1一种或多种功能的本发明化合物以刺激(诱导或增强)炎性反应，例如白细胞迁移、趋化性、胞吐作用(例如，酶、组胺)或炎性介体释放，其产生炎性过程的有益刺激。举例而言，可募集单核细胞以对抗细菌感染。

可使用本发明方法治疗与炎症有关的疾病及病状、免疫病症及感染。在优选实施方案中，该疾病或病状是一种其中抑制或促进免疫细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞、NK细胞、肥大细胞、树突细胞、或某些免疫源性细胞(例如，破骨细胞))的作用以调节炎性或自体免疫反应的疾病或病状。

在一组实施方案中，人类或其它物种的疾病或病状(包括慢性疾病)可利用CCR1、CCR2或CCR3功能的调节剂来治疗。这些疾病或病状包括：(1)过敏性疾病，例如，全身性过敏或过敏反应、药物过敏、昆虫叮咬过敏及食物过敏；(2)炎性肠病，例如克隆氏病(Crohn′s disease)、溃疡性结肠炎、回肠炎及小肠炎；(3)阴道炎；(4)牛皮癣及炎性皮肤，例如，皮炎、湿疹、异位性皮炎、过敏性接触皮炎、荨麻疹及搔痒；(5)脉管炎；(6)脊椎关节病；(7)硬皮病；(8)哮喘及呼吸系统过敏性疾病，例如，哮喘、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性肺病及诸如此类；(9)自体免疫疾病，例如纤维肌肉疼痛、硬皮病、强直性脊椎炎、幼年型RA、斯蒂尔病(Still′s disease)、多关节幼年型RA、少关节幼年型RA、风湿性多肌痛、高安氏(Takuyasu)关节炎、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、骨关节炎、多关节关节炎、多发性硬化症、全身性红斑狼疮、I型糖尿病、II型糖尿病、I型糖尿病(新近发生的)、视神经炎、肾小球肾炎、及诸如此类；(10)移植物排斥，包括同种异体移植物排斥及急性和慢性移植物对抗宿主疾病；(11)纤维化(例如，肺纤维化(即，特发性肺纤维化、间质性肺纤维化)、与终末期肾病相关的纤维化、由辐射造成的纤维化、肾小管间质性纤维化、表皮下纤维化、硬皮病(进行性全身硬化症)、肝纤维化(包括由酒精性或病毒性肝炎所造成的)、原发性及继发性肝硬化)；(12)急性及慢性肺炎症(慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎、成人呼吸窘迫综合征、新生儿呼吸窘迫综合征、免疫复合肺泡炎)及(13)其中欲抑制不期望的炎性反应或免疫病症的其它疾病，例如心血管疾病，其包括动脉粥样硬化、由组织移植引起或在再狭窄期间的血管炎症(其包括但不限于血管成形术和/或支架置入后再狭窄)、其它急性及慢性炎性病状，例如，肌炎、神经退化性疾病(例如，阿尔兹海默氏病(Alzheimer′s disease))、脑炎、脑膜炎、肝炎、肾炎、败血症、类肉瘤病、过敏性结膜炎、耳炎、鼻窦炎、由关节镜术造成的滑膜炎症、高尿酸血症、创伤、缺血性再灌注损伤、鼻息肉(nasal polyosis)、先兆子痫、口腔扁平苔藓、格-巴氏综合征(Guillina-Barre syndrome)、肉芽肿病、与瘦素产生相关的病状、贝切特氏综合征(Behcet′s syndrome)及痛风症，且在伤口愈合应用中(14)免疫介导的食物过敏，例如，乳糜泻。

在另一组实施方案中，可利用CCR1功能调节剂治疗疾病或病状。欲用CCR1功能的调节剂治疗的疾病的实例包括癌症(原发性及转移性)(例如，多发性骨髓瘤；Hata，H.，Leukemia & Lymphoma，2005，46(7)；967-972)、心血管病、其中血管生成或新血管形成起作用的疾病(肿瘤性疾病、视网膜病及黄斑变性)、传染病(病毒感染，例如，HIV感染、及细菌感染)及免疫抑制疾病(例如，器官移植病状及皮肤移植病状)。术语″器官移植病状″意欲包括骨髓移植病状及实体器官(例如，肾、肝、肺、心脏、胰脏或其组合)移植病状。

本发明的药物组合物亦可直接或间接抑制炎性位点处金属蛋白酶及细胞因子的产生(由于减少细胞浸润)，藉此为与这些细胞因子有关的疾病或病状提供益处。

因此，本发明化合物用于预防和治疗各种炎性和免疫调节病症及疾病。

取决于欲治疗的疾病及受治疗者状况，本发明化合物可藉由口、非经肠(例如，肌内、腹膜内、静脉内、ICV、脑池内注射或输注、皮下注射或植入)、吸入喷雾、鼻、阴道、直肠、舌下或局部施用途径来施用，且可单独或共同调配成含有适合每一施用途径的常规无毒药学上可接受的载体、佐剂及媒介物的剂量单位调配物。

在需要趋化因子受体调节的病状的治疗或预防中，适宜剂量水平通常将为约0.001-100毫克/公斤患者体重/天，其可以单一剂量或多剂量施用。优选地，该剂量水平将为约0.01-约25毫克/公斤/天；更优选地约0.05-约10毫克/公斤/天。适宜剂量水平可为约0.01-25毫克/公斤/天、约0.05-10毫克/公斤/天、或约0.1-5毫克/公斤/天。在此范围内，剂量可为0.005-0.05、0.05-0.5或0.5-5.0毫克/公斤/天。就口服施用而言，所述组合物优选以含有1.0-1000毫克活性成份、尤其1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0、及1000.0毫克活性成份的片剂形式提供以根据症状调节施用于待治疗患者的剂量。所述化合物可以每天1-4次的服法施用，优选每天一次或两次。

然而，应了解，对于任何具体患者，特定剂量水平及给药频率可能会不同且应根据各种因素而定，所述因素包括所用特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性及作用时间长度、受治疗者的年龄、体重、遗传特性、整体健康状况、性别及饮食、以及施用模式及时间、排泄速率、药物组合、正接受治疗的受治疗者具体病状的严重程度。

可利用本发明化合物、组合物及方法治疗或预防与炎症相关的疾病及病状、免疫病症、感染及癌症。

本发明化合物及组合物可结合具有相关效用的其它化合物及组合物用于预防及治疗所关注的病状或疾病，例如炎性或自体免疫病症、病状及疾病，其包括炎性肠病、类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣性关节炎、多关节关节炎、多发性硬化症、过敏性疾病、牛皮癣、异位性皮炎及哮喘、及以上所提及的那些病理。

举例而言，在治疗或预防炎症或自体免疫或例如关节炎相关的骨损失中，本发明化合物及组合物可结合抗炎剂或止痛剂使用，例如，鸦片激动剂、脂氧合酶抑制剂(例如5-脂氧合酶抑制剂)、环氧合酶抑制剂(例如环氧合酶-2抑制剂)、白介素抑制剂(例如白介素-1抑制剂)、NMDA拮抗剂、一氧化氮的抑制剂或一氧化氮的合成抑制剂、非类固醇抗炎剂、或细胞因子抑制抗炎剂(例如化合物，例如，对乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因(codeine)、芬太尼(fentanyl)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮咯酸(ketorolac)、吗啡、萘普生(naproxen)、非纳西汀(phenacetin)、吡罗昔康(piroxicam)、类固醇止痛剂、舒芬太尼(sufentanyl)、苏林酸(Sunlindac)、替尼达普(tenidap)、及诸如此类。同样地，本发明化合物及组合物可与以下一起施用：以上所列的止痛剂；增效剂，例如，咖啡因、H2拮抗剂(例如，雷尼替丁(ranitidine))、simethicone、氢氧化铝或氢氧化镁；减充血剂，例如，去氧肾上腺素、苯丙醇胺(phenylpropanolamine)、伪麻黄碱(pseudoephedrine)、羟甲唑啉(oxymetazoline)、肾上腺素(ephinephrine)、萘甲唑啉(naphazoline)、赛洛唑啉(xylometazoline)、丙己君(propylhexedrine)、或左旋脱氧麻黄碱；镇咳药，例如，可待因、氢可酮(hydrocodone)、卡拉美芬(caramiphen)、喷托维林(carbetapentane)、或右美沙芬(dextromethorphan)；利尿药；及镇静或非镇静抗组胺药。

同样，本发明的化合物及组合物可结合其它用于治疗、预防、抑制或缓解本发明化合物及组合物有用的疾病或病状的药物使用。此类其它药物可藉由其常用途径及用量与本发明化合物或组合物同时或依序施用。当本发明化合物或组合物与一种或多种其它药物同时使用时，优选除包含本发明化合物或组合物外亦包含此类其它药物的药物组合物。因此，本发明的药物组合物包括除含有本发明化合物或组合物外亦包含一种或多种其它活性成份或治疗剂的那些组合物。可结合本发明的化合物或组合物分别或在相同药物组合物中施用的其它治疗剂实例包括，但不限于：(a)VLA-4拮抗剂；(b)皮质类固醇，例如倍氯米松(beclomethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、氟替卡松(fluticasone)、氢化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、曲安西龙(triamcinolone)、沙美特罗(salmeterol)、沙美特罗、沙丁胺醇(salbutamol)、福美雷司(formeterol)；(c)免疫抑制剂，例如，环孢霉素(cyclosporine)(环孢霉素A、

)、他克莫司(tacrolirnus)(FK-506、

)、雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)、)及其它FK-506型免疫抑制剂、及麦考酚酯(mycophenolate)，例如，麦考酚酸吗乙酯(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，例如，溴苯那敏(brompheniramine)、氯苯那敏(chlorpheniramine)、右氯苯那敏(dexchloipheniramine)、曲普利啶(triprolidine)、氯马斯汀(clemastine)、苯海拉明(diphenhydramine)、二苯拉林(diphenylpyraline)、曲吡那敏(tripelennamine)、羟嗪(hydroxyzine)、甲地嗪(methdilazine)、异丙嗪(promethazine)、三甲泼拉嗪(trimeprazine)、阿扎他定(azatadine)、赛庚啶(cyproheptadine)、安他唑啉(antazoline)、非尼拉敏(pheniramine)、美吡拉敏(pyrilamine)、阿司咪唑(astemizole)、特非那定(terfenadine)、氯雷他定(loratadine)、西替利嗪(cetirizine)、非索非那定(fexofenadine)、脱羧乙氧氯雷他定(descarboethoxyloratadine)、及诸如此类；(e)非类固醇抗哮喘药(例如，特布他林(terbutaline)、奥西那林(metaproterenol)、非诺特罗(fenoterol)、异他林(isoetharine)、沙丁胺醇(albuterol)、比托特罗(bitolterol)及吡布特罗(pirbuterol))、茶碱(theophylline)、色甘酸钠(cromolyn sodium)、阿托品(atropine)、异丙托溴铵(ipratropiumbromide)、白三烯(leukotriene)拮抗剂(例如，扎氟普汀(zafmlukast))、孟鲁司特(montelukast)、普仑司特(pranlukast)、伊拉司特(iralukast)、泊比司特(pobilukast)及SKB-106,203)、白三烯生物合成抑制剂(齐留通(zileuton)、BAY-1005)；(f)非类固醇抗炎剂(NSAID)，例如，丙酸衍生物(例如，阿明洛芬(alminoprofen))、苯恶洛芬(benoxaprofen)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、布洛芬、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生、奥沙普秦(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)及硫恶洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(例如，吲哚美辛、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(fentiazac)、呋罗芬酸(furofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、oxpinac、舒林酸(sulindac)、硫平酸(tiopinac)、托美丁(tolmetin)、齐多美辛(zidometacin)及佐美酸(zomepirac))、芬那酸(fenamic acid)衍生物(例如，氟芬那酸(flufenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、尼氟酸(niflumic acid)及托芬那酸(tolfenamic acid))、联苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳(diflunisal)及氟苯柳(flufenisal))、昔康类(oxicam)(例如，伊索昔康(isoxicam)、吡罗昔康、舒多昔康(sudoxicam)及替诺昔康(tenoxicam))、水杨酸酯(例如，乙酰水杨酸及柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine))及吡唑啉酮(例如，阿扎丙宗(apazone)、bezpiperylon、非普拉宗(feprazone)、莫非布宗(mofebutazone)、羟布宗(oxyphenbutazone)及保泰松(phenylbutazone))；(g)环氧合酶-2(COX-2)抑制剂，例如，塞来考昔(celecoxib)及罗非考昔(rofecoxib)

(h)IV型磷酸二酯酶(PDE IV)的抑制剂；(i)金化合物，例如，金诺芬(auranofin)及金硫葡糖(aurothioglucose)；(j)依那西普(etanercept)

(k)抗体治疗剂，例如，奥素克隆(orthoclone)(OKT3))、达珠单抗(daclizumab)

)、巴利昔单抗(basiliximab)

)及英夫利昔单抗(infliximab)

)、(l)趋化因子受体、尤其CCR5、CXCR2、CXCR3、CCR2、CCR3、CCR4、CCR7、CX₃CR1及CXCR6的其它拮抗剂；(m)润滑剂或缓和剂，例如，矿脂及羊毛脂；(n)角质软化剂(例如，他扎罗汀(tazarotene)；(o)维生素D₃衍生物，例如，卡泊三烯(calcipotriene)或卡泊三醇(calcipotriol)(p)PUVA；(q)地蒽酚(anthralin)

；(r)阿维a酯(etretinate)

及异维a酸(isotretinoin)；及(s)多发性硬化症治疗剂，例如，干扰素β-1β

、干扰素(β-1α、硫唑嘌呤

乙酸格拉默(glatiramer acetate)、糖皮质激素(例如，泼尼松龙)及环磷酰胺；(t)DMARDS，例如，甲氨蝶呤；(u)其它化合物，例如，5-氨基水杨酸及其前药；羟氯喹啉；D-青霉胺；抗代谢物，例如，硫唑嘌呤、6-巯嘌呤及甲氨蝶呤；DNA合成抑制剂(例如，羟基脲)及微管破坏剂(例如，秋水仙碱(colchicine))。可改变本发明化合物与第二活性成份的重量比且将根据每一成份的有效剂量而定。一般而言，将使用每一成份的有效剂量。因此，举例而言，当本发明化合物与NSAID组合时，本发明化合物与NSAID的重量比将通常自约1000∶1至约1∶1000，优选约200∶1至约1∶200范围。通常，本发明化合物与其它活性成份的组合亦将处于上述范围内，但在每一情况下，应使用每一活性成份的有效剂量。

V.实施例

提供以下实施例用以阐述而非限制所要求保护的发明。

以下所用试剂及溶剂可自商业来源获得，例如，Aldrich Chemical公司(Milwaukee，Wisconsin，USA)。¹H-NMR是在Varian Mercury 400MHz NMR光谱计上记录。有效峰是相对于TMS提供且以以下顺序制表：多重性(s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)及质子数量。质谱结果是以质量比电荷的比例、随后各离子的相对丰度(在括号中)来报告。在表中，对于含最普通原子同位素的M+H(或标记为M-H)离子报告单一m/e值。在所有情况中同位素分布(isotope pattern)对应于预计式。电喷射离子(ESI)质谱分析是在Hewlett-Packard MSD电喷射质谱仪上使用配备有Agilent Zorbax SB-C18，2.1X50mm，5μ柱用于样品递送的HP1100 HPLC实施。通常，将分析物以0.1毫克/毫升溶于甲醇并利用递送溶剂将1微升注入质谱仪中，质谱仪自100至1500道尔顿扫描。所有化合物皆可以正ESI模式使用含有1％甲酸的乙腈/水作为递送溶剂来分析。下文所提供的化合物亦可以负ESI模式使用2mM于乙腈/水中的NH₄OAc作为递送系统来分析。

本发明实施例及整个说明书中使用以下缩写：

HPLC，高压液相色谱；DMF，二甲基甲酰胺；TFA，三氟乙酸；THF，四氢呋喃；EtOAc，乙酸乙酯；BOC₂O，二碳酸二叔丁基酯或BOC酸酐；HPLC，高压液相色谱；DIPEA，二异丙基乙胺；HBTU，六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓；dppf，1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁；Pd₂(dba)₃，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)；DIPEA，二异丙基乙胺；DMP，邻苯二甲酸二甲酯；Me，甲基；Et，乙基；DCM，二氯甲烷。

在本发明范围内的化合物可如下所述使用各种熟练的技术人员已知的反应来合成。本领域技术人员亦应认识到，可使用替代方法来合成本发明的目标化合物，且此文献主体内所阐述的途径并非穷举，而是提供感兴趣化合物的宽可适用及实用途径。

本专利中所主张的某些分子可以不同对应异构体及非对应异构体形式存在且主张这些化合物的所有此类变体。

根据详细阐述的用于合成本文关键化合物的实验程序，可获得藉由鉴别所述化合物的物理数据以及藉由与所述化合物相关联的结构阐述所描述的分子。

本领域中的那些技术人员亦应认识到，在有机化学的标准处理程序期间，经常使用酸和碱。母体化合物若具有需要的固有酸度或碱度，则有时在本专利内所阐述的实验程序期间制备其盐。

实施例1

1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

步骤1：将3-碘-7-氮杂吲唑(25.50克)及K₂CO₃(41.4克)于DMF(200毫升)中的混合物加热至85℃并缓慢添加氯乙酸叔丁基酯(14.3毫升)。将混合物于此温度下搅拌1小时(h)，冷却至室温，随后添加水(300毫升)。将反应混合物过滤，获得(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯。

步骤2：向250毫升烧瓶中装填(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯(15.0克)、PdCl₂(dppf)(3.0克)、Zn(CN)₂(4.96克)、DMF(200毫升)及H₂O(14毫升)。使包含所得悬浮液的烧瓶脱气并用氮气重复回填持续5分钟，随后向反应混合物中添加Pd₂(dba)₃(3.85克)。将反应混合物在N₂下在90℃下加热16小时，冷却至室温，用H₂O(800毫升)稀释并过滤。将所收集固体用甲苯(10毫升)洗涤，获得黄色固体(3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯。

步骤3：将(3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯、盐酸羟胺(8.28克)及Et₃N(22.6毫升)于EtOH(120毫升)中的混合物在N₂下在65℃下加热过夜。将所得混合物冷却至室温，过滤并将所收集固体用H₂O(100毫升)及Et₂O(50毫升x2)洗涤，获得[3-(N-羟基甲脒基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸叔丁基酯。

步骤4：将[3-(N-羟基甲脒基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸叔丁基酯(6.17克)与AcOH(45毫升)及Ac₂O(4.3毫升)一起装填于100毫升小瓶中。将所得混合物于室温下搅拌1小时，此时初始悬浮液变成澄清溶液。向此溶液中添加Pd/C(10％，900毫克)并于1个大气压H₂气球下搅拌，并将所得混合物于室温下搅拌过夜。将反应混合物藉助硅藻土垫过滤，用DCM/MeOH洗涤。蒸发掉溶剂，获得(3-脒基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯，其未经进一步纯化即使用。

步骤5：将以上获得的(3-脒基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯与氯乙醛(5.72毫升)、二噁烷(50毫升)及K₂CO₃(12.42克)一起装填于100毫升小瓶中。将所得混合物于80℃下搅拌4小时并添加更多氯乙醛(5.72毫升)及K₂CO₃(12.42克)。将混合物再于80℃下搅拌1小时并于120℃下再搅拌1小时，冷却至室温，用二氯甲烷(DCM)稀释，用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发。藉由快速色谱法纯化，获得褐色油状物2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸叔丁基酯。

步骤6：将2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸叔丁基酯(977毫克)溶于三氟乙酸(TFA)(10毫升)中并于室温下搅拌1小时。将混合物在真空中蒸发，获得褐色油状物2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸，其未经进一步纯化即使用。

步骤7：(方案A-HBTU偶合程序)将[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸(0.30M，0.40毫升，0.12毫摩尔)溶液转移至小瓶中。将1-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪二盐酸盐(48毫克，0.14毫摩尔)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓(HBTU)(55毫克，0.14毫摩尔)及i-Pr₂NEt(0.30毫升)添加于小瓶中并将混合物于周围温度下搅拌。30分钟后，LC/MS分析显示形成期望产物且羧酸起始材料完全消耗掉。将混合物用EtOAc稀释，用水(1x)及盐水(1x)洗涤，经Na₂SO₄干燥并蒸发。将残余物藉由硅胶色谱(1％至8％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，0.6H，J＝8.4，1.6Hz)，8.66(dd，0.4H，J＝8.0，1.6Hz)，8.57-8.55(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，7.22-7.16(m，1H)，7.09-7.05(m，2H)，6.50-6.45(m，2H)，5.45(s，0.6H)，5.43(s，1.4H)，4.07-4.01(m，2H)，3.81-3.69(m，4H)，3.17-3.13(m，1.6H)，3.08-3.02(m，2.4H)，1.50-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺484.4。

实施例2

1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)-苯基]哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用1-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)苯基]-哌嗪二盐酸盐及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(2％至3.5％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)苯基]哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，0.6H，J＝8.0，1.8Hz)，8.67(d，0.4H，J＝6.4Hz)，8.57-8.55(m，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.11-7.06(m，2H)，6.63(d，0.6H，J＝7.6Hz)，6.57(d，0.4H，J＝7.6Hz)，6.54(d，1H，J＝7.6Hz)，5.45(s，0.7H)，5.43(s，1.3H)，4.83-4.80(m，1H)，4.71-4.68(m，1H)，4.31-4.18(m，2H)，3.82-3.76(m，3H)，3.50(t，1H，J＝5.2Hz)，3.23-3.04(m，4H)；LC/MS m/z(M+H)⁺502.4。

实施例3

1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用1-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪二盐酸盐及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(4％至15％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(25毫克)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.49-6.40(m，2H)，5.45(s，0.7H)，5.43(s，1.3H)，4.10-4.04(m，2H)，3.81-3.69(m，4H)，3.23-3.16(m，4H)，1.50-1.45(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺466.4。

实施例4

1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪二盐酸盐及[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(1％至10％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(27毫克)：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.67(dd，0.4H)，8.57-8.55(m，1H)，7.31-7.20(m，2H)，7.12-7.06(m，2H)，6.49-6.45(m，1H)，5.45(s，0.6H)，5.43(s，1.4H)，3.86(s，0.9H)，3.85(s，2.1H)，3.81-3.75(m，4H)，3.15-3.08(m，4H)；LC/MS m/z(M+H)⁺470.4。

实施例5

1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用(S)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(1％至8％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.55(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.44-6.39(m，2H)，5.42(br.s，2H)，4.83(br.s，0.3H)，4.49(br.s，0.3H)，4.30(br.s，0.3H)，3.89(s，1.2H)，3.88(s，1.8H)，3.83(br.s，0.3H)，3.72-3.69(m，1H)，3.54-3.52(m，1H)，3.38(b r.s，1H)，3.19-3.15(m，1H)，3.00(br.s，1H)，2.80(br.s，1H)，1.50-1.43(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺466.4。

实施例6

1-[(S)-4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用(S)-1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(2％至3％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[(S)-4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(29毫克)：¹HNMR(CDCl₃，400MHz)δ8.79(dd，1H)，8.55(dd，1H)，7.27-7.21(m，3H)，7.07(d，1H)，6.43(br.d，1H)，5.46-5.37(m，2H)，4.83(br.s，0.3H)，4.51-4.48(m，0.6H)，4.28-4.21(m，0.6H)，3.86(s，0.9H)，3.85(s，2.1H)，3.79(br.s，0.3H)，3.67(br.s，0.3H)，3.33-3.21(m，2.5H)，2.95-2.93(m，0.9H)，2.83-2.76(m，1.6H)，1.48-1.40(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺484.4。

实施例7

1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用(R)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(1％至7.5％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.76(d，0.6H)，8.66(dd，0.3H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.48-6.40(m，2H)，5.53-5.40(m，2H)，4.26(br.d，0.6H)，4.00(br.d，0.6H)，3.88(s，1.3H)，3.86(s，1.7H)，3.80-3.49(m，3.2H)，3.33(br.s，0.6H)，3.17-3.14(m，2H)，1.51-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺466.4。

实施例8

1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用(S)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(1％至7％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.77(d，0.6H)，8.66(d，0.3H)，8.57-8.54(m，1H)，7.30-7.19(m，4H)，6.48-6.40(m，2H)，5.54-5.36(m，2H)，4.25(b r.d，0.6H)，4.00(br.d，0.6H)，3.88(s，1.3H)，3.86(s，1.7H)，3.82-3.48(m，3.2H)，3.36-3.29(m，0.6H)，3.17-3.13(m，2H)，1.51-1.43(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺466.4。

实施例9

1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。使用(R)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作为偶合组份。粗产物藉由硅胶色谱(1％至7.5％于CH₂Cl₂中的MeOH)纯化，获得棕褐色固体1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ8.75(d，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.18(m，4H)，6.44-6.39(m，2H)，5.42(br.s，2H)，4.82(br.s，0.3H)，4.45(br.s，0.3H)，4.33(br.s，0.3H)，3.88(s，1.2H)，3.87(s，1.8H)，3.83(br.s，0.3H)，3.73-3.67(m，1H)，3.54-3.52(m，1H)，3.38(br.s，1H)，3.17-3.13(m，1H)，2.99(br.s，1H)，2.80(br.s，1H)，1.50-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)⁺466.4。

实施例10

2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-((S)-4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮的合成。

该标题化合物是根据方案A制备。向含有(S)-1-(4-氯-3-乙氧基苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐(70毫克，0.21毫摩尔)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩尔)、HBTU(81毫克，0.21毫摩尔)、DMF(0.7毫升)及DIPEA(0.15毫升，0.87毫摩尔)。将反应混合物于30℃下维持24小时。将溶液用EtOAc(30毫升)稀释并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl饱和水溶液(2×10毫升)洗涤。有机相经MgSO₄干燥并于真空中浓缩。所得残余物是藉由制备型HPLC(MeCN-H₂O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)纯化并将纯净部分冻干，获得所示化合物(11毫克，11％产率)：MS(ES)[M+H]⁺预计值480.2，试验值480.5；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ9.94(br s，1H)，8.79(dd，J＝1.6，8.0，1H)，8.55(dd，J＝1.6，4.4，1H)，7.19-7.26(m，4H)，6.37-6.43(m，2H)，5.40(br s，2H)，2.78-4.81(m，10H)，4.07(q，J＝6.8，2H)，1.46(t，J＝6.8，3H)。

实施例11

2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)哌嗪-1-基)乙酮的合成。

向含有1-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)哌嗪二盐酸盐(70毫克，0.21毫摩尔)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩尔)、HBTU(83毫克，0.22毫摩尔)、DMF(0.7毫升)、及DIPEA(0.20毫升，1.2毫摩尔)。将反应混合物于20℃下维持24小时。将溶液用EtOAc(30毫升)稀释并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl饱和水溶液(2×10毫升)洗涤。有机相经MgSO₄干燥并于真空中浓缩。所得残余物藉由制备型HPLC(MeCN-H₂O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)纯化并将纯净部分冻干，获得所示化合物(20毫克，20％产率)：MS(ES)[M+H]⁺预计值484.2，试验值484.4；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ9.94(br s，1H)，8.78(dd，J＝1.2，8，1H)，8.55(dd，J＝1.2，4.6，1H)，7.16-7.26(m，4H)，6.45-6.53(m，2H)，5.44(s，2H)，4.77(dt，J＝4.0，46.8，2H)，4.26(dt，J＝4.0，26.8，2H)，3.69-3.78(m，4H)，3.10-3.21(m，4H)。

实施例12

2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-((S)-4-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮的合成。

向含有(S)-1-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)-3-甲基哌嗪二盐酸盐(80毫克，0.23毫摩尔)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩尔)、HBTU(81毫克，0.21毫摩尔)、DMF(0.7毫升)、及DIPEA(0.2毫升，1.2毫摩尔)。将反应混合物于30℃下维持24小时。将溶液用EtOAc(30毫升)稀释并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl饱和水溶液(2×10毫升)洗涤。有机相经MgSO₄干燥并于真空中浓缩。所得残余物藉由制备型HPLC(MeCN-H₂O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)纯化并将纯净部分冻干，获得所示化合物(14毫克，13％产率)：MS(ES)[M+H]⁺预计值498.2，试验值498.4；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ9.95(br s，1H)，8.79(dd，J＝1.6，8.2，1H)，8.55(dd，J＝1.6，4.4，1H)，7.19-7.26(m，4H)，6.44-6.50(m，2H)，5.40(br s，2H)，4.77(dt，J＝4.2，47.2，2H)，4.26(dt，J＝4.2，27.2，2H)，2.78-4.42(m，10H)。

实施例13

1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中装填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩尔)、HBTU(125毫克，0.33毫摩尔)、1-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪二盐酸盐(142毫克，0.50毫摩尔)、无水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.5毫升)。给小瓶盖上盖子，加热至45℃并搅拌过夜。次日，在真空中去除挥发物并藉由制备型hplc(反相，乙腈-水梯度)分离，获得1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮：MS(ES)[M+H]⁺试验值：436.4。

实施例14

1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中装填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩尔)、HBTU(125毫克，0.33毫摩尔)、1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪二盐酸盐(170毫克，0.50毫摩尔)、无水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.5毫升)。给小瓶盖上盖子，加热至45℃并搅拌过夜。次日，在真空中去除挥发物并藉由制备型hplc(反相，乙腈-水梯度)分离，获得1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮：MS(ES)[M+H]⁺试验值：490.4。

实施例15

1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中装填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩尔)、HBTU(125毫克，0.33毫摩尔)、1-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪二盐酸盐(177毫克，0.50毫摩尔)、无水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.4毫升)。将小瓶盖上，加热至45℃并搅拌过夜。次日，在真空中去除挥发物并藉由制备型hplc(反相，乙腈-水梯度)分离，获得1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮。MS(ES)[M+H]⁺试验值：506.4。

实施例16

1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

该标题化合物是自1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮(参见美国申请案第11/474,132号，其作为美国专利第20070010524号公开，以引用方式并入)根据类似于在实施例1的合成中步骤2至步骤5所阐述的程序来制备：¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ10.22(br，1H)，8.82(dd，1H)，8.56(dd，1H)，7.20-7.30(m，3H)，7.11(s，1H)，6.47(d，1H)，6.42(dd，1H)，5.44(s，2H)，3.88(s，3H)，3.80(m，4H)，3.19(m，4H)；MS(ES)M+H预计值452.2。

实施例17

1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮(50毫克，0.11毫摩尔，1eq)于THF中的溶液中添加60％氢化钠(5.7毫克，0.14毫摩尔，1.3eq)并搅拌1小时，随后添加碘甲烷(25.8毫克，0.16毫摩尔，1.5eq)。2小时后，LCMS显示主峰是期望产物。藉由制备型hplc(反相，乙腈-水梯度)，获得1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮。MS(ES)[M+H]⁺试验值：465.2。

实施例18

步骤1：4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯

向配备有机械搅拌器、气体接头、加热套及温度计的3颈5升Morton烧瓶中添加外消旋-BINAP(rac-BINAP)(4.24克，0.005当量)及Pd₂(dba)₃(3.20克，0.0025当量)。将烧瓶抽真空，并用氮气回填。经由套管添加甲苯(100毫升)。将混合物于室温下搅拌15分钟，获得紫色溶液。然后添加甲苯(2.0升)。一次性添加2-氯-5-溴苯甲醚(300.3克，1.356摩尔，1当量)。一次性添加Boc-哌嗪(252.4克，1当量)。一次性添加叔丁醇钠(183.0克，1.4当量)。将烧瓶抽真空并用氮气回填。然后将混合物加热至内部温度为60℃。获得非均相浅橙色浆液。1小时后，该混合物变成均相褐色溶液。再过15小时后，将混合物冷却至室温。将EtOAc(2.0升)添加于搅拌混合物中。将固体过滤。滤液用EtOAc(100毫升)洗涤。将合并的滤液用10％K₂CO₃水溶液(1×1升)、水(1×1升)洗涤，并经MgSO₄干燥。在真空中去除溶剂，获得橙色固体状产物(410.3克，93％产率)。

步骤2：1-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪二盐酸盐

向配备有机械搅拌器的4升烧杯中装填4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(500克，1.53摩尔，1当量)及MeOH(1.50升)。于室温下搅拌的同时，在5分钟内添加37％浓HCl(500毫升，4当量)。使内部温度升至40℃，且溶液变稠，同时有沉淀。15分钟后，在热板上将混合物加热至内部温度为60℃。(当混合物加热时在约50℃时开始出现起泡。)于60℃下2小时后，将溶液冷却至室温，且随后于冰箱中冷却至5℃。藉由过滤分两批收集产物。将各批红-褐色滤液用EtOAc(2×500毫升)洗涤，获得浅黄色固体。将两个批料合并获得产物(391.3克)。将滤液在真空中浓缩至体积为300毫升并利用热(50℃)MeOH(500毫升)处理。将混合物在冰箱中冷却至5℃维持24小时。藉由过滤收集所得沉淀物并用EtOAc(2×200毫升)洗涤，获得额外44.3克产物(总共435.6克，95％产率)。

步骤3：2-氯-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮

向配备有机械搅拌器的3升烧瓶中添加1-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪二盐酸盐(220克，0.73摩尔，1当量)、CH₂Cl₂(1000毫升)、及水(1000毫升)。利用冰-水浴将两相混合物冷却至5℃。将K₂CO₃(506克，5当量)逐份添加于剧烈搅拌的溶液中以使起泡减至最少。自添加漏斗逐滴添加氯乙酰氯(124.4克，1.5当量)于CH₂Cl₂(100毫升)中的溶液，同时维持内部温度低于8℃。1小时后，离开冷却浴，并使反应升温至室温。再过1小时后，将该层分离。水相用CH₂Cl₂(2×300毫升)萃取，且合并的有机层经3∶1Na₂SO₄/K₂CO₃干燥(添加K₂CO₃有助于使溶液相变得透明)。过滤后，将滤液在真空中浓缩，并将残余物于真空下干燥16小时，获得灰白色固体状产物(410克，92％产率)。

步骤6：7-氮杂吲唑-3-甲醛

向配备有数字式温度计、1升添加漏斗及机械搅拌器的5升3颈烧瓶(所有玻璃器具在使用之前皆在烘箱中干燥并在空气中冷却30分钟)中装填3-碘-7-氮杂吲唑(196.0克，0.80摩尔)及1升无水THF(于自Aldrich购得的SureSeal瓶中且直接使用)。将固体于室温下完全溶于THF中以形成深褐色溶液。然后将烧瓶利用冰/NaCl浴冷却至-5℃并适度搅拌，逐滴添加邻-甲苯基氯化镁(1M于THF中的溶液，880毫升，1.1当量)以使内部温度保持在-5℃至-3℃之间(添加约820毫升邻-甲苯基氯化镁溶液之后，温度不再上升)。整个添加过程耗时2小时25分。添加结束后，混合物为均相深褐色溶液。

再过1小时后，逐滴添加异丙基氯化镁溶液(2M于THF中，480毫升，1.2当量)以保持内部温度＜4℃。25分钟且添加约200毫升异丙基氯化镁溶液后，开始形成褐色沉淀物。总共添加380毫升异丙基氯化镁溶液后，混合物再次变成均相。整个添加过程实施45分钟。再1小时25分钟之后，取出少量样品并用D₂O中止反应。此样品的LCMS分析显示完成碘-Mg交换。

然后逐滴添加1-甲酰基哌啶(120毫升，1.3当量)以保持内部温度在＜2℃之间。添加约30毫升1-甲酰基哌啶后，内部温度不再上升并相对快的添加剩余1-甲酰基哌啶。整个添加过程耗时20分钟。添加结束时，混合物仍为深色均相溶液并使其缓慢升温至室温并适度搅拌18小时。

将混合物利用冰/NaCl浴重新冷却至0℃并藉由缓慢添加NH₄Cl饱和溶液(750毫升)/浓HCl溶液(250毫升)的混合物中止反应以保持内部温度在＜35℃。添加完成后，允许持续搅拌1小时且出现黄色沉淀物。将混合物过滤且固体用THF(100毫升)洗涤。将所收集滤液转移至分液漏斗中并利用添加NaHCO₃(约5克)将水层的pH调节至5与6之间。分离THF层并用NaCl饱和溶液(2×100毫升)洗涤。将合并的水层(包括NaCl洗涤层及中止反应的水层)用EtOAc(3×250毫升)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)、过滤并在真空中蒸发(浴温度＜30℃)，获得浅褐色固体。将此固体用Et₂O(600毫升)研磨并过滤。将所收集固体用Et₂O(2×100毫升)洗涤，获得浅黄色固体7-氮杂吲唑-3-甲醛(86.6克，73％)。

步骤4：1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲酰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮

将7-氮杂吲唑-3-甲醛(86.6克，0.59摩尔，1当量)，NaI(8.8克，0.1当量)与K₂CO₃(162.5克，2当量)于DMF(0.5升)中的混合物在5升烧瓶中加热至85℃(加热过程耗时约1.5小时)。将2-氯-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(175克，1当量)以小份添加于反应混合物中。整个添加过程耗时约30分钟。然后将混合物于85℃下搅拌30分钟且LCMS证实反应完成。冷却至室温后，将混合物转移至4升具有2升冰的烧瓶中。将反应烧瓶用少量丙酮(30毫升)洗涤且也转移至4升烧瓶中的DMF/冰混合物中。有大量浅褐色固体沉淀出。冰完全融化后，将混合物过滤。将所收集固体用水(1升)洗涤，掺合，且然后用水(1升)洗涤，以除去一些残余DMF。所收集固体含有大量水，故将其溶于CH₂Cl₂(4升)中并将混合物转移至5升分液漏斗中。分离出底部CH₂Cl₂层并将顶部水层用CH₂Cl₂(2×100毫升)洗涤。将合并的CH₂Cl₂层干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发，获得浅褐色固体1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲酰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(236.4克，97％)，其未经纯化即使用。

步骤5：1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮

于装配有磁力搅拌棒及氮气入口的5升圆底烧瓶中将1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲酰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(300克，723毫摩尔，1当量)、三聚乙二醛二水合物(60.6克，0.4当量)、及乙酸铵(222.9克，4当量)悬浮于THF(720毫升)与MeOH(720毫升)的混合物中。添加乙酸(84毫升，2当量)并将混合物于45℃油浴中加热(加热时固体溶解)。12小时后，LC/MS分析显示醛起始材料完全消耗掉且形成期望产物(LC/MSm/z(M+H)⁺452.1)。藉由旋转蒸发去除MeOH/THF。将残余物溶于10％于CH₂Cl₂中的MeOH(约1.5升)中并将混合物与碳酸钾水溶液(约210克碳酸钾于约1.5升水中，水溶液pH＝8-9)一起剧烈晃动。将各层分离，且水层用10％于CH₂Cl₂中的MeOH(2x100毫升)萃取。将合并的有机层浓缩，获得褐色油状固体。将粗产物悬浮于10％于EtOAc中的MeOH(约1升)中。添加无水Na₂SO₄(约60克)及硅胶(约100克)并利用加热枪温和地加热浆液以溶解粗产物。将浆液转移至2升含硅胶(约100克，用10％于EtOAc中的MeOH预平衡)的多孔玻璃过滤漏斗，并将产物藉助硅胶塞利用10％于EtOAc中的MeOH(约6升)、1％Et₃N、10％于EtOAc中的MeOH(约10升)洗脱。(注意：在硅胶的存在下产物的不完全溶解和/或产物的沉淀使过滤变得复杂)。藉由旋转蒸发去除溶剂。将残余物用MeCN(1×300毫升)研磨并干燥(旋转蒸发，随后在高真空中)，获得灰白色固体1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(190克，58％，LC/MS纯度＞98％)。

步骤7：2-(3-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮盐酸盐

向带有磁力搅拌器的2升烧瓶中装填起始材料(5.1克，11.28毫摩尔)及EtOAc(900毫升)。将所得悬浮液加热以形成澄清溶液并在适度搅拌下冷却至室温。于室温下在5分钟内将于Et₂O中的HCl(2M，6.2毫升，12.42毫摩尔)逐滴添加于所得溶液中。添加之后，将所得悬浮液于室温下再搅拌1小时。藉由过滤收集固体并用Et₂O(150毫升×2)洗涤并在真空中干燥，获得5.4克灰白色粉末。向带有磁力搅拌器的250毫升烧瓶中装填以上所获得粉末(5.4克)、丙酮(100毫升)及去离子水(16毫升)。将所得悬浮液加热以形成澄清溶液并搅拌至冷却。当溶液变得浑浊(出现晶种)时，在20分钟内将丙酮(540毫升)缓慢添加于悬浮液中。将所得悬浮液加热至50℃并搅拌2小时。趁热过滤，用热丙酮(50毫升×2)洗涤并在真空中干燥，获得3.3克(60％)灰白色固体产物：m.p.164-165℃。在偏光显微镜下晶体呈现为棱晶。

实施例19

步骤1：1-{2-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲腈的合成

向2000毫升烧瓶中装填1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酮(参见美国申请案序列第11/474,132号，作为US 20070010524号公布，40克，78.1毫摩尔)、dppf(3.86克，6.96毫摩尔)、Zn(CN)₂(9.6克，81.6毫摩尔)、DMF(360毫升)和H₂O(20毫升)。将所得悬浮液使用N₂脱气5分钟，随后添加Pd₂(dba)₃(4.24克，4.64毫摩尔)。将反应混合物于N₂下于90℃下加热2小时(藉由TLC及LC-MS监测)。冷却至室温后，用EtOAc(1500毫升)稀释，过滤以去除沉淀物并用H₂O(1000×2毫升)、饱和EDTA.4Na(800毫升×2)、盐水洗涤并经Na₂SO₄干燥。蒸发掉溶剂后，添加醚(150毫升)并搅拌2小时。将所得固体过滤，获得浅黄色粉末状期望产物30克(93％)。自回流CH₃CN(160毫升)中重结晶，获得26克(80％)浅黄色晶体：mp 183-185℃；R_t＝2.38分钟；MS(ES)M+H预计值411.1，试验值411.1。

步骤2：1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-(4，5-二氢-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酮的合成

向250毫升烧瓶中装填1-(2-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-3-甲腈(15.3克，37.2毫摩尔)、EtOH(40毫升，约1M)。在冰浴及搅拌下，添加AcOH(6.75毫升，112毫摩尔)，随后添加乙二胺(25毫升，372毫摩尔)。将所得混合物于120℃下(浴槽)在N₂下加热(观察到混合物开始回流)1.5小时。TLC及LC-MS显示起始材料消失且形成咪唑啉。冷却至室温后，将混合物用DCM(700毫升)稀释并用H₂O(350毫升)洗涤。将H₂O层利用DCM(150毫升)反萃取，且合并的有机层用盐水(350毫升)洗涤并经MgSO₄干燥。在减压下蒸发溶剂后，将残余物悬浮于热EtOAc(80毫升)中。冷却至室温后，藉由过滤收集固体并用EtOAc(30毫升)洗涤，获得白色粉末状标题化合物(16克，95％)，其直接用于下一步骤：mp 133-135℃；R_t＝1.369分钟。MS(ES)M+H预计值454.2，试验值454.4。

步骤3：2-(3-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮

将以上咪唑啉(12.3克，27.1毫摩尔)与无水DMSO(108毫升，约0.25M)一起装填于500毫升烧瓶中。在搅拌下逐份添加DMP(17.2克，40.6毫摩尔)。将所得混合物于45℃下在N₂下搅拌2小时(藉由TLC及LC-MS监测)。冷却至室温后，反应用饱和Na₂S₂O₃(100毫升)(冰浴)、随后3N NaOH(100毫升)(pH12至13)及H₂O(300毫升)中止并用DCM(600毫升+300毫升)萃取。将合并的有机层用饱和NaHCO₃(300毫升)、盐水(300毫升)洗涤并干燥(MgSO₄，120克)。蒸发掉有机溶剂后，将残余黄色固体(约11克)溶于热CH₃CN(20毫升)中。冷却至室温后，藉由过滤收集所得固体，获得6.7克(55％)浅褐色晶体状标题化合物：mp 149-152℃；R_t＝1.309分钟。MS(ES)M+H预计值452.2，试验值452.4。将母液浓缩并获得额外0.6克(总分离产率为60％)。

实施例20

以下实施例阐释本发明化合物与先前阐述的类似化合物(美国公布案第2007/0010524A1号)相比具有意想不到地优良药物代谢动力学性质。

出于比较目的，表2A中呈现本发明化合物(即，化合物B，亦参见表2B中的1.016)及两种美国公布案第2007/0010524A1号中所述化合物(即，化合物A和C)的药物代谢动力学特征。如本文所示，化合物B具有优良的药物代谢动力学性质。更具体而言，本发明化合物B由于其在口服吸收(如藉由％口服生物利用度所测量)；Cmax、及AUC值方面与结构类似的化合物A和C相比展示实质增加而更有利。

大鼠PK方案：

在药物代谢动力学研究中，将各化合物给四只未曾用于试验的雄性斯普拉-道来氏(Sprague-Dawley)大鼠服用。两只动物以1毫克/公斤静脉内(i.v.)接受单次剂量的化合物(调配于31.6％丙二醇/31.6％N，N-二甲基乙酰胺/36.8％EtOH中)，两只动物以50毫克/公斤接受该化合物(调配于1％于水中的HPMC中)的口服给药(p.o.)。各自给药后在预定时间点(最多24小时)收集血样并使用LC-MS/MS方法分析化合物的相应血浆浓度。构造血浆浓度-时间曲线并使用非房室分析推导出相应药物代谢动力学参数。表中所展示的Cmax(最大血浆浓度)及AUC(曲线下面积)值是基于口服给药后的血浆浓度-时间曲线来计算。F(口服生物利用度)值是口服给药后的曲线下面积(标准化成1毫克/公斤)与iv给药后的曲线下面积的比率。

表2A^＊

^*在SD大鼠中经口以50毫克/公斤服用化合物。

实施例21

此实施例阐释与本发明感兴趣的化合物相关的生物活性的评价。

材料及方法

A.细胞

1.表达CCR1的细胞

a)THP-1细胞

THP-1细胞是自ATCC获得(TIB-202)并作为于RPMI-1640培养基中的悬浮液培养，该培养基补充有2mM L-谷氨酰胺、1.5克/升碳酸氢钠、4.5克/升葡萄糖、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠、0.05％2-巯基乙醇及10％FBS。使细胞在5％CO₂/95％空气、100％湿度于37℃下生长并每周以1∶5继代培养两次(细胞以2x10⁵至2x10⁶个细胞/毫升的密度范围培养)并以1x10⁶个细胞/毫升收获。THP-1细胞表达CCR1且可用于CCR1结合及功能测定中。

2.趋化性测定

趋化性测定是使用5微米孔聚碳酸酯、聚乙烯基吡咯烷酮涂布的过滤器在96孔趋化性室(马里兰州盖瑟斯堡的神经探针公司(Neuroprobe；Gaithersburg，MD))中使用趋化性缓冲液(Hank的平衡盐溶液(HBSS)及1％FBS)来进行。使用CCR1趋化因子配体(即，MIP-1α，CCL15/白细胞诱素；明尼苏达州明尼阿波利斯的RD系统公司(R&D Systems；Minneapolis，MN))来评价化合物调节的对CCR1介导的迁移的抑制。其它趋化因子(即，SDF-1α；明尼苏达州明尼阿波利斯的RD系统公司)用作特异性对照。下部室装载有29微升趋化因子(即，0.1nM CCL15/白细胞诱素)及不同量的化合物；顶部室含有20微升100,000个THP-1或单核细胞。将所述室于37℃下培育1-2小时，且在下部室中细胞数量是藉由在5个高倍视野中直接对每孔进行细胞计数或藉由CyQuant测定(分子探针公司(Molecular Probes))(一种测量核酸含量的荧光染料方法)及显微镜观察来确定数量。

B.CCR1抑制剂的鉴定

趋化因子的一种主要功能是其介导表达趋化因子受体的细胞(例如，白细胞)迁移的能力。为证实感兴趣化合物不仅抑制CCR1特异性结合及信号转导(至少如藉由钙动员测定所确定)，而且抑制CCR1介导的迁移，采用趋化性测定。使用类似于单核细胞的THP-1骨髓单核细胞性白血病细胞、以及新分离的单核细胞作为受CCR1趋化因子配体(即，MIP-1α、CCL15/白细胞诱素)化学引诱的靶。将细胞放置于微孔迁移室的顶部隔室中，同时MIP-1α(或其它有效CCR1趋化因子配体)及浓度渐增的感兴趣化合物装载于下部室中。在缺乏抑制剂的情况下，细胞将响应趋化因子激动剂迁移至下部室中；若化合物抑制CCR1功能，则大部分细胞将留在上部室中。为确定感兴趣化合物对CCR1的亲和力以及证实其抑制CCR1介导的细胞迁移的能力，在此趋化性测定中在1x10^-10至1x10^-4M的化合物浓度范围内滴定抑制活性。在此测定中，改变化合物的量；同时细胞数量及趋化因子激动剂浓度保持恒定。将趋化性室于37℃下培育1-2小时后，藉由利用CyQuant测定(分子探针公司)(一种测量核酸含量的荧光染料方法)标记且藉由利用Spectrafluor Plus(替康公司(Tecan))测量来确定下部室中响应细胞的数量。使用加利福尼亚州圣迭戈的GP公司(GraphPad，Inc，San Diego，Ca)的计算机程序Prism计算IC₅₀值。IC₅₀值是使响应CCR1激动剂的细胞数量受到50％抑制所需的化合物浓度。

1.体内效能

a)破坏性关节炎症的兔模型

兔LPS研究是基本上如Podolin等人在J.Immunol.169(11)：6435-6444(2002)中所述进行。利用LPS(10纳克)对雌性新西兰兔(约2公斤)的两个膝进行关节内处理。以5ml/kg的剂量体积口服给予两次(关节内注射LPS前2小时和关节内注射LPS后4小时)感兴趣的化合物，例如1.016(配制成1％的甲基纤维素溶液)或运载体(1％的甲基纤维素溶液)。LPS注射16个小时之后，灌洗膝并进行细胞计数。藉由募集到膝关节发炎的滑液的炎性细胞数目减少来确定治疗的有益作用。用感兴趣的化合物治疗导致募集的炎性细胞明显减少。

b)感兴趣化合物在胶原诱发关节炎的大鼠模型中的评价

对发展17天的II型胶原关节炎进行研究以评价感兴趣化合物对关节炎诱发临床踝肿胀的作用。大鼠胶原型关节炎是已广泛用于许多抗关节炎剂的临床前测试的多发性关节炎的试验模型(参见Trentham等人，J.Exp.Med.146(3)：857-868(1977)、Bendele等人，Toxicologic Pathol.27：134-142(1999)、Bendele等人，Arthritis Rheum.42：498-506(1999))。此模型的特点是可靠发作及强健发展、容易地可测量多关节炎症、与血管翳形成及轻微至中等骨再吸收相关的显著软骨破坏及骨膜骨增殖。

在此17天研究的第0天及第6天使用异氟烷麻醉雌性Lewis大鼠(约0.2公斤)并在尾根部及背部两个位点处注射含2毫克/毫升牛II型胶原的弗氏不完全佐剂(Freund′s Incomplete Adjuvant)。感兴趣化合物是以皮下方式自第0天直至第17天以有效剂量每天服用。获取踝关节直径的卡尺测量值，并将减少的关节肿胀作为效能的量度。

在表2B(以下)中，提供本文所述代表性化合物的结构及活性。上述趋化性测定的活性如下提供：+，IC₅₀＞100nM；++，IC₅₀≤100nM。

表2B