CN101679949A - 通过dectin-1激活人抗原呈递细胞的治疗性应用 - Google Patents

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Abstract

本发明包括用于使免疫细胞上的Dectin－1与能够活化所述免疫细胞的抗Dectin－1特异性抗体或其片段结合的组合物和方法。

Description

通过DECTIN-1激活人抗原呈递细胞的治疗性应用
发明的技术领域
一般而言，本发明涉及免疫细胞活化领域，更具体而言，涉及用于通过DECTIN-1激活免疫细胞的组合物和方法。
发明背景
不限制本发明的范围，描述与树突细胞活化有关的发明背景。
通过提供可溶的胞间信号并随后识别病原体，树突细胞在控制先天和后天免疫界面方面具有重要作用。DC的这些功能很大程度上依赖于特定的表面受体“模式识别受体”(PRR)的表达，所述受体中最有代表性的是toll样受体(TLR)和C型外源凝集素或凝集素样受体(LLR)(1-3)。
在当前模式中，TLR的主要功能是使树突细胞产生白细胞介素12(IL-12)和其他炎性细胞因子，以起始免疫应答。C-型LLR作为巨噬细胞和DC中有力的抗原捕获和摄取机制的组分起作用(1)。然而与TLR相比，LLR可具有更广泛的生物学功能，包括细胞迁移(4)和胞间相互作用(5)。LLR的这些多重功能可能是由于不像TLR，LLR能识别自身和非自身的事实。然而，LLR的复杂性，包括免疫细胞中表达的LLR过多，是妨碍了解个体LLR的详细功能的主要障碍之一。此外，大多数这些受体的天然配体仍未被鉴定。尽管如此，最近的研究证据显示，LLR与TLR一起可在微生物感染中有助于活化免疫细胞(6-14)。与其他LLR相比，已知Dectin-1具有递送信号以活化细胞表达Dectin-1的ITAM基序。然而，大多数研究都在小鼠模型中进行，在人抗原呈递细胞，包括DC、单核细胞和B细胞上表达的Dectin-1的生物学功能并没有很好的阐明。这一点非常重要，因为小鼠和人之间的许多LLR并没有严格的一致性。
发明概述
本发明包括制备和使用疫苗的组合物和方法，所述疫苗特异性地靶向(递送)抗原至抗原呈递细胞，以引发针对该抗原的有效且广泛的免疫应答。目的主要是引发针对衍生抗原的试剂(agent)(病原体或癌症)的保护性或治疗性免疫应答。此外，本发明包括这样的试剂，其直接或与其他试剂一起通过与称作Dectin-1的表达在抗原呈递细胞上的受体特异性的结合(engagement)而具有治疗作用。
本发明的发明人证明人细胞中的Dectin-1的表达局限于抗原呈递细胞，包括DC、单核细胞和B细胞。已知在小鼠细胞(巨噬细胞)中表达的Dectin-1受TLR4配体和IL-10下调。这里我们证明仅TLR4配体能下调人DC上的Dectin-1的表达，而IL-10导致Dectin-1的表达轻微增加。更有趣的是，人DC上Dectin-1的表达与TLR4的协同比与TLR2有效的多，Dectin-1与TLR4之间的协同作用导致细胞因子和趋化因子，尤其是IL-12产生显著增加，这之前在小鼠模型中未观察到。人扁桃体B细胞可分成2组：CD19+Dectin-1+和CD19+Dectin-。这些发现可用于基于抗Dectin-1剂的治疗性和预防性试剂中。
因此，本文发现通过人Dectin-1的信号传导单独或与其他细胞信号一起在细胞(包括DC)活化中是独特且有功能的。Dectin-1介导的细胞活化通过特定的抗Dectin-1单抗诱导，因此所述抗人Dectin-1单抗在开发针对疾病的试剂中是有用的。
本发明包括增加Dectin-1表达性抗原呈递细胞抗原呈递效力的组合物和方法，通过使所述抗原呈递细胞与能够活化该抗原呈递细胞的抗Dectin-1特异性抗体或其片段接触来进行，其中所述抗原呈递细胞被活化。抗原呈递细胞的例子包括树突细胞、外周血单核细胞、单核细胞、B细胞、髓样树突细胞及其组合。所述抗原呈递细胞可在体外与GM-CSF和IL-4、干扰素α、抗原及其组合一起培养。通过接触GM-CSF和IL-4和Dectin-1-特异性抗体或其片段活化所述抗原呈递细胞时，所述抗原呈递细胞上CD86、CD80和HLA-DR的表面表达增加。当用干扰素α和Dectin-1-特异性抗体或其片段活化抗原呈递细胞时，所述细胞增加CD86、CD83、CD80和HLA-DR的表面表达。
本发明的另一方法包括接触树突细胞，所述树突细胞已与GM-CSF和IL-4或干扰素接触以活化该树突细胞，其中活化的树突细胞增加CD86、CD80和HLA-DR的表面表达。对于已与抗Dectin-1抗体或其片段和GM-CSF和IL-4或干扰素接触以活化该树突细胞的树突细胞，活化的树突细胞增加IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p40、IP-10和MIP-1a及其组合的分泌。活化树突细胞的另一方法包括与GM-CSF和IL-4或干扰素和Dectin-1特异性抗体或其片段接触增加与通过CD40信号传导有关的活化。已发现与GM-CSF和IL-4或干扰素和Dectin-1特异性抗体或其片段接触的树突细胞增加了树突细胞对B细胞和T细胞的共刺激活性。
另一方法包括使抗原呈递细胞与抗Dectin-1抗体接触，通过TLR4受体活化共激活抗原呈递细胞，其中所述细胞增加细胞因子和趋化因子产生。通过TLR4受体活化共激活抗原呈递细胞，其中所述细胞增加IL-10、IL-1b、TNFα、IL-12p40及其组合的分泌。
权利要求1的方法，还包括共激活抗原呈递细胞的步骤，激活使用TLR4配体、抗TLR4抗体或其片段、抗TLR4-抗Dectin-1杂交抗体或其片段、抗TLR4-抗Dectin-1配体结合物中的至少一种通过TLR4受体进行。Dectin-1特异性抗体或其片段可以是选自如下克隆中的一个或多个：15E2.5、11B6.4、15F4.7、14D6.3和9H7.6及其组合。树突细胞可通过Dectin-1受体使用Dectin-1特异性抗体或其片段活化，以激活单核细胞、树突细胞、外周血单核细胞、B细胞及其组合。Dectin-1特异性抗体或其片段可与Cohesin/Dockerin对的一半结合。当所述Dectin-1特异性抗体或其片段与Cohesin/Dockerin对的一半结合时，所述对的另一半可与一种或多种抗原、细胞因子结合，所述细胞因子选自白细胞介素，转化生长因子(TGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，表皮生长因子(EGF)，结缔组织活性肽(CTAP)，成骨因子，以及这些生长因子的生物活性类似物、片段和衍生物，B/T细胞分化因子，B/T细胞生长因子，促有丝分裂细胞因子，趋化细胞因子类和趋化因子，集落刺激因子，血管生成因子，IFN-α，IFN-β，IFN-γ，IL1，IL2，IL3，IL4，IL5，IL6，IL7，IL8，IL9，IL10，IL11，IL12，IL13，IL14，IL15，IL16，IL17，IL18等，瘦素，肌肉生长抑制素，巨噬细胞刺激蛋白，血小板衍生生长因子，TNF-α，TNF-β，NGF，CD40L，CD137L/4-IBBL，人淋巴毒素-β，G-CSF，M-CSF，GM-CSF，PDGF，IL-1α，IL1-β，IP-10，PF4，GRO，9E3，促红细胞生成素，内皮抑素，血管抑素，VEGF，包括β转化生长因子(例如TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)在内的转化生长因子(TGF)超基因家族；骨形态发生蛋白(例如BMP-1、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9)；肝素结合生长因子(成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子(IGF))；抑制素(例如抑制素A、抑制素B)；生长分化因子(例如GDF-1)；以及活化素(例如活化素A、活化素B、活化素AB)。
本发明包括表达Dectin-1特异性抗体或其片段的杂交瘤和从其分离的抗体，其中所述Dectin-1特异性抗体或其片段激活抗原呈递细胞以表达新的表面标记物、分泌一种或多种细胞因子或表达新的表面标记物和分泌一种或多种细胞因子两者。杂交瘤可选自克隆PAB1、PAB4、PAB5、PAB8、PAB10及其组合。
用于增强B细胞免疫应答的方法，所述方法包括在抗原和活化剂TLR9存在下，通过Dectin-1特异性抗体或其片段触发树突细胞上的Dectin-1受体，其中与Dectin-1/TLR9活化的树突细胞接触的B细胞增加抗体产生、分泌细胞因子、增加B细胞活化表面标记物表达及其组合。使用这些树突细胞活化的B细胞分泌IL-8、MIP-1a、IL-6、TNFa及其组合。B细胞的例子包括浆细胞，其同样可表达Dectin-1和/或增加IgM的产生。
本发明还包括用于增强B细胞免疫应答的方法，所述方法包括用Dectin-1特异性抗体或其片段触发B细胞上的Dectin-1受体，其中所述B细胞增加抗体产生。使用本发明活化的B细胞增加分泌性IL-8、MIP-1α、IL-6、TNFα及其组合的产生和/或增加IgG、IgM、IgA及其组合的产生。
本发明还包括用于增强T细胞活化的方法，通过用Dectin-1特异性抗体或其片段和TLR4受体触发树突细胞上的Dectin-1受体，并使T细胞与Dectin-1/TLR4活化的树突细胞接触，其中T细胞活化被增强。用于活化的树突细胞可与GM-CSF和IL-4、干扰素α、抗原及其组合接触。Dectin-1特异性抗体或其片段增加T细胞的IL10、IL-15及其组合的分泌。通过所述树突细胞活化的T细胞可增加4-1BBL的表面表达和/或增殖。
本发明还包括由哺乳动物细胞分泌的抗Dectin-1免疫球蛋白或其部分和与所述免疫球蛋白结合的抗原，其中所述免疫球蛋白将抗原靶向至抗原呈递细胞。抗原特异性结构域包括全长抗体、抗体可变区结构域、Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、和Fv片段，以及Fabc片段和/或具有部分Fc结构域的Fab片段。
本发明的另一个实施方案包括疫苗，其包含用Dectin-1特异性抗体或其片段活化的树突细胞。本发明还包括B细胞、T细胞或其他免疫细胞，它们通过Dectin-1特异性抗体或其片段直接活化和/或通过抗原呈递细胞例如树突细胞活化，所述树突细胞之前被Dectin-1特异性抗体或其片段单独活化或与其他免疫细胞组合一起活化。例如，组合治疗可包括已用Dectin-1特异性抗体或其片段活化的抗原可负载的抗原呈递细胞(例如树突细胞)、B细胞和/或T细胞一起形成疫苗。
本发明还包括单独或与共激活剂一起与免疫细胞上的Dectin-1受体结合(engage)，组合活化抗原呈递细胞的活性剂用于治疗性应用的用途；免疫细胞上的Dectin-1结合剂用于制备疫苗的用途，Dectin-1结合剂与或不与激活剂一起与一个或多个抗原连接；抗Dectin-1剂作为免疫细胞共激活剂用于增强通过免疫细胞上表达的除Dectin-1外的细胞表面受体引起的免疫应答的用途；能够通过Dectin-1受体结合并活化免疫细胞的抗Dectin-1抗体V区序列的用途和/或与一种或多种毒性剂连接的Dectin-1结合剂用于在已知或怀疑由免疫细胞的通过Dectin-1的不适当激活导致的疾病的情况下或在表达Dectin-1的病理(pathogenic)细胞或组织的情况下的治疗性目的的用途。
本发明的另一个实施方案包括模块式rAb载体，其包含Dectin-1特异性抗体结合结构域，该结合结构域与一个或多个包含cohesin-dockerin结合对的一半的抗原载体结构域连接。抗原特异性结合结构域可以是抗体的至少一部分和/或与与cohesin-dockerin结合对的一半构成融合蛋白的抗体的至少一部分。所述rAb可以是与抗原结合的cohesin-dockerin结合对的互补性一半(complementary half)，该抗原与模块式rAb载体形成复合物，或者所述rAb可以是与抗原构成融合蛋白的cohesin-dockerin结合对的互补性一半。该抗原特异性结构域可以是全长抗体、抗体可变区结构域、Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、和Fv片段，以及Fabc片段和/或具有部分Fc结构域的Fab片段。
附图的简要说明
为了更完整的理解本发明的特征和优点，参考发明详述以及附图，在附图中：
图1A和1B显示正常供体PBMC上的Dectin-1的表达水平；
图2显示体外培养的IL-4DC结果，该IL-4DC在CD40L(50ng/ml)、TLR2配体(100ng/ml)、TLR3配体(100nM)、TLR4配体(20ng/ml)、IL-10(20ng/ml)、IL-15(100ng/ml)、IFNα(500U/ml)和IL-4(50ng/ml)存在下培养24小时；
图3显示抗Dectin-1单抗活化DC；
图4A和4B显示通过Dectin-1的信号传导可导致IL-4DC和IFNDC的活化。抗Dectin-1单抗活化DC。IFNDC(图4A)和IL4-DC(图4B)用抗Dectin-1刺激24小时，随后细胞用抗CD86、80、40、83、CCR7和HLA-DR染色；
图5显示Dectin-1和TLR协同活化DC。在包被有抗Dectin-1的96孔板中，在存在或不存在可溶性TLR4配体(1.5ng/ml)或TLR2配体(30ng/ml)的情况下培养IL-4DC细胞(2x10e5/200ul/孔)18小时。还检测了对照单抗。18小时后，通过Luminex分析培养物上清液测定细胞因子和趋化因子；
图6A和6B显示负载有10uM Mart-1肽且用抗Dectin-1单抗、TLR4配体或抗Dectin-1单抗和TLR4配体活化18小时的IFNDC(5000个DC/孔/200uL)的结果(图6A)。与纯化的自体同源CD8T细胞(2x10e5个细胞/孔/200ul)在20U/ml IL-2和10ng/ml IL-7存在下共培养10天。细胞用抗CD8和Mart-1-HLA-A2四聚体染色。图6B显示负载有10uM Mart-1肽且用抗Dectin-1单抗、TLR2配体或抗Dectin-1单抗和TLR2配体活化18小时的IFNDC(5000个DC/孔/200uL)的结果。与纯化的自体同源CD8T细胞(2x105个细胞/孔/200uL)在20U/mlIL-2和10ng/ml IL-7存在下共培养10天。细胞用抗CD8和Mart-1-HLA-A2四聚体染色；
图7显示负载有10uM Mart-1肽且用抗Dectin-1单抗、TLR4配体或抗Dectin-1单抗和TLR4配体、酵母聚糖活化18小时的IFNDC(5000个DC/孔/200uL)的结果(图6A)。向用抗Dectin-1单抗和TLR4配体以及酵母聚糖刺激的DC中添加抗IL-10中和抗体(5ug/ml)。还检测了对照单抗，但未观察到显著差异(数据未显示)。与纯化的自体同源CD8T细胞(2x10e5个细胞/孔/200uL)在20U/ml IL-2和10ng/ml IL-7存在下共培养10天。细胞用抗CD8和Mart-1-HLA-A2四聚体染色；
图8显示用抗Dectin-1单抗活化的DC表达的IL-15和4-1BBL水平升高。将IFNDC(2x105/200ul/孔)在包被有抗Dectin-1或对照Ig的96孔板中培养18小时。18小时后，细胞用抗IL-15和抗4-1BBL染色；
图9A和9B显示在DC上表达的Dectin-1导致增强的体液免疫应答。将6天的IL-4DC，5x103/孔，在包被有抗Dectin-1或对照单抗的96孔板中培养16到18小时，随后与用CFSE染色的2x10e4自体同源CD19+B细胞在20U/ml IL-2和50ng/ml CD40L(图9A)或50nM CpG(图9B)存在下共培养。在第6天，细胞用荧光标记的抗CD38抗体染色。在第13天通过夹心ELISA分析培养物上清液的总免疫球蛋白；
图10A和10B显示B细胞上表达的Dectin-1促进B细胞的活化和免疫球蛋白产生。图10A：将纯化的CD19+B细胞(20000个细胞/孔/200ul)在包被有单抗，抗Dectin-1或对照Ig，的平板中，在50nM CpG和20U/ml IL-2存在下培养6天。细胞用抗CD38染色，并通过CFSE稀释测定细胞增殖。在培养的第13天，通过ELISA分析培养物上清液，测定产生的总免疫球蛋白；
图11A至11C显示DC上表达的Dectin-1导致增强的细胞免疫应答。图11A：将5x103IFNDC在包被有抗Dectin-1或对照单抗的平板中，在100nM重组Flu M1蛋白存在下培养16-18小时，随后与纯化的自体同源CD8T细胞在20U/mlIL-2和10ng/mlIL-7存在下共培养7天。细胞用抗CD8和用于HLA-A2的Flu M1肽表位四聚体染色。图11B和图11C：向IFNDC负载10uM Mart-1肽(图11B)或100nM Coh-Mart-1重组蛋白，随后用抗Dectin-1或对照抗体刺激，如图11A所示。培养10天后，用抗CD8和四聚体(HLA-A2-mart-1肽)染色细胞。每一列代表单个供体的数据。本研究中使用的所有细胞均来自HLA-A201阳性正常供体；
图12显示可溶形式的抗Dectin-1单抗活化DC以增强Mart-1特异性CD8T细胞致敏(prime)。将5x103的IFNDC在0.5ug/ml抗Dectin-1、抗CD40或对照单抗存在下培养16小时。向培养物中加入纯化的自体同源T细胞(2x105/孔)前，加入20uM Mart-1肽。10天后，细胞用抗CD8和四聚体(HLA-A2-mart-1肽)染色。本研究中使用的所有细胞均来自HLA-A201阳性正常供体；
图13显示获得来自正常供体的扁桃腺，使用无DNAse III型胶原酶制备细胞悬液。细胞用含有5％的FCS的PBS强力洗涤，随后用抗CD3或抗CD19与抗Dectin-1单抗染色。使用同型配对的对照单抗；
图14A和14B显示制备了来自正常供体的人皮肤(图14A)和淋巴结(图14B)的组织切片，用DAPI(蓝色)和本研究中制备的抗Dectin-1(红色)染色；
图15显示来自非人灵长类(食蟹猴)的PBMC用抗Dectin-1单抗和细胞表面标记物的抗体染色；
图16显示典型rAb.抗原融合蛋白的还原型SDS-PAGE分析，所述蛋白具有许多上述显示或提及的抗原。
发明详述
尽管以下详细讨论本发明的不同实施方案的制备及使用，但是应该理解本发明提供了许多可以在多种特定情况下具体实施的可应用的发明构思。本文讨论的特定实施方案仅仅是用于例示制备和使用本发明的特定方法，而不限定本发明的范围。
为便于理解本发明，许多术语定义如下。本文定义的术语具有与本发明相关的领域中的普通技术人员通常理解的含义。术语诸如″一个″、″一种″、″该″等不意欲仅仅指单数实体，而是包括其中特定实例可以用于例证的总的类别。本文术语用于描述本发明的特定实施方案，但是它们的用法并不限制本发明，除非在权利要求中列出。
本发明还包括重组人源化单抗(针对所述特异性人树突细胞受体Dectin-1)，该单抗通过抗体重链与已知抗原或怀疑编码保护性抗原的抗原融合。这些包括例如用于针对多种物质-流感病毒H5N1血凝素；来自蓖麻毒素的减弱毒素的HIV gag、炭疽毒素和葡萄球菌B肠毒素；来自黑色素瘤抗原的抗原肽“串”等的疫苗接种。本发明将发现在风险或感染人群的预防性或治疗性疫苗接种中的用途。本发明对于针对许多疾病和癌症的人用和动物用疫苗接种方面具有广泛的应用。
如本文所用，术语″模块式rAb载体″用于描述重组抗体系统，该系统被工程化以提供不同的抗原、活化蛋白质或其它抗体以受控的模块式方式加入单一重组单克隆抗体(mAb)，在本案中，抗Dectin-1单克隆抗体。rAb可以是使用标准杂交瘤技术、重组抗体展示、人源化单克隆抗体等制备的单克隆抗体。模块式rAb载体可用于，例如，(通过一种针对例如人树突细胞受体的内在化受体的原发重组抗体)靶向多个抗原和/或抗原与活化的细胞因子至树突细胞(DC)。模块式rAb载体还可以用于以受控且确定的方式首尾相连地连接两种不同的重组mAb。
″模块式rAb载体″的抗原结合部分可以是一种或多种可变结构域、一种或多种可变结构域与第一恒定结构域，Fab片段、Fab′片段、F(ab)2片段、和Fv片段，以及Fabc片段和/或具有部分Fc结构域的Fab片段，同源的模块式结合部分添加到氨基酸序列和/或与其结合。模块式rAb载体中使用的抗体可以是任何同型或类别、亚类或者来自任何来源(动物和/或重组体)。
在一个非限制性实施例中，模块式rAb载体被工程化为具有一种或多种模块式cohesin-dockerin蛋白质结构域，用于制备在工程化的重组mAb情况下的特异且明确的蛋白质复合物。mAb是包括一种或多种来自mAb的抗原结合结构域的模块式cohesin-dockerin蛋白质结构域羧基的融合蛋白的一部分。cohesin-dockerin蛋白质结构域甚至可以在翻译后，例如使用化学交联剂和/或二硫键连接。
本文使用的术语″抗原″指的是可以在该抗原的接受者中启动体液和/或细胞免疫应答的分子。抗原可以用于本发明的两种不同情况中：作为抗体或rAb的其它抗原识别结构域的靶标或者作为分子，该分子通过模块式rAb载体的dockerin/cohesin-分子补体的一部分的rAb运送到和/或进入细胞或靶标。抗原通常是引起疾病的试剂，对于该疾病，疫苗接种可能是有益的治疗。当抗原被呈递在MHC上时，该肽通常是约8到约25个氨基酸。抗原包括任何类型的生物分子，包括，例如，简单的中间代谢物、糖、脂质和激素以及大分子诸如复合碳水化合物、磷脂、核酸和蛋白质。抗原的常见种类包括但不限于病毒抗原，细菌抗原，真菌抗原，原生动物及其他寄生虫抗原，肿瘤抗原，自身免疫性疾病、过敏症和移植排斥中涉及的抗原，及其他各种抗原。
模块式rAb载体能够运载许多活化剂，例如抗生素、抗感染药、抗病毒药、抗肿瘤药、解热药、镇痛药、抗炎药、骨质疏松症的治疗剂、酶、细胞因子、抗凝血药、多糖、胶原、细胞及两种或更多前述活化剂的组合。使用本发明递送的抗生素的实例无限制地包括四环素、氨基糖苷类、青霉素、头孢菌素、磺胺类药物、氯霉素琥珀酸钠、红霉素、万古霉素、林可霉素、克林霉素、制霉菌素、两性霉素B、金刚烷胺、碘苷、对氨基水杨酸、异烟肼、利福平、放线菌素D、光辉霉素、道诺霉素、阿霉素、博来霉素、长春碱、长春新碱、甲基苄肼、咪唑甲酰胺等等。
使用本发明递送的抗肿瘤药的实例无限制地包括阿霉素、柔红菌素、紫杉醇、氨甲喋呤等等。解热药和镇痛药的实例包括阿司匹林、美林
Figure A20088001321900151
布洛芬
Figure A20088001321900152
萘普生、醋氨酚等等。
使用本发明递送的抗炎药的实例无限制地包括NSAIDS、阿司匹林、甾族化合物、地塞米松、氢化可的松、泼尼松龙、双氯芬酸钠等等。
使用本发明递送的治疗骨质疏松症的治疗剂和作用于骨和骨骼的其它因子的实例无限制地包括钙，阿仑膦酸盐，骨GLa肽，甲状旁腺激素及其活性片段，组蛋白H4相关骨形成和增殖肽及其突变体、衍生物和类似物。
使用本发明递送的酶和酶辅因子的实例无限制地包括胰酶(pancrease)、L-天冬酰胺酶、透明质酸酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、tPA、链激酶、尿激酶、胰酶制剂、胶原酶、胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原、血纤维蛋白溶酶原、链激酶、腺苷酸环化酶、过氧化物歧化酶(SOD)等等。
使用本发明递送的细胞因子的实例无限制地包括白细胞介素，转化生长因子(TGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，表皮生长因子(EGF)，结缔组织活化肽(CTAP)，成骨因子及这些生长因子的生物活性类似物、片段和衍生物。细胞因子可以是B/T细胞分化因子、B/T细胞生长因子、促有丝分裂细胞因子、趋化细胞因子、集落刺激因子、血管生成因子、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL11、IL12、IL13、IL14、IL15、IL16、IL17、IL18等、瘦素、肌肉生长抑制素、巨噬细胞刺激蛋白、血小板衍生生长因子、TNF-α、TNF-β、NGF、CD40L、CD137L/4-1BBL、人淋巴毒素-β、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、PDGF、IL-1α、IL1-β、IP-10、PF4、GRO、9E3、促红细胞生成素、内皮抑素、血管抑素、VEGF或其任何片段或组合。其它细胞因子包括转化生长因子(TGF)超基因家族成员，包括β转化生长因子(例如TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)；骨形态发生蛋白质(例如，BMP-1、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9)；肝素结合生长因子(例如成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子(IGF))；抑制素(例如，抑制素A、抑制素B)；生长分化因子(例如，GDF-1)；以及活化素(例如，活化素A、活化素B、活化素AB)。
使用本发明递送的生长因子的实例无限制地包括可以从天然或自然的来源诸如从哺乳动物细胞分离的，或可以合成地制备诸如通过重组DNA技术或通过多种化学方法制备的生长因子。此外，可以使用这些因子的类似物、片段或衍生物，只要它们显示天然分子的至少一些生物活性。例如，可以通过表达位点特异性突变或其它遗传工程技术改变的基因来制备类似物。
使用本发明递送的抗凝血药的实例无限制地包括华法林、肝素、水蛭素等等。使用本发明递送的作用于免疫系统的因子的实例无限制地包括控制炎症和恶性赘生物的因子以及攻击感染性微生物的因子，诸如趋化肽和缓激肽。
病毒抗原的实例包括但不限于，例如，逆转录病毒抗原，诸如来自人免疫缺陷病毒(HIV)的逆转录病毒抗原，诸如gag、pol和env基因的基因产物，Nef蛋白，逆转录酶及其他HIV元件；肝炎病毒抗原，诸如乙型肝炎病毒的S、M和L蛋白，乙型肝炎病毒和其它肝炎例如甲、乙和丙型肝炎病毒的pre-S抗原，病毒元件诸如丙型肝炎病毒RNA；流感病毒抗原，诸如血球凝集素和神经氨酸酶及其他流感病毒元件；麻疹病毒抗原，诸如麻疹病毒融合蛋白及其他麻疹病毒元件；风疹病毒抗原，诸如蛋白E1和E2及其他风疹病毒元件；轮状病毒抗原，诸如VP7sc及其他轮状病毒元件；巨细胞病毒抗原，诸如包膜糖蛋白B及其他巨细胞病毒抗原元件；呼吸道合胞体病毒抗原，诸如RSV融合蛋白、M2蛋白及其他呼吸道合胞体病毒抗原元件；单纯性疱疹病毒抗原，诸如立即早期蛋白质、糖蛋白D及其他单纯性疱疹病毒抗原元件；水痘带状疱疹病毒抗原，诸如gpI、gpII及其他水痘带状疱疹病毒抗原元件；日本脑炎病毒抗原，诸如蛋白E、M-E、M-E-NS1、NS1、NS1-NS2A、80％E及其他日本脑炎病毒抗原元件；狂犬病病毒抗原，诸如狂犬病糖蛋白、狂犬病核蛋白及其他狂犬病病毒抗原元件。关于病毒抗原的其他实例，参见Fundamental Virology，第二版，编著Fields，B.N.和Knipe，D.M.(Raven Press，New York，1991)。
可以使用本发明的rAb-DC/DC-抗原疫苗递送的抗原靶标包括编码抗原诸如病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原或寄生虫抗原的基因。病毒包括微小核糖核酸病毒、冠状病毒、披盖病毒、黄病毒、杆状病毒、副粘病毒、正粘病毒、布尼亚病毒、沙粒病毒、呼肠孤病毒、逆转录病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、疱疹病毒、痘病毒、嗜肝DNA病毒和海绵状病毒。其它病毒靶标包括流感、单纯疱疹病毒1和2、麻疹、登革热、天花、脊髓灰质炎或HIV。病原体包括锥虫、绦虫、蛔虫、蠕虫、疟疾。肿瘤标记物诸如胚胎抗原或前列腺特异性抗原可以以这个方法靶向。其它实例包括：HIV env蛋白和乙型肝炎表面抗原。根据本发明用于疫苗接种目的的载体的给予可能要求载体结合的抗原是足够非免疫原性的以使得转基因能够长期表达，对此可期望强烈的免疫应答。在一些情况下，个体的疫苗接种可仅是不经常地需要，诸如每年或每两年一次，并提供对传染物的长期免疫保护。本发明用于载体中并最终作为抗原的生物体、过敏原及核酸和氨基酸序列的特定实例可以在美国专利6,541,011中找到，该专利的相关部分引入本文作为参考，尤其是可以用于本发明的匹配生物体和特定序列的表格。
用于本文公开的rAb疫苗的细菌抗原包括但不限于，例如，细菌抗原，诸如百日咳毒素、丝状血球凝集素、百日咳杆菌粘附素、FIM2、FIM3、腺苷酸环化酶及其他百日咳细菌抗原元件；白喉细菌抗原，诸如白喉毒素或类毒素及其他白喉细菌抗原元件；破伤风细菌抗原，诸如破伤风毒素或类毒素及其他破伤风细菌抗原元件；链球菌细菌抗原，诸如M蛋白及其他链球菌细菌抗原元件；革兰氏阴性杆菌细菌抗原，诸如脂多糖及其他革兰氏阴性细菌抗原元件；结核分枝杆菌细菌抗原，诸如霉菌酸、热休克蛋白65(HSP65)、30kDa主要分泌性蛋白、抗原85A及其他分枝杆菌抗原元件；幽门螺杆菌细菌抗原元件；肺炎球菌细菌抗原，诸如肺炎球菌溶血素、肺炎球菌荚膜多糖及其他肺炎球菌细菌抗原元件；流感嗜血杆菌细菌抗原，诸如荚膜多糖及其他流感嗜血杆菌细菌抗原元件；炭疽细菌抗原，诸如炭疽保护性抗原及其他炭疽细菌抗原元件；立克次氏体细菌抗原，诸如rompA及其他立克次氏体细菌抗原元件。本文描述的细菌抗原还包括任何其它细菌、分枝杆菌、支原体、立克次体或衣原体抗原。部分或完整的病原体还可以是：流感嗜血杆菌；镰状疟原虫；脑膜炎奈瑟氏球菌；肺炎链球菌；淋病奈瑟氏菌；伤寒沙门氏菌血清型；志贺氏菌；霍乱弧菌；登革热；脑炎；日本脑炎；莱姆病；鼠疫耶尔森氏菌；西尼罗河病毒；黄热病；兔热病；肝炎(病毒性；细菌性)；RSV(呼吸道合胞病毒)；HPIV 1和HPIV 3；腺病毒；天花；过敏物和癌症物质。
用于本发明的组合物和方法的真菌抗原包括但不限于，例如，念珠菌属真菌抗原元件；组织胞浆菌属真菌抗原，诸如热休克蛋白60(HSP60)及其他组织胞浆菌属真菌抗原元件；隐球菌真菌抗原，诸如荚膜多糖及其他隐球菌真菌抗原元件；球孢子菌真菌抗原，诸如小球体抗原及其他球孢子菌真菌抗原元件；以及癣真菌抗原，诸如发癣菌素及其他球孢子菌真菌抗原元件。
原生动物及其他寄生虫抗原的实例包括但不限于，例如，恶性疟原虫抗原，诸如裂殖子表面抗原、子孢子表面抗原、环子孢子抗原、配子母细胞/配子表面抗原、红内期抗原pf 155/RESA及其他疟原虫抗原元件；弓形体属抗原，诸如SAG-1、p30及其他弓形体属抗原元件；血吸虫属抗原，诸如谷胱甘肽-S转移酶、副肌球蛋白及其他血吸虫属抗原元件；利什曼原虫主要及其他利什曼原虫抗原，诸如gp63、磷脂聚糖及与其相关的蛋白质及其他利什曼原虫抗原元件；以及克氏锥虫抗原，诸如75-77kDa抗原、56kDa抗原及其他锥虫抗原元件。
可以使用本发明的rAb靶向的抗原通常基于许多因素选择，所述因素包括：内在化的可能性、免疫细胞特异性的水平、靶向的免疫细胞种类、免疫细胞成熟的水平和/或活化等等。用于树突细胞的细胞表面标记物的实例包括但不限于，MHC I类、MHC II类、B7-2、CD18、CD29、CD31、CD43、CD44、CD45、CD54、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR和/或Dectin-1等等；而在一些情况下还缺失CD2、CD3、CD4、CD8、CD14、CD15、CD16、CD 19、CD20、CD56和/或CD57。抗原呈递细胞的细胞表面标记物的实例包括但不限于，MHC I类、MHC II类、CD40、CD45、B7-1、B7-2、IFN-γ受体及IL-2受体、ICAM-1和/或Fcγ受体。用于T细胞的细胞表面标记物的实例包括但不限于，CD3、CD4、CD8、CD14、CD20、CD11b、CD16、CD45和HLA-DR。
用于递送的细胞表面上的靶标抗原包括通常来源于肿瘤组织细胞的细胞表面、细胞质、细胞核、细胞器等的肿瘤抗原特征性的那些抗原。用于本发明的抗体部分的肿瘤靶标的实例无限制地包括血液癌诸如白血病和淋巴瘤；神经肿瘤诸如星形细胞瘤或恶性胶质瘤；黑色素瘤；乳癌；肺癌；头和颈癌；胃肠肿瘤诸如胃或结肠癌；肝癌；胰腺癌；泌尿生殖器肿瘤如宫颈、子宫、卵巢癌，阴道癌，睾丸癌，前列腺癌或阴茎癌；骨肿瘤；血管肿瘤；或唇、鼻咽、咽和口腔、食道、直肠、胆囊、胆道、喉、肺和支气管、膀胱、肾、脑及神经系统的其他部分、甲状腺的癌症；霍奇金氏病；非霍奇金氏淋巴瘤；多发性骨髓瘤和白血病。
可以使用本发明单独或组合地递送至免疫细胞用于抗原呈递的抗原的实例包括肿瘤蛋白，例如突变的癌基因；与肿瘤相关的病毒蛋白；以及肿瘤粘蛋白和糖脂。抗原可以是与肿瘤相关的病毒蛋白，其可以是来自上文指出的各类别病毒的病毒蛋白。某些抗原可以是肿瘤特征性的(一个亚集，是肿瘤前体细胞通常不表达的蛋白质)，或者可以是肿瘤前体细胞中通常表达的蛋白质，但是具有肿瘤特征性的突变。其它抗原包括具有改变的活性或亚细胞分布的正常蛋白质的突变型变体，例如，产生肿瘤抗原的基因突变。
肿瘤抗原的特定的非限制性实例包括：CEA，前列腺特异性抗原(PSA)，HER-2/neu，BAGE，GAGE，MAGE 1-4、6和12，MUC(粘蛋白)(例如MUC-1、MUC-2等)，GM2和GD2神经节苷脂，ras，myc，酪氨酸酶，MART(黑色素瘤抗原)，Pmel 17(gp100)，GnT-V内含子V序列(N-乙酰葡糖氨基转移酶V内含子V序列)，前列腺Ca psm，PRAME(黑色素瘤抗原)，β-连环蛋白，MUM-1-B(黑色素瘤遍在突变基因产物)，GAGE(黑色素瘤抗原)1，BAGE(黑色素瘤抗原)2-10，c-ERB2(Her2/neu)，EBNA(EB病毒核抗原)1-6，gp75，人乳头瘤病毒(HPV)E6和E7，p53，肺抗性蛋白(LRP)，Bcl-2，以及Ki-67。此外，免疫原性分子可以是自身免疫性疾病的起始和/或进展中涉及的自身抗原，该自身免疫性疾病的病理学主要是由于相关靶标器官、组织或细胞表达的分子特异性的抗体的活性所引起，例如SLE或MG。在这些疾病中，可能期望将进行中的针对相关自身抗原的抗体介导的(即Th2型)免疫应答指向细胞(即Th1型)免疫应答。或者，可能期望在没有感染，但是疑似易感染相关自身免疫性疾病的受试者中通过预防性诱导针对适当的自身抗原的Th1反应来防止针对自身抗原的Th2反应的起始或降低其水平。靶标自身抗原无限制地包括：(a)对于SLE，Smith蛋白、RNP核糖核蛋白、及SS-A和SS-B蛋白；以及(b)对于MG，乙酰胆碱受体的抗原。在一种或多种类型的自身免疫应答中涉及的其它各种抗原的实例包括，例如，内源性激素，诸如黄体生成素、卵泡刺激素、睾丸激素、生长激素、催乳素及其他激素。
在自身免疫疾病、过敏症和移植排斥中涉及的抗原可被用于本发明的组合物和方法。例如，在任何一种或多种下列自身免疫疾病或障碍中涉及的抗原可被用于本发明：糖尿病(diabetes、diabetes mellitus)，关节炎(包括类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎)，多发性硬化，重症肌无力，系统性红斑狼疮，自身免疫性甲状腺炎，皮炎(包括特应性皮炎和湿疹性皮炎)，银屑病，斯耶格伦氏综合征，包括继发于斯耶格伦氏综合征的干燥性角膜结膜炎，斑秃，由于节肢动物叮咬反应的过敏反应，克罗恩氏病，口疮性溃疡，虹膜炎，结膜炎，角膜结膜炎，溃疡性结肠炎，哮喘，过敏性哮喘，皮肤红斑狼疮，硬皮病，阴道炎，直肠炎，药疹，麻疯病逆向反应，麻风结节性红斑，自身免疫性葡萄膜炎，过敏性脑脊髓炎，急性坏死性出血性脑病，特发性双侧累进性感觉神经性听力丧失，再生障碍性贫血，单纯性红细胞贫血，特发性血小板减少，多软骨炎，韦格纳氏肉芽肿病，慢性活动型肝炎，斯-约二氏综合征，自发性口炎性腹泻，扁平苔癣，克罗恩氏病，格雷夫斯眼病，结节病，原发性胆汁性肝硬化，后葡萄膜炎和间质性肺纤维化。在自身免疫性疾病中涉及的抗原的实例包括谷氨酸脱羧酶65(GAD 65)、天然DNA、髓磷脂碱蛋白、髓磷脂蛋白脂质蛋白、乙酰胆碱受体元件、甲状腺球蛋白和促甲状腺激素(TSH)受体。在过敏症中涉及的抗原的实例包括花粉抗原诸如日本柳杉花粉抗原、豚草花粉抗原、黑麦草花粉抗原，动物来源的抗原诸如灰尘螨抗原和猫科抗原，组织相容性抗原和青霉素及其他治疗性药物。在移植排斥中涉及的抗原的实例包括移植入移植物接受者的移植物的抗原性元件，诸如心脏、肺、肝脏、胰、肾和神经的移植物元件。抗原可以是对治疗自身免疫性疾病有用的改变的肽配体。
如同本文使用的，术语″表位″指的是包括与位于由病原体DNA或RNA编码的多种病原体多肽之任何一种中的表位相似的一级、二级或三级结构的肽或蛋白质抗原。相似性的水平通常达到这样的程度，即针对上述多肽的单克隆或多克隆抗体也会与该肽或蛋白质抗原结合、反应或识别该肽或蛋白质抗原。多种免疫测定方法可以和上述抗体一起使用，例如蛋白质印迹法、ELISA、RIA等，所有这些都为本领域技术人员所知。适于在疫苗中使用的病原体表位和/或它们的功能等价物的鉴定是本发明的一部分。一旦分离和鉴定，可以容易地获得功能等价物。例如，可以使用如美国专利号4,554,101中讲授的Hopp的方法，其教导根据亲水性从氨基酸序列鉴定和制备表位，该文献引入本文作为参考。其它一些论文中描述的方法及基于其的软件程序也可以用于鉴定表位核心序列(参见，例如，Jameson和Wolf，1988；Wolf等，1988；美国专利号4,554,101)。然后可以容易地通过运用肽合成或重组技术把这些″表位核心序列″的氨基酸序列引入肽中。
可以把包含编码本发明的抗原的核酸作为活性成分的疫苗组合物制剂制备为注射剂，为液体溶液或悬浮液；也可以制备适于在注射之前溶解或悬浮于液体中的固体形式。可以把制剂乳化，包封在脂质体中。通常把活性免疫原性成分与药学上可接受并与活性成分相容的载体混合。
术语″药学上可接受的载体″指的是在给予的受试者中不引起过敏反应或其它副作用的载体。合适的药学上可接受的载体包括，例如，水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等及其组合中的一种或多种。此外，如果需要，疫苗可以包含少量的辅助性物质，诸如润湿或乳化剂、pH缓冲剂和/或增强疫苗效力的佐剂。可能有效的佐剂的实例包括但不限于：氢氧化铝、N-乙酰-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰-nor-胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺、MTP-PE和RIBI，其包含在2％鲨烯/Tween 80乳剂中的三种细菌提取成分，单磷酰脂质A、海藻糖二霉菌酸酯和细胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)。佐剂的其它实例包括DDA(溴化二甲基双十八烷基铵)、弗氏完全和不完全佐剂以及QuilA。此外，免疫调节物质，诸如淋巴因子(例如，IFN-γ、IL-2和IL-12)或合成的IFN-γ诱导物(诸如聚I:C)可以和本文描述的佐剂联合使用。
如本发明所描述的，药品可以包括具有单一或多拷贝的特定核苷酸序列的裸多核苷酸，该特定核苷酸序列与存在于血浆脂蛋白上的载脂蛋白的特定DNA结合位点结合。多核苷酸可以编码生物活性肽、反义RNA或核酶并以生理学上可接受的可给药形式提供。可来自本发明的另一种药品以生理学上可接受的可给药形式包括根据本文描述的方法从患者血液或其它来源分离的高度纯化的血浆脂蛋白部分和预先结合到纯化的脂蛋白部分的、包含与存在于血浆脂蛋白上的载脂蛋白的特定DNA结合位点结合的单一或多拷贝的特定核苷酸序列的多核苷酸。
另一种药品以生理学上可接受的可给药形式包括高度纯化的血浆脂蛋白部分，该血浆脂蛋白部分包括含有单一或多拷贝的特定DNA结合基序的重组载脂蛋白片段，其预先结合到包括单一或多拷贝的特定核苷酸序列的多核苷酸上。另一种药品以生理学上可接受的可给药形式包括高度纯化的血浆脂蛋白部分，该血浆脂蛋白部分包括含有单一或多拷贝的特定DNA结合基序的重组载脂蛋白片段，其预先结合到包括单一或多拷贝的特定核苷酸序列的多核苷酸上。
给药剂量在很大程度上取决于治疗的受试者的体重和身体健康状态以及给药途径和治疗频率。包括预先结合到高度纯化的脂蛋白部分的裸多核苷酸的药物组合物可以按1μg到1mg多核苷酸和1μg到100mg蛋白质的量给药。
rAb和rAb复合物给予患者可以遵循用于化学疗法给药的一般方案，如果有的话，考虑载体的毒性。预料根据需要重复治疗周期。还考虑，多种标准治疗以及外科干预可以与所述的基因治疗联合施用。
在考虑基因治疗临床应用的情况下，需要制备复合物作为适于目的应用的药物组合物。通常这需要制备基本上不含热原以及任何其它对人或动物有害的杂质的药物组合物。通常还期望使用适当的盐和缓冲液以使复合物稳定和允许复合物被靶标细胞摄取。
本发明的水性组合物可以包括有效量的化合物，其溶解或分散在药学上可接受的载体或水介质中。这些组合物也可以称作接种物。用于药物活性物质的介质和试剂的使用在本领域中为大家所熟知。任何常规介质或试剂除非与活性成分不相容，否则其在治疗组合物中的使用被考虑。补充性活性成分也可以加入组合物中。本发明的组合物可以包括典型的药物制剂。也可以在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和在油类中制备分散体。在通常的储存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物的生长。
疾病状态。取决于要治疗的特定疾病，根据本发明的治疗组合物的给予可以经任何常规途径进行，只要经该途径可达到靶标组织以使最大化递送抗原到位点来达到最大的(或在一些情况下最小的)免疫应答。通常可以经原位、皮内、皮下、肌内、腹膜内或静脉内注射给药。递送的其它部位包括：口、鼻、颊、直肠、阴道或局部的。局部给药对于皮肤癌的治疗可能是特别有益的。所述组合物通常作为包括生理学上可接受的载体、缓冲液或其它赋形剂的药学上可接受的组合物给药。
本发明的疫苗或治疗组合物可以经注射胃肠外例如皮下或肌内给予。适于其它给药方式的另外的制剂包括栓剂，以及在一些情况下口服制剂或适于分配的制剂如气雾剂。对于口服制剂，使用佐剂的T细胞亚型操作，抗原包装或添加单独的细胞因子到多种制剂中产生具有最佳化免疫应答的改良口服疫苗。对于栓剂，常规的粘合剂和载体可以包括，例如，聚亚烷基二醇或甘油三脂；这些栓剂可以由包含0.5％到10％，优选1％-2％范围内的活性成分的混合物形成。口服制剂包括通常使用的赋形剂，例如药物级的甘露糖醇、乳糖、淀粉硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这些组合物采取溶液、悬浮液、片剂、丸剂、胶囊、缓释制剂或散剂的形式并且包含10％-95％的活性成分，优选25-70％。
本发明的编码抗原的核酸可以作为中性的或盐的形式配制入疫苗或治疗组合物中。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与肽的游离氨基形成的)，其为与无机酸例如盐酸或磷酸或与有机酸诸如醋酸、草酸、酒石酸、马来酸等形成的盐。与游离羧基形成的盐也可以源自于无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁和有机碱诸如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等。
疫苗或治疗组合物以与给药制剂相容的方式，以及以预防和/或治疗有效的量给予。要给予的量取决于要治疗的受试者，包括例如受试者的免疫系统对合成抗体的容量，以及期望保护或治疗的程度。合适的剂量范围为每次疫苗接种具有约几百微克级的活性成分，范围为约0.1mg到1000mg，诸如约1mg到300mg的范围，以及优选约10mg到50mg的范围。合适的初始给药和强化注射方案也是变化的，但是典型的是初始给药然后是后续的接种或其他给药。给药要求的活性成分的精确量取决于医师的判断且可能为每个受试者所特有。本领域技术人员清楚，本发明的核酸分子或融合多肽的治疗有效量尤其取决于给药方案，给药抗原的单位剂量，核酸分子或融合多肽是否和其它治疗剂联合给药，接受者的免疫状态和健康状态，以及特定核酸分子或融合多肽的治疗活性。
组合物可以以单一剂量方案或以多次剂量方案提供。多次剂量方案中疫苗接种的初始时程可以包括，例如1-10个单独的剂量，随后在以维持和或加强免疫应答要求的后续时间间隔给予其它剂量，例如在1-4个月给予第二剂量，以及如果需要在数月之后给予后续剂量。需要每隔1-5年，通常3年的定期加强剂量来维持需要的保护性免疫水平。免疫时程可以继之以与ESAT6或ST-CF共培养的外周血淋巴细胞(PBL)的体外增殖测定，以及测量致敏淋巴细胞释放的IFN-γ水平。可以使用常规的标记物诸如放射性同位素、酶、荧光标记物等进行测定。这些技术为本领域技术人员所知并且可以在美国专利号3,791,932、4,174,384和3,949,064中找到，这些文献的相关部分通过引用并入本文。
模块式rAb载体和/或结合的rAb载体-(cohesion/dockerin和/或dockerin-cohesin)-抗原复合物(rAb-DC/DC-抗原疫苗)可以以一种或多种″单位剂量″提供，这取决于是否使用核酸载体，最终纯化的蛋白质，或使用的最终的疫苗形式。把单位剂量定义为包含计算以产生与该治疗组合物给药即适当的途径和治疗方式相关的期望反应的预定量的治疗组合物。给药量以及特定的途径和制剂在临床领域技术人员的范围之内。还可以评估待治疗的受试者，尤其是，受试者免疫系统的状态和需要的保护。单位剂量不需要以单一注射给药，而是可以包括经设定的一段时间内的连续输注。本发明的单位剂量可以方便地用DNA/kg(或蛋白质/Kg)体重来描述，以约0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.5、1、10、50、100、1,000或更多mg/DNA或蛋白质/kg体重的范围给药。同样地，递送的rAb-DC/DC-抗原疫苗的量可以从约0.2到约8.0mg/kg体重变化。因此，在特定实施方案中，可以把0.4mg、0.5mg、0.8mg、1.0mg、1.5mg、2.0mg、2.5mg、3.0mg、4.0mg、5.0mg、5.5mg、6.0mg、6.5mg、7.0mg和7.5mg的疫苗递送到个体体内。给药的rAb-DC/DC-抗原疫苗的剂量在很大程度上取决于治疗的受试者的体重和身体健康状态以及给药途径和治疗频率。包括预先结合到脂质体或病毒递送载体上的裸多核苷酸的药物组合物可以按从1μg到1mg多核苷酸到1μg到100mg蛋白质的量给药。因此，特定组合物可以包括在约1μg、5μg、10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、100μg、150μg、200μg、250μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg或1,000μg之间的多核苷酸或蛋白质，该多核苷酸或蛋白质独立地与1μg、5μg、10μg、20μg、3.0μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、100μg、150μg、200μg、250μg、500μg、600μg、700μg、800μg、900μg、1mg、1.5mg、5mg、10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg载体结合。
在体外细胞系统中测试本发明，该体外细胞系统测量Flu抗原靶向的树突细胞对人Flu特异性T细胞的免疫刺激。本文显示的结果证明在该系统中单独使用无效的抗原剂量下这些抗原特异性细胞的特异性扩增。
本发明还可以用于制备模块式rAb载体，该模块式rAb载体例如是与来自蓖麻毒素、炭疽毒素和葡萄球菌B肠毒素的保护性抗原复合的重组人源化mAb(抗特异性人树突细胞受体)。该实体的潜在市场是所有军事人员的疫苗接种和储备待用给大居民点服药以应对任何与这些试剂相关的生物威胁的存储疫苗。本发明对通常用于人和动物两者的疫苗设计具有广泛的应用。感兴趣的工业包括制药和生物技术工业。
本发明包括包含疫苗的组合物和方法，其特异性靶向(递送)抗原至抗原呈递细胞(APC)以引发针对该抗原的有效且广泛的免疫应答。这些组合物诱发针对衍生所述抗原的活性剂(病原体或癌症)的保护性或治疗性免疫应答。此外，本发明产生了这样的试剂，其直接或与其他试剂一起通过它们与在抗原呈递细胞上表达的称作DC-ASGPR的受体的特异性结合而具有治疗性作用。
Dectin-1(CLEC7A；G.D.Brown，Nat Rev Immunol 6(2006)，pp.33-43.)最初报道为具有T细胞共刺激能力的树突细胞(DC)特异性分子(N.Kanazawa等，J Biol Chem 278(2003)，pp.32645-32652)，但是后来发现其表达在单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞中更强，在T细胞亚型和人B细胞和嗜酸性粒细胞中弱。最重要的是，已确定Dectin-1识别真菌β-葡聚糖作为主要非调理性(nonopsonic)受体，对于β-葡聚糖的生物效应是关键性的(G.D.Brown，Nat RevImmunol 6(2006)，pp.33-43.)。巨噬细胞上的Dectin-1的表达被IL-4和IL-13上调，以及被LPS以及IL-10和地塞米松下调。Dectin-1在其胞质区独特地含有ITAM，实际上在缺乏任何接合体分子的情况下作为活化受体起作用。其ITAM的结构也是独特的。与含有两个重复的YxxL/I(酪氨酸-任意-任意-亮氨酸或异亮氨酸)共有序列(SJ.van Vliet等，Int Immunol 17(2005)，pp.661-669)相比，在小鼠或人Dectin-1的第一个酪氨酸和随后亮氨酸或异亮氨酸之间分别插入3个氨基酸残基(YxxxL/I)。实际上，已报道仅磷酸化第二个酪氨酸足以募集Syk和各种Dectin-1的活化效应，例如诱导吞噬作用、产生活性氧物质(ROS)和通过核因子(NF)-κB活化介导产生细胞因子。然而，在特定的细胞类型(巨噬细胞或DC)中仅这些效应中的一些需要Syk。此外，这些效应中的一些需要与MyD88-介导的TLR信号传导协同作用。值得注意的是，仅在某些特定的条件下β-葡聚糖暴露于酵母细胞表面，Dectin-1信号缺失可能解释某些真菌逃避宿主免疫监视(S.E.Heinsbroek等.，TrendsImmunol 26(2005)，pp.352-354)。此外，报道Dectin-1介导的信号促进遗传倾向的(ZAP-70-突变)SKG小鼠中自身免疫性关节炎的诱导(H.Yoshitomi等，J Exp Med 201(2005)，pp.949-960)。鉴于念珠菌属抗原广泛用于诱导多种自身免疫性疾病模型(E.C.Keystone等，Arthritis Rheum 20(1977)，pp.1396-1401)，Dectin-1在破坏自体耐受性方面可能具有作用。但是，其可能类似于Dectin-1，与调节性T细胞有关(E.P.McGreal，M.Rosas，G.D.Brown，S.Zamze，S.Y.Wong和S.Gordon等，Glycobiology 16(2006)，pp.422-430.)仍有待进一步证实。
DC可交叉呈递蛋白质抗原(Rock KL Immunol Rev.2005Oct；207：166-83)。在体内，DC通过大量的受体摄取抗原，并呈递I类和II类抗原肽。在本文中，DC凝集素作为“模式识别”受体对有效摄取抗原以及交叉呈递抗原起作用。
本发明包括开发、鉴定和使用抗人Dectin-1单克隆抗体(mAb)，并且鉴定了其生物学功能，从而发现抗Dectin-1单抗及其替代物可能的治疗应用。本发明公开了开发能够活化具有Dectin-1的细胞的独特活性剂的方法，以及在接收这些信号的细胞中所导致的变化关于对免疫系统中其他细胞的作用的影响。这些影响[单独或与其他信号一起(即共刺激)]高度预测针对某些疾病状态的治疗性结果或在疫苗接种情况下增加保护性结果。
材料和方法
抗体和四聚体-用于DC和B细胞表面染色的抗体(Ab)，包括同型对照Ab，购自BD Biosciences(CA)。用于ELISA的Ab购自Bethyl(TX)。抗BLyS和抗APRIL来自PeproTech(NJ)。四聚体HLA-A*0201-GILGFVFTL(Flu M1)和HLA-A*0201-ELAGIGILTV(Mart-1)购自Beckman Coulter(CA)。
细胞和培养物-来自正常供体的单核细胞(1×106/ml)在含有GM-CSF(100ng/ml)和IL-4(50ng/ml)(R&D，CA)的Cellgenics(France)培养液中培养。对于第3天和第6天的DC，分别在第1天和第3天将相同量的细胞因子添加到培养液中。B细胞用阴性分离试剂盒(BD)纯化。CD4和CD8T细胞用包被抗CD4或CD8的磁珠(Milteniy，CA)纯化。使用PercollTM梯度(GEHealthcare UK Ltd，Buckinghamshire，UK)通过密度梯度离心从血沉棕黄层中分离PBMC。对于DC活化，将1×105DC在用mAb包被的96孔平板中培养16-18h。在碳酸盐缓冲液pH 9.4中的mAb(1-2μg/孔)在37℃下培养至少3h。收集培养物上清液，细胞因子/趋化因子通过Luminex(Biorad，CA)测定。对于基因分析，DC在mAb包被的平板中培养8h。在一些研究中，将可溶性50ng/ml CD40L(R&D，CA)或50nM CpG(InVivogen，CA)添加到培养液中。在DC和B细胞共培养中，将重悬在含有10％FCS和抗生素的RPMI 1640(Biosource，CA)中的5×103DC首先在mAb包被的平板中培养至少6h，然后加入1×105用CFSE(Molecular Probes，OR)标记的纯化自体B细胞。在一些研究中，DC用5moi(感染复数)热灭活流感病毒(A/PR/8H1N1)脉冲攻击2h，然后与B细胞混合。对于DC和T细胞共培养，将5×103DC与1×105纯化的自体CD8T细胞或者混合的同种异体T细胞一起培养。在培养的最后18h，用1μCi/孔3[H]-胸苷脉冲攻击同种异体T细胞，然后通过用γ-计数仪(Wallac，MN)测定cpm。以5×105PBMC/孔在mAb包被的平板中培养。分别在第10天和第7天，通过用抗CD8和四聚体染色细胞来测定Mart-1和Flu M1特异性CD8T细胞的频率。将10μM的Mart-1肽(ELAGIGILTV)和20nM的含Mart-1肽的重组蛋白(参见下文)添加到DC和CD8T细胞培养物中。将20nM纯化的重组Flu M1蛋白(参见下文)加到PBMC培养物中。
单克隆抗体-通过常规技术制备小鼠mAb。简而言之，用含有Ribi佐剂的20μg受体胞外结构域.hIgGFc融合蛋白对6周龄的BALB/c小鼠进行i.p.免疫，然后在第10天和第15天，用20μg抗原进行加强免疫。3个月后，在取出脾脏的前3天，再对小鼠加强免疫。或者，在30天至40天的期间内，每3-4天用在Ribi佐剂中的1-10μg抗原注射小鼠足垫。在最后加强免疫后的3-4天，收集引流的淋巴结，来自脾脏或淋巴结细胞的B细胞与SP2/0-Ag14细胞融合。对杂交瘤上清液进行筛选，与单独的融合伴侣或与碱性磷酸酶融合的受体胞外结构域(15)比较，分析受体胞外结构域融合蛋白的Ab。然后在FACS中使用用编码全长受体cDNA的表达质粒瞬时转染的293F细胞对阳性孔进行筛选。选择的杂交瘤是在CELLine瓶(Intergra，CA)中克隆和扩增的单个细胞。杂交瘤上清液与等体积的1.5M甘氨酸、3M NaCl、1x PBS，pH 7.8混合，并用MabSelect树脂滚动。用结合缓冲液洗涤树脂，并用0.1M甘氨酸，pH 2.7洗脱。接着用2M Tris中和，用PBS透析mAb。
ELISA-进行夹心ELISA来测量总IgM、IgG和IgA以及flu特异性免疫球蛋白(Ig)。含有已知量的Ig的标准人血清(Bethyl)和人AB血清分别用作总Ig和flu特异性Ig的标准。样本中的Flu特异性Ab滴度，单位被确定为具有相同的光密度的AB血清的稀释系数。用ELISA试剂盒(BenderMedSystem，CA)测定BAFF和BLyS的量。
RNA纯化和基因分析-用RNeasy柱(Qiagen)提取总RNA，并用2100Bioanalyser(Agilent)分析。生物素标记的cRNA靶标用Illumina totalprep标记试剂盒(Ambion)制备并杂交到Sentrix Human6BeadChips(46K的转录本)上。这些微阵列由附着在3μm珠上的50mer寡核苷酸探针组成，所述珠固定在硅片表面上蚀刻的微孔中。用链霉抗生物素-Cy3染色后，用Illumina(Beadstation 500X)生产的亚微米分辨扫描仪成像。用基因表达分析软件程序GeneSpring，Version 7.1(Agilent)进行数据分析。
重组Flu M1和MART-1蛋白的表达和纯化-用PCR扩增流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)M1基因的ORF，同时加入起始密码子远端的Nhe I位点以及终止密码子远端的Not I位点。将消化片段克隆到pET-28b(+)(Novagen)中，并在M1ORF读框内插入His6标签，从而编码His.Flu M1蛋白质。编码插入在Nco I和Nhe I之间的来自热纤梭菌(C.thermocellum)(未公开)的N端169个残基cohesin结构域的pET28b(+)衍生物表达Coh.His。为表达Cohesin-Flex-hMART-1-PeptideA-His，序列GACACCACCGAGGCCCGCCACCCCCACCCCCCCGTGACCACCCCCACCACCACCGACCGGAAGGGCACCACCGCCGAGGAGCTGGCCGGCATCGGCATCCTGACCGTGATCCTGGGCGGCAAGCGGACCAACAACAGCACCCCCACCAAGGGCGAATTCTGCAGATATCCATCACACTGGCGGCCG(SEQ ID NO.：1)(编码DTTEARHPHPPVTTPTTDRKGTTAEELAGIGILTVILGGKRTNNSTPTKGEFCRYPSHWRP(SEQ ID NO.：2)-带阴影的残基是免疫显性的HLA-A2-限制性肽，而该肽周围带下划线的残基来自MART-1)被插入到上述载体的Nhe I位点和Xho I位点之间。蛋白在大肠杆菌菌株BL21(DE3)(Novagen)或者T7Express(NEB)中表达，这些菌株在37℃下在LB中培养，以卡那霉素抗性(40μg/ml)选择，并以200转/分钟摇瓶直至生长到对数中期，同时添加120mg/LIPTG。3h后，通过离心收集细胞，保存在-80℃下。将来自每1L发酵物中的大肠杆菌细胞重悬在30ml含有0.1ml蛋白酶抑制剂Cocktail II(Calbiochem，CA)的冰冷的50mM Tris，1mM EDTA pH 8.0(缓冲液B)中。在冰上超声处理细胞2次，每次5分钟，设定值为18(Fisher SonicDismembrator 60)，其中有5分钟静止期，然后在4℃下以17,000r.p.m.(SorvallSA-600)离心20分钟。为了纯化His.Flu M1，使50ml细胞裂解物上清液部分通过5ml Q琼脂糖珠，将6.25ml 160mM Tris、40mM咪唑、4M NaCl pH7.9添加到Q琼脂糖流动液中。将其以4ml/分钟速度上样到5ml带有Ni++的HiTrap螯合HP柱上。结合柱的蛋白质用20mM NaPO4，300mM NaCl pH7.6(缓冲液D)洗涤，接着用100mM H3COONa pH 4.0再洗涤一次。结合的蛋白质用100mM H3COONa pH 4.0洗脱。合并峰值馏分，以4ml/分钟的速度上样到用100mM H3COONa pH 5.5平衡的5ml HiTrap S柱上，用平衡缓冲液洗涤，接着用在50mM NaPO4 pH 5.5中的梯度为0-1M的NaCl洗脱。合并用约500mM NaCl洗脱的峰值馏分。为了纯化Coh.Flu M1.His，如上所述将来自2L培养物的细胞裂解。离心后，将2.5ml Triton 29XI14加到上清液中，在冰上培育5分钟。在25℃下再温育5分钟后，在25℃下进行离心，从Triton XI14中分离上清液。重复提取操作，将上清液通过5ml的Q琼脂糖珠，在Q琼脂糖流动液中添加6.25ml 160mM Tris、40mM咪唑、4M NaClpH 7.9。如上所述，用Ni++螯合的层析柱纯化蛋白质，并用在缓冲液D中的0-500mM咪唑洗脱。
抗Dectin-1mAb-本发明包括以下所示的对应于抗LOX-1单克隆抗体的特定氨基酸序列，它们是治疗性或保护性产品中的期望成分(在例如人源化重组抗体的情况下)。以下是在嵌合小鼠V区(下划线)-人C区(粗体)重组抗体中的所述序列。这些小鼠V区可容易地被人源化，即LOX-1结合区由任何本领域技术人员移植到人V区框架序列上。此外，所述序列也可表达为融合蛋白，其保留了抗体的功能，但加入了例如抗原、细胞因子或毒素以用于需要的治疗性应用。rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_
Figure A20088001321900271
.4_
Figure A20088001321900272
-V-hIgG4H-C]QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCSVSGFSLSNYDISWIRQPPGKGLEWLGVMWTGGGAN YNSAFMSRLSINKDNSKSQVFLKMNNLQTDDTAIYYCVRDAVRYWNFDVWGAGTTV TVSSAKTK
Figure A20088001321900282
(SEQ ID NO.：3)
rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_
Figure A20088001321900283
.4_
Figure A20088001321900284
-V-hIgGK-C]QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWYQQKPGSSPKPWIYATSHLASGVPAR FSGSGSGTSYSLTISRVEAEDTATYYCQQWSSNPFTFGSGTK
Figure A20088001321900285
Figure A20088001321900286
Figure A20088001321900287
(SEQ ID NO.：4)
rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_
Figure A20088001321900288
.5_
Figure A20088001321900289
-V-hIgG4H-C]QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSSG YTNYNQKFKDKATLTADKSSSTASMQLSSLTSEDSAVYYCARERAVLVPYAMDYWGQ GTSVTVSSAKTK
Figure A200880013219002810
Figure A200880013219002811
Figure A200880013219002812
(SEQ ID NO.：5)
rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_
Figure A200880013219002813
.5_
Figure A200880013219002814
-V-hIgGK-C]QIVLTQSPAVMSASPGEKVTITCTASSSLSYMHWFQQKPGTSPKLWLYSTSILASGVPTR FSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPFTFGSGTK
Figure A200880013219002815
Figure A200880013219002817
(SEQ ID NO.：6)
rAB-pIRES2[mAnti-Dectin_1_
Figure A200880013219002818
.2D4
Figure A200880013219002819
-V-hIgG4H-C]EVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKSLEWIGNIDPYYGD TNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHLKSLTSEDSAVYYCARPYGSEAYFAYWGQGTLV TVSAAKTK
Figure A200880013219002820
Figure A200880013219002821
Figure A20088001321900292
(SEQ ID NO.：7)
rAB-pIRES2[mAnti-Dectin_1_
Figure A20088001321900293
.2D4
Figure A20088001321900294
-V-hIgGK-C]DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYAAQSISGIPSR FSGSGSGSDFTLSINGVEPEDVGVYYCQNGHSFPYTFGGGTK
Figure A20088001321900295
Figure A20088001321900297
(SEQ ID NO.：8)
V区序列和相关序列可由本领域技术人员进行修饰，以例如增强Dectin-1的亲和力和/或整合入人V区框架序列中，以工程化入表达载体中指导能够结合抗原呈递细胞上的Dectin-1的蛋白质形式的表达。此外，本发明中公开的(或使用用于本文公开的独特生物学的类似方法和筛选得到的)其他单抗可通过类似的方法(始于PCR克隆和小鼠杂交瘤V区测序)导入编码类似重组抗体(rAb)的表达构建体中。这种抗Dectin-1V区还可由本领域技术人员人源化(即将小鼠特异性的结合序列移植到人V区框架序列上)以最小化所述治疗性rAb可能的免疫反应性。
工程化重组抗Dectin-1重组抗体-抗原融合蛋白(rAb.抗原)是有效的体外原型疫苗-表达载体可采用不同的蛋白编码序列构建，例如与H链编码序列框内融合。例如，抗原如流感病毒HA5、流感病毒M1、HIV gag或来自癌抗原的免疫显性肽或细胞因子可随后表达为rAb.抗原或rAb.细胞因子融合蛋白，在本发明的情况下，其能够具有使用抗Dectin-1V区序列将抗原或细胞因子(或毒素)直接带至具有Dectin-1的抗原呈递细胞表面的用处。其容许例如抗原的内在化-有时与受体的活化和随后治疗或保护性作用的起始(例如通过起始有效的免疫应答，或通过杀死靶细胞)相关。基于该构思的典型原型疫苗可使用H链载体例如rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_11B6.4_H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis]，其指导H链小鼠mAb V区(下划线)-人IgG4C区(粗体)Flu HA1-1(斜体)融合蛋白的合成。与类似的轻链表达质粒(编码上述的序列)共表达产生多功能的重组抗体(rAb)，该重组抗体结合Dectin-1，并递送Flu HA1-1抗原至细胞表面用于DC活化、抗原内在化、抗原加工、抗原呈递和特异性抗Flu HA1-1B和T细胞的发育和扩充。下面还给出了与FluHA5-1、HIV病毒gag p24和PSA(前列腺特异性抗原)融合的类似的H链构建体。rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_11B6.4_H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis]QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCSVSGFSLSNYDISWIRQPPGKGLEWLGVMWTGGGAN YNSAFMSRLSINKDNSKSQVFLKMNNLQTDDTAIYYCVRDAVRYWNFDVWGAGTTV TVSSAKTK
Figure A20088001321900301
Figure A20088001321900302
Figure A20088001321900303
ASDTTEPATPTTPVTT
Figure A20088001321900304
Figure A20088001321900306
HHHHHH(SEQ ID NO.：9)
rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_11B6.4_H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA5-1-6xHis]QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCSVSGFSLSNYDISWIRQPPGKGLEWLGVMWTGGGAN YNSAFMSRLSINKDNSKSQVFLKMNNLQTDDTAIYYCVRDAVRYWNFDVWGAGTTV TVS SAKTK
Figure A20088001321900307
Figure A20088001321900308
Figure A20088001321900309
ASDTTEPATPTTPVTT
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Figure A200880013219003011
Figure A200880013219003012
HHHHHH(SEQ ID NO.：10)
rAB-pIRES2[mAnti-Dectin_1_2D8.2D4H-LV-hIgG4H-Viralgag]EVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKSLEWIGNIDPYYGD TNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHLKSLTSEDSAVYYCARPYGSEAYFAYWGQGTLV TVSAAKTK
Figure A200880013219003013
Figure A200880013219003014
Figure A20088001321900311
Figure A20088001321900312
ASDMAKKETVWRLEEFGR
Figure A20088001321900313
Figure A20088001321900315
(SEQ ID NO.：11)
rAB-pIRES2[mAnti-Dectin_1_2D8.2D4H-V-hIgG4H-C-hPSA]EVQLQQSGPELEKPGASVKISCKASGYSFTGYNMNWVKQSNGKSLEWIGNIDPYYGD TNYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMHLKSLTSEDSAVYYCARPYGSEAYFAYWGQGTLV TVSAAKTK
Figure A20088001321900316
Figure A20088001321900317
Figure A20088001321900318
ASDTTEPATPTTPVTTPTTTLL
Figure A20088001321900319
Figure A200880013219003110
Figure A200880013219003111
(SEQ ID NO.：12)。
类似地，以下所示的rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_11B6.4_H-LV-hIgG4H-C-Dockerin]编码与dockerin融合的抗Dectin-1H链(序列如下)。Dockerin允许与cohesin-抗原(coh.抗原)融合蛋白的强特异性非共价相互作用-提供可选择的递送抗原至DC和其他抗原呈递细胞的方法。rAB-pIRES2[manti-Dectin_1_11B6.4_H-LV-hIgG4H-C-Dockerin]QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCSVSGFSLSNYDISWIRQPPGKGLEWLGVMWTGGGANYNSAFMSR LSINKDNSKSQVFLKMNNLQTDDTAIYYCVRDAVRYWNFDVWGAGTTVTVSSAKTK
Figure A200880013219003112
Figure A200880013219003114
AS
Figure A200880013219003116
(SEQ ID NO.：13)。
关于克隆和表达重组抗体(rAb)和rAb.抗原的方法
嵌合小鼠/人mAb的cDNA克隆和表达-从杂交瘤细胞(RNeasy试剂盒，Qiagen)制备总RNA，用于cDNA合成和PCR(SMART RACE试剂盒，BDBiosciences)，采用提供的5′引物和基因特异的3′引物：(mIgGκ，5’ggatggtgggaagatggatacagttggtgcagcatc3’(SEQ ID NO.：14)；mIgGλ，5’ctaggaacagtcagcacgggacaaactcttctccacagtgtgaccttc3’(SEQ ID NO.：15)；mIgG1，5’gtcactggctcagggaaatagcccttgaccaggcatc3’(SEQ ID NO.：16)；mIgG2a，5’ccaggcatcctagagtcaccgaggagccagt3’(SEQ ID NO.：17)；以及mIgG2b，5’ggtgctggaggggacagtcactgagctgctcatagtgt3’(SEQ ID NO.：18))。
克隆PCR产物(pCR2.1TA试剂盒，Invitrogen)，并通过DNA测序鉴定。使用衍生的序列用于小鼠H和L链V区cDNA，使用特异性引物PCR扩增信号肽和V区，同时将用于克隆的侧翼限制性位点插入编码下游人IgGκ或IgG4H的表达载体中。通过扩增残基401-731(gi|631019371)建立用于表达嵌合mVκ-hIgκ的载体，所述残基由Xho I和Not I位点侧翼，将其插入pIRES2-DsRed2(BD Biosciences)的Xho I-Not I间隔区。使用PCR从起始密码子扩增mAb Vk区，添加Nhe I或Spe I位点，随后CACC，至编码区(例如gi|76779294|的残基126)，添加Xho I位点。随后将PCR片段克隆入上述载体的Nhe I-Not I间隔区。通过将序列5′ctagttgctggctaatggaccccaaaggctccctttcctggagaatacttctgtttctctccctggcttttgagttgtcgtacggattaattaag ggcccactcgag3′(SEQ ID NO.：19)插入到上述载体的Nhe I-Xho I间隔中来建立使用mSLAM导引部分的用于嵌合mVκ-hIgκ的载体。使用PCR扩增预测的成熟N端密码子(使用SignalP 3.0Server定义)(16)以及mVκ区(如上文所定义)的末端之间的间隔，同时附加5′tcgtacgga3′。将用Bsi WI和Xho I消化的片段插入到上述载体相应的位点中。对照hIgκ序列相应于gi|49257887|残基26-85和gi|21669402|残基67-709。对照hIgG4H载体相应于gi|19684072|的残基12-1473，其具有S229P和L236E取代，这稳定了二硫键并消除了残基FcR结合(27)，插入到pIRES2-DsRed2载体的BglII和Not I位点之间，同时添加序列5′gctagctgattaattaa3′(SEQ ID NO.：20)代替终止密码子。使用PCR扩增mAb VH区，从起始密码子开始，添加CACC，随后BglII位点，至编码gi|19684072|残基473的区。随后将PCR片段克隆入上述载体的Bgl II-Apa I间隔中。通过将序列5′ctagttgctggctaatggaccccaaaggctccctttcctggagaatacttctgtttctctccctggcttttgagttgtcgtacggattaattaag ggccc3′(SEQ ID NO.：22)插入上述载体的Nhe I-Apa I位点中来建立使用mSLAM导引部分的用于嵌合mVH-hIgG4序列的载体。使用PCR扩增预测的成熟N端密码子以及mVH区的末端之间的间隔，同时附加5′tcgtacgga3′。将用Bsi WI和Apa I消化的片段插入到上述载体相应的位点。附录2详细列出了本研究中使用的各种mVκ和mVH区的核苷酸序列。
将不同抗原编码序列插入到H链载体的Nhe I-Pac I-Not I间隔区，该抗原编码序列由近端的Nhe I位点和远端终止密码子后的Not I位点侧翼。Flu HA1-1由甲型流感病毒(A/Puerto Rico/8/34(H1N1))红细胞凝集素gi|21693168|残基82-1025(C982T改变)编码，该残基具有近端5′gctagcgatacaacagaacctgcaacacctacaacacctgtaacaa3′(SEQ ID NO.：23)序列(NheI位点，然后为编码cipA cohesin-cohesin接头残基序列)和远端的5′caccatcaccatcaccattgagcggccgc3′(SEQ ID NO.：24)序列(编码His6、终止密码子和Not I位点)。Flu HA5-1由结合有与Flu HA1-1相同序列的gi|50296052|甲型流感病毒(A/Viet Nam/1203/2004(H5N1))红细胞凝集素残基49-990编码。Doc由gi|40671|celD残基1923-2150编码，该残基具有近端的Nhe I位点和远端的Not I位点。PSA由gi|34784812|前列腺特异性抗原残基101-832编码，该残基具有近端序列5′gctagcgatacaacagaacctgcaacacctacaacacctgtaacaacaccgacaacaacacttctagcgc3′(SEQ ID NO.：25)(Nhe I位点和cipA间隔区)和远端Not I位点。Flu M1-PEP由5′gctagccccattctgagccccctgaccaaaggcattctgggctttgtgtttaccctgaccgtgcccagcgaacgcaagggtatacttggattcgttttcacacttacttaagcggccgc3′(SEQ ID NO.：26)编码。这个以及所有的其他肽编码序列通过具有适于克隆入Nhe I和Not I限制性H链载体，或Nhe I-Xho I限制性Coh.His载体的末端的互补合成DNA片段的混合物来产生。总是使用优选的人密码子，除了需要插入限制性位点或在Cip A间隔区序列中的情况。
采用L链和H链构建体各～2.5μg和上述的方案，在5ml瞬时转染物中检测rAb表达构建体的生产水平。用抗hIgG ELISA(亲和纯化的山羊抗人IgG(H+L)，Jackson ImmunoResearch)分析上清液。在该方案的检测中，分泌性rAb的产生不依赖于H链和L链载体浓度，各DNA浓度在～2倍的范围内(即系统是DNA饱和的)。
开发了新的抗Dectin-1单克隆抗体(mAb)并使用其揭示以前未知的与该发现于抗原呈递细胞上的细胞表面受体相关的生物学。所述新的生物学高度预测了活化该受体的抗Dectin-1剂用于不同治疗性和保护性应用的应用。下面给出的数据有力得地支持最初的预测，并阐述了将本文的发现用于临床应用的途径。
针对人Dectin-1高亲和力单克隆抗体的开发：制备受体胞外结构域.hIgG(人IgG1Fc)和AP(人胎盘碱性磷酸酶)融合蛋白分别用于免疫小鼠和筛选单抗。先前描述了用于DCIR胞外结构域.IgG的表达构建体(15)，以及使用小鼠SLAM(mSLAM)信号肽定向分泌(16)。还通过使用PCR扩增AP残基133-1581(gb|BC009647|)，通过添加近端框内Xho I位点和远端的TGA终止密码子和Not I位点来产生DCIR胞外结构域.AP的表达载体。该Xho I-NotI片段在上述的DCIR胞外结构域.IgG载体中替换了IgG编码序列。在相同的Ig和AP载体系列中的Dectin-1胞外结构域构建体含有编码(bp 397-603，gi|88999591|)的插入物。使用FreeStyleTM 293表达系统(Invitrogen)，根据厂商说明(1mg总质粒DNA与1.3ml 293Fectin试剂/L转染物)产生Dectin-1融合蛋白。为生产rAb，共转染等量编码H和L链的载体。将转染的细胞培养3天，收集培养物上清液，加入新鲜的培养基，继续培养2天。通过过滤澄清合并的上清液。通过HiTrap蛋白A亲和层析纯化受体胞外结构域.hIgG，用0.1M pH 2.7的甘氨酸洗脱，随后对PBS透析。使用HiTrap MabSelectTM柱类似地纯化rAb(后面描述的重组抗体)。小鼠mAb通过常规细胞融合技术产生。简言之，6周龄的BALB/c小鼠腹膜内用20μg受体胞外结构域.hIgGFc融合蛋白与Ribi佐剂免疫，随后在10天和15天后用20μg抗原加强。3个月后，小鼠在取脾脏前3天再次加强。或者，每3-4天小鼠交替足垫内注射1-10μg在Ribi佐剂中的抗原，持续30至40天。最后一次加强后3至4天，收集引流淋巴结。使用常规技术将来自脾脏或淋巴结细胞的B细胞与SP2/O-Ag 14细胞(17)融合。与单独的融合伴侣或与AP融合的受体胞外结构域(15)相比，使用ELISA针对受体胞外结构域融合蛋白筛选杂交瘤上清液。阳性孔随后用FACS筛选，使用用编码全长受体DNA的表达质粒瞬时转染的293F细胞。选择的杂交瘤是单细胞克隆的，使适应无血清培养基，并在CELLine烧瓶(Integra，CA)中扩增。将杂交瘤上清液与等体积的1.5M甘氨酸、3M NaCl、1×PBS，pH7.8混合，并用MabSelect树脂滚动。该树脂用结合缓冲液洗涤，以0.1M甘氨酸，pH2.7洗脱。用2M Tris中和后，对PBS透析单抗。
通过直接ELISA进行纯化的抗Dectin-1单克隆抗体的鉴定。通过ELISA检测的一些抗Dectin-1单克隆抗体相对亲和力(即将Dectin-1.Ig蛋白固定于微量滴定板表面，通过一系列剂量滴定检测抗体结合Dectin-1.Ig的能力(如通过抗小鼠IgG.HRP结合试剂检测))。这些图片是(左边)对Dectin-1.Ig蛋白的单抗反应性；(右边)对hIgGFc蛋白的单抗反应性。所述图片显示抗Dectin-1单抗与Dectin-1特异性反应。注意到不同抗体的结合有变化。
体内DC和体外培养的DC均表达Dectin-1：图1A和1B显示正常供体的PBMC上Dectin-1的表达水平。如图1A中所示，抗原呈递细胞，包括CD11c+DC、CD14+单核细胞和CD19+B细胞，表达Dectin-1。CD3+T细胞不表达可检测的表面Dectin-1。图1b中显示体外培养的DC、IFNDC和IL-4DC上Dectin-11的表达水平。IL-4和IFNDC均用本研究中制备的所有的三种抗Dectin-1染色。
体内DC和体外培养的DC均表达Dectin-1。图1A：来自正常供体的PBMC用抗CD-11c、CD14、CD19和CD3以及抗Dectin-1单抗染色。对单个抗体染色的细胞作门以测定Dectin-1的表达水平。图1B：将来自正常供体的单核细胞在GM-CSF与IL-4(IL-4DC)或IFNa(IFNDC)存在下培养，细胞用抗Dectin-1单抗染色。细胞同样用对照抗体和用FITC标记的山羊抗小鼠抗体染色。
DC上的Dectin-1的表达水平受TLR配体和细胞因子的调节：DC表面分子的表达水平可通过多种刺激物调节。为观察Dectin-1表达是否受DC活化控制，用TLR配体和细胞因子刺激IL-4DC。图2中的数据显示TLR4配体(来自大肠杆菌(E.coli)的LPS)降低了Dectin-1的表达水平，但是IL-10轻微地增强IL-4DC上的Dectin-1表达。在一项重复研究中，IL-15轻微地下调Dectin-1。其他刺激物，包括IFNa和TLR3配体，不改变IL-4DC上的Dectin-1的表达。
图2：将体外培养的IL-4DC在CD40L(50ng/ml)、TLR2配体(100ng/ml)、TLR3配体(100nM)、TLR4配体(20ng/ml)、IL-10(20ng/ml)、IL-15(100ng/ml)、IFNa(500U/ml)和IL-4(50ng/ml)存在下培养24小时。细胞用抗Dectin-1或对照单抗染色。虚线表示用同型对照抗体染色的细胞。灰色和空的柱状图分别表示在没有任何刺激物和含刺激物的培养基中培养的细胞。
通过Dectin-1的信号传导刺激DC产生细胞因子和趋化因子：树突细胞是主要的免疫细胞，依赖于其活化决定免疫应答的结果为诱导或耐受(18)。Dectin-1在人DC活化中的作用未被彻底地研究。我们制备了产生小鼠抗hDectin-1单抗的8个不同杂交瘤克隆，通过测定DC分泌的细胞因子和趋化因子，确定个体的单抗是否能激活DC。图3中的数据显示尤其是PAB47和PAB49可活化DC产生显著量的IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p40、IP-10和MIP-1a。PAB187为已知活化DC的抗CD40单抗。PAB85是对照抗体。
图3显示抗Dectin-1单抗活化DC。将1x10e5/200ulIFNDC在包被有不同克隆的单抗的平板中培养18小时。通过Luminex分析培养物上清液以测定细胞因子和趋化因子。
图4显示通过Dectin-1的信号传导可导致IL-4DC和IFNDC的活化。对于IFNDC，抗Dectin-1单抗刺激DC以表达水平显著增加的CD86、CD83、CD80和HLA-DR(图4A)。抗Dectin-1单抗还活化IL-4DC表达水平增加的CD86、CD80和HLA-DR(图4B)。
通过Dectin-1的信号传导增大了通过TLR的信号传导：通过Dectin-1的信号可与通过TLR的信号协同用于增强DC的活化(图5)。已知Dectin-1与TLR2协同作用。然而，在本研究中，我们显示在活化DC中，Dectin-1与TLR4之间的协同作用要强于Dectin-1与TLR2之间的协同作用。Dectin-1与TLR4之间的这一协同作用导致DC的IL-10、IL-1b、TNFα和IL-12p40的产生显著增加。我们还用抗共激活分子，包括CD86、CD80、CD83和CD40染色细胞；该协同作用并没有导致所测试的共激活分子的表达增加。
Dectin-1和TLR4之间的协同作用导致增强的抗原特异性CD8T细胞应答：为测试Dectin-1和TLR介导的信号传导的协同作用是否导致增强的免疫应答，测试了DC致敏Mart-1特异性CD8T细胞的能力(图6)。如图6A中所示，Dectin-1和TLR4L的协同作用导致大于5倍数目的Mart-1特异性CD8T细胞应答。我们还观察到Dectin-1和TLR2之间的协同作用导致增强的Mart-1特异性CD8T细胞致敏。图6中的数据可用于将来的疫苗开发。
通过Dectin-1刺激的DC产生的IL-10导致增强的Mart-1特异性CD8T细胞致敏：如图3和图5中所示，通过Dectin-1的信号传导导致DC产生的IL-10(CD8T细胞应答的抑制性细胞因子)量显著增加。当Dectin-1与TLR配体协同作用时，IL-10的量显著增加。然而，不考虑DC产生的IL-10，单独用抗Dectin-1或用抗Dectin-1和TLR配体刺激的DC均导致增强的Mart-1特异性CD8T细胞致敏(图6)。因此，可能在致敏中IL-10可能有助于抗原特异性CD8T细胞致敏。为检测这一假设，我们在培养物中添加抗IL-10抗体，图7中的数据表明来自用抗Dectin-1和TLR配体刺激的DC的IL-10增强Mart-1特异性CD8T细胞致敏。当用酵母聚糖刺激DC时观察到类似的结果。当相同的DC用酵母聚糖刺激时，DC产生了显著量的IL-10(1x10e5DC产生超过1000pg/ml)(数据未显示)。由于用抗Dectin-1单抗刺激的DC产生显著量的IL-10，因此该IL-10介导的增强的抗原特异性CD8T细胞致敏可用于将来的疫苗开发。
用抗Dectin-1活化的DC表达的IL-15和4-1BBL的水平增加：为进一步分析抗Dectin-1在DC活化中的作用，用抗Dectin-1刺激IFN DC，然后用抗IL-15和4-1BBL染色细胞。图8中的数据显示通过Dectin-1的信号传导增加了IL15和4-1BBL的表达，IL15和4-1BBL可导致增强的体液和细胞免疫应答。已知IL-15在CD8T细胞应答和B细胞增殖和抗体产生中起重要作用。4-1BBL是共刺激分子，其导致DC介导的CD8T细胞应答-通过CD137/4-1BB及其自身的人4-1BBL信号。其胞质尾区参与反向信号传导，导致T细胞的凋亡和单核细胞的细胞因子(IL-6、TNF-α)分泌。4-1BBL与CD137/4-1BB的结合产生许多效应，在T细胞回忆应答中起重要作用。其在初次应答末期维持T细胞数目，并诱导CD4+和CD8+T细胞增殖和分泌细胞因子，例如CD4+细胞中的IL2和IFN-γ，CD8+细胞中的IFN-γ。
通过Dectin-1刺激的DC诱导强的体液免疫应答：DC通过为T依赖的和非T依赖的B细胞应答提供信号(19-22)以及传递抗原至B细胞(23，24)而在体液免疫应答中起重要作用。除DC外，作为第三信号的通过TLR9的信号传导对于足够的B细胞应答也是必须的(25，26)。Dectin-1可影响TLR9配体CpG存在下的DC介导的体液免疫应答。用抗Dectin-1单抗刺激6天IL-4DC，然后在CD40L或CpG存在下共培养纯化的B细胞。如图9a和图9b中所示，与对照单抗刺激的DC相比，用抗Dectin-1单抗活化的DC导致增强的B细胞增殖(通过CFSE稀释显示)和浆细胞分化(CD38增加)。
通过ELISA测定产生的总免疫球蛋白(Ig)的量(图9a和b)。与B细胞增殖和浆细胞分化一致，与抗Dectin-1单抗刺激的DC一起培养的B细胞导致在CD40L和CpG存在下总免疫球蛋白的产生显著增加。
本发明可用于通过Dectin-1特异性活化的试剂的治疗性应用，所述试剂例如作为疫苗中的佐剂或作为免疫受损个体中的免疫系统刺激剂。另外，所述发现预期阻断通过Dectin-1的天然或异常调节的活化可能具有应用(例如用于在移植固定(setting)中引起耐受，或改善自体免疫疾病)。
抗Dectin-1单抗活化B细胞：CD19+B细胞表达Dectin-1(图1)，这预期B细胞上表达的Dectin-1的可能作用。图10A中的数据显示，触发B细胞上的Dectin-1导致CpG存在下增强的B细胞增殖和浆细胞分化。一致地，图10B显示用抗Dectin-1单抗活化的B细胞分泌的总IgM增加，而非IgG和IgA增加。
上述关于通过Dectin-1结合对B细胞的直接作用的发现增加了上述通过Dectin-1作用或针对Dectin-1作用的试剂的治疗性应用的范围。
Dectin-1在T细胞应答中的作用：通过Dectin-1刺激的DC表达的共刺激分子的水平提高，且细胞因子和趋化因子的产生也增加(图3和4)，表明Dectin-1有助于增强细胞免疫应答以及体液免疫应答。这通过测量抗原特异性CD8T细胞应答来检测(图11)。图11中的数据显示通过Dectin-1活化的DC导致增强的Flu M1蛋白特异性记忆CD8T细胞应答(图11a)。更重要的是，通过Dectin-1的信号传导允许DC将Mart-1肽致敏和交叉致敏至CD8T细胞(图11b和c中)。这表明Dectin-1在增强DC功能方面具有重要作用，导致改善的抗原至CD8T细胞的致敏和交叉致敏。因此，抗Dectin-1单抗和抗原融合蛋白诱导强的抗原特异性CD8T细胞应答，表明由抗Dectin-1单抗组成的试剂可用于开发针对癌症和感染的疫苗。
可溶形式的抗Dectin-1单抗活化DC，导致来自正常供体的Mart-1特异性CD8T细胞增强的致敏。我们已显示可溶性抗Dectin-1单抗可活化DC，因此我们检测了是否用可溶性抗Dectin-1刺激的DC能够增强抗原特异性CD8T细胞应答。图12中的数据显示，用可溶性抗Dectin-1活化的DC导致来自正常供体的Mart-1特异性CD8T细胞增强的致敏。本研究中制备的抗CD40可溶形式还导致增强的CD8T细胞致敏。
人扁桃体B细胞基于Dectin-1的表达分成2组：来自人扁桃体的细胞用抗Dectin-1和其他抗体染色。如图13所示，CD3+T细胞不表达Dectin-1(左侧)。然而，有两组CD19+B细胞，一组不表达Dectin-1，而另一组CD19+B细胞表达Dectin-1，类似于来自正常供体的PBMC的CD19+B细胞。这使得可能开发新的基于抗Dectin-1的癌症治疗剂和疫苗。
人皮肤和淋巴结中的细胞表达Dectin-1：表达Dectin-1的细胞可通过IHC在人皮肤和淋巴结中检测。用核染剂DAPI(蓝色)和抗Dectin-1(红色)染色组织切片。图14显示人皮肤和淋巴结均含有表达高水平Dectin-1的细胞。这是一项重要的观察结果，因为其揭示了体内表达Dectin-1的细胞-准确所在的位置(皮肤)是给予例如抗Dectin-1靶向抗原的优选位点。
非人灵长类动物体内DC表达Dectin-1-非人灵长类(食蟹猴)的血液DC-猴PBMC用抗Dectin-1单抗和对其他细胞标记物CD3、CD14、CD11c、CD27、CD56和CD16的抗体染色。图15中的数据显示CD14和CD11c+细胞均被抗人Dectin-1单抗染色。与CD14+和CD11c+细胞不同，CD3+、CD16+、CD27+和CD56+细胞不表达Dectin-1(数据未显示)。该数据表明某些抗人Dectin-1单抗对猴抗原呈递细胞具有交叉反应性。这大大有利于本文所描述的发明的实施，因为猴可用作预期的人治疗的有效且安全研究的有效模型。
上述发现增强并拓宽了通过Dectin-1起作用的试剂的治疗性应用范围。DC的Dectin-1活化影响了邻近的T细胞，指导它们增强增殖。此外，当抗原在该相互作用中呈递时，Dectin-1活化的DC导致抗原特异性T细胞的扩增加强。这显示Dectin-1活化，例如在疫苗固定中，可指导抗原特异性原初T细胞的选择性扩增-其与上述B细胞的Dectin-1活化的直接和间接作用一起，明确地预期抗原特异性B细胞的扩增，以及由此的抗原特异性抗体的产生。
考虑任何本说明书中讨论的实施方案可通过本发明的任何方法、试剂盒、试剂或组合物实现，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于完成本发明的方法。
应理解，本文描述的特定实施方案以例证的方式显示而不作为本发明的限制。不背离本发明的范围的前提下，可以在多种实施方案中使用本发明的基本特征。本领域技术人员将识别或仅使用常规实验能够确定本文描述的特定操作的许多等价物。这样的等价物被认为是在本发明的范围之内并被权利要求书所覆盖。
在说明书中提到的所有出版物和专利申请指示了本发明所属领域技术人员的技能水平。所有出版物和专利申请均引入本文作为参考，其程度如同各单个出版物或专利申请特别且单独地指出引入本文作为参考一样。
词语″一″当和术语″包括″、“包含”、“含有”在权利要求书和/或说明书中一起使用时可以表示″一个(种)″，但是也与″一个(种)或多个(种)″、″至少一个(种)″和″一个(种)或一个(种)以上″的意思一致。在权利要求书中术语″或″的使用用于表示″和/或″，除非尽管公开的内容支持指代唯一的替换物以及″和/或″的定义，但是权利要求书中明确指出指的是唯一的替换物或替换物是相互排斥的。贯穿本申请，术语″大约″用于表示数值包括装置、使用来测定该值的方法的固有误差变异，或存在于研究受试者之中的变化。
如本说明书和权利要求书中所用，词语″包括″(及其任何形式)、″具有″(及其任何形式)、″包含″(及其任何形式)或″含有″(及其任何形式)是包含的或开放的并且不排除另外的、未列举的元件或方法步骤。
本文使用的术语″或其组合″指在该术语之前列举的项目的所有排列与组合。例如，″A、B、C或其组合″意指包含A、B、C、AB、AC、BC或ABC至少一个，以及如果在特定的情况下顺序是重要的，还包含BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续这个例子，明确包括的是包含一个或多个项目或术语的重复的组合，诸如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。熟练的技术人员可以理解在任何组合中通常没有对项目或术语数目的限制，除非从上下文中是显然的。
按照本申请公开的内容而不需要过度的实验，能够制备及实施本文公开及请求保护的所有组合物和/或方法。虽然本发明的组合物和方法已经就优选的实施方案进行了描述，但是本领域技术人员清楚，在不背离本发明的构思、精神及范围的前提下，可以将变化应用于本文所描述的组合物和/或方法以及本文所描述的方法的步骤中或步骤的序列中。所有这样的对本领域技术人员而言显而易见的类似替代和修改被认为在所附的权利要求书所定义的本发明的精神、范围及构思的范围之内。
参考文献
1.Figdor，C.G.，Y.van Kooyk，and G.J.Adema.2002.C-type lectin receptorson dendritic cells and Langerhans cells.(树突状细胞和郎格汉斯细胞表面的C型外源凝集素受体)Nat Rev Immunol(自然综述免疫学)2：77-84.
2.Pyz，E.，A.S.Marshall，S.Gordon，and G.D.Brown.2006.C-type lectin-likereceptors on myeloid cells.(骨髓细胞表面的类C型外源凝集素受体)Ann Med(医学年报)38：242-251.
3.Brown，G.D.2006.Dectin-1：a signalling non-TLR pattern-recognitionreceptor.(树突状细胞相关性C型植物血凝素-1：非TLR型信号传输识别受体)Nat Rev Immunol(自然综述免疫学)6：33-43.
4.Geijtenbeek，T.B.，D.J.Krooshoop，D.A.Bleijs，S.J.van Vliet，G.C.vanDuijnhoven，V.Grabovsky，R.Alon，C.G.Figdor，and Y.van Kooyk.2000.DC-SIGN-ICAM-2interaction mediates dendritic cell trafficking.(DC-SIGN-ICAM-2相互作用介导树突状细胞移行)Nat Immunol(自然免疫)1：353-357.
5.Geijtenbeek，T.B.，R.Torensma，S.J.van Vliet，G.C.van Duijnhoven，G.J.Adema，Y.van Kooyk，and C.G.Figdor.2000.Identification of DC-SIGN，anovel dendritic cell-specific ICAM-3receptor that supports primary immuneresponses.(维持初级免疫应答的树突状细胞特异性的新型ICAM-3受体DC-SIGN的鉴定)Cell(细胞)100：575-585.
6.d′Ostiani，C.F.，G.Del Sero，A.Bacci，C.Montagnoli，A.Spreca，A.Mencacci，P.Ricciardi-Castagnoli，and L.Romani.2000.Dendritic cells discriminatebetween yeasts and hyphae of the fungus Candida albicans.Implications forinitiation of T helper cellimmunity in vitro and in vivo.(树突状细胞区分酵母与白念珠菌菌丝：体内和体外的T辅助细胞免疫的启示)J Exp Med(实验医学杂志)191：1661-1674.
7.Fradin，C.，D.Poulain，and T.Jouault.2000.beta-1，2-linked oligomannosidesfrom Candida albicans bind to a 32-kilodalton macrophage membrane proteinhomologous to the mammalian lectin galectin-3.(白色念球菌的beta-1-2-连接寡聚甘露糖结合与哺乳动物外源凝集素半乳凝集素-3同源的32kD的巨噬细胞膜蛋白)Infect Immun(感染与免疫)68：4391-4398.
8.Cambi，A.，K.Gijzen，J.M.de Vries，R.Torensma，B.Joosten，G.J.Adema，M.G.Netea，B.J.Kullberg，L.Romani，and C.G.Figdor.2003.The C-type lectinDC-SIGN(CD209)is an antigen-uptake receptor for Candida albicans on dendriticcells.(C型外源凝集素DC-SIGN(CD209)是树突状细胞上白色念珠菌的抗原摄取受体)Eur J Immunol(欧洲免疫学杂志)33：532-538.
9.Netea，M.G.，J.W.Meer，I.Verschueren，and B.J.Kullberg.2002.CD40/CD40ligand interactions in the host defense against disseminated Candidaalbicans infection：the role ofmacrophage-derived nitric oxide.(在宿主针对弥散性白念珠菌感染的防御中CD40/CD40配体的相互作用：巨噬细胞产生的一氧化氮的功能)Eur J Immunol(欧洲免疫学杂志)32：1455-1463.
10.Lee，S.J.，S.Evers，D.Roeder，A.F.Parlow，J.Risteli，L.Risteli，Y.C.Lee，T.Feizi，H.Langen，and M.C.Nussenzweig.2002.Mannose receptor-mediatedregulation of serum glycoprotein homeostasis.(甘露糖受体介导的血清糖蛋白动态平衡调节)Science(科学)295：1898-1901.
11.Maeda，N.，J.Nigou，J.L.Herrmann，M.Jackson，A.Amara，P.H.Lagrange，G.Puzo，B.Gicquel，and O.Neyrolles.2003.The cell surface receptor DC-SIGNdiscriminates between Mycobacterium species through selective recognition of themannose caps on lipoarabinomannan.(细胞表面受体DC-SIGN通过对阿拉伯树胶酸上的甘露糖末端的选择性区分识别分支杆菌属)J Biol Chem(生物化学杂志)278：5513-5516.
12.Tailleux，L.，O.Schwartz，J.L.Herrmann，E.Pivert，M.Jackson，A.Amara，L.Legres，D.Dreher，L.P.Nicod，J.C.Gluckman，P.H.Lagrange，B.Gicquel，and O.Neyrolles.2003.DC-SIGN is the major Mycobacterium tuberculosis receptor onhuman dendritic cells.(DC-SIGN是人类树突状细胞上主要的结核分歧杆菌受体)J Exp Med(实验医学杂志)197：121-127.
13.Geijtenbeek，T.B.，S.J.Van Vliet，E.A.Koppel，M.Sanchez-Hernandez，C.M.Vandenbroucke-Grauls，B.Appelmelk，and Y.Van Kooyk.2003.Mycobacteriatarget DC-SIGN to suppress dendritic cell function.(分支杆菌以DC-SIGN为目标抑制树突状细胞功能)J Exp Med(实验医学杂志)197：7-17.
14.Cooper，A.M.，A.Kipnis，J.Turner，J.Magram，J.Ferrante，and I.M.Orme.2002.Mice lacking bioactive IL-12can generate protective，antigen-specificcellular responses to mycobacterial infection only if the IL-12p40subunit ispresent.(缺乏具有生物活性的IL-12的小鼠仅在IL-12p40亚基存在的情况下能够针对分支杆菌感染产生保护性的抗原特异性的细胞应答)J Immunol(免疫学杂志)168：1322-1327.
15.Bates，E.E.，N.Fournier，E.Garcia，J.Valladeau，I.Durand，J.J.Pin，S.M.Zurawski，S.Patel，J.S.Abrams，S.Lebecque，P.Garrone，and S.Saeland.1999.APCs express DCIR，a novel C-type lectin surface receptor containing animmunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif.(抗原递呈细胞表达树突状细胞免疫受体，一种含有基于酪氨酸抑制结构域疫受体新型C型外源凝集素表面受体)J Immunol(免疫学杂志)163：1973-1983.
16.Bendtsen，J.D.，H.Nielsen，G.von Heijne，and S.Brunak.2004.Improvedprediction of signal peptides：SignalP 3.0.(改进的信号肽预测：SignalP 3.0)JMol Biol(分子生物学杂志)340：783-795.
17.Shulman，M.，C.D.Wilde，G.Kohler，M.J.Shulman，N.S.Rees，D.Atefi，J.T.Horney，S.B.Eaton，W.Whaley，J.T.Galambos，H.Hengartner，L.R.Shapiro，and L.Zemek.1978.A better cell line for making hybridomas secreting specificantibodies.(制备杂种瘤分泌的特定抗体的更好的细胞系)Nature(自然)276：269-270.
18.Banchereau，J.，F.Briere，C.Caux，J.Davoust，S.Lebecque，Y.J.Liu，B.Pulendran，and K.Palucka.2000.Immunobiology of dendritic cells.(树突状细胞的免疫生物学)Annu Rev Immunol(免疫学年评)18：767-811.
19.Wykes，M.，and G.MacPherson.2000.Dendritic cell-B-cell interaction：dendritic cells provide B cells with CD40-independent proliferation signals andCD40-dependent survival signals.(树突状细胞和B细胞的相互作用：树突状细胞为B细胞提供CD40无关的增殖信号以及CD40相关的生存信号)Immunology(免疫学)100：1-3.
20.Balazs，M.，F.Martin，T.Zhou，and J.Kearney.2002.Blood dendritic cellsinteract with splenic marginal zone B cells to initiate T-independent immuneresponses.(血液树突状细胞与脾脏边缘区B细胞相互作用以触发T无关的免疫应答)Immunity(免疫)17：341-352.
21.Kikuchi，T.，S.Worgall，R.Singh，M.A.Moore，and R.G.Crystal.2000.Dendritic cells genetically modified to express CD40 ligand and pulsed withantigen can initiate antigen-specific humoral immunity independent of CD4+Tcells.(树突状细胞转基因表达CD40配体并在抗原致敏的情况下可以触发CD4+T细胞无关的抗原特异的体液免疫)Nat Med(自然医学)6：1154-1159.
22.Dubois，B.，J.M.Bridon，J.Fayette，C.Barthelemy，J.Banchereau，C.Caux，and F.Briere.1999.Dendritic cells directly modulate B cell growth anddifferentiation.(树突状细胞直接介导B细胞生长及分化)J Leukoc Biol(白血球生物学杂志)66：224-230.
23.Qi，H.，J.G.Egen，A.Y.Huang，and R.N.Germain.2006.Extrafollicularactivation of lymph node B cells by antigen-bearing dendritic cells.(淋巴结B细胞被携带抗原的树突状细胞小结外激活)Science(科学)312：1672-1676.
24.Bergtold，A.，D.D.Desai，A.Gavhane，and R.Clynes.2005.Cell surfacerecycling of internalized antigen permits dendritic cell priming of B cells.(内在化抗原的细胞表面回收允许树突状细胞启动B细胞)Immunity(免疫)23：503-514.
25.Ruprecht，C.R.，and A.Lanzavecchia.2006.Toll-like receptor stimulation as athird signal required for activation of human naive B cells.(类铎受体激发作为人类幼稚B细胞激活所需的第三信号)Eur J Immunol(欧洲免疫学杂志)36：810-816.
26.Bernasconi，N.L.，E.Traggiai，and A.Lanzavecchia.2002.Maintenance ofserological memory by polyclonal activation of human memory B cells.(通过人类记忆B细胞多克隆激活的血清记忆维持)Science(科学)298：2199-2202.
27.Reddy，M.P.，C.A.Kinney，M.A.Chaikin，A.Payne，J.Fishman-Lobell，P.Tsui，P.R.Dal Monte，M.L.Doyle，M.R.Brigham-Burke，D.Anderson，M.Reff，R.Newman，N.Hanna，R.W.Sweet，and A.Truneh.2000.Elimination of Fcreceptor-dependent effector functions of a modified IgG4monoclonal antibody tohuman CD4.(在修饰的IgG4对人类CD4的单克隆抗体中Fc受体依赖效应子功能的减少)J Immunol(免疫学杂志)164：1925-1933.
序列表
<110>J·班彻罗
G·祖拉夫斯基
S·祖拉夫斯基
S·吴
L·倪
<120>通过DECTIN-1激活人抗原呈递细胞的治疗性应用
<130>BHCS：1047
<150>US 60/891,425
<151>2007-02-23
<160>25
<170>PatentIn version 3.4
<210>1
<211>186
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>1
gacaccaccg aggcccgcca cccccacccc cccgtgacca cccccaccac caccgaccgg     60
aagggcacca ccgccgagga gctggccggc atcggcatcc tgaccgtgat cctgggcggc    120
aagcggacca acaacagcac ccccaccaag ggcgaattct gcagatatcc atcacactgg    180
cggccg                                                               186
<210>2
<211>61
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>2
Asp Thr Thr Glu Ala Arg His Pro His Pro Pro Val Thr Thr Pro Thr
1               5                   10                  15
Thr Asp Arg Lys Gly Thr Thr Ala Glu Glu Leu Ala Gly Ile Gly Ile
            20                  25                  30
Leu Thr Val Ile Leu Gly Gly Lys Arg Thr Asn Asn Ser Thr Pro Thr
        35                  40                  45
Lys Gly Glu Phe Cys Arg Tyr Pro Ser His Trp Arg Pro
    50                  55                  60
<210>3
<211>447
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>3
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
        35                  40                  45
Gly Val Met Trp Thr Gly Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met
    50                  55                  60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asn Asn Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val
                85                  90                  95
Arg Asp Ala Val Arg Tyr Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser
        435                 440                 445
<210>4
<211>213
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>4
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
            20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
        35                  40                  45
Ala Thr Ser His Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
        115                 120                 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
    130                 135                 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
                165                 170                 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
            180                 185                 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
        195                 200                 205
Asn Arg Gly Glu Cys
    210
<210>5
<211>450
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>5
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
            20                  25                  30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Ser
65                  70                  75                  80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Arg Ala Val Leu Val Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser
        115                 120                 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
    130                 135                 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145                 150                 155                 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
                165                 170                 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
            180                 185                 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
        195                 200                 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
                245                 250                 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
            260                 265                 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
        275                 280                 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
    290                 295                 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305                 310                 315                 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser SerIle Glu Lys Thr
                325                 330                 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
            340                 345                 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
        355                 360                 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
    370                 375                 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385                 390                 395                 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
                405                 410                 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
            420                 425                 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
        435                 440                 445
Ala Ser
    450
<210>6
<211>213
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>6
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Val Met Ser Ala Ser Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Ser Ser Ser Leu Ser Tyr Met
            20                  25                  30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ser Pro Lys Leu Trp Leu Tyr
        35                  40                  45
Ser Thr Ser Ile Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65                  70                  75                  80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Ser Pro Phe Thr
                85                  90                  95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
            100                 105                 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
        115                 120                 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
    130                 135                 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145                 150                 155                 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
                165                 170                 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
            180                 185                 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
        195                 200                 205
Asn Arg Gly Glu Cys
    210
<210>7
<211>448
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>7
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
            20                  25                  30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Pro Tyr Gly Ser Glu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
        195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225                 230                 235                 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                245                 250                 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
            260                 265                 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
        275                 280                 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
    290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                405                 410                 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
            420                 425                 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser
        435                 440                 445
<210>8
<211>214
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Lys Tyr Ala Ala Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Gly Val Glu Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Gly His Ser Phe Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
<210>9
<211>781
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>9
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
        35                  40                  45
Gly Val Met Trp Thr Gly Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met
    50                  55                  60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asn Asn Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val
                85                  90                  95
Arg Asp Ala Val Arg Tyr Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
         275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser Asp
        435                 440                 445
Thr Thr Glu Pro Ala Thr Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Asp Thr Ile
    450                 455                 460
Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Asp Thr Val Asp Thr Val
465                 470                 475                 480
Leu Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ser Val Asn Leu Leu Glu Asp
                485                 490                 495
Ser His Asn Gly Lys Leu Cys Arg Leu Lys Gly Ile Ala Pro Leu Gln
            500                 505                 510
Leu Gly Lys Cys Asn Ile Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Glu Cys
        515                 520                 525
Asp Pro Leu Leu Pro Val Arg Ser Trp Ser Tyr Ile Val Glu Thr Pro
    530                 535                 540
Asn Ser Glu Asn Gly Ile Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Ile Asp Tyr Glu
545                 550                 555                 560
Glu Leu Arg Glu Gln Leu Ser Ser Val Ser Ser Phe Glu Arg Phe Glu
                565                 570                 575
Ile Phe Pro Lys Glu Ser Ser Trp Pro Asn His Asn Thr Asn Gly Val
            580                 585                 590
Thr Ala Ala Cys Ser His Glu Gly Lys Ser Ser Phe Tyr Arg Asn Leu
        595                 600                 605
Leu Trp Leu Thr Glu Lys Glu Gly Ser Tyr Pro Lys Leu Lys Asn Ser
    610                 615                 620
Tyr Val Asn Lys Lys Gly Lys Glu Val Leu Val Leu Trp Gly Ile His
625                 630                 635                 640
His Pro Pro Asn Ser Lys Glu Gln Gln Asn Leu Tyr Gln Asn Glu Asn
                645                 650                 655
Ala Tyr Val Ser Val Val Thr Ser Asn Tyr Asn Arg Arg Phe Thr Pro
            660                 665                 670
Glu Ile Ala Glu Arg Pro Lys Val Arg Asp Gln Ala Gly Arg Met Asn
        675                 680                 685
Tyr Tyr Trp Thr Leu Leu Lys Pro Gly Asp Thr Ile Ile Phe Glu Ala
    690                 695                 700
Asn Gly Asn Leu Ile Ala Pro Met Tyr Ala Phe Ala Leu Ser Arg Gly
705                 710                 715                 720
Phe Gly Ser Gly Ile Ile Thr Ser Asn Ala Ser Met His Glu Cys Asn
                725                 730                 735
Thr Lys Cys Gln Thr Pro Leu Gly Ala Ile Asn Ser Ser Leu Pro Tyr
            740                 745                 750
Gln Asn Ile His Pro Val Thr Ile Gly Glu Cys Leu Lys Tyr Val Arg
        755                 760                 765
Ser Ala Lys Leu Arg Met Val His His His His His His
    770                 775                 780
<210>10
<211>781
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>10
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
        35                  40                  45
Gly Val Met Trp Thr Gly Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met
    50                  55                  60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asn Asn Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val
                85                  90                  95
Arg Asp Ala Val Arg Tyr Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser Asp
        435                 440                 445
Thr Thr Glu Pro Ala Thr Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Asp Gln Ile
    450                 455                 460
Cys Ile Gly Tyr His Ala Asn Asn Ser Thr Glu Gln Val Asp Thr Ile
465                 470                 475                 480
Met Glu Lys Asn Val Thr Val Thr His Ala Gln Asp Ile Leu Glu Lys
                485                 490                 495
Lys His Asn Gly Lys Leu Cys Asp Leu Asp Gly Val Lys Pro Leu Ile
            500                 505                 510
Leu Arg Asp Cys Ser Val Ala Gly Trp Leu Leu Gly Asn Pro Met Cys
        515                 520                 525
Asp Glu Phe Ile Asn Val Pro Glu Trp Ser Tyr Ile Val Glu Lys Ala
    530                 535                 540
Asn Pro Val Asn Asp Leu Cys Tyr Pro Gly Asp Phe Asn Asp Tyr Glu
545                 550                 555                 560
Glu Leu Lys His Leu Leu Ser Arg Ile Asn His Phe Glu Lys Ile Gln
                565                 570                 575
Ile Ile Pro Lys Ser Ser Trp Ser Ser His Glu Ala Ser Leu Gly Val
            580                 585                 590
Ser Ser Ala Cys Pro Tyr Gln Gly Lys Ser Ser Phe Phe Arg Asn Val
        595                 600                 605
Val Trp Leu Ile Lys Lys Asn Ser Thr Tyr Pro Thr Ile Lys Arg Ser
     610                 615                 620
Tyr Asn Asn Thr Asn Gln Glu Asp Leu Leu Val Leu Trp Gly Ile His
625                 630                 635                 640
His Pro Asn Asp Ala Ala Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Gln Asn Pro Thr
                645                 650                 655
Thr Tyr Ile Ser Val Gly Thr Ser Thr Leu Asn Gln Arg Leu Val Pro
            660                 665                 670
Arg Ile Ala Thr Arg Ser Lys Val Asn Gly Gln Ser Gly Arg Met Glu
        675                 680                 685
Phe Phe Trp Thr Ile Leu Lys Pro Asn Asp Ala Ile Asn Phe Glu Ser
    690                 695                 700
Asn Gly Asn Phe Ile Ala Pro Glu Tyr Ala Tyr Lys Ile Val Lys Lys
705                 710                 715                 720
Gly Asp Ser Thr Ile Met Lys Ser Glu Leu Glu Tyr Gly Asn Cys Asn
                725                 730                 735
Thr Lys Cys Gln Thr Pro Met Gly Ala Ile Asn Ser Ser Met Pro Phe
            740                 745                 750
His Asn Ile His Pro Leu Thr Ile Gly Glu Cys Pro Lys Tyr Val Lys
        755                 760                 765
Ser Asn Arg Leu Val Leu Ala His His His His His His
    770                 775                 780
<210>11
<211>695
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>11
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
            20                  25                  30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Pro Tyr Gly Ser Glu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
        195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225                 230                 235                 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                245                 250                 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
            260                 265                 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
        275                 280                 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
    290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                405                 410                 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
            420                 425                 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser
        435                 440                 445
Asp Met Ala Lys Lys Glu Thr Val Trp Arg Leu Glu Glu Phe Gly Arg
    450                 455                 460
Pro Ile Val Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser
465                 470                 475                 480
Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe
                485                 490                 495
Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr
            500                 505                 510
Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala
        515                 520                 525
Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp
    530                 535                 540
Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met
545                 550                 555                 560
Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gln
                565                 570                 575
Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly Glu
            580                 585                 590
Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg Met
        595                 600                 605
Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Art Gln Gly Pro Lys Glu Pro
    610                 615                 620
Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln
625                 630                 635                 640
Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln
                645                 650                 655
Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala
            660                 665                 670
Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro
        675                 680                 685
Gly His Lys Ala Arg Val Leu
    690                 695
<210>12
<211>712
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>12
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
            20                  25                  30
Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Pro Tyr Gly Ser Glu Ala Tyr Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
        195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225                 230                 235                 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
                245                 250                 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
            260                 265                 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
         275                 280                 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
    290                 295                 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305                 310                 315                 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
                325                 330                 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
            340                 345                 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
        355                 360                 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
    370                 375                 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385                 390                 395                 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
                405                 410                 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
            420                 425                 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala Ser
        435                 440                 445
Asp Thr Thr Glu Pro Ala Thr Pro Thr Thr Pro Val Thr Thr Pro Thr
    450                 455                 460
Thr Thr Leu Leu Ala Pro Leu Ile Leu Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp
465                 470                 475                 480
Glu Cys Glu Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Leu Val Ala Ser Arg
                485                 490                 495
Gly Arg Ala Val Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu
            500                 505                 510
Thr Ala Ala His Cys Ile Arg Asn Lys Ser Val Ile Leu Leu Gly Arg
        515                 520                 525
His Ser Leu Phe His Pro Glu Asp Thr Gly Gln Val Phe Gln Val Ser
    530                 535                 540
His Ser Phe Pro His Pro Leu Tyr Asp Met Ser Leu Leu Lys Asn Arg
545                 550                 555                 560
Phe Leu Arg Pro Gly Asp Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg
                565                 570                 575
Leu Ser Glu Pro Ala Glu Leu Thr Asp Ala Val Lys Val Met Asp Leu
            580                 585                 590
Pro Thr Gln Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp
        595                 600                 605
Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu Phe Leu Thr Pro Lys Lys Leu Gln Cys
    610                 615                 620
Val Asp Leu His Val Ile Ser Asn Asp Val Cys Ala Gln Val His Pro
625                 630                 635                 640
Gln Lys Val Thr Lys Phe Met Leu Cys Ala Gly Arg Trp Thr Gly Gly
                645                 650                 655
Lys Ser Thr Cys Ser Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly
            660                 665                 670
Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Ser Glu Pro Cys Ala Leu Pro
        675                 680                 685
Glu Arg Pro Ser Leu Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile
    690                 695                 700
Lys Asp Thr Ile Val Ala Asn Pro
705                 710
<210>13
<211>522
<212>PRT
<213>人工
<220>
<223>化学合成多肽
<400>13
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1               5                   10                  15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
        35                  40                  45
Gly Val Met Trp Thr Gly Gly Gly Ala Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met
    50                  55                  60
Ser Arg Leu Ser Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Met Asn Asn Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Val
                85                  90                  95
Arg Asp Ala Val Arg Tyr Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr
            100                 105                 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
        115                 120                 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
    130                 135                 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145                 150                 155                 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
                165                 170                 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
            180                 185                 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
        195                 200                 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
    210                 215                 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Ala SerAsn
        435                 440                 445
Ser Pro Gln Asn Glu Val Leu Tyr Gly Asp Val AsnAsp Asp Gly Lys
    450                 455                 460
Val Asn Ser Thr Asp Leu Thr Leu Leu Lys Arg Tyr Val Leu Lys Ala
465                 470                 475                 480
Val Ser Thr Leu Pro Ser Ser Lys Ala Glu Lys Asn Ala Asp Val Asn
                485                 490                 495
Arg Asp Gly Arg Val Asn Ser Ser Asp Val Thr Ile Leu Ser Arg Tyr
            500                 505                 510
Leu Ile Arg Val Ile Glu Lys Leu Pro Ile
        515                 520
<210>14
<211>36
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>14
ggatggtggg aagatggata cagttggtgc agcatc                 36
<210>15
<211>48
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>15
ctaggaacag tcagcacggg acaaactctt ctccacagtg tgaccttc    48
<210>16
<211>37
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>16
gtcactggct cagggaaata gcccttgacc aggcatc               37
<210>17
<211>31
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>17
ccaggcatcc tagagtcacc gaggagccag t                                   31
<210>18
<211>38
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>18
ggtgctggag gggacagtca ctgagctgct catagtgt                            38
<210>19
<211>107
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>19
ctagttgctg gctaatggac cccaaaggct ccctttcctg gagaatactt ctgtttctct    60
ccctggcttt tgagttgtcg tacggattaa ttaagggccc actcgag    107
<210>20
<211>17
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>20
gctagctgat taattaa                                                   17
<210>21
<211>100
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>21
ctagttgctg gctaatggac cccaaaggct ccctttcctg gagaatactt ctgtttctct    60
ccctggcttt tgagttgtcg tacggattaa ttaagggccc                         100
<210>22
<211>46
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>22
gctagcgata caacagaacc tgcaacacct acaacacctg taacaa                  46
<210>23
<211>29
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>23
caccatcacc atcaccattg agcggccgc                                      29
<210>24
<211>70
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>24
gctagcgata caacagaacc tgcaacacct acaacacctg taacaacacc gacaacaaca    60
cttctagcgc                                                           70
<210>25
<211>119
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>化学合成寡核苷酸
<400>25
gctagcccca ttctgagccc cctgaccaaa ggcattctgg gctttgtgtt taccctgacc   60
gtgcccagcg aacgcaaggg tatacttgga ttcgttttca cacttactta agcggccgc    119

Claims (46)

1.一种用于增加Dectin-1表达性抗原呈递细胞的抗原呈递效力的方法，所述方法包括使所述抗原呈递细胞与能够活化所述抗原呈递细胞的抗Dectin-1特异性抗体或其片段接触，其中所述抗原呈递细胞被活化。
2.权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括分离的树突细胞、外周血单核细胞、单核细胞、B细胞、髓样树突细胞及其组合。
3.  权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括已在体外与GM-CSF和IL-4、干扰素α、抗原及其组合一起培养的如下细胞：分离的树突细胞、外周血单核细胞、单核细胞、B细胞、髓样树突细胞及其组合。
4.权利要求1的方法，所述方法还包括活化与GM-CSF和IL-4接触的抗原呈递细胞的步骤，其中与所述Dectin-1特异性抗体或其片段接触增加所述抗原呈递细胞上的CD86、CD80和HLA-DR的表面表达。
5.权利要求1的方法，还包括与干扰素α接触的抗原呈递细胞活化步骤，其中与Dectin-1特异性抗体或其片段接触增加所述抗原呈递细胞上的CD86、CD83、CD80和HLA-DR的表面表达。
6.  权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括树突细胞，所述树突细胞已与GM-CSF和IL-4或干扰素α接触以活化该树突细胞，其中所述活化的树突细胞增加CD86、CD80和HLA-DR的表面表达。
7.权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括树突细胞，所述树突细胞已与GM-CSF和IL-4或干扰素α接触以活化该树突细胞，其中所述活化的树突细胞增加IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p40、IP-10和MIP-1a及其组合的分泌。
8.权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括树突细胞，所述树突细胞已与GM-CSF和IL-4或干扰素α接触，且所述Dectin-1特异性抗体或其片段增加了与通过CD40信号传导有关的活化。
9.  权利要求1的方法，其中所述抗原呈递细胞包括树突细胞，所述树突细胞已与GM-CSF和IL-4或干扰素α接触，且所述Dectin-1特异性抗体或其片段增加了树突细胞的共刺激活性。
10.权利要求1的方法，所述方法还包括共激活所述抗原呈递细胞的步骤，该激活通过TLR4受体进行，其中所述细胞增加细胞因子和趋化因子的产生。
11.权利要求1的方法，所述方法还包括共激活所述抗原呈递细胞的步骤，该激活通过TLR4受体进行，其中所述细胞增加IL-10、IL-1b、TNFα、IL-12p40及其组合的分泌。
12.权利要求1的方法，所述方法还包括共激活所述抗原呈递细胞的步骤，该激活通过TLR4受体，使用TLR4配体、抗TLR4抗体或其片段、抗TLR4-抗Dectin-1杂交抗体或其片段、抗TLR4-抗Dectin-1配体结合物中的至少一种进行。
13.权利要求1的方法，其中Dectin-1特异性抗体或其片段选自克隆15E2.5、11B6.4、15F4.7、14D6.3和9H7.6及其组合。
14.权利要求1的方法，其中通过Dectin-1受体以Dectin-1特异性抗体或其片段活化的树突细胞激活单核细胞、树突细胞、外周血单核细胞、B细胞及其组合。
15.权利要求1的方法，其中Dectin-1特异性抗体或其片段与Cohesin/Dockerin对的一半结合。
16.权利要求1的方法，其中Dectin-1特异性抗体或其片段与Cohesin/Dockerin对的一半结合，且该对的另一半与一种或多种抗原、细胞因子结合，所述细胞因子选自白细胞介素，转化生长因子(TGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，表皮生长因子(EGF)，结缔组织活性肽(CTAP)，成骨因子，以及这些生长因子的生物活性类似物、片段和衍生物，B/T细胞分化因子，B/T细胞生长因子，促有丝分裂细胞因子，趋化细胞因子和趋化因子，集落刺激因子，血管生成因子，IFN-α，IFN-β，IFN-γ，IL1，IL2，IL3，IL4，IL5，IL6，IL7，IL8，IL9，IL10，IL11，IL12，IL13，IL14，IL15，IL16，IL17，IL18等，瘦素，肌肉生长抑制素，巨噬细胞刺激蛋白，血小板衍生生长因子，TNF-α，TNF-β，NGF，CD40L，CD137L/4-IBBL，人淋巴毒素-β，G-CSF，M-CSF，GM-CSF，PDGF，IL-1α，IL1-β，IP-10，PF4，GRO，9E3，促红细胞生成素，内皮抑素，血管抑素，VEGF，包括β转化生长因子(例如TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)在内的转化生长因子(TGF)超基因家族；骨形态发生蛋白(例如BMP-1、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8、BMP-9)；肝素结合生长因子(成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子(IGF))；抑制素(例如抑制素A、抑制素B)；生长分化因子(例如GDF-1)；以及活化素(例如活化素A、活化素B、活化素AB)。
17.一种表达Dectin-1特异性抗体或其片段的杂交瘤，其中所述LOX-1特异性抗体或其片段活化抗原呈递细胞以表达新的表面标记物、分泌一种或多种细胞因子或表达新的表面标记物和分泌一种或多种细胞因子两者兼具。
18.权利要求17的杂交瘤，其中所述杂交瘤选自克隆PAB1、PAB4、PAB5、PAB8、PAB10及其组合。
19.一种用于增强B细胞免疫应答的方法，所述方法包括在抗原和TLR9活化剂存在下用Dectin-1特异性抗体或其片段触发树突细胞上的Dectin-1受体，其中与Dectin-1/TLR9活化的树突细胞接触的B细胞增加抗体产生、分泌细胞因子、增加B细胞活化表面标记物表达及其组合。
20.权利要求19的方法，其中所述B细胞分泌IL-8、MIP-1a、IL-6、TNFα及其组合。
21.权利要求19的方法，其中所述B细胞包括浆细胞。
22.权利要求19的方法，其中所述活化的B细胞表达Dectin-1。
23.权利要求19的方法，其中所述B细胞增加IgM的产生。
24.一种用于增强B细胞免疫应答的方法，所述方法包括用Dectin-1特异性抗体或其片段触发B细胞上的Dectin-1受体，其中所述B细胞增加抗体产生。
25.权利要求24的方法，其中所述B细胞增加分泌性IL-8、MIP-1α、IL-6、TNFα及其组合的产生。
26.权利要求24的方法，其中所述B细胞增加IgG、IgM、IgA及其组合的产生。
27.一种用于增强T细胞活化的方法，所述方法包括用Dectin-1特异性抗体或其片段和TLR4受体触发树突细胞上的Dectin-1受体，并使T细胞与Dectin-1/TLR4活化的树突细胞接触，其中T细胞的活化被增强。
28.权利要求27的方法，其中所述树突细胞进一步与GM-CSF和IL-4、干扰素α、抗原及其组合接触。
29.权利要求27的方法，其中所述Dectin-1特异性抗体或其片段增加IL-10、IL-15及其组合的分泌。
30.权利要求27的方法，其中所述Dectin-1特异性抗体或其片段增加4-1BBL的表面表达。
31.权利要求27的方法，其中所述T细胞在暴露于用抗Dectin-1抗体或其片段活化的树突细胞时增殖。
32.一种抗Dectin-1免疫球蛋白或其部分，其由哺乳动物细胞分泌并且该免疫球蛋白与抗原结合，其中所述免疫球蛋白将所述抗原靶向至抗原呈递细胞。
33.权利要求32的免疫球蛋白，其中所述抗原特异性结构域包括全长抗体、抗体可变区结构域、Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、Fv片段，以及Fabc片段和/或具有部分Fc结构域的Fab片段。
34.一种疫苗，其包含用Dectin-1特异性抗体或其片段活化的树突细胞。
35.权利要求34的疫苗，其中所述疫苗包含SEQ ID NO.1-13中的至少一个。
36.一种模块式rAb载体，其包含Dectin-1特异性抗体结合结构域，该结合结构域与一个或多个包含cohesin-dockerin结合对的一半的抗原载体结构域连接。
37.权利要求36的rAb，其中所述抗原特异性结合结构域包含抗体的至少一部分。
38.权利要求36的rAb，其中所述抗原特异性结合结构域包含与cohesin-dockerin结合对的一半构成融合蛋白的抗体的至少一部分。
39.权利要求36的rAb，其还包含与抗原结合的cohesin-dockerin结合对的互补性一半，所述抗原与模块式rAb载体形成复合物。
40.权利要求36的rAb，其还包含与抗原构成融合蛋白的cohesin-dockerin结合对的互补性一半。
41.权利要求36的rAb，其中所述抗原特异性结构域包括全长抗体、抗体可变区结构域、Fab片段、Fab’片段、F(ab)2片段、Fv片段，以及Fabc片段和/或具有部分Fc结构域的Fab片段。
42.单独地或与共激活剂一起与免疫细胞上的Dectin-1受体结合、联合活化抗原呈递细胞的活性剂用于治疗性应用的用途。
43.免疫细胞上的Dectin-1结合剂用于制备疫苗的用途，所述Dectin-1结合剂与或不与激活剂一起与一个或多个抗原连接。
44.抗Dectin-1剂作为免疫细胞共激活剂用于增强通过免疫细胞上表达的除Dectin-1外的细胞表面受体引起的免疫应答的用途。
45.能够通过Dectin-1受体结合并活化免疫细胞的抗Dectin-1抗体V区序列的用途。
46.与一种或多种毒性剂连接的DC-Dectin-1结合剂用于在已知或怀疑由免疫细胞的通过Dectin-1的不适当激活导致的疾病的情况下或在表达Dectin-1的病理细胞或组织的情况下的治疗性目的的用途。
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Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106148279A (zh) * 2016-07-28 2016-11-23 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种长时间培养b细胞的方法
CN106456736A (zh) * 2014-06-02 2017-02-22 贝勒研究院 用于治疗过敏和炎性疾病的方法和组合物
WO2017201635A1 (zh) * 2016-05-23 2017-11-30 蔡胜和 透明质酸酶的细胞表达及其在实体瘤细胞治疗中的应用
CN109022431A (zh) * 2018-08-06 2018-12-18 苏州吉玛基因股份有限公司 激活免疫反应的cpg-b型寡核苷酸及其应用
CN109310709A (zh) * 2015-12-30 2019-02-05 细胞基因公司 T淋巴细胞生产方法和由此产生的t淋巴细胞
CN113624964A (zh) * 2021-06-29 2021-11-09 上海市第十人民医院 一种侵袭性真菌的检测方法及检测试剂盒

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI422594B (zh) 2007-02-02 2014-01-11 Baylor Res Inst 經由樹狀細胞去唾液酸糖蛋白受體（ｄｃ-ａｓｇｐｒ）接合抗原呈現細胞之藥劑
CN105131112A (zh) 2009-08-29 2015-12-09 Abbvie公司 治疗用dll4结合蛋白
KR20180044441A (ko) 2010-03-02 2018-05-02 애브비 인코포레이티드 치료학적 ｄｌｌ４ 결합 단백질
WO2012021834A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Baylor Research Institute Novel vaccine adjuvants based on targeting adjuvants to antibodies directly to antigen-presenting cells
US20120128710A1 (en) * 2010-11-02 2012-05-24 Baylor Research Institute Enhancement of Pathogen-Specific Memory Th17 Cell Responses
US9078878B2 (en) 2010-12-01 2015-07-14 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF antibodies that selectively inhibit the association of NGF with TrkA, without affecting the association of NGF with p75
US9884909B2 (en) 2010-12-01 2018-02-06 Alderbio Holdings Llc Anti-NGF compositions and use thereof
US9539324B2 (en) 2010-12-01 2017-01-10 Alderbio Holdings, Llc Methods of preventing inflammation and treating pain using anti-NGF compositions
WO2012075340A2 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Alderbio Holdings Llc Anti-ngf compositions and use thereof
US11214610B2 (en) 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
US9067988B2 (en) 2010-12-01 2015-06-30 Alderbio Holdings Llc Methods of preventing or treating pain using anti-NGF antibodies
WO2012122396A1 (en) * 2011-03-08 2012-09-13 Baylor Research Institute Novel vaccine adjuvants based on targeting adjuvants to antibodies directly to antigen-presenting cells
AR088220A1 (es) 2011-08-29 2014-05-21 Baylor Res Inst Activacion de celulas dendriticas humanas por el receptor de dectina-1 o de tipo toll 2 (tlr2) en el control de la alergia y el asma
US20140037606A1 (en) * 2012-08-06 2014-02-06 Eyal Amiel Cell-based, anti-cancer vaccines
US20160296609A1 (en) 2013-06-28 2016-10-13 Baylor Research Institute Dendritic cell asgpr targeting immunotherapeutics for multiple sclerosis
US10286058B2 (en) 2014-01-13 2019-05-14 Baylor Research Institute Vaccines against HPV and HPV-related diseases
EP3142691A4 (en) 2014-05-16 2018-04-11 Baylor Research Institute Methods and compositions for treating autoimmune and inflammatory conditions
EP3045470A1 (en) 2015-01-15 2016-07-20 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des Öffentlichen Rechts Modulators of the function of the core domain of annexins, and uses thereof in autoimmune and/or cancer therapy
US10857228B2 (en) 2015-06-10 2020-12-08 The University Of Tokyo Adjuvant for vaccines, vaccine, and immunity induction method
AU2016329057A1 (en) * 2015-09-30 2018-04-12 Janssen Biotech, Inc. Antagonistic antibodies specifically binding human CD40 and methods of use
PL3468621T3 (pl) 2016-06-10 2023-01-30 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Domena rdzeniowa aneksyn i jej zastosowania w dostarczaniu antygenu i szczepieniu
AU2017292934B2 (en) 2016-07-07 2024-04-04 Bolt Biotherapeutics, Inc. Antibody adjuvant conjugates
WO2020190725A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting her2
US20220177912A1 (en) * 2019-04-12 2022-06-09 The Methodist Hospital Therapeutic particles that enable antigen presenting cells to attack cancer cells
CN111303302A (zh) * 2020-03-19 2020-06-19 芜湖天明生物技术有限公司 一种可溶性高效表达的rChGM-CSF-IFNα融合蛋白及其制备方法和应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
US3949064A (en) 1973-10-26 1976-04-06 Baxter Laboratories, Inc. Method of detecting antigens or antibodies
US4174384A (en) * 1975-06-30 1979-11-13 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US20040258688A1 (en) * 1995-01-31 2004-12-23 Daniel Hawiger Enhanced antigen delivery and modulation of the immune response therefrom
CA2272536A1 (en) * 1996-11-26 1998-06-04 Stressgen Biotechnologies Corp. Immune responses using compositions containing stress proteins
US6046158A (en) * 1996-12-20 2000-04-04 Board Of Regents The University Of Texas Systems Unique dendritic cell-associated C-type lectins, dectin-1 and dectin-2; compositions and uses thereof
US6541011B2 (en) * 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
US5945308A (en) * 1998-04-03 1999-08-31 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human oxidized LDL receptor
US6544780B1 (en) * 2000-06-02 2003-04-08 Genphar, Inc. Adenovirus vector with multiple expression cassettes
GB0112649D0 (en) * 2001-05-24 2001-07-18 Isis Innovation Macrophage receptor
WO2003033695A1 (fr) * 2001-10-11 2003-04-24 Katakura Industries Co., Ltd. Procede de purification de proteine fusionnee recombinee et procede de production de proteine utilisant ledit procede de purification
JP4817625B2 (ja) * 2003-08-11 2011-11-16 一般財団法人阪大微生物病研究会 粘膜免疫誘導アジュバントを含む新規ワクチン
WO2006051632A1 (ja) * 2004-11-12 2006-05-18 Seikagaku Corporation 抗デクチン－１モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
WO2006055729A1 (en) * 2004-11-16 2006-05-26 Transcutaneous Technologies Inc. Iontophoretic device and method for administering immune response-enhancing agents and compositions
WO2006063101A2 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Vaccines for the rapid response to pandemic avian influenza
WO2006082435A1 (en) * 2005-02-04 2006-08-10 Viranative Ab Method and use of interferon compositions for the treatment of avian influenza
CA2601022C (en) * 2005-03-23 2023-03-07 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Use of an influenza virus an oil-in-water emulsion adjuvant to induce cd4 t-cell and/or improved b-memory cell response
US7666596B2 (en) * 2005-05-23 2010-02-23 University Of Alberta Tissue rejection
AU2006297259A1 (en) * 2005-09-30 2007-04-12 Oklahoma Medical Research Foundation Regulation of toll-like receptors on stem cells
GB0605735D0 (en) * 2006-03-22 2006-05-03 Immunobiology Ltd Composition and method for mediating an immune response
JP5543785B2 (ja) * 2007-02-02 2014-07-09 ベイラー リサーチ インスティテュート ヒト化ターゲティングモノクローナル抗体と複合体を形成する複数の可変抗原
JP5904227B2 (ja) * 2014-03-24 2016-04-13 トヨタ自動車株式会社 エンジンの冷却装置

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BROWN GORDON D ET AL: "Dectin-1:a signalling non-TLR pattern-recognition receptor", 《NATURE REVIEWS IMMUNOLOG》 *
PROUDFOOT OWEN ET AL: "receptor-mediated delivery of antigens to dendritic cells:anticancer applications", 《MOLECULAR APPLICATIONS》 *
RAMAKRISHNA ET AL: "Toll-like receptor activation enhances cell-mediated immunity induced by an antibody vaccine targeting human dendritic cells", 《JOURNAL OF TRANSLATIONAL MEDICINE》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106456736A (zh) * 2014-06-02 2017-02-22 贝勒研究院 用于治疗过敏和炎性疾病的方法和组合物
CN109310709A (zh) * 2015-12-30 2019-02-05 细胞基因公司 T淋巴细胞生产方法和由此产生的t淋巴细胞
WO2017201635A1 (zh) * 2016-05-23 2017-11-30 蔡胜和 透明质酸酶的细胞表达及其在实体瘤细胞治疗中的应用
CN106148279A (zh) * 2016-07-28 2016-11-23 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种长时间培养b细胞的方法
CN109022431A (zh) * 2018-08-06 2018-12-18 苏州吉玛基因股份有限公司 激活免疫反应的cpg-b型寡核苷酸及其应用
CN109022431B (zh) * 2018-08-06 2022-02-11 苏州吉玛基因股份有限公司 激活免疫反应的cpg-b型寡核苷酸及其应用
CN113624964A (zh) * 2021-06-29 2021-11-09 上海市第十人民医院 一种侵袭性真菌的检测方法及检测试剂盒

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