CN101669906B

CN101669906B - 吡喹酮注射剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN101669906B
Application number: CN2009100576689A
Authority: CN
Inventors: 朱传刚; 林矫矫; 张磊; 汪勇沛; 陆珂
Original assignee: Shanghai Veterinary Research Institute CAAS
Current assignee: Shanghai Veterinary Research Institute CAAS
Priority date: 2009-07-28
Filing date: 2009-07-28
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2029-07-28
Also published as: CN101669906A

Abstract

本发明公开一种吡喹酮注射剂，包含206佐剂、吡喹酮、以及水溶液或纯净水，其重量百分比为：206佐剂40％～60％、吡喹酮5％～45％、水溶液或纯净水5％～45％。本发明还公开了吡喹酮注射剂的制备方法和应用。本发明吡喹酮注射剂，不仅对感染当天及成熟成虫有效，而且对移行期的童虫也有极强的杀灭作用，对早期有效防治血吸虫病具有重大意义。

Description

吡喹酮注射剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及防治血吸虫病的吡喹酮药物，尤其涉及一种吡喹酮注射剂及其制备方法和应用。

背景技术

血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病，是世界卫生组织重点防治疾病之一。国内至今仍有7个省区，共计300余个县、市、区处于血吸虫病流行状态，多年来造成了巨大的社会经济损失。血吸虫病流行的主要传染源之一是牲畜。牲畜数量多，排粪量大，粪里所带的虫卵多，使血吸虫中间宿主钉螺感染的机会大。因此，控制血吸虫病流行或传播，牲畜血吸虫病的防治是重要环节之一。

吡喹酮(Praziquantel，PZQ)为杂环吡嗪异喹啉化合物，是一种高效、广谱的抗蠕虫药，更是迄今为止最有效的治疗血吸虫病的理想药物，具有疗效高、副作用小、安全度高等优点，成为目前大面积防治血吸虫病的主要药物。吡喹酮在生产中的传统剂型主要是粉剂和片剂，但这些剂型的吡喹酮药物进行口服时，“首过效应”大，生物利用度差，影响了临床应用效果。尤其是现场治疗牲畜时，因吡喹酮原粉不溶于水，以片剂给牲畜特别是给大牲畜如耕牛内服时，投药不方便。

国内曾有学者研究过PZQ注射剂，所用的PZQ溶媒是聚乙二醇，它对动物的刺激性大，有使耕牛倒地不起的毒副作用。对于大牲畜如耕牛来说，PZQ注射剂的浓度和所需注射剂的量密切相关，以牲畜耕牛为例，口服剂量一般为30mg/kg，体重150～210kg的耕牛，1次投药需4500～6300mg。若PZQ注射剂的浓度偏低，则1次肌肉注射所需注射剂的体积就较大，不仅造成给药的不方便，而且会造成耕牛对药物的吸收困难，易引起局部炎症等副作用。最近有报道，通过对PZQ溶媒进行筛选，研制出了在室温20℃下，浓度可高达200mg/mL的PZQ注射剂，对人工感染日本血吸虫病的小鼠进行了治疗试验，达到了良好的效果。但该PZQ注射剂所用溶媒乙二醇苯醚(Ethylene Glycol Monophenyl Ether，EGPE)的毒性问题依然没有彻底解决，可能限制该药的现场应用。

另外，现有吡喹酮药剂只对当天感染的血吸虫及血吸虫成虫有效，对移行期童虫无杀灭作用，限制了该药的治疗血吸虫病效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种既有效提高吡喹酮浓度又保证溶媒安全可靠的吡喹酮注射剂，该注射剂不仅对感染当天的血吸虫及成熟成虫有效，而且对移行期的童虫也有杀伤作用。

此外，还需要提供一种吡喹酮注射剂的制备方法，以及吡喹酮注射剂在早期防治血吸虫病中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种吡喹酮注射剂，包含206佐剂、吡喹酮、以及水溶液或纯净水，其重量百分比为：206佐剂40％～60％、吡喹酮5％～45％、水溶液或纯净水5％～45％。

优选的，所述206佐剂的重量百分比为50％，即206佐剂/(吡喹酮+水溶液或纯净水)＝50/50(重量比)，按这个比例配制的吡喹酮注射剂稳定性好。

吡喹酮注射剂中加水溶液或纯净水主要是为了根据需要配制出不同吡喹酮浓度的吡喹酮注射剂，并有效防止吡喹酮注射剂由于吡喹酮浓度过高而出现吡喹酮沉淀，增加了吡喹酮注射剂的稳定性。

优选的，所述水溶液包括磷酸盐缓冲液或生理盐水，因为磷酸盐缓冲液或生理盐水配制方便，容易获得。

在本发明的另一方面，提供了一种吡喹酮注射剂的制备方法，包括以下步骤：

分别将适量的206佐剂、水溶液或纯净水加热到28℃～32℃；

将预热的206佐剂和吡喹酮混合，并加入预热的水溶液或纯净水进一步混合均匀，直至获得乳液状的吡喹酮注射剂。

优选的，所述混合步骤通过注射器的来回推动或搅拌装置的搅拌实现，有利于混合均匀。

优选的，获得的乳液状吡喹酮注射剂置于4℃～12℃保存，使吡喹酮注射剂的有效时间显著延长。

所述水溶液包括磷酸盐缓冲液或生理盐水，该磷酸盐缓冲液的PH值为8.0。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述吡喹酮注射剂在早期防治血吸虫病中的应用。

在本发明中，术语“206佐剂”是指法国赛比克(SEPPIC)公司生产的Montanide ISA 206系列的佐剂，包括Montanide ISA 206、ISA 206VG等，该佐剂属于油乳佐剂，是一类含十八烷酸和无水甘露醇酯的水包油包水型(w/o/w)免疫佐剂。

本发明吡喹酮注射剂，使注射剂中吡喹酮的浓度达到200mg/mL～400mg/mL，按照200mg/mL的PZQ注射剂计算，对耕牛1次注射只需20～35mL，给药方便，利于药物吸收，且该吡喹酮制剂没有毒性副作用，安全可靠。更为重要的是，该吡喹酮注射剂对不同阶段的血吸虫都有杀伤作用，即不仅对感染当天及成熟成虫有效，而且对移行期的童虫也有极强的杀灭作用，对早期有效防治血吸虫病具有重大意义。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明实施例8吡喹酮注射剂对感染血吸虫20天的小鼠治疗后的肝脏病变图。

具体实施方式

本发明提供了一种吡喹酮注射剂，包含206佐剂、吡喹酮、以及水溶液或纯净水，其重量百分比为：206佐剂40％～60％、吡喹酮5％～45％、水溶液或纯净水5％～45％。

本发明的吡喹酮注射剂采用206佐剂作为吡喹酮药物的溶媒，可使注射剂中吡喹酮浓度达到200mg/mL～400mg/mL。本发明偶然地将206佐剂作为吡喹酮的溶媒，不仅增加了吡喹酮的溶解度，而且使该吡喹酮注射剂具有很强的杀灭血吸虫童虫的功能。优选的，206佐剂的重量百分比为50％，即206佐剂/(吡喹酮+水溶液或纯净水)＝50/50(重量比)，因为按这个比例配制的吡喹酮注射剂稳定性好。

吡喹酮注射剂中加水溶液或纯净水主要是为了根据需要配制出不同吡喹酮浓度的吡喹酮注射剂，并有效防止吡喹酮注射剂由于吡喹酮浓度过高而出现吡喹酮沉淀，增加了吡喹酮注射剂的稳定性。优选的，水溶液包括磷酸盐缓冲液或生理盐水，因为磷酸盐缓冲液或生理盐水配制方便，容易获得。

吡喹酮注射剂中还可加入添加剂如增溶剂、抗氧剂、稳定剂、抑菌剂等。

本发明吡喹酮注射剂的制备方法，包括以下步骤：

分别将适量的206佐剂、水溶液或纯净水加热到28℃～32℃；

优选的，混合步骤通过注射器的来回推动或搅拌装置的搅拌实现，有利于混合均匀。

实施例1吡喹酮注射剂的制备

1.实验室规模：

将206佐剂和PBS(PH8.0)分别加热到30℃±2℃；

将吡喹酮药物加入到206佐剂中；加入PBS(206佐剂/(吡喹酮+PBS)＝50/50重量比)；

用一支带针头的无橡皮塞的10-50ml的注射器混合；来回推动10-20次。

制得的乳液置于4℃～12℃保存。

2.利用均质机(150ml为例的乳液配置)：

分别将87ml的206佐剂和PBS(PH8.0)加热到30℃±2℃；

称取7.5-60g的吡喹酮，放置到无菌烧杯中，将87ml的206佐剂加入；

将FJ-200高速分散均质机的转头安置在装有吡喹酮和206佐剂的烧杯中；

低速(200-300转/分)开始搅拌并将PBS逐渐加入，加速到2000转/分并保持10分钟；

停止搅拌并将制得的乳液置于4℃～12℃。

3.中试规模

根据所需及配制浓度分别准备PBS和206佐剂以及药物PZQ(206佐剂/(PZQ+PBS)＝50/50重量比)，PBS和206佐剂分别加热到30℃±2℃；

将称取的吡喹酮和206佐剂倒入双层夹套容器并将温度保持在30℃；

以低速(200-300转/分)搅拌并将PBS逐渐加入，PBS的流速在5-10升/分；

加速到2000转/分并在30℃±2℃保持10-20分钟；

将容器冷却至15℃以下，并在冷却过程中持续搅拌；

停止搅拌，将乳液在4℃～12℃存放。

实施例2

(1)量取54ml的206佐剂；配置的灭菌PBS(PH8.0)41.2ml；上述溶媒加热到30℃±2℃；

(2)称取4.8g吡喹酮，倒入无菌的烧杯中，预热到30℃±2℃；

(3)将量取的54ml预热206佐剂加入烧杯中；

(4)将FJ-200高速分散均质机的转头安置在装有吡喹酮和206佐剂的烧杯中；

(5)低速(200-300转/分)开始搅拌并将预热的41.2mlPBS逐渐加入，PBS的流速在5-10升/分；

(6)加速到2000转/分并保持10分钟；

(7)停止搅拌即制得含5％(重量百分比)吡喹酮的吡喹酮注射剂，其中206佐剂的重量百分比为50％、体积百分比为54％；接着将制得的乳液置于低温(4℃～12℃)。

实施例3

(1)量取43.2ml的206佐剂；配置的灭菌生理盐水36.8ml；上述溶媒加热到30℃±2℃；

(2)称取20g吡喹酮，倒入无菌的烧杯中，预热到30℃±2℃；

(3)将量取的43.2ml预热206佐剂加入烧杯中；

(5)低速(200-300转/分)开始搅拌并将预热的36.8ml生理盐水逐渐加入，生理盐水的流速在5-10升/分；

(6)加速到2000转/分并保持10分钟；

(7)停止搅拌即制得含20.7％(重量百分比)吡喹酮的吡喹酮注射剂，其中206佐剂的重量百分比为40％、体积百分比为43.2％；接着将制得的乳液置于低温(4℃～12℃)。

实施例4

(1)量取64.8ml的206佐剂；量取灭菌纯净水5.2ml；上述溶媒加热到30℃±2℃；

(2)称取30g吡喹酮，倒入无菌的烧杯中，预热到30℃±2℃；

(3)将量取的64.8ml预热206佐剂加入烧杯中；

(5)低速(200-300转/分)开始搅拌并将预热的5.2ml纯净水逐渐加入，纯净水的流速在5-10升/分；

(6)加速到2000转/分并保持10分钟；

(7)停止搅拌即制得含31.5％(重量百分比)吡喹酮的吡喹酮注射剂，其中206佐剂的重量百分比为60％、体积百分比为64.8％；接着将制得的乳液置于低温(4℃～12℃)。

实施例5

(1)量取48.6ml的206佐剂；配置的灭菌PBS(PH8.0)8ml；上述溶媒加热到30℃±2℃；

(2)称取43.4g吡喹酮，倒入无菌的烧杯中，预热到30℃±2℃；

(3)将量取的48.6ml预热206佐剂加入烧杯中；

(5)低速(200-300转/分)开始搅拌并将预热的8mlPBS逐渐加入，PBS的流速在5-10升/分；

(6)加速到2000转/分并保持10分钟；

(7)停止搅拌即制得含45％(重量百分比)吡喹酮的吡喹酮注射剂，其中206佐剂的重量百分比为45％、体积百分比为48.6％；接着将制得的乳液置于低温(4℃～12℃)。

实施例6口服与不同剂量吡喹酮注射剂对血吸虫成虫的杀灭效果比较

方法：吡喹酮注射剂组按照所给剂量对人工感染300条尾蚴的新西兰大白兔皮下给药，口服组为口服灌胃。给药时间均为感染后35天。

结论：如下表1所示，本发明吡喹酮注射剂按每公斤体重给药60-20毫克，对血吸虫成虫的杀灭效果以及对宿主肝脏虫卵的减卵率基本一致，和口服吡喹酮药物的杀灭效果及减卵率无显著性区别。吡喹酮注射剂可以低于口服用药的3倍使用。

表1口服与不同剂量吡喹酮注射剂对血吸虫成虫的杀灭效果比较

实施例7口服与不同剂量吡喹酮注射剂对血吸虫雌虫和毛蚴孵化率的影响

方法：同实施例6。

结论：如下表2所示，本发明吡喹酮注射剂60-20mg/Kg皮下注射和口服药具有相似的减雌率和减毛蚴孵化率，本发明新制剂防治血吸虫的效果明显，可有效杀灭血吸虫成虫并阻断血吸虫的传播。

表2口服与不同剂量吡喹酮注射剂对血吸虫雌虫和毛蚴孵化率的影响

实施例8吡喹酮注射剂对20天日本血吸虫童虫的治疗效果

方法：吡喹酮注射剂给药组按照600mg/Kg剂量对人工感染40条尾蚴的昆明小鼠皮下给药，对照组不做药物处理。给药时间均为感染后20天。给药后，在感染42～48天解剖小鼠，由肝门静脉冲虫及肝脏采样虫卵计数。

为了得出准确的实验结果，本发明按上述方法进行了三次独立实验。

结果：本发明吡喹酮注射剂具有杀灭20天血吸虫童虫的效果，三次独立实验的减虫率为56.7％～82.69％(见下表3)，并能有效减少肝脏虫卵负荷，宿主肝脏虫卵减少70.7～94.8％，且上述实验表明本发明吡喹酮注射剂对早期血吸虫童虫的作用具有重复性，该吡喹酮新制剂的性能稳定。

表3三次独立实验的吡喹酮注射剂对20天童虫的治疗效果

注：P值为各次给药组和对照组相比。

如图1所示，三次实验均显示，本发明吡喹酮注射剂治疗感染20天的小鼠，第48天剖检，肝脏外观为颜色正常的鲜红色，表面仅有少量的虫卵肉芽肿和死亡虫体形成的脓肿结节(见图1A)，与对照组(见图1B)相比，本发明吡喹酮注射剂早期防治血吸虫病的效果非常明显。在图1中，图1A为感染血吸虫20天的小鼠皮下注射PZQ注射剂600mg/kg，并在感染后的第48天剖检出的肝脏病变图，图1B为仅感染未治疗的对照组小鼠的肝脏病变图。

此外，本发明吡喹酮注射剂给药后，未见小鼠有明显的精神状态不正常现象，连续观察72小时，每只小鼠都食欲正常，注射部位除了产生药储包外，未见红色炎症迹象。给药后15天，解剖检查注射部位，没有发现病理异常，说明本发明吡喹酮注射剂在600mg/kg的给药量是安全的。

结论：本发明吡喹酮注射剂具有早期防治血吸虫的功能，能将20天的血吸虫童虫杀灭，从而有效避免了血吸虫成熟后产下大量虫卵对宿主肝脏造成极大损伤。感染血吸虫20天的小鼠经吡喹酮注射剂治疗后，肝脏表面的虫卵结节明显减少，这少量的虫卵结节不会引起肝脏的免疫病理损伤，而口服吡喹酮虽然对成熟血吸虫有极强杀伤力，但由于其对早期感染的童虫(1-3周)不起作用，其杀灭成虫时，成虫往往已经产下大量虫卵，这些虫卵对宿主肝脏造成不可逆转的病理损伤。

实施例9口服与吡喹酮注射剂对20天血吸虫童虫的治疗效果比较

方法：吡喹酮注射剂组按照600mg/Kg剂量对人工感染40条尾蚴的昆明鼠皮下给药，对照组不做药物处理。口服组为按照600mg/Kg剂量口服灌胃，给药时间均为感染后20天。

结论：如下表4，本发明吡喹酮注射剂具有杀灭20天血吸虫童虫的效果，减虫率54.36％，并能有效减少肝脏虫卵负荷，宿主肝脏虫卵减少84.30％，而口服组对血吸虫童虫的杀灭作用有限，本次实验口服组只有14.89％的减虫率和58.55％的减卵率，由此可知，本发明吡喹酮注射剂具有口服药物无法比拟的杀灭童虫效果。

表4口服与吡喹酮注射剂对20天血吸虫童虫的治疗效果比较

以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种吡喹酮注射剂，其特征在于，包含206佐剂、吡喹酮、以及水溶液或纯净水，其重量百分比为：206佐剂40％～60％、吡喹酮5％～45％、水溶液或纯净水5％～45％，所述水溶液是磷酸盐缓冲液或生理盐水。

2.根据权利要求1所述的吡喹酮注射剂，其特征在于，所述206佐剂的重量百分比为50％。

3.一种吡喹酮注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

分别将适量的206佐剂、水溶液或纯净水加热到28℃～32℃，所述水溶液是磷酸盐缓冲液或生理盐水；

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述混合步骤通过注射器的来回推动或搅拌装置的搅拌实现。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，获得的乳液状吡喹酮注射剂置于4℃～12℃保存。

6.权利要求1所述的吡喹酮注射剂在制备早期防治血吸虫病的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述吡喹酮注射剂杀灭血吸虫童虫、以及当天感染的血吸虫和血吸虫成虫。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述吡喹酮注射剂减少血吸虫宿主肝脏虫卵达70.7％～94.8％。