CN101664704A - 细胞微量吸取贮存器 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞微量吸取贮存器，包括内管、外管、口吸管、手控注射器、乳胶管，其中，内管下端伸入外管内，上端通过乳胶管与口吸管连接，手控注射器通过乳胶管与外管粗端开口连接。本发明用外管对生物物质进行初步聚集之后，在带有极少量液体的情况下将生物物质移入较细的内管中进行样品精确转移或冷冻保存，与现有技术相比，本发明的细胞微量吸取贮存器具有使用安全方便、控制精确等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种能精确转移生物物质的微量吸取贮存器。
背景技术
随着生物冷冻技术的发展，越来越多的生物物质能够被长时间的保存，如人卵冻存技术的发展为人类剩余能力的保存提供了可能；卵巢组织的保存为那些由于各种原因必须切除卵巢的女性带来了福音。这一系列的成果在很大程度上归功于冷冻培养液配方的改进，但冷冻物质承载器及相关吸取技术的改进也起到了一定的促进作用。
经过数十年的研究和改进，慢速冷冻技术相对比较成熟，但其也存在着非常严峻的瓶颈亟待突破，就是慢速冷冻过程中冰晶的形成以及冷冻保护剂毒性渗透对生物物质特别是胚胎及卵母细胞的损伤。玻璃化冷冻作为一种新兴的冷冻技术，其操作的简便性以及较高的成功率越来越收到人们的青睐。目前用于生物物质玻璃化冷冻的承载器有多种，如Cryoloop，Cryoleaf，，electron microscopic grid等。在应用上，这些承载器均取得了不错的冷冻效果。这些成果的获得离不开对样品的准确吸取，因为伴随样品一起进入承载器的液体量与冷冻效果密切相关，这也是冷冻效果因人的熟练程度以及发挥状态不同而存在差异的原因之一。
目前所用的玻璃化冷冻细胞吸取器主要为经酒精灯拉制的巴斯德滴管或毛细管，在吸取生物物质时不可避免的会将大量的液体伴随样品一起吸入管内，给下一步的操作带来了不便。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种使用安全便捷的、控制精确的微量吸取贮存器。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种细胞微量吸取贮存器，包括内管、外管、口吸管、手控注射器、乳胶管，其中，内管下端伸入外管内，上端通过乳胶管与口吸管连接，手控注射器通过乳胶管与外管粗端开口连接。
所述伸入外管的内管下端的管口内径比所要吸取生物物质的直径大10～40微米，以微量控制所吸生物物质以及液体的量；外管管口内径稍大于内管下端的管口外径，且小于内管下端的管口外径与生物物质两倍外径之和，主要控制主体生物物质的聚集。
所述生物物质为各种类型细胞、胚胎、组织块或小型生物个体之一。
所述手控注射器为普通注射器或螺旋控制注射器。
所述口吸管是含滤器的自制口吸管或各种商品化口吸管。
所述的内管、外管的制作材料是目前市场上所存在的所有透明、耐超低温或具有高热传导性的材料之一。
使用时，先通过口吸管在内管中吸取一定的玻璃化冷冻液，然后将含有一定量冷冻液的内管嵌入外管当中，确保内管与外管之间密封不漏气；然后调节与外管相连的手控注射器，将事先转移至冷冻液中的生物物质连同适量的冷冻液吸入外管中，冷冻液进入外管的同时，生物物质被阻挡在内管口处，此时通过与内管相连的口吸管轻微施少许负压，便能将所需的生物物质及极少量的冷冻液吸入内管较细部位当中，此段含生物物质的液体与事先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱，然后拔出内管，将生物物质取出进行冷冻即可，或进行其它操作；本发明的内管也可以直接作为冷冻保存管。根据不同的生物物质，可以选择不同材料和不同内径的内管、外管。
本发明的细胞微量吸取贮存器和现有技术相比，具有以下突出的有益效果：1、设计合理，能对所要冷冻的物质首先进行初步聚集，第二次吸取样品时能够更加准确。2、能够精确控制伴随样品进入承载器中的液体的量，这样可以提高降温速率，从而提高冷冻效果。3、使用简单，不需要比较多的经验就能稳定操作。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
图2为实施例1的使用状态图。
其中，1、内管；2、口吸管；3、外管；4、手控注射器；5、乳胶管；6、冷冻液；7、卵母细胞及适量的冷冻液；8、空气柱；9、卵母细胞及极少量的冷冻液。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明：
一种细胞微量吸取贮存器，包括内管1、外管3、口吸管2、手控注射器4、乳胶管5，如图1所示，其中，内管1下端伸入外管3内，上端通过乳胶管5与口吸管2连接，手控注射器4通过乳胶管5与外管3粗端开口连接，伸入外管3的内管1下端的管口内径比所要吸取生物物质的直径大10～40微米，以微量控制所吸生物物质以及液体的量；外管3管口内径稍大于内管1下端的管口外径，且小于内管下端的管口外径与生物物质两倍外径之和，主要控制主体生物物质的聚集。
实施例1：吸取人卵母细胞：步骤如下：
(1)用聚乙烯管制作外径150、内径130的内管1，用玻璃材料制作外径200、内径180的外管3；
(2)通过自制的口吸管2在内管1中吸取一定的玻璃化的冷冻液6，冷冻液6成分为：mHTF+20％sss+15％EG+15％DMSO+0.5M Sucrose；
(3)将含有一定量冷冻液6的内管1嵌入外管3当中，确保内管1与外管3之间密封不漏气；
(4)将2～3枚人卵母细胞在成分为mHTF+20％SSS+7.5％EG+7.5％DMSO的液体中处理4～5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5)半分种后调节与外管3相连的普通1ml的手控注射器4中的负压，使卵母细胞及适量的冷冻液7一起进入外管3当中；
(6)冷冻液进入外管3的同时，卵母细胞被阻挡在内管1口处，此时通过与内管1相连的口吸管2轻微施少许负压便能将卵母细胞及极少量的冷冻液9吸入内管1较细部位当中，此段含卵母细胞的液体与事先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱8；
(7)拔出内管1，将卵母细胞以及极少量的冷冻液9置于Cryoloop上，再浸入液氮进行冷冻保存。
实施例2：吸取人8-细胞胚胎：步骤如下：
(1)用聚乙烯管制作外径150、内径130的内管，用玻璃材料制作外径200、内径180的外管；
(2)通过商品化的口吸管在内管中吸取一定的玻璃化冷冻液，冷冻液成分为mHTF+20％sss+15％EG+15％PROH+0.5M Sucrose；
(3)将含有一定量冷冻液的内管嵌入外管当中，确保内管与外管之间密封不漏气；
(4)将2～3枚人8-细胞胚胎放入成分为mHTF+20％SSS+7.5％EG+7.5％PROH的液体中处理4～5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5)半分种后调节与外管相连的螺旋注射器中的负压，使胚胎连同适量的冷冻液一起进入外管当中；
(6)冷冻液进入外管的同时，胚胎被阻挡在内管口处，此时通过与内管相连的口吸管轻微施少许负压便能将胚胎及极少量的冷冻液吸入内管较细部位当中，此段含胚胎的液体与事先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱；
(7)拔出内管，将胚胎以及少量的冷冻液置于Cryoloop上，再浸入液氮进行冷冻保存。
实施例3：吸取牛MII期牛卵母细胞胚胎：步骤如下：
(1)用聚乙烯管制作外径180、内径150的内管，用玻璃材料制作外径220、内径200的外管；
(2)通过自制的口吸管在内管吸取一定的显微操作液，操作液成分为G-MOPs+5mg/mlBSA；
(3)将含有一定量操作液的内管嵌入外管当中，确保内管与外管之间密封不漏气；
(4)调节与外管相连的普通1ml注射器中的负压，使10～20枚牛MII期牛卵母细胞胚胎连同适量的培养液一起进入外管当中，培养液成分G1.5+5mg/mlBSA；
(5)培养液进入外管的同时，胚胎被阻挡在内管口处，此时通过与内管相连的口吸管轻微施少许负压便能将牛卵及极少量的培养液液吸入内管较细部位当中，此段含胚胎的液体与事先吸取的操作液之间存在一段空气柱；
(6)拔出内管，将牛卵以及少量的培养吹入含操作液的核移植皿中，并进行核移植操作。
实施例4：吸取人卵母细胞：步骤如下：
(1)制作外径150、内径130的内管以及外径200、内径180的外管；
(2)用内管吸取一定的最终冷冻液，冷冻液成分为mHTF+20％sss+15％EG+15％DMSO+0.5MSucrose；
(3)将含有一定量冷冻液的内管嵌入外管当中，确保内管与外管之间密封不漏气；
(4)将2-3枚人卵母细胞在成分为mHTF+20％SSS+7.5％EG+7.5％DMSO的液体中处理4-5分钟后，转移至最终冷冻液中；
(5)半分种后调节与外管相连的注射器中的负压，使卵母细胞连同适量的冷冻液一起进入外管当中；
(6)冷冻液进入外管的同时，卵母细胞被阻挡在内管口处，此时通过与内管相连的口吸管(图1-2)轻微施少许负压便能将卵母细胞及极少量的冷冻液吸入内管较细部位当中，此段含卵母细胞的液体与事先吸取的冷冻液之间存在一段空气柱；
(7)拔出内管，将含有卵母细胞的液体注通过负压使起上升一段距离，并用在酒精灯上烤过的镊子将内管开口处捏紧而使其封闭；
(8)立刻将含有卵母细胞的内管细长部分浸入液氮中，去除口吸管并将细管的另一端用塞子塞住，并将整个内管浸入液氮中进行保存。
Claims (5)
1.一种细胞微量吸取贮存器，其特征在于：包括内管、外管、口吸管、手控注射器、乳胶管，其中，内管下端伸入外管内，上端通过乳胶管与口吸管连接，手控注射器通过乳胶管与外管粗端开口连接。
2.根据权利要求1所述的细胞微量吸取贮存器，其特征在于：所述伸入外管的内管下端的管口内径比所要吸取生物物质的直径大10～40微米，外管管口内径大于内管下端的管口外径，且小于内管下端的管口外径与生物物质两倍外径之和。
3.根据权利要求2所述的细胞微量吸取贮存器，其特征在于：所述生物物质为各种类型细胞、胚胎、组织块或小型生物个体之一。
4.根据权利要求1所述的细胞微量吸取贮存器，其特征在于：所述手控注射器为普通注射器或螺旋控制注射器。
5.根据权利要求1所述的细胞微量吸取贮存器，其特征在于：所述口吸管是含滤器的自制口吸管或各种商品化口吸管。
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