CN101663321A - 拮抗型人light特异性人源性单克隆抗体 - Google Patents

Abstract

本发明提供了能够免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体，例如完全人源性抗体。本发明还提供了编码免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体(例如完全人源性抗体)的分离的核酸。本发明进一步提供了包含编码免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体(例如完全人源性抗体)的核酸的载体和宿主细胞。本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体(例如完全人源性抗体)的制备方法。本发明还提供了治疗个体中hLIGHT－介导的疾病的方法，其包括向该个体施用免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体，例如完全人源性抗体。在优选的实施方案中，本发明提供的抗hLIGHT抗体能够减少、抵消或以其它方式抑制体内的hLIGHT生物活性(例如，hLIGHT介导的CCL20、IL－8或RANTES从表达hLIGHT受体的细胞的生成或分泌)。本发明还提供了在样本中检测hLIGHT的方法，以及在例如患有疾病(其中hLIGHT活性是有害的)的人类个体体内减少、抵消或以其它方式抑制hLIGHT活性的方法。

Description

拮抗型人LIGHT特异性人源性单克隆抗体

引言

本发明提供了免疫特异性结合人LIGHT(hLIGHT)(淋巴毒素样，显示可诱导的表达并与HSV糖蛋白D竞争HVEM，由T淋巴细胞表达的受体(lymphotoxin-like，exhibits inducible expression，competes with HSVglycoprotein D for HVEM，a receptor expressed by T lymphocytes))多肽、hLIGHT多肽片段或其它hLIGHT表位的抗体。在部分实施方案中，所述抗体为完全人源性抗体，优选完全人源性单克隆抗体，该抗体免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位。本发明还提供了编码免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的分离的核酸。本发明进一步提供了包含免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的编码核酸的载体或宿主细胞，以及制备免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的方法。本发明还提供了采用本发明提供的抗hLIGHT抗体在体内抑制hLIGHT生物活性和/或治疗或以其它方式控制患者体内hLIGHT介导的疾病的方法。

背景技术

LIGHT(淋巴毒素样，显示可诱导的表达并与HSV糖蛋白D竞争HVEM，由T淋巴细胞表达的受体(lymphotoxin-like，exhibits inducibleexpression，competes with HSV glycoprotein D for HVEM，a receptorexpressed by T lymphocytes))是一种潜在的细胞因子靶标，已显示它与慢性炎性自身免疫疾病的过程相关(Mauri等人，1998Immunity 821-30)。作为配体的TNF超家族(TNFSF)的一员，LIGHT也被称为TNFSF 14或CD258。LIGHT在激活后以严格调节的方式在T细胞表面表达，其在4小时内出现，在12-24小时达到峰值，并在48小时消失(Castellano等人.2002J Biol Chem27742841-51)。然而，LIGHT还以可测水平组成性地存在于不成熟树突细胞的表面(Tamada等人，2000J Immunol 1644105-10)以及在肠部的T细胞和自然杀伤(NK)细胞表面(Cohavy等人，2005J Immunol 174646-53)。LIGHT通过与包括淋巴毒素β受体(LTβR)(Crowe等人，1994Science 264707-10，Browning等人，1997J Immunol 1593288-98)、疱疹病毒进入调节子(HVEM)(Montgomery等人，1996Cell 87(3)427-36)以及诱骗受体3(DcR3)(Yu等人，1999J Biol Chem 27413733-6)在内的三个TNF超家族受体的结合介导其生物作用。

以抑制性LTβR-Fc融合蛋白治疗的小鼠减少了结肠炎CD4+CD45RB^hlgh T细胞转移模型、CD4+T细胞介导的病理的炎性症状(Mackay等人，1998Gastroenterology 1151464-75)。另外，已显示LIGHT的组成性转基因T细胞特异性表达导致严重的肠炎，并有自身免疫样病理表现，类似人的炎症性肠病(IBD)(Wang等人，2005J Immunol 1748173-82；Shaikh等人，2001J Immunol 1676330-7；Wang等人，2001J Immunol 1675099-105；Wang等人，2004J Clin Invest 113826-35)。当来自LIGHT转基因动物的肠系膜淋巴结细胞被转移至RAG-/-时，表达LIGHT的淋巴细胞可诱导IBD样症状(例如人Crohn疾病、裂开性溃疡、回肠炎的细胞因子特征，以及结肠IFN-γ和TNF的增加)(Wang等人2005J Immunol 1748173-82)。在人类疾病中，可在具有活动性Crohn病的患者体内观察到LIGHT表达的上升(Cohavy等人，2005J Immunol 174646-53；Wang等人，2005J Immunol1748173-82；Wang等人，2004J Clin Invest 113826-35；Cohavy等人，2004J Immunol 173，251-8)。另外，已显示LIGHT在IBD患者的肠T细胞中有所上升(Cohavy等人，2004J Immunol 173251-8)。遗传证据也支持LIGHT在IBD中的作用(Granger等人，2001J Immunol 1675122-8；Rioux等人，2000Am J Hum Genet 661863-70；Low等人，2004Inflamm Bowel Dis 10173-81；Bonen和Cho 2003Gastroenterology 124521-36)。

此外，已显示CCL20-CCR6信号转导与IBD有关，而LIGHT诱导人结肠上皮细胞系HT29.14s分泌CCL20。在人类研究中，已发现结肠的上皮细胞为IBD患者的主要CCL20来源，且CCL20表达在人IBD患者中上升(Kwon等人，2002Gut 51818-26；Kaser等人，2004J Clin Immunol 2474-85)。

hLIGHT还与移植物抗宿主病(GVHD)相关。例如，已显示LIGHT向T细胞提供了强共刺激活性，提高了Th1细胞因子独立于B7-CD28途径的扩增和生成(例如，参见Tamada等人，2000J.Immunol.1644105-4110)。阻断抗HVEM单克隆抗体、HVEM-Ig或LTβR融合蛋白对LIGHT-HVEM的共刺激，可以抑制同种异体T细胞应答(例如，参见Tamada等人，2000J.Immunol.1644105-4110；Harrop等人，19998J.Immunol.1611786)。此外，体内施用LTβR-Ig或小鼠抗LIGHT抗体可在小鼠急性GVHD模型中抑制抗宿主细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答(Tamada等人，2000Nat.Med.6283-289)。

尽管如上所示的讨论显示了LIGHT在炎性疾病(例如IBD或GVHD)中的作用，目前为止还没有人源性抗人LIGHT抗体被制备，也没有任何人源性抗人LIGHT抗体或人源性单克隆抗人LIGHT抗体显示出对人LIGHT生物活性具有拮抗作用。因此，仍然需要识别能够用于人类炎性疾病治疗的疗法(例如抗LIGHT疗法)。本发明引用或讨论的参考文献不应视为承认其为本发明的现有技术。

发明概述

本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体，例如完全人源性抗体。本发明还提供了编码免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体(例如完全人源性抗体)的分离的核酸。本发明还提供了包含免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体(例如完全人源性抗体)的编码核酸的载体和宿主细胞。本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体(例如完全人源性抗体)的制备方法。本发明还提供了治疗hLIGHT介导的疾病的方法，其包括施用免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体，例如完全人源性抗体。在优选的实施方案中，本发明提供的抗hLIGHT抗体是能够减少、抵消或以其它方式抑制体内的hLIGHT生物活性(例如，hLIGHT介导的CCL20、IL-8或RANTES从表达hLIGHT配体(例如hLIGHT受体，例如HVEM、LTβR和/或DcR3)的细胞的生成或分泌)的拮抗型抗体。本发明的抗体可以是完全人源性抗体或是抗原结合抗体片段。本发明的抗体还可用于检测hLIGHT，以及在例如患有疾病(其中hLIGHT活性是有害的)的人类个体体内减少、抵消或以其它方式抑制hLIGHT活性。

因此，一方面，本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗体免疫特异性结合(a)三聚(或天然的)hLIGHT表位，(b)单体(或变性的)hLIGHT表位，(c)三聚hLIGHT表位和单体hLIGHT表位，(d)三聚hLIGHT表位而非单体hLIGHT表位，或者(e)单体hLIGHT表位而非三聚hLIGHT表位。在优选的实施方案中，所述抗体免疫特异性结合三聚hLIGHT表位而不结合人源单体hLIGHT表位。在优选的实施方案中，所述抗体为E1抗体、E13抗体、E63抗体、F19抗体或F23抗体。

分别生成E1、E13、E63、F19和F23抗体的杂交瘤，根据布达佩斯条约的条款保藏于美国菌种保藏中心(ATCC，10801University Blvd.，Manassas，VA 20110-2209)，保藏时间为2006年7月12日(ATCC录入号分别为PTA-7729(杂交瘤124E1)和PTA-7728(杂交瘤124F23))，2006年8月17日(ATCC录入号PTA-7818(杂交瘤124E63)和PTA-7819(杂交瘤124F19))，以及2006年8月23日(ATCC录入号PTA-7842(杂交瘤124E13))，在此引用作为参考。分别由杂交瘤124E1、124E13、124E63、124F19和124F23生成的抗体在此也被分别称为E1、E13、E63、F19、F23，并且/或者分别以ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819和PTA-7728表示。

这些抗体、杂交瘤、制备这些抗体的方法以及使用这些抗体的方法均包括在本发明中。

在具体的实施方案中，本发明的抗体与hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的结合被E1抗体、E13抗体和/或E63抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)。在其它实施方案中，所述抗体与hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的结合被F19抗体和/或F23抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)。在具体的实施方案中，所述抗体与hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的结合被E1抗体、E13抗体和/或E63抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)，但不被F19抗体和/或F23抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)。在其它实施方案中，所述抗体与hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的结合被F19抗体和/或F23抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)，但不被E1抗体、E13抗体和/或E63抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖方式)。本发明的实施例中提供了示范性的竞争性阻断测试。

本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含E1、E13、E63、F19或F23的VH链、VL链、VH结构域、VL结构域、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。

在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含少于六个CDR。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含一个、两个、三个、四个或五个选自VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR，或由之组成。在具体实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含一个、两个、三个、四个或五个选自E1、E13、E63、F19或F23的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的CDR，或由之组成。

本发明还提供了包含本发明的抗hLIGHT抗体(例如E1、E13、E63、F19或F23)的药物组合物。

在具体的实施方案中，本发明的抗体为完全人源性抗体、单克隆抗体、重组抗体、拮抗型抗体或其任意组合。在特定实施方案中，所述抗体为免疫特异性结合hLIGHT的完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体或其抗原结合片段。在优选的实施方案中，所述抗体为拮抗型抗体。

在某些实施方案中，所述抗体与HVEM、LTβR、DcR3或其融合蛋白(例如，Fc：HVEM、Fc：LTβR或Fc：DcR3)竞争(例如，以剂量依赖方式)结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位。本发明的实施例中提供了示范性的竞争性阻断测试。

在第二方面，本发明提供了编码免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的分离的核酸。在某些实施方案中，所述核酸编码E1、E13、E63、F19或F23的VH链、VL链、VH结构域、VL结构域、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。

在第三方面，本发明还提供了包含免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的编码核酸的载体和宿主细胞。

在第四方面，本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的制备方法。在某些实施方案中，所述抗体免疫特异性结合hLIGHT多肽的单核苷酸多态性(SNP)变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L和/或214K-32L。本发明还提供了生成免疫特异性结合hLIGHT多肽或其SNP变体的抗体的杂交瘤。在优选的实施方案中，所述杂交瘤为生产E1、E13、E63、F19或F23的杂交瘤。

在第五方面，本发明提供了在个体(例如，人类个体)体内治疗或以其它方式减缓hLIGHT介导的疾病的一种或多种症状的方法，其包括向该个体施用有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)的抗体，其中hLIGHT活性被该抗体抑制。在某些实施方案中，所述hLIGHT介导的疾病为IBD，例如Crohn疾病或溃疡性结肠炎。在其它实施方案中，所述hLIGHT介导的疾病为GVHD。

在第六方面，本发明提供了在个体(例如，人类个体)体内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3结合的方法，其包括向该个体施用有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)的抗体。

在第七方面，本发明提供了在个体(例如，人类个体)体内减少或抑制hLIGHT生物活性(例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌)的方法，其包括向该个体施用有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的hLIGHT)的抗体，其中hLIGHT生物活性被该抗体降低或抑制。

在第八方面，本发明提供了在具有细胞表面表达的hLIGHT的细胞中减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3结合的方法，其包括将该细胞与有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体相接触。

在第九方面，本发明提供了在具有细胞表面表达的hLIGHT受体(例如，HVEM、LTβR和/或DcR3)的细胞中减少或抑制hLIGHT生物活性(例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌)的方法，其包括将该细胞与有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT或其SNP变体)相接触，其中hLIGHT生物活性被该抗体减少或抑制。

在第十方面，本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体，其中所述抗体进一步包含可检测标记。在某些实施方案中，包含可检测标记的抗hLIGHT抗体可用于在样本中检测hLIGHT的方法，所述方法包括将该样本与该抗hLIGHT抗体相接触。在具体的实施方案中，所述样本包含了在细胞表面表达hLIGHT的细胞。

在第十一方面，本发明提供了包含免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的试剂盒。

术语

除非另行指明，本发明所用的技术和科学术语的含义等同于本领域普通技术人员的普遍理解。所有的专利、申请、公布的申请以及其它出版物均在此全文引用作为参考。对于本发明一个术语存在多个定义的情况，除非另行指明，应采用本节所用定义。

术语“约”或“大约”指在给定数值或范围的20％以内、优选在10％以内、更有选在5％(或1％或更少)以内。

本发明所用的“施用”指通过，例如粘膜、皮内、静脉内、肌肉内传递和/或本发明所述的或是本领域已知的任意其它物理递送方法，通过注射或其它方式将体外存在的物质(例如，本发明提供的抗hLIGHT抗体)物理递送至患者体内的行为。在治疗疾病或其症状时，物质的施用通常发生在该疾病或其症状的发作之后。在预防疾病或其症状时，物质的施用通常发生在该疾病或其症状的发作之前。

在有关多肽的上下文中，本发明所用的术语“类似物”指具有与hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体类似或一致的功能，但不一定包含与hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体类似或一致的氨基酸序列，或者具有与hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体类似或一致的结构的多肽。具有类似氨基酸序列的多肽指至少满足如下条件之一的多肽：(a)其氨基酸序列与本发明所述的hLIGHT多肽(例如，SEQ IDNO：52)、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体的氨基酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、且优选至少90％、更优选至少95％、或最优选至少99％一致性的多肽；(b)由能够在严格条件下与编码至少具有5个氨基酸残基、至少10个氨基酸残基、至少15个氨基酸残基、至少20个氨基酸残基、至少25个氨基酸残基、至少40个氨基酸残基、至少50个氨基酸残基、至少60个氨基酸残基、至少70个氨基酸残基、至少80个氨基酸残基、至少90个氨基酸残基、至少100个氨基酸残基、至少125个氨基酸残基、或至少150个氨基酸残基的本发明所述的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体(或其VH或VL区)的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码的多肽(例如，参见Sambrook等人，(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Maniatis等人，(1982)MolecularCloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY)；以及(c)与编码本发明所述的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体(或其VH或VL区)的核苷酸序列具有至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、并优选至少90％、更优选至少95％、或最优选至少99％一致性的核苷酸序列所编码的多肽。与本发明所述的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体具有类似结构的多肽指具有与本发明所述的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或抗hLIGHT抗体类似的二级、三级或四级结构的多肽。所述多肽结构可通过本领域技术人员已知的方法测定，所述方法包括但不限于：X射线晶体学、核磁共振以及晶体电子显微学。

为了测定两个氨基酸序列或两个核酸序列的一致性百分比，可对序列进行多种优化比较目的的比对(例如，可向第一氨基酸或核酸序列导入空位(gap)，从而和第二氨基酸或核酸序列进行优化比对)。然后比较对应的氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被第二序列中相应位置的相同氨基酸残基或核苷酸所占据时，该分子在该位置具有一致性。两个序列之间的一致性百分比为所述序列所共有的一致性位置的数量的函数(即，一致性％＝一致性重叠位置的数量/位置总数×100％)。在一个实施方案中，两个序列具有相同的长度。

两个序列(例如，氨基酸序列或核酸序列)之间的一致性百分比还可通过数学算法确定。用于两个序列比较的数学算法的优选、非限制性范例为Karlin和Altschul的算法，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：22642268，该算法经Karlin和Altschul，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：58735877改良。该算法被整合进入Altschul等人，1990，J.MoI.Biol.215：403的NBLAST和XBLAST程序。可通过NBLAST核苷酸程序参数设置，例如，分值＝100、字长＝12来进行BLAST核苷酸检索，以获得与本发明核酸分子一致的核苷酸序列。可通过XBLAST程序参数设置，例如，分值＝50、字长＝3来进行BLAST蛋白检索，以获得与本发明的蛋白分子一致的氨基酸序列。为了得到比较目的的空位比对，可使用Altschul等人，1997，NucleicAcids Res.25：33893402中所用的Gapped BLAST。替代性地，可采用PSIBLAST进行迭代检索，以检测分子间远缘关系(出处同上)。当采用BLAST、Gapped BLAST和PSI Blast程序时，可使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数(例如，参见在网站ncbi.nlm.nih.gov上的国家生物技术信息中心(NCBI))。另一个用于序列比较的数学算法的优选、非限制性范例为Myers和Miller的算法，1988，CABIOS 4：1117。该种算法被整合进入ALIGN程序(2.0版)，该程序为GCG序列比对软件包的一部分。在采用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可使用PAM 120重量残留表(weight residuetable)、空位长度罚分12以及空位罚分4。

两个序列之间的一致性百分比可通过与上述包括或不包括引入空位的技术类似的技术进行测定。在计算一致性百分比时，通常仅计入精确的匹配。

本发明所用的hLIGHT的“拮抗剂”或“抑制剂”指能够在例如表达hLIGHT的细胞中或是在表达hLIGHT配体(例如hLIGHT受体)的细胞中抑制或以其它方式减少hLIGHT的一种或多种生物活性的分子。例如，在某些实施方案中，本发明的抗体为能够在与具有细胞表面表达hLIGHT受体(例如，HVEM，LTβR和/或DcR3)的细胞接触时抑制或以其他方式减少CCL20、IL-8和/或RANTES从所述细胞分泌的拮抗型抗体。在一些实施方案中，hLIGHT的拮抗剂(例如，本发明的拮抗性抗体)可以，例如，通过抑制或以其它方式减少表达hLIGHT受体的细胞的活化和/或细胞信号转导途径，从而相对无拮抗剂时hLIGHT介导的生物活性而言，抑制该细胞的hLIGHT介导的生物活性。在某些实施方案中，本发明提供的抗体为完全人源性、拮抗性抗hLIGHT抗体，优选完全人源性、单克隆、拮抗性抗hLIGHT抗体。

术语“抗体”和“免疫球蛋白”或“Ig”在此可互换使用。术语“免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体”、“免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体”、“抗hLIGHT抗体”以及类似术语同样在此可互换使用，并指特异性结合hLIGHT多肽(例如hLIGHT抗原或表位)的抗体或其片段。免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体或其片段可与相关抗原交叉反应。优选地，免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体或其片段不与其它抗原交叉反应。免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体或其片段可通过，例如，免疫测定、BIAcore或其它本领域技术人员已知的技术进行鉴定。当通过放射性免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)等实验技术测定时，抗体或其片段与hLIGHT抗原的结合亲和性高于任意交叉反应抗原时，该抗体或其片段特异性结合hLIGHT抗原。通常，特异性或选择性反应将是背景信号或噪音的至少两倍，更通常是背景的10倍。例如，有关抗体特异性的讨论可参见Paul编辑，1989，Fundamental Immunology Second Edition，Raven Press，New York，第332-336页。

本发明的抗体包括但不限于，合成抗体、单克隆抗体、重组生成的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体、单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性、双特异性等)、骆驼源化(camelized)抗体、Fab片段、F(ab′)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗个体基因型(抗Id)抗体以及任意上述抗体的表位结合片段。特别地，本发明的抗体包括免疫球蛋白分子和该免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，包含免疫特异性结合至hLIGHT抗原的抗原结合位点(例如，抗hLIGHT抗体的一个或多个互补决定区(CDR))的抗原结合域或分子。本发明的抗体可以是任何型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)，任何类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的免疫球蛋白分子。在优选的实施方案中，所述hLIGHT抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆hLIGHT抗体。在某些实施方案中，本发明的抗体为IgG抗体，或者它的一类(例如，人IgG1或IgG4)或亚类。

术语“抗原结合域”、“抗原结合区”、“抗原结合片段”和类似的术语指包含与抗原相互作用的氨基酸残基并赋予所述抗体针对该抗原的特异性和亲和性的抗体部分(例如，互补决定区(CDR))。抗原结合区可来自任意动物种类，例如啮齿动物(例如，兔、大鼠和仓鼠)和人类。优选地，所述抗原结合区来自人类。

本发明所用的术语“组合物”指包含特定成分(例如，本发明的抗体)(任选地，以特定量)的产品，以及由特定成分(任选地，以特定量)的组合直接或间接形成的任意产品。

术语“恒定区”或“恒定域”指轻链和重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但显示出各种效应功能，例如与Fc受体相互作用。该术语指免疫球蛋白中相对免疫球蛋白其它部分(可变区，其包含抗原结合位点)具有更保守的氨基酸序列的部分。恒定区包含重链的CH1、CH2和CH3结构域和轻链的CHL结构域。

在有关多肽的上下文中，本发明所用的术语“衍生物”指如下所述的多肽，该多肽包含经过引入氨基酸替换、删除或添加后改变的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体的氨基酸序列。本发明所用的术语“衍生物”还指经过化学修饰(例如，将任意类型的分子共价连接至多肽)的hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体。例如，但非限制，hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗体可通过，例如，糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/阻断基团衍生化、蛋白酶裂解、连接至细胞配体或其它蛋白等方式进行化学修饰。所述衍生物通过修饰在其所连接分子的类型或位置上不同于天然存在的或是起始的肽或多肽。衍生物进一步包括去除该肽或多肽上天然存在的一个或多个化学基团。hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗体的衍生物可通过本领域技术人员已知的技术进行化学修饰，所述技术包括但不限于特定的化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。此外，hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗体的衍生物可包含一个或多个非经典氨基酸。多肽衍生物具有与本发明所述hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT抗体类似或相同的功能。

本发明所用的术语“有效量”指足以减少和/或减缓给定疾病和/或与之相关症状的严重性和/或病程的疗法(例如，本发明提供的抗体或药物组合物)的量。该术语还包括减少或减缓给定疾病的进展，减少或减缓给定疾病的复发、形成或发作，以及/或者提高或增强另一疗法(例如，本发明提供的抗hLIGHT抗体以外的疗法)的预防或治疗效果所需的量。在一些实施方案中，本发明抗体的有效量为约0.1mg/kg(mg抗体/kg个体体重)至约100mg/kg。在某些实施方案中，本发明提供的抗体的有效量为约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg或约100mg/kg(或在此范围之内)。在一些实施方案中，本文所用的“有效量”还指实现特定结果(例如，抑制细胞的hLIGHT生物活性，例如抑制CCL20、IL-8或RANTES从该细胞的分泌)所需的本发明抗体的量。

本发明所用的术语“表位”指在抗原(例如hLIGHT多肽或hLIGHT多肽片段)表面能够与抗体的一个或多个抗原结合区结合，且在动物(优选哺乳动物，最优选人)体内具有抗原性或免疫原性、能够诱发免疫应答的局部区域。具有免疫原性活性的表位是在动物体内诱发抗体应答的多肽部分。具有抗原性活性的表位是通过本领域的任意公知方法(例如，通过本发明所述的免疫测定)测定的与抗体免疫特异性结合的多肽部分。抗原性表位不一定具有免疫原性。表位通常由氨基酸或糖侧链等分子的化学活性表面基团组成，并具有特定的三维结构特征和特定的电荷特征。多肽中促使形成表位的区域可以是该多肽的相邻近的氨基酸，或者该表位可由来自该多肽的两个或多个非相邻区域组成。表位可具有或不具有该抗原的三维表面特征。在某些实施方案中，hLIGHT表位具有hLIGHT多肽的三维表面特征(例如，hLIGHT多肽的三聚形式)。在其它实施方案中，hLIGHT表位具有hLIGHT多肽的线性特征(例如，hLIGHT多肽的三聚形式或单体形式)。本发明提供的抗体可免疫特异性结合单体(变性)形式的hLIGHT的表位、三聚(天然)形式的hLIGHT的表位，或者同时可结合单体(变性)形式和三聚(天然)形式的hLIGHT的表位。在具体的实施方案中，本发明提供的抗体免疫特异性结合三聚形式的hLIGHT的表位，但不会免疫特异性结合单体形式的hLIGHT的表位。

本发明所用的术语“赋形剂”指通常用作药物的稀释剂、溶媒、防腐剂、结合剂或稳定剂的惰性物质，其包括但不限于，蛋白(例如，血清白蛋白等)、氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸等)、脂肪酸和磷脂(例如，烷基磺酸盐、辛酸盐等)、表面活性剂(例如，SDS、聚山梨酯、非离子型表面活性剂等)、糖(例如，蔗糖，麦芽糖，海藻糖等)以及多元醇(例如，甘露糖醇、山梨糖醇等)。还可参见Remington′sPharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA，其全部在此引用作为参考。

在有关肽或多肽的上下文中，本发明所用的术语“片段”指包含少于全长氨基酸序列的肽或多肽。这种片段可来自于，例如，在氨基末端的截短、在羧基末端的截短、以及/或者从氨基酸序列内部去除残基。片段可以通过，例如，RNA可变剪接或体内蛋白酶活性获得。在某些实施方案中，hLIGHT片段包含具有hLIGHT多肽或免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体的氨基酸序列中至少5个相邻氨基酸残基、至少10个相邻氨基酸残基、至少15个相邻氨基酸残基、至少20个相邻氨基酸残基、至少25个相邻氨基酸残基、至少40个相邻氨基酸残基、至少50个相邻氨基酸残基、至少60个相邻氨基酸残基、至少70个相邻氨基酸残基、至少80相邻氨基酸残基、至少90个相邻氨基酸残基、至少100个相邻氨基酸残基、至少125个相邻氨基酸残基、至少150个相邻氨基酸残基、至少175个相邻氨基酸残基、至少200个相邻氨基酸残基或至少250个相邻氨基酸残基的多肽。在具体的实施方案中，hLIGHT多肽或免疫特异性结合hLIGHT多肽的抗体的片段保留了该多肽或抗体的至少1个、至少2个或至少3个功能。

术语“完全人源性抗体”或“人源抗体”可在此互换使用，并指包含人可变区、最优选包含人恒定区的抗体。在具体的实施方案中，该术语指包含人可变区和人恒定区的抗体。在具体的实施方案中，“完全人源性”抗hLIGHT抗体还可包含结合hLIGHT多肽，并由天然发生的人胚系免疫球蛋白核酸序列的体细胞变体的核酸序列编码的抗体。在具体的实施方案中，本发明提供的抗hLIGHT抗体为完全人源性抗体。术语“完全人源性抗体”包括具有与Kabat等人描述的人胚系免疫球蛋白序列相对应的可变区和恒定区的抗体。(参见Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH出版号91-3242)。本发明实施例中提供了生产完全人源性抗体的示例性方法，但也可采用本领域任何已知的方法。

短语“重组人抗体”包括通过重组方式制备、表达、生成或分离的人抗体，例如通过转染至宿主细胞的重组表达载体表达的抗体，由重组体、组合式人抗体库分离的抗体，由对人免疫球蛋白基因进行转基因和/或转染色体的动物(例如，小鼠或牛)分离得到的抗体(例如，参见Taylor，L.D.等人，(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或是通过包括将人免疫球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列的任意其它方式制备、表达、生成或分离的抗体。这种重组人抗体可具有来自人胚系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区(参见Kabat，E.A.等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，U.S.Department of Health and Human Services，NIH出版号91-3242)。然而，在某些实施方案中，这种重组人抗体要经过体外突变(或者，当动物对人Ig序列进行转基因时，进行了体内的体细胞突变)，因此该重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列尽管来自于人胚系VH和VL序列或与之相关，但可能并非天然存在于体内的人胚系基因谱系中。

本发明所用的术语“融合蛋白”指包含抗体的氨基酸序列以及异源多肽或蛋白(即，通常不是该抗体的一部分的多肽或蛋白(例如，非-抗-hLIGHT抗原抗体))的氨基酸序列的多肽。在涉及hLIGHT或抗hLIGHT抗体时所用的术语“融合”指将肽或多肽，或其片段、变体和/或衍生物与异源性肽或多肽相连接。优选地，该融合蛋白保留了hLIGHT或抗hLIGHT抗体的生物活性。在某些实施方案中，该融合蛋白包含hLIGHT抗体VH结构域、VL结构域、VH CDR(一个、两个或三个VH CDR)、和/或VL CDR(一个、两个或三个VL CDR)，其中该融合蛋白免疫特异性结合hLIGHT表位。

在涉及抗体时所用的术语“重链”根据该重链恒定区的氨基酸序列指五种不同的类型，称为alpha(α)，delta(δ)，epsilon(ε)，gamma(γ)和mu(μ)。这些不同类型的重链已众所周知，且形成了五类抗体，分别为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包括IgG的四个亚类，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。优选地，该重链为人源性重链。

本发明所用的术语“宿主”指动物，优选哺乳动物，并最优选人。

本发明所用的术语“宿主细胞”指用核酸分子转染的特定个体细胞以及该种细胞的子代或潜在的子代。由于在后代中或者核酸分子向宿主细胞基因组的整合中可能发生突变或受环境影响，该细胞的子代可能与核酸分子转染的母代细胞并不完全一致。

本发明所用的术语“免疫调节剂”及其变体包括但不限于免疫调节剂，指能调节宿主免疫系统的药剂。在某些实施方案中，免疫调节剂为免疫抑制剂。在其它一些实施方案中，免疫调节剂为免疫刺激剂。根据本发明，在本发明的联合疗法中所用的免疫调节剂不包括抗hLIGHT抗体或抗原结合片段。免疫调节剂包括，但不限于，小分子、肽、多肽、蛋白、融合蛋白、抗体、无机分子、模拟剂(mimetic agent)以及有机分子。

在涉及施用其它疗法的上下文中所用的术语“联合”指超过一种疗法的应用。使用术语“联合”并不限制各疗法被施用至治疗个体的顺序。第一疗法可在第二疗法被施用至已患或易患hLIGHT介导的疾病的个体之前(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时或之后(例如，1分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)施用。任何额外的疗法可与其它额外疗法以任意顺序施用。在某些实施方案中，本发明的抗体可联合一种或多种疗法(例如，除了当前施用以预防、治疗、控制和/或减缓hLIGHT介导的疾病的本发明的抗体以外的疗法)施用。可联合本发明的抗体施用的疗法的非限制性示例包括镇痛药、麻醉药、抗生素或免疫调节剂或者在美国药典和/或Physician′s Desk Reference中列举的任意其它药剂。

本发明所用的术语“无机盐”指不包含碳的任何化合物，该化合物通过金属或类似金属基团置换部分或全部酸式氢或酸所得到，并在药物组合物和生物材料制备中常用作张力调节化合物。最常见的无机盐为NaCl、KCl、NaH₂PO₄等。

“分离的”或“纯化的”抗体基本不含来自该抗体的细胞或组织来源的细胞物质或其它污染蛋白，或者在化学合成时基本不含化学前体或其它化学品。短语“基本不含细胞物质”包括抗体制备物，其中所述抗体是从分离或重组生产该抗体的细胞的细胞成分中分离得到的。因此，基本不含细胞物质的抗体包括具有少于约30％、20％、10％或5％(干重)的异源蛋白(在此也称为“污染蛋白”)的抗体制备物。当该抗体为重组制备时，它还优选基本不含培养基，即，培养基占蛋白制备物的体积少于约20％、10％或5％。当抗体通过化学合成生成时，该抗体优选基本不含化学前体或其它化学品，即，它与参与该蛋白合成的化学前体或其它化学品相分离。相应地，这种抗体制备物具有少于约30％、20％、10％或5％(干重)的化学前体或非目标抗体化合物。在优选的实施方案中，本发明的抗体为分离的或纯化的抗体。

“分离的”核酸分子是与存在于该核酸分子天然来源的其它核酸分子相分离的核酸分子。此外，“分离的”核酸分子，例如cDNA分子，在通过重组技术生产时可基本不含其它细胞物质或培养基，或者在化学合成时基本不含化学前体或其它化学品。在具体的实施方案中，编码本发明的抗体的核酸分子为分离或纯化的核酸分子。

术语“人LIGHT”、“hLIGHT”或“hLIGHT多肽”及类似术语指包含SEQID NO：52氨基酸序列的多肽(“多肽”、“肽”和“蛋白”在此可互换使用)及相关的多肽，包括它的SNP变体。相关多肽包括等位变体(例如，SNP变体)；剪接变体；片段；衍生物；替换、删除和插入变体；融合多肽；以及种间同源物，优选地，该种间同源物保留了hLIGHT活性和/或足以生成抗hLIGHT免疫应答。示范性的非同义SNP变体包括但不限于，包含214E-32S(在hLIGHT多肽(例如，SEQ ID NO：52所示的hLIGHT多肽)位置214为谷氨酸和位置32为丝氨酸)、214K-32S、214E-32L和214E-32L的hLIGHT多肽。另外还包含了足以生成抗hLIGHT免疫应答的可溶性形式的hLIGHT(例如，参见SEQ ID NO：53和SEQ ID NO：54)。如同本领域技术人员所能理解的，本发明的抗hLIGHT抗体可以结合hLIGHT多肽、多肽片段、抗原和/或表位，因为表位是更大的抗原的一部分，抗原是更大的多肽片段的一部分，而多肽片段是更大的多肽的一部分。hLIGHT可以以三聚(天然)或单体(变性)形式存在。

术语“Kabat编号”和类似的术语已为本领域所认识，指与抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中的氨基酸残基相比，更具可变性(即，超变性)的其它氨基酸残基的编号系统(Kabat等人，(1971)Ann.NY Acad.Sci.190：382-391和Kabat等人，(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，U.S.Department of Health and Human Services，NIHPublication No.91-3242)。对于重链可变区，超变区通常在CDR1的氨基酸位置31至35，CDR2的氨基酸位置50至65，以及CDR3的氨基酸位置95至102。对于轻链可变区，超变区通常在CDR1的氨基酸位置24至34，CDR2的氨基酸位置50至56，以及CDR3的氨基酸位置89至97。

根据恒定区的氨基酸序列，在涉及抗体时所用的术语“轻链”指两种不同的类型，称为kappa(κ)或lambda(λ)。在优选的实施方案中，该所述轻链为人轻链。

此处讨论的术语“控制”指个体从疗法(例如，预防性或治疗性药剂)获得的有益效果，但并没有治愈感染。在某些实施方案中，向个体施用一种或多种疗法(例如，预防性或治疗性制剂，例如本发明的抗体)以“控制”hLIGHT介导的疾病(例如，IBD或GVHD)、hLIGHT介导的疾病的一种或多种症状，从而防止该疾病的进展或恶化。

术语“单克隆抗体”指从同源或基本同源的抗体群体中获得的抗体，且各单克隆抗体通常识别抗原上的单个表位。在优选的实施方案中，“单克隆抗体”，如此处所用，指通过单个杂交瘤或其它细胞生产的抗体，其中通过ELISA或者其它本领域已知或是此处的实施例提供的抗原结合或竞争性结合实验检测，该抗体仅免疫特异性结合hLIGHT表位。术语“单克隆”不限于任何具体的制备抗体的方法。例如，本发明的单克隆抗体可通过Kohler等人，Nature，256：495(1975)所述的杂交瘤法制备，或者可采用例如此处所述的技术从噬菌体库分离。其它制备克隆细胞系以及由其表达单克隆抗体的方法已为本领域公知(例如，参见Short Protocols in Molecular Biology，(2002)第5版，Ausubel等人编，第11章，John Wiley and Sons，New York)。本发明的实施例提供了生产其它单克隆抗体的其它示范性方法。

在涉及生物材料(例如核酸分子、多肽、宿主细胞等)时使用的术语“天然存在”或“天然的”指在自然中发现且未经人类改变的。

此处所用的术语“药学可接受的”指经过联邦或州政府的管理机构批准，或者被美国药典、欧洲药典或其它被普遍认可的针对在动物体内(更特别地在人体)的应用的药典所收录。

此处所用的术语“多克隆抗体”指对具有多个表位的蛋白的免疫应答中生成的抗体群，并因此包括多种针对该蛋白内相同或不同表位的不同抗体。制备多克隆抗体的方法已为本领域所知(例如，参见Short Protocols inMolecular Biology，(2002)，第5版，Ausubel等人编，第11章，John Wileyand Sons，New York)。

此处所用的术语“多聚核苷酸”、“核苷酸”、“核酸”、“核酸分子”以及其它类似术语可互换使用，包括DNA、RNA、mRNA等。

此处所用的术语“预防”指通过施用此处提供的疗法或疗法组合(例如，预防性或治疗性制剂(例如本发明的抗体)的组合)，完全或部分抑制hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的形成、复发、发作或扩散。

此处所用的术语“预防性制剂”指能够完全或部分抑制个体体内hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的形成、复发、发作或扩散的制剂。在具体的实施方案中，术语“预防性制剂”指本发明的抗体。在某些其它实施方案中，术语“预防性制剂”指除本发明的抗体以外的制剂。优选地，预防性制剂是已知能够用于或曾经用于或正用于预防hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状或者阻止hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的发作、形成、进展和/或严重性的制剂。在具体实施方案中，预防性制剂为完全人源性抗hLIGHT抗体，例如完全人源性抗hLIGHT单克隆抗体。

在本发明的某些实施方案中，“预防有效量血清效价”为在个体体内完全或部分抑制hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的形成、复发、发作或扩散的个体(优选人)的血清效价。

术语“hLIGHT抗原”指抗体免疫特异性结合的hLIGHT多肽部分。hLIGHT抗原还指抗体免疫特异性结合的hLIGHT多肽或其片段的类似物或衍生物。在一些实施方案中，hLIGHT抗原是单体hLIGHT抗原或三聚hLIGHT抗原。hLIGHT多肽中对表位有用的区域可以是该多肽的相邻氨基酸，或者表位可来自该多肽的两个或多个非相邻区域。表位可具有或不具有该抗原的三维表面特征。在hLIGHT抗原表面能够引发免疫应答的局部区域为hLIGHT表位。该表位可具有或不具有该抗原的三维表面特征。

“hLIGHT介导的疾病”和“hLIGHT介导的失调”在此可互换使用，指完全或部分由hLIGHT引起或者作为hLIGHT的结果的任意疾病。在某些的实施方案中，hLIGHT在细胞表面异常(例如，高度)表达。在一些实施方案中，hLIGHT可以在特定的细胞类型上异常上调。在其它实施方案中，由hLIGHT和hLIGHT配体的结合引起了正常、异常或者过度的细胞信号转导。在某些实施方案中，hLIGHT配体为hLIGHT受体(例如，HVEM、LTβR或DCR3)，例如，在结肠上皮细胞等细胞的表面表达的hLIGHT受体。在某些实施方案中，hLIGHT介导的疾病为炎性肠道疾病(IBD)，例如Crohn疾病(CD)或溃疡性结肠炎(UC)。在其它实施方案中，hLIGHT介导的疾病为移植物抗宿主病(GVHD)。

“hLIGHT配体”指结合hLIGHT或以其它方式与hLIGHT相互作用的分子。在优选的实施方案中，hLIGHT配体为hLIGHT受体。

术语“hLIGHT受体”或“hLIGHT结合受体”可在此互换使用，指结合hLIGHT的受体多肽。在具体实施方案中，hLIGHT受体为HVEM、LTβR或DCR3。在一些实施方案中，hLIGHT受体在结肠上皮细胞等细胞的表面表达。

此处所用的术语“糖”指由多元醇衍生的一类分子。糖通常指碳水化合物，并可包含不同数量的糖单元，例如，单糖、二糖以及多糖。

此处所用的术语“血清效价”指在至少10个、优选至少20个、最优选至少40个个体至大约为100、1000或更多个体的群体的平均血清效价。

此处所用的术语“副作用”包括疗法(例如，预防性或治疗性制剂)的不希望的作用或不良作用。不希望的作用不一定是不良作用。疗法(例如，预防性或治疗性制剂)的不良作用可能是有害的或是不适的或是危险的。副作用的示例包括腹泻、咳嗽、肠胃炎、气喘、恶心、呕吐、厌食、腹部绞痛、发烧、疼痛、体重减轻、脱水、脱发、呼吸困难、失眠、头晕、粘膜炎、神经和肌肉作用、疲劳、口干、食欲降低、施用位点的皮疹或肿胀、类似流感的症状(如发热、寒战和疲劳)、消化道问题和过敏反应。患者还可能出现许多已为本领域所知的其它不希望的作用。其中许多作用的描述参见Physician′s Desk Reference(第60版，2006)。

术语“小分子”以及类似的术语包括但不限于肽、肽模拟物、氨基酸、氨基酸类似物、多聚核苷酸、多聚核苷酸类似物、核苷酸、核苷酸类似物、分子量小于约10,000克每摩尔的有机化合物或无机化合物(即包含了异源有机和/或有机金属化合物)、分子量小于约5,000克每摩尔的有机或无机化合物、分子量小于约1,000克每摩尔的有机或无机化合物、分子量小于约500克每摩尔的有机或无机化合物、以及该类化合物的盐、酯和其它药学可接受形式。

在涉及包含了免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的液体制剂的上下文中所用的术语“稳定性”和“稳定的”指该制剂中的抗体在给定的生产、制备、运输和贮存条件下对热和化学解折叠、聚集、降解或片段化的耐受。本发明的“稳定”制剂在给定的生产、制备、运输和贮存条件下保留的生物活性等于或大于80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.5％。抗体的稳定性可通过本领域技术人员已知的方法(包括但不限于毛细管凝胶电泳(rCGE)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和HPSEC)，与参考抗体比较聚集、降解或片段化的程度进行评估。包含免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的制剂的总体稳定性可通过各种免疫检测(包括，例如，采用hLIGHT的特异性表位的ELISA和放射性免疫检测)进行评估。

此处所用的术语“个体”和“患者”可以互换使用。此处所用的个体优选哺乳动物，例如非灵长动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长动物(例如，猴和人)，最优选人。在一个实施方案中，该个体为患有hLIGHT介导的疾病的哺乳动物，优选人。在另一实施方案中，该个体为具有罹患hLIGHT介导的疾病风险的哺乳动物，优选人。

此处所用的“基本全部”指至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％、或约100％。

此处所用的术语“基本不含表面活性剂”指免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的制剂，所述制剂包含小于0.0005％、小于0.0003％、或小于0.0001％的表面活性剂和/或小于0.0005％、小于0.0003％或小于0.0001％的表面活性剂。

此处所用的术语“基本不含盐”指免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的制剂，所述制剂包含小于0.0005％、小于0.0003％或小于0.0001％的无机盐。

本发明所用的术语“表面活性剂”指具有双性结构的有机物质；即，它们由具有相反可溶性倾向的基团(通常为油溶性烃链和水溶性离子基团)组成。表面活性剂可根据表面活性部分的电荷分为阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂。表面活性剂常被用作各种药物组合物和生物材料制剂的润湿剂、乳化剂、助溶剂和分散剂。

本发明所用的术语“标记”指能与多肽和/或编码hLIGHT或hLIGHT抗体或其抗原结合片段的多聚核苷酸结合的任意类型的部分。例如，编码hLIGHT或hLIGHT抗体或其抗原结合片段的多聚核苷酸可包含一个或多个额外的标记编码核苷酸序列，该标记编码核苷酸序列能够编码，例如，可检测的部分或帮助亲和纯化的部分。标记和抗体可被翻译为融合蛋白的形式。在涉及标记时，术语“可检测的”或“检测”指任何标记其能够被可视化或者或者其存在能够通过其它方式被检测和/或测量(例如，定量)。可检测标记的非限制性范例为荧光标记。

本发明所用的术语“治疗性制剂”指可用于治疗、控制或减缓hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的任意制剂。在某些实施方案中，术语“治疗性制剂”指本发明的抗体。在其它一些实施方案中，术语“治疗性制剂”指除本发明的抗体以外的制剂。优选地，治疗性制剂为已知可用于、或曾被用于或正被用于治疗、控制或减缓hLIGHT介导的疾病和/或其相关症状的制剂。在具体的实施方案中，治疗性制剂为完全人源性抗hLIGHT抗体，例如完全人源性抗hLIGHT单克隆抗体。

联合疗法(例如，预防性或治疗性制剂的使用)比任意两种或多种单独疗法的累加作用更为有效。例如，预防性和/或治疗性制剂联合应用的协同作用允许向患有hLIGHT介导的疾病的患者施用较低剂量的一种或多种制剂和/或以更低的频率施用该制剂。使用较低剂量的预防性或治疗性疗法和/或以更低的频率施用所述疗法的能力可减少向个体施用所述疗法所伴随的毒性，但不减少所述疗法在预防、控制、治疗或减缓hLIGHT介导的疾病的效果。此外，协同作用可提高疗法在预防、控制、治疗或减缓hLIGHT介导的疾病中的效果。最后，疗法(例如，预防性或治疗性制剂)联用的协同作用可以避免或减少与任意单独疗法的使用相关的不良作用或不希望的作用。

在本发明某些实施方案中，“治疗有效血清效价”是在个体体内，优选在人体内减少hLIGHT介导的疾病的严重性、作用时间和/或与之相关的症状的所述个体体内的血清效价。

本发明所用的术语“疗法”指可用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病(例如，IBD或GVHD)的任意方案、方法和/或制剂。在某些实施方案中，术语“疗法”指生物疗法、支持疗法和/或其它本领域技术人员(例如医疗人员)已知的可用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的疗法。

本发明所用的术语“治疗”指通过施用一种或多种疗法(包括但不限于，施用一种或多种预防性或治疗性制剂，例如本发明的抗体)以减少或缓和hLIGHT介导的疾病(例如，IBD或GVHD)的进展、严重性和/或发作期限。在具体的实施方案中，该术语指减少或抑制hLIGHT和HVEM的结合、减少或抑制hLIGHT和LTβR的结合、减少或抑制hLIGHT和DcR3的结合、减少或抑制表达个体hLIGHT受体的细胞生产和分泌CCL20、减少或抑制表达个体hLIGHT受体的细胞生产和分泌IL-8、减少或抑制表达个体hLIGHT受体的细胞生产和分泌RANTES、和/或抑制或减少与hLIGHT介导的疾病(例如，IBD或GVHD)相关的一种或多种症状。在具体实施方案中，预防性制剂为完全人源性抗hLIGHT抗体，例如完全人源性抗hLIGHT单克隆抗体。

术语“可变区”或“可变域”指轻链和重链的一部分，通常约为重链的氨基末端120至130个氨基酸，以及轻链的约100至110个氨基酸，其在抗体中的序列差异很大，并用于各特定抗体针对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在被称为互补决定区(CDR)的区域，而在可变区中更加高度保守的区域被称为框架区(FR)。轻链和重链的CDR主要负责抗体和抗原的相互作用。本发明所用的氨基酸位置的编号参照EU指数(EU Index)，参见Kabat等人，(1991)Sequences of proteins of immunological interest.(U.S.Department of Health and Human Services，Washington，D.C.)第5版(“Kabat等人”)。在优选的实施方案中，该可变区为人的可变区。

在涉及hLIGHT或hLIGHT抗体时所用的术语“变体”指与天然或未修饰序列相比包含了一个或多个(例如，约1个至约25个、约1个至约20个、并优选约1个至约15个、更优选约1个至约10个、最优选约1个至约5个)氨基酸序列替换、删除和/或添加的肽或多肽。例如，hLIGHT变体可来自于对天然hLIGHT的氨基酸序列的一个或多个(例如，约1个至约25个、约1个至约20个、并优选约1个至约15个、更优选约1个至约10个、最优选约1个至约5个)变化。同样举例，抗hLIGHT抗体的变体可来自于对天然的或是未曾修饰的抗hLIGHT抗体的氨基酸序列的一个或多个(例如，约1个至约25个、约1个至约20个、并优选约1个至约15个、更优选约1个至约10个、最优选约1个至约5个)变化。变体可天然存在，例如等位或剪接变体，或者可以人工构建。多肽变体可由编码所述变体的相应核酸分子制备得到。在优选的实施方案中，hLIGHT变体或hLIGHT抗体变体分别保留了hLIGHT或hLIGHT抗体的功能活性。在具体的实施方案中，hLIGHT抗体免疫特异性结合hLIGHT和/或拮抗hLIGHT活性。在某些实施方案中，所述变体由hLIGHT的单核苷酸多态性(SNP)变体编码。hLIGHT的示范性SNP变体在氨基酸位置214编码谷氨酸(E)或赖氨酸(K)。hLIGHT的另一示范性SNP变体在氨基酸位置32编码丝氨酸(S)或亮氨酸(L)。

附图说明

图1A-1B显示了用人抗hLIGHT抗体进行的内源性表达hLIGHT的细胞计数分析。(A)人T细胞系II23.D7由PMA和伊屋诺霉素激活过夜，并用激活标记CD69联合各种抗hLIGHT抗体进行染色。对CD69阳性细胞进行门控(gated)并进行hLIGHT染色(粗线)分析，与对照人抗流感IgG1(虚线)比较，或是与抗hLIGHT抗体对非激活II23.D7细胞的染色(灰线)进行比较。采用山羊抗人IgG-APC二级抗体检测结合。(B)人抗hLIGHT抗体对激活的人T细胞系II23.D7的染色具有可饱和性。以不同浓度的人抗hLIGHT抗体标记激活的II-23.D7细胞并以抗人IgG-APC检测。图中绘制了几何平均荧光强度数据和非线性回归。

图2A-2B显示了在EL4-hLIGHT细胞系上以人抗hLIGHT抗体对重组hLIGHT的染色。在图(A)和(B)中采用了不同数量级的抗hLIGHT抗体对EL4-hLIGHT细胞进行染色，用抗人IgG-APC检测，并以流式细胞仪进行分析。测量了几何平均荧光强度(MFI)，并采用非线性回归分析。在所有的试验中，人抗流感蛋白M2被用作阴性对照。该分析获得的数据显示在图3中。

图3显示了人抗hLIGHT单克隆抗体的特征。

图4显示了ELISA检测的抗体交叉阻断。该分析通过ELISA根据对hLIGHT的竞争性结合定义了两个组。单个抗体被包被在96孔板的微孔中。可溶性FLAG-hLIGHT与可溶性抗hLIGHT抗体进行预孵育，然后添加至包被的微孔。通过抗FLAG IgG-HRP检测FLAG-hLIGHT与包被抗体的结合。抑制百分比通过下式采用每个样本的OD确定：％抑制＝(最大值-样本值/最大值)×100。

图5A-5B显示了人抗hLIGHT单克隆抗体对细胞表面人HVEM:Fc与天然hLIGHT的结合的阻断。在图(A)和(B)中，不同数量等级的抗体与EL4-hLIGHT细胞孵育，添加亚饱和浓度的生物素化的人HVEM:Fc，并以SA-APC检测。如图(A)所示，人抗流感M2抗体被用作对照。

图6A-6B显示了人抗hLIGHT单克隆抗体对细胞表面人LTβR:Fc与天然hLIGHT的结合的阻断。在图(A)-(B)中，不同数量等级的抗体与EL4-hLIGHT细胞孵育，添加亚饱和浓度的polyHis标记的人LTβR:Fc，并以抗-His-APC检测。如图(A)所示，人抗流感M2抗体被用作对照。

图7显示了hLIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌CCL20。向HT29.14s细胞的生长培养基添加浓度递增的重组可溶性hLIGHT。处理后3天收集生长培养基，并通过ELSIA检测CCL20的水平。误差棒显示了两个独立的处理。

图8显示了hLIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌IL-8和RANTES。将重组可溶性hLIGHT、TNF、LTα₁β₂和FLAG-BAP(作为阴性对照)添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在处理后1、2和3天从不同的微孔收集生长培养基。通过ELISA测定IL-8和RANTES水平。FLAG标记的细菌碱性磷酸酶(FLAG-BAP)被用作标记的不相关蛋白阴性对照。

图9A-9B显示了人抗hLIGHT抗体抑制hLIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌CCL20。(A)将重组可溶性hLIGHT(1μg/ml)与抗hLIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定CCL20水平。将单独的培养基、单独的可溶性hLIGHT、与抗流感M2抗体孵育的可溶性hLIGHT以及单独的每一种抗hLIGHT抗体作为对照孵育。(B)图A中显示了数据的非线性回归分析。

图10A-10B显示了人抗hLIGHT抗体抑制细胞表面表达的hLIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌RANTES。(A)将固定的EL4-hLIGHT细胞与抗hLIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定RANTES水平。将单独的培养基、单独的EL4-hLIGHT细胞、单独的可溶性hLIGHT、以及单独的每种抗hLIGHT抗体作为对照孵育。(B)图(A)中数据的绘图。

图11显示了与hLIGHT的结合的竞争性阻断试验的结果。

图12显示了抗体对HVEM:Fc和293hLIGHT细胞的结合的阻断活性。测试了E1、E13、F19人抗hLIGHT单克隆抗体、R&D mAb和市售的山羊抗hLIGHT多克隆抗体(R&D Systems)、以及兔抗hLIGHT多克隆抗体(eBioscience)对HVEM:Fc和表达hLIGHT的293细胞的结合的阻断。

图13显示了抗体对LTβR:Fc和293hLIGHT细胞的结合的阻断活性。测试了E1和E13人抗hLIGHT单克隆抗体、R&D mAb和市售的山羊抗hLIGHT多克隆抗体(R&D Systems)、以及兔抗hLIGHT多克隆抗体(eBioscience)对LTβR:Fc和表达hLIGHT的293细胞的结合的阻断。

图14显示了抗体对(A)LTβR:Fc和(B)HVEM:Fc与293hLIGHT细胞结合的阻断活性，是图12和13中所示数据的图示。

图15A-15B显示了各种抗hLIGHT抗体与天然或变性的可溶性hLIGHT的结合。将一份5微克的可溶性人LIGHT与2×SDS样本缓冲液煮沸(变性)，另一份不加处理(天然)，然后同时以6×增量系列稀释。使用8通道移液器将5μl的各种hLIGHT稀释液同时点在水合0.2μm PVDF膜(Invitrogen，Carlsbad，CA)上。将该印迹空气干燥，然后再度水合，封闭(1×TBST(Tris-缓冲盐Tween-20)+2.5％脱脂牛奶+0.02％叠氮化钠)。每个印迹以5μg/ml的每种一级抗体进行探测。将印迹在1×TBST中洗涤三次，然后以5μg/ml生物素化的二级抗体(生物素-山羊α人(Vector Labs，Burlingame，CA)，生物素-山羊α小鼠(Jackson labs，Bar Harbor，ME)，生物素-小鼠α山羊(Sigma-Aldrich corp.，St.Louis，MO))进行孵育。将印迹在1×TBST中洗涤三次，然后以超SA-HRP(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)洗涤。使用ECL检测试剂盒(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)进行化学发光检测，并通过对X-OMAT AR成像膜(Kodak，Rochester，New York)的曝光将信号可视化。(A)采用E1、E13、E63、F19、F23人抗hLIGH单抗，或者由R&D Systems(″R&D小鼠单抗″)和Abnova(″Abnova小鼠单抗″)购得的两种鼠抗hLIGH单克隆抗体所得的斑点印迹结果。抗M2(无关抗原)抗体被用作阴性对照。(B)采用市售的山羊抗hLIGHT多克隆抗体制备物(R&DSystems″R&D山羊多克隆抗体″)或两种市售的兔抗hLIGHT多克隆抗体(eBioscience(“eBioscience兔多克隆抗体”)和Peprotech(“Peprotech兔多克隆抗体”))制备物得到的斑点印迹结果。

图16显示了各种抗hLIGHT抗体与天然的或是变性的可溶性hLIGHT的结合，并以表格形式总结了图15中所示的数据。

图17显示本发明的人抗LIGHT抗体抑制LIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌CCL20，而市售的鼠抗hLIGHT抗体未显示抑制作用。将重组可溶性人LIGHT(1μg/ml)与抗LIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定CCL20水平。将单独的培养基、单独的可溶性LIGHT、与抗流感M2抗体孵育的可溶性LIGHT，非阻断抗LIGHT抗体B12以及单独的每一种抗LIGHT抗体作为对照进行孵育。E1和F19是各种交叉阻断表位基团的代表。

图18显示本发明的人抗LIGHT抗体抑制LIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌RANTES，而市售的鼠抗hLIGHT抗体未显示抑制作用。将重组可溶性人LIGHT(1μg/ml)与抗LIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定RANTES水平。将单独的培养基、单独的可溶性LIGHT与抗流感M2抗体孵育的可溶性LIGHT、非阻断抗LIGHT抗体B12以及单独的每一种抗LIGHT抗体作为对照进行孵育。E1和F19是各种交叉阻断表位基团的代表。

图19A-19B显示了细胞表面表达的hLIGHT被人(A)E1或(B)F19抗hLIGHT抗体结合的细胞计数分析，并与它们的重组单kappa链抗体对应物进行了比较。稳定表达hLIGHT的293细胞与图例中所示的数量逐渐上升的抗LIGHT抗体进行孵育。采用山羊抗人IgG-APC二级抗体检测结合。从杂交瘤培养物或被哺乳动物表达载体瞬时转染的293F细胞中纯化抗体，该表达载体编码与重链基因配对的不同kappa链cDNA。图中绘制了几何平均荧光强度数据的点和非线性回归。

图20显示了将单kappa链抗体与其亲代对应物相比，ELISA检测的抗体交叉阻断。该分析通过ELISA根据对hLIGHT的竞争性结合定义了两个组。单个抗体被包被在96孔板的微孔中。可溶性FLAG-hLIGHT与可溶性抗hLIGHT抗体进行预孵育，然后添加至包被的微孔。通过抗FLAGIgG-HRP检测FLAG-hLIGHT与包被的抗体的结合。抑制百分比通过下式采用每个样本的OD来确定：％抑制＝(最大值-样本值/最大值)×100。

图21A-21B显示了人抗hLIGHT单克隆抗体及其单kappa链重组对应物对(A)人HVEM:Fc或(B)人LTβR:Fc与细胞表面的天然hLIGHT结合的阻断。将不同等级数量的抗体与EL4-hLIGHT细胞孵育，添加亚饱和浓度的生物素化人HVEM:Fc或polyHis标记的人LTβR:Fc，并以SA-APC或抗-His-APC检测。从杂交瘤培养物或哺乳动物表达载体瞬时转染的293F细胞中纯化抗体，该哺乳动物表达载体编码与重链基因配对的不同kappa链cDNA。

图22显示了重组单kappa链人抗LIGHT抗体相对于亲代杂交瘤所制备抗体对hLIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌CCL20的抑制。将重组可溶性人LIGHT(1μg/ml)与抗LIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定CCL20水平。将单独的培养基、单独的可溶性LIGHT(SHL)、与抗流感M2抗体孵育的可溶性LIGHT、或者在可溶性LIGHT缺失下的每一种抗体作为对照孵育。被称为″E1k2″的抗体包含E1kappa(B)，被称为″F19k2″的抗体包含F19kappa(B)。

图23显示本发明的人抗LIGHT抗体抑制LIGHT介导的人结肠上皮细胞分泌CCL20，而市售的鼠抗hLIGHT抗体或者没有抑制作用(Abnova)，亦或仅在极高的浓度(100μg/ml)下有抑制作用(R&D)。将重组可溶性人LIGHT(1μg/ml)与抗LIGHT抗体预孵育，并添加至HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定CCL20水平。将单独的培养基、单独的可溶性LIGHT(SHL)、与无关的抗流感M2抗体孵育的可溶性LIGHT、抗人血清白蛋白、或者在可溶性LIGHT缺失下的每一种抗体作为对照孵育。E1和F19是每种交叉阻断表位基团的代表。

图24A-24B显示了各种种族人群中(A)在氨基酸位置214编码谷氨酸(E)或赖氨酸(K)；或者(B)在氨基酸位置32编码亮氨酸(L)或丝氨酸(S)的某些非同义单核苷酸多态性(SNP)hLIGHT变体的等位基因频率。

图25A-25D.图25A-25C显示了通过人抗hLIGHT抗体124F23和124E1kappa(B)对表达人LIGHT的非同义SNP变体的细胞系染色的剂量滴定。采用不同数量等级的抗hLIGHT抗体对表达SNP变体(A)214E-32S、(B)214K-32S或(C)214E-32L的EL4-hLIGHT细胞染色，用抗人IgG-APC检测，并通过流式细胞仪进行分析。(D)显示了如图5进行的人抗LIGHT抗体介导的人HVEM:Fc(方块)或LTβR:Fc(三角)与细胞表面表达的214K-32SLIGHT SNP变体的结合的阻断的剂量滴定。对于图(A)-(D)，测定了几何平均荧光强度(MFI)，并采用了非线性回归分析。

图26A-26B显示了通过人抗hLIGHT抗体进行的表达非同义SNP变体的细胞系的流式细胞计数分析。(A)EL4-LIGHT SNP 214E细胞系和(B)EL4SNP 214K细胞系以同一浓度(10μg/ml)的每种抗hLIGHT抗体进行染色。采用山羊抗人IgG-APC二级抗体检测结合。同型对照人IgG用作阴性对照。

图27显示了人抗hLIGHT抗体抑制细胞表面表达的hLIGHT SNP变体介导的人结肠上皮细胞分泌RANTES。将重组可溶性hLIGHT(SHL)(1μg/ml)或5×10⁵EL4-hLIGHT 214K或214E SNP变体细胞与抗hLIGHT抗体预孵育，并加入HT29.14s细胞的生长培养基。在第3天从每批处理的两个微孔收集生长培养基。通过ELISA测定RANTES水平。将单独的培养基、单独的EL4-hLIGHT细胞、单独的可溶性hLIGHT、以及单独的每种抗hLIGHT抗体作为对照孵育。

图28显示了急性异种GVHD模型的示意图。在第-2天向SCID小鼠注射IL2Rβ抗体(TM-β1)，以减少NK细胞。在第-1天，该小鼠接受2.5Gy的半致死量辐射。在第0天，该小鼠通过腹腔注射接受100万人PBMC，然后迅速静脉注射人抗人LIGHT或阴性对照抗体。小鼠以3-4天的间隔称重，在第12天，处死小鼠，并进行肉眼病理(gross pathology)评估。移取脾脏进行流式细胞计数分析，移取盲肠进行组织学分析，并采集血清进行细胞因子和抗体分析。

图29显示了在小鼠急性异种GVHD疾病模型中观察到的肉眼病理评分。图中显示了对无单克隆抗体注射(圆圈)、124F23抗hLIGHT单克隆抗体注射(三角)和人IgG1单克隆抗体对照(方块)的病理评分。对腹泻、腹膜炎症/腹水和肠炎三个类别中每个规定了0、1、2或3分的分值(分别对应无、轻度、中度或严重，最高总分为9分)。

图30显示了在小鼠急性异种GVHD疾病模型中观察到的组织病理学评分。图中显示了对无单克隆抗体注射(圆圈)，124F23抗hLIGHT单克隆抗体注射(三角)和对照hIgG1单克隆抗体(方块)的病理评分。对炎症严重性、炎症范围、小肠绒毛损伤/萎缩和损伤百分比(percent involvement)四个类别中每个规定了0、1、2或3分的分值(分别对应无、轻度、中度或严重，最高总分为12分)。

图31A-31B显示了在GVHD研究中苏木精和曙红(H&E)组织染色的小鼠盲肠切片。(A)抗LIGHT单克隆抗体处理的小鼠盲肠切片和(B)对照人处理的小鼠。粘膜下层的病理改变显示了腹水，虚线箭头指示了血液区域，而实线箭头指示了淋巴细胞渗透区。

图32显示了在异种GVHD研究中的小鼠脾脏中的总T细胞数。星号显示对抗LIGHT单克隆抗体处理的动物和对照之间比较的t-检验值小于0.05。

发明详述

本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体。本发明还提供了编码免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的分离的核酸。本发明进一步提供了包含免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的编码核酸的载体和宿主细胞。本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体的制备方法。本发明还提供了治疗或控制hLIGHT介导的疾病的方法，其包括施用免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体。

抗体

本发明的抗体包括但不限于，合成抗体、单克隆抗体、重组生产的抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体、单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性、双特异性等)、骆驼源化(camelized)抗体、Fab片段、F(ab′)片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗个体基因型(抗Id)抗体以及任意上述抗体的表位结合片段。

特别地，本发明提供的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分(即，包含了免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗原结合位点的分子)。本发明提供的免疫球蛋白分子可以是任何型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类的免疫球蛋白分子。在具体的实施方案中，本发明提供的抗体为IgG抗体，优选IgG1或IgG4。

抗体的变体和衍生物包括保留了特异性结合表位的能力的抗体片段。优选的片段包括Fab片段(包含了抗原结合区以及通过二硫键连接的轻链和部分重链的抗体片段)；Fab′(包含了单个抗原结合区的抗体片段，该片段包含Fab和铰链区中的重链其他部分)；F(ab′)₂(通过重链铰链区的链间二硫键连接的两个Fab′分子；该Fab′分子可针对相同或不同的表位)；双特异性Fab(具有两个抗原结合区的Fab分子，每个抗原结合区可针对不同的表位)；包含可变区的单链Fab链，也称为sFv(通过10-25个氨基酸链连接在一起的抗体的单个轻链和重链的可变抗原结合决定区)；二硫键连接的Fv，或dsFv(通过二硫键连接在一起的抗体的单个轻链和重链的可变抗原结合决定区)；骆驼源化VH(抗体的单个重链的可变抗原结合决定区，其中VH界面(interface)的部分氨基酸发现于天然存在的骆驼抗体的重链)；双特异性sFv(具有两个抗原结合区的sFv或dsFv分子，每一种分子可针对不同的表位)；双链抗体(二聚化sFv，其通过第一sFv的VH结构域与第二sFv的VL结构域组装且第一sFv的VL结构域与第二sFv的VH结构域组装形成；该双链抗体的两个抗原结合区可针对相同或不同的表位)；以及三链抗体(三聚化sFv，其通过类似双链抗体的方式形成，但其中在单个复合物中生成了三个抗原结合区；这三个抗原结合区可针对相同或不同的表位)。抗体的衍生物还包含抗体结合位点的一个或多个CDR序列。当存在两个或多个CDR序列时，这些CDR序列可在一个支架上连接在一起。在某些实施方案中，将在本发明使用的抗体包括了单链Fv(″scFv″)。scFv为包含了抗体VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单个多肽链。一般而言，scFv多肽进一步包含VH和VL结构域之间的多肽接头，该接头使得scFv形成用于抗原结合的所需结构。有关scFv的综述可参见Pluckthun in ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，vol.1 13，Rosenburg and Moore eds.Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。

本发明的抗体可来自于任意动物来源，包括鸟类和哺乳动物(例如，人、鼠、驴、绵羊、兔、山羊、豚鼠、骆驼、马或鸡)。在某些实施方案中，本发明的抗体为人源或人源化单克隆抗体。本发明所用的“人源”抗体包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体，并包括从人免疫球蛋白库或从表达来自人类基因的抗体的小鼠分离的抗体。

在优选的实施方案中，本发明的抗体为完全人源性抗体，例如免疫特异性结合hLIGHT多肽、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的完全人源性抗体。这种完全人源性抗体相比完全鼠源性抗体(或其它完全或部分非人物种的抗体)、人源化抗体或嵌合抗体的优势将在于向个体施用时能够最小化不希望的副作用，例如针对非完全人源性抗体(例如，来自其它物种的抗hLIGHT抗体)的免疫应答。

本发明的抗体可具有单特异性、双特异性、三特异性或更大的多特异性。多特异性抗体可对hLIGHT多肽的不同表位具有特异性，或可能对hLIGHT多肽和外源表位(如外源多肽或固相支持材料)具有特异性。在优选的实施方案中，本发明提供的抗体单特异性针对hLIGHT多肽的给定表位，且不免疫特异性结合其它表位。

在优选的实施方案中，在包含本发明抗体的组合物以及使用本发明抗体的方法中的抗体包括E1、E13、E63、F19或F23抗体(分别为ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728)。本发明还提供了制备E1、E13、E63、F19或F23抗体(分别为ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728)和/或本发明所述的其它抗hLIGHT单克隆抗体的杂交瘤。

在某些实施方案中，本发明提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的分离的单克隆抗体，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体竞争性地阻断(例如，以剂量依赖方式)；其前提是与hLIGHT表位的结合不被(a)E1抗体和F19抗体、(b)E1抗体和F23抗体、(c)E13抗体和F19抗体、(d)E13抗体和F23抗体、(e)E63抗体和F19抗体或者(f)E63抗体和F23抗体两者同时阻断。该抗体可以是或不是完全人源性抗体。在优选的实施方案中，抗体为完全人源性单克隆抗hLIGHT抗体，更优选地为完全人源性单克隆拮抗性抗hLIGHT抗体。本发明的实施例中提供了可供使用的示范性的竞争性阻断测试。

在其它实施方案中，本发明提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的分离的抗体，优选完全人源性抗体，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体竞争性地阻断(例如，以剂量依赖方式)。所述抗体可以是或不是完全人源性抗体。在优选的实施方案中，该抗体为完全人源性单克隆抗hLIGHT抗体，更优选地为完全人源性单克隆拮抗性抗hLIGHT抗体。本发明的实施例中提供了可供使用的示范性的竞争性阻断测试。

在一些实施方案中，本发明提供的抗体(例如，以剂量依赖方式)与HVEM、LTβR和/或DcR3(或其融合蛋白)竞争结合细胞表面表达的hLIGHT。在其它实施方案中，本发明提供的抗体(例如，以剂量依赖方式)与HVEM、LTβR和/或DcR3(或其融合蛋白)竞争结合可溶性的hLIGHT。本发明的实施例中提供了可供使用的示范性的竞争性结合测定。在一个实施方案中，所述抗体部分或完全抑制HVEM、LTβR和/或DcR3与细胞表面表达的hLIGHT(例如，hLIGHT)的结合。在另一实施方案中，所述抗体部分或完全竞争性抑制HVEM、LTβR和/或DcR3与可溶性hLIGHT的结合。在一些实施方案中，本发明提供的抗体部分或完全抑制具有细胞表面表达的hLIGHT配体(例如hLIGHT受体，例如HVEM、LTβR和/或DcR3)的细胞分泌CCL20、IL-8和/或RANTES。在某些实施方案中，表达hLIGHT受体的细胞为结肠上皮细胞。

本发明的抗体包括如下的抗体或如下抗体的抗原结合片段：在实施例部分或本申请其它部分的E1抗体(ATCC录入号PTA-7729)、E13抗体(ATCC录入号PTA-7842)、或E63抗体(ATCC录入号PTA-7818)、F19抗体(ATCC录入号PTA-7819)或F23抗体(ATCC录入号PTA-7728)抗体。在具体的实施方案中，本发明的抗体为E1、E13、E63、F19或F23抗体。在另一实施方案中，本发明的抗体包含E1、E13、E63、F19或F23的抗原结合片段(例如，Fab片段)。

优选地，本发明的抗体为完全人源性单克隆抗体，例如免疫特异性结合hLIGHT的完全人源性单克隆拮抗型抗体。

在一些实施方案中，本发明提供的抗体结合具有hLIGHT多肽的三维表面特征(例如，hLIGHT多肽的三聚形式)的hLIGHT表位。可形成表位的hLIGHT多肽区域可以是该多肽的相邻氨基酸，或者该表位可来自该多肽的两个或多个非相邻区域的集合。hLIGHT表位可以如下形式存在：(a)hLIGHT的三聚体形式(“三聚hLIGHT表位”)、(b)hLIGHT的单体形式(“单体hLIGHT表位”)、(c)hLIGHT的三聚和单体形式、(d)hLIGHT的三聚形式，而非单体形式、(e)hLIGHT的单体形式，而非三聚形式。

例如，在一些实施方案中，所述表位仅以三聚(天然)形式存在或结合抗hLIGHT抗体，但不以单体(变性)形式存在或结合抗hLIGHT抗体。在其它实施方案中，hLIGHT表位具有hLIGHT多肽的线性特征(例如，hLIGHT多肽的三聚形式或单体形式)。本发明提供的抗体可以免疫特异性结合(a)单体形式hLIGHT的表位、(b)三聚形式hLIGHT的表位、(c)单体而非三聚形式hLIGHT的表位、(d)三聚而非单体形式hLIGHT的表位、或者(e)单体形式和三聚形式hLIGHT的表位。在优选的实施方案中，本发明提供的抗体免疫特异性结合三聚形式的hLIGHT的表位，但不会免疫特异性结合单体形式hLIGHT的表位。

在特定的实施方案中，本发明提供了下述一种或多种免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的VH链和/或VL链具有E1、E13、E63、F19或F23抗体的VH链和/或VL链氨基酸序列；或者所述抗体包含的VH链和/或VL链具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的VH链和/或VL链氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明提供了下述一种或多种免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的VH结构域和/或VL结构域具有E1、E13、E63、F19或F23抗体的VH结构域和/或VL结构域氨基酸序列；或者所述抗体包含的VH结构域和/或VL结构域具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的VH结构域和/或VL结构域氨基酸序列。

在另一实施方案中，本发明提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的一个、两个、三个或多个CDR具有E1、E13、E63、F19或F23抗体的一个、两个、三个或多个CDR的氨基酸序列；或者所述抗体包含的一个、两个、三个或多个CDR具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的一个、两个、三个或多个CDR的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了下述一种或多种免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的VH CDR和/或VL CDR具有E1、E13、E63、F19或F23抗体的VH CDR和/或VL CDR氨基酸序列；或者所述抗体包含的VH CDR和/或VL CDR具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的VHCDR和/或VL CDR氨基酸序列。

本发明提供了下述一种或多种免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的VH链和/或VL链分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体VH链和/或VL链氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1、E13或E63抗体，或者(b)F19或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断；其前提是与hLIGHT表位的结合不同时被两种抗体(a)E1和F19抗体、(b)E1和F23抗体、(c)E13和F19抗体、(d)E13和F23抗体、(e)E63和F19抗体或者(f)E63和F23抗体阻断。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的完全人源性抗体，所述抗体包含的VH链和/或VL链分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体VH链和/或VL链氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断。优选地，该完全人源性抗体为完全人源性单克隆抗体和/或hLIGHT拮抗型抗体。

本发明提供了下述一种或多种免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的VH结构域和/或VL结构域分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体VH结构域和/或VL结构域氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1、E13或E63抗体，或者(b)F19或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断；其前提是与hLIGHT表位的结合不同时被两种抗体(a)E1和F19抗体、(b)E1和F23抗体、(c)E13和F19抗体、(d)E13和F23抗体、(e)E63和F19抗体、或者(f)E63和F23抗体阻断。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的完全人源性抗体，所述抗体包含的VH结构域和/或VL结构域分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体VH结构域和/或VL结构域氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断。优选地，所述完全人源性抗体为完全人源性单克隆抗体和/或hLIGHT拮抗型抗体。

本发明提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的一个、两个或三个VH CDR(即，VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体一个、两个或三个VH CDR的氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1、E13或E63抗体，或者(b)F19或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断；其前提是与hLIGHT表位的结合不同时被两种抗体(a)E1和F19抗体、(b)E1和F23抗体、(c)E13和F19抗体、(d)E13和F23抗体、(e)E63和F19抗体或者(f)E63和F23抗体阻断。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的完全人源性抗体，所述抗体包含的一个、两个或三个VH CDR(即，VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体一个、两个或三个VH CDR的氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断。优选地，所述完全人源性抗体为完全人源性单克隆抗体和/或hLIGHT拮抗型抗体。

本发明提供了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的一个、两个或三个VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体一个、两个或三个VL CDR的氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1、E13或E63抗体，或者(b)F19或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断；其前提是与hLIGHT表位的结合不同时被两种抗体(a)E1和F19抗体、(b)E1和F23抗体、(c)E13和F19抗体、(d)E13和F23抗体、(e)E63和F19抗体、或者(f)E63和F23抗体阻断。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的完全人源性抗体，所述抗体包含的一个、两个或三个VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)分别具有免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体一个、两个或三个VL CDR的氨基酸序列，其中hLIGHT表位与该抗体的结合被(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者(b)F19抗体或F23抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断。优选地，所述完全人源性抗体为完全人源性单克隆抗体和/或hLIGHT拮抗型抗体。

本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含一个或多个VH CDR(即，VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)具有E1、E13、E63、F19或F23的任意一个VH CDR(即，VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的VHCDR(即，VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)的氨基酸序列(即，VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3)；或者具有所述多种VH CDR的任意组合。

在一个实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含的VH结构域具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域的氨基酸序列，和/或具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91或10任意一个所示的VL结构域的氨基酸序列。

在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(a)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的VH结构域，和SEQ ID NO：82、6或83任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；(b)具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的VH结构域，和SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的VL结构域；(c)具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的VH结构域，和SEQ ID NO：8所示氨基酸序列的VL结构域；(d)具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的VH结构域，和SEQ ID NO：90、9、91或92任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；或者(e)具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的VH结构域，和SEQ IDNO：10所示氨基酸序列的VL结构域。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在另一实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含的VH结构域具有ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的VH结构域的氨基酸序列，和/或所述抗体包含的VL结构域具有ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的VL结构域的氨基酸序列。

在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的氨基酸序列的VH结构域，以及具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的氨基酸序列的VL结构域；(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的氨基酸序列的VH结构域，以及具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的氨基酸序列的VL结构域；(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的氨基酸序列的VH结构域，以及具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的氨基酸序列的VL结构域；(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的氨基酸序列的VH结构域，以及具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的氨基酸序列的VL结构域；或者(e)具有ATCC录入号PTA-7828的抗体(F23)的氨基酸序列的VH结构域，以及具有ATCC录入号PTA-7828的抗体(F23)的氨基酸序列的VL结构域。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，本发明的抗体包含的VH CDR1具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明的抗体包含的VH CDR2具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR2的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明的抗体包含的VH CDR3具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR3的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明的抗体包含的VH CDR1和/或VH CDR2和/或VHCDR3独立地选自SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，所述抗体包含的一个或多个VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)具有E1、E13、E63、F19或F23的任意一个VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)的氨基酸序列(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)；或者上述所个VL CDR的任意组合。

在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(1)VH结构域具有(a)分别具有SEQ ID NO：11、12和/或13所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(b)分别具有SEQ ID NO：14、15和/或16所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(c)分别具有SEQ ID NO：17、18和/或19所示的氨基酸序列的VH CDR1、VHCDR2，和/或VH CDR3，(d)分别具有SEQ ID NO：20、21和/或22所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2，和/或VH CDR3，或(e)分别具有SEQID NO：23、24和/或24所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2，和/或VH CDR3，和/或(2)VL结构域具有(a)具有SEQ ID NO：84、26或85任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：86、27或87任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：88、28或89任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，(b)分别具有SEQ ID NO：29、30和/或31所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(c)分别具有SEQ ID NO：32、33和/或34所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(d)具有SEQ ID NO：93、35、94或95任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，或者(e)分别具有SEQ ID NO：38、39和/或40所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(1)VH结构域具有(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VH CDR1、VHCDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VHCDR3，(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，或者(e)具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和/或(2)VL结构域具有(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，或者(e)具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(1)(a)VH结构域，该VH结构域含有分别具有SEQ ID NO：11、12和/或13所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有SEQ ID NO：84、26或85任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：86、27或87任意一个所示氨基酸序列的VLCDR2；和/或具有SEQ ID NO：88、28或89任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，(2)(a)VH结构域，该VH结构域含有分别具有SEQ ID NO：14、15和/或16所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，该VL结构域分别具有SEQ ID NO：29、30和/或31所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(3)(a)VH结构域，该VH结构域含有分别具有SEQ ID NO：17、18和/或19所示氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，该VL结构域分别具有SEQ ID NO：32、33和/或34所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(4)(a)VH结构域，该VH结构域含有分别具有SEQ ID NO：20、21和/或22所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有SEQ ID NO：93、35、94，或95任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，或(5)(a)VH结构域，该VH结构域含有分别具有SEQ ID NO：23、24和/或25所示氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，该VL结构域含有分别具有SEQ ID NO：38、39和/或40所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含(1)(a)VH结构域，该VH结构域含有具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；(2)(a)VH结构域，该VH结构域含有具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VLCDR2和/或VL CDR3；(3)(a)VH结构域，该VH结构域含有具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VL CDR1、VLCDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3；(4)(a)VH结构域，该VH结构域含有具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；或(5)(a)VH结构域，该VH结构域含有具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，该VL结构域含有具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，本发明的抗体包含的VL CDR1具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR1的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR1的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗体包含的VL CDR2具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR2的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR2的氨基酸序列。在另一实施方案中，本发明的抗体包含的VL CDR3具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR3的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR3的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明的抗体包含的VL CDR1和/或VL CDR2和/或VL CDR3具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明的抗体包含(1)VH结构域或链，该VH结构域或链具有一种或多种(a)具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列的VH CDR1；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列的VH CDR1，(b)具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR2的氨基酸序列的VH CDR2；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH结构域的VH CDR2的氨基酸序列的VH CDR2，或(c)具有SEQID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR3；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH结构域的VH CDR3的氨基酸序列的VHCDR3，和/或(2)VL结构域或链，该VL结构域或链具有一种或多种(a)具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR1的氨基酸序列的VL CDR1；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR1的氨基酸序列的VL CDR1，(b)具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR2的氨基酸序列的VL CDR2；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR2的氨基酸序列的VL CDR2，或(c)具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR3；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR3的VL结构域或链。

本发明还提供了包含表1所列举的一种或多种VH CDR以及一种或多种VL CDR的抗体。特别地，本发明提供了包含表1所列举的VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14，17、20或23)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VHCDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ IDNO：13、16、19、22或25)和VL CDR3(SEQ IDNO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH1 CDR1、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15，18、21或24)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ IDNO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VH CDR2(SEQID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VLCDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQID NO：84，26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85，29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ IDNO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ IDNO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；或该VH CDR(SEQ ID NO：11-25)和VL CDR(SEQ ID NO：26-40)的任意组合的抗体。ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19，或F23)的相应VH CDR和VL CDR也可用于上述的任意组合。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，该抗体包含本发明所述的免疫特异性结合hLIGHT抗原的VH结构域、VH CDR、VL结构域和VL CDR的衍生物。本发明还提供了包含E1、E13、E63、F19和/或F23的衍生物的抗体，其中所述抗体免疫特异性结合hLIGHT表位。本领域技术人员已知的标准技术可用于在编码本发明分子的核苷酸序列中引入突变，包括，例如可导致氨基酸替换的定点突变和PCR介导的突变。优选地，该衍生物相对原始分子包含少于25个氨基酸替换、包含少于20个氨基酸替换、包含少于15个氨基酸替换、包含少于10个氨基酸替换、包含少于5个氨基酸替换、包含少于4个氨基酸替换、包含少于3个氨基酸替换、包含少于2个氨基酸替换。在优选的实施方案中，所述衍生物在一个或多个预测为非必需氨基酸残基处进行了保守氨基酸替换。“保守氨基酸替换”是以具有类似电荷侧链的氨基酸残基替换其中一个氨基酸残基。本领域内已经定义了有类似电荷侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)，未带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，无极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)，β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。或者，所述突变可沿全部或部分编码序列随机进行(例如通过饱和突变)，对所得的突变体进行生物活性筛选以鉴定保留活性的突变体。在突变后，可表达编码蛋白并测定该蛋白的活性。

在另一实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含了与E1、E13、E63、F19和/或F23或其抗原结合片段(例如，VH结构域、VL结构域、VH链或VL链)的氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％一致性的氨基酸序列。在一个实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含了与SEQ IDNO：1、2、3、4或5所示氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％一致性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含了与SEQID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％一致性的氨基酸序列。在另一实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体包含了与SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(VH CDR)所示的VH CDR氨基酸序列和/或SEQID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40所示的VL CDR氨基酸序列具有至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％一致性的VH CDR和/或VL CDR氨基酸序列。

在具体实施方案中，所述抗体为完全人源性抗人抗体，例如完全人源性抗人单克隆抗体。完全人源性抗体可通过本领域的任何已知方法制备。示范性的方法包括以hLIGHT抗原(任意能够诱发免疫应答的hLIGHT多肽，可选地与载体结合)免疫能够生成内源性免疫球蛋白外全部人抗体的转基因动物(例如，小鼠)；例如，参见Jakobovits等人，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci，90：2551；Jakobovits等人，(1993)Nature，362：255258(1993)；Bruggermann等人，(1993)Year in Immunol.，7：33。生产完全人源性抗hLIGHT抗体的其它方法可参见本发明提供的其它实施例。

可替代性地，可通过对噬菌体展示抗体库的体外筛选获得完全人源性抗体；例如，参见Hoogenboom等人，J.Mol.Biol.，227：381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.，222：581(1991)，在此引用作为参考。各种含抗体噬菌体展示库已得到描述，并可由本领域技术人员方便地制备。库中可包含多种可通过适当靶标进行筛选的人抗体序列，例如人Fab、Fv和scFv片段。

在优选的实施方案中，根据本发明方法使用的抗体对hLIGHT多肽或其多肽片段或表位具有较高的亲和性。在一个实施方案中，根据本发明方法使用的抗体对hLIGHT的亲和性高于已知抗体(例如，本文别处讨论的市售的单克隆抗体)。在具体的实施方案中，通过本发明所述的或是本领域技术人员已知的技术(例如，BIAcore测定)测定，根据本发明方法使用的抗体对hLIGHT的亲和性比已知抗hLIGHT抗体高2至10倍(或更多)。根据这些实施方案，所述抗体的亲和性在一个实施方案中通过BIAcore测定进行评估。

在具体的实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体包含由下述核苷酸序列编码的VH结构域的氨基酸序列和/或VL结构域的氨基酸序列，该核苷酸序列与(1)编码SEQ ID NO：41、42、43、44或45(VH)和/或SEQ ID NO：102、46、103、47、48、104、49、105、106或50(VL)所示的任意一个VH和/或VL结构域的核苷酸序列的互补序列或者(2)编码ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH或VL结构域的核苷酸序列的互补序列在严格条件(例如，在约45℃下于6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约50-65℃下用0.2×SSC/0.1％SDS洗涤一次或多次)、在高度严格条件(例如在约45℃下于6×SSC中与滤膜结合的核酸杂交，然后在约68℃下用0.1×SSC/0.2％SDS洗涤一次或多次)或在其它本领域技术人员已知的严格杂交条件(例如，参见Ausubel，F.M.等人，eds.，1989，Current Protocols in Molecular Biology.Vol.1，Green Publishing Associates，Inc.and John Wiley&Sons，Inc.，New York，第6.3.1-6.3.6和2.10.3页)下杂交。

在另一个实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体包含由下述核苷酸序列编码的VH CDR氨基酸序列或VL CDR氨基酸序列，该核苷酸序列与(a)编码SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(VH CDR)和/或SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40(VL CDR)所示的任意一个VH CDR和/或VL CDR的核苷酸序列的互补序列，或(b)编码ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH CDR和/或VL CDR的核苷酸序列的互补序列在严格条件(例如，在约45℃下于6×SSC中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约50-65℃下用0.2×SSC/0.1％SDS洗涤一次或多次)、在高度严格条件(例如在约45℃下于6×SSC中与滤膜结合的核酸杂交，然后在约68℃下用0.1×SSC/0.2％SDS洗涤一次或多次)或在其它本领域技术人员已知的严格杂交条件(例如，参见Ausubel，F.M.等人，eds.，1989，Current Protocols in Molecular Biology.Vol.1，Green Publishing Associates，Inc.and John Wiley&Sons，Inc.，New York，第6.3.1-6.3.6和2.10.3页)下杂交。

本发明的抗体包括经过化学修饰(即，向该抗体共价连接任意类型的分子)的抗体。例如，但非限制，所述抗体衍生物包括通过糖基化，乙酰化、聚乙二醇化、磷酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/阻断基团进行衍生化、蛋白水解裂解、与细胞配体或其它蛋白连接等方法化学修饰得到的抗体。各种化学修饰中的任意一种均可通过已知技术实现，包括，但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素代谢合成等。此外，该衍生物可能包含一个或多个非传统氨基酸。

本发明还提供了下述免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体，其包含本领域技术人员已知的框架区(例如，人或非人框架)。该框架区可以是，例如，天然存在的或共有的框架区。最优选地，本发明抗体的框架区为人框架区(人框架区的清单可例如，参见Chothia等人，1998，J.Mol.Biol.278：457-479，其全文在此引用作为参考)。还可参见Kabat等人，(1991)Sequences ofProteins of Immunological Interest(U.S.Department of Health and HumanServices，Washington，D.C.)第5版。

在具体实施方案中，本发明提供了下述免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体，所述抗体包含了一种或多种下述CDR的氨基酸序列，所述CDR是E1、E13、E63、F19和/或F23的CDR(即，SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(VH CDR)或SEQ IDNO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40(VLCDR))，或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的CDR，所述抗体还包含下述人框架区的氨基酸序列，所述人框架区在一个、两个、三个或多个如下残基具有一个或多个氨基酸替换：(a)在鼠抗体框架(即，供体抗体框架)和人抗体框架(即，受体抗体框架)之间不同的罕有框架残基，(b)在供体抗体框架和受体抗体框架间不同时的Venier框架残基，(c)在供体抗体框架和受体抗体框架间不同的VH/VL界面处的链间封装残基(interchain packing residues)，(d)在供体抗体框架和受体抗体框架间不同的规范残基(canonical residue)，特别是对于鼠源抗体CDR环的规范性分类的定义关键的框架区，(e)邻近CDR的残基，(g)能够与抗原相互作用的残基，(h)能够与CDR相互作用的残基，和(i)在VH结构域和VL结构域之间的接触残基。在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体为拮抗性hLIGHT抗体，其包含在一个、两个、三个或多个上述指定的残基处一个或多个氨基酸替换的人框架区。

本发明包括了下述免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体，所述抗体包含由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备的抗体的VH结构域和/或VL结构域或其抗原结合片段的氨基酸序列，或是E1、E13、E63、F19和/或F23抗体的VH结构域和/或VL结构域或其抗原结合片段的氨基酸序列，并在框架区具有突变(例如，一个或多个氨基酸替换)。在某些实施方案中，免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体包含了E1、E13、E63、F19和/或F23的VH结构域和/或VL结构域或其抗原结合片段的氨基酸序列，并在该VH和/或VL结构域的框架区具有一个或多个氨基酸替换。

本发明还包括了下述免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体，所述抗体包含由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的VH结构域和/或VL结构域的氨基酸序列，或是E1、E13、E63、F19和/或F23抗体的VH结构域和/或VL结构域的氨基酸序列，在超变区和框架区具有突变(例如，一个或多个氨基酸残基替换)。优选地，在该超变区和框架区的氨基酸替换促进了所述抗体与hLIGHT抗原的结合。

在一些实施方案中，本发明提供的抗体在个体(例如，人类个体)体内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3的结合，和/或减少或抑制hLIGHT的生物活性，例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌。在某些实施方案中，本发明提供的抗体(例如，人单克隆抗hLIGHT抗体)在个体体内与可溶性或细胞表面表达的hLIGHT接触后减少或抑制可溶性或细胞表面表达的hLIGHT与HVEM或LTβR的结合，和/或减少或抑制CCL20和/或RANTES的分泌。在一些实施方案中，所述hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。本发明提供的抗体对hLIGHT结合HVEM、LTβR和/或DCR3的阻断活性可通过实施例1-4任意一个所述的测定方法进行检测。本发明提供的hLIGHT抗体对细胞表达hLIGHT受体的生物活性的抑制可通过实施例1-4任意一个所述的测定方法进行检测。

在其它实施方案中，本发明提供的抗体减少或抑制了hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3的结合并且/或者减少或抑制了hLIGHT的生物活性，例如CCL20、IL8和/或RANTES在具有细胞表面表达的hLIGHT受体(例如，HVEM、LTβR和/或Dc3R)的细胞中的分泌。在某些实施方案中，本发明提供的抗体(例如，人单克隆抗hLIGHT抗体)在与可溶性或细胞表面表达的hLIGHT接触后，减少或抑制可溶性或细胞表面表达的hLIGHT与HVEM或LTβR的结合，和/或减少或抑制CCL20和/或RANTES在具有细胞表面表达hLIGHT受体的细胞中的分泌。在一些实施方案中，所述hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。本发明提供的抗体对hLIGHT结合HVEM、LTβR和/或DCR3的阻断活性可通过实施例1-4任意一个所述的测定方法进行检测。本发明提供的hLIGHT抗体对细胞表达的hLIGHT受体的生物活性的抑制可通过实施例1-4任意一个所述的测定方法进行检测。

本发明还提供了融合蛋白，该融合蛋白包含本发明提供的免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体以及异源多肽。在一些实施方案中，与该抗体融合的异源多肽可用于将该抗体靶向具有细胞表面表达的hLIGHT的细胞。

本发明还提供了免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体组。在具体的实施方案中，本发明提供了具有对hLIGHT抗原不同的结合速率常数、对hLIGHT抗原的不同亲和性和/或对hLIGHT抗原不同的特异性的抗体组。本发明提供了约10、优选约25、约50、约75、约100、约125、约150、约175、约200、约250、约300、约350、约400、约450、约500、约550、约600、约650、约700、约750、约800、约850、约900、约950或约1000个或更多个抗体的组。抗体组可在例如96孔或384孔板中用于ELISA等测定。

抗体偶联物和融合蛋白

在部分实施方案中，本发明的抗体偶联或重组融合至诊断性、可检测或是治疗性制剂或任何其它分子。该偶联的或是重组融合的抗体可用于，例如，监测或预测hLIGHT介导的疾病的发作、形成、进展和/或严重性，以作为临床测试过程(例如测定特定疗法的效力)的一部分。

该种诊断和检测可通过，例如，将所述抗体与可检测物质偶联得以实现，该可检测物质包括但不限于：各种酶，例如，但不限于，辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，例如但不限于，链霉亲和素/生物素和抗生物素蛋白/生物素；荧光物质，例如但不限于，伞形酮、荧光素、异硫氰荧光素、若丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质，例如但不限于，鲁米诺；生物发光物质，例如但不限于，萤光素酶、萤光素、以及水母素；放射活性物质，例如但不限于，碘(¹³¹I、¹²⁵I、¹²³I和¹²¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、铟(¹¹⁵In、¹¹³In、¹¹²In和¹¹¹In)、锝(⁹⁹Tc)、铊(²⁰¹Ti)、镓(⁶⁸Ga、⁶⁷Ga)、钯(¹⁰³Pd)、钼(⁹⁹Mo)、氙(¹³³Xe)、氟(¹⁸F)、¹⁵³Sm、¹⁷⁷Lu、¹⁵⁹Gd、¹⁴⁹Pm、¹⁴⁰La、¹⁷⁵Yb、¹⁶⁶Ho、⁹⁰Y、⁴⁷Sc、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁴²Pr、¹⁰⁵Rh、⁹⁷Ru、⁶⁸Ge、⁵⁷Co、⁶⁵Zn、⁸⁵Sr、³²P、¹⁵³Gd、¹⁶⁹Yb、⁵¹Cr、⁵⁴Mn、⁷⁵Se、¹¹³Sn和¹¹⁷Sn；使用各种正电子发射断层的正电子发射金属，以及非放射性顺磁性金属离子。

本发明进一步包括了偶联或重组融合至治疗性部分(或者一种或多种治疗性部分)的本发明抗体的应用。所述抗体可被结合偶联或重组融合至治疗性部分，例如细胞毒素，例如，细胞生长抑制剂或杀细胞剂，治疗性制剂或放射活性金属离子，例如，α辐射体。细胞毒素或细胞毒性制剂包括任何对细胞有害的制剂。治疗性部分包括，但不限于：抗代谢物(例如，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)；烷化剂(例如，氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、卡氮芥(BCNU)和环己亚硝脲(CCNU)、环磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、链脲菌素、丝裂霉素C以及顺氯氨铂(II)(DDP)、以及顺铂)；蒽环(例如，道诺红菌素(之前为道诺霉素)和阿霉素)；抗生素(例如，放线菌素d(之前为放线菌素)、博来霉素、光神霉素、和氨茴霉素(AMC))；Auristatin分子(例如，auristatin PHE，苔藓抑素1和solastatin 10；参见Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.46：3802-8(2002)，Woyke等人，Antimicrob.Agents Chemother.45：3580-4(2001)，Mohammad等人，Anticancer Drugs 12：735-40(2001)，Wall等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.266：76-80(1999)，Mohammad等人，Int.J.Oncol.15：367-72(1999)，均在此引用作为参考)；激素(例如，糖皮质激素、妊娠素、雄激素和雌激素)，DNA修复酶抑制剂(例如，依托泊甙或托泊替康)，激酶抑制剂(例如，化合物STl 571、甲磺酸伊马替尼(Kantarjian等人，Clin Cancer Res.8(7)：2167-76(2002))；细胞毒素制剂(例如，紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啡啶、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔，和嘌呤霉素及其类似物或同族物，以及如下美国专利所披露的化合物：美国专利6,245,759、6,399,633、6,383,790、6,335,156、6,271,242、6,242,196、6,218,410、6,218,372、6,057,300、6,034,053、5,985,877、5,958,769、5,925,376、5,922,844、5,911,995、5,872,223、5,863,904、5,840,745、5,728,868、5,648,239、5,587,459；法呢基转移酶抑制剂(例如，R115777，BMS-214662以及披露于，例如，美国专利6,458,935、6,451,812、6,440,974、6,436,960、6,432,959、6,420,387、6,414,145、6,410,541、6,410,539、6,403,581、6,399,615、6,387,905、6,372,747、6,369,034、6,362,188、6,342,765、6,342,487、6,300,501、6,268,363、6,265,422、6,248,756、6,239,140、6,232,338、6,228,865、6,228,856、6,225,322、6,218,406、6,211,193、6,187,786、6,169,096、6,159,984、6,143,766、6,133,303、6,127,366、6,124,465、6,124,295、6,103,723、6,093,737、6,090,948、6,080,870、6,077,853、6,071,935、6,066,738、6,063,930、6,054,466、6,051,582、6,051,574和6,040,305的法呢基转移酶抑制剂)；拓扑异构酶抑制剂(例如，喜树碱；伊立替康；SN-38；托泊替康；9-氨基喜树碱；GG-211(GI 147211)；DX-8951f；IST-622；卢比替康；吡唑啉吖啶；XR-5000；saintopin；UCE6；UCEl 022；TAN-1518A；TAN 1518B；KT6006；KT6528；ED-110；NB-506；ED-110；NB-506；以及蝴蝶霉素)；bulgarein；DNA小沟区结合剂，例如Hoescht染料33342和Hoechst染料33258；两面针碱；花椒宁碱；表小檗碱；甲氧檗因；β拉帕醌；BC-4-1；二膦酸盐(例如，阿伦膦酸盐、英卡磷酸盐、氯膦酸盐、替鲁膦酸盐、羟乙膦酸盐、伊班膦酸盐、奈立膦酸盐、阿仑磷酸盐、利塞膦酸盐、吡膦酸盐、帕米膦酸盐、唑来膦酸盐)；HMG-CoA还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、抑制素、西立伐他汀、来适可、lupitor、瑞舒伐他汀和阿托伐他汀)；反义寡聚核苷酸(例如，在美国专利6,277,832、5,998,596、5,885,834、5,734,033和5,618,709中披露的反义寡聚核苷酸)；腺苷酸脱氨酶抑制剂(例如，氟达拉滨磷酸盐和2-氯脱氧腺苷)；伊莫单抗托西莫单抗

及其药学可接受的盐、溶剂化物、笼形化物和前药。

此外，本发明的抗体可偶联或重组融合至改变指定生物应答的治疗性部分或药物部分。治疗性部分或药物部分不应理解为限制于经典的化学治疗性制剂。例如，该药物部分可以是具有目标生物活性的蛋白、肽或多肽。该种蛋白可包括，例如，毒素、相思子毒素、蓖麻毒素A、绿脓杆菌外毒素、霍乱毒素、或白喉毒素；蛋白，例如肿瘤坏死因子、γ-干扰素、α-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织型纤溶酶原激活剂、凋亡剂、例如、TNF-γ、TNF-γ、AIM I(参见国际专利公布WO 97/34911)、Fas配体(Takahashi等人，1994，J.Immunol.，6：1567-1574)和VEGF(参见国际专利公布WO 99/23105)、抗血管生成剂、例如血管他丁、内皮他丁或凝结途径的成分(例如，组织因子)；或者，生物应答调节剂，例如，淋巴因子(例如，干扰素gamma、白介素-1、(″IL-1″)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-5(“IL-5”)、白介素-6(“IL-6”)、白介素-7(“IL-7”)、白介素9(“IL-9”)、白介素-10(“IL-10”)、白介素-12(“IL-12”)、白介素-15(“IL-15”)、白介素-23(“IL-23”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)以及粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”))，或者生长因子(例如，生长激素(“GH”))，或者凝结剂(例如，钙，维生素K，组织因子，例如但不限于Hageman因子(因子XII)、高分子量激肽原(HMWK)、前激肽释放酶(PK)、凝结蛋白因子II(凝血素)、因子V、XIIa、VIII、XIIIa、XI、XIa、IX、IXa、X、磷脂以及纤维蛋白单体)。

本发明包括了重组融合或化学偶联(共价或非共价偶联)至异源蛋白或多肽(或其片段，优选约10、约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90或约100个氨基酸的多肽)以生成融合蛋白的本发明的抗体。特别地，本发明提供了包含本发明抗体的抗原结合片段(例如，Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)₂片段、VH结构域、VH CDR、VL结构域或VL CDR)以及异源蛋白、多肽或肽的融合蛋白。在一个实施方案中，与抗体融合的该异源蛋白、多肽或肽可用于将该抗体靶向特定的细胞类型，例如表达hLIGHT或hLIGHT受体的细胞。例如，由特定细胞类型(例如，免疫细胞)表达的免疫特异性结合细胞表面受体的抗体可融合或偶联至修饰后的本发明的抗体。

本发明的偶联或融合蛋白包括了本发明所述的任意抗体和异源多肽。在一个实施方案中，本发明的偶联或融合蛋白包含了E1、E13、E63、F19或F23抗体，或者由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)，以及异源多肽。在另一个实施方案中，本发明的偶联或融合蛋白包含了E1、E13、E63、F19或F23的抗原结合片段，或者由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的抗原结合片段，以及异源多肽。在另一实施方案中，本发明的偶联或融合蛋白包含的VH结构域具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH结构域的氨基酸序列，和/或包含VL结构域具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL结构域的氨基酸序列，以及异源多肽。在另一实施方案中，本发明的偶联或是融合蛋白包含的一个或多个VH CDR具有SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25所示的任意一种VH CDR的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR的氨基酸序列，以及异源多肽。在另一实施方案中，本发明的偶联或是融合蛋白包含的一个或多个VL CDR具有SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40所示的任意一种VL CDR的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR的氨基酸序列，以及异源多肽。在另一实施方案中，本发明的偶联或是融合蛋白包含至少一种VH结构域和至少一种VL结构域，分别如SEQ ID NO：1、2、3、4或5和SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的至少一种VH结构域和至少一种VL结构域，以及异源多肽。在另一实施方案中，本发明的偶联或是融合蛋白包含至少一个VH CDR和至少一个VL CDR，分别如SEQ ID NO：11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25和SEQ ID NO：84、26、85、86、27、87、88、28、89、2、30、31、32、33、34、93、35、94、95、96、36、97、98、99、37、100、101、38、39或40所示或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的至少一种VH CDR和至少一种VL CDR，以及异源多肽。

此外，本发明的抗体可被偶联至治疗性部分，例如放射活性金属离子，如α辐射体(如²¹³Bi)或是可用于结合放射性金属离子的大环螯合剂，包括但不限于，¹³¹In、¹³¹LU、¹³¹Y、¹³¹Ho、¹³¹Sm，以及多肽。在某些实施方案中，所述大环螯合剂为1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N′″-四乙酸(DOTA)，其可通过接头分子连接至抗体。该种接头分子已为本领域所知，其描述可参见Denardo等人，1998，Clin Cancer Res.4(10)：2483-90；Peterson等人，1999，Bioconjug.Chem.10(4)：553-7；and Zimmerman等人，1999，Nucl.Med.Biol.26(8)：943-50，其全文分别在此引用作为参考。

此外，本发明的抗体可被融合至标记序列，例如可连接至肽以促进纯化。在优选实施方案中，该标记氨基酸序列为一种六组氨酸肽，例如pQE载体(QIAGEN，Inc.)中所提供的标记，其中多数已上市销售。如Gentz等人，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：821-824所述，例如，六组氨酸实现了融合蛋白的快速纯化。其它可用于纯化的肽标记包括，但不限于，对应一种来自流行性感冒血红球凝集素蛋白的表位的红血球凝集素(“HA”)标记(Wilson等人，1984，Cell 37：767)以及“FLAG”标记。

用于将治疗性部分(包括多肽)融合或偶联至抗体的方法已被熟知，例如，参见Arnon等人，“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of DrugsIn Cancer Therapy”，in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy，Reisfeld等人(eds.)，第243-56页(Alan R.Liss，Inc.1985)；Hellstrom等人，“Antibodies For Drug Delivery”，in Controlled Drug Delivery(2nd Ed.)，Robinson等人(eds.)，第623-53页(Marcel Dekker，Inc.1987)；Thorpe，“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review”，inMonoclonal Antibodies 84：Biological And Clinical Applications，Pinchera等人，(eds.)，第475-506页(1985)；“Analysis，Results，And Future ProspectiveOf The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”，inMonoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy，Baldwin等人，(eds.)，第303-16页(Academic Press 1985)，Thorpe等人，1982，Immunol.Rev.62：119-58；美国专利5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、5,723,125、5,783,181、5,908,626、5,844,095和5,112,946；EP 307,434；EP367,166；EP 394,827；PCT公布WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631以及WO 99/04813；Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：10535-10539，1991；Traunecker等人，Nature，331：84-86，1988；Zheng等人，J.Immunol.，154：5590-5600，1995；Vil等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：1 1337-11341，1992，在此全文引用作为参考。

融合蛋白可通过，例如，基因改组(gene shuffling)、基序改组(motifshuffling)、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”(DNA shuffling))等技术生成。DNA改组可用于改变本发明的抗体的活性(例如，具有更高亲和性和更低解离速率的抗体)。一般可参见美国专利5,605,793、5,811,238、5,830,721、5,834,252和5,837,458；Patten等人，1997，Curr.OpinionBiotechnol.8：724-33；Harayama，1998，Trends Biotechnol.16(2)：76-82；Hansson等人，1999，J.Mol.Biol.287：265-76；以及Lorenzo和Blasco，1998，Biotechniques 24(2)：308-313(这些专利和出版物的每一个在此全文引用作为参考)。抗体，或编码的抗体可通过易错PCR、随机核苷酸插入或其它重组前的方法进行随机突变以得到改造。编码本发明抗体的多聚核苷酸可与一种或多种异源分子的一种或多种元件、基序、部分(section)、部件(part)、结构域、片段等进行重组。

本发明的抗体还可偶联至第二抗体以形成如美国专利4,676,980(其全文在此引用作为参考)所述的异源偶联物(heteroconjugate)。

应选择偶联或重组融合至本发明的免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的治疗性部分或药物，以实现预期的预防性或治疗性作用。在某些实施方案中，该抗体为修饰的抗体。临床医生或其它医疗人员在决定将何种治疗性部分或药物偶联或重组融合至本发明的抗体时应考虑如下问题：该疾病的性质、该疾病的严重性、以及该个体的状况。

本发明的抗体还可连接至固体支持物，这对于免疫测定或目标抗原的纯化特别有用。该种固体支持物包括，但不限于，玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚丙烯。

药物组合物

包含本发明提供的本发明的一种或多种抗体的治疗性制剂可通过将具有预期纯度的所述抗体与任选的生理可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA)以冻干制剂或水溶液的形式混合以供贮藏。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接收者无毒，并包含缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐以及其它有机酸的缓冲液；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚，丁醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白，例如血清白蛋白、明胶、或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖、以及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖；成盐平衡离子，例如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白络合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如TWEEN^TM，PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

本发明提供的本发明的抗体还可以，例如，配制成脂质体。包含目标分子的脂质体可通过本领域已知的方法进行制备，例如该方法的描述可参见Epstein等人(1985)Proc.Natl.Acad，ScL USA 82：3688；Hwang等人，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4030；以及美国专利4,485,045和4,544,545。美国专利5,013,556中披露了具有更长循环时间的脂质体。

特别有用的免疫脂质体可通过反相蒸发法(reverse phase evaporationmethod)，采用含有磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物制成。可通过从具有限定孔径的过滤器挤出脂质体，从而得到具有预期直径的脂质体。本发明提供的抗体的Fab′片段可参照Martin等人，(1982)J.Biol.Chem.257：286-288的描述通过二硫键互换反应结合至脂质体。化疗制剂(例如阿霉素)可以任选地包含在脂质体中；参见Gabizon等人，(1989)J.National Cancer Inst.81(19)：1484。

如本发明所述的制剂根据待治疗的特定适应症的需要，还可包含一种以上的活性化合物。在某些实施方案中，制剂包含本发明的抗体，以及一种或多种彼此间没有不良作用的具有互补活性的活性化合物。这些分子可适当地以对预期目标有效的量联合存在。例如，本发明的抗体可联合一种或多种其它治疗性制剂。该种联合疗法可连续地或同时地或依次向患者施用。

本发明的抗体还可通过，例如，堆聚技术或界面聚合包埋在微胶囊中，例如，羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，用于胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒以及纳米胶囊)或巨乳液。该类技术披露于Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA.。

进行体内施用的制剂可以是无菌的。这可通过以例如无菌过滤膜进行过滤得以实现。

还可制备缓释制剂。缓释制剂的适当的范例包括，含有该拮抗剂的固体疏水聚合物的半透基质，其中该基质呈现为固定形状的物品，例如，膜或微胶囊。缓释基质的范例包括水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸甲酯)，或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美国专利3,773,919)、L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、非降解乙烯-醋酸乙烯酯、可降解乳酸-羟基乙酸共聚物、如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)和多聚-D-(-)-3-羟丁酸。乙烯-醋酸乙烯酯和乳酸-羟基乙酸等聚合物能够在100天以上释放分子，某些水凝胶可在更短的时间内释放蛋白。当包于胶囊内的抗体在身体内存留较长时间时，它们可能由于暴露在37℃的潮湿环境下而变性或聚集，从而导致生物活性的丧失以及免疫原性的可能改变。可根据所涉及的机制设计合理的稳定化策略。例如，如果发现该聚集机制是通过硫-二硫化物交换形成分子间S-S键，则可通过修饰硫氢基残基、从酸性溶液冻干、控制含水量、使用适当的添加剂、和形成特定的聚合物基质组合物实现稳定化。

本发明提供的药物组合物包含治疗有效量的一种或多种本发明提供的本发明的抗体，以及可选的一种或多种额外的预防性或治疗性制剂，并含于药学可接受的载体中。这种药物组合物可用于预防、治疗、控制或减缓hLIGHT介导的疾病，例如炎症性肠病，或其一种或多种症状。

适用于施用本发明提供的化合物的药物载体包括本领域技术人员已知的适于特定施用模式的任意载体。

此外，本发明的抗体可配制为组合物中的单一药物活性成分，或者可联合其它活性成分(例如一种或多种其它预防性或治疗性制剂)。

所述组合物可包含本发明的一种或多种抗体。在一个实施方案中，所述抗体被配制成为用于口服施用，或者在无菌溶液或悬浮液中进行肠胃外施用的适当的药物制剂，例如，溶液、悬浮液、片剂、分散片剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释制剂或酏剂，以及配制为透皮贴剂制剂和干粉吸入器。在一个实施方案中，上文所述的抗体通过本领域公知的技术和程序(例如，参见Ansel(1985)Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms，第4版，第126页)被配制成为药物组合物。

在所述组合物中，有效量的一种或多种抗体或其衍生物与适当的药物载体混合。化合物在组合物中的浓度能够在施用时有效传递能够治疗、预防或减缓hLIGHT介导的疾病或其症状的量。

在一个实施方案中，所述组合物被配制为可进行单剂量施用。为了配制组合物，可将一定重量比例的化合物以有效浓度溶解、悬浮、分散或以其它方式混合在选定的载体中，从而使所治疗的疾病被减轻、预防，或者一种或多种症状被减缓。

本发明的抗体以足以实现治疗有用效果、且不对所治疗患者产生不想要的副作用的有效量包含在药学可接受的载体中。治疗有效量浓度的确定可采用常规方法在体外和体内系统中测试化合物，然后外推为人用剂量进行经验性确定。

抗体在药物组合物中的浓度将取决于，例如，抗体的物理化学特征、服药日程和施用量，以及其它本领域技术人员已知的因素。

在一个实施方案中，治疗有效剂量可生成从约0.1ng/ml至约50-100μg/ml的血清抗体浓度。在另一实施方案中，所述药物组合物提供了约0.001mg至约2000mg抗体/公斤体重/天的剂量。可制备药物剂量单元形式以提供每个剂量单位形式约0.01mg、0.1mg或1mg至约500mg、1000mg或2000mg(在一个实施方案中，从约10mg至约500mg)的抗体和/或抗体与其它任选的必要成分的组合。

该抗体可立即施用，或者可被分为一定数量的更小剂量，从而以一定的时间间隔施用。应理解：确切的剂量和治疗时间与待治疗疾病相关，并可通过已知的测试方案经验测定或可根据体内或体外测试数据推断得到。应注意浓度和剂量值也可随着待缓解的疾病的严重性而有所变化。应当进一步理解：对于任何具体个体，可根据被施用所述组合物的患者的个体需求或者施用或指导的人员的专业判断随时间调整具体的剂量方案，且本发明提供的浓度范围仅作为范例，无意对所主张的组合物的范围或实施构成限制。

在混合或添加抗体时，所得的混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等。所得混合物的形式取决于多种因素，包括想施用的模式以及抗体在所选载体或溶媒中的可溶性。有效浓度足以改善待治疗的疾病、紊乱或病症的症状，并可通过经验确定。

所述药物组合物可作为包含适当量的所述抗体或其药学可接受的衍生物的单位剂型(例如，片剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒、无菌肠胃外溶液或悬浮液、和口服溶液或悬浮液、以及油水乳液)施用至人和动物。在一个实施方案中，所述抗体被配制为单位剂型或多重剂型进行施用。本发明所用的单位剂型指本领域已知的适用于人和动物个体并单独包装的物理分散的单元。每个单位剂型包含了足以产生所需治疗效果的预定量的抗体，以及所需的药物载体、溶媒或稀释剂。单位剂型的范例包括安瓿和注射器以及单独包装的片剂和胶囊。单位剂型可分成多个部分施用或者多次施用。多重剂型是包装在单独容器中的多个相同的单位剂型，并以分离的单位剂型施用。示范性的多重剂型包括小瓶、片剂或胶囊的瓶子或品脱或加仑瓶。因此，多重剂型是不被分离包装的多个单位剂型。

在优选的实施方案中，本发明的一种或多种抗hLIGHT抗体含于液体药物制剂中。液体状药学可施用组合物可通过如下示范性方法制备：将上述定义的抗体和任选的药物佐剂溶解、分散或以其它方式混合在载体中(例如，水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙二醇、乙醇等)，从而形成溶液或悬浮液。如果需要，待施用的药物组合还可包含微量的无毒性辅助物质，例如润湿剂、乳化剂、助溶剂、pH缓冲剂等，例如，醋酸盐、柠檬酸钠、环状糊精衍生物、山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺醋酸钠、油酸三乙醇胺，以及其它该类制剂。

制备这种剂型的实际方法已为本领域技术人员所知或显而易见；例如，参见Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA。

可制备包含0.005％至100％范围的抗体，其余为无毒性载体的剂型或组合物。制备这些组合物的方法已为本领域技术人员所知。

口服药物剂型可以是固体、凝胶或液体。固体剂型为片剂、胶囊、颗粒和整装粉剂。口服片剂的类型包括压缩的、可咀嚼的片剂以及可包有肠溶衣、糖衣或膜的片剂。胶囊可以是硬胶囊或软凝胶胶囊，而颗粒和粉末可提供为非泡腾或泡腾形式，并混合了其它本领域技术人员已知的成分。

在某些实施方案中，所述制剂为固体剂型。在某些实施方案中，所述制剂为胶囊或片剂。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可包含一种或多种如下成分或性质类似的化合物：粘合剂；润滑剂；稀释剂；助流剂；崩解剂；着色剂；甜味剂；调味剂；润湿剂；催吐剂包衣；以及膜覆层。粘合剂的范例包括微晶纤维素、黄芪树胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、糖蜜、聚乙烯吡咯烷、聚烯吡酮、交聚维酮、蔗糖和淀粉糊。润滑剂包括滑石、淀粉、硬脂酸镁或钙、石松子和硬脂酸。稀释剂包括，例如，乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘露醇和磷酸二钙。助流剂包括，但不限于，胶体二氧化硅。崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钠、褐藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、膨润土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。着色剂包括，例如，任意批准的水溶性FD和C染料，其混合物；以及悬浮在水合氧化铝中的水不溶的FD和C染料。甜味剂包括蔗糖、乳糖、甘露醇和人工甜味剂，如糖精，和任何数量的喷雾干燥调味料。调味剂包括从水果等植物中提取的天然调味料，以及能产生快感的合成化合物的混合物，例如，但不仅限于，薄荷和水杨酸甲酯。润湿剂包括丙二醇单硬脂酸酯、山梨糖醇酐单油酸酯、二甘醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂酸醚。肠溶衣包括脂肪酸、脂肪、蜡、虫胶、氨化虫胶和醋酸纤维素邻苯二甲酸酯。膜覆层包括羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和醋酸纤维素邻苯二甲酸。

本发明的抗体可以以组合物提供，从而在胃的酸性环境中得到保护。例如，该组合物可配制在能在胃中保持完整性、并在肠中释放该活性化合物的肠溶衣中。该组合物联合解酸剂或其它该类成分进行配制。

当剂量单位形式为胶囊时，除了上述类型的物质之外，它还包含液体载体(例如脂肪油)。此外，剂量单位形式可包含各种可改变该剂量单位的物理形式的其它物质，例如，糖衣和其它肠溶剂。所述抗体还可作为酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂、sprinkle、口香糖等的成分施用。糖浆中除了所述抗体外可包含作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料以及着色剂和调味剂。

所述抗体还可与其它不影响目标作用的活性物质混合，或者与补充该目标作用的物质(例如解酸剂、H2阻断剂和利尿剂)相混合。所述活性成分为本发明所述的抗体或其药学可接受的衍生物。可包含更高浓度，最高为重量比约98％的所述活性成分。

在所有的实施方案中，片剂和胶囊制剂可参照本领域技术人员的已知技术进行包被，从而改变或维持所述活性成分的解离。因此，例如，它们可以常规的可肠内消化的包衣(例如水杨酸苯酯、蜡和醋酸纤维素邻苯二甲酸)进行包被。

在优选的实施方案中，所述制剂为液体剂型。液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、溶液和/或从非泡腾颗粒复原的悬浮液以及从泡腾颗粒复原的泡腾制剂。水溶液包括，例如，酏剂和糖浆。乳液或者为水包油型，或者为油包水型。

酏剂为透明、甜味的水醇制剂。用于酏剂的药学可接受的载体包括溶剂。糖浆为糖(例如，蔗糖)的浓缩水溶液，并可能包含防腐剂。乳液是一种两相体系，其中一种液体以细小颗粒形式完全分散在另一种液体中。用于乳液的药学可接受的载体为非水溶液、乳化剂和防腐剂。悬浮液使用药学可接受的悬浮剂和防腐剂。将被复原为液体口服剂型的非-泡腾颗粒中的药学可接受的物质包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。将复原为液体口服剂型的泡腾颗粒中的药学可接受的物质包括有机酸和二氧化碳源。着色剂和调味剂可用于上述所有剂型。

溶剂包括甘油、山梨醇、乙醇和糖浆。防腐剂的范例包括甘油、尼泊金甲酯和丙酯、苯甲酸、苯甲酸钠和乙醇。用于乳液的非水性液体的范例包括矿物油和棉花籽油。乳化剂的范例包括明胶、阿拉伯树胶、斑脱土、以及表面活性剂，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、胶质、黄芪胶、硅酸镁铝以及阿拉伯树胶。甜味剂包括蔗糖、糖浆、甘油和人工甜味剂如糖精。润湿剂包括丙二醇单硬脂酸酯、山梨糖醇酐单油酸酯、二甘醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂酸醚。有机酸包括柠檬酸和酒石酸。二氧化碳源包括重碳酸钠和碳酸钠。着色剂包括任意批准的水溶性FD和C染料，及其混合物。调味剂包括从水果等植物中提取的天然调味料，以及能产生愉快味觉的合成的化合物的混合物。

对于固体剂型，在一个实施方案中，含于例如碳酸丙烯、植物油或甘油三酸酯中的溶液或悬浮液可装填在凝胶胶囊中。这种溶液及其制剂和胶囊化披露于美国专利4,328,245、4,409,239和4,410,545。对于液体剂型，溶液(例如，含于聚乙二醇)可被足量的药学可接受的液体载体(例如，水)所稀释，从而易于定量施用。

可替代性地，液体或半固体口服剂型可通过将所述抗体溶解或分散在植物油、甘油、甘油三酸酯、丙二醇酯(例如碳酸丙二酯)和其它这类载体中，并将这些溶液或悬浮液包封于硬或软凝胶胶囊壳中来制备。其它有用的剂型包括美国专利RE28,819和4,358,603中所列举的剂型。简单而言，这种剂型包括但不限于，包含本发明提供的抗体、二烷基化单或聚亚烷基二醇(包括但不限于，1，2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚、其中350、550和750指该聚乙二醇的大约平均分子量)，以及一种或多种抗氧化剂(例如二丁基羟基甲苯(BHT)、二丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯、维生素E、对苯二酚、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨糖醇、磷酸、硫二丙酸及其酯类、和二硫代氨基甲酸盐)的剂型。

其它的剂型包括但不限于，包含药学可接受的缩醛的水醇溶液。在这类剂型中所用的醇为具有一个或多个羟基基团的任意药学可接受的、水混溶的溶剂，包括但不限于丙二醇和乙醇。缩醛包括但不限于，低级烷基醛(例如乙醛二乙缩醛)的二(低级烷基)缩醛。

在一个实施方案中，肠胃外施用的特征为通过皮下、肌肉或静脉注射。可注射物可制备为常规的形式，可以是液体溶液或悬浮液、适于在注射前配制为溶液或悬浮液的固体形式、或者作为乳液。该可注射物、溶液和乳液同样包含一种或多种赋形剂。适用的赋形剂为，例如，水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。此外，根据需要，待施用的该药物组合物还可包含微量的无毒性辅助物质，例如润湿或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、助溶剂、以及其它该类制剂，例如，醋酸钠、山梨醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺以及环式糊精。

本发明还预期通过缓慢释放或持续释放系统的注入，维持恒定的剂量水平(例如，参见美国专利3,710,795)。简单而言，本发明提供的抗体被分散在不溶于体液中的固相内部基质(solid inner matrix)中，例如，聚甲基丙烯酸甲酯、聚丁基丙烯酸甲酯、塑化或未塑化聚氯乙烯、塑化尼龙、塑化聚乙醇对苯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、碳酸盐岩有机硅共聚物、亲水聚合物，例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、胶原蛋白、交联聚乙烯醇和部分交联水解聚醋酸乙烯酯，其被外部聚合物膜(如聚乙烯、聚丙烯、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯与醋酸乙烯酯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、离子聚对苯二甲酸乙二醇酯、丁基橡胶、环氧氯丙烷橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/醋酸乙烯/乙烯醇三聚物、以及乙烯/乙烯氧基醇共聚物)所包围。所述抗体在释放速率控制步骤中扩散通过该外部聚合物膜。在这类肠胃外组合物中包含的抗体量高度依赖于它的特性性质，以及抗体的活性和该个体的需求。

肠胃外施用的制剂包括马上可以注射的无菌溶液、无菌干燥的可溶性产品(例如冻干粉)、易于在使用前与溶剂混合的制剂(例如可皮下注射片剂)、易于注射的无菌悬浮液、易于在使用前与溶媒混合的无菌干燥可溶性产品以及无菌乳液。该溶液可以是水溶液或非水溶液。

如果静脉施用，适用的载体包括生理盐水或磷酸缓冲盐(PBS)，以及包含增稠剂和助溶剂(例如，葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物)的溶液。

用于肠胃外制剂的药学可接受的载体包括水性溶媒、非水性溶媒、抗菌剂、等张剂、缓冲液、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、掩蔽剂或螯合剂、以及其它药学可接受的物质。

水性溶媒的范例包括氯化钠注射液、Ringers注射液、等渗右旋糖注射液、无菌注射用水、右旋糖和乳酸盐Ringers注射液。非水性肠胃外溶媒包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。可向包含苯酚或甲酚、汞制剂、苯甲醇、氯丁醇、甲基和丙基对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵的包装于多剂量容器的肠胃外制剂添加抑菌或抑真菌浓度的抗菌剂。等张剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲液包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯酮。乳化剂包括聚山梨醇酯80(

80)。金属离子的掩蔽和螯合剂包括EDTA。药学可接受的载体还包括用于水混容性溶媒的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；以及用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。

可调节该药学活性化合物的浓度，使得注射提供可生成所需药理作用的有效量。如本领域所知，确切剂量取决于该患者或动物年龄、体重和状况。

单位剂量的肠胃外制剂可包装于安瓿、小瓶或带有针头的注射器中。如本领域已知和实践，所有的肠胃外施用的制剂均可被灭菌。

举例而言，静脉或动脉输注包含所述抗体的无菌水溶液是有效的施用模式。另一实施方案是包含所述抗体的无菌水性或油性溶液或悬浮液，根据需要注射以生成所需的药理活性。

可注射物被设计用于局部或全身施用。在一个实施方案中，配制治疗有效剂量，包含针对待治疗组织的至少约0.1％w/w至约90％w/w或更高浓度(在某些实施方案中超过1％w/w)的本发明抗体。

所述抗体可以微粒化或其它适当的形式被悬浮。所得混合物的形式取决于多种因素，包括希望的施用模式以及所述抗体在所选载体或溶媒中的可溶性。有效浓度足以改善疾病的症状，并可通过经验确定。

在其它实施方案中，所述药物剂型为冻干粉，其可复原为溶液、乳液和其它混合物进行施用。它们还可被复原并配制为固体或凝胶。

该冻干粉可通过将本发明提供的抗体或其药学可接受的衍生物溶解于适当的溶剂后制备。在一些实施方案中，该冻干粉是无菌的。溶剂可包含增强稳定性的赋形剂，或该粉末或由该粉末制备的复原溶液的其他药理成分。可使用的赋形剂包括但不限于，右旋糖、山梨醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它适当的制剂。溶剂还可包含缓冲剂，例如柠檬酸盐、磷酸钠或钾或者本领域技术人员已知的其它该类缓冲剂，在一个实施方案中，缓冲剂约为中性pH。对该溶液进行无菌过滤后，在本领域技术人员已知的标准条件下进行冻干，以提供所需的剂型。在一个实施方案中，该所得的溶液将被分装到小瓶中进行冻干。每个小瓶将含有单个剂量或多重剂量的所述抗体。冻干粉将被贮存在适当的条件下，例如约4℃下或室温下。

以注射用水复原冻干粉，提供用于肠胃外施用的剂型。在复原时，将冻干粉添加至无菌水或其它适当的载体中。确切的量取决于所选的化合物。这样的数量可通过经验确定。

可按照描述制备局部混合物，以进行局部和全身施用。所得的混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等，并可被配制成乳膏、凝胶、软膏、乳剂、溶液、酏剂、涂剂、悬浮液、酊剂、膏剂、泡沫剂、气雾剂、灌洗剂、喷雾剂、栓剂、绷带，皮肤贴剂或任意其它适于局部施用的剂型。

本发明的抗体可被配制成气雾剂以进行局部应用，例如吸入(例如，参见美国专利4,044,126、4,414,209和4,364,923，其描述了递送可用于治疗炎性疾病(特别是哮喘)的类固醇的气雾剂)。用于向呼吸道施用的该类剂型可作为用于喷雾器的气雾剂或溶液，或者作为用于吸入的微细粉末，可单独使用或与乳糖等惰性载体混合。在这种情况下，该剂型的颗粒在一个实施方案中将具有小于50微米的直径，在一个实施方案中具有小于10微米的直径。

所述抗体可配制进行局部应用，例如以凝胶、乳膏和涂剂的形式局部应用于(例如眼中的)皮肤和粘膜，并应用于眼部或脑池内或椎管内。在透皮传递和向眼部或粘膜施用，或者吸入疗法中可考虑局部施用。也可施用只包含所述活性物质的鼻部溶液，或是联合其它药学可接受的赋形剂的鼻部溶液。

这些溶液，特别是针对眼部施用的溶液，可配制为pH约5-7，具有适当的盐的0.01％-10％等张溶液。

本发明还预期了其它施用途径，例如包含离子电渗和电泳装置的透皮贴剂，以及直肠施用。

包含离子电渗和电泳装置的透皮贴剂已为本领域技术人员公知。例如，该种贴剂披露于美国专利6,267,983、6,261,595、6,256,533、6,167,301、6,024,975、6,010715、5,985,317、5,983,134、5,948,433和5,860,957。

举例来说，用于直肠施用的药物剂型为具有全身效果的直肠栓剂、胶囊和片剂。本发明所用的直肠栓剂指用于插入直肠的固体，其在体温下溶化或软化，从而释放一种或多种药理或治疗活性成分。用于直肠栓剂的药学可接受的物质为碱或溶媒以及提高熔点的制剂。碱的范例包括可可脂(可可油)，甘油-明胶，carbowax(聚乙二醇)和脂肪酸的甘油单酸脂、甘油二酸脂和甘油三酸脂的适当混合物。可使用各种碱的组合。用于提高栓剂熔点的制剂包括鲸蜡和蜡。直肠栓剂可通过压缩法或通过制模进行制备。在一个实施方案中，直肠栓剂的重量为2至3mg。

用于直肠施用的片剂和胶囊可采用相同的药学可接受的物质，通过口服施用制剂相同的方法进行制备。

本发明提供的抗体和其它组合物还可配制为靶向待治疗个体体内的特定组织、受体或其它区域。许多这类靶向方法已为本领域技术人员公知。所有这些靶向方法均可预期用于本发明的组合物。靶向方法的非限制性范例可参见，例如，美国专利6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。在一些实施方案中，本发明的所述抗hLIGHT抗体靶向(或以其它方式施用至)结肠，例如患有或易患IBD的患者的结肠。

在一个实施方案中，包含靶向组织的脂质体(例如，靶向肿瘤的脂质体)的脂质体悬浮液也可被用作药学可接受的载体。这些可通过本领域技术人员已知的方法进行制备。例如，脂质体制剂可参照美国专利4,522,811所述进行制备。简单而言，可通过在烧瓶中逐渐干燥(drying down)卵磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸(摩尔比7∶3)形成如多层囊泡(MLVs)等脂质体。添加含于缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲液(PBS)中的本发明提供的抗体的溶液，然后振荡烧瓶直至脂质膜被分散。洗涤所得的囊泡以去除未封装的抗体，离心成为小球，然后重悬浮于PBS。

施用和给药的方法

本发明进一步提供了包含本发明的用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病(或其症状)的一种或多种抗体的组合物。

在某些实施方案中，本发明提供的是包含本发明的用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病(例如IBD(例如溃疡性结肠炎或Crohn疾病))或其症状的一种或多种抗体的组合物。IBD症状可从轻微到严重，其程度通常取决于所涉及的肠道部分。IBD的典型症状包括腹部绞痛和疼痛，出血性腹泻，严重的紧迫性肠部运动，发烧，食欲不振，体重减轻，贫血，疲劳，和/或小腿、脚踝、小腿、大腿和手臂的溃疡。IBD的典型肠部并发症包括溃疡处的大出血、肠穿孔或破裂、狭窄和阻塞、瘘管(异常通行)和肛周疾病、中毒性巨结肠症(例如，急性非梗阻性结肠扩张)、和/或恶性肿瘤(如结肠或小肠的癌症)。IBD的典型肠外并发症包括关节炎、皮肤病、眼睛的炎症、肝脏和肾脏疾病、和/或骨质流失。通过本发明提供的组合物和方法可以预防、控制、治疗和/或减缓这些症状的任意组合。

在某些实施方案中，本发明提供的是包含本发明的用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病(例如GVHD)或其症状的一种或多种抗体的组合物。GVHD通常发生在同种异体或匹配的不相关骨髓移植(BMT)之后。

在一些实施方案中，所述GVHD为急性GVHD。急性GVHD的症状可迅速发生，并可能比较轻微或严重。在某些情况下，急性GVHD形成于移植后约三个月内，例如形成于移植后血球计数恢复时。在某些情况下，急性GVHD损伤皮肤、胃肠(GI)道和/或肝脏。例如，在部分患者中，急性皮肤GVHD始于患者手掌、脚底或肩部等部位的疹子。然而，该疹子可能扩散，并可能发痒和疼痛和/或可能起水泡或脱落。急性肝脏GVHD可能影响正常的肝功能，例如肝酶，并可能进而引起黄疸。急性肝脏GVHD还可能引起该患者腹部肿胀，并在肝肿大时引起疼痛。最后，急性肠GVHD(或消化系统的GVHD)的症状可包括腹泻、大便中带有粘液或血、腹部绞痛或腹部疼痛、消化不良、恶心和/或食欲不振。急性GVHD的其它一般症状包括贫血、低热和/或更易感染。通过本发明提供的组合物和方法可以预防、控制、治疗和/或减缓急性GVHD症状的任意组合。

在其它实施方案中，所述GVHD慢性GVHD。慢性GVHD可能发生在移植后约三个月至约一年。慢性GVHD可能是轻微的或是严重的，且通常包括与急性GVHD类似的症状。慢性GVHD可影响皮肤和消化系统，包括肝脏，但还可包括其它器官和免疫系统(例如，使得患者更易于被感染)和/或结缔组织。慢性皮肤GVHD的症状包括皮疹、皮肤干燥、皮肤紧、皮肤发痒、皮肤颜色变深、皮肤增厚、和/或可能影响头发(如脱发、变灰)或指甲(例如、硬指甲或脆指甲)。慢性肠GVHD可能影响消化系统、口腔、食道、胃粘膜及/或肠粘膜，而症状可包括腹泻、口腔干燥或疼痛、吞咽疼痛、胃的低养分吸收、腹胀、胃痉挛。肝脏的慢性GVHD可引起肝脏的损伤和创伤(硬化)。眼部的慢性GVHD可能影响泪腺，引起眼部干燥、灼伤和疼痛或者难以承受亮光。慢性肺GVHD可能引起呼吸短促、喘气、持续咳嗽和/或更易于胸部感染。慢性GVHD影响连接肌肉和骨骼的腱(例如，发炎)，从而导致你的手臂和腿部难以伸直或弯曲。通过本发明提供的组合物和方法可以预防、控制、治疗和/或减缓慢性GVHD症状的任意组合。

在具体的实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含E1、E13、E63、F19和/或F23抗体。在一个实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备的抗体(E1、E13、E63、F19或F23)。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含E1、E13、E63、F19和/或F23抗体的抗原结合片段。在另一个实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的抗原结合片段。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一种或多种VH结构域具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一种VH结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH结构域的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一个或多个VH CDR1具有SEQ ID NO：11、14、17、20或23所示的任意一种VH CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR1的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一个或多个VH CDR2具有SEQ ID NO：12、15、18、21或24所示的任意一种VH CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR2的氨基酸序列。在优选的实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一种或多种VH CDR3具有SEQ IDNO：13、16、19、22或25所示的任意一种VH CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR3)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR3的氨基酸序列。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一个或多个VL结构域具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示任意一种VL结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL结构域的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一种或多种VL CDR1具有SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38所示的任意一种VL CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VH CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR1的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一个或多个VL CDR2具有SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39所示的任意一种VL CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VH CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VLCDR2的氨基酸序列。在优选的实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含的一种或多种VL CDR3具有SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40所示的任意一种VL CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VH CDR3)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR3的氨基酸序列。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含了具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一种VH结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH结构域的氨基酸序列的一个或多个VH结构域，以及具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一种VL结构域的氨基酸序列或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL结构域的氨基酸序列的一个或多个VL结构域。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含了具有SEQ ID NO：11、14、17、20或23所示的任意一种VH CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR1的氨基酸序列的一个或多个VH CDR1，以及具有SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38所示的任意一种VL CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR1)的或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VLCDR1的氨基酸序列的一种或多种VL CDR1。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含了具有SEQ ID NO：11、14、17、20或23所示的任意一种VH CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR1的氨基酸序列的一种或多种VH CDR1，以及具有SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39所示的任意一种VL CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VH CDR2)的氨基酸序列的一种或多种VL CDR2。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，所述抗体包含了具有SEQ IDNO：11、14、17、20或23所示的任意一种VH CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR1的氨基酸序列的一种或多种VH CDR1，以及具有SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40所示的任意一种VL CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VHCDR3)的或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR3的氨基酸序列的一种或多种VL CDR3。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：12、15、18、21或24所示的任意一种VH CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR2的氨基酸序列的一个或多个VH CDR2，以及具有SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38所示的任意一种VL CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR1的氨基酸序列的一个或多个VL CDR1。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：12、15、18、21或24所示的任意一种VH CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VHCDR2的氨基酸序列的一个或多个VH CDR2，以及具有SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39所示的任意一种VL CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR2的氨基酸序列的一个或多个VL CDR2。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：12、15、18、21或24所示的任意一种VH CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR2)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR2的氨基酸序列的一个或多个VH CDR2，以及具有SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40所示的任意一种VL CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR3)的或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR3的氨基酸序列的一个或多个VL CDR3。

在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：13、16、19、22或25所示的任意一种VH CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR3)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR3的氨基酸序列的一个或多个VH CDR3，以及具有SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95或38所示的任意一种VL CDR1的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR1)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR1的氨基酸序列的一个或多个VL CDR1。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：13、16、19、22或25所示的任意一种VH CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR3)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VHCDR3的氨基酸序列的一个或多个VH CDR3，以及具有SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39所示的任意一种VL CDR2的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR2)的或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR2的氨基酸序列的一个或多个VL CDR2。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了一种或多种抗体，该抗体包含了具有SEQ ID NO：13、16、19、22或25所示的任意一种VH CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ IDNO：1、2、3、4或5所示的VH的VH CDR3)或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VH CDR3的氨基酸序列的一个或多个VH CDR3，以及具有SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40所示的任意一种VL CDR3的氨基酸序列(即，分别为SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的VL的VL CDR3)的或是由ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR3的氨基酸序列的一个或多个VL CDR3。

在一个实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域的氨基酸序列的VH结构域和/或具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10任意一个所示的VL结构域的氨基酸序列的VL结构域。

在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(a)具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO：82、6或83任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；(b)具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO：7所示氨基酸序列的VL结构域；(c)具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO：8所示氨基酸序列的VL结构域；(d)具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的VH结构域和SEQ ID NO：90、9、91或92任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；或者(e)具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的VH结构域和SEQ IDNO：10所示氨基酸序列的VL结构域。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含了具有ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的VH结构域的氨基酸序列的VH结构域和/或具有ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的VL结构域的氨基酸序列的VL结构域。

在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的氨基酸序列的VH结构域以及具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的氨基酸序列的VL结构域；(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的氨基酸序列的VH结构域以及具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的氨基酸序列的VL结构域；(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的氨基酸序列的VH结构域以及具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的氨基酸序列的VL结构域；(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的氨基酸序列的VH结构域以及具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的氨基酸序列的VL结构域；或者(e)具有ATCC录入号PTA-7828的抗体(F23)的氨基酸序列的VH结构域以及具有ATCC录入号PTA-7828的抗体(F23)的氨基酸序列的VL结构域。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VH CDR1具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VH CDR2具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域的VH CDR2的氨基酸序列。在另一实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VH CDR3具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域的VH CDR3的氨基酸序列。在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VH CDR1和/或VH CDR2和/或VHCDR3独立选自SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示的VH结构域中的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3。

本发明还提供了用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物，其包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含具有E1、E13、E63、F19和/或F23的任意一种VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)的氨基酸序列的一个或多个VL CDR(即，VLCDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL CDR(即，VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3)的氨基酸序列的一个或多个VL CDR(即，VL CDR1、VLCDR2和/或VL CDR3)；或者具有上述VL CDR的任意组合。

在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(1)VH结构域，其具有(a)分别具有SEQ ID NO：11、12和/或13所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(b)分别具有SEQID NO：14、15和/或16所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(c)分别具有SEQ ID NO：17、18和/或19所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2，和/或VH CDR3，(d)分别具有SEQ ID NO：20、21和/或22所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2，和/或VH CDR3，或(e)分别具有SEQ ID NO：23、24和/或25所示的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2，和/或VH CDR3，和/或(2)VL结构域，其具有(a)具有SEQ ID NO：84、26或85任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：86、27或87任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：88、28或89任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，(b)分别具有SEQ ID NO：29、30和/或31所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(c)分别具有SEQ ID NO：32、33和/或34所示氨基酸序列的VL CDR1、VLCDR2和/或VL CDR3，(d)具有SEQ ID NO：93、35、94或95任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，或者(e)分别具有SEQ ID NO：38、39和/或40所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(1)VH结构域，其具有(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VHCDR2和/或VH CDR3，(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VHCDR3，(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，或者(e)具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和/或(2)VL结构域，其具有(a)具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VLCDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(b)具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3，(c)具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(d)具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VL CDR1、VL CDR2和/或VLCDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，或者(e)具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(1)(a)VH结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：11、12和/或13所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，其含有具有SEQ ID NO：84、26或85任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：86、27或87任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：88、28或89任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，(2)(a)VH结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：14、15和/或16所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：29、30和/或31所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(3)(a)VH结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：17、18和/或19所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：32、33和/或34所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3，(4)(a)VH结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：20、21和/或22所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，其含有具有SEQ ID NO：93、35、94，或95任意一个所示氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR2；和/或具有SEQ ID NO：96、36、97或98任意一个所示氨基酸序列的VL CDR3，或(5)(a)VH结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：23、24和/或25所示氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3和(b)VL结构域，其含有分别具有SEQ ID NO：38、39和/或40所示氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(1)(a)VH结构域，其含有分别具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7729的抗体(E1)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；(2)(a)VH结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7842的抗体(E13)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；(3)(a)VH结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VH CDR1、VHCDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VHCDR3，和(b)VL结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7818的抗体(E63)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；(4)(a)VH结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VHCDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7819的抗体(F19)的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3；或(5)(a)VH结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3的氨基酸序列的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3，和(b)VL结构域，其含有具有ATCC录入号PTA-7728的抗体(F23)的VL CDR1、VLCDR2和/或VL CDR3的氨基酸序列的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VL CDR1具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一种VL区的VL CDR1的氨基酸序列，或是ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL区的VL CDR1的氨基酸序列。在其它实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VL CDR2具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一种VL区的VL CDR2的氨基酸序列，或是ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一种VL区的VL CDR2的氨基酸序列。在其它实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VL CDR3具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一种VL区的VL CDR3的氨基酸序列，或是ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F2)的任意一种VL区的VL CDR3的氨基酸序列。在某些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含的VL CDR1和/或VL CDR2和/或VL CDR3独立选自SEQ IDNO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一种VL区的VLCDR1、VL CDR2、VL CDR3，或是ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F2)的任意一种VL区的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3。

在一些实施方案中，用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含(1)VH结构域或链，其具有一个或多个(a)VH CDR1，其具有SEQ IDNO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH结构域的VH CDR1的氨基酸序列，(b)VH CDR2，其具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH区的VH CDR2的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH区的VH CDR2的氨基酸序列，或(c)VH CDR3，其具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5所示的任意一个VH区的VH CDR3的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VH区的VH CDR3的氨基酸序列，和/或(2)VL结构域或链，其具有一种或多种(a)VL CDR1，其具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL区的VL CDR1的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL区的VL CDR1的氨基酸序列，(b)VLCDR2，其具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL区的VL CDR2的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL区的VL CDR2的氨基酸序列，和/或(c)VL CDR3，其具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10所示的任意一个VL区的VL CDR3的氨基酸序列；或者具有由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备抗体的抗体(分别为E1、E13、E63、F19或F23)的任意一个VL区的VL CDR3的氨基酸序列。

本发明还提供了用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物，其包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含了表1所列举的一种或多种VH CDR以及一种或多种VL CDR。特别地，本发明提供了用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的组合物，其包含了免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体，其中所述的抗体包含VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)和VL CDR1(SEQ IDNO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)和VL CDR3(SEQID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ IDNO：12、15、18、21 or 24)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)；VH CDR3(SEQ IDNO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH1 CDR1、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ IDNO：13、16、19、22或25)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)和VL CDR3(SEQID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ IDNO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VL CDR1(SEQ IDNO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VHCDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ IDNO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)；VH CDR1(SEQID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ IDNO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ IDNO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ IDNO：88，28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37，100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR2(SEQ IDNO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ ID NO：84、26、85、29、32、35或38)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VL CDR1(SEQ IDNO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR1(SEQ ID NO：11、14、17、20或23)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ IDNO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；VH CDR2(SEQ ID NO：12、15、18、21或24)、VH CDR3(SEQ ID NO：13、16、19、22或25)、VL CDR1(SEQ IDNO：84、26、85、29、32、35或38)、VL CDR2(SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98或39)和VL CDR3(SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101或40)；或上述VH CDR(SEQ ID NO：11-25)和VLCDR(SEQ ID NO：26-40)的任意组合。ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728(E1、E13、E63、F19，或F23)的相应VH CDR和VL CDR也可用于上述的任意组合。优选地，所述抗体为完全人源性抗体，例如完全人源性单克隆抗体，和/或hLIGHT拮抗型抗体。

如本文别处更为具体的讨论，本发明的组合物可单独使用或联合其它化合物或组合物使用。此外，所述抗体可被进一步被重组融合至异源多肽的N或C末端，或者化学偶联(包括共价或非共价偶联)至多肽或其它组合物。例如，本发明的抗体可重组融合或偶联至可用于检测实验的标记分子和效应分子，例如异源多肽、药物、放射性核素、或毒素等。例如，参见PCT公布WO 92/08495；WO 91/14438；WO 89/12624；美国专利5,314,995和EP 396,387。

在一些实施方案中，本发明提供了在个体(例如，人类个体)体内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3的结合方法，其包括向所述个体施用有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)的抗体。在一个实施方案中，该hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。在一些实施方案中，个体中的hLIGHT生物活性，例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌，也被减少或抑制。

在某些实施方案中，本发明提供了在个体(例如，人类个体)体内减少或抑制hLIGHT生物活性(例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)的抗体，其中hLIGHT生物活性被该抗体降低或抑制。在一些实施方案中，该hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。

在其它实施方案中，本发明提供了在具有细胞表面表达的hLIGHT的细胞中减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR和/或DcR3的结合的方法，其包括将该细胞与有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)、hLIGHT多肽片段或hLIGHT表位的抗体相接触。在某些实施方案中，该hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。在一些实施方案中，细胞中的hLIGHT生物活性，例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌，也被减少或抑制。

在某些实施方案中，本发明提供了在具有细胞表面表达的hLIGHT受体(例如，HVEM、LTβR和/或DcR3)的细胞中减少或抑制hLIGHT生物活性(例如CCL20、IL8和/或RANTES的分泌)的方法，其包括将该细胞与有效量的免疫特异性结合hLIGHT多肽(例如，细胞表面表达的或是可溶性的hLIGHT)的抗体相接触，其中hLIGHT生物活性被该抗体减少或抑制。在一些实施方案中，所述hLIGHT为hLIGHT的SNP变体，例如214E-32S、214K-32S、214E-32L或214K-32L。

本发明的抗体可同时在体外和体内诊断和治疗方法中用于，例如，纯化、检测和靶向hLIGHT抗原。例如，修饰的抗体在免疫测定中用于定性和定量测定生物样本中的hLIGHT水平。例如，参见Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1988)(在此全文引用作为参考)。

本发明还提供了通过向个体施用有效量的抗体或包含本发明的抗体的药物组合物来预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病的方法。一方面，所述抗体被基本纯化(即，基本不含有限制其作用或产生不想要的副作用的物质)。在优选的实施方案中，所述抗体为完全人源性单克隆人抗体，例如完全人源性抗人单克隆拮抗型抗体。施用疗法的个体优选哺乳动物，例如非灵长动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长动物(例如，猕猴或人)。在优选的实施方案中，所述个体为人。在另一优选的实施方案中，所述个体为人类婴儿或人类的早产婴儿。在另一实施方案中，所述个体为患有hLIGHT介导的疾病的人。

已知各种递送系统，并可用于施用预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)，包括但不限于，封装在脂质体、微颗粒、微胶囊中、能够表达该抗体的重组细胞、受体介导的胞吞作用(例如、参见Wu和Wu，J.Biol.Chem.262：4429-4432(1987))、作为逆转录病毒或其它载体一部分的核酸的构建等。施用预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)或药物组合物的方法包括但不限于，肠胃外施用(例如，皮肤、肌肉、腹腔、静脉和皮下施用)、硬脑膜和粘膜(例如，鼻部和口腔途径)施用。在特定的实施方案中，预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)，或者药物组合物可通过鼻部、肌肉、静脉或皮下施用。预防性或治疗性制剂或组合物可通过任何便捷的途径施用，例如输注或弹丸注射、通过上皮和皮肤粘膜(例如，口腔粘膜、鼻部粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并可与其它生物活性剂一起施用。施用可以是全身或局部施用。此外，也可通过，例如，吸入器或喷雾器的使用，并与烟雾化剂配制进行肺部施用。例如，参见美国专利6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540和4,880,078；以及PCT公布WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346以及WO 99/66903，分别在此全文引用作为参考。

在具体实施方案中，可能需要向需要治疗的区域局部施用本发明的预防性或治疗性制剂或药物组合物。这可通过，例如，但不限于，局部输注、局部施用(例如，鼻内喷雾)、注射，或者移植(所述移植物为多孔的、非多孔的或是凝胶状的材料，其包含膜，例如硅胶模或纤维)得以实现。优选地，当施用本发明的抗体时，应注意使用不吸收该抗体的材料。

在另一实施方案中，本发明的预防性或治疗性制剂或组合物可在载体，特别是脂质体中递送(参见Langer，1990，Science 249：1527-1533；Treat等人，在Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York中第353-365页(1989)；Lopez-Berestein，同上，第317-327页；同上)。

在另一实施方案中，本发明的预防性或治疗性制剂或组合物可在控释或缓释系统中递送。在一个实施方案中，可用泵实现控释或缓释(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：20；Buchwald等人，1980，Surgery 88：507；Saudek等人，1989，N.Engl.J.Med.321：574)。在另一实施方案中，可使用聚合材料以实现本发明的预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)或组合物的控释或缓释(例如，MedicalApplications of Controlled Release，Langer和Wise(eds.)，CRC Pres.，BocaRaton，Florida(1974)；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Designand Performance，Smolen和Ball(eds.)，Wiley，New York(1984)；Ranger和Peppas，1983，J.，Macromol.Sci.ReV.Macromol.Chem.23：61；还可参见Levy等人，1985，Science 228：190；During等人，1989，Ann.Neurol.25：351；Howard等人，1989，J.Neurosurg.71：105)；美国专利5,679,377；美国专利5,916,597；美国专利5,912,015；美国专利5,989,463；美国专利5,128,326；PCT公布WO 99/15154以及PCT公布WO 99/20253。用于缓释剂型的聚合物的范例包括但不限于，聚(2-羟基乙基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-醋酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙醇酸交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚乳酸(PLA)、聚(乳酸-共-乙醇酸交酯)(PLGA)、和聚正酯。在优选的实施方案中，用于缓释剂型的聚合物是惰性的、不含可浸出杂质、储存稳定、无菌、且生物可降解的。在另一实施方案中，控释或缓释系统可被置于治疗靶标附近，即，鼻道或肺附近，从而仅需要全身剂量的一部分(例如，参见Goodson，在Medical Applications of Controlled Release中，同上，vol.2，第115-138页(1984))。控释系统在Langer(1990，Science 249：1527-1533)的综述中得到了讨论。本领域技术人员已知的任意技术可用于生产包含一种或多种本发明的抗体的缓释剂型。例如，参见，美国专利4,526,938，PCT公布WO 91/05548，PCT公布WO 96/20698，Ning等人，1996，″Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer XenograftUsing a Sustained-Release Gel，″Radiotherapy&Oncology 39：179-189，Song等人，1995，″Antibody Mediated Lung Targeting of Long-CirculatingEmulsions，″PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 50：372-397，Cleek等人，1997，″Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGFAntibody for Cardiovascular Application，″Pro.Int′l.Symp.Control.ReI.Bioact.Mater.24：853-854，和Lam等人，1997，″Microencapsulation of RecombinantHumanized Monoclonal Antibody for Local Delivery，″Proc.Int′l.Symp.Control ReI.Bioact.Mater.24：759-760。每篇文献分别在此全文引用作为参考。

在具体实施方案中，当本发明的组合物为编码预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)的核酸时，可通过将其构建为适当的核酸表达载体的一部分，并通过例如使用逆转录病毒载体(参见美国专利4,980,286)或通过直接注射或使用微粒轰击(例如，基因枪；Biolistic，Dupont)或以脂质或细胞表面受体或转染剂包被，或者通过与已知进入细胞核的同源异型框样肽连接施用(例如，参见Joliot等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：1864-1868)等方式施用进入细胞内，得以体内施用以促进其编码的预防性或治疗性制剂的表达。可替代性的，可将核酸导入细胞内，并通过同源重组整合进宿主细胞DNA以进行表达。

在具体的实施方案中，本发明的组合物包含本发明的一种、两种或多种抗体。在另一实施方案中，本发明的组合物包含本发明的一种、两种、或多种抗体，以及本发明的抗体以外的预防性或治疗性制剂。优选地，该试剂已知可用于或者曾被用于或者正被用于预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病。除了预防性或治疗性制剂外，本发明的组合物还可包含载体。

本发明的组合物包括可用于生产能够用来制备单位剂型的药物组合物(例如，适于向个体或患者施用的组合物)的原料药(bulk drug)组合物。在优选的实施方案中，本发明的组合物为药物组合物。该种组合物包含预防性或治疗性有效量的一种或多种预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体或其它预防性或治疗性制剂)，以及药学可接受的载体。优选地，该药物组合物被配制成与个体施用的途径相适应。

在具体实施方案中，术语“载体”指随治疗施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏试剂(完全或不完全))、赋形剂或溶媒。这样的药物载体可以是无菌液体，例如水和油，包括来自石油、动物、蔬菜或合成的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当所述药物组合物通过静脉内施用时，水是优选的载体。盐水溶液和右旋糖水溶液以及甘油溶液也可用作液体载体，特别适用于可注射溶液。适当的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石粉、氯化钠、干脱脂牛奶、甘油、丙二醇、乙二醇、水、乙醇等。根据需要，所述组合物还可包含极少量的润湿剂或乳化剂，或是pH缓冲剂。该组合物可呈溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、缓释剂型等形式。口服剂型可包含标准载体，例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适用的药物载体的范例可参见Remington′s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.，Easton，PA。所述组合物将包含预防性或治疗性有效量的该抗体(优选地呈纯化形式)，以及适当量的载体，从而提供正确施用至患者的形式。剂型应当适合施用的模式。

在优选实施方案中，可参照常规方法将组合物配制成适于静脉施用至人类的药物组合物。用于静脉内施用的组合物通常为无菌等张水性缓冲液中的溶液。根据需要，该组合物还可包含增溶剂和局部麻醉剂(例如lignocamne)以缓解注射位点的疼痛。然而，该种组合物还可通过静脉以外的途径施用。

一般而言，本发明组合物的成分既可单独提供也可混合在一起提供，例如，在密封容器(如标明了活性制剂的量的安瓿或小袋)作为冻干粉或无水浓缩物。当组合物通过输注施用时，可以配合使用含有无菌药物级水或盐水的输液瓶。当组合物通过注射施用时，可提供注射用无菌水或盐水的安瓿，从而可在施用前混合该成分。

本发明还提供了将本发明的抗体包装在标明了抗体量的密封容器(如安瓿或小袋中)。在一个实施方案中，所述抗体可提供为密封容器中的干式无菌冻干粉或无水浓缩物，并可用例如水或盐水复原至适当的浓度，从而向个体施用。优选地，所述抗体以至少0.1mg、至少0.5mg、至少1mg、至少2mg或至少3mg、更优选至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少60mg、至少75mg、至少80mg、至少85mg、至少90mg、至少95mg或至少100mg的单位剂量提供为密封容器中的干式无菌冻干粉。冻干抗体可在原始容器中被贮存在2和8℃之间，抗体可在复原后12小时内、优选6小时内、5小时内、3小时内或1小时内施用。在可替代性的实施方案中，所述抗体以液体形式提供，并包装于标明了抗体量和浓度的密封容器中。优选地，液体形式的抗体以至少0.1mg/ml、至少0.5mg/ml或至少1mg/ml、更优选至少5mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml、至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml或至少100mg/ml的浓度提供于密封容器中。

本发明的组合物可制成中性或盐的形式。药学可接受的盐包括例如盐酸、磷酸、醋酸、草酸、酒石酸等与阳离子形成的盐，以及与例如钠、钾、铵、钙、氢氧化物铁、异丙胺、三乙胺、2-氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等形成的盐。

在预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病中有效的本发明的预防性或治疗性制剂(例如，本发明的抗体)或组合物的量可通过标准临床技术确定。

相应地，可向人施用能产生下述血清效价的抗体或组合物的剂量：约0.1μg/ml至约450μg/ml，在部分实施方案中至少0.1μg/ml、至少0.2μg/ml、至少0.4μg/ml、至少0.5μg/ml、至少0.6μg/ml、至少0.8μg/ml、至少1μg/ml、至少1.5μg/ml、并优选地至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少30μg/ml、至少35μg/ml、至少40μg/ml、至少50μg/ml、至少75μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少200μg/ml、至少250μg/ml、至少300μg/ml、至少350μg/ml、至少400μg/ml或至少450μg/ml，以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病。此外，可以可选地采用体外测定来帮助确定最佳剂量范围。所采用的确切的剂量将取决于施用的途径，以及hLIGHT介导的疾病的严重性，并且应该根据医生的判断和每位患者的情况决定。

有效剂量可从来自体外或动物模型测试系统获得的剂量-应答曲线外推得到。

对于本发明的抗体，向患者施用的剂量相对患者体重通常为0.1mg/kg至100mg/kg。在部分实施方案中，向患者施用的剂量相对患者体重为大约1mg/kg至大约75mg/kg。优选地，向患者施用的剂量相对患者体重介于1mg/kg和20mg/kg，更优选介于1mg/kg和5mg/kg。一般而言，由于对外源多肽的免疫应答，人源抗体在人体内的半衰期长于来自其它物种的抗体。因此，通常可以采用更低剂量的人源抗体和更小的施用频率。此外，可通过修饰(例如，脂化)抗体增加摄取和组织穿透力来减少本发明的抗体的施用剂量和频率。

在一个实施方案中，施用了5次、4次、3次、2次或优选地1次约100mg/kg或更少、约75mg/kg或更少、约50mg/kg或更少、约25mg/kg或更少、约10mg/kg或更少、约5mg/kg或更少、约1mg/kg或更少、约0.5mg/kg或更少或约0.1mg/kg或更少的本发明的抗体来控制hLIGHT介导的疾病。在一些实施方案中，本发明的抗体被施用了约1-12次，其中可根据医生的决定按需给药，例如，每周、每两周、每月、每两月、每三月等进行给药。在一些实施方案中，可以较高的频率(例如，3-6次)施用较低的剂量(例如，1-15mg/kg)。在其它实施方案中，可以较低的频率(例如，1-3次)施用较高的剂量(例如，25-100mg/kg)。然而，在本领域中显而易见的是，其它的给药量和方案可被简单地确定，且落入本发明的范围之内。

在具体实施方案中，向个体(优选人)施用了约100mg/kg、约75mg/kg或更少、约50mg/kg或更少、约25mg/kg或更少、约10mg/kg或更少、约5mg/kg或更少、约1mg/kg或更少、约0.5mg/kg或更少、约0.1mg/kg或更少的缓释剂型的本发明的抗体以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病。在另一具体的实施方案中，向个体(优选人)施用了约100mg/kg、约75mg/kg或更少、约50mg/kg或更少、约25mg/kg或更少、约10mg/kg或更少、约5mg/kg或更少、约1mg/kg或更少、约0.5mg/kg或更少或者约0.1mg/kg或更少的非缓释剂型的本发明抗体的大丸剂，以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病，且在一定的时间后，向所述个体(例如，鼻内或肌肉内)施用两次、三次或四次(优选一次)约100mg/kg、约75mg/kg或更少、约50mg/kg或更少、约25mg/kg或更少、约10mg/kg或更少、约5mg/kg或更少、约1mg/kg或更少、约0.5mg/kg或更少或者约0.1mg/kg或更少的缓释剂型的本发明的抗体。根据该实施方案，一定的时间可以是1至5天，一周，两周或一个月。

在一些实施方案中，在一年的周期内以两周(例如，约14天)的间隔向患者施用二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、十五、十六、十七、十八、十九、二十、二十一、二十二、二十三、二十四、二十五或二十六次单个剂量的本发明抗体以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病，其中所述剂量选自约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每月的剂量可以相同或不同)。

在另一实施方案中，在一年的周期内每月(例如，约30天)向患者施用二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二次单个剂量的本发明的抗体以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病，其中所述剂量选自约0.1mg/kg，约0.5mg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每月的剂量可以相同或不同)。

在一个实施方案中，在一年的周期内以两月(例如，约60天)的间隔向患者施用二、三、四、五或六次单独剂量的本发明的抗体以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病，其中所述剂量选自约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每两月的剂量可以相同或不同)。

在一些实施方案中，在一年的周期内以三月(例如，约120天)的间隔向患者施用二、三或四次单独剂量的本发明的抗体以预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病，其中所述剂量选自约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每三月的剂量可以相同或不同)。

在某些实施方案中，本发明的抗体制剂的施用途径为鼻内、肌肉、静脉或其组合，但也可接受本发明所述的其它途径。每个制剂可采用相同或不同的施用途径。在一些实施方案中，本发明的抗体可与本发明的相同或不同抗体的其它制剂同时或先后通过多重施用途径进行施用。

在某些实施方案中，本发明的抗体被预防性或治疗性地施用至个体。本发明的抗体可被预防性或治疗性地施用至个体，从而预防、减轻或减缓hLIGHT介导的疾病或其症状。

基因疗法

在具体实施方案中，施用包含本发明抗体或其功能性衍生物的编码序列的核酸，从而通过基因疗法预防、控制、治疗和/或减缓hLIGHT介导的疾病。基因疗法指通过向个体施用表达的或可表达的核酸所进行的疗法。在本发明的实施方案中，所述核酸生成其编码的抗体，而该抗体介导预防性或治疗性作用。

本领域中现有的任意基因治疗方法均可用于本发明。以下描述的为示范性方法。

对于基因疗法的一般综述可参见，Goldspiel等人，1993，ClinicalPharmacy 12：488-505；Wu和Wu，1991，Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan，1993，Science260：926-932；以及Morgan and Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May，1993，TIBTECH 11(5)：155-215。重组DNA技术领域中公知的方法描述于Ausubel等人(eds.)，Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley&Sons，NY(1993)；和Kriegler，Gene Transfer andExpression，A Laboratory Manual，Stockton Press，NY(1990)。

在优选的实施方案中，本发明的组合物包含编码本发明的抗体的核酸，所述核酸是在适当的宿主中表达抗体或嵌合蛋白或其重或轻链的表达载体的一部分。特别地，这样的核酸具有可操作地连接至抗体编码区的启动子，优选异源启动子，所述启动子可以是诱导型或组成型，并可选地具有组织特异性。在另一具体的实施方案中，所使用的核酸分子中所述抗体编码序列和任意其它目标序列的侧翼是促进基因组目标位点上同源重组的区域，从而使所述抗体编码核酸可以在染色体内表达(Roller和Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；Zijlstra等人，1989，Nature 342：435-438)。在一些实施方案中，表达的抗体分子为单链抗体；可替代性地，该核酸序列包含同时编码抗体的重链和轻链或其片段的序列。

核酸向个体的递送可以是直接的，此时该个体直接暴露至该核酸或核酸-携带载体；也可以是间接的，此时首先在体外用该核酸转化细胞，然后将细胞移植进入该个体。这两种方法分别被称为体内或离体基因疗法。

在具体实施方案中，核酸序列被直接施用至体内，其中该序列将表达生成所编码产物。这可通过本领域已知的多种方法中的任意方法实现，例如，通过将其构建为适当核酸表达载体的一部分，并通过，例如，缺陷或减毒逆转录病毒或其它病毒载体的感染施用该载体，使核酸序列进入细胞内(参见美国专利4,980,286)，或通过直接注射裸露DNA，或通过微粒轰击(例如，基因枪法；Biolistic，Dupont)，或以脂质或细胞表面受体或转染剂包被，在脂质体、微粒或微胶囊包封，或通过将其与已知进入细胞核的的肽相结合进行施用，通过将其与参与受体介导的内吞作用的配体相结合进行施用(例如，参见Wu和Wu，1987，J.Biol.Chem.262：4429-4432)(其可用于靶向特异性表达该受体的细胞类型)等。在另一实施方案中，可形成核酸-配体复合物，其中配体包含基因融合的病毒肽以破坏内涵体，使核酸避免被溶酶体降解。在另一实施方案中，核酸可通过靶向特异性受体在体内定向，从而进行特异性摄取和表达(例如，参见PCT公布WO 92/06180；WO92/22635；WO92/9220316；WO93/14188，WO 93/20221)。可替代性地，核酸可被导入胞内，并通过同源重组被整合至宿主细胞DNA中以进行表达(Koller和Smithies，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：8932-8935；以及Zijlstra等人，1989，Nature 342：435-438)。

在具体实施方案中，使用了包含编码本发明抗体的核酸序列的病毒载体。例如，可使用逆转录病毒载体(参见Miller等人，1993，Meth.Enzymol.217：581-599)。这些逆转录载体包含正确包装病毒基因组并整合进入宿主细胞DNA所必需的组件。将在基因疗法中使用的编码抗体的核酸序列克隆进入一种或多种载体中，所述载体促进基因向个体的递送。有关逆转录病毒载体更具体的信息可参见Boesen等人，1994，Biotherapy 6：291-302，其描述了逆转录病毒载体将mdr 1基因递送进入造血干细胞，以使该干细胞对化疗更具耐受力的用途。其它阐述逆转录病毒在基因疗法中的用途的参考文献为：Clowes等人，1994，J.Clin.Invest.93：644-651；Klein等人，1994，Blood 83：1467-1473；Salmons和Gunzberg，1993，Human Gene Therapy 4：129-141；以及Grossman和Wilson，1993，Curr.Opin.in Genetics and Devel.3：110-114。

腺病毒是可用于基因疗法的另一病毒载体。腺病毒是用于向呼吸道上皮细胞递送基因的特别受人关注的载体。腺病毒天然感染呼吸道上皮细胞，并在此引起轻微的疾病。基于腺病毒递送系统的其它靶标为肝、中枢神经系统、内皮细胞和肌肉。腺病毒具有能够感染非分裂细胞的优势。Kozarsky和Wilson，1993，Current Opinion in Genetics and Development 3：499-503中提供了基于腺病毒基因疗法的综述。Bout等人，1994，Human Gene Therapy5：3-10显示了腺病毒载体在向恒河猴的呼吸道上皮细胞递送基因中的用途。腺病毒在基因疗法中的用途的其它实例可参见Rosenfeld等人，1991，Science 252：431-434；Rosenfeld等人，1992，Cell 68：143--155；Mastrangeli等人，1993，J.Clin.Invest.91：225-234；PCT公布WO94/12649；以及Wang等人，1995，Gene Therapy 2：775-783。在优选的实施方案中，采用了腺病毒载体。

腺相关病毒(AAV)也曾被提议用于基因疗法(Walsh等人，1993，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300以及美国专利5,436,146)。

基因疗法的另一策略包括通过诸如电穿孔、脂质体转染、磷酸钙介导的转染或是病毒感染等方法将基因转移进入组织培养中的细胞。这种转移方法通常包括将可选择的标记转移进入该细胞。然后对该细胞进行选择，以分离那些摄取并表达转移基因的细胞。这些细胞随后被递送进入个体。

在该实施方案中，核酸首选被导入细胞，随后在体内施用所得的重组细胞。这种导入可通过本领域任何已知的方法进行，包括但不限于转染、电穿孔、显微注射、用携带核酸序列的病毒或噬菌体感染、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质球融合等。本领域中已知有多种技术可用于将外源基因导入细胞(例如，参见Loeffler和Behr，1993，Meth.Enzymol.217：599-618；Cohen等人，1993，Meth.Enzymol.217：618-644；Clin.Pharma.Ther.29：69-92(1985))，这些技术在不破坏受体细胞必要的发育和生理功能的前提下可用于本发明。该技术应能将核酸稳定转移至细胞，从而使核酸可被细胞表达，并优选可被其细胞子代继承和表达。

所得的重组细胞可通过本领域已知的各种方法递送至个体。重组血细胞(例如，造血干或祖细胞)优选通过静脉内施用。预期使用的细胞的数量取决于目标效果、患者状态等，可由本领域技术人员确定。

可为基因治疗目的导入核酸的细胞包括任意希望的、现有的细胞类型，包括但不限于上皮细胞、内皮细胞、角化细胞、成纤维细胞、肌肉细胞、肝细胞；血细胞，如T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞、粒细胞；各种干或祖细胞，尤其是造血干或祖细胞，例如，由骨髓、脐带血、外周血、胎肝等获得的造血干或祖细胞。

在优选的实施方案中，用于基因疗法的细胞与个体是自体同源的。

在重组细胞被用于基因疗法的实施方案中，编码本发明抗体的核酸序列被导入细胞，从而可被该细胞或其子代所表达，而重组细胞随后被体内施用以获得治疗作用。在具体的实施方案中，使用了干细胞或祖细胞。任意能被分离并在体外维持的干和/或祖细胞均可用于本发明的这种实施方案(例如，参见，PCT公布WO 94/08598；Stemple和Anderson，1992，Cell 71：973-985；Rheinwald，1980，Meth.Cell Bio.21A：229以及Pittelkow和Scott，1986，Mayo Clinic Proc.61：771)。

在具体实施方案中，为基因治疗目的而需要被导入的核酸包含可操作地连接至编码区域的诱导型启动子，从而可通过控制适当的转录诱导物的存在或缺失来控制该核酸的表达。

抗体的诊断用途

标记后的免疫结合hLIGHT抗原的本发明抗体或其衍生物和类似物可用于诊断目的，从而检测、诊断或监测hLIGHT介导的疾病。本发明提供了检测hLIGHT介导的疾病的方法，其包括：(a)采用一种或多种免疫特异性结合hLIGHT抗原的本发明的抗体测定个体的细胞或组织样本中hLIGHT抗原的表达；和(b)将该hLIGHT抗原的水平与对照水平(例如，正常组织样本(例如，来自于未患有hLIGHT介导的疾病的个体或来自于疾病发作前的同一患者)样本中的水平)比较，与hLIGHT抗原的对照水平相比，测得hLIGHT抗原水平的上升表明hLIGHT介导的疾病。

本发明提供了诊断hLIGHT介导的疾病的诊断性测定，其包括：(a)采用一种或多种免疫特异性结合hLIGHT抗原的本发明抗体测定个体的细胞或组织样本中的hLIGHT抗原的水平；和(b)将该hLIGHT抗原的水平与对照水平(例如，正常组织样本中的水平)比较，与hLIGHT抗原的对照水平相比，测定的hLIGHT抗原水平上升表明hLIGHT介导的疾病。hLIGHT介导的疾病的更明确的诊断可允许保健专家采用预防性措施或早期积极治疗，从而防止hLIGHT介导的疾病的形成或进一步进展。

本发明的抗体可用于通过本发明所述或本领域技术人员已知的经典免疫组化方法来测定生物样本中hLIGHT抗原水平(例如，参见Jalkanen等人，1985，J.Cell.Biol.101：976-985；和Jalkanen等人，1987，J.Cell.Biol.105：3087-3096)。其它可用于检测蛋白基因表达的基于抗体的方法包括免疫测定，例如酶联免疫吸收分析(ELISA)和放射性免疫测定(RIA)。适用的抗体测定标记已为本领域所知，包括酶标记，例如，葡萄糖氧化酶；放射性同位素，例如碘(¹²⁵I、¹²¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、铟(¹²¹In)、和锝(⁹⁹Tc)；发光标记，例如鲁米诺；以及荧光标记，例如荧光素和若丹明，以及生物素。

本发明的一个方面为在人体内检测或诊断hLIGHT介导的疾病。在一个实施方案中，诊断包括a)向个体施用(例如，肠胃外、皮下或腹膜施用)有效量的免疫特异性结合hLIGHT抗原的标记抗体；b)在施用后等待一段时间，以允许该标记抗体在个体中表达该hLIGHT抗原的位点优先聚集(并允许未结合的标记分子从背景水平中被清除)；c)测定背景水平；和d)测定个体体内的标记抗体，所测得的标记抗体在背景水平以上表明该个体患有hLIGHT介导的疾病。背景水平可通过各种方法测定，包括，将测得的标记分子的量与之前测定的特定系统的标准值相比较。

本领域中应能理解：个体的大小和所用的成像系统将决定用于生成诊断性影像所需的成像部分的数量。对于用在人类个体的放射性同位素部分，所注射的放射活性的量通常在约5至20毫居里⁹⁹Tc的范围内。标记的抗体将优先聚集在包含特定蛋白的细胞的位置。体内肿瘤成像的描述可参见S.W.Burchiel等人，“Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies andTheir Fragments.”(Tumor Imaging：The Radiochemical Detection of Cancer中第13章，S.W.Burchiel and B.A.Rhodes，eds.，Masson Publishing Inc.(1982)。

根据多种变量(包括所用标记的类型和施用模式)，在施用后，标记抗体优先浓缩于个体内的位点以及未结合的标记抗体被清除至背景水平的时间间隔为6至48小时或6至24小时或6至12小时。在另一实施方案中，所述施用后的时间间隔为5至20天或5至10天。

在一个实施方案中，可通过例如，初次诊断一个月后、初次诊断六个月后、初次诊断一年后重复所述诊断hLIGHT介导疾病的方法来监测hLIGHT介导的疾病。

标记分子在个体体内的存在可通过本领域已知的体内扫描的方法进行检测。该方法依赖于所用的标记类型。技术人员将能够确定用于测定具体标记的适当方法。可用于本发明诊断方法的方法和仪器包括但不限于，计算机X射线断层成像(CT)、全身扫描，例如，正电子发射体层摄影(PET)、磁共振成像(MRI)和超声检查。

在具体实施方案中，通过放射性同位素标记分子标记分子，并通过放射应答手术仪器(Thurston等人，美国专利5,441,050)在患者体内检测。在另一实施方案中，用荧光化合物标记分子，并通过荧光应答扫描仪器在患者体内检测。在另一实施方案中，用正电子发射金属标记分子，并通过正电子发射断层显像在患者体内检测。在另一实施方案中，通过顺磁标记对分子进行标记，并通过磁共振成像(MRI)在患者体内检测。

制备抗体的方法

本发明的免疫特异性结合抗原的抗体可通过本领域已知的用于抗体合成的任何方法制备，特别地，可通过化学合成制备，或者优选地，通过重组表达技术制备。除非另行指明，本发明的实施采用了分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡聚核苷酸合成和修饰、核酸杂交以及本领域技术人员的相关领域的常规技术。这些技术在本发明引用的参考文献中已有描述，并在文献中得到了完全的解释。例如，参见Maniatis等人，(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人，(1989)，MolecularCloning：A Laboratory Manual，Second Edition，Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Sambrook等人，(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley&Sons(1987andannual updates)；Current Protocols in Immunology，John Wiley&Sons(1987and annual updates)Gait(ed.)(1984)Oligonucleotide Synthesis：A PracticalApproach，IRL Press；Eckstein(ed.)(1991)Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach，IRL Press；Birren等人，(eds.)(1999)GenomeAnalysis：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press。

免疫特异性结合抗原的多克隆抗体可通过各种本领域已知的各种方法制备。例如，人抗原可被施用至各种宿主动物，包括，但不限于，兔、小鼠、大鼠等，以诱导生产含有特异性针对该人抗原的多克隆抗体的血清。依据宿主种类不同，各种佐剂可用于提高免疫应答，其包括但不限于，弗氏试剂(完全或不完全)、矿物凝胶(如氢氧化铝)、表面活性物质如溶血卵磷脂、pluronic多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、匙孔血蓝蛋白、二硝基酚以及潜在有用的人佐剂如BCG(卡介苗)和短小棒状杆菌。该类佐剂已为本领域熟知。

单克隆抗体可通过本领域已知的多种技术进行制备，包括杂交瘤、重组和噬菌体展示技术及其组合的应用。例如，单克隆抗体可采用杂交瘤技术进行制备，该技术包括本领域已知的技术，或者对该技术的阐述可参见，例如，Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual，(Cold Spring HarborLaboratory Press，2nd ed.1988)；Hammerling等人，在Monoclonal Antibodiesand T-CeIl Hvbridomas 563 681(Elsevier，N.Y.，1981)中(所述参考文献在此全文引用作为参考)。本发明所用的术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术生产的抗体。制备单克隆抗体的其它示范性方法在本文别处进行了讨论，例如，用KM mouse^TM。本发明的实施例提供了制备单克隆抗体的其它示范性方法。

采用杂交瘤技术生产和筛选特异性抗体的方法是常规方法，且为本领域所知。简单而言，可用hLIGHT抗原免疫小鼠，一旦检测到免疫应答(例如，在小鼠血清中检测到特异性针对hLIGHT抗原的抗体)，则采集小鼠脾脏并分离脾细胞。然后将脾细胞通过公知技术融合至任何适当的骨髓瘤细胞，例如来自ATCC的细胞系SP20的细胞。通过有限稀释选择并克隆杂交瘤。

此外，可采用RIMMS(多位点反复免疫)技术来免疫动物(Kilptrack等人，1997Hybridoma 16：381-9，在此全文引用作为参考)。然后可通过本领域已知的方法测定分泌能够结合多肽的本发明抗体的杂交瘤克隆。具有阳性杂交瘤克隆的免疫小鼠可生成通常包含高水平抗体的腹水。

相应地，本发明提供了通过培养分泌本发明的修饰抗体的杂交瘤细胞制备抗体的方法，其中该杂交瘤通过如下方法生成：从用hLIGHT抗原免疫的小鼠分离脾细胞，融合至骨髓瘤细胞，然后筛选融合得到的杂交瘤，以得到分泌能够结合hLIGHT抗原的抗体的杂交瘤克隆。

识别特定hLIGHT抗原的抗体片段可通过本领域技术人员任意已知的技术制备。例如，本发明的Fab和F(ab′)₂片段可使用木瓜蛋白酶(生成Fab片段)或胃蛋白酶(生成F(ab′)₂片段)等酶通过蛋白水解免疫球蛋白分子生成。F(ab′)₂片段包含了可变区，轻链恒定区和重链CH1结构域。此外，本发明的抗体还可通过本领域已知的各种噬菌体展示方法制备。

例如，还可通过各种噬菌体展示方法制备抗体。在噬菌体展示方法中，功能性抗体结构域被展示在噬菌体颗粒的表面上，该噬菌体颗粒携带了编码该功能性抗体的多聚核苷酸序列。特别地，可从动物cDNA库(例如，人或鼠感染组织cDNA库)扩增编码VH和VL结构域的DNA序列。编码该VH和VL结构域的DNA可通过PCR与scFv接头重组在一起，并克隆进入噬菌粒载体。将该载体通过电穿孔导入大肠杆菌并以辅助噬菌体感染大肠杆菌。在这种方法中所用的噬菌体通常为丝状噬菌体，包括fd和M 13，VH和VL结构域通常重组融合至噬菌体基因III或基因VIII。表达能够结合特定抗原的抗原结合结构域的噬菌体可通过抗原(例如，采用标记抗原或者固体表面或珠子结合或捕获的抗原)进行选择或鉴别。可用于制备本发明抗体的示范性噬菌体展示方法包括披露于Brinkman等人，1995，J.Immunol.Methods 182：41-50；Ames等人，1995，J.Immunol.Methods 184：177-186；Kettleborough等人，1994，Eur.J.Immunol.24：952-958；Persic等人，1997，Gene 187：9-18；Burton等人，1994，Advances in Immunology 57：191-280；PCT申请PCT/GB91/O1 134；国际公布WO 90/02809、WO 91/10737、WO92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401和WO97/13844；以及美国专利5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108的方法，这些参考文献的每一个在此全文引用作为参考。

如上述参考文献所述，在噬菌体筛选后，可从该噬菌体分离抗体编码区并用于生成完整抗体(包括人抗体)或任何其它目标抗原结合片段，并在包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌的目标宿主中表达，例如，如下文所述。用于重组生产Fab、Fab′和F(ab′)₂片段的技术也可采用本领域已知的方法进行，例如参见PCT公布WO 92/22324；Mullinax等人，BioTechniques 12(6)：864-869(1992)；以及Sawai等人，AJRI 34：26-34(1995)；和Better等人，Science 240：1041-1043(1988)(所述参考文献全文引用作为参考)。

为了生成全抗体，可采用PCR引物来扩增scFv克隆中的VH或VL序列，所述PCR引物包括VH或VL核苷酸序列、限制性位点、以及保护该限制性位点的侧翼序列。通过本领域技术人员已知的克隆技术，可将PCR扩增的VH结构域克隆进入表达VH恒定区(例如，人gamma4恒定区)的载体，可将PCR扩增的VL结构域克隆进入表达VL恒定区(例如，人kappa或lambda恒定区)的载体。VH和VL结构域还可被克隆进入表达必需恒定区的一个载体。然后通过本领域技术人员已知的技术将重链转化载体和轻链转化载体共转染进入细胞系，以生成表达全长抗体(例如，IgG)的稳定或瞬时细胞系。

对于某些用途，包括抗体在人体的体内应用和体外检测分析，优选使用人源或嵌合抗体。完整人类抗体是对于人类个体的治疗特别理想的。人类抗体可通过本领域已知的多种方法制备，包括上述采用来自人免疫球蛋白序列的抗体库进行的噬菌体展示方法。还可参见美国专利4,444,887和4,716,111；以及国际申请WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741；分别在此全文引用作为参考。

在优选的实施方案中，人源性抗体被制备。人源性抗体和/或完全人源性抗体可通过本领域已知的任何方法，包括本发明提供的实施例中的方法制备。例如，可采用不表达功能性内源性免疫球蛋白、但能够表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠。例如，人重链和轻链免疫球蛋白基因复合物可随机导入或通过同源重组进入小鼠胚胎干细胞。除人重链和轻链基因外，还可将人可变区、恒定区和多样区导入鼠胚胎干细胞。可通过同源重组导入人免疫球蛋白基因座使鼠重链和轻链免疫球蛋白基因分别或同时失去功能。特别地，同源性删除J_H区防止了内源抗体的生成。扩增修饰后的胚胎干细胞并微注射进入胚泡以制备嵌合小鼠。饲养该嵌合小鼠以制备表达人抗体的纯合子型后代。用选择的抗原(例如，本发明多肽的全部或部分)通过常规方式免疫该转基因小鼠。可采用常规杂交瘤技术从免疫后的转基因小鼠获取针对该抗原的单克隆抗体。转基因小鼠包含的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化时重排，随后进行类型转换和体细胞突变。因此，通过这种技术可制备治疗有效的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。通过这种技术制备人类抗体的综述可参见Lonberg和Huszar(1995，Int.Rev.Immunol.13：65-93)。有关用于制备人源抗体和人单克隆抗体的这种技术以及制备这种抗体的方案的具体讨论可参见，例如，PCT公布WO 98/24893、WO 96/34096和WO 96/33735；以及美国专利5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318和5,939,598，上述文献的全文在此引用作为参考。其它的方法在本发明的实施例具体描述。此外，可委托Abgenix，Inc.(Freemont，CA)和Genpharm(San Jose，CA)等公司通过与上述类似的技术提供针对选定抗原的人源抗体。

嵌合抗体是抗体的不同部分来自于不同免疫球蛋白分子的一种分子。制备嵌合抗体的方法已为本领域所知。例如，参见Morrison，1985，Science229：1202；Oi等人，1986，BioTechniques 4：214；Gillies等人，1989，J.Immunol.Methods 125：191-202；以及美国专利5,807,715、4,816,567、4,816,397和6,331,415,上述文献全文在此引用作为参考。

人源化抗体是如下的抗体或其变体或其片段：该抗体能够结合预定的抗原，并包含了基本具有人免疫球蛋白氨基酸序列的框架区以及基本具有非人源免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。人源化抗体包含了基本全部的至少一个、通常为两个可变区(Fab、Fab′、F(ab′)₂、Fabc、Fv)，其中CDR区的全部或基本全部对应非人免疫球蛋白(即，供体抗体)的CDR区，框架区的全部或基本全部对应人免疫球蛋白一致序列的框架区。优选地，人源化抗体还包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白恒定区。通常该抗体将同时包含轻链和至少重链的可变区。该抗体还可包含重链的CH1、铰链、CH2、CH3和CH4区。人源化抗体可选自任意类(IgM、IgG、IgD、IgA和IgE)和任意亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)的免疫球蛋白。当需要人源化抗体显示细胞毒性时，通常恒定区是补体固定恒定区，且类别通常是IgG1。当不需要细胞毒性时，恒定区可来自IgG2。可用于本发明的特定实施方案的VL和VH恒定区的范例包括但不限于，在Johnson等人(1997)J.Infect.Dis.176，1215-1224和在美国专利5,824,307描述的C-kappa和C-gamma-1(nG1m)。人源化抗体可包含来自一个以上类别或同种型的序列，选择特定恒定区以优化目标效应功能属于本领域的普通技术。人源化抗体的框架和CDR区不需要精确对应亲代序列，例如，供体CDR或共有框架可通过替换、插入或删除至少一个残基进行突变，从而使得该位点的CDR或框架残基不与该共有或导入抗体(import antibody)相对应。然而，这种诱变不会是大范围的。通常，至少75％、更通常90％、并最优选大于95％的人源化抗体残基与亲代FR和CDR序列相对应。人源化抗体可通过本领域各种已知的技术进行制备，该技术包括但不限于，CDR-嫁接(欧洲专利EP239,400；国际公布WO 91/09967；以及美国专利5,225,539、5,530,101和5,585,089)，镶饰或重塑(欧洲专利EP 592,106和EP 519,596；Padlan，1991，Molecular Immunology 28(4/5)：489-498；Studnicka等人，1994，ProteinEngineering 7(6)：805-814；以及Roguska等人，1994，PNAS 91：969-973)，链替换(美国专利5,565,332)，以及披露于例如下述文献中的技术：美国专利6,407,213；美国专利5,766,886；WO 9317105；Tan等人，J.Immunol.169：111925(2002)；Caldas等人，Protein Eng.13(5)：353-60(2000)；Morea等人，Methods 20(3)：26779(2000)；Baca等人，J.Biol.Chem.272(16)：10678-84(1997)；Roguska等人，Protein Eng.9(10)：895904(1996)；Couto等人，Cancer Res.55(23Supp)：5973s-5977s(1995)；Couto等人，Cancer Res.55(8)：1717-22(1995)，Sandhu JS，Gene 150(2)：409-10(1994)和Pedersen等人，J.Mol.Biol.235(3)：959-73(1994)。还可参见美国专利US 2005/0042664A1(2005年2月24日)，这些文献的全文在此引用作为参考。框架区的框架残基通常可被CDR供体抗体的相应残基所替代从而改变，优选提高抗原结合。这些框架替换可通过本领域公知的方法进行鉴定，例如，可通过对CDR和框架残基的相互作用建模以鉴定对抗原结合重要的框架残基，可通过序列比较鉴定在特定位点的反常框架残基。(例如，参见Queen等人，美国专利5,585,089；以及Reichmann等人，1988，Nature 332：323，其全文在此引用作为参考)。

单结构域抗体，例如，缺失轻链的抗体，可通过本领域公知的方法制备。参见Riechmann等人，1999，J.Immunol.231：25-38；Nuttall等人，2000，Curr.Pharm.Biotechnol.1(3)：253-263；Muylderman，2001，J.Biotechnol.74(4)：277302；美国专利6,005,079；以及国际公布WO 94/04678，WO 94/25591和WO 01/44301，分别在此全文引用作为参考。

此外，随后免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体可通过本领域技术人员公知的技术用于生成“模仿”抗原的抗个体型抗体(例如，参见Greenspan&Bona，1989，FASEB J.7(5)：437-444；和Nissinoff，1991，J.Immunol.147(8)：2429-2438)。

编码抗体的多聚核苷酸

本发明提供了多聚核苷酸，其包含编码本发明的免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体的核苷酸序列。本发明还包括了在高度严格、中等或较低严格杂交条件(例如，如上文所定义)下与编码本发明的修饰抗体的多聚核苷酸杂交的多聚核苷酸。

可通过本领域任何已知的方法获得所述多聚核苷酸并测定该多聚核苷酸的核苷酸序列。由于已知E1、E13、E63、F19和F23的氨基酸序列(例如，参见SEQ ID NO：41、42、43、44、45、102、46、103、47、48、104、49、105、106和50；以及分别参见ATCC录入号PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728，在此引用作为参考)，编码这些抗体或这些抗体的修饰抗体的核苷酸序列可通过本领域公知的方法测定，即，组装已知编码特定氨基酸的核苷酸密码子，从而生成编码该抗体的核酸。这种编码抗体的多聚核苷酸可由化学合成的寡聚核苷酸(例如，如Kutmeier等人，1994，BioTechniques 17：242所述)组装而成，其主要涉及重叠寡聚核苷酸(包含编码该抗体或其片段或变体的序列部分)的合成，寡聚核苷酸的退火和连接，以及通过PCR对连接的寡聚核苷酸进行扩增。

可替代性地，编码本发明抗体的多聚核苷酸可通过来自于适当来源(例如，ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤(E1、E13、E63、F19或F23))的核酸生成。如果没有包含编码特定抗体的核酸的克隆，但已知抗体分子的序列，编码该免疫球蛋白的核酸可通过化学合成，或采用从该序列的3’到5’端杂交的合成引物通过PCR扩增从适当来源(例如，从任何表达该抗体的组织或细胞(例如经选定用于表达本发明的抗体的杂交瘤细胞)分离得到的抗体cDNA库、或cDNA库、或核酸，优选poly A+RNA)获取，或采用对待鉴定的特定基因序列(例如，一种来自编码该抗体的cDNA库的cDNA克隆)具有特异性的寡聚核苷酸探针进行克隆。然后可用本领域公知的任何技术将PCR生成的扩增核酸克隆进入可复制克隆性载体。

在某些实施方案中，本发明的核酸分子包含或由下述核酸序列组成：如SEQ ID NO：41、42、43、44、45(编码VH)和/或SEQ ID NO：102、46、103、47、48、104、49、105、106或50(编码VL)任意一个所示的核酸序列，或其组合(例如，编码本发明抗体，如本发明的全长抗体，本发明抗体的重和/或轻链或单链的核苷酸序列)。

抗体的重组表达

本发明的免疫结合hLIGHT抗原的抗体(例如，本发明的全长抗体，本发明抗体的重和/或轻链或单链)的重组表达需要构建包含编码该抗体的多聚核苷酸的表达载体。在获得编码本发明抗体分子或者抗体的重链或轻链、或其片段(优选，但非必须，包含该重链或轻链可变区)的多聚核苷酸后，可通过本领域公知的重组DNA技术制备生产该抗体分子的载体。因此，本发明描述了通过表达包含抗体编码核苷酸序列的多聚核苷酸来制备蛋白的方法。可采用本领域技术人员公知的方法构建包含抗体编码序列和适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括，例如，体内重组DNA技术、合成技术、以及体内遗传重组。因此，本发明提供了可复制载体，其包含可操作地连接至启动子的编码本发明抗体分子、抗体的重链或轻链、抗体的重链可变区或轻链可变区或其片段、或者重链CDR或轻链CDR的核苷酸序列。这种载体可包含编码所述抗体分子的恒定区的核苷酸序列(例如，参见国际公布WO 86/05807和WO 89/01036；以及美国专利5,122,464)，而抗体的可变区可被克隆进入该载体以表达完整的重链、完整的轻链或者同时表达完整的重链和轻链。

表达载体通过常规技术转入宿主细胞，然后以常规技术培养转染细胞以制备本发明的抗体。因此，本发明包括宿主细胞，其包含了可操作连接至外源启动子的编码本发明抗体或其片段、或者本发明抗体的重或轻链或其片段或者单链的多聚核苷酸。在针对表达双链抗体的优选实施方案中，如下文详述，同时编码重和轻链的载体可在宿主细胞中共表达以表达完整免疫球蛋白分子。

多种宿主表达载体系统可被用于表达本发明的抗体分子(例如，参见美国专利5,807,715)。这种宿主表达系统代表了可制备、然后纯化目标编码序列的载体，还代表了在以适当核苷酸编码序列进行转化或转染后原位表达本发明抗体分子的细胞。这些宿主表达系统包括但不限于微生物，如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转染的细菌(例如，大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转染的酵母(例如，毕赤酵母)；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒、CaMV；烟草花叶病毒、TMV)感染或重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转染的植物细胞系统；或含有哺乳动物细胞基因组启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或哺乳动物病毒启动子(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒75k启动子)的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如，COS、CHO、BLK、293、NSO和3T3细胞)。优选使用细菌细胞如大肠杆菌，更优选使用真核细胞表达重组抗体分子，特别是完整重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞(CHO))结合载体(例如，来自人细胞巨化病毒的主要中间早期基因(major intermediate early gene)启动子元件)是一种有效的抗体表达系统(Foecking等人，1986，Gene 45：101；以及Cockett等人，1990，Bio/Technology 8：2)。在优选的实施方案中，本发明的抗体在CHO细胞中制备。在具体实施方案中，编码本发明免疫特异性结合hLIGHT抗原的抗体的核苷酸序列的表达受到组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子的调节。

在细菌系统中，根据被表达的抗体分子的目标用途，可选择使用多种表达载体。例如，当需要制备大量抗体以得到抗体分子的药物组合物时，可采用能够引导表达高水平易纯化融合蛋白产物的载体。这类载体包括但不限于，大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等人，1983，EMBO 12：1791))，其中抗体克隆序列可在与lacZ编码区同框的情况下单独连接至载体从而生成融合蛋白；pIN载体(Inouye&Inouye，1985，Nucleic Acids Res.13：3101-3109；VanHeeke&Schuster，1989，J.Biol.Chem.24：5503-5509)；pGEX载体也可用于将外源多肽以与谷胱甘肽S-转移酶(GST)形成融合蛋白的形式进行表达。一般而言，这种融合蛋白具有可溶性，并能通过吸附、结合至基质谷胱甘肽-琼脂糖珠，然后在游离谷胱甘肽存在下洗脱进行方便的纯化。通过设计，pGEX载体包含了凝血酶或Xa因子蛋白酶裂解位点，从而使克隆的目标基因产物可以从GST部分释放。

在昆虫系统中，使用苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcNPV)作为表达外源基因的载体。该病毒生长在草地夜蛾细胞中。抗体编码序列可单独克隆进入该病毒的非必需区(例如多角体蛋白基因)并位于AcNPV启动子(例如该多角体蛋白启动子)的控制下。

在哺乳动物细胞中，可采用一系列基于病毒的表达系统。当采用腺病毒作为表达载体时，可将感兴趣的抗体编码序列连接至腺病毒转录/翻译控制复合物，例如，晚期启动子和三联前导序列。然后可通过体外或体内重组将该嵌合基因插入腺病毒基因组。插入至病毒基因组的非必需区(例如，E1区和E3区)，可形成存活的并能在感染宿主体内表达抗体分子的重组病毒(例如，参见Logan&Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：355-359)。也可能需要特定的起始信号来有效地翻译插入的抗体编码序列。这类信号包括ATG起始密码子和邻近序列。此外，起始密码子应当与目标编码序列的阅读框架同相，以确保完整插入物的翻译。这种外源性翻译控制信号和起始密码子可来自于不同来源(包括天然来源和合成来源)。表达的效率可通过包含适当的转录增强元件、转录终止子等得到增强(例如，参见Bittner等人，1987，Methods in Enzymol.153：51-544)。

此外，还可选择宿主细胞株，该细胞株以特定形式调节插入序列的表达、或修饰和处理基因产物。对蛋白产物的修饰(例如，糖基化)和处理(例如，裂解)可对该蛋白的功能非常重要。不同宿主细胞可对蛋白和基因产物的转译后处理和修饰均有特征性的和特异性的机制。可选择适当的细胞系或宿主系统以确保表达的外源蛋白被正确修饰和处理。为此，可使用具有正确处理基因产物的初级转录、糖基化和磷酸化的细胞机制的真核宿主细胞。这样的哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO、VERY、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、Wl38、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NSO(不会内源性生成任何免疫球蛋白链的鼠源骨髓瘤细胞系)、CRL7030和HsS78Bst细胞。在优选的实施方案中，在哺乳动物细胞(例如CHO细胞)中制备本发明的完全人源性、单克隆抗hLIGHT抗体。

为了长期高产量的制备重组蛋白，稳定表达是优选的。例如，可通过工程改造得到稳定表达抗体分子的细胞系。可以用由适当表达控制元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、聚腺苷酸化位点等)和选择性标记控制的DNA转化宿主细胞，而不使用包含病毒复制原点的表达载体转化。在导入外源DNA后，将工程细胞在富集培养基中培养1-2天，然后转入选择性培养基。重组质粒中的选择性标记可对选择因素耐受，并使细胞将该质粒稳定整合进入其染色体，然后生长得到可进行后续克隆并扩增成细胞系的细胞灶。该方法可用于工程改造可表达抗体分子的细胞系。这种工程改造细胞系对于筛选和评估直接或间接与抗体分子相互作用的组合物特别有用。

多种选择系统可供使用，包括但不限于可分别应用于tk-细胞、hgprt-细胞或aprt-细胞的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(Wigler等人，1977，Cell11：223)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因(Szybalska&Szybalski，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48：202)、以及腺嘌呤磷酸核糖转移酶(Lowy等人，1980，Cell 22：8-17)基因。此外，抗代谢物抗性可用作下列基因选择的基础：具有氨甲喋呤抗性的dhfr(Wigler等人，1980，Natl.Acad.Sci.USA 77：357；O′Hare等人，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：1527)；具有麦考酚酸抗性的gpt(Mulligan&Berg，1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA78：2072)；具有氨基糖苷G-418抗性的neo(Wu和Wu，1991，Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev，1993，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan，1993，Science 260：926-932；以及Morgan和Anderson，1993，Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May，1993，TIB TECH 11(5)：155-215)；具有对潮霉素的抗性的hygro(Santerre等人，1984，Gene 30：147)。重组DNA技术领域中公知的方法可被常规用于选择所需的重组克隆，且该种方法描述于，例如，Ausubel等人(eds.)，Current Protocols in Molecular Biology.John Wiley&Sons，NY(1993)；Kriegler，Gene Transfer and Expression，ALaboratory Manual，Stockton Press，NY(1990)；和Dracopoli等人(eds.)，Current Protocols in Human Genetics.中第12和13章，John Wiley&Sons，NY(1994)；Colberre-Garapin等人，1981，J.Mol.Biol.150：1，这些文献的全文在此引用作为参考。

抗体分子的表达水平可通过扩增载体得到提高(其综述参见Bebbington和Hentschel，The use of vectors based on gene amplification for the expressionof cloned genes in mammalian cells in DNA cloning，Vol.3(Academic Press，New York，1987))。当表达抗体的载体系统中的标记可进行扩增时，宿主细胞培养中抑制剂水平的增加可提高标记基因拷贝数。由于扩增区与抗体基因关联，因而抗体的产量也会得到提高(Crouse等人，1983，Mol.Cell.Biol.3：257)。

宿主细胞可被两个本发明的表达载体共转染，第一载体编码重链衍生多肽，第二载体编码轻链衍生多肽。这两种载体可包含相同的能使重和轻链多肽同等表达的可选择标记。可替代性地，可使用同时编码并能够表达重链多肽和轻链多肽的单一载体。在这种情况下，轻链被放置在重链之前以防止过量的无毒重链(Proudfoot，1986，Nature 322：52；以及Kohler，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：2197-2199)。重链和轻链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。

当本发明的抗体分子通过重组表达制备后，可通过本领域已知的任意免疫球蛋白分子纯化方法对其进行纯化，例如，层析(例如，离子交换层析、亲和层析，特别是对蛋白A特异性抗原的亲和层析、筛分柱层析)、离心、差异溶解度，或通过任何其它蛋白纯化标准技术。此外，本发明的抗体可被融合至本发明所述的或是本领域已知的其它异源多肽，以促进纯化。

试剂盒

本发明还提供了包含一个或多个装填了一种或多种本发明的药物组合物成分(例如，本发明提供的一种或多种抗体)的容器的包装或试剂盒。这种容器任选地带有通告，通告的形式由规范药物或生物产品的制造、使用和生产的政府部门制定，其内容反映针对人体施用物品的生产、使用或销售的机关的批准。

本发明提供了可用于上述方法的试剂盒。在一个实施方案中，试剂盒在一个或多个容器中包含了本发明的抗体，优选地包含了纯化抗体。在具体的实施方案中，本发明的试剂盒包含了基本分离的hLIGHT抗原作为对照。优选地，本发明的试剂盒进一步包含了不与hLIGHT抗原反应的对照抗体。在另一具体实施方案中，本发明的试剂盒包含了针对修饰抗体与hLIGHT抗原结合的检测手段(例如，所述抗体可被结合至可检测的底物，如荧光化合物、酶底物、放射活性化合物或发光化合物，或者可将识别第一抗体的第二抗体结合至可检测底物)。在具体实施方案中，试剂盒可包含重组生产的或是化学合成的hLIGHT抗原。试剂盒中提供的hLIGHT抗原可被连接至固相支持物。在更具体的实施方案中，上述试剂盒的检测手段包括可与hLIGHT抗原连接的固相支持物。所述试剂盒还可包含非连接的报告分子标记的抗人抗体。在该实施方案中，抗体与hLIGHT抗原的结合可通过结合所述报告分子标记的抗体进行检测。

以下的实施例仅为阐述目的提供，对本发明不构成限制。

实施例

实施例1人抗hLIGHT抗体的制备

在本实施例中，描述了通过用可溶性重组hLIGHT免疫的转染色体小鼠(KM mice^TM)(WO 02/43478；WO 02/092812；Ishida和Lonberg，IBC’s 11^thAntibody Engineering Meeting.Abstract(2000)；以及Kataoka，S.IBCs 13^thAntibody Engineering Meeting.Abstract(2002))制备人抗hLIGHT单克隆抗体。本发明所述的抗体可对hLIGHT稳定转染细胞系(EL4-hLIGHT和HEK293-hLIGHT)特异性染色，但不对其亲代细胞系染色。同样地，它们可结合在激活后在人T细胞杂交瘤(II-23.D7)表面内源性表达的hLIGHT(Ware等人，1986Lymphokine Res 5313-24)。这些数据显示了所述抗体免疫特异性结合hLIGHT。如下所述，通过交叉阻断试验测定，所述分离的抗体识别hLIGHT上的一个或两个表位。此外，所述抗体能够同时阻断细胞表面表达的hLIGHT与人HVEM和LTβR的可溶性受体-Fc融合形式的结合。可溶性hLIGHT以剂量依赖方式诱导趋化因子CCL20和RANTES在人结肠上皮细胞系HT29.14s(ATCC HTB-38)的分泌。将可溶性hLIGHT与抗hLIGHT抗体孵育，可同时阻断hLIGHT介导的CCL20和RANTES从HT29.14s细胞的分泌。此外，将细胞表面表达的hLIGHT(EL4-hLIGHT)与这些抗hLIGHT抗体预孵育，可阻断膜结合的hLIGHT诱导的HT29细胞分泌趋化因子。这些结果阐述了所述完全人源性抗hLIGHT单克隆抗体的功能和结构特征，并为它们在治疗hLIGHT介导的疾病中的用途提供了证据。

材料和方法

抗原制备：用于制备完全人源性抗hLIGHT抗体的免疫抗原为可溶性hLIGHT，其被截短，从而仅包含由氨基酸位置66的甘氨酸至位置240的缬氨酸的胞外区，并在该蛋白的氨基末端含有FLAG表位标记(SEQ ID NO：54)。该分子的制备已有报道(Rooney等人2000J Biol Chem 27514307-15)。

编码全长hLIGHT氨基酸序列(SEQ ID NO：52)的核酸(SEQ ID NO：51)可通过逆转录酶-PCR从激活的II23.D7T细胞杂交瘤细胞克隆得到(Mauri等人，1998Immunity 821-30)。该II-23细胞系(D7亚克隆)为人CD4+T细胞杂交瘤(Ware等人，1986Lymphokine Res 5313-24)。hLIGHT的PCR产物被亚克隆到哺乳动物表达载体pcDNA3.1(+)中，以生成pcDNA3.1-hLIGHT。通过PCR从pcDNA3-hLIGHT扩增胞外区(编码Gly66至Val240)，采用整合了限制性位点的如下引物：

正向5′-GTAGGAGAGATGGTCACCCGCCT-3′(SEQ ID NO：80)；

反向5′-GGAACGCGAATTCCCACGTGTCAGACCCATGTCCAAT-3′(SEQ ID NO：81)。

用EcoRI消化扩增的hLIGHT PCR产物，并连接至pCDNA3.1-VCAM-FLAG的SnaB1和EcoRI位点，pCDNA3.1-VCAM-FLAG编码跟随了FLAG表位的VCAM1前导序列，用于制备分泌的N末端FLAG标记的蛋白(SEQ ID NO：52)。

为了生成用于制备可溶性hLIGHT的稳定细胞系，通过磷酸钙法转染HEK293细胞，用G418(Invitrogen，Corp.)选择稳定的克隆，并用ELISA筛选生成hLIGHT的克隆。从含有1.0％特级胎牛血清的DMEM(HycloneLaboratories，Logan，UT)的细胞培养上清液纯化可溶性hLIGHT。以结合至琼脂糖珠的抗FLAG(M2)抗体通过亲和层析纯化可溶性hLIGHT。以pH3.0的20mM甘氨酸、150mM NaCl从柱上洗脱可溶性hLIGHT，并通过采集进入pH 7.4的50mM Tris立即中和pH。蛋白浓度可通过280nm下的吸收进行测定。

从起始密码子(ATG)至终止密码子(TGA)的hLIGHT的核苷酸序列(SEQ ID NO：51)：

ATGGAGGAGA GTGTCGTACG GCCCTCAGTG TTTGTGGTGG ATGGACAGAC CGACATCCCA   60

TTCACGAGGC TGGGACGAAG CCACCGGAGA CAGTCGTGCA GTGTGGCCCG GGTGGGTCTG  120

GGTCTCTTGC TGTTGCTGAT GGGGGCCGGG CTGGCCGTCC AAGGCTGGTT CCTCCTGCAG  180

CTGCACTGGC GTCTAGGAGA GATGGTCACC CGCCTGCCTG ACGGACCTGC AGGCTCCTGG  240

GAGCAGCTGA TACAAGAGCG AAGGTCTCAC GAGGTCAACC CAGCAGCGCA TCTCACAGGG  300

GCCAACTCCA GCTTGACCGG CAGCGGGGGG CCGCTGTTAT GGGAGACTCA GCTGGGCCTG  360

GCCTTCCTGA GGGGCCTCAG CTACCACGAT GGGGCCCTTG TGGTCACCAA AGCTGGCTAC  420

TACTACATCT ACTCCAAGGT GCAGCTGGGC GGTGTGGGCT GCCCGCTGGG CCTGGCCAGC  480

ACCATCACCC ACGGCCTCTA CAAGCGCACA CCCCGCTACC CCGAGGAGCT GGAGCTGTTG  540

GTCAGCCAGC AGTCACCCTG CGGACGGGCC ACCAGCAGCT CCCGGGTCTG GTGGGACAGC  600

AGCTTCCTGG GTGGTGTGGT ACACCTGGAG GCTGGGGAGG AGGTGGTCGT CCGTGTGCTG  660

GATGAACGCC TGGTTCGACT GCGTGATGGT ACCCGGTCTT ACTTCGGGGC TTTCATGGTG  720

TGA                                                                780

全长hLIGHT 240aa的氨基酸序列(SEQ ID NO：52)：

MEESVVRPSV FVVDGQTDIP FTRLGRSHRR QSCSVARVGL GLLLLLMGAG LAVQGWFLLQ  60

LHWRLGEMVT RLPDGPAGSW EQLIQERRSH EVNPAAHLTG ANSSLTGSGG PLLWETQLGL 120

AFLRGLSYHD GALVVTKAGY YYIYSKVQLG GVGCPLGLAS TITHGLYKRT PRYPEELELL 180

VSQQSPCGRA TSSSRVWWDS SFLGGVVHLE AGEEVVVRVL DERLVRLRDG TRSYFGAFMV 240

可溶性FLAG标记的hLIGHT的核苷酸序列(显示了VCAM前导序列，随后为粗体显示的FLAG编码序列)(SEQ ID NO：53)：

ATGCCTGGGA AGATGGTCGT GATCCTTGGA GCCTCAAATA TACTTTGGAT AATGTTTGCA   60

GCTTCTCAAG CT

GGAGAGAT GGTCACCCGC  120

CTGCCTGACG GACCTGCAGG CTCCTGGGAG CAGCTGATAC AAGAGCGAAG GTCTCACGAG  180

GTCAACCCAG CAGCGCATCT CACAGGGGCC AACTCCAGCT TGACCGGCAG CGGGGGGCCG  240

CTGTTATGGG AGACTCAGCT GGGCCTGGCC TTCCTGAGGG GCCTCAGCTA CCACGATGGG  300

GCCCTTGTGG TCACCAAAGC TGGCTACTAC TACATCTACT CCAAGGTGCA GCTGGGCGGT  360

GTGGGCTGCC CGCTGGGCCT GGCCAGCACC ATCACCCACG GCCTCTACAA GCGCACACCC  420

CGCTACCCCG AGGAGCTGGA GCTGTTGGTC AGCCAGCAGT CACCCTGCGG ACGGGCCACC  480

AGCAGCTCCC GGGTCTGGTG GGACAGCAGC TTCCTGGGTG GTGTGGTACA CCTGGAGGCT  540

GGGGAGGAGG TGGTCGTCCG TGTGCTGGAT GAACGCCTGG TTCGACTGCG TGATGGTACC  600

CGGTCTTACT TCGGGGCTTT CATGGTGTGA                                   660

可溶性FLAG标记的hLIGHT 183aa的氨基酸序列(FLAG以粗体显示)(SEQ ID NO：54)：

MVTRLPDGPA GSWEQLIQER RSHEVNPAAH LTGANSSLTG SGGPLLWETQ  60

LGLAFLRGLS YHDGALVVTK AGYYYIYSKV QLGGVGCPLG LASTITHGLY KRTPRYPEEL 120

ELLVSQQSPC GRATSSSRVW WDSSFLGGVV HLEAGEEVVV RVLDERLVRL RDGTRSYFGA 180

FMV                                                               240

以含有编码全长hLIGHT的cDNA的逆转录病毒稳定转导EL4(ATCCTIB-39)细胞，以形成EL4-hLIGHT细胞系。

Fc融合蛋白制备：对于克隆、表达和纯化包含人IgG1的Fc区以及人LTβR和人HVEM的配体结合区的可溶性受体融合蛋白，已有描述(Rooney等人，2000Methods Enzymol 322345-63)。简单而言，HVEM和LTβR的胞外区可通过聚合酶链式反应分离得到，其中采用的引物整合了限制性核酸内切酶位点并在框内连接至含有人Fc IgG1的杆状病毒载体pVL1392(Pharmingen)。以LTβR：Fc或HVEM:Fc重组杆状病毒感染Trichoplusia niHigh-Five BTI-TN-5bl-4(Tn5)昆虫细胞，以制备蛋白(参见抗体和蛋白纯化)。

小鼠：带有编码人免疫球蛋白区的人染色体片段的人转染色体KMmice^TM(WO 02/43478；WO 02/092812；Ishida和Lonberg，IBCs 11^th AntibodyEngineering Meeting.Abstract(2000)；以及Kataoka，S.IBCs 13^th AntibodyEngineering Meeting.Abstract(2002))可从日本的Kirin Brewery Co.，Ltd.获得，并收藏于Gemini Science(La Jolla，CA)的动物机构中。有关生产人源抗体的技术的综述可参见Lonberg和Huszar 1995 Int Rev Immunol 1365-93。带有一个或多个人免疫球蛋白基因(kappa或lambda)且不表达内源性免疫球蛋白的转基因动物描述于，例如，美国专利5,939,598。用于生产人源抗体和人源单克隆抗体的其它方法已有描述(例如，参见WO 98/24893；WO92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；美国专利5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；和5,939,598)。携带人免疫球蛋白基因的牛(TC牛)的制备描述于Ishida和Lonberg(参见Ishida 2000 11th Antibody Engineering Meeting，Kuroiwa等人，2004Nat Genet 36775-80，Kuroiwa等人，2002Nat Biotechnol 20889-94)。

免疫：将FLAG标记的可溶性hLIGHT重组蛋白与等体积的完全弗氏佐剂(CFA，Sigma)混合，制备乳液。以10至50μg的蛋白皮下(s.c.)免疫小鼠，并以在不完全弗氏佐剂(IFA，Sigma)中乳化的10至20μg的蛋白以2-3周的间隔进行2至3次强化。最后，在融合前3天，静脉注射(i.v.)10μg无佐剂的FLAG标记的可溶性hLIGHT。

杂交瘤的制备：用显示血清中抗hLIGHT IgG特异性抗体效价最高的小鼠来制备单克隆抗体，其中抗体效价用hLIGHT诱导的EL4细胞相对EL4亲代细胞以hLIGHT ELISA和FACS测得。采集脾脏，在50％聚乙二醇(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)中以5∶1的比例将单细胞悬浮液融合至SP2/O-Ag14骨髓瘤细胞系(ATCC，Manassas，VA)。将含于完全DMEM-10培养基(Dulbecco改良的Engle培养基，含有10％胎牛血清(FBS，Invitrogen，Corp.)、1％非必需氨基酸、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、100μg/ml硫酸链霉素(均来自于BioWhittaker，Walkersville，MD)、HAT补充物(Sigma)、以及10％杂交瘤克隆因子(HCF，Biovaris，San Diego，CA))的融合物在一定光密度(此处为1×10⁶/ml)下涂覆在96孔平底板上，在37℃下于10％CO₂培养箱中培养。通过ELISA对2种融合物筛选约2800个微孔，以得到含人kappa的hLIGHT特异性抗体。通过以hLIGHT-EL4细胞相对EL4亲代细胞的流式细胞计数分析确认人抗hLIGHT IgG抗体。另外通过将粗杂交瘤消减培养(extinction culture)生长培养基与EL4-hLIGHT细胞进行预培养，并以半饱和HVEM:Fc或LTβR:Fc染色，测试阳性微孔的受体阻断活性。扩增阳性微孔，并进行3-5轮的有限稀释克隆，以获得单克隆抗体。

抗体和蛋白纯化：为进行抗体纯化，在2升的转瓶中以350毫升至1升/瓶，或者1升的Integra系统(INTEGRA Bioscience，Inc.，Ijamsville，MD)中，用添加了超低IgG胎牛血清(Invitrogen，Corp.)的杂交瘤-SFM培养基(Invitrogen，Corp.)培养杂交瘤。

人和小鼠LTβR:Fc和HVEM:Fc重组蛋白的制备已有报道(Rooney等人，2000Meth.Enzymol.322：345-63)，该蛋白可在感染1升的Tn5细胞悬浮液4天后生成。人单克隆抗体和Fc融合蛋白均以重组蛋白A-SepharoseFast Flow凝胶(Amersham Biosciences)从培养基中纯化得到。先用Ultrasette切向流动系统(Pall Corp.，East Hills，NY)浓缩转瓶中生成的条件培养基。用0.22μm真空过滤装置(Millipore，Bedford，MA)过滤该条件培养基，并上样至蛋白A-Sepharose Fast Flow柱(Amersham Biosciences)上，该柱的大小与培养基中人源抗体量相适应。用20倍柱体积的PBS彻底洗涤该柱子，以0.1M Gly-HCl，pH 3.6，0.15M的NaCl洗脱抗体，并用1M Tris-HCl，pH 8.0中和。通过SDS-PAGE分析组分，汇集阳性组分，并用离心浓缩机(Vivaspin，50,000MWCO：Sartorius，Gettingen，Germany)浓缩。

用Sephadex G-25脱盐柱(NAP，Amersham Biosciences)将缓冲液变为PBS，pH 7.4。最后，以0.22μm孔径的注射式过滤器无菌过滤抗体，并通过Lowry法测定抗体浓度。通过鲎阿米巴样细胞裂解物(LAL)实验(Associates of Cape Cod，Falmouth，MA)检测热源含量。该实验的检测限度为0.06EU/mg。如果测试结果为阴性，可认为该样本无内毒素。

人IgG定量ELISA：为了检测上清液和纯化的储存液中人源抗体的量，可采用如下方法。将碳酸盐缓冲液中的山羊抗人Fcγ特异性抗体(JacksonImmunoresearch Laboratories，West Grove，PA)以0.5μg/微孔在37℃下对96孔板包被1小时。然后以Super block(Pierce，Rockford，IL)封闭该平板30分钟，随后向该平板添加样本。可采用总人源IgG(Sigma)或纯化的人源IgG1或IgG4(Kirin Brewery Co.，Ltd)生成标准曲线。将平板在37℃下孵育1小时，在PBS/1％BSA/0.1％Tween20(Sigma)中洗涤，并通过结合至辣根过氧化酶的山羊抗人Fcγ特异性抗体(HRP，Jackson ImmunoresearchLaboratorie，West Grove，PA)检测结合的抗体。在10分钟内添加TMB底物(Sigma)，并以H₂SO₄(LabChem，Pittsburgh，PA)终止反应。在酶标仪上于450nm下测量OD。

哺乳动物细胞培养：将人II-23细胞系(D7亚克隆)，一种CD4+T细胞杂交瘤系(Ware等人，1986Lymphokine Res 5313-24)，保存在含有10％FBS(HyClone Laboratories，Logan，UT)和100U/ml青霉素/100U/ml链霉素(Life Technologies，Grand Island，NY)的RPMI 1640中。将人HT29.14s细胞系、EL4-hLIGHT细胞系和293-hLIGHT细胞系都保存在含有10％FBS的DMEM(HyClone Laboratories，Logan，UT)中。所有的哺乳动物细胞均在37℃下的5％CO₂增湿培养箱中培养。

抗hLIGHT抗体检测ELISA：可通过ELISA测定抗体效价、抗体特异性以及杂交瘤制备的抗体。简单而言，将50μl碳酸盐缓冲液(pH 9.4)中的FLAG标记的可溶性hLIGHT以5μg/ml包被96孔平底板，在4℃下过夜，或在37℃下1小时。用PBS/0.1％Tween 20洗涤两次后，以PBS/1％BSA/0.1％Tween20在37℃下将平板封闭1小时。在封闭缓冲液中稀释血清、上清液或纯化的抗体，添加至微孔，并将平板在37℃下孵育1小时。以PBS/0.1％Tween 20洗涤平板4次，并添加1∶2000稀释的过氧化酶结合的绵羊抗人kappa检测抗体(The Binding Site，Birmingham，UK)。37℃下孵育1小时后，洗涤平板，添加TMB(Sigma)底物，并在室温下孵育10至30分钟。用H₂SO₄(LabChem)终止反应，并用酶标仪检测450nm下的光密度。

流式细胞术：可使用hLIGHT稳定的EL4转导细胞系或6-15hr PMA(40ng/ml)+inonomycin(500ng/ml)激活的II23.D7T细胞系，采用流式细胞计数分析测定，抗体效价、特异性和相对结合亲和性。将细胞用染色缓冲液(PBS+2％FBS+0.01％NaN₃+10mM EDTA)洗涤一次，然后重悬浮于50μl体积的血清、上清液或纯化抗体中。将细胞和抗体在冰上孵育20分钟，用染色缓冲液洗涤两次，然后重悬浮在山羊抗人IgG-APC标记的二级抗体(驴抗人APC，Jackson Immunoresearch Laboratories，West Grove，PA)中。在冰上孵育20分钟后，洗涤细胞一次，并以1％多聚甲醛固定10分钟，或进行最后的洗涤，然后将细胞重悬浮于染色缓冲液，通过FACScan或FACSCalibur流式细胞仪(Becton Dickinson Biosciences，Palo Alto，CA)获得样本。通过CELLQUEST(Becton Dickinson Biosciences)或FLOW JO(TreeStar，Inc.，San Carlos，CA)软件分析数据。

抗hLIGHT抗交叉阻断实验：可采用ELISA法测定抗体是否结合相同的hLIGHT表位。将含于碳酸盐缓冲液的人抗hLIGHT抗体以2μg/ml包被NUNC 96孔平底ELISA板，37℃下1小时。洗涤平板，然后以PBS/1％BSA/Tween 20封闭。然后将人抗hLIGHT抗体与重组人FLAG标记的可溶性hLIGHT在4℃下预孵育30分钟。向平板添加抗体-hLIGHT蛋白重组物，并4℃下孵育1小时。3次洗涤后，通过过氧化酶结合的M2-小鼠抗FLAG表位标记抗体(Sigma)检测结合的hLIGHT。抑制百分比采用每个样本的OD通过下式确定：％抑制＝(最大值-样本值/最大值)×100。

人细胞因子分析。采用多重技术(multiplex technology)并参照生产商的说明(Bio-Rad Laboratories，Hercules，CA)检测处理的HT29.14s细胞的生长培养基中的一组8种人细胞因子。通过ELISA(R&D systems，Minneapolis，MN)并参照生产商的说明，检测HT29.14s细胞培养基中的CCL20。

体外测定细胞表面表达的LIGHT结合可溶性受体Fc融合蛋白的抗体 所介导的阻断。将1e5EL4hLIGHT细胞与不同浓度等级的各种抗体在4℃下孵育30分钟。然后向细胞添加亚饱和量的HVEM:Fc-生物素(3μg/ml)或LTβR:Fc-His(3μg/ml)(Alexis Biochemicals)，并4℃下孵育30分钟。然后用200μl FACS缓冲液(1×PBS 2％FBS+0.02％叠氮化物)洗涤细胞2次。HVEM:Fc-生物素或LTβR:Fc-His可分别通过与2.5μg/ml的SA-APC或抗His-HRP孵育30分钟进行检测。然后在FACScaliber(Becton Dickinson)流式细胞仪上分析细胞。从前向角散射相对侧向角散射的图中排除(gatedout)死细胞，并通过FLOWJO(TreeStar，San Carlos，CA，USA)计算每个柱下的几何平均值。

人抗hLIGHT抗体基因的分离。通过离心收集分别生成E63(IgG3)、F23(IgG4)、E1(IgG1)、E13(IgG1)和F19(IgG1)抗体的培养的杂交瘤细胞(124E63、124F23、124E1、124E13和124F19)。采用RNEASY试剂盒(QIAGENInc.，Valencia，CA)，并参照生产商的说明从这些细胞中提取总RNA。采用SMART RACE cDNA扩增试剂盒(Clontech Co.，Ltd.，Palo Alto，CA)从总杂交瘤细胞RNA中克隆编码免疫球蛋白基因的可变区的cDNA。简单而言，从2微克的RNA通过逆转录酶制备第一链cDNA。该cDNA被用作聚合酶链式反应(PCR)的模板，以扩增重链和轻链的可变区(分别为VH和VL)和恒定区的一部分。用于在5′RACE反应中扩增该重链和轻链基因的3′引物分别为HH-2(SEQ ID NO：64)(重链恒定区)和HK-2(SEQ ID NO：65)(轻链恒定区)。扩增的序列还可包含前导序列。反应物如下：2.5单位PFUULTRA DNA聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)；0.2μM 3′引物(针对重链：IgG1p，针对轻链：hk5，表2)；1×针对5′端的通用引物混合物A(包含在SMART RACE试剂盒中的UMP引物混合物A)；200μM dNTP混合物；1mM MgCl₂；Puff Ultra Buffer(终浓度为1×)；以及cDNA模板。

温度循环程序为5个如下的循环：94℃×30秒，72℃×3分钟。5个如下的循环：94℃×30秒，70℃×30秒，72℃×3分钟。25个如下的循环：94℃×30秒，68℃×30秒，72℃×3分钟，然后继以72℃×7分钟的延伸。从琼脂糖凝胶电泳收集扩增的DNA片段，并用QIAQUICK凝胶提取试剂盒(QiagenCo.，Ltd.，Germany)纯化。采用Zero平头TOPO PCR克隆试剂盒(Invitrogen，Carlsbad，CA)将纯化的VH和LV DNA片段整合进入PCR 4平头-TOPO载体，将各种构建体质粒转化进入大肠杆菌，然后克隆。通过特定的通用载体引物M13F(SEQ ID NO：58)和M13R(SEQ ID NO：59)分析构建体质粒中的各种插入物(HV和LV)的核苷酸序列。根据从VH和VL获得的序列，设计寡聚核苷酸引物，以扩增相应的VH和VL(参见表2)。

将编码E63、F23、E1及F19VH和VL的cDNA通过PCR由PCR4平头-TOPO载体亚克隆到IgG1表达载体中。由于E13是具有单kappa链的IgG1亚型(见下文)杂交瘤，因此对于进一步分析，不需要将E13 cDNA亚克隆进入IgG1载体。

首先，设计带有5′-SaII和3′-NheI限制性酶识别位点的寡聚核苷酸引物，通过PCR扩增重链的可变区(VH)。例如，对于E63VH，以pTopoE63VHmini-prep DNA作为模板，E63HF85(SEQ ID NO：60)和E63HR38(SEQ IDNO：61)作为引物(见表2)，并用PFU ULTRA DNA聚合酶进行PCR。用Nhel和Sail消化后，将PCR产物亚克隆进入预先以Nhel和Sail消化的IgG1表达载体(IDEC Pharmaceuticals，San Diego，CA，N5KG1-Val Lark(N5KG1的修饰载体(美国专利6,001,358))(8.9kb DNA片段)。通过限制性消化分析VH的存在。

然后，设计带有5′BgIII和3′BsiWI限制性酶识别位点的寡聚核苷酸引物，以通过PCR扩增轻链的可变区(VL)。例如，在上述的E63VH亚克隆后，通过以BgIII和BsiWI消化该DNA载体，将E63VL插入N5KG1-ValLark-VH载体。然后分离9.1kb DNA片段。与VH构建体类似，设计VL的PCR引物组，以包含5′BgIII和3′BsiWI的识别位点。引物E63LF84(SEQID NO：62)和E63LR43(SEQ ID NO：63)可用于从pTopoE63VL mini-prep质粒DNA扩增VL。用BgIII和BsiWI消化该PCR产物，并用琼脂糖凝胶电泳和凝胶纯化进行分离。通过T4DNA连接酶将包含E63VL的该片段连接至制备的9.1kb载体，并用于转化Top 10细胞(Invitrogen)。选择阳性大肠杆菌转化体。纯化pG1K112E63表达载体，并通过限制性分析确认E63VL和E63VH区的同时存在。

用与E63G1基本相同的方法，制备重组F23G1、E1G1和F19G1抗体的载体。采用F23HF86(SEQ ID NO：66)和F23HR55(SEQ ID NO：67)进行F23VH的PCR扩增。F23VL扩增引物为F23LF36(SEQ ID NO：68)和F23LR43(SEQ ID NO：69)。采用E1HFSal1(SEQ ID NO：70)和E1HRNheI(SEQ ID NO：71)进行E1VH的PCR扩增。采用E1KF2+3BglII(SEQ ID NO：74)与E1KR2BsiWI(SEQ ID NO：75)或E1KR3BsiWI(SEQ ID NO：76)配对进行E1VL kappa(A)、E1VL kappa(B)和E1VL kappa(C)的PCR扩增。采用F19HFSal1(SEQ ID NO：72)和F19HRNheI(SEQ ID NO：73)进行F19VH的PCR扩增。采用F19KR1+2BsiWI(SEQ ID NO：77)和F19KF 1+2+3BgIII(SEQ ID NO：79)进行F19L kappa(A)和F19L kappa(B)的PCR扩增。采用F19KR3BsiWI(SEQ ID NO：78)和F19KF 1+2+3BgIII(SEQ ID NO：79)进行F19L kappa(C)的PCR扩增。通过限制性酶消化和测序确认所得的载体pKLG1/F23、pKLG1/E1和pKLG1/F19。由于阅读框移码(通过序列分析测得)，因而不通过PCR扩增F19L kappa(D)，该移码生成抗体C末端片段。

E63重链可变区(VH)的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：43)：

ATGAAACACC TGTGGTTCTT CCTCCTCCTG GTGGCAGCTC CCAGATGGGT CCTGTCCCAG

60

GTGCAGCTGC AGGAGTCGGG CCCAGGACTG GTGAAGCCTT CGGAGACCCT GTCCCTCACC

120

TGCATTGTCT CTGGTGGCTC CGTCAGCAGT GGTGGTTACT ACTGGAGCTG GATCCGGCAG

180

CCCCCAGGGA AGGGACTGGA GTGGATTGGG TATATCTATT ACAGTGGGAG CACCAACTAC

240

AACCCCTCCC TCAAGAGTCG AGTCACCATA TCAGTAGACA CGTCCAAGAA CCAGTTCTCC

300

CTGAAGCTGA GCTCTGTGAC CGCTGCGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGATGGATT

360

ACTATGTTTC GGGGAGTTGG GTTCGACCCC TGGGGCCAGG GAACCCTGGT CACCGTCTCC

420

TCA

480

E63kappa轻链可变区(VL)的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：48)：

ATGTCGCCAT CACAACTCAT TGGGTTTCTG CTGCTCTGGG TTCCAGCCTC CAGGGGTGAA   60

ATTGTGCTGA CTCAGTCTCC AGACTTTCAG TCTGTGACTC CAAAGGAGAA AGTCACCATC  120

ACCTGCCGGG CCAGTCAGAG CATTGGTAGT AGCTTACACT GGTACCAGCA GAAACCAGAT  180

CAGTCTCCAA AGCTCCTCAT CAAGTATGCT TCCCAGTCCT TCTCAGGGGT CCCCTCGAGG  240

TTCAGTGGCA GTGGATCTGG GACAGATTTC ACCCTCACCA TCAATAGCCT GGAAGCTGAA  300

GATGCTGCAG CATATTACTG TCATCAGAGT AGTAGTTTAC CTCTCACTTT CGGCGGAGGG  360

ACCAAGGTGG AGATCAAA                                                420

F23重链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：45)：

ATGGACCTCC TGCACAAGAA CATGAAACAC CTGTGGTTCT TCCTCCTCCT GGTGGCAGCT   60

CCCAGATGGG TCCTGTCCCA GGTGCAGCTA CAGCAGTGGG GCGCAGGACT GTTGAAGCCT  120

TCGGAGACCC TGTCCCTCAC CTGCGCTGTC TATGGTGGGT CCTTCAGTGG TTACTACTGG  180

AACTGGATCC GCCAGCCCCC AGGGAAGGGG CTGGAGTGGA TTGGGGAAAT CAATCAGTAC  240

AACCCGTCCC TCAAGAGTCG AGTCACCATA TCAGTAGACA CGTCCAAGAA CCAGTTCTCC  300

CTGAAGCTGA GCTCTGTGAC CGCCGCGGAC ACGGCTGTGT ATTACTGTGC GAGAGAGATA  360

GCAACAGCTG ATAAAGGGTA CTACGGTTTG GACGTCTGGG GCCAAGGGAC CACGGTCACC  420

GTCTCCTCA                                                          480

F23kappa轻链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：50)：

ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTTCTGC TGCTCTGGCT CCCAGGTGCC   60

AGATGTGCCA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT CTGCATCTGT AGGAGACAGA  120

GTCACCATCA CTTGCCGGGC AAGTCAGGGC ATTAGCAGTG CTTTAGCCTG GTATCAGCAG  180

AAACCAGGGA AAGCTCCTAA GCTCCTGATC TATGATGCCT CCAGTTTGGA AAGTGGGGTC  240

CCATCAAGGT TCAGCGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG  300

CAGCCTGAAG ATTTTGCAAC TTATTACTGT CAACAGTTTA ATAGTTACCC GCTCACTTTC  360

GGCGGAGGGA CCAAGGTGGA GATCAAA                                      420

E1重链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：41)：

ATGGAGTTGG GGCTGTGCTG GGTTTTCCTT GTTGCTATTT TAGAAGGTGT CCAGTGTGAG   60

GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCTTG GTACAGCCTG GGGGGTCCCT GAGACTCTCC  120

TGTGCAGCCT CTGGATTCAC CTTCAGTAGA TTTAACATGA ACTGGGTCCG CCAGGCTCCA  180

GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT TTCATACATT AGTAGTAGTA GTTATACCAT ATACTACGCA  240

GACTCTGTGA AGGGCCGATT CACCATCTCC AGAGACAATG CCAAGAACTC ACTGGATCTG  300

CAAATGAACA GCCTGAGAGA CGAGGACACG GCTGTGTATT ACTGTGCGAG GAGTATAGCA  360

GCAGCTTTTG ACTACTGGGG CCAGGGAGCC CTGGTCACCG TCTCCTCA               420

E1kappa轻链可变区#1的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：102)：

ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTTCTGC TGCTCTGGCT CCCAGGTGCC   60

AGATGTGCCA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT CTGCATCTGT AGGAGACAGA  120

GTCACCATCA CTTGCCGGGC AAGTCAGGGC ATTAGCAGTG CTTTAGCCTG GTATCAGCAG  180

AAACCAGGGA AAGCTCCTAA GCTCCTGATC TATGATGCCT CCAGTTTGGA AAGTGGGGTC  240

CCATCAAGGT TCAGCGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG  300

CAGCCTGAAG ATTTTGCAAC TTATTACTGT CAACAGTTTA ATAGTTACCG TACACTTTTG  360

GCCAGGGGAC CAAGCTGGAG ATCAAA                                       420

E1kappa轻链可变区#2的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：46)：

ATGGAAACCC CAGCGCAGCT TCTCTTCCTC CTGCTACTCT GGCTCCCAGA TACCACCGGA     60

GAAATTGTGT TGACGCAGTC TCCAGGCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA AAGAGCCACC    120

CTCTCCTGCA GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCAGCTACT TAACCTGGTA CCAGCAGAAA    180

CCTGGCCAGG CTCCCAGGCT CCTCATCTAT GGTGCATCCA GCAGGGCCAC TGGCATCCCA    240

GACAGGTTCA GTGGCAGTGG GTCTGGGACA GACTTCACTC TCACCATCAG CAGACTGGAG    300

CCTGAAGATT TTGCAGTGTA TTACTGTCAG CAGTATGGTA GCTCAATGTA CACTTTTGGC    360

CAGGGGACCA AGCTGGAGAT CAAA                                           420

E1kappa轻链可变区#3的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：103)：

ATGGAAACCC CAGCGCAGCT TCTCTTCCTC CTGCTACTCT GGCTCCCAGA TACCACCGGA    60

GAAATTGTGT TGACGCAGTC TCCAGGCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA AAGAGCCACC   120

CTCTCCTACA GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCAGCTACT TAGCCTGGTA CCAGCAGAAA   180

CCTGGCCAGG CTCCCAGGCT CCTCATCTAT GGTGCATCCA ACAGGGCCAC TGGCATCCCA   240

GACAGGTTCA GTGGCAGTGG GTCTGGGACA GACTTCACTC TCACCATCAG CAGACTGGAG   300

CCTGAAGATT TTGCAGTGTA TTACTGTCAG CAGTATGGTA GCTCACCGTG GACGTTCGGC   360

CAAGGGACCA AGGTGGAAAT CAAA                                          420

E13重链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：42)：

ATGGAGTTTG GGCTGAGCTG GATTTTCCTT GCTGCGATTT TAAAAGGTGT CCAGTGTGAG

60

GTGCAGCTGG TGGAGTCTGG GGGAGGCCTG GTAAAGCCTG GGGGGTCCCT TAGACTCTCC

120

TGTGCAGCCT CTGGATTCAC TCTCAGTAAC GCCTGGATGA GCTGGGTCCG CCAGGCTCCA

180

GGGAAGGGGC TGGAGTGGGT TGGCCGTATT AAAAGCAAAA TAGATGGTGG GACAACAGAC

240

TACGCTGCAC CCGTGAAAGG CAGATTCACC ATCTCAAGAG ATGATTCAAA AAACACGCTG

300

TTTCTGCAAA TGAACAGCCT GAAAACCGAG GACACAGCCG TGTATTACTG TACCACAGCA

360

ATGGCTGGTG CGTTTGGCTT TTGGGGCCAG GGAACCCTGG TCACCGTCTC CTCA         420

E13kappa轻链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：47)：

ATGGAAACCC CAGCGCAGCT TCTCTTCCTC CTGCTACTCT GGCTCCCAGA TACCACCGGA   60

GAAATTGTGT TGACGCAGTC TCCAGGCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA AAGAGCCACC  120

CTCTCCTGCA GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCAGCTACT TAGCCTGGTA CCAGCAGAAA  180

CCTGGCCAGG CTCCCAGGCT CCTCATCTAT GGTGCATCCA GCAGGGCCAC TGGCATCCCA  240

GACAGGTTCA GTGGCAGTGG GTCTGGGACA GACTTCACTC TCACCATCAG CAGACTGGAG  300

CCTGAAGATT TTGCAGTGTA TTACTGTCAG CAGTATGGTA GCTCACCCAT GTACACTTTT  360

GGCCAGGGGA CCAAGCTGGA GATCAAACGA                                   420

F19重链可变区的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：44)：

ATGAAACACC TGTGGTTCTT CCTCCTCCTG GTGGCAGCTC CCAGATGGGT CCTGTCCCAG   60

GTGCAGCTAC AGCAGTGGGG CGCAGGACTG TTGAAGCCTT CGGAGACCCT GTCCCTCACC  120

TGCGCTGTCT ATGGTGGGTC CTTCAGTGGT TACAACTGGC ACTGGATCCG CCAGCCCCCA  180

GGGAAGGGGC TGGAGTGGAT TGGGGAAATC ACTCATAGTG GAAGCACCAA TTACAACCCG  240

TCCCTCAAGA GTCGAGTCAC CATATCAGTA GACACGTCCA AGAACCAGTT CTCCCTGAAG  300

CTGAGCTCTG TGACCGCCGC GGACACGGCT GTGTATTACT GTGTGCGAGA GATTGCAGTG  360

GCTGGTACGG GCTACTACGG TATGGACGTC TGGGGCCAAG GGACCACGGT CACCGTCTCC  420

TCA                                                                480

F19kappa轻链可变区#1的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：104)：

ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTAC TGCTCTGGGT CCCAGGTGCC   60

AGATGTGACA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT CTGCATCTGT AGGAGACAGA  120

GTCACCATCA CTTGCCGGGT GAGTCAGGGC ATTAGCAGTT ATTTAAATTG GTATCGGCAG  180

AAACCAGGGA AAGTTCCTAA GCTCCTGATC TATAGTGCAT CCAATTTGCA ATCTGGAGTC  240

CCATCTCGGT TCAGTGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACTAT CAGCAGCCTG  300

CAGCCTGAAG ATGTTGCAAC TTATTACGGT CAACGGACTT ACAATGCCCC TCCCACTTTC  360

GGCGGAGGGA CCAAGGTGGA GATCAAA                                      420

F19kappa轻链可变区#2的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：49)：

ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTTCTGC TGCTCTGGCT CCCAGGTGCC   60

AGATGTGCCA TCCAGTTGAC CCAGTCTCCA TCCTCCCTGT CTGCATCTGT AGGAGACAGA  120

GTCACCATCA CTTGCCGGGC AAGTCGGGGC ATTAACAGTG CTTTTGCCTG GTATCAGCAG  180

AAACCAGGGA AAGCTCCTAA GCTCCTGATC TATGATGCCT CCAGTTTGGA AAGTGGGGTC  240

CCATCAAGGT TCAGCGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCAGCCTG  300

CAGCCTGAAG ATTTTGCAAC TTATTACTGT CAACAGTTTA ATAGTTACCC TCTCACTTTC  360

GGCGGAGGGA CCAAGGTGGA GATCAAA                                      420

F19kappa链可变区#3的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：105)：

ATGGACATGA GGGTCCCCGC TCAGCTCCTG GGGCTCCTGC TGCTCTGGCT CCCAGGTGCC   60

AGATGTGTCA TCTGGATGAC CCAGTCTCCA TCCTTACTCT CTGCATCTAC AGGAGACAGA  120

GTCACCATCA GTTGTCGGAT GAGTCAGGGC ATTAGCAGTT ATTTAGCCTG GTATCAGCAA  180

AAACCAGGGA AAGCCCCTGA GCTCCTGATC TATGCTGCAT CCACTTTGCA AAGTGGGGTC  240

CCATCAAGGT TCAGTGGCAG TGGATCTGGG ACAGATTTCA CTCTCACCAT CAGCTGCCTG  300

CAGTCTGAAG ATTTTGCAAC TTATTACTGT CAACAGTATT ATAGTTTCCC GTACACTTTT  360

GGCCAGGGGA CCAAGCTGGA GATCAAA                                      420

F19kappa链可变区#4的cDNA的核苷酸序列(从起始密码子(ATG)至可变区末端)(SEQ ID NO：106)：

ATGGAAGCCC CAGCGCAGCT TCTCTTCCTC CTGCTACTCT GGCTCCCAGA TACCACCGGA   60

GAAATTGTGT TGACACAGTC TCCAGCCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA AAGAGCCACC  120

CTCTCCTGCA GGGCCAGTCA GGGTGTTAGC AGCTACTTAG CCTGGTACCA GCAGAAACCT  180

GGCCAGGCTC CCAGGCTCCT CATCTATGAT GCATCCAACA GGGCCACTGG CATCCCAGCC  240

AGGTTCAGTG GCAGTGGGCC TGGGACAGAC TTCACTCTCA CCATCAGCAG CCTAGAGCCT  300

GAAGATTTTG CAGTTTATTA CTGTCAGCAG CGTAGCAACT GGCATCCCGT TCGGCCAAGG  360

GACCAAGGTG GAGATTCAAA                                              420

E63重链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：3)：

Q VQLQESGPGL VKPSETLSLT CIVSGGSVSS GGYYWSWIRQ   60

PPGKGLEWIG YIYYSGSTNY NPSLKSRVTI SVDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCARWI  120

TMFRGVGFDP WGQGTLVTVS S                                            180

E63kappa轻链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ IDNO：8)：

E IVLTQSPDFQ SVTPKEKVTI TCRASQSIGS SLHWYQQKPD   60

QSPKLLIKYA SQSFSGVPSR FSGSGSGTDF TLTINSLEAE DAAAYYCHQS SSLPLTFGGG  120

TKVEIK                                                             180

F23重链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：5)：

QVQL QQWGAGLLKP SETLSLTCAV YGGSFSGYYW   60

NWIRQPPGKG LEWIGEINQY NPSLKSRVTI SVDTSKNQFS LKLSSVTAAD TAVYYCAREI  120

ATADKGYYGL DVWGQGTTVT VSS                                          180

F23kappa轻链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ IDNO：10)：

AIQLTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQG ISSALAWYQQ   60

KPGKAPKLLI YDASSLESGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL QPEDFATYYC QQFNSYPLTF  120

GGGTKVEIK                                                          180

E1重链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：1)：

VQLVESGGGL VQPGGSLRLS CAASGFTFSR FNMNWVRQAP   60

GKGLEWVSYI SSSSYTIYYA DSVKGRFTIS RDNAKNSLDL QMNSLRDEDT AVYYCARSIA  120

AAFDYWGQGA LVTVSS                                                  180

E1kappa轻链可变区#1(E1kappa(A))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：82)：

AIQLTQSP SSLSASVGDR VTITCRASQG ISSALAWYQQ   60

KPGKAPKLLI YDASSLESGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL QPEDFATYYC QQFNSYRTLL  120

ARGPSWRS                                                           180

E1kappa轻链可变区#2(E1kappa(B))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：6)：

VLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SSYLTWYQQK   60

PGQAPRLLIY GASSRATGIP DRFSGSGSGT DFTLTISRLE PEDFAVYYCQ QYGSSMYTFG  120

QGTKLEIK                                                           180

E1kappa轻链可变区#3(E1kappa(C))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：83)：

VLTQSPGT LSLSPGERAT LSYRASQSVS SSYLAWYQQK   60

PGQAPRLLIY GASNRATGIP DRFSGSGSGT DFTLTISRLE PEDFAVYYCQ QYGSSPWTFG  120

QGTKVEIK                                                           180

E13重链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：2)：

VQLVESGGGL VKPGGSLRLS CAASGFTLSN AWMSWVRQAP   60

GKGLEWVGRI KSKIDGGTTD YAAPVKGRFT ISRDDSKNTL FLQMNSLKTE DTAVYYCTTA  120

MAGAFGFWGQ GTLVTVSS                                                180

E13kappa轻链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ IDNO：7)：

EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SSYLAWYQQK   60

PGQAPRLLIY GASSRATGIP DRFSGSGSGT DFTLTISRLE PEDFAVYYCQ QYGSSPMYTF  120

GQGTKLEIKR                                                         180

F19重链可变区的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：4)：

MKHLWFFLLL VAAPRWVLSQ VQLQQWGAGL LKPSETLSLT CAVYGGSFSG YNWHWIRQPP   60

GKGLEWIGEI THSGSTNYNP SLKSRVTISV DTSKNQFSLK LSSVTAADTA VYYCVREIAV  120

AGTGYYGMDV WGQGTTVTVS S                                            180

F19kappa轻链可变区#1(F19kappa(A))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：90)：

DIQLTQSP SSLSASVGDR VTITCRVSQG ISSYLNWYRQ   60

KPGKVPKLLI YSASNLQSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL QPEDVATYYG QRTYNAPPTF  120

GGGTKVEIK                                                          180

F19kappa轻链可变区#2(F19kappa(B))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：9)：

AIQLTQSP SSLSASVGDR VTITCRASRG INSAFAWYQQ   60

KPGKAPKLLI YDASSLESGV PSRFSGSGSG TDFTLTISSL QPEDFATYYC QQFNSYPLTF  120

GGGTKVEIK                                                          180

F19kappa轻链可变区#3(F19kappa(C))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：91)：

VIWMTQSP SLLSASTGDR VTISCRMSQG ISSYLAWYQQ   60

KPGKAPELLI YAASTLQSGV PSRFSGSGSG TDFTLTISCL QSEDFATYYC QQYYSFPYTF  120

GQGTKLEIK                                                          180

F19kappa轻链可变区#4(F19kappa(D))的氨基酸序列(前导序列(粗体)和可变区)(SEQ ID NO：92)：

EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQGVS SYLAWYQQKP   60

GQAPRLLIYD ASNRATGIPA RFSGSGPGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWHPVRPR  120

DQGGDS                                                             180

表2：合成的DNA引物

SEQIDNO：	名称	5’至3’序列	长度
				55	RACEUPS5’	CTAATACGACTCACTATAGGGC	22-mer
56	IgG1p	TCTTGTCCACCTTGGTGTTGCTGGGCTTGTG	31-mer
				57	HK5	AGGCACACAACAGAGGCAGTTCCAGATTTC	30-mer
58	M13F	GTAAAACGACGGCCAGTG	18-mer
				59	M13R	CAGGAAACAGCTATGAC	17-mer
60	E63HF85	AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTC	41-mer
				61	E63HR38	GAGAGAGAGAGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCAGGGT	37-mer
62	E63LF84	AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGTCGCCATCACAACTCATTG	42-mer
				63	E63LR43	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATCTCCACCTTGGTCCCTCC	40-mer
64	HH-2	GCTGGAGGGCACGGTCACCACGCTG	25-mer
				65	HK-2	GTTGAAGCTCTTTGTGACGGGCGAGC	26-mer
66	F23HF86	AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGGACCTCCTGCACAAGAAC	41-mer
				67	F23HR55	AGAGAGAGAGGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCGT	34-mer
68	F23LF36	AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGACATGAGGGTCCCCGCTC	42-mer
				69	F23LR43	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATCTCCACCTTGGTCCCTCC	40-mer
70	E1HFSal1	AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGGAGTTGGGGCTGTGCTGG	41-mer

71	E1HRNhel	AGAGAGAGAGGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCAGGGC	37-mer
				72	F19HFSal1	AGAGAGAGAGGTCGACCACCATGAAACACCTGTGGTTCTTC	41-mer
73	F19HRNhel	AGAGAGAGAGGCTAGCTGAGGAGACGGTGACCGTGGT	37-mer
				74	E1KF2+3Bg1II	AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGAAACCCCAGCGCAGCTTC	42-mer
75	E1KR2BsiWI	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCCCTG	40-mer
				76	E1KR3BsiWI	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCCTTG	40-mer
77	F19KR1+2BsiWI	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATCTCCACCTTGGTCCCTCC	40-mer
				78	F19KR3BsiWI	AGAGAGAGAGCGTACGTTTGATCTCCAGCTTGGTCCCCTG	40-mer
79	F19KF1+2+3Bg1II	AGAGAGAGAGATCTCTCACCATGGACATGAGGGTCCCCGCTC	42-mer

KM mouse^TM描述于，例如，Fishwild等人，1996，Nat.Biotechnol.14：845-51；Lonberg等人，2005Nat.Biotechnol.9：1117-1125；Tomizuka等人，2000Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：722-7；Tomizuka 1997Nat Genet.16：133-43，上述文献内容分别在此全部引用作为参考。由于KM mouse^TM的性质(例如，在kappa转基因株生成时，超过一个kappa链基因被整合进入鼠基因组)，因此纯系杂交瘤便有可能表达超过一个kappa轻链cDNA。为确定是否发生这种情况，可对最少10个cDNA克隆进行测序。当分离出超过一个kappa轻链抗体cDNA时(例如，E1和F19)，生成若干个构建体，含有各种重链cDNA与每个kappa cDNA一起形成的对。用293FECTIN(Invitrogen，San Diego，CA)将这些表达构建体转染到293F细胞中。然后测试72小时培养上清液中的抗体活性，以(例如，通过Western印迹，ELISA或其它类似方法)鉴定免疫特异性结合hLIGHT的正确的重和轻链对。有关具有多kappa链的抗体(例如，E1和F19)的示范性鉴别方法请参见下文的实施例3。

由293F细胞制备重组人抗hLIGHT抗体：将293F细胞的悬浮培养物保存在Freestyle 293表达培养基中，并在37℃下8％CO₂增湿培养箱中进行约120rpm/min的振荡。对于重组抗体的瞬时表达，采用293-fectin(Invitrogen，Carlsbad，CA)，参照生产商的说明，以30μg编码重组IgG1型的E63或F23抗hLIGHT抗体的各种质粒转染3×10⁷293F细胞。使转染体悬浮于30ml的FREESTYLE 293表达培养基中在正常生长条件下生长5天。收集生长培养基，以300g的速度离心去除细胞，并以0.22μm过滤器过滤。通过hIgG ELISA测定该未纯化物质中存在的抗体浓度，并用于体外测定，以评估亚类转换的抗体的功能性质。

结果

在CFA/IFA中以可溶性重组FLAG标记的hLIGHT免疫KM mice^TM。一些小鼠生成了抗hLIGHT特异性抗体，其范围在通过ELISA和FACS分析染色的hLIGHT-EL4细胞所测得的人IgG hLIGHT特异性效价范围内。将来自最高应答小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，以制备生成人抗hLIGHT杂交瘤。通过抗hLIGHT ELISA初级筛选测定单个杂交瘤生产的抗hLIGHT抗体。在筛选中，将抗FLAG抗体包被在平板上，以捕获FLAG标记的重组hLIGHT，并成功地掩蔽FLAG表位以防止分离抗FLAG抗体的杂交瘤。以来自ELISA阳性克隆的培养基通过流式细胞术染色hLIGHT-EL4细胞系进行二级筛选，以确认免疫特异性结合天然形式hLIGHT的抗体的鉴定。

通过对杂交瘤所制备的抗体阻断HVEM:Fc和LTβR:Fc结合hLIGHT-EL4细胞的能力进行排序，测试阳性杂交瘤的拮抗活性。这种阻断活性被校正为通过人IgG ELISA测定的抗体浓度。通过有限稀释克隆前15个候选物，获得单克隆杂交瘤，并将其余的冷冻。从该15种抗体的消减培养物(＜1mg)生成小规模纯化物，以根据如下标准进行进一步的鉴别和排序：对hLIGHT的相对结合亲和性、阻断人HVEM:Fc和LTβR:Fc结合hLIGHT-EL4细胞的能力、彼此交叉阻断的能力、以及阻断可溶性和细胞表面表达的hLIGHT介导的趋化因子从结肠上皮细胞系HT29.14s中分泌的能力。根据这些研究，前5种选定的候选物(E1、E13、E63、F23和F19)的属性列于表3中。

E1、E13、E63、F23和F19抗hLIGHT单克隆抗体分别特异性结合激活的人T细胞系(II23.D7)和稳定表达hLIGHT的细胞系hLIGHT-EL4，但不结合亲代EL4或静止的II23.D7细胞(图1A)。这些人抗hLIGHT抗体的结合达到了饱和(图1B)。通过滴定标记hLIGHT-EL4细胞所需的抗体量，确定各抗体的功能性稳态结合亲和性(图2A和2B)。进行非线性回归分析，以确定每种候选物的功能性结合亲和性或EC50(图3)。观察到一定范围的功能亲和性。在排序和选择过程中，在饱和时的低EC50和高水平染色(平均荧光强度(MFI))均被认为是理想的。

通过ELISA测试抗体是否彼此竞争结合可溶性hLIGHT(图4)。在该分析中鉴定了两种hLIGHT表位组。“E抗体”(E1、E13和E63)彼此交叉阻断，“F抗体”(F19和F23)彼此交叉阻断。然而，“E抗体”不能交叉阻断“F抗体”，反之亦然。如同预期，在该测定中所有的抗体阻断其自身。

通过流式细胞术测定获得了E1、E13、E63、F23和F19阻断人HVEM:Fc和LTβR:Fc融合蛋白结合细胞表面表达的hLIGHT的能力，分别显示于图5A和5B，以及图6A和6B。在这些实验中，将不同数量级的各种抗体添加至EL4-hLIGHT细胞系，然后添加亚饱和量的受体融合蛋白。通过抗His抗体(针对His标记的LTβR:Fc)或链霉亲和素-PE(针对生物素化的HVEM:Fc)检测受体融合蛋白。如显示的，每种抗体阻断任一受体融合蛋白结合hLIGHT，相反地，完全人源性抗流感M2抗体对照对任一Fc受体结合均无作用。在每一个实验中，所有的抗体均以剂量依赖方式阻断受体结合，从而允许通过非线性回归确定IC₅₀量(图3)。在对潜在候选物进行排序时考虑这些数值。

为了直接证明本发明的拮抗性抗体阻断hLIGHT介导的信号转导，建立了体外测定hLIGHT介导的信号转导的方法。针对该目的，以不同数量等级的可溶性hLIGHT处理同时表达LTβR和HVEM的结肠上皮细胞系HT29.14s，在数天的时间段内分析生长培养基中分泌的细胞因子的存在。使用标准ELISA和悬浮液阵列多重分析(suspension array multiplex analysis)测得hLIGHT以剂量依赖方式诱导CCL20、IL-8和RANTES(图7以及图8A和8B)。图7显示了在第3天采集的可溶性hLIGHT的剂量滴定。重组TNF被用作以TNF受体进行趋化因子诱导的阳性对照，而淋巴毒素(LTα₁β₂)被用作通过LTβR进行信号转导的阳性对照。FLAG标记的细菌碱性磷酸酶(FLAG-BAP)被用作标记的不相关蛋白阴性对照。如同预期，通过将细胞与hLIGHT接触，所生成的趋化因子的水平相当于LTαβ诱导的水平，而THF可更有效诱导CCL20和IL-8，但诱导RANTES的水平类似。该细胞应答测定可用于检测hLIGHT信号转导，并评估本发明的抗体在体外阻断hLIGHT介导的信号转导事件的能力。

在hLIGHT介导的HT29.14s CCL20诱导测定中，将不同数量级的抗hLIGHT抗体与恒定量的重组可溶性hLIGHT进行预孵育，然后添加至HT29.14s细胞(图9)。在处理后第3或4天测定趋化因子水平，并与单独可溶性hLIGHT诱导的水平、或与作为同型对照的用不相关的完全人源性抗流感M2蛋白预孵育的可溶性hLIGHT诱导的水平进行比较。在这些测定中，测试出本发明的抗体以剂量依赖方式阻断可溶性hLIGHT介导的CCL20诱导。在一些情况下，可通过非线性回归分析生成IC50值。

不希望受限于任何特定的机制或理论，认为细胞表面的hLIGHT与其它细胞上的同源受体结合所启动的信号转导对于通过HVEM相互作用显示的T细胞共刺激(co-stimulatory)活性、或者对于通过来自于肠、脾或淋巴结的间质或上皮细胞上表达的LTβR提高的趋化因子生成相当重要。相比通过可溶性因子，肠中CCL20的诱导似乎更受到与上皮细胞接触的细胞上LTβR配体表达的调节(Rumbo等人，2004Gastroenterology 127213-23)。因此，发展出细胞表面hLIGHT信号转导测定，以评估本发明抗体阻断细胞表面hLIGHT的能力。在该测定中，以可溶性hLIGHT测定中类似的方式，通过将福尔马林固定的hLIGHT-EL4细胞与HT29.14s细胞一起孵育，诱导趋化因子。这些细胞诱导的CCL20和RANTES与可溶性hLIGHT诱导的水平相当。当将不同数量级的抗hLIGHT抗体与固定的hLIGHT-EL4细胞预孵育时，RANTES的诱导被阻断至不添加hLIGHT表达细胞时的水平(图10)。在相同的实验中，CCL20被类似地抑制。综上，这些数据显示本发明的抗体可在体外同时阻断可溶性和膜结合的hLIGHT信号转导。

实施例2市售小鼠抗人单克隆抗体的鉴别

抗体交叉阻断。如实施例1所述进行交叉阻断试验，并采用来自R&DSystems(“R&D小鼠mAb”)和Abnova(“Abnova小鼠mAb”)的小鼠抗hLIGHT单克隆抗体以及在实施例1中鉴定的人抗hLIGHT单克隆抗体，以评估抗体结合的hLIGHT表位。结果显示于图11。

结果显示，R&D小鼠mAb可与人E1、E13和E63单克隆抗体(“人E抗体”)结合相同表位，并可与人F19和F23单克隆抗体(“人F抗体”)结合相同表位。因此，与仅免疫特异性结合两种不同表位之一的实施例1所鉴定的人抗hLIGHT E&F单克隆抗体不同，该R&D小鼠mAb同时结合两种hLIGHT表位组。即，在实施例1中鉴定的人E抗体和人F抗体彼此不交叉阻断。人E抗体交叉阻断其它人E抗体，而人F抗体交叉阻断其它人F抗体；然而人E抗体和人F抗体均能交叉阻断R&D小鼠mAb。类似地，R&D小鼠mAb交叉阻断人E抗体和人F抗体。

结果还显示Abnova小鼠mAb不结合被人E抗体和人F抗体所结合的任一表位。即，Abnova小鼠mAb不被E1、E13、E63、F19或F23抗体任一个所交叉阻断，Abnova小鼠mAb也不能交叉阻断人E1、E13、E63、F19或F23抗体中的任何一个。

抗体对HVEMrFc与293hLIGHT细胞结合的阻断活性。测试了E1、E13和F19人抗hLIGHT单克隆抗体、R&D mAb、市售的山羊抗hLIGHT多克隆抗体(R&D Systems)、以及兔抗hLIGHT多克隆抗体(eBioscience)阻断HVEM:Fc和实施例1所述的表达hLIGHT的293细胞结合的能力。结果显示于图12和图14B。根据FACS分析测定，所有四种单克隆抗体都能够以剂量依赖方式抑制结合。R&D多克隆抗体能够抑制HVEM:Fc的结合，而eBioscience兔多克隆抗体则不能。

抗体对LTβR:Fc与293hLIGHT细胞结合的阻断活性。测试了E1和E13人抗hLIGHT单克隆抗体、R&D mAb、市售的山羊抗hLIGHT多克隆抗体(R&D Systems)、以及兔抗hLIGHT多克隆抗体(eBioscience)阻断LTβR:Fc和实施例1所述的表达hLIGHT的293细胞结合的能力。结果显示于图13和图14B。根据FACS分析测定，所有四种单克隆抗体都能够以剂量依赖方式抑制结合。R&D多克隆抗体能够抑制LTβR:Fc的结合，而eBioscience兔多克隆抗体则不能。

与天然和变性的hLIGHT的结合。将5微克的可溶性人LIGHT与2×SDS样本缓冲液煮沸(变性)，另一份不加处理(天然)，然后同时以6×增量系列稀释。用8道移液器将5μl的各种hLIGHT稀释液同时点在水合0.2μm PVDF膜(Invitrogen，Carlsbad，CA)上。将印迹空气干燥，然后再度水合，封闭(1×TBST(Tris-缓冲盐Tween-20)+2.5％脱脂牛奶+0.02％叠氮化钠)。每个印迹以5μg/ml的每种一级抗体进行检测(见下文)。将印迹在1×TBST中洗涤三次，然后以5μg/ml生物素化的二级抗体(生物素-山羊α人(VectorLabs，Burlingame，CA)、生物素-山羊α小鼠(Jackson labs，Bar Harbor，ME)、生物素-小鼠α山羊(Sigma-Aldrich corp.，St.Louis，MO))进行孵育。将印迹在1×TBST中洗涤三次，然后以超SA-HRP(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)洗涤。使用ECL检测试剂盒(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)进行化学发光检测，并通过对X-OMAT AR成像膜(Kodak，Rochester，New York)的暴露将信号可视化。

所测试的一级抗体为E1、E13、E63、F19、F23人抗hLIGHT单克隆抗体(见实施例1)、从R&D Systems(“R&D小鼠mAb”)和Abnova(“Abnova小鼠mAb”)购得的鼠抗单克隆抗体、山羊抗hLIGHT多克隆抗体制备物(R&D Systems“R&D山羊pAb”)和两种兔抗hHIGHT多克隆抗体制备物(eBioscience(“eBioscience兔pAb”)和Peprotech(“Peprotech兔pAb”))。

结果显示于图15和图16。实验中测试的本发明的人抗hLIGHT单克隆“E抗体”(E1、E13和E63)同时免疫特异性结合可溶性hLIGHT的天然形式和变性形式(图15A和图16)。与免疫特异性结合变性的hLIGHT的浓度相比(最低检测限为139ng变性hLIGHT)，抗体E63免疫特异性结合的天然hLIGHT的浓度较低(最低检测限为3.9ng天然hLIGHT)。与免疫特异性结合变性的hLIGHT的浓度相比(最低检测限为139ng变性hLIGHT)，抗体E1免疫特异性结合的天然hLIGHT的浓度较低(最低检测限为23ng天然hLIGHT)。抗体E13同时以最低检测限0.64ng免疫特异性结合hLIGHT的天然和变性形式两种形式。

与人抗hLIGHT单克隆“E抗体”不同，在实验中测试的本发明的抗hLIGHT单克隆“F抗体”(F19和F23)免疫特异性结合可溶性hLIGHT的天然形式(天然hLIGHT的最低检测限为23ng)，但不结合hLIGHT的变性形式，即使在变性hLIGHT的最高浓度下(＞5000ng)也不结合(图15A和图16)。

在实验中测试的各种市售小鼠抗hLIGHT单克隆抗体(R&D小鼠mAb和Abnova小鼠mAb)同时免疫特异性结合可溶性hLIGHT的天然和变性形式。相比变性的hLIGHT(最低检测限为139ng变性hLIGHT)，R&D小鼠mAb免疫特异性结合的天然hLIGHT的浓度较低(最低检测限为23ng天然hLIGHT)。Abnova小鼠mAb同时免疫特异性结合大约等浓度的可溶性hLIGHT的天然和变性形式(天然或变性hLIGHT的最低检测限分别为0.64ng)。

三种市售抗hLIGHT多克隆抗体制备物(R&D山羊pAb，eBioscience兔pAb，以及Peprotech兔pAb)分别同时结合可溶性hLIGHT的天然和变性形式。相比变性的hLIGHT(最低检测限为0.13ng变性hLIGHT)，R&D山羊pAb免疫特异性结合略低浓度的天然hLIGHT(最低检测限为0.04ng天然hLIGHT)。相比变性的hLIGHT(最低检测限为1.2ng变性hLIGHT)，eBioscience兔pAb也免疫特异性结合略低浓度的天然hLIGHT(最低检测限为0.4ng天然hLIGHT)。类似地，相比变性的hLIGHT(最低检测限为0.13ng变性hLIGHT)，Peprotech兔pAb也免疫特异性结合略低浓度的天然hLIGHT(最低检测限为0.04ng天然hLIGHT)。

表达hLIGHT受体的细胞的生物活性的抑制。同样参照实施例1的描述进行实验，以确定市售小鼠抗hLIGHT单克隆抗体是否能够竞争性阻断可溶性hLIGHT与HT29.14s细胞上的细胞表面表达的LTβR和HVEM的结合。结果呈现于图17(CCL20)和图18(RANTES)，显示R&D小鼠mAb和Abnova小鼠mAb均不能抑制这些细胞生产LIGHT介导的CCL20或PANTES趋化因子，而人E13和人F23单克隆抗体能够将趋化因子分泌降低至背景水平。

实施例3F19和E1人抗hLIGHT抗体的KAPPA链的表征

采用实施例1所讨论的步骤寻找由E1和F19杂交瘤所制备抗体的优选kappa链-重链对。实验结果显示E1 kappa(B)(SEQ NO：6)是由E1杂交瘤生产的hLIGHT抗体的优选kappa轻链，而F19kappa(B)(SEQ NO：9)是由F19杂交瘤生产的hLIGHT抗体的优选kappa轻链。

通过对哺乳动物表达载体进行瞬时转染(所述载体包含重链基因，该重链基因与各个存在于亲代杂交瘤细胞中的单独kappa链基因配对)，可生成重组单kappa链抗体。然后将该物质与相应亲代杂交瘤生成的纯化抗体进行平行试验。

参照实施例1所述，进行抗体结合测定。用包含了E1kappa(B)或F19kappa(B)的kappa链-重链对，对hLIGHT稳定转染的细胞系(HEK293-hLIGHT)进行特异性染色，达到相当于各自亲代杂交瘤所制备抗体的程度(图19)。

如实施例1所示进行交叉阻断ELISA实验，结果显示这些重组抗体与其亲代杂交瘤Ab识别hLIGHT上的相同表位(图20)。

按照实施例1所示，进一步测试所述单kappa链重组抗体，以测试其阻断细胞表面表达的hLIGHT与人HVEM和LTβR的可溶性受体Fc融合形式相结合的能力(图21)，阻断水平与亲代抗体不同。

最后，如实施例1和2所述，测试所述重组单kappa抗体抑制LIGHT介导的HT29结肠上皮细胞分泌CCL20的能力(图22和图23)。在这些实验中，可溶性hLIGHT与抗hLIGHT抗体的孵育阻断了hLIGHT介导的HT29.14s细胞(类似于亲代杂交瘤细胞)分泌CCL20。

此外，在天然LIGHT相对变性LIGHT的斑点印迹评估中，所述单kappa链重组体还保持了亲代杂交瘤所制备抗体的特异性(数据未显示)。

综上，这些结果显示了E1kappa(B)(SEQ ID NO：6)是与E1重链(SEQID NO：1)联用的优选kappa轻链，而F19kappa(B)(SEQ ID NO：9)是与F19重链(SEQ ID NO：4)联用的优选kappa轻链。

实施例4抗体结合和抗体介导的HVEM:FC和LTβR:FC与LIGHT的单核苷酸多态性(SNP)变体的结合的阻断

人LIGHT存在至少两种非同义单核苷酸多态性变体(SNP)(图24)。一个SNP变体在氨基酸位置214编码谷氨酸(E)或赖氨酸(K)，另一个SNP变体在氨基酸位置32编码丝氨酸(S)或亮氨酸(L)。如图24A-24B所示，各个SNP变体在各种种族人群间的等位基因频率不尽相同。因此，结合给定SNP变体的hLIGHT抗体可在给定SNP变体更高发生率的种族人群中更有效地治疗或预防hLIGHT介导的疾病或其症状。

在本实施例中，显示本发明提供的hLIGHT抗体可结合存在于hLIGHT胞外区和细胞质区的非同义hLIGHT SNP变体。这些抗体与SNP变体的结合还与该抗体有效阻断HVEM:Fc和LTβR:Fc与hLIGHT SNP变体结合的能力相关，并有效阻断了表达hLIGHT受体的细胞的生物活性。

抗体结合。如实施例1所述进行F23和E1kappa(B)抗体的剂量滴定，以确定这些抗体是否结合细胞表面表达的hLIGHT SNP变体。在这些实验中采用了EL4细胞系，该细胞系主要参照实施例1的描述制备并稳定表面表达相应hLIGHT SNP变体。分别如图25A和25C所示，F23和E1kappa(B)抗体各自同时结合214E-32S SNP变体和214E-32L SNP变体。然而，如图25B所示，仅F23能够识别214K-32S SNP变体，而E1kappa(B)抗体则不能。

另外测试了F23(IgG1)、F19、E63和E1kappa(B)抗体，以确定“F抗体”和“E抗体”识别SNP变体任一形式的能力的差别。如图26A和26B所示，F23和F19抗体同时结合hLIGHT的214E和214K SNP形式。然而，E63和E1kappa(B)抗体仅结合LIGHT的主要形式214E，而不结合214K(图26A和26B)。

抗体对HVEM:Fc和LTβR:Fc与LIGHT SNP变体214K-32S结合的 阻断活性。由于F23抗体同时结合LIGHT变体的主要形式(214E)和非主要形式(214K)，进一步确定F23抗体能否阻断HVEM:Fc或LTβR:Fc的结合。如实施例1所述，进行抗体介导的受体融合蛋白的阻断。简单而言，将细胞系EL4-214K-32S与数量增加的抗LIGHT抗体进行孵育，然后添加HVEM:Fc或LTβR:Fc。参照实施例1，检测HVEM:Fc或LTβR:Fc，以评估预孵育对受体结合的作用。如图25D所示，F23抗体同时有效地阻断了HVEM:Fc和LTβR:Fc与LIGHT 214K-32S变体的结合。

对细胞表面LIGHT SNP变体介导的细胞表达LIGHT受体的生物活性 的抑制。进行该研究，以确定之前显示同时结合214K hLIGHT SNP变体和214E hLIGHT SNP变体的人抗hLIGHT单克隆抗体是否能够通过细胞表面表达的hLIGHT 214E hLIGHT SNP变体或214K hLIGHT SNP变体或其可溶性hLIGHT SNP变体有效阻断同时表达LTβR和HVEM的人结肠上皮细胞HT29.14s分泌RANTES。在细胞表面表达的LIGHT介导的HT29.14sRANTES诱导测定中，将不同数量级的抗hLIGHT抗体与恒定量的表达hLIGHT SNP变体(214K或214E)的细胞进行预孵育。在处理后第3天测定趋化因子水平，并与单独的可溶性hLIGHT诱导的水平、单独的表达hLIGHT的细胞、或者与作为同型对照蛋白的无关全人IgG预孵育的细胞的诱导水平进行比较。

在这些测定中，本发明提供的抗体(F19和F23)以剂量依赖方式阻断可溶性hLIGHT和两种细胞表面表达的hLIGHT SNP变体(214E或214K)介导的RANTES诱导。无论是不是SNP变体，可从R&D systems获得的市售小鼠抗hLIGHT单克隆抗体(R&D小鼠mAb，如实施里1)不能阻断可溶性或细胞表面表达的hLIGHT介导的趋化因子分泌。细胞表面表达的hLIGHT变体和可溶性hLIGHT重组阳性对照均诱导水平相当的RANTES，而阴性对照同型hIgG与细胞表面表达的hLIGHT变体或可溶性重组hLIGHT的预孵育，均不能明显减少RANTES水平。

讨论。在hLIGHT基因组位点(genomic locus)的三十个以上的单核苷酸多态性(SNP)中，至少两种非同义hLIGHT显示了与其相关的频率数据(frequency data)(图24)。一种编码hLIGHT氨基酸位置214处的谷氨酸(～0.9)或赖氨酸(0.1)，并位于hLIGHT的胞外区。另一种编码hLIGHT氨基酸残基32处丝氨酸(0.99)或亮氨酸(0.011)，并位于hLIGHT的细胞质区。hLIGHT基因组位点位于染色体区ch19p13.3内，其包含炎症性肠病的易感性位点(Rioux等人，(2000)Am J Hum Genet.66：1863-70)，从而提示SNP可能与IBD疾病频率相关。因此，人们有兴趣确定本发明提供的拮抗性抗hLIGHT抗体是否能够识别hLIGHT的非同义SNP变体。

在本实施例中，我们测试了所述抗hLIGHT抗体结合EL4细胞系表面稳定表达的hLIGHT SNP变体的能力。如图25A和25B所示，F23同时结合SNP变体214E和214K，而E1kappa(B)仅结合主要形式214E。F23同样地阻断HVEM:Fc或LTβRrFc与这些细胞的结合(图25D)。如同预期，细胞质SNP不影响任意抗体的结合(图25C)。当测试“E抗体”和“F抗体”时，仅F抗体能够同时结合214K和214E SNP变体(图26A和26B)。可商业购得的R&D小鼠mAb抗体也能够结合两种SNP变体(数据未显示)。

除了所述抗hLIGHT抗体对可溶形式的受体与LIGHT SNP变体的体外阻断，细胞表面hLIGHT SNP介导的趋化因子诱导也被本发明的抗hLIGHT抗体所抑制。在该测定中，表达214E或214K hLIGHT SNP变体的EL4细胞系被福尔马林固定，并用于处理HT29结肠上皮细胞系。如图27所示，这些细胞系本身与1μg可溶性LIGHT相比，诱导类似水平的RANTES。通过将hLIGHT表达细胞系与不同数量级的抗体预孵育，并与同型对照或市售R&D小鼠mAb比较，以测试抗hLIGHT“F抗体”。F23和F19kappa(B)均抑制由任意SNP变体表达细胞系介导的RANTES分泌。然而，R&D小鼠mAb和人同型阴性对照不抑制由任意LIGHT SNP变体介导的RANTES分泌。尽管R&D小鼠mAb能够结合两种SNP变体。这些结果不仅证实了本发明的F23和F19kappa(B)抗体可通过LIGHT SNP变体阻断任一信号转导，还显示了相对市售R&D小鼠mAb的优越性。

实施例5124F23在急性异种移植物抗宿主病模型中的体内效力研究

在本实施例中，在鼠急性异种移植物抗宿主病模型(GVHD)中评估了本发明提供的抗hLIGHT抗体的体内效力。显示F23抗体在该模型中减少了肉眼病理损伤(腹泻、腹腔炎症和腹水、以及肠道炎症)和组织病理损伤(炎症严重性、炎症程度、绒毛损伤/萎缩、和牵连度)，并减少脾脏中T细胞的数量。

人PBMC从全血的纯化：在Scripps Green Hospital(La Jolla，CA)的常规献血项目中从18至50岁健康献血者采集全血，并添加肝素以防止凝血。未指定民族、种族或性别。将血液在PBS中稀释，然后以FICOLL-PLAQUEPlus(Amersham Biosciences)衬垫。通过1800RPM无制动离心从血清和血小板中分离单核细胞。然后收集含有PBMC的界面，并以PBS洗涤两次。

急性移植物抗宿主病体内模型：急性异种移植物抗宿主病模型被用于测试F23(124F23G1)人抗人LIGHT抗体在体内的治疗潜力(Watanabe等人，20061006.Clin Immunol.120247-59)，其主要如图28所概述。简单而言，在第-2天以20μg大鼠抗小鼠IL2受体-β(IL2Rβ)链抗体注射5-10周大的患有严重联合免疫缺陷(SCID)的雄性小鼠(TMβl，Tanaka等人，1993J Exp Med.1781103)以消耗内源性鼠自然杀伤细胞。次日(第-1天)，以铯源对该小鼠施用2.5Gy的半致死量辐射，以允许人源细胞迁移至肠道。次日(第0天)，向小鼠腹膜内注射含于PBS的100万总人外周血单核细胞，然后立即以100μg/100μl PBS的剂量静脉注射人抗人LIGHT(124F23G1)或阴性对照hIgG1(抗二硝基酚(抗-DNP)，Kirin Brewery Co.Ltd.)抗体。人T细胞扩增，并诱导了移植物抗宿主样疾病及其症状，导致了例如体重减轻、血尿、腹水、肝脏和肠道中的炎性细胞浸润、并最终死亡。该疾病主要由人T细胞介导，因为仅T细胞的转移变诱导类似的症状。每3-4天检测体重，小鼠每周接受抗IL2Rβ抗体。在第12天处死小鼠以分析肉眼病理损伤和疾病症状，采集脾脏进行流式细胞计数分析，采集盲肠进行组织学分析，并采集血清进行人细胞因子和抗体分析(Watanabe等人，1006.ClinImmunol.120247-59)。

人抗人LIGHT单克隆抗体的体内功能分析。在第12天观察到的肉眼病理损伤按照如下评分：腹泻(0或1)，肠道和腹腔出血、以及腹膜炎(分别以0、1、2或3表示无、轻度、中度或重度)。所有疾病症状的总和被用于测定总的肉眼病理损伤的分值。如图29所示，仅接受对照抗体或PBMC(无抗体注射)的小鼠均显示了GVHD症状，病理损伤分值高于接受了124F23G1抗LIGHT抗体的小鼠。

对盲肠的H&E切片进行了组织病理学分析，并评分如下：炎症严重性、炎症程度、绒毛损伤/萎缩和牵连度(分别以0、1、2或3表示无、轻度、中度或重度)。最终的分值为各个类别的总和，每只小鼠的最大分值为12。如图30所示，仅接受对照抗体或PBMC(无抗体注射)的小鼠具有类似的组织病理损伤，而注射了124F23G1的小鼠没有疾病的组织学征象。在抗LIGHT处理的动物中观察到的盲肠组织学范例显示于图31A，其显示了均一的绒毛结构、粘膜下层和肌肉层，以及较少的腹水或出血。相反，由对照抗体处理的动物的盲肠组织学具有疾病的主要特征，包括粘膜下充有腹水、通过红血球簇显示的肠出血症状、以及明显的淋巴细胞浸润(图31B)。

对脾脏的分析与肉眼病理损伤和组织病理损伤一致。人T细胞出现在对照抗体处理的小鼠的脾脏中，但人T细胞在124F23G1处理的动物中的数量明显低于T细胞在对照动物中的数量(图32)。

在随后的研究中，T细胞消耗(IgG1)和/或非消耗(IgG4PE)形式的抗hLIGHT抗体可用于评估疾病缓解，例如T细胞是否被抗体阻断，还是经历了凋亡。

讨论：急性移植物抗宿主病(GVHD)是伴随异种造血干细胞移植的主要并发症。GVHD通常定义为供体T细胞对宿主组织的广泛攻击。目前用于防止移植后GVHD的方法是全身性免疫抑制，然而这可能导致条件致病菌感染和白血病的复发。因此，T细胞共刺激信号的阻断是更具前景的免疫抑制剂的替代方案之一。最近的报告显示T细胞的LIGHT-HVEM共刺激在GVHD中具有关键的致病作用(Xu等人，(2007)109：4097-4104)。因此，拮抗性抗LIGHT抗体可能对GVHD具有治疗效力。在急性异种GVHD模型中显示的体内效力证实了这种潜力。

在急性异种GVHD模型中，人PBMC被注射至消耗了NK细胞的半致死量辐射的SCID小鼠(图28)。在该模型中，辐射引起了肠损伤而T细胞介导了该疾病的肠部炎症。动物在PBMC注射后约12天内显示了严重的疾病症状。疾病特征包括表现在出血、腹水及绒毛萎缩的肠道炎症。在初始研究中，以100微克抗LIGHT抗体(124F23G1)处理的小鼠减轻在肠中观察到的肉眼病理损伤(图29)。同样地，肉眼病理损伤的减轻得到了盲肠组织病理学的更为精确分析的验证，发现抗LIGHT抗体处理导致没有可测得的疾病(图30)。图31A显示来自抗LIGHT抗体处理的动物盲肠的相应H&E染色切片。相反地，对照抗体处理的动物的盲肠显示肠中有严重的炎症特征，包括显示出血的细胞红色斑块、粘膜下明显的腹水，以及淋巴细胞浸润(图31B)。在该模型中，转移的人T细胞是疾病的主要诱因，而脾T细胞数与疾病严重性具有一定相关性。抗LIGHT抗体处理明显减少了脾脏中的总人T细胞数(图32)。因此，综上所述，这些数据表明抗LIGHT抗体在该模型中显示了体内效力，相对阴性对照明显减少了疾病症状。

实施例6人LIGHT/抗人LIGHT抗体(F23)相互作用的X射线结晶分析

F23G1抗体(或其Fab片段)被用于评估天然三聚hLIGHT的优先识别的性质。结构分析可对抗hLIGHT抗体和hLIGHT分子间的特定接触氨基酸残基进行鉴定，从而进一步明确被该抗体识别的构型表位。通过标准的沉滴蒸气扩散(sitting drop vapor diffusion)法进行LIGHT-抗-LIGHT Fab复合物的结晶(例如，参见McRee 1993：Practical Protein Crystallography(AcademicPress，San Diego，CA)第1-23页；Rhodes 1993：Crystallography Made CrystalClear(Academic Press，San Diego，CA)第8-10、29-38页。采用SYNCHROTRON分析结晶，并以CCP4软件套装(Science&TechnologyFacilities Council，Computational Science and Engineering Department)分析数据，该软件套装为涵盖了大部分的大分子结晶计算所需的不同程序的组合。如本领域技术人员所能理解，本发明提供的其它hLIGHT抗体可被类似地用于测定hLIGHT表位结合和氨基酸接触残基。

实施例7124F23在结肠炎疾病模型中的体内效力研究

结肠炎的人T细胞转移模型。类似于Morrissey等人，(1993)J Exp Med.178237所描述的小鼠结肠炎CD4+/CD45Rbhi转移模型，以人幼稚T细胞(CD45RA+CD45RO-)注射RAG-/-小鼠。在该模型中，将与人供体的HLA类型匹配的HLA转基因株(C57BL/6NTac-[KO]Abb-[Tg]DR-4)回交至RAG-/-(B6.129S6-Rag2^tml FwaN12)背景，使得在小鼠受体APC和人供体T细胞之间出现抗原。该相互作用是T细胞识别人肠微生物群落所必须的，其被认为负责激活T细胞并向肠运送T细胞。动物经历了体重下降和消耗性疾病，以及未在RAG-/-小鼠中见到的肠道炎症。

在某些组中，人抗hLIGHT抗体(例如，F23)以每只动物100μg(或，例如，在2μg-500μg范围内)的剂量通过静脉注射与人供体T细胞同时施用。在某些组中，所述抗hLIGHT抗体在人供体T细胞施用前和/或后以不同的时间间隔进行施用。由于抗LIGHT抗体结合激活的T细胞上表达的LIGHT，疾病的症状可被预防和/或治疗。在后续的研究中，T细胞消耗(IgG1)型和/或非消耗型(IgG4PE)的抗hLIGHT抗体可被用于评估疾病减缓的机制。例如，IgG4抗LIGHT抗体能够阻断T细胞共刺激和存活。

实施例8人LIGHT敲入小鼠中的人疾病的IBD模型

如本文别处讨论的，LIGHT已被认为与IBD疾病病理损伤相关联(例如，参见Wang等人，2005J.Immunol.174：8173-82；Wang等人，2004J.Clin.Invest.113：826-35；Cohavy等人，2005J.Immunol.174：646-53)。在本实施例中，构建了IBD的hLIGHT敲入小鼠模型，并将本发明的人抗hLIGHT单克隆抗体施用至该动物，以评估这些抗体在IBD治疗中的体内效力。由于这些抗体已被显示阻断hLIGHT受体结合、阻断hLIGHT的生物活性(例如，参见实施例1-4)，预期本发明的hLIGHT抗体同样在IBD治疗中有效。

LIGHT敲入生成。通过同源重组的标准基因打靶方法制备小鼠LIGHT基因被中断并靶向插入了人LIGHT基因的小鼠。简单而言，通过将基因靶向构建体电穿孔进入野生型ES细胞生成基因靶向的小鼠ES细胞。在ES细胞基因组和人LIGHT基因侧翼的靶向载体中的两个同源区之间的同源重组导致小鼠LIGHT基因被人LIGHT基因替换。然后将囊胚移植进入假孕雌性，导致嵌合型小鼠的生成。生育得到同源LIGHT敲入动物。

人疾病的IBD模型。hLIGHT敲入动物被用于建立IBD模型。一种建立IBD模型的方法包括随饮用水施用右旋糖硫酸钠(DSS)(参见，例如，Mahler等人，1998Am J Physiol.274G544-51)。简单而言，通过任意饮用含3.5％(w/v)DDS(分子量36,100-45,000；TbD Consultancy，Uppsala，Sweden)的酸化饮用水5天以诱导实验性结肠炎。然后终止DDS施用，单独给用酸化饮用水16天，直至在第21天对小鼠进行尸检。尽管也可使用其它剂量，但该剂量诱导中度至严重的结肠炎，同时尽量减少死亡率。然后收集大肠，并将盲肠和结肠分离。然后进行标准组织固定和H&E染色，以确定炎症和损伤的严重性。对小鼠的病理改变、组织病理改变、消耗性综合症和/或死亡进行评估。

第二种建立IBD模型的方法包括直肠施用三硝基苯磺酸(TNBS)(例如，参见Neurath，等人，1995J Exp Med.1821281-90)。简单而言，为了诱导结肠炎，以甲氧氟烷暂时麻醉小鼠，然后将3.5F导液管小心插入结肠，约距肛门4cm。为诱导结肠炎，将含于50％乙醇(以破碎肠道屏障)的半抗原试剂TNBS(Sigma，St.Louis，MO)通过连接在1ml注射器上的导液管插入结肠的内腔。在对照试验中，小鼠仅接受50％乙醇。在两个组中的总注射量均为100μl，这使得TNBS或乙醇到达整个结肠，包括盲肠和阑尾。然后将动物在竖直位置保持30秒，并放回笼子。或者小鼠结肠炎的CD4+/CD45Rbhi转移模型(例如，参见Morrissey，等人，1993J Exp Med.1821281-90)。抗LIGHT抗体可基本参照上文描述被用于(例如采用2-500μg/动物的剂量)治疗和预防创建的疾病。然后收集大肠，并将盲肠和结肠分离。在之后的不同时间点移除肠，通过标准组织固定和H&E染色确定炎症和损伤的严重性。对小鼠的病理改变、组织病理改变、消耗性综合症和/或死亡进行评估。

第三种建立的IBD模型是小鼠结肠炎的CD4+/CD45RBhi转移模型(例如，参见Morrissey，等人，1993J Exp Med.1821281-90)。简单而言，根据CD45RB的表达对纯化的CD4+淋巴结T细胞进行分类，并注射进入hLIGHT敲入小鼠。然后进行标准组织固定和H&E染色，以确定炎症和损伤的严重性。对小鼠的病理改变、组织病理改变、消耗性综合症和/或死亡进行评估。

抗LIGHT抗体(例如，2-500μg/动物的剂量)可用于任意IBD模型(例如上文所述的模型)，基本上参照上文描述评估其在IBD治疗和预防中的效力。由于这些抗体已被显示阻断hLIGHT受体结合、阻断hLIGHT生物活性(例如，参见实施例1-4)和治疗GVHD(实施例5)，预期本发明的hLIGHT抗体同样在IBD治疗中有效。

以上所述的本发明实施方案的目的仅在于进行示范，本领域的技术人员通过不超出常规的试验将可以识别或能够确定本发明所述具体内容的多种等效方案。所有这些等效方案都被认为在本发明的范围内且包含在附属的权利要求书中。此外，除非另行明确指明，本说明书和权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包含了复数形式。因此，例如，“一个抗体”包括了两个或多个抗体的组合或类似物。此外，本领域普通技术人员将能够认识到为了解释和主张的需要，操作程序必须以一些具体顺序加以阐述，但本发明包含了这样的具体顺序之外的多种变化。

本发明描述的所有参考文献的内容在此结合作为参考。

其它实施例被包括在下面的权利要求中。

序列表

<110>麒麟医药株式会社(东京，日本)

     拉霍拉敏感及免疫学研究所(拉霍拉，加利福尼亚州)

<120>拮抗型人LIGHT特异性人源性单克隆抗体

<130>7505-049-228

<140>

<141>

<150>60/840,774

<151>2006-08-28

<150>60/897,875

<151>2007-01-25

<160>106

<170>Windows 4.0版的FastSEQ

<210>1

<211>136

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1重链可变区

<400>1

Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly

1               5                   10                  15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe

        35                  40                  45

Ser Arg Phe Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Thr Ile Tyr Tyr Ala

65                  70                  75                  80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn

                85                  90                  95

Ser Leu Asp Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ile Ala Ala Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

        115                 120                 125

Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>2

<211>138

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13重链可变区

<400>2

Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Ile Phe Leu Ala Ala Ile Leu Lys Gly

1               5                   10                  15

Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

            20                  25                  30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu

        35                  40                  45

Ser Asn Ala Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Val Gly Arg Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr Asp

65                  70                  75                  80

Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

                85                  90                  95

Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr

            100                 105                 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Ala Met Ala Gly Ala Phe Gly Phe Trp

        115                 120                 125

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

    130                 135

<210>3

<211>141

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63重链可变区

<400>3

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp

1               5                   10                  15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys

            20                  25                  30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ile Val Ser Gly Gly Ser Val

        35                  40                  45

Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

                85                  90                  95

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

            100                 105                 110

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Ile Thr Met Phe Arg Gly Val Gly Phe

        115                 120                 125

Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>4

<211>141

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19重链可变区

<400>4

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trg

1               5                   10                  15

Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys

            20                  25                  30

Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe

        35                  40                  45

Ser Gly Tyr Asn Trp His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu

    50                  55                  60

Glu Trp Ile Gly Glu Ile Thr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro

65                  70                  75                  80

Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln

                85                  90                  95

Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr

            100                 105                 110

Tyr Cys Val Arg Glu Ile Ala Val Ala Gly Thr Gly Tyr Tyr Gly Met

        115                 120                 125

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>5

<211>143

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23重链可变区

<400>5

Met Asp Leu Leu His Lys Asn Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu

1               5                   10                  15

Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp Val Leu Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln

            20                  25                  30

Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys

        35                  40                  45

Ala Va1 Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg

    50                  55                  60

Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn Gln Tyr

65                  70                  75                  80

Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys

                85                  90                  95

Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala

            100                 105                 110

Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ile Ala Thr Ala Asp Lys Gly Tyr Tyr

        115                 120                 125

Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

    130                 135                 140

<210>6

<211>128

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#2(E1kappa(B))

<400>6

Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Val Ser Ser Ser Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65                  70                  75                  80

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

                85                  90                  95

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

            100                 105                 110

Gly Ser Ser Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>7

<211>130

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13kappa轻链可变区

<400>7

Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65                  70                  75                  80

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

                85                  90                  95

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

            100                 105                 110

Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

        115                 120                 125

Lys Arg

    130

<210>8

<211>126

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63kappa轻链可变区

<400>8

Met Ser Pro Ser Gln Leu Ile Gly Phe Leu Leu Leu Trp Val Pro Ala

1               5                   10                  15

Ser Arg Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val

            20                  25                  30

Thr Pro Lys Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile

        35                  40                  45

Gly Ser Ser Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro Lys

    50                  55                  60

Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser Gly Val Pro Ser Arg

65                  70                  75                  80

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser

                85                  90                  95

Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys His Gln Ser Ser Ser

            100                 105                 110

Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>9

<211>129

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#2

<400>9

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

        35                  40                  45

Arg Gly Ile Asn Ser Ala Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

            100                 105                 110

Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

        115                 120                 125

Lys

<210>10

<211>129

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23kappa轻链可变区

<400>10

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

        35                  40                  45

Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

            100                 105                 110

Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

        115                 120                 125

Lys

<210>11

<211>5

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1重链可变区的CDR1

<400>11

Arg Phe Asn Met Asn

1               5

<210>12

<211>17

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1重链可变区的CDR2

<400>12

Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1               5                   10                  15

Gly

<210>13

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1重链可变区的CDR3

<400>13

Ser Ile Ala Ala Phe Asp Tyr

1               5

<210>14

<211>5

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13重链可变区的CDR1

<400>14

Asn Ala Trp Met Ser

1               5

<210>15

<211>19

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13重链可变区的CDR2

<400>15

Arg Ile Lys Ser Lys Ile Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro

1               5                   10                  15

Val Lys Gly

<210>16

<211>8

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13重链可变区的CDR3

<400>16

Ala Met Ala Gly Ala Phe Gly Phe

1               5

<210>17

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63重链可变区的CDR1

<400>17

Ser Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser

1               5

<210>18

<211>16

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63重链可变区的CDR2

<400>18

Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1               5                   10                  15

<210>19

<211>12

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63重链可变区的CDR3

<400>19

Trp Ile Thr Met Phe Arg Gly Val Gly Phe Asp Pro

1               5                   10

<210>20

<211>5

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19重链可变区#2(F19kappa(B))的CDR1

<400>20

Gly Tyr Asn Trp His

1               5

<210>21

<211>16

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19重链可变区#2(F19kappa(B))的CDR2

<400>21

Glu Ile Thr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1               5                   10                  15

<210>22

<211>14

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19重链可变区#2(F19kappa(B))的CDR3

<400>22

Glu Ile Ala Val Ala Gly Thr Gly Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1               5                   10

<210>23

<211>5

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23重链可变区的CDR1

<400>23

Gly Tyr Tyr Trp Asn

1               5

<210>24

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23重链可变区的CDR2

<400>24

Glu Ile Asn Gln Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1               5                   10

<210>25

<211>14

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23重链可变区的CDR3

<400>25

Glu Ile Ala Ile Ala Asp Lys Gly Tyr Tyr Gly Leu Asp Val

1               5                   10

<210>26

<211>12

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#2(E1kappa(B))的CDR1

<400>26

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Thr

1               5                   10

<210>27

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#2(E1kappa(B))的CDR2

<400>27

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1               5

<210>28

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#2(E1kappa(B))的CDR3

<400>28

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Met Tyr Thr

1               5

<210>29

<211>12

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13轻链可变区的CDR1

<400>29

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1               5                   10

<210>30

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13轻链可变区的CDR2

<400>30

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1               5

<210>31

<211>10

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E13轻链可变区的CDR3

<400>31

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr

1               5                   10

<210>32

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63轻链可变区的CDR1

<400>32

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser Leu His

1               5                   10

<210>33

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63轻链可变区的CDR2

<400>33

Tyr Ala Ser Gln Ser Phe Ser

1               5

<210>34

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E63轻链可变区的CDR3

<400>34

His Gln Ser Ser Ser Leu Pro Leu Thr

1               5

<210>35

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#2(F19kappa(B))的CDR1

<400>35

Arg Ala Ser Arg Gly Ile Asn Ser Ala Phe Ala

1               5                   10

<210>36

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#2(F19kappa(B))的CDR2

<400>36

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1               5

<210>37

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#2(F19kappa(B))的CDR3

<400>37

Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr

1               5

<210>38

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23轻链可变区的CDR1

<400>38

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala

1               5                   10

<210>39

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23轻链可变区的CDR2

<400>39

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1               5

<210>40

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F23轻链可变区的CDR3

<400>40

Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu Thr

1               5

<210>41

<211>408

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E1重链可变区的cDNA

<400>41

atggagttgg ggctgtgctg ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcttg gtacagcctg gggggtccct gagactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac cttcagtaga tttaacatga actgggtccg ccaggctcca 180

gggaaggggc tggagtgggt ttcatacatt agtagtagta gttataccat atactacgca 240

gactctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc actggatctg 300

caaatgaaca gcctgagaga cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag gagtatagca 360

gcagcttttg actactgggg ccagggagcc ctggtcaccg tctcctca              408

<210>42

<211>414

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E13重链可变区的cDNA

<400>42

atggagtttg ggctgagctg gattttcctt gctgcgattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60

gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtaaagcctg gggggtccct tagactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac tctcagtaac gcctggatga gctgggtccg ccaggctcca 180

gggaaggggc tggagtgggt tggccgtatt aaaagcaaaa tagatggtgg gacaacagac 240

tacgctgcac ccgtgaaagg cagattcacc atctcaagag atgattcaaa aaacacgctg 300

tttctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacagccg tgtattactg taccacagca 360

atggctggtg cgtttggctt ttggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca       414

<210>43

<211>423

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E63重链可变区的cDNA

<400>43

atgaaacacc tgtggttctt cctcctcctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60

gtgcagctgc aggagtcggg cccaggactg gtgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120

tgcattgtct ctggtggctc cgtcagcagt ggtggttact actggagctg gatccggcag 180

cccccaggga agggactgga gtggattggg tatatctatt acagtgggag caccaactac 240

aacccctccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300

ctgaagctga gctctgtgac cgctgcggac acggccgtgt attactgtgc gagatggatt 360

actatgtttc ggggagttgg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 420

tca                                                               423

<210>44

<211>423

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F19重链可变区的cDNA

<400>44

atgaaacacc tgtggttctt cctcctcctg gtggcagctc ccagatgggt cctgtcccag 60

gtgcagctac agcagtgggg cgcaggactg ttgaagcctt cggagaccct gtccctcacc 120

tgcgctgtct atggtgggtc cttcagtggt tacaactggc actggatccg ccagccccca 180

gggaaggggc tggagtggat tggggaaatc actcatagtg gaagcaccaa ttacaacccg 240

tccctcaaga gtcgagtcac catatcagta gacacgtcca agaaccagtt ctccctgaag 300

ctgagctctg tgaccgccgc ggacacggct gtgtattact gtgtgcgaga gattgcagtg 360

gctggtacgg gctactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 420

tca                                                               423

<210>45

<211>429

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F23重链可变区的cDNA

<400>45

atggacctcc tgcacaagaa catgaaacac ctgtggttct tcctcctcct ggtggcagct 60

cccagatggg tcctgtccca ggtgcagcta cagcagtggg gcgcaggact gttgaagcct 120

tcggagaccc tgtccctcac ctgcgctgtc tatggtgggt ccttcagtgg ttactactgg 180

aactggatcc gccagccccc agggaagggg ctggagtgga ttggggaaat caatcagtac 240

aacccgtccc tcaagagtcg agtcaccata tcagtagaca cgtccaagaa ccagttctcc 300

ctgaagctga gctctgtgac cgccgcggac acggctgtgt attactgtgc gagagagata 360

gcaacagctg ataaagggta ctacggtttg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 420

gtctcctca                                                         429

<210>46

<211>384

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#2(E1kappa(B))的cDNA

<400>46

atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact taacctggta ccagcagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 240

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaatgta cacttttggc 360

caggggacca agctggagat caaa                                        384

<210>47

<211>390

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E13kappa轻链可变区的cDNA

<400>47

atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 240

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacccat gtacactttt 360

ggccagggga ccaagctgga gatcaaacga                                  390

<210>48

<211>378

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E63kappa轻链可变区的cDNA

<400>48

atgtcgccat cacaactcat tgggtttctg ctgctctggg ttccagcctc caggggtgaa 60

attgtgctga ctcagtctcc agactttcag tctgtgactc caaaggagaa agtcaccatc 120

acctgccggg ccagtcagag cattggtagt agcttacact ggtaccagca gaaaccagat 180

cagtctccaa agctcctcat caagtatgct tcccagtcct tctcaggggt cccctcgagg 240

ttcagtggca gtggatctgg gacagatttc accctcacca tcaatagcct ggaagctgaa 300

gatgctgcag catattactg tcatcagagt agtagtttac ctctcacttt cggcggaggg 360

accaaggtgg agatcaaa                                               378

<210>49

<211>387

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#2(F19kappa(B))的cDNA

<400>49

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggcttctgc tgctctggct cccaggtgcc 60

agatgtgcca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120

gtcaccatca cttgccgggc aagtcggggc attaacagtg cttttgcctg gtatcagcag 180

aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tatgatgcct ccagtttgga aagtggggtc 240

ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300

cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacagttta atagttaccc tctcactttc 360

ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaa                                     387

<210>50

<211>387

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F23kappa轻链可变区的cDNA

<400>50

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggcttctgc tgctctggct cccaggtgcc 60

agatgtgcca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120

gtcaccatca cttgccgggc aagtcagggc attagcagtg ctttagcctg gtatcagcag 180

aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tatgatgcct ccagtttgga aagtggggtc 240

ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300

cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacaattta atagttaccc gctcactttc 360

ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaa                                     387

<210>51

<211>723

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>hLIGHT的核苷酸序列

<400>51

atggaggaga gtgtcgtacg gccctcagtg tttgtggtgg atggacagac cgacatccca 60

ttcacgaggc tgggacgaag ccaccggaga cagtcgtgca gtgtggcccg ggtgggtctg 120

ggtctcttgc tgttgctgat gggggccggg ctggccgtcc aaggctggtt cctcctgcag 180

ctgcactggc gtctaggaga gatggtcacc cgcctgcctg acggacctgc aggctcctgg 240

gagcagctga tacaagagcg aaggtctcac gaggtcaacc cagcagcgca tctcacaggg 300

gccaactcca gcttgaccgg cagcgggggg ccgctgttat gggagactca gctgggcctg 360

gccttcctga ggggcctcag ctaccacgat ggggcccttg tggtcaccaa agctggctac 420

tactacatct actccaaggt gcagctgggc ggtgtgggct gcccgctggg cctggccagc 480

accatcaccc acggcctcta caagcgcaca ccccgctacc ccgaggagct ggagctgttg 540

gtcagccagc agtcaccctg cggacgggcc accagcagct cccgggtctg gtgggacagc 600

agcttcctgg gtggtgtggt acacctggag gctggggagg aggtggtcgt ccgtgtgctg 660

gatgaacgcc tggttcgact gcgtgatggt acccggtctt acttcggggc tttcatggtg 720

tga                                                               723

<210>52

<211>240

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>全长hLIGHT

<400>52

Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln

1               5                   10                  15

Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser

            20                  25                  30

Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly

        35                  40                  45

Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Tro Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg

    50                  55                  60

Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp

65                  70                  75                  80

Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala

                85                  90                  95

His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu

            100                 105                 110

Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr

        115                 120                 125

His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr

    130                 135                 140

Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser

145                 150                 155                 160

Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu

                165                 170                 175

Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser

            180                 185                 190

Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His

        195                 200                 205

Leu Glu Ala Gly Glu Glu Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu

    210                 215                 220

Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val

225                 230                 235                 240

<210>53

<211>630

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>可溶的FLAG-标记的hLIGHT(240aa)

<400>53

atgcctggga agatggtcgt gatccttgga gcctcaaata tactttggat aatgtttgca 60

gcttctcaag ctgactacaa ggacgacgat gacaagtacg taggagagat ggtcacccgc 120

ctgcctgacg gacctgcagg ctcctgggag cagctgatac aagagcgaag gtctcacgag 180

gtcaacccag cagcgcatct cacaggggcc aactccagct tgaccggcag cggggggccg 240

ctgttatggg agactcagct gggcctggcc ttcctgaggg gcctcagcta ccacgatggg 300

gcccttgtgg tcaccaaagc tggctactac tacatctact ccaaggtgca gctgggcggt 360

gtgggctgcc cgctgggcct ggccagcacc atcacccacg gcctctacaa gcgcacaccc 420

cgctaccccg aggagctgga gctgttggtc agccagcagt caccctgcgg acgggccacc 480

agcagctccc gggtctggtg ggacagcagc ttcctgggtg gtgtggtaca cctggaggct 540

ggggaggagg tggtcgtccg tgtgctggat gaacgcctgg ttcgactgcg tgatggtacc 600

cggtcttact tcggggcttt catggtgtga                                  630

<210>54

<211>183

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>可溶的FLAG-标记的hLIGHT(183aa)

<400>54

Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro

1               5                   10                  15

Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser

            20                  25                  30

His Glu Val Asn Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu

        35                  40                  45

Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala

    50                  55                  60

Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys

65                  70                  75                  80

Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly

                85                  90                  95

Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg

            100                 105                 110

Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser

        115                 120                 125

Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser

    130                 135                 140

Phe Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Glu Val Val Val

145                 150                 155                 160

Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser

                165                 170                 175

Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val

            180

<210>55

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物RACEUPS5′

<400>55

ctaatacgac tcactatagg gc                                                     22

<210>56

<211>31

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物IgG1p

<400>56

tcttgtccac cttggtgttg ctgggcttgt g                                           31

<210>57

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物HK5

<400>57

aggcacacaa cagaggcagt tccagatttc                                         30

<210>58

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物M13F

<400>58

gtaaaacgac ggccagtg                                                      18

<210>59

<211>17

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物M13R

<400>59

caggaaacag                                                          ctatgac

17

<210>60

<211>41

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E63HF85

<400>60

agagagagag gtcgaccacc atgaaacacc tgtggttctt c                         41

<210>61

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E63HR38

<400>61

gagagagaga gctagctgag gagacggtga ccagggt                               37

<210>62

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E63LF84

<400>62

agagagagag atctctcacc atgtcgccat cacaactcat tg                          42

<210>63

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E63LR43

<400>63

agagagagag cgtacgtttg atctccacct tggtccctcc                             40

<210>64

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物HH-2

<400>64

gctggagggc acggtcacca cgctg                                             25

<210>65

<211>26

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物HK-2

<400>65

gttgaagctc tttgtgacgg gcgagc                                               26

<210>66

<211>41

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F23HF86

<400>66

agagagagag gtcgaccacc atggacctcc tgcacaagaa c                              41

<210>67

<211>34

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F23HR55

<400>67

agagagagag gctagctgag gagacggtga ccgt                                 34

<210>68

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F23LF36

<400>68

agagagagag atctctcacc atggacatga gggtccccgc tc                        42

<210>69

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F23LR43

<400>69

agagagagag cgtacgtttg atctccacct tggtccctcc                           40

<210>70

<211>41

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E1HFSalI

<400>70

agagagagag gtcgaccacc atggagttgg ggctgtgctg g                        41

<210>71

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E1HRNheI

<400>71

agagagagag gctagctgag gagacggtga ccagggc                             37

<210>72

<211>41

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F19HFSalI

<400>72

agagagagag gtcgaccacc atgaaacacc tgtggttctt c                         41

<210>73

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F19HRNheI

<400>73

agagagagag gctagctgag gagacggtga ccgtggt                              37

<210>74

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E1KF2+3Bg1II

<400>74

agagagagag atctctcacc atggaaaccc cagcgcagct tc                        42

<210>75

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E1KR2BsiWI

<400>75

agagagagag cgtacgtttg atctccagct tggtcccctg                             40

<210>76

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物E1KR3BsiWI

<400>76

agagagagag cgtacgtttg atttccacct tggtcccttg                             40

<210>77

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F19KR1+2BsiWI

<400>77

agagagagag cgtacgtttg atctccacct tggtccctcc                             40

<210>78

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F19KR3BsiWI

<400>78

agagagagag cgtacgtttg atctccagct tggtcccctg                             40

<210>79

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>引物F19KF1+2+3Bg1II

<400>79

agagagagag atctctcacc atggacatga gggtccccgc tc                          42

<210>80

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>正向引物

<400>80

gtaggagaga tggtcacccg cct                                                23

<210>81

<211>37

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反向引物

<400>81

ggaacgcgaa ttcccacgtg tcagacccat gtccaat                                 37

<210>82

<211>128

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#1(E1kappa(A))

<400>82

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

        35                  40                  45

Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

            100                 105                 110

Phe Asn Ser Tyr Arg Thr Leu Leu Ala Arg Gly Pro Ser Trp Arg Ser

        115                 120                 125

<210>83

<211>128

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#3(E1kappa(C))的cDNA的氨基酸序列

<400>83

Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gln Ser

        35                  40                  45

Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

    50                  55                  60

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

65                  70                  75                  80

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

                85                  90                  95

Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

            100                 105                 110

Gly Ser Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

        115                 120                 125

<210>84

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#1(E1kappa(A))的CDR1

<400>84

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala

1               5                   10

<210>85

<211>12

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#3(E1kappa(C))的CDR1

<400>85

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1               5                   10

<210>86

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#1(E1kappa(A))的CDR2

<400>86

Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1               5

<210>87

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#3(E1kappa(C))的CDR2

<400>87

Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1               5

<210>88

<211>8

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#1(E1kappa(A))的CDR3

<400>88

Gln Gln PheAsn Ser Tyr Arg Thr

1              5

<210>89

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>E1轻链可变区#3(E1kappa(C))的CDR3

<400>89

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1               5

<210>90

<211>129

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#1(F19kappa(A))

<400>90

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Val Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Val Ser

        35                  40                  45

Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Gly Gln Arg

            100                 105                 110

Thr Tyr Asn Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

        115                 120                 125

Lys

<210>91

<211>129

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#3(F19kappa(C))

<400>91

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1               5                   10                  15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Val Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu

            20                  25                  30

Leu Ser Ala Ser Thr Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Met Ser

        35                  40                  45

Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

    50                  55                  60

Ala Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val

65                  70                  75                  80

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

                85                  90                  95

Ile Ser Cys Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

            100                 105                 110

Tyr Tyr Ser Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

        115                 120                 125

Lys

<210>92

<211>126

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#4(F19kappa(D))的cDNA的氨基酸序列

<400>92

Met Glu Ala Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro

1               5                   10                  15

Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser

            20                  25                  30

Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly

        35                  40                  45

Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

    50                  55                  60

Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala

65                  70                  75                  80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Pro Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

                85                  90                  95

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser

            100                 105                 110

Asn Trp His Pro Val Arg Pro Arg Asp Gln Gly Gly Asp Ser

        115                 120                 125

<210>93

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#1(F19kappa(A))的CDR1

<400>93

Arg Val Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Asn

1               5                   10

<210>94

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#3(F19kappa(C))的CDR1

<400>94

Arg Met Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala

1               5                   10

<210>95

<211>11

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#4(F19kappa(D))的CDR1

<400>95

Arg Ala Ser Gln Gly Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1               5                   10

<210>96

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#1(F19kappa(A))的CDR2

<400>96

Ser Ala Ser Asn Leu Gln Ser

1               5

<210>97

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#3(F19kappa(C))的CDR2

<400>97

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1               5

<210>98

<211>7

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#4(F19kappa(D))的CDR2

<400>98

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1               5

<210>99

<211>8

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#1(F19kappa(A))的CDR3

<400>99

Gln Arg Thr Asn Ala Pro Pro Thr

1               5

<210>100

<211>9

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#3(F19kappa(C))的CDR3

<400>100

Gln Gln Tyr Tyr Ser Phe Pro Tyr Thr

1               5

<210>101

<211>8

<212>PRT

<213>智人

<220>

<223>F19轻链可变区#4(F19kappa(D))的CDR3

<400>101

Gln Gln Arg Ser Asn Trp His Pro

1               5

<210>102

<211>386

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#1(E1kappa(A))的cDNA

<400>102

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggcttctgc tgctctggct cccaggtgcc 60

agatgtgcca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120

gtcaccatca cttgccgggc aagtcagggc attagcagtg ctttagcctg gtatcagcag 180

aaaccaggga aagctcctaa gctcctgatc tatgatgcct ccagtttgga aagtggggtc 240

ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300

cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacagttta atagttaccg tacacttttg 360

gccaggggac caagctggag atcaaa                                      386

<210>103

<211>384

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>E1kappa轻链可变区#3(E1kappa(C))的cDNA

<400>103

atggaaaccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctaca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 180

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca acagggccac tggcatccca 240

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 300

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 360

caagggacca aggtggaaat caaa                                        384

<210>104

<211>387

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F19kappa轻链可变区#1(F19kappa(A))的cDNA

<400>104

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctac tgctctgggt cccaggtgcc 60

agatgtgaca tccagttgac ccagtctcca tcctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120

atcaccatca cttgccgggt gagtcagggc attagcagtt atttaaattg gtatcggcag 180

aaaccaggga aagttcctaa gctcctgatc tatagtgcat ccaatttgca atctggagtc 240

ccatctcggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcactat cagcagcctg 300

cagcctgaag atgttgcaac ttattacggt caacggactt acaatgcccc tcccactttc 360

ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaa                                     387

<210>105

<211>387

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F19kappa链可变区#3(F19kappa(C))的cDNA

<400>105

atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60

agatgtgtca tctggatgac ccagtctcca tccttactct ctgcatctac aggagacaga 120

gtcaccatca gttgtcggat gagtcagggc attagcagtt atttagcctg gtatcagcaa 180

aaaccaggga aagcccctga gctcctgatc tatgctgcat ccactttgca aagtggggtc 240

ccatcaaggt tcagtggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagctgcctg 300

cagtctgaag attttgcaac ttattactgt caacagtatt atagtttccc gtacactttt 360

ggccagggga ccaagctgga gatcaaa                                     387

<210>106

<211>380

<212>DNA

<213>智人

<220>

<223>F19kappa链可变区#4(F19kappa(D))的cDNA

<400>106

atggaagccc cagcgcagct tctcttcctc ctgctactct ggctcccaga taccaccgga 60

gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 120

ctctcctgca gggccagtca gggtgttagc agctacttag cctggtacca gcagaaacct 180

ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 240

aggttcagtg gcagtgggcc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 300

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcatcccgt tcggccaagg 360

gaccaaggtg gagattcaaa                                             380

Claims (71)

1.一种特异性结合hLIGHT表位的分离的抗体，其中该抗体与hLIGHT表位的结合被以下抗体以剂量依赖方式竞争性阻断：

(a)E1抗体(ATCC录入号PTA-7729)、E13抗体(ATCC录入号PTA-7842)或E63抗体(ATCC录入号PTA-7818)，或者

(b)F19抗体(ATCC录入号PTA-7819)或F23抗体(ATCC录入号PTA-7728)，

并且所述与hLIGHT表位的结合不被以下两种抗体同时阻断：

(a)所述E1抗体和所述F19抗体，

(b)所述E1抗体和所述F23抗体，

(c)所述E13抗体和所述F19抗体，

(d)所述E13抗体和所述F23抗体，

(e)所述E63抗体和所述F19抗体，或者

(f)所述E63抗体和所述F23抗体。

2.一种特异性结合hLIGHT表位的分离的完全人源性抗体，其中该抗体与hLIGHT表位的结合被如下抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断：

(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者

(b)F19抗体或F23抗体。

3.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体为拮抗型抗体。

4.如权利要求3所述的抗体，其中该抗体与HVEM、LTβR或其融合蛋白竞争性结合细胞表面表达的hLIGHT或可溶性hLIGHT。

5.如权利要求3所述的抗体，其中该抗体部分或完全抑制HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合与细胞表面表达的hLIGHT或可溶性hLIGHT的结合。

6.如权利要求3所述的抗体，其中该抗体部分或完全抑制hLIGHT介导的具有细胞表面表达的hLIGHT受体的细胞分泌CCL20、IL-8、RANTES或其任意组合。

7.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)具有SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示氨基酸序列的重链可变区(VH)；和/或

(b)具有SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10任意一个所示氨基酸序列的轻链可变区(VL)。

8.如权利要求7所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：82、6或83任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；

(b)具有SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：7所示氨基酸序列的VL结构域；

(c)具有SEQ ID NO：3中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：8所示氨基酸序列的VL结构域；

(d)具有SEQ ID NO：4中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：90、9、91任意一个所示氨基酸序列的VL结构域；或者

(e)具有SEQ ID NO：5中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：10所示氨基酸序列的VL结构域。

9.如权利要求8所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)具有SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：6所示氨基酸序列的VL结构域；或者

(b)具有SEQ ID NO：4中所示氨基酸序列的VH结构域以及具有SEQID NO：9所示氨基酸序列的VL结构域。

10.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含：

(1)选自SEQ ID NO：11、14、17、20和23的VH CDR1；

(2)选自SEQ ID NO：12、15、18、21和24的VH CDR2；和/或

(3)选自SEQ ID NO：13、16、19、22和25的VH CDR3；

和/或

(b)轻链可变区，其包含：

(1)选自SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95和38的VL CDR1；

(2)选自SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98和39的VL CDR2；和/或

(3)选自SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101和40的VL CDR3。

11.如权利要求10所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含具有SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQ ID NO：12所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQID NO：13所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或

(b)轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：84、26或85所示氨基酸序列的VL CDR1，具有SEQ ID NO：86、27或87所示氨基酸序列的VLCDR2，以及具有SEQ ID NO：88、28或89所示氨基酸序列的VL CDR3。

12.如权利要求11所述的抗体，其中该抗体包含轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：26所示氨基酸序列的VL CDR1，具有SEQ ID NO：27所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQ ID NO：28所示氨基酸序列的VL CDR3。

13.如权利要求10所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含具有SEQ ID NO：14所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQ ID NO：15所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQID NO：16所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或

(b)轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：29所示氨基酸序列的VLCDR1，具有SEQ ID NO：30所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQID NO：31所示氨基酸序列的VL CDR3。

14.如权利要求10所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含具有SEQ ID NO：17所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQ IDNO：18所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQID NO：19所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或

(b)轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：32所示氨基酸序列的VLCDR1，具有SEQ ID NO：33所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQID NO：34所示氨基酸序列的VL CDR3。

15.如权利要求10所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含具有SEQ ID NO：20所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQ ID NO：21所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQID NO：22所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或

(b)轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：93、35、94或95所示氨基酸序列的VL CDR1，具有SEQ ID NO：96、36、97或98所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQ ID NO：99、37或100、101所示氨基酸序列的VL CDR3。

16.如权利要求15所述的抗体，其中该抗体包含轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：35所示氨基酸序列的VL CDR1，具有SEQ ID NO：36所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQ ID NO：37所示氨基酸序列的VL CDR3。

17.如权利要求10所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)重链可变区，其包含具有SEQ ID NO：23所示氨基酸序列的VHCDR1，具有SEQ ID NO：24所示氨基酸序列的VH CDR2，以及具有SEQID NO：25所示氨基酸序列的VH CDR3；和/或

(b)轻链可变区，其包含具有SEQ ID NO：38所示氨基酸序列的VLCDR1，具有SEQ ID NO：39所示氨基酸序列的VL CDR2，以及具有SEQID NO：40所示氨基酸序列的VL CDR3。

18.如权利要求1或2所述的抗体，其中该分离的抗体为E1抗体、E13抗体、E63抗体、F19抗体或F23抗体。

19.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)由能在严格条件下与SEQ ID NO：41、42、43、44或45任意一个所示核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列所编码的VH；和/或

(b)由能在严格条件下与SEQ ID NO：102、46、103、47、48、104、49、105、106或50任意一个所示核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列所编码的VL。

20.如权利要求19所述的抗体，其中该抗体包含由能在严格条件下与SEQ ID NO：46或49所示核苷酸序列的互补序列杂交的核苷酸序列所编码的VL。

21.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含(a)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤制备的抗体的VH；和/或(b)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤制备的抗体的VL。

22.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含：

(a)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤或其组合制备的抗体的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3；和/或

(b)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤或其组合制备的抗体的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。

23.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤所制备。

24.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体为E1抗体、E13抗体或E63抗体、F19抗体或F23抗体。

25.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体包含IgG恒定区。

26.如权利要求25所述的抗体，其中该抗体包含IgG1或IgG4恒定区。

27.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体为完全人源性抗体。

28.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体为嵌合或人源化抗体。

29.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体为单克隆抗体。

30.如权利要求1或2所述的抗体，其中该抗体为重组抗体。

31.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体为抗原结合片段。

32.如权利要求1所述的抗体，其中该抗体为Fab片段、F(ab′)2片段、单链Fv(sFv)、双链抗体、三链抗体或微型抗体。

33.一种包含权利要求1或2所述抗体的组合物。

34.一种编码权利要求1或2所述抗体的分离的核酸分子，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO：41、42、43、44、45、102、46、103、47、48、104、49、105、106、50中的任意一个或其组合。

35.如权利要求34所述的分离的核酸分子，其中该核苷酸序列包含SEQ ID NO：46或49。

36.如权利要求34所述的分离的核酸分子，其包含：

(a)由能在严格条件下与SEQ ID NO：41、42、43、44或45任意一个所示核苷酸序列的互补序列杂交的序列；和/或

(b)由能在严格条件下与SEQ ID NO：102、46、103、47、48、104、49、105、106或50任意一个所示核苷酸序列的互补序列杂交的序列。

37.如权利要求36所述的分离的核酸分子，其包含能在严格条件下与SEQ ID NO：46或49所示核苷酸序列的互补序列杂交的序列。

38.一种分离的核酸分子，其包含编码SEQ ID NO：1、2、3、4或5任意一个所示VH氨基酸序列和/或SEQ ID NO：82、6、83、7、8、90、9、91、92或10任意一个所示VL氨基酸序列的核酸序列，或者由该核酸序列组成。

39.如权利要求38所述的分离的核酸分子，其包含编码SEQ ID NO：6或9所示VL氨基酸序列的核酸序列，或者由该核酸序列组成。

40.一种分离的核酸分子，其包含编码具有如下成分的多肽的序列，或由该序列组成：

(a)选自SEQ ID NO：11、14、17、20和23的VH CDR1；

(b)选自SEQ ID NO：12、15、18、21和24的VH CDR2；

(c)选自SEQ ID NO：13、16、19、22和25的VH CDR3；

(d)选自SEQ ID NO：84、26、85、29、32、93、35、94、95和38的VL CDR1；

(e)选自SEQ ID NO：86、27、87、30、33、96、36、97、98和39的VL CDR2；和/或

(f)选自SEQ ID NO：88、28、89、31、34、99、37、100、101和40的VL CDR3。

41.如权利要求40所述的分离的核酸分子，其中所述VL CDR1为SEQ ID NO：26或35；所述VL CDR2为SEQ ID NO：27或36，并且/或者所述VL CDR3为SEQ ID NO：28或37。

42.一种分离的核酸分子，其包含编码(a)由ATCC保藏录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤制备的抗体的VH氨基酸序列；和/或(b)由ATCC保藏录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤制备的抗体的VL氨基酸序列的核酸序列，或由该核酸序列组成。

43.一种分离的核酸分子，其包含编码如下成分的核酸序列：

(a)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤或其组合制备的抗体的VH CDR1、VH CDR2和/或VH CDR3；和/或

(b)由ATCC录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤或其组合制备的抗体的VL CDR1、VL CDR2和/或VL CDR3。

44.一种分离的核酸分子，其包含编码由ATCC保藏录入号为PTA-7729、PTA-7842、PTA-7818、PTA-7819或PTA-7728的杂交瘤制备的抗体的核酸序列，或由该核酸序列组成。

45.一种包含权利要求34-44任意一项所述核酸分子的载体。

46.一种包含权利要求45所述载体的宿主细胞。

47.一种制备免疫特异性结合hLIGHT表位的抗体的方法，其中该抗体与hLIGHT表位的结合被如下抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断：

(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者

(b)F19抗体或F23抗体，

并且所述与hLIGHT表位的结合不被以下两种抗体同时阻断：

(a)所述E1抗体和所述F19抗体，

(b)所述E1抗体和所述F23抗体，

(c)所述E13抗体和所述F19抗体，

(d)所述E13抗体和所述F23抗体，

(e)所述E63抗体和所述F19抗体，或者

(f)所述E63抗体和所述F19抗体，

所述方法包括在促进该抗体生成的条件下培养权利要求46所述的宿主细胞。

48.一种制备免疫特异性结合hLIGHT表位的分离的完全人源性抗体的方法，其中该抗体与hLIGHT表位的结合被如下抗体以剂量依赖方式竞争性地阻断：

(a)E1抗体、E13抗体或E63抗体，或者

(b)该F19抗体和该F23抗体，

所述方法包括在促进该抗体生成的条件下培养权利要求46所述的宿主细胞。

49.一种制备如权利要求1或2所述抗体的杂交瘤。

50.ATCC录入号为PTA-7729(124E1)、PTA-7842(124E13)、PTA-7818(124E63)、PTA-7819(124F19)或PTA-7728(124F23)的杂交瘤。

51.一种在有此需要的人体内减缓炎症性肠病(IBD)的一种或多种症状的方法，其包括向该人施用有效量的权利要求33所述的组合物。

52.一种在有此需要的人体内减缓移植物抗宿主病(GVHD)的一种或多种症状的方法，其包括向该人施用有效量的权利要求33所述的组合物。

53.一种在有此需要的人体内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合的结合的方法，其包括向该人施用有效量的权利要求33所述的组合物。

54.一种在有此需要的人体内减少或抑制CCL20、IL-8、RANTES或其任意组合的分泌的方法，其包括向该人施用有效量的权利要求33所述的组合物。

55.一种在具有细胞表面表达的hLIGHT的细胞内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合的结合的方法，其包括将该细胞与有效量的权利要求1或2所述抗体相接触。

56.一种在具有细胞表面表达的HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合的细胞内减少或抑制hLIGHT与HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合的结合的方法，其包括将该细胞与有效量的权利要求1或2所述抗体相接触。

57.一种在具有细胞表面表达的hLIGHT受体的细胞内减少或抑制CCL20、IL-8、RANTES或其任意组合的分泌的方法，其包括将该细胞与有效量的权利要求1或2所述抗体相接触。

58.如权利要求57所述的方法，其中所述hLIGHT受体为HVEM、LTβR或DcR3。

59.如权利要求6所述的抗体，其中所述hLIGHT受体为HVEM、LTβR或DcR3。

60.如权利要求1或2所述的抗体，其进一步包含可检测标记。

61.一种在样本中检测hLIGHT的方法，其包括将该样本与权利要求60所述的抗体相接触。

62.如权利要求61所述的方法，其中该样本包含在细胞表面表达hLIGHT的细胞。

63.一种包含权利要求1或2所述抗体的试剂盒。

64.一种包含权利要求33所述组合物的试剂盒。

65.一种特异性结合hLIGHT的分离的人源单克隆抗体或其hLIGHT结合片段，该hLIGHT在氨基酸位置214包含赖氨酸或谷氨酸。

66.一种特异性结合hLIGHT的分离的人源单克隆抗体或其hLIGHT结合片段，该hLIGHT在氨基酸位置32包含亮氨酸或丝氨酸。

67.如权利要求65所述的抗体，其中所述hLIGHT在氨基酸位置32进一步包含亮氨酸或丝氨酸。

68.如权利要求65-67任意一项所述的抗体，其中该抗体在具有hLIGHT受体的细胞内减少或抑制hLIGHT生物活性。

69.如权利要求65-68任意一项所述的抗体，其中该抗体部分或完全抑制HVEM、LTβR、DcR3或其任意组合与细胞表面表达的hLIGHT或可溶性hLIGHT的结合。

70.如权利要求65-69任意一项所述的抗体，其中该抗体部分或完全抑制hLIGHT介导的具有细胞表面表达的hLIGHT受体的细胞分泌CCL20、IL-8、RANTES或其任意组合。

71.如权利要求70所述的抗体，其中该hLIGHT介导的分泌为可溶性hLIGHT介导的分泌或细胞表面表达的hLIGHT介导的分泌。

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