CN101622010A - 糖免疫原 - Google Patents

糖免疫原 Download PDF

Info

Publication number
CN101622010A
CN101622010A CN200880006145A CN200880006145A CN101622010A CN 101622010 A CN101622010 A CN 101622010A CN 200880006145 A CN200880006145 A CN 200880006145A CN 200880006145 A CN200880006145 A CN 200880006145A CN 101622010 A CN101622010 A CN 101622010A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mannose
oligomeric
hiv
monosaccharide
compositions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200880006145A
Other languages
English (en)
Inventor
R·A·德维克
C·斯坎伦
D·C·登洛普
F·M·曼萨伯
S·E·涂里
P·温特沃斯
N·齐兹曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
United Therapeutics Corp
Original Assignee
United Therapeutics Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by United Therapeutics Corp filed Critical United Therapeutics Corp
Publication of CN101622010A publication Critical patent/CN101622010A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units
    • A61K2039/645—Dendrimers; Multiple antigen peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Abstract

公开了可用于诱导受试者或宿主的免疫原性应答的组合物和方法。具体地，所述组合物和方法可以涉及碳水化合物HIV疫苗和涉及通过将抗原性糖引入到HIV包膜糖蛋白gp120和gp41的聚糖模拟物中来生产碳水化合物HIV疫苗的方法。

Description

糖免疫原
相关申请
[0001]本申请要求Raymond Dwek等人在2007年1月29日提交的美国临时申请60/887,033的优先权，所述申请被全文并入本文作为参考。
技术领域
[0002]本发明主要涉及糖免疫原的领域。
发明背景
[0003]抗-碳水化合物识别代表了适应性免疫和先天免疫的主要组成部分。然而，针对表面碳水化合物的抗体的保护性质只在有限的情况中被用于疫苗设计。
[0004]糖基化的抗原作用在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的情况中具有特殊的意义。HIV-1的表面被大的、柔性的和免疫原性差的N联糖所覆盖，所述N联糖形成了促进体液免疫逃避的‘进化的聚糖防护罩’(参见，例如，X.Wei等人，“Antibody neutralization and escapeby HIV-1”，Nature，422(6929)，pp.307-312，2003，所述文献被全文并入本文作为参考)。已经提出了关于HIV聚糖的免疫原性差的三个主要的解释。第一，与HIV连接的聚糖是由宿主细胞合成的，因此是“自体”免疫的。第二，蛋白质对碳水化合物的结合通常是弱的，因此限制了高亲合力抗碳水化合物抗体的潜力。最后，有多种不同的糖形可以连接于任何给定的N-联接的附着位点，由此产生潜在抗原的高度非均质混合物。有多种复杂的、低聚甘露糖和混合型聚糖都存在于HIV上，低聚甘露糖聚糖紧密地聚集在gp120的暴露的外部结构域上。然而，在感染期间通常没有观察到HIV碳水化合物的抗体。
[0005]HIV-1 gp120分子广泛地被N-糖基化，由共价连接的N-聚糖贡献这种糖蛋白的大约一半分子量。在糖蛋白表面上塑造的具有N-聚糖的gp120的晶体结构确定了包含一簇N-聚糖的gp120分子的一个面(参见，例如，P.D.Kwong等人，“Structure of an HIV gp120envelope glycoprotein in complex with the CD4 receptor and aneutralizing human antibody”，Nature，393(6686)pp.648-659，1998，所述文献被全文并入本文作为参考)。这个面已经被表示为免疫沉默面，因为至今只确定了一种抗体(2G12)能够识别糖蛋白分子的这个区域。HIV-1 gp120分子的N-糖基化被认为通过防止抗体接近N-糖基化位点下面的抗原蛋白质表位而在免疫逃避中起到重要作用。在这种情况中，N-聚糖的确切结构无关紧要，只要它们保护下面的gp120分子免于抗体识别。因此，可以通过在病毒基因组突变之后引入新的N-糖基化位点来发展出gp120聚糖保护罩。这促进了对寄主免疫的继续逃避。
[0006]尽管针对HIV的碳水化合物的抗体是罕有的，但是许多其它病原体的碳水化合物部分引起强烈的抗体应答。实际上，人体液的抗碳水化合物反应性的一个显著特征在于对于α1→2连结的甘露糖低聚糖为特异性的抗-甘露糖抗体的广泛存在。然而，与2G12不同，这些抗体不结合于在‘自体’的低聚甘露糖聚糖的情况中存在的甘露糖。天然的抗甘露糖抗体的可能的靶是存在于许多通常存在的酵母菌的脂质和蛋白质上的细胞壁甘露聚糖。用酵母菌甘露聚糖免疫可以提供与gp120碳水化合物的一些体液交叉反应性(参见，例如，W.E.Muller等人，“Polyclonal antibodies to mannan from yeast alsorecognize the carbohydrate structure of gp120 of the AIDS virus：anapproach to raise neutralizing antibodies to HIV-1 infection in vitro”，AIDS.1990 Feb；4(2)，pp.159-62，所述文献被全文并入本文作为参考；和W.E.Muller等人，“Antibodies against defined carbohydratestructures of Candida albicans protect H9 cells against infection withhuman immunodeficiency virus-1 in vitro”，J Acquir Immune DeficSyndr.1991；4(7)pp.694-703，所述文献被全文并入本文作为参考)。然而，观察到的滴度和亲合力不足以成为将其用作预防处理的保证。
[0007]尽管如上所述，但是一种罕见的中和抗gp120抗体-2G12确实结合于HIV外壳上的特定的碳水化合物表位。由2G12识别的表位是甘露糖残基的高度异常的聚簇，存在于gp120的外部结构域上(参见，例如，C.N.Scanlan等人，“The Broadly Neutralizing Anti-HumanImmunodeficiency Virus Type 1 Antibody 2G12 Recognizes a Clusterof α1-＞2 Mannose Residues on the Outer Face of gp120 J.Virol.76(2002)7306-7321，所述文献被全文并入本文作为参考)。2G12结合的主要的分子决定因素是连接于gp120的Asn332和Asn392的聚糖的由α1→2连结的甘露糖末端。尽管由‘自体’聚糖组成，但是这种聚簇布置为稠密的阵列，是高度非典型的哺乳动物糖基化，因此提供了被2G12‘非自体’识别的结构基础。2G12 Fab的结构研究显示，Fab的两个重链通过以前没有观察到的结构域-互换的结构互锁(参见，例如，D.Calarese等人，“Antibody domain exchange is an immunologicalsolution to carbohydrate cluster recognition”，Science，vol.300，pp.2065-2071，2003，所述文献被全文并入本文作为参考)。由这种结构域互换的Fab形成的扩展的互补位提供用于高亲和力结合多价碳水化合物的大的表面。
[0008]2G12的被动转移研究显示，这种抗体可以在HIV-1动物模型中防止病毒攻击。已经阐明了2G12针对多种HIV-1初级分离物的广泛特异性的分子基础。因此，基于2G12表位的已知结构，非常期望开发能够得到2G12样抗体并且可以有助于针对HIV-1的消除性免疫的免疫原。然而，这种免疫原的设计必须克服gp120上的聚糖表位的抗原模拟所需的结构限制以及针对HIV的免疫原性差的N联聚糖的固有的免疫限制。
[0009]gp120免疫原设计的一个方法是合成再造2G12结合的gp120的抗原部分(参见，例如，H.K Lee等人，“Reactivity-BasedOne-Pot Synthesis of Oligomannoses：Defining Antigens Recognizedby 2G12，a Broadly Neutralizing Anti-HIV-1 Antibody”，Angew.Chem.Int.Ed.Engl，43(8)，pp.1000-1003，2004，所述文献被全文并入本文作为参考；H.Li等人，“Design and synthesis of atemplate-assembled oligomannose cluster as an epitope mimic forhuman HIV-neutralizing antibody 2G12”，Org.Biomol.Chem.，2(4)，pp.483-488，2004，所述文献被全文并入本文作为参考；L.-X.Wang，“Binding of High-Mannose-Type Oligosaccharides andSynthetic Oligomannose Clusters to Human Antibody 2G12：Implications for HIV-1 Vaccine Design”，Chem.Biol.11(1)，pp.127-34，2004，所述文献被全文并入本文作为参考)。制备碳水化合物免疫原的其它方法描述在美国2006-0251680中，所述文献被全文并入本文作为参考。存在多价形式的合成甘露糖苷可以使其对2G12的亲合力增加将近100倍(参见，例如，L.-X.Wang，“Binding of High-Mannose-TypeOligosaccharides and Synthetic Oligomannose Clusters to HumanAntibody 2G12：Implications for HIV-1 Vaccine Design”，Chem.Biol.11(1)，pp.127-34，2004)。
[0010]尽管免疫原设计的合成方法可能是强大的，但是免疫原的‘合理’设计具有显著的挑战。非常期望开发设计碳水化合物免疫原的可供选择的方法。
发明内容
[0011]公开了用于诱导针对包括低聚-D-甘露糖部分的抗原的免疫原性应答的药物组合物和药包。还公开了使用所述组合物诱导免疫原性应答的方法和制备所述药物组合物的方法。典型地，所述药物组合物包括：(a)有效浓度的包括被取代的低聚-D-甘露糖部分的抗原，其中所述抗原的低聚-D-甘露糖部分的至少一个D-甘露糖残基被至少一个非-D-甘露糖单糖残基代替；和(b)载体(例如，赋形剂、稀释剂、和/或佐剂)。
[0012]在一些实施方案中，所述非-D-甘露糖单糖残基包括D-甘露糖的结构模拟物或类似物。所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括在给予所述药物组合物的受试者(例如，人)中为抗原性的单糖残基。所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括在受试者(例如，人)中非天然产生或观察到的单糖残基。所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括D-或L-型单糖。典型地，所述非-D-甘露糖单糖残基具有五个或六个碳并且任选地在碳或羟基位置被取代。非-D-甘露糖单糖残基的实例可以包括选自以下的单糖残基：脱氧单糖(例如，鼠李糖)、卤素取代的单糖或卤素取代的脱氧单糖(例如，6-脱氧-6-氟-D-葡萄糖)、硝基取代的单糖、氨基取代的单糖(例如，野尻霉素和脱氧野尻霉素)、硫取代的单糖、磷取代的单糖、和芳基取代的单糖(例如，1-对硝基苯基-D-鼠李糖)。
[0013]在药物组合物中，取代的低聚-D-甘露糖部分可以作为更大分子(例如，糖蛋白、糖缀合物支架、或树枝型聚合物(dentrimer))的一部分存在。在一些实施方案中，取代的低聚-D-甘露糖部分作为糖蛋白的一部分存在于药物组合物中，其中取代的低聚-D-甘露糖部分作为N-聚糖连接。
[0014]所述低聚-D-甘露糖部分包括直链或分支的低聚-D-甘露糖低聚糖。在一些实施方案中，所述低聚-D-甘露糖部分包括约5-12个甘露糖残基(例如，Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、Man7GlcNAc2、或Man6GlcNAc2)。
[0015]低聚-D-甘露糖部分的甘露糖残基可以通过减少的羟基和任何其它适合的羟基连接。在一些实施方案中，低聚-D-甘露糖部分的甘露糖残基可以通过1→2键(例如，α1→2键)、通过1→3键(例如，α1→3键)、通过1→6键(例如，α1→6键)、或其组合来连接。取代的低聚-D-甘露糖部分的非-D-甘露糖残基可以通过任何适合的键连接(例如，通过α1→2键、通过α1→3键、或通过α1→6键，优选通过α1→2键)。
[0016]所述低聚-D-甘露糖部分可以连接于多肽。例如，所述低聚-D-甘露糖部分可以作为N-聚糖连接，其中所述低聚-D-甘露糖部分可以包括一个或多个N-乙酰半乳糖胺残基(GlcNAc)，所述N-乙酰半乳糖胺残基与多肽连接(例如，通过酰胺键连接于天门冬酰胺残基(Asn))。示例性的N-聚糖可以包括Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、或Man7GlcNAc2。
[0017]所述抗原的低聚-D-甘露糖部分可以由任何适合的非-D-甘露糖单糖残基取代。在一些实施方案中，所述低聚-D-甘露糖部分是Man9GlcNAc2，并且所述取代的低聚-D-甘露糖部分是Rham1Man8GlcNAc2。
[0018]所述低聚-D-甘露糖部分可以具有下式表示的结构：
Figure G2008800061455D00061
其中，“Man”是甘露糖，“GlcNAc”是N-乙酰半乳糖胺。任选地，所述低聚-D-甘露糖部分通过末端GlcNAc残基与肽连接(例如，连接于天门冬酰胺残基)。
[0019]所述取代的低聚-D-甘露糖部分可以具有以下之一表示的结构：
Figure G2008800061455D00062
Figure G2008800061455D00071
其中，“Man”是甘露糖，“GlcNAc”是N-乙酰半乳糖胺，和“X”是本文中所述的非-D-甘露糖单糖残基(例如，鼠李糖)。
[0020]所述抗原可以是与低聚-D-甘露糖部分(例如，Man9GlcNAc2)连接的具有十(10)个以上连续氨基酸的HIV糖蛋白或其片段。所述抗原可以包括HIV糖蛋白120(gp120)或HIV糖蛋白41(gp41)。在一些实施方案中，所述HIV糖蛋白是gp120，所述低聚-D-甘露糖部分是在Asn332或Asn392处作为N-聚糖连接的低聚-D-甘露糖部分。
[0021]所述组合物典型地包括用于在受试者(例如，人)中诱导免疫原性应答的有效量的抗原。在一些实施方案中，所述组合物用于诱导受试者的体液应答，其中所述体液应答包括产生特异性地结合低聚-D-甘露糖部分的抗体。
[0022]还公开了用于诱导针对包括低聚-D-甘露糖部分的抗原的免疫原性应答的方法和药包。典型地，所述方法包括对有此需要的受试者(例如，具有HIV感染或处于获得HIV感染的危险中的人)给予任何本文中所公开的药物组合物。
[0023]还公开了用于制备包括取代的低聚-D-甘露糖部分的抗原的方法，所述抗原任选地可用于诱导针对包括非取代低聚-D-甘露糖部分的抗原的免疫原性应答。典型地，所述方法包括：(a)用第一糖苷酶处理包括低聚-D-甘露糖部分的抗原，以便除去至少一个D-甘露糖残基；和(b)是经过处理的抗原在第二糖苷酶的存在下与至少一个非-D-甘露糖单糖残基反应，以提供包括取代的低聚-D-甘露糖部分的抗原。
[0024]所述低聚-D-甘露糖部分可以包括存在于HIV gp120或HIV gp41中的低聚-D-甘露糖部分。例如，所述低聚-D-甘露糖部分可以包括连接于HIV gp120的Asn332或Asn392的N-聚糖。所述制备方法的低聚-D-甘露糖部分可以包括Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、或Man7GlcNAc2。
[0025]在所述制备方法中，所述第一糖苷酶或第二糖苷酶可能是甘露糖苷酶。糖苷酶可以包括外切甘露糖苷酶和内甘露糖苷酶。示例性的甘露糖苷酶包括一级内质网(ER)甘露糖苷酶和刀豆甘露糖苷酶。在一些实施方案中，所述第1类糖苷酶是外切甘露糖苷酶，所述第二糖苷酶是刀豆甘露糖苷酶。适合的甘露糖苷酶可以包括保留酶，其中糖的α或β端基异构构型在酶水解糖苷键之后被所述酶保留。适合的甘露糖苷酶可以包括转化酶，其中糖的α或β端基异构构型在酶水解糖苷键之后被所述酶反转成β或α端基异构构型。
[0026]例如，所述制备方法可以包括使用其中非-D-甘露糖残基具有α端基异构构型的作为保留酶的甘露糖苷酶(例如，刀豆甘露糖苷酶)。在其它实施方案中，所述制备方法可以包括使用其中非-D-甘露糖残基具有β端基异构构型的作为转化酶的甘露糖苷酶(例如，第1类ER外切甘露糖苷酶)。
[0027]所述制备方法可以利用任何适合的非-D-甘露糖单糖残基。在一些实施方案中，所述非-D-甘露糖单糖残基包括D-甘露糖的结构模拟物或类似物。所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括在受试者(例如，人)中为抗原性的单糖残基。在一些实施方案中，所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括在受试者(例如，人)中非天然产生或观察到的单糖残基。例如，所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括选自以下的单糖残基：脱氧单糖(例如，鼠李糖)、卤素取代的单糖、硝基取代的单糖、氨基取代的单糖(例如，野尻霉素和脱氧野尻霉素)、硫取代的单糖、磷取代的单糖、和对硝基苯基取代的单糖。
[0028]在所述制备方法中，包括低聚-D-甘露糖部分的抗原可以包括糖蛋白、糖缀合物支架、或树枝型聚合物。在制备方法的一些实施方案中，包括低聚-D-甘露糖部分的抗原是其中低聚-D-甘露糖部分被作为N-聚糖连接的糖蛋白。所述抗原可以是与低聚-D-甘露糖部分连接的具有十(10)个以上连续氨基酸的HIV糖蛋白(例如，gp120或gp41)或其片段。在所述制备方法的一些实施方案中，所述抗原是HIVgp120，所述低聚-D-甘露糖部分在Asn332或Asn392处作为N-聚糖连接。
[0029]在制备方法的一些实施方案中，所述低聚-D-甘露糖部分可以包括Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、或Man7GlcNAc2。所述非-D-甘露糖单糖部分可以在羟基位置被取代。例如，所述非-D-甘露糖单糖部分可以包括氧→氢(在C6位置的氢取代(例如，6-脱氧-α-D-甘露糖或“鼠李糖”)。在羟基位置的取代可以包括离去基团取代(例如，在C6羟基处的硝基苯基基团)。所述非-D-甘露糖单糖残基可以包括对硝基苯基-α-D-鼠李糖。示例性制备的抗原可以包括取代的低聚-D-甘露糖部分例如Rham1Man8GlcNAc2、Rham1Man7GlcNAc2、Rham1Man6GlcNAc2、和Rham1Man5GlcNAc2。
附图简述
[0030]图1提供通过荧光抗人抗体测量的人血清(n＝10)结合聚糖微阵列的分析。
[0031]图2提供用于合成低聚甘露糖聚糖的抗原性衍生物的示例方案。
[0032]图3举例说明图2所示反应的反应产物的MALDI-TOFF质谱分析。
发明详述
[0033]本公开涉及药物组合物、方法和药包。具体地，本公开涉及碳水化合物疫苗或免疫原性组合物、用于诱导针对碳水化合物部分的抗体的方法以及免疫原性组合物及其生产方法。在一些实施方案中，本公开涉及碳水化合物HIV疫苗和免疫原性组合物及其生产方法。
相关申请
[0034]本公开将美国专利申请11/376,549的全部内容并入本文作为参考，所述美国专利申请11/376,549的公布号为US 2006-0251680。
定义
[0035]除非另有说明，术语“一”或“一个”表示“一个或多个”。
[0036]除非另有说明，本文中使用的术语“烷基”是指包含一个或多个碳原子的直链和支链的烷基，包括例如甲基、乙基、丁基、和壬基。
[0037]本文中使用的术语“芳基”是指单环的芳香族基团例如苯基或苯并稠合的芳香族基团例如茚满基、萘基、或芴基等。
[0038]术语“杂芳基”是指包含一个或多个杂原子的芳族化合物。实例包括吡啶基、呋喃基、和噻吩基，或包含一个或多个杂原子的苯并稠合的芳香族例如吲哚基或喹啉基。
[0039]本文中使用的术语“杂原子”是指非碳原子，例如N、O、和S。
[0040]本文中使用的术语“环烷基”是指包含3、4、5、6、7、或8个碳的碳环，包括例如环丙基和环己基。
[0041]除非另有说明，本文中使用的术语“烷氧基”是指包含一个或多个碳原子的直链或支链的烷氧基，包括例如甲氧基和乙氧基。
[0042]本文中使用的术语“烯基”是指包含一个或多个双键的直链或支链烃基，例如乙烯基和丙烯基。
[0043]本文中使用的术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基，例如苄基和苯乙基。
[0044]本文中使用的术语“炔基”是指包含一个或多个三键的直链或支链烃基，例如乙炔基和丙炔基。
[0045]本文中使用的术语“芳氧基”是指通过用芳基基团取代-OH基团中的氢原子而产生的取代基，包括例如苯氧基。
[0046]本文中使用的术语“芳烷氧基”是指被芳基基团取代的烷氧基，例如2-苯基乙氧基。
[0047]本文中使用的术语“烷基氨基”是指被一个烷基取代的氨基，例如甲基氨基(-NHCH3)和乙基氨基(-NHCH2CH3)。本文中使用的术语“二烷基氨基”是指被两个烷基取代的氨基，例如二甲基氨基(-N(CH3)2)和二乙基氨基(-N(CH2CH3)2)。
[0048]术语“卤素或“卤素取代”是指氟、氯、溴或碘。
[0049]单糖是不能通过水解分解为更简单的糖的任何碳水化合物，例如丁糖、戊糖、和己糖。可以用于本发明的非-D-甘露糖单糖包括但不限于衍生自以下D-型和L-型天然单糖的残基：6-脱氧单糖，例如鼠李糖、岩藻糖、毛地黄毒素糖、齐墩果糖和奎诺糖，己糖例如阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖和塔罗糖，戊糖例如核糖、阿拉伯糖、木糖和来苏糖，丁糖例如赤藓糖和苏糖，氨基糖例如葡糖胺和柔胺，糖醛酸例如葡糖醛酸和半乳糖醛酸，酮糖例如阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖和戊酮糖，和脱氧糖，例如2-脱氧核糖；衍生自天然或合成的吡喃糖和呋喃糖的残基；以及其中任何上述残基的羟基和/或氨基被保护或酰化、或者包括离去基团(即，-O-离去基团)的糖残基衍生物或具有卤代糖(其中羟基被卤素例如氟代替)残基的糖类。根据“羟基的离去基团”的离去基团是指可以通过适当的生物化学方法，例如水解除去。在本文中的术语“有此需要的受试者”是指其中对取代的低聚-D-甘露糖部分的免疫原性应答引起治疗或预防效果的受试者，其可以是任何动物，包括人。“有此需要的受试者”可以包括感染了病原体(例如，人类免疫缺陷病毒1型或HIV-1)或者处于感染该病原体的危险之中的人。术语“受试者”和“患者”和“宿主”在本文中可互换使用。
[0050]术语“有效量”是指所讨论的物质(例如，包括取代的低聚-D-甘露糖部分的抗原)的量会在大多数的患者中诱导免疫原性应答(例如，产生针对包括低聚-D-甘露糖部分的抗原的抗体)。术语“有效量”还暗示所述物质以仅对被给予该物质的受试者引起轻度或没有有害作用的量给予，或者考虑到给予所述物质来治疗或预防的疾病的严重程度，所述有害作用从医学和药学的观点是可以耐受的。
[0051]如本文中使用的，“治疗”包括预防性和治疗性治疗。因此，在治疗受试者时，可以将本发明的化合物对已经感染的受试者给药，或者用于防止这种感染发生。
[0052]在本文中，术语“甘露糖类似物”或“甘露糖模拟物”应该在广义上理解为表示模拟(在结合特征方面)与2G12单克隆抗体(可得自美国国家卫生研究所(NIH)AIDS研究&参考试剂计划(U.S.NationalInstitute of Health(NIH)AIDS Research & Reference ReagentProgram)，目录编号1476)的有效部分结合的甘露糖的任何物质。因此，所述类似物或模拟物可以简单地是认为能够在体内或体外模拟甘露糖低聚糖的甘露糖对2G12抗体的结合的任何其它化合物。在本文中，甘露糖类似物或甘露糖模拟物表现出与2G12抗体结合于HIVgp120相关的至少一种结合特征。例如，在类似物或模拟物中，每个侧链可以被具有相似立体化学或极性和非极性原子排列的另一个基团代替，只要对于与2G12抗体结合不可缺少的任何特定特征得以保持。
[0053]在一些实施方案中，非-D-甘露糖单糖为下式：
Figure G2008800061455D00121
其中，R1a、R1b、R2a、R2b、R3a、R3b、R4a、R4b、R5a、R5b、R6a、R6b、和R6c彼此独立地选自-H；-OH；-F；-Cl；-Br；-I；-NH2；烷基-和二烷基氨基；直链或支链的C1-6烷基、C2-6烯基和炔基；芳烷基；直链或支链的C1-6烷氧基；芳基氧基；芳烷氧基；-(亚烷基)氧基(烷基)；-CN；-NO2；-COOH；-COO(烷基)；-COO(芳基)；-C(O)NH(C1-6烷基)；-C(O)NH(芳基)；磺酰基；(C1-6烷基)磺酰基；芳基磺酰基；氨磺酰基、(C1-6烷基)氨磺酰基；(C1-6烷基)硫；(C1-6烷基)磺酰胺；芳基磺酰胺；-NHNH2；-NHOH；芳基；和杂芳基。每个取代基可以相同或不同。在另外的实施方案中，碳原子可以被杂原子代替。
对碳水化合物进行修饰以提供免疫原
[0054]尽管免疫原设计的合成方法可能是强大的，但是免疫学上“自体”低聚甘露糖聚糖固有地是差的免疫原。例如，“自体”和“非自体”甘露糖苷之间的区别有紧密地调节，为疫苗设计提出了挑战。结合2G12(Man(α1-2)Man(α1-2)Man(α1-3)Man，D1和[Man(α1-2)Man(α1-6)][Man(α1-2)Man(α1-3)]Man，D2D3)的碳水化合物是天然抗原性的。然而，这些抗原结构在自体聚糖的情况中仍是免疫沉默的。在原子水平，一个羟基决定了单糖α-D-甘露糖与α-D-鼠李糖相比的抗原性。因此，一种方法是通过引入保持与低聚甘露糖聚糖紧密的结构同系性的、非自体的抗原性碳水化合物来克服免疫耐受性。例如，低聚甘露糖聚糖的化学和/或酶促修饰可以生产2G12表位的抗原性模拟物。
[0055]为了确定天然地或固有地对人免疫系统为抗原性的碳水化合物，可以针对固定化的聚糖筛选人血清抗体(参见图1)。这样可以揭示被识别为“非自体”的碳水化合物、和/或碳水化合物排列。对人血清反应性的分析显示，α-D-鼠李糖是这样的抗原性糖，而α-D-甘露糖(2G12表位的主要组成部分)则不是(参见图1)。有意义的是，鼠李糖是甘露糖的紧密的结构模拟物，不同之处只在于在C6位缺少一个氧原子，因此，α-D-鼠李糖是6-脱氧-α-D-甘露糖。通过将鼠李糖、或类似的抗原性模拟物并入到gp120的天然低聚甘露糖结构中，也可能克服由于HIV的(甘露糖)糖引起的固有的耐受性。
[0056]因此，可以将α-D-鼠李糖(或其它“非自体”单糖)并入到在gp120上发现的低聚甘露糖聚糖中。合成这种抗原性聚糖的一个方法是逆转甘露糖苷酶的水解活性以得到甘露糖的糖缀合物。由此，通过α-甘露糖苷酶的作用可以将过量的甘露糖类似物酶促转移给聚糖。一个可行的合成方案显示在图2中。鼠李糖取代的聚糖保留了对2G12的结合部位，其包括Man9GlcNAc2的D1和D3臂，而且包含高度抗原性的糖(即，鼠李糖)。这种碳水化合物修饰可用于设计HIV-1的碳水化合物疫苗。
HIV疫苗和免疫原性组合物
[0057]可以通过修饰包括碳水化物部分的HIV组成部分使得被修饰的HIV组成部分变得在受试者中具有抗原性的方式(例如，修饰糖基化)来生产HIV疫苗或免疫原性组合物。然后可以将经过修饰的HIV组成部分对受试者给药，以便诱导免疫原性应答例如产生与未被修饰的HIV组成部分结合的抗体。
[0058]在本文中，术语“修饰糖基化”或“修饰的糖基化”是指所述组成部分(例如，糖蛋白)的聚糖(低聚糖)与在所述组成部分上天然发现的聚糖相比相差至少一个并且优选相差超过一个。
[0059]本文中公开的抗原的低聚-D-甘露糖部分可以包括高甘露糖聚糖。高甘露糖聚糖包括具有至少一个末端Manα1，2Man键的聚糖。这种低聚糖的实例为Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、Man7GlcNAc2、Man6GlcNAc2或它们的异构体。优选地，所述抗原是具有N-聚糖的糖蛋白，并且所述糖蛋白的N-聚糖主要是Man9GlcNAc2或其异构体。
用于提供糖免疫原的自体蛋白
[0060]对gp120的免疫应答通常由对所述蛋白质核心特异性的抗体控制。在抗体识别中，N-联聚糖通常不起到直接的作用。为了消除对所述蛋白质部分的免疫应答和受到所述蛋白质部分的免疫调节，可以将“自体”蛋白质用作“非自体”低聚甘露糖聚簇的支架。
[0061]重组的‘自体’糖蛋白的表达可以提供模拟2G12表位的具有低聚甘露糖型聚糖的支架。例如，可以修饰重组的‘自体’糖蛋白，以便包括修饰的糖基化(例如，取代的低聚-D-甘露糖部分)。这种方法的优点可以是2G12表位可以存在于免疫沉默的蛋白质支架中，而任何抗体应答只是直接针对取代的低聚-D-甘露糖部分。
修饰的糖蛋白和甘露聚糖作为免疫原的用途
[0062]本公开还提供包括具有对2G12抗体的特异性互补性的取代的低聚-D-甘露糖部分的HIV疫苗或免疫原性组合物。可以从甘露聚糖(其为包含甘露糖的聚糖，优选得自酵母菌或细菌细胞)制备这种取代的低聚-D-甘露糖部分。所述甘露聚糖可以是分离的甘露聚糖形式、完整的酵母菌或细菌细胞(可以是被杀死的细胞或被减弱的细胞)、或者作为与载体分子或蛋白质偶联的甘露聚糖。所述甘露聚糖可以是对2G12抗体具有天然亲合力的酵母菌或细菌细胞的甘露聚糖。这种甘露聚糖的一个实例可以是白色念珠菌的甘露聚糖结构，其模拟2G12表位，即具有天然的与2G12抗体的特异性互补性。所述甘露聚糖可以如本文中所述进行修饰，以便包括一个或多个非-D-甘露糖单糖残基。
[0063]所述甘露聚糖可以是人工选择的甘露聚糖或遗传选择的甘露聚糖。这种甘露聚糖可以通过反复地选择对2G12抗体具有较高亲合力的酵母菌或细菌细胞来生产。用于这种反复处理的细胞起始库可以包括表现出一定的非零亲合力或特异性的细胞。从起始库选择与其余细胞相比对2G12抗体具有更高亲合力的细胞的子集。然后可以对该子集的细胞重复实验并且用作随后的重复试验的起始库。可以使用各种标准来识别对2G12抗体具有较高的亲合力的细胞子集。例如，在第一次重复实验时，选择对2G12抗体具有可检测的亲合力的细胞。在随后的重复试验中，选择的细胞可以是如下的细胞，可以使用荧光活化细胞分选系统(FACS)选出表现出对2G12抗体具有高亲合力的细胞，或者通过使用用于亲合力分离的固定化的2G12直接浓集表现出对2G12抗体具有高亲合力的细胞。所选择的甘露聚糖可以如本文中所述进行修饰，以便包括一个或多个非-D-甘露糖单糖残基。
[0064]可以用于细胞起始库的一个非限制性实例为酒精酵母(S.cervisiae)细胞。2G12抗体可以结合酒精酵母甘露聚糖，因此，显示在甘露聚糖和gp120糖蛋白之间的某一非零程度的抗原性模拟。酒精酵母细胞壁的碳水化合物结构与gp120的低聚甘露糖聚糖共有通用的抗原结构。然而，天然存在的酒精酵母甘露聚糖在用作免疫原时对gp120不诱导充分的体液交叉反应性。可以将酒精酵母甘露聚糖如本文中所述进行修饰，以便包括一个或多个非-D-甘露糖单糖残基。
疫苗和免疫原性组合物
[0065]本文中公开的药物组合物可以用作疫苗或免疫原性组合物。可以给予所述疫苗或免疫原性组合物用于进行针对HIV的预防接种和/或使包括人在内的哺乳动物对HIV免疫化。所述疫苗或免疫原性组合物可以包括具有对2G12抗体特异性互补性的甘露聚糖(或如本文中所述的修饰的甘露聚糖)和/或根据上述方法制备的糖蛋白。糖蛋白可以作为分离或纯化的糖蛋白被包括在在疫苗中，而不对其糖基化进行进一步的修饰。
[0066]所述疫苗或免疫原性组合物可以通过任何方便的方式给药。例如，可以将糖蛋白和/或甘露聚糖(或修饰的糖蛋白或甘露聚糖)作为药学可接受的组合物的一部分给药(所述药学可接受的组合物另外包含任何药学可接受的载体)，或者借助递送系统例如脂质体或控制释放药物组合物的方式给予。术语“药学可接受的”是指生理学可耐忍的并且在给药时典型地不产生过敏反应或类似的不希望的反应(例如，心嘈(gastric upset)或眩晕)的分子和组合物。优选地，“药学可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的或在美国药典或其它一般公认的药典中列举用于动物(优选用于人)的。术语“载体”是指与所述化合物一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂、或媒介物。这种药物载体可以是灭菌液体，例如盐水溶液、葡萄糖溶液、甘油溶液、水和油乳液，例如由石油、动物、植物、或合成来源的油类(花生油、豆油、矿物油、或芝麻油)制成的那些。优选使用水、盐水溶液、葡萄糖溶液、和甘油溶液作为载体，特别是用于可注射的溶液。
[0067]所述疫苗或免疫原性组合物可以通过与糖蛋白和/或甘露聚糖相容的任何标准技术给药。这种技术包括非肠道给药、透皮给药、和经粘膜给药，例如经口或经鼻给药。
说明性的实施方案
[0068]以下非限制性实施方案进一步说明本发明。
[0069]实施方案1.将抗原性的糖引入到低聚甘露糖中产生非天然的低聚甘露糖以便改善所述低聚甘露糖聚糖的免疫原性的方法。
[0070]实施方案2.实施方案1的方法，其中非天然的低聚甘露糖聚糖的免疫原性与其引起抗-HIV抗体的能力有关。
[0071]实施方案3.实施方案1或2的方法，其中所述糖是通过人血清对碳水化合物和碳水化合物阵列的亲合力结合研究被确定为免疫原性的。
[0072]实施方案4.实施方案1-3中任一项的方法，其中所述抗原性糖是D-甘露糖的结构模拟物。
[0073]实施方案5.实施方案1-4中任一项的方法，其中所述抗原性糖是D-鼠李糖。
[0074]实施方案6.实施方案1-5中任一项的方法，其中所述低聚甘露糖聚糖是Man9GlcNAc2、Man8GlcNAc2、Man7GlcNAc2、或其结构类似物、模拟物、或衍生物。
[0075]实施方案7.实施方案1-6中任一项的方法，其中根据实施方案1取代的低聚甘露糖聚糖被布置在糖蛋白、糖缀合物支架、或树枝型聚合物的表面上。
[0076]实施方案8.实施方案1-7中任一项的方法，其中将抗原性糖引入到低聚甘露糖支架中是通过使用糖苷酶的催化活性进行缩合(反向水解)实现的。
[0077]实施方案9.实施方案1-8中任一项的方法，其中所述糖苷酶是甘露糖苷酶。
[0078]实施方案10.实施方案1-9中任一项的方法，其中所述反向水解通过具有离去基团的供体糖的置换来帮助完成。
[0079]实施方案11.实施方案1-10中任一项的方法，其中所述离去基团是对硝基酚。
[0080]实施方案12.实施方案1-11中任一项的方法，其中所述甘露糖苷酶是保留酶，所述供体糖在α-端基异构构型中被取代。
[0081]实施方案13.实施方案1-12中任一项的方法，其中所述保留酶是刀豆甘露糖苷酶。
[0082]实施方案14.实施方案1-13中任一项的方法，其中所述甘露糖苷酶是转化酶，所述供体糖在β-端基异构构型中被取代。
[0083]实施方案15.实施方案1-14中任一项的方法，其中所述转化酶是第I类ER外切甘露糖苷酶。
[0084]通过参考以下实施例更容易地理解上述描述的本发明，提供所述实施例只是用于例证而不用于限制本发明。
实施例
[0085]在一个实施例中，将Man9GlcNAc2用外切甘露糖苷酶处理，裂解中心的D2单糖，得到Man8(B)GlcNAc2(参见图2)。随后使用刀豆甘露糖苷酶(JBM)进行反向水解，使用对硝基苯基-α-D-鼠李糖作为供体单糖，得到新的化合物Rham1Man8GlcNAc2。这个反应的进展可以通过反应产物的MALDI-TOFF质谱分析来测定(图3)。
[0086]本说明书中提及的所有的出版物、专利申请、公布的专利、和其它文献都被并入本文作为参考，如同每个单独的出版物、专利申请、公布的专利、和其它文献都被明确地和分别地指明被全文并入本文作为参考一样。被并入本文作为参考的本文中所包含的定义在它们与本文中的定义抵触的情况下被排除在外。

Claims (44)

1.用于诱导针对人类免疫缺陷病毒1型(HIV)的低聚-D-甘露糖部分的免疫原性应答的药物组合物，所述组合物包括：
(a)有效量的抗原，所述抗原包括HIV的低聚-D-甘露糖部分，其中所述HIV的低聚-D-甘露糖部分的至少一个D-甘露糖残基被至少一个非-D-甘露糖单糖残基代替；和
(b)载体。
2.权利要求1的组合物，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括D-甘露糖的结构模拟物。
3.权利要求1的组合物，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括在受试者中为抗原性的单糖残基。
4.权利要求1的组合物，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括对于人来说是非天然的单糖残基。
5.权利要求1的组合物，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括选自以下的单糖残基：脱氧单糖、卤素取代的单糖、硝基取代的单糖、氨基取代的单糖、硫取代的单糖、和磷取代的单糖。
6.权利要求5的组合物，其中所述脱氧单糖包括鼠李糖。
7.权利要求1的组合物，其中所述抗原包括糖蛋白、糖缀合物支架、或树枝型聚合物。
8.权利要求7的组合物，其中所述抗原是糖蛋白，其包括作为N-聚糖连接的取代的低聚-D-甘露糖部分。
9.权利要求1的组合物，其中所述取代的低聚-D-甘露糖部分具有选自下述的式子：
Figure A2008800061450003C1
其中“Man”是甘露糖，“GlcNAc”是N-乙酰半乳糖胺，和“X”是非-D-甘露糖单糖残基。
10.权利要求9的组合物，其中X是鼠李糖。
11.权利要求1的组合物，其中HIV的低聚-D-甘露糖部分存在于HIV糖蛋白120(gp120)或HIV糖蛋白41(gp41)中。
12.权利要求11的组合物，其中HIV的低聚-D-甘露糖部分是在gp120的Asn332或Asn392处作为N-聚糖连接的低聚-D-甘露糖部分。
13.权利要求1的组合物，其中所述免疫原性应答是包括特异性地结合于HIV的低聚-D-甘露糖部分的抗体的产生在内的体液应答。
14.诱导针对包括低聚-D-甘露糖部分的抗原的免疫原性应答的方法，所述方法包括对有此需要的受试者给予权利要求1的组合物。
15.用于诱导针对HIV的免疫原性应答的抗原的制备方法，所述方法包括：
(a)用第一糖苷酶处理HIV低聚-D-甘露糖部分，以除去至少一个D-甘露糖残基；和
(b)使经过处理的低聚-D-甘露糖部分与至少一个非-D-甘露糖单糖残基在第二糖苷酶的存在下反应，以便提供取代的低聚-D-甘露糖部分，由此制备用于诱导针对HIV的免疫原性应答的抗原。
16.权利要求15的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖部分存在于HIV gp120或HIV gp41中。
17.权利要求16的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖部分存在于HIV gp120中。
18.权利要求17的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖部分为Man9GlcNAc2。
19.权利要求17的方法，其中所述低聚-D-甘露糖部分为连接于gp120的Asn332或Asn392的N-聚糖。
20.权利要求15的方法，其中所述第一糖苷酶是甘露糖苷酶。
21.权利要求20的方法，其中所述甘露糖苷酶是外切甘露糖苷酶。
22.权利要求15的方法，其中所述第二糖苷酶是甘露糖苷酶。
23.权利要求22的方法，其中所述甘露糖苷酶是保留酶，并且所述非-D-甘露糖单糖残基具有α-端基异构构型。
24.权利要求23的方法，其中所述保留酶是刀豆甘露糖苷酶。
25.权利要求22的方法，其中所述甘露糖苷酶是转化酶，并且所述非-D-甘露糖单糖残基具有β-端基异构构型。
26.权利要求25的方法，其中所述转化酶是第I类ER外切甘露糖苷酶。
27.权利要求15的方法，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括D-甘露糖的结构模拟物。
28.权利要求15的方法，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括在人类中为抗原性的单糖残基。
29.权利要求15的方法，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括在人类中为非天然的单糖残基。
30.权利要求15的方法，其中所述至少一个非-D-甘露糖单糖残基包括选自以下的单糖残基：脱氧单糖、卤素取代的单糖、硝基取代的单糖、氨基取代的单糖、硫取代的单糖、磷取代的单糖、和对硝基苯基取代的单糖。
31.权利要求15的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖部分是糖蛋白、糖缀合物支架、或树枝型聚合物的一部分。
32.权利要求15的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖是糖蛋白的一部分，所述糖蛋白包括作为N-聚糖连接的低聚-D-甘露糖部分。
33.权利要求15的方法，其中所述取代的低聚-D-甘露糖部分具有选自以下的式子：Rham1Man8GlcNAc2、Rham1Man7GlcNAc2、和Rham1Man6GlcNAc2。
34.权利要求15的方法，其中所述HIV低聚-D-甘露糖部分是HIV糖蛋白的一部分。
35.权利要求34的方法，其中所述HIV糖蛋白是gp120或gp41。
36.权利要求35的方法，其中所述HIV糖蛋白是gp120，并且所述低聚-D-甘露糖部分作为N-聚糖连接在Asn332或Asn392处。
37.权利要求15的方法，其中所述取代的低聚-D-甘露糖部分是Rham1Man8GlcNAc2。
38.权利要求15的方法，其中所述非-D-甘露糖单糖残基包括在羟基位置的取代。
39.权利要求38的方法，其中所述取代包括离去基团。
40.权利要求39的方法，其中所述离去基团为对硝基苯基基团。
41.权利要求15的方法，其中所述非-D-甘露糖单糖残基包括对硝基苯基-α-D-鼠李糖。
42.根据权利要求15的方法制备的包括取代的低聚-D-甘露糖部分的抗原。
43.包括权利要求42的抗原和载体的药物组合物。
44.权利要求43的组合物，其中所述抗原以有效诱导针对HIV的免疫原性应答的浓度存在于组合物中。
CN200880006145A 2007-01-29 2008-01-28 糖免疫原 Pending CN101622010A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US88703307P 2007-01-29 2007-01-29
US60/887,033 2007-01-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101622010A true CN101622010A (zh) 2010-01-06

Family

ID=39668264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200880006145A Pending CN101622010A (zh) 2007-01-29 2008-01-28 糖免疫原

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20080181913A1 (zh)
EP (1) EP2109458A2 (zh)
JP (1) JP2010516784A (zh)
KR (1) KR20090103939A (zh)
CN (1) CN101622010A (zh)
CA (1) CA2676995A1 (zh)
WO (1) WO2008094849A2 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2766037A4 (en) * 2011-10-12 2015-08-05 Scripps Research Inst HIV-1 GP-120 MINI-V3 LOOP AND USES THEREOF
KR20150063079A (ko) * 2012-09-28 2015-06-08 엘리스 클라인 감염성 질환의 치료를 위한 글리코시다아제 요법
CN105017346B (zh) * 2015-07-02 2017-09-12 中国农业大学 三六支化甘露五糖六糖对甲氧基苯基糖苷及其制备方法与应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6069235A (en) * 1994-02-23 2000-05-30 Monsanto Company Method for carbohydrate engineering of glycoproteins
US6770468B1 (en) * 1999-09-14 2004-08-03 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Phosphodiester-α-GlcNAcase of the lysosomal targeting pathway
US6534300B1 (en) * 1999-09-14 2003-03-18 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Methods for producing highly phosphorylated lysosomal hydrolases
US7232670B2 (en) * 2001-09-28 2007-06-19 St. Jude Children's Research Hospital Targeting proteins to cells expressing mannose receptors via expression in insect cells
US6800472B2 (en) * 2001-12-21 2004-10-05 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Expression of lysosomal hydrolase in cells expressing pro-N-acetylglucosamine-1-phosphodiester α-N-acetyl glucosimanidase
WO2004033663A2 (en) * 2002-10-11 2004-04-22 University Of Maryland Biotechnology Institute Off. Of Research Admin./ Tech. Dev. Carbohydrate-based synthetic vaccines for hiv
AU2003302235A1 (en) * 2002-12-03 2004-06-23 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Gp120 specific antigens, conjugates thereof, methods for their preparation and uses thereof
EP2058004A1 (en) * 2005-03-16 2009-05-13 University of Oxford Mannose immunogens for HIV-1

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008094849A3 (en) 2008-12-31
KR20090103939A (ko) 2009-10-01
CA2676995A1 (en) 2008-08-07
EP2109458A2 (en) 2009-10-21
WO2008094849A2 (en) 2008-08-07
JP2010516784A (ja) 2010-05-20
US20080181913A1 (en) 2008-07-31
US20110045021A1 (en) 2011-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fenouillet et al. Functions of HIV envelope glycans
Binley et al. Role of complex carbohydrates in human immunodeficiency virus type 1 infection and resistance to antibody neutralization
RU2401665C2 (ru) Иммуногенная композиция и способ разработки вакцины, основанной на вич, инактивированном псораленом
US7556806B2 (en) Carbohydrate-based synthetic vaccines for HIV
Burton et al. A blueprint for HIV vaccine discovery
Fernandez-Tejada et al. Designing synthetic vaccines for HIV
Berman Development of bivalent rgp120 vaccines to prevent HIV type 1 infection.
Sliepen et al. HIV-1 envelope glycoprotein immunogens to induce broadly neutralizing antibodies
EP2058004A1 (en) Mannose immunogens for HIV-1
El-Amad et al. Resistance of chimpanzees immunized with recombinant gp120SF2 to challenge by HIV-1SF2
Rubens et al. HIV vaccine: recent advances, current roadblocks, and future directions
del Moral-Sánchez et al. Strategies for inducing effective neutralizing antibody responses against HIV-1
CN106170296A (zh) 具有能被广谱中和抗体识别的抗原表位的hiv‑1包膜蛋白及其片段
Deimel et al. Glycans in HIV-1 vaccine design–engaging the shield
CN101622010A (zh) 糖免疫原
SJÖLANDER et al. N-Linked Glycans in the CD4-Binding Domain of Human Immunodeficiency Virus Type 1 Envelope Glycoprotein gp160 Are Essential for thein VivoPriming of T Cells Recognizing an Epitope Located in Their Vicinity
Liu et al. Altering the Specificity of the Antibody Response to HIV gp120 with a Glycoconjugate Antigen
Galili Increasing efficacy of enveloped whole-virus vaccines by in situ immune-complexing with the natural anti-gal antibody
EP2745844A1 (en) Molecular mimic mucosal aids vaccine
Barnes Strategies for an AIDS Vaccine: In their attempts to develop a vaccine against AIDS, many scientists focus on raising antibodies to a protein from the AIDS virus, a strategy that some researchers think may require modification
Mayr et al. Antibodies targeting the envelope of HIV‐1
Shivatare et al. Immunogenicity Evaluation of N-Glycans Recognized by HIV Broadly Neutralizing Antibodies
Hioe et al. The influence of HIV envelope glycosylation on adaptive immune response
Pashov et al. Carbohydrate targets in HIV vaccine research: lessons from failures
Åkerblom et al. Cross-Neutralizing Antibodies to HIV-1 in Mice After Immunization with gp160 Iscoms. Dissection of the Immune Response

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Open date: 20100106