CN101598716B - 一种棉酚快速检测试纸条及制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于化学测试分析技术领域，具体涉及一种适用于棉酚快速检测的试纸条，及其制备方法与应用。本发明的试纸条制备过程包括检测试剂盒和配套使用的棉酚标准比色卡的制备。所述的核心试剂包括显色剂乙酰丙酮铁或三氯化铁或硫酸铁，盐酸和冰醋酸的混酸溶液，络合剂邻非哕啉和固载剂硅溶胶或可溶性淀粉。与本发明试纸条配套使用的棉酚标准比色卡是用十个点的棉酚标准溶液与所述试纸条显色，得到色阶不同的棉酚标准比色卡。本发明的试纸条适用于棉籽类产品中棉酚的快速检测，具有方法简便，检测灵敏和便于推广的突出优点。

Description

一种棉酚快速检测试纸条及制备方法与应用

技术领域

本发明涉及化学测试分析技术领域，具体的说，涉及一种棉酚检测试纸条及制备方法与应用。

技术背景

棉酚(gossypol)又名棉子醇或棉毒素，是棉属植物体内的一种黄色多酚型物质，存在于棉株的各部器官，以棉籽仁中含量最高。棉酚的分子式为C₃₀H₃₀O₈，其分子结构中含有非常活泼的羟基和醛基。棉酚溶于甲醇、乙醇以及丙酮等有机溶剂，不溶于水和低沸点的石油醚。棉酚呈弱酸性，能与氢氧化钠、碳酸钾的水溶液反应，生成二钠盐或二钾盐。同时极易被过氧化氢、费林试剂等许多氧化剂氧化，甚至被空气中的氧气氧化而变质。

棉酚在棉籽油、棉籽蛋白等中的存在形式可分为游离棉酚(FG)和结合棉酚(BG)，其中游离棉酚是一种有毒的化学物质(最近有文献报道结合棉酚也有毒)，过量的吸收，能够影响人的生育功能，急性中毒常出现皮肤和胃灼烧、恶心、呕吐、腹泻、头痛，危急时下肢麻痹、昏迷、抽搐、便血，乃至因呼吸、循环系统衰竭而死亡。普通的棉籽仁中含有棉酚0.20-2.0％，加工后的棉籽产品中含棉酚0.06-2％，远超过国际食用卫生标准0.045％。

棉酚的检测方法很多，目前主要应用的有紫外分光光度法、比色法、高效液相色谱法、原子吸收分光光谱法、红外光谱法、气相色谱法、流动注射法、极谱法以及薄层层析法等。其中紫外分光光度法、比色法、高效液相色谱法是较常用的方法。紫外分光光度法(UV)是测定样品中FG的一种国标方法。首先用纯棉酚标样配成一系列不同浓度的溶液，在378nm处测定吸光度，制作标准工作曲线，然后将样品中的FG用70％丙酮提取，同样在378nm处测定其吸光度，再根据其吸光度的大小与标准工作曲线比较定量。分光光度法是在国内外应用较普遍的一种检测方法。分光光度法又分为苯胺法、三氯化锑法、甲氧基苯胺法和间苯三酚法。其中苯胺法应用最多，该方法不仅是检测FG的另一种国标方法，也是美国油脂化学协会(AOCS)认可的分析方法。苯胺法是用70％丙酮试剂提取样品中FG后，在95％乙醇溶液中，加苯胺试剂与FG反应生成黄色物质二苯胺棉酚，再于445nm处测吸光度，然后与标准工作曲线比色定量。高效液相色谱法(HPLC)具有高效、高速、高灵敏度等特点，将HPLC用作棉酚检测在国内外已研究多年。但是因为流动相、萃取剂及色谱柱等因素的差异，而使得结果大多数不太满意。目前，以甲醇一水一磷酸作流动相的报道较多。HPLC法的关键在于选择合适的萃取剂、流动相和色谱柱。

以上关于棉酚的检测方法各有优劣，有的检测方法灵敏度高，有的检测方法选择性好，但存在仪器昂贵，操作复杂，专业性强，不利于普及等缺点。因此，在棉籽的深加工前及深加工过程中，很有必要探索出一种快速、准确、简便的方法来检测棉籽中的游离棉酚含量，以便能及时、准确、有效地监控原料和产品的质量。

发明内容

本发明的目的是针对现有检测技术的不足，提供一种灵敏度高，显色效果好的棉酚检测试纸条及其制备方法，并将该棉酚检测试纸条用于棉籽油、棉籽蛋白等产品中棉酚含量的快速检测。

本发明通过以下技术方案实现：

一种棉酚快速检测的试纸条，它包括下列试剂：

①显色剂乙酰丙酮铁或三氯化铁或硫酸铁：0.01-0.05mol/L；

②盐酸，冰醋酸的混酸溶液：摩尔比为1∶2；

③络合剂邻非啰啉：质量百分比为0.36％-0.5％；

④固载剂硅溶胶或可溶性淀粉：质量百分比为1％-5％；

它是按照以下步骤制备的：

(1)按配方量称取显色剂溶于100ml乙醇中，使其摩尔浓度至0.01-0.05mol/L，取其中10ml溶液稀释至0.002mol/L；按配方量称取络合剂溶于盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使该溶液的质量百分含量至0.36-0.5％，等体积混合所述的显色剂、络合剂和乙醇得到棉酚试剂盒；

(2)按配方量称取所述的固载剂加入到蒸馏水中，加热溶解得到浓度为1-5％的溶液A；按配方量称取络合剂加入到盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，搅拌溶解，使其浓度至0.36％-0.5％；按配方量称取所述的显色剂溶于乙醇中，使其摩尔浓度为0.01-0.05mol/L；等体积混合络合剂，显色剂和乙醇，得到溶液B；将溶液A与溶液B按体积比为1∶10混合组成显色液；将滤纸浸入到所述的显色液中，按照每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下干燥，剪切，包装，得到所述的棉酚检测试纸条；

与本发明配套使用的棉酚标准比色卡的制备步骤如下：配制质量百分浓度为0.01-0.30％棉酚标准溶液中取十个点，用所述的棉酚检测试纸条分别以上述十个点的棉酚标准溶液进行显色，根据棉酚标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照棉酚标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

一种棉酚快速检测试纸条的制备方法，它包括下列试剂：

①显色剂乙酰丙酮铁或三氯化铁或硫酸铁：0.01-0.05mol/L；

②盐酸，冰醋酸的混酸溶液：摩尔比为1∶2；

③络合剂邻非啰啉：质量百分比为0.36％-0.5％；

④固载剂硅溶胶或可溶性淀粉：质量百分比为1％-5％；

它是按照以下步骤制备的：

(1)按配方量称取显色剂溶于100ml乙醇中，使其摩尔浓度至0.01-0.05mol/L，取其中10ml溶液稀释至0.002mol/L；按配方量称取络合剂溶于盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使该溶液的质量百分含量至0.36-0.5％，等体积混合所述的显色剂、络合剂和乙醇得到棉酚试剂盒；

(2)按配方量称取所述的固载剂加入到蒸馏水中，加热溶解得到浓度为1-5％的溶液A；按配方量称取络合剂加入到盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，搅拌溶解，使其浓度至0.36％-0.5％；按配方量称取所述的显色剂溶于乙醇中，使其摩尔浓度为0.01-0.05mol/L；等体积混合络合剂，显色剂和乙醇，得到溶液B；将溶液A与溶液B按体积比为1∶10混合组成显色液；将滤纸浸入到所述的显色液中，按照每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下干燥，剪切，包装，得到所述的棉酚检测试纸条。

作为与所述的试纸条条联用的本发明还包括一个标准比色卡的制备，具体步骤如下：配制质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％十个点棉酚标准溶液，用所述的棉酚检测试纸条分别以上述十个点的棉酚标准溶液进行显色，根据棉酚标准溶液的显色结果制作棉酚标准色块，将所述的棉酚标准色块按照棉酚标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

本发明的应用方法是：

称取2-4g的待测样品，加入5-10ml的提取液，常温下，避光浸提30-40分钟制得待测液，取上述棉酚检测试纸条滴加待测液(按每1cm²检测试纸条滴加1滴待测液)，显色2min后，与本发明提供的棉酚标准比色卡进行比对，得到待测样品棉酚的含量或范围。

所述的待测样品包括棉籽仁(粉碎)，棉籽油，棉籽蛋白等含棉酚产品。所述的提取液包括甲醇，乙醇，丙酮等有机溶剂。

棉酚含量或范围可根据以下公式计算得到：

棉酚质量百分含量或范围X％＝(AρV)/M

其中：A是比色值：通过与比色卡比对获得；V：提取液的体积(mL)；ρ：提取液的密度(g/mL)；M：待测样品的质量(g)。

本发明的有益效果

本发明提供的棉酚检测方法具有简单、方便、快捷等特性，可以直观的检测出待测样品中棉酚的含量或范围。与其它检查棉酚的方法相比较，本发明无需贵重的精密仪器，也不需经过培训的专业技术人员，有利于推广和普及。

附图说明

图1：不同反应比例的UV-vis吸收光谱图；

图2：不同反应时间的UV-vis吸收光谱图；

图3：不同浓度棉酚反应后的UV-vis吸收光谱图；

图4：棉酚标准曲线；

图5：不同浓度棉酚反应后的数码图(从左到右浓度分别为0.0％，0.01％，0.02％0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％，0.30％)；

图6：实际样品试剂盒检测数码图片(图6a：棉籽油；图6b：棉籽仁)

图7：棉酚检测试纸条数码图片

图8：标准比色卡

图9：实际样品试纸条检测数码图片(图9a：棉籽油；图9b：棉籽仁)

图10：实际样品中棉酚检测数码图片(左为棉籽油，右为棉籽仁)

具体实施方式

实施例1  棉酚试剂盒和标准色带的制备

制备棉酚(Gossypol)试剂盒所需试剂：乙酰丙酮铁(Fe(acac)₃)和邻非啰啉以及溶剂乙醇，冰醋酸和盐酸等。称取0.353g的乙酰丙酮铁溶于100ml乙醇中，乙酰丙酮铁的摩尔浓度为0.01mol/L，取其中10ml稀释成为0.002mol/L；称取0.36g邻非啰啉溶于100ml盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使得溶液的质量百分含量为0.36％。分别取0.02mol/L的乙酰丙酮铁1ml，0.36％的邻非啰啉1ml和乙醇1ml放人5ml的比色管中混合均匀得到棉酚试剂盒。

(1)乙酰丙酮铁和棉酚的体积比对显色反应的影响

乙酰丙酮铁与棉酚的体积比分别为1∶1-4，两者反应3min后的UV-vis吸收光谱如图1所示，从图中得知，纯棉酚在378nm(图1中a曲线)处有一特征吸收峰，纯乙酰丙酮铁在350nm(图1中b曲线)处有一特征吸收峰。随着棉酚量的增加(体积比由1∶1增加到1∶4)二者反应后在360nm(图1中c，d，e，f曲线)处出现一个新的吸收峰，且吸收强度逐渐增大(体积比为1∶1时无吸收)。由此可判断乙酰丙酮铁和棉酚的最佳体积比为1∶1。

(2)反应时间对显色反应的影响

乙酰丙酮铁和棉酚的体积比为1∶1，反应时间分别设定为1min，2min和3min，反应时间对显色反应的影响如图2所示，当反应只进行1min时，从图中a曲线可以看出，在378nm处有一个明显的吸收峰，说明溶液中存在没反应的棉酚，反应还需进一步进行。当反应进行2min后，378nm处的吸收峰消失，且反应2min和反应3min的吸收曲线重叠(图中b曲线和c曲线)，说明反应2min后反应完成。所以设定的最佳反应时间为2min。

(3)试剂盒的标准色带的制备

配置一系列的棉酚标准溶液(0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％，0.30％)加入的棉酚试剂盒中，反应2min后形成一试剂盒标准色带(如图5)，其UV-vis吸收光谱如图3所示。从图5的数码图片可以清楚的看出，随着棉酚浓度的增加，反应后溶液的颜色逐渐加深。从图3的UV-vis吸收光谱也可得到一致的信息，随着棉酚浓度的增加，溶液的吸光度值增加明显。

图5中的不同颜色对应不同浓度的标准棉酚，将数码图片剪辑整理得到试剂盒标准色带。

实施例2：利用本发明的试剂盒检测棉籽油中棉酚的含量

称取2g棉籽油放入一锥形瓶中，同时加入5ml的甲醇，盖上瓶塞，常温下避光、振荡浸提30min得到待测样品。取待测样品1ml放入按照实施例1所述方法制备的棉酚试剂盒中，显色反应2min(如图6a)。通过与试剂盒标准色带比较，其比色值介于0-0.01％之间，代入棉酚质量百分含量或范围X％＝(AρV)/M公式，得出棉籽油中棉酚含量范围为0-0.02％。此样品采用UV-vis分光光度法检测棉酚，测得其吸光度值为0.33A，从棉酚标准曲线(图4)上查得其浓度为61ug/ml，经计算得出棉籽油中棉酚含量为0.015％。通过对比，采用试剂盒检测棉籽油中棉酚的含量具有很高的可靠性。

实施例3：利用本发明的试剂盒检测棉籽仁中棉酚的含量

棉籽仁中棉酚的提取参照实施例2的方法进行。称取2g棉籽仁，粉碎后放入一锥形瓶中，同时加入5ml的甲醇，盖上瓶塞，常温下避光、振荡浸提40min得到棉酚提取液。取棉酚提取液1ml放入按照实施例1所述方法制备的棉酚试剂盒中，显色反应2min(如图6b)。通过与试剂盒标准色带比较，其比色值介于0.15％-0.20％之间，代入棉酚质量百分含量或范围X％＝(AρV)/M公式，得出棉籽油中棉酚含量范围为0.30％-0.40％。取上述棉酚提取液1ml稀释10倍后采用UV-vis分光光度分析棉酚含量，其吸光度值为0.71A，从棉酚标准曲线(图4)中查得稀释后棉酚的浓度为131ug/ml，经计算棉籽仁中棉酚的质量百分含量为0.33％。试剂盒检测结果与采用仪器检查结果一致。

实施例4：棉酚检测试纸条和标准比色卡的制备1

制备棉酚检测试纸条所需试剂包括乙酰丙酮，邻非啰啉，乙醇，冰醋酸，盐酸和固载剂硅溶胶。称取1g的硅溶胶加入到100mL的蒸馏水中，加热溶解得到透明溶液A；称取0.353g的乙酰丙酮铁溶于100ml乙醇中，乙酰丙酮铁的摩尔浓度为0.01mol/L，取20ml稀释成0.001mol/L；称取0.36g邻非啰啉溶于100ml盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使得溶液的质量百分含量为0.36％，取50ml稀释成0.15％。分别量取0.001mol/L的乙酰丙酮铁50ml，0.15％的邻非啰啉50ml和乙醇溶剂50ml于一250ml烧杯中，搅拌混合均匀得混合溶液B。将A溶液与B溶液按照1∶10体积比混合，即取10ml的A溶液与100ml的B溶液混合得到显色液。最后将滤纸浸入到显色液中，每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下用真空干燥(真空干燥箱生产产家：中国河南省巩义市予华仪器有限公司，按照仪器说明书操作)，将该试纸条剪切成0.5cm宽，2cm长后包装，即得棉酚检测试纸条(如图7)。

标准比色卡的制备配置质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％等十个点梯度棉酚标准溶液，将所制备的棉酚检测试纸条分别用不同浓度的棉酚标准溶液进行显色，根据标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照棉酚标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡(如图8)。

实施例5  棉酚检测试纸条和标准比色卡的制备2

制备棉酚检测试纸条所需试剂包括乙酰丙酮，邻非啰啉，乙醇，冰醋酸，盐酸和固载剂可溶性淀粉。称取2g的可溶性淀粉加入到100mL的蒸馏水中，加热溶解得到透明溶液A；称取0.162g的三氯化铁溶于100ml乙醇中，三氯化铁的摩尔浓度为0.01mol/L，取20ml稀释成0.001mol/L；称取0.42g邻非啰啉溶于100ml盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使得溶液的质量百分含量为0.42％，取50ml稀释成0.2％。分别量取0.001mol/L的三氯化铁50ml，0.2％的邻非啰啉50ml和乙醇溶剂50ml于一250ml烧杯中，搅拌混合均匀得混合溶液B。将A溶液与B溶液按照1∶10体积比混合，即取10ml的A溶液与100ml的B溶液混合得到显色液。最后将滤纸浸入到显色液中，每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下真空干燥(真空干燥箱生产产家：中国河南省巩义市予华仪器有限公司，按照仪器说明书操作)，将该试纸条条剪切成0.5cm宽，2cm长后包装，即得棉酚检测试纸条。

标准比色卡的制备配置质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％等十个点梯度棉酚标准溶液，将所制备的棉酚检测试纸条分别用不同浓度的棉酚标准溶液进行显色，根据标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照棉酚标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

实施例6  棉酚检测试纸条和标准比色卡的制备3

制备棉酚检测试纸条所需试剂包括乙酰丙酮，邻非啰啉，乙醇，冰醋酸，盐酸和固载剂可溶性淀粉。(3)称取5g的可溶性淀粉加入到100mL的蒸馏水中，加热溶解得到透明溶液A；称取0.526g的硫酸铁溶于100ml乙醇中，硫酸铁的摩尔浓度为0.01mol/L，取20ml稀释成0.001mol/L；称取0.5g邻非啰啉溶于100ml盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使得溶液的质量百分含量为0.5％，取50ml稀释成0.25％。分别量取0.001mol/L的硫酸铁50ml，0.25％的邻非啰啉50ml和乙醇溶剂50ml于一250ml烧杯中，搅拌混合均匀得混合溶液B。将A溶液与B溶液按照1∶10体积比混合，即取10ml的A溶液与100ml的B溶液混合得到显色液。最后将滤纸浸入到显色液中，每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下真空干燥(真空干燥箱生产产家：中国河南省巩义市予华仪器有限公司，按照仪器说明书操作)，剪切成0.5cm宽，2cm长后包装，即得棉酚检测试纸条。

标准比色卡的制备配置质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％等十个点梯度棉酚标准溶液，将所制备的棉酚检测试纸条分别用不同浓度的棉酚标准溶液进行显色，根据标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照棉酚标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

实施例7：利用本发明的棉酚检测试纸条检测棉籽油中棉酚的含量

棉籽油中棉酚的提取采用实施例2中的方法进行。称取4g棉籽油放入一锥形瓶中，同时加入10ml的甲醇，盖上瓶塞，常温下避光、振荡浸提30min得到待测样品。取待测样品50ul滴到按照实施例4所述方法制备的棉酚检测试纸条上，显色反应2min(如图9a；图10)。通过与比色卡比较，其比色值介于0-0.01％之间，代入棉酚质量百分含量或范围X％＝(AρV)/M公式，得出棉籽油中棉酚含量范围为0-0.02％。此样品采用UV-vis分光光度法检测棉酚，测得其吸光度值为0.33A，从棉酚标准曲线(图4)上查得其浓度为61ug/ml，经计算得出棉籽油中棉酚含量为0.015％。通过对比，采用棉酚检测试纸条检测棉籽油中棉酚的含量是可行的。

实施例8：利用本发明的棉酚检测试纸条检测棉籽仁中棉酚含量

棉籽仁棉酚的提取参照实施例2的方法进行。称取4g棉籽仁，粉碎后放入一锥形瓶中，同时加入10ml的甲醇，盖上瓶塞，常温下避光、振荡浸提40min得到棉酚提取液。取棉酚提取液50ul滴到按照实施例5所述方法制备的棉酚检测试纸条上，，显色反应2min(如图9b；图10)。通过与比色卡比较，其比色值大于0.15％，代入棉酚质量百分含量或范围X％＝(AρV)/M公式，得出棉籽油中棉酚含量超过0.30％。取上述棉酚提取液1ml稀释10倍后采用UV-vis分光光度分析棉酚含量，其吸光度值为0.71A，从棉酚标准曲线(图4)中查得稀释后棉酚的浓度为131ug/ml，经计算棉籽仁中棉酚的质量百分含量为0.33％。棉酚检测试纸条检测结果与采用仪器检查结果一致。

Claims (2)

1.一种棉酚快速检测试纸条，其特征在于，它由试剂盒，试纸条和标准比色卡组成，如下所示：

显色剂乙酰丙酮铁或三氯化铁或硫酸铁：0.01-0.05mol/L；

盐酸，冰醋酸的混酸溶液：摩尔比为1∶2；

络合剂邻菲啰啉：质量百分比为0.36％-0.5％；

固载剂硅溶胶或可溶性淀粉：质量百分比为1％-5％；

棉酚标准比色卡；

它是按照以下步骤制备的：

(1)试剂盒的制备：按配方量称取显色剂溶于100ml乙醇中，使其摩尔浓度至0.01-0.05mol/L，取其中10ml溶液稀释至0.002mol/L；按配方量称取络合剂溶于盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使该溶液的质量百分含量至0.36-0.5％，等体积混合所述的显色剂、络合剂和乙醇得到棉酚试剂盒；

(2)试纸条的制备：按配方量称取所述的固载剂加入到蒸馏水中，加热溶解得到浓度为1-5％的溶液A；按配方量称取络合剂加入到盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，搅拌溶解，使其浓度至0.36％-0.5％；按配方量称取所述的显色剂溶于乙醇中，使其摩尔浓度为0.01-0.05mol/L；等体积混合络合剂，显色剂和乙醇，得到溶液B；将溶液A与溶液B按体积比为1∶10混合组成显色液；将滤纸浸入到所述的显色液中，按照每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下干燥，剪切，包装，得到所述的棉酚检测试纸条；

(3)棉酚标准比色卡的制备：配制质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％十个点棉酚标准溶液，用步骤(2)所述的棉酚检测试纸条分别对所述的十个点的棉酚标准溶液进行显色，根据标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

2.一种棉酚快速检测试纸条的制备方法，其特征在于，它由试剂盒，试纸条和标准比色卡组成，如下所示：

显色剂乙酰丙酮铁或三氯化铁或硫酸铁：0.01-0.05mol/L；

盐酸，冰醋酸的混酸溶液：摩尔比为1∶2；

络合剂邻菲啰啉：质量百分比为0.36％-0.5％；

固载剂硅溶胶或可溶性淀粉：质量百分比为1％-5％；

棉酚标准比色卡；

它是按照以下步骤制备的：

(1)试剂盒的制备：按配方量称取显色剂溶于100ml乙醇中，使其摩尔浓度至0.01-0.05mol/L，取其中10ml溶液稀释至0.002mol/L；按配方量称取络合剂溶于盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，使该溶液的质量百分含量至0.36-0.5％，等体积混合所述的显色剂、络合剂和乙醇得到棉酚试剂盒；

(2)试纸条的制备：按配方量称取所述的固载剂加入到蒸馏水中，加热溶解得到浓度为1-5％的溶液A；按配方量称取络合剂加入到盐酸和冰醋酸的混酸溶液中，搅拌溶解，使其浓度至0.36％-0.5％；按配方量称取所述的显色剂溶于乙醇中，使其摩尔浓度为0.01-0.05mol/L；等体积混合络合剂，显色剂和乙醇，得到溶液B；将溶液A与溶液B按体积比为1∶10混合组成显色液；将滤纸浸入到所述的显色液中，按照每1cm²的滤纸加入1mL的显色液，室温下干燥，剪切，包装，得到所述的棉酚检测试纸条；

(3)棉酚标准比色卡的制备：配制质量百分比浓度为0.01％，0.02％，0.04％，0.06％，0.09％，0.12％，0.15％，0.20％，0.25％和0.30％十个点棉酚标准溶液，用步骤(2)所述的棉酚检测试纸条分别对所述的十个点的棉酚标准溶液进行显色，根据标准溶液的显色结果制作标准色块，将标准色块按照标准溶液浓度的高低顺序进行排列，粘贴制成棉酚标准比色卡。

Images