CN101574386B - 雷公藤活性成分调控热休克蛋白和视黄醇X受体α的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种雷公藤提取物及其活性成分用于制备调控视黄醇X受体的活性与功能的药物，视黄醇X受体用于筛选雷公藤提取物及其包含的活性成分，以及视黄醇X受体用于指导雷公藤包含的活性成分的结构修饰的应用。同时本发明揭示了雷公藤活性成分是通过诱导热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的相互作用，从而调控HSP70依赖的RXRα转录活性，这为RXRα活性相关药物的筛选提供了新的筛选通路。

Description

雷公藤活性成分调控热休克蛋白和视黄醇X受体α的应用

技术领域

本发明涉及中草药领域，具体地说，是关于雷公藤的应用，更具体地说，是关于雷公藤活性成分调控热休克蛋白和视黄醇X受体α的应用。

背景技术

人体的许多生命活动受到一类脂溶性激素和维生素，如糖皮质激素、盐皮质激素、雄性激素、雌性激素、甲状腺激素、维生素A和维生素D等的调控，这些脂溶性激素和维生素可以穿过细胞膜进入细胞内，并通过细胞核受体的介导发挥作用。由于这些受体在结构上非常相似，人们把所有的这类受体归纳为一类很大的家族，统称为激素核受体超家族。这是一类配体依赖的转录因子，成员众多，共分29个亚家族200余个成员(Novac N，et al.，Curr Drug Targets Inflamm Allergy，2004；3：335-46；Gronemeyer H，et al.，Nat Rev DrugDiscov.2004Nov；3：950-64.)。

某些化学小分子可以直接或者间接地作用于核受体，参与人体的代谢、生长、发育、分化、死亡和免疫等几乎所有的生理过程的调节。核受体表达或调控异常与人体的许多疾病如心血管疾病、糖尿病、痴呆症和癌症密切相关，针对核受体开发的药物也因而广泛应用于这些疾病的治疗(Gronemeyer H，et al.，Nat Rev Drug Discov.，2004；3：950-64；MetivierR，et al.，EMBO Rep.2006Feb；7：161-7；Cases M，et al.，Curr Top Med Chem.2005；5：763-72.)。

在核受体超家族中，一个引人注目的亚家族是维生素A受体，包括视黄酸受体(RAR)和视黄醇X受体(RXR)两类，由于利用的启动子和剪切方式的不同，每一类受体各有α、β和γ三种不同亚型(SzantoA，et al.，Cell Death Differ.2004 Dec；11 Suppl 2：S126-43.；OkunoM，et al.，Curr Cancer Drug Targets.2004 May；4：285-98)。此类受体的许多激动剂或拮抗剂已被证明可应用于治疗人类以及动物的多种疾病，包括用于预防和治疗癌症和癌前期病变，如乳腺癌、皮肤癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫癌、结肠癌、膀胱癌、食道癌、胃癌、肺癌、喉癌、口腔癌、血液和淋巴系统肿瘤，用于治疗组织非典型增生、发育障碍、粘膜白斑病、粘膜乳头瘤以及卡波西肉瘤。这类药物近年来在癌症的治疗中备受瞩目(OkunoM，et al.，Curr Cancer Drug Targets，4：285-98，2004)。同时由于参与对代谢紊乱的调节，视黄醇类活性化合物还被开发应用于治疗II型糖尿病、高脂质血症和动脉硬化症(Hong SE，et al.，J Med Food，7：320-6，2004；Villarroya F，et al.Curr Med Chem，11：795-805，2004)。

由于RXR参与许多核受体以及生长和凋亡信号转导通路中关键信号分子的功能调控，该基因被认为是核受体超家族中最具有开发前景的重要成员。其作用机制是近年来才被逐渐认识的，即核受体经相应配体或小分子化合物诱导后可以通过核受体和核受体之间的二聚合作用，高亲和性地同DNA上的应答元件结合，调控特定基因的转录活性，产生生物学效应。RXRα在核受体超家族中属于维生素A受体亚家族成员，该基因受维生素A代谢衍生物，如9-cis-RA，以及一些多聚非饱和脂肪酸，如DHA等的调控，主要通过形成同源或异源二聚体的形式起作用，可与其形成异源二聚体的核受体包括维生素D受体(VDR)、过氧物酶体增殖激活受体(PPAR)以及多种孤儿受体，如肝X受体(LXR)、胚胎X受体(PXR)、持续激活受体(CAR)和孤儿受体TR3/Nur77/NGFI-B等。RXRα的这一特性，使其成为核受体超家族中最重要的成员之一(Kastner P，et al，Cell，1995，83，859-869；Mangelsdorf D.J.，et al.，Cell，1995，83，841-850；Zhang XK，et al.，Nature，1992，358，587-591)。遗传学研究进一步表明，RXRα^-/-/RXRβ^-/-缺失突变会发生发育障碍，但表达缺失仅AF2结构域的RXRα-ΔAF2/RXRβ^-/-/RXRγ^-/-不影响发育，显示RXRα的活性不仅仅由于转录活性，还可能作为异源二聚体的沉默的伴随因子或者通过一个不依赖于转录通路的功能起作用(Chen J，et al.，Development.1998 May；125：1943-9)。

由于RXR参与许多核受体以及生长和凋亡信号转导通路中关键信号分子的功能调控，任何影响RXRα表达水平、转录活性或转位等生物学过程的药物均将具有重要的应用价值。

热休克蛋白(HSP)是一类高度保守的蛋白质，普遍存在于生物细胞中。在应激状态下可被诱导表达，故HSP又称为应激蛋白。HSP根据同源程度及相对分子质量的大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP及泛素等几个家族，其中最为重要的是HSP70(Bornfeldt KE，et al.，Cir Res，2000；86(11)：1101-1103)。它在应激反应，特别是在热刺激时，诱导性最显著，合成量最多，是人们侧重研究的一类热休克蛋白。HSP70显示具有“分子伴侣”功能，参与蛋白质合成、加工、折叠、转运等过程。BAG-1蛋白是一种多功能结合蛋白，属于共分子伴侣家族成员。BAG-1可以与分子伴侣HSP70相互作用，并且其很多作用都是由HSP70介导的(Takayama S，et al.，EMBO J，1997 Aug15；16(16)：4887-96)。BAG-1和HSP70结合后可以与多种核受体相作用，如雌激素受体、雄激素受体、糖皮质激素等，从而调整它们的功能(Schmidt U，et al.，J Biol Chem，2003；287(7)：4926-4931)。肿瘤细胞特别是恶性肿瘤细胞常常高表达HSP70和BAG-1，并与人类恶性肿瘤进展有关。对它们的深入研究表明其表达参与了基因调控机制，调节细胞增殖，与肿瘤细胞的分化程度、癌基因及抑癌基因、抗肿瘤凋亡等有着密切的内在关系。

雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook.F，TWHF)属卫矛科植物，又名黄藤、断肠草等。在我国主要分布在长江流域以南的浙江、安徽、江西、湖南、福建、广东、广西和云南等省区及东北长白山地区。本品作为草药，用于治疗关节炎、跌打损伤、皮肤病等在民间流传已久。近年的研究表明雷公藤有抗免疫、抗生育、抗肿瘤、抗炎、抗菌作用，在类风湿关节炎，红斑狼疮、银屑病、亚急性甲状腺炎、哮喘、癌症等的治疗中都有不同程度的疗效。

近年来，中医临床研究证明雷公藤及其活性成分对于抗肿瘤有较好的效果，其研究包括抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡等。但是对于其抗肿瘤作用的机理至今尚不明了，并且一直没有找到一个明确的作用靶点，因而难以对该结构进行有效的修饰和优化，这是制约其进一步开发成为抗癌药物的最主要原因。

发明内容

本申请的发明人首次发现以常规提取方法制备得到的雷公藤提取物可以通过调控核受体RXRα的功能而起作用，其中的活性成分为雷公藤甲素和雷藤酮。

进一步的研究发现，雷公藤提取物及活性成分通过调控RXRα功能从而抑制癌细胞的生长并诱导癌细胞的凋亡，这些不同的细胞系包括：MGC803胃癌细胞、H460肺癌细胞和SMMC7721肝癌细胞等不同癌细胞。这一特性表明雷公藤提取物可以用于治疗和/或预防肿瘤疾病。

更深入的研究发现，雷公藤活性成分通过诱导热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的相互作用，诱导二者的降解，抑制RXRα的转录活性。这一发现揭示了一条新的调控核受体RXRα的途径。

雷公藤活性成分通过抑制热休克蛋白HSP70调控核受体RXRα的活性。

因此，本发明的第一个目的在于，提供一种雷公藤提取物用于制备调控视黄醇X受体的活性与功能的药物的用途。

本发明的第二个目的在于，提供一种视黄醇X受体用于筛选雷公藤提取物及其包含的活性成分的应用。

本发明的第三个目的在于，提供一种视黄醇X受体作为受体靶点用于指导雷公藤包含的活性成分结构修饰的应用。

根据本发明的一个优选实施例，所述雷公藤提取物为雷公藤甲素和/或雷藤酮。

本发明提供的雷公藤提取物可显著抑制多种癌细胞，如肺癌、肝癌、胃癌等的细胞的生长，以及诱导这些癌细胞发生凋亡；同时发现，雷公藤提取物能够抑制RXRα蛋白的转录活性，其对癌细胞生长的抑制和癌细胞凋亡的诱导与对RXRα蛋白的转录活性的抑制密切相关，进一步研究发现，雷公藤提取物中能够诱导RXRα蛋白的降解并抑制其转录活性的有效成分为雷公藤甲素、雷藤酮。

本发明提供的RXR受体可以用于指导筛选雷公藤的活性成分，例如，可通过模拟雷公藤已知活性成分雷公藤甲素与雷藤酮和RXR的作用，从而指导筛选雷公藤其他活性成分，从中获得具有抗肿瘤活性的化合物，并可将获得的化合物改造进而制备可调控RXRα受体的活性与功能的药物。同时，本发明发现可以通过诱导热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的相互作用，从而调控HSP70依赖的RXRα转录活性，这为RXRα相关药物的筛选提供了新的通路。

附图说明

图1显示雷公藤提取物抑制RXRα的转录激活作用的示意图。

图2A为雷公藤提取物对癌细胞的生长抑制作用的示意图。

图2B为雷公藤提取物的生长抑制作用与RXRα相关的示意图。

图3A为雷公藤提取物诱导癌细胞凋亡的示意图。

图3B为雷公藤提取物诱导癌细胞凋亡与RXRα相关的示意图。

图4为雷公藤活性成分雷公藤甲素(图4A)、雷藤酮(图4B)抑制RXRα的转录激活作用。

图5为雷公藤甲素和雷藤酮抑制胃癌细胞生长的示意图。

图6为雷公藤甲素和雷藤酮诱导胃癌细胞凋亡的示意图。

图7为雷公藤活性成分雷公藤甲素(图7A)、雷藤酮(图7B)诱导RXRα蛋白的降解的结果。

图8为雷公藤甲素对HSP70和RXRα蛋白的降解作用。

图9为热休克蛋白HSP70、共分子伴侣BAG-1和RXRα的相互作用的示意图。

图10A为热休克蛋白调控RXRα转录活性的示意图。

图10B为共分子伴侣BAG-1调控RXRα转录活性的示意图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如《分子克隆：实验室手册》(NewYork：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

在本发明的下述实施例中使用的RXRα-GST蛋白按常规方法，通过构建RXRα-GST质粒，并表达、纯化获得。

在本发明的下述实施例中使用的质粒RXRα、(TREpal)2-tk-CAT和β-gal按Zhang XK等提供的方法(Zhang XK，et al.，Nature，355：441-446，1992)，质粒HSP70和BAG-1按Takayama S等提供的方法(Takayama S，et al.，EMBO J，1997 Aug 15；16(16)：4887-96)构建获得。

实施例1、雷公藤提取物的制备

称取100g雷公藤根(市售)，磨碎后加入5倍量95％乙醇回流2次，每次3小时，将提取液合并，用氯仿萃取提取液，萃取液经浓缩干燥后，得到0.36g氯仿提取物，此为活性组分，再将得到的提取物溶于二甲基亚砜(DMSO)，制备成浓度为50mg/ml的雷公藤提取物溶液。

实施例2、雷公藤提取物对RXRα转录活性的调控

以实施例1制备得到的雷公藤提取物进行实验。取CV-1细胞(ATCC，CCL-70)，于48孔组织培养板，培养过夜。

然后，将培养过夜的CV-1细胞，转染质粒RXRα和(TREpal)₂-tk-CAT，并以质粒β-gal作为内对照。

转染6h后换液，在已知可上调RXRα转录活性的化合物如9cis-RA存在的情况下，加或不加入雷公藤提取物处理细胞20h(其中，加入的雷公藤提取物浓度分别为0.125，0.25，0.5，1.0，2.0μg/m1)，再用RLB(reporter lysis buffer，购自Promega)裂解细胞，然后，根据产品说明书的方法，测定裂解液的β-gal值及CAT值，并以CAT值除以β-gal值，获得相对的转录活性值，作相对的转录活性值-提取物浓度柱状图，结果如图1所示。

根据图1的结果，雷公藤提取物可抑制RXRα的转录活性，并呈浓度依赖性。以上结果说明，根据靶点RXR的调控能力，是指导化合物结构改造和活性筛选的重要依据。

实施例3、雷公藤提取物抑制癌细胞生长及与RXRα的相关性

3.1、雷公藤提取物抑制癌细胞生长

利用MTT法检测雷公藤提取物抑制细胞生长，具体过程如下：

取H460肺癌细胞(ATCC，HTB-177)和MGC803胃癌细胞(购自中科院上海细胞库)，分别加入到含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基(购自Hyclone)中，同时，取SMMC7721肝癌细胞(中科院上海细胞库，TChu13)，加入到含10％小牛血清的DMEM培养基(购自Hyclone)中，在37℃，5％二氧化碳培养箱中，于96孔板组织培养板上，培养24小时，然后加入不同浓度(分别是0.125，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0μg/ml)的雷公藤提取物处理5天，再加入15μl MTT溶液(5mg MTT溶于1ml去离子水中，0.22μm滤膜过滤)作用4小时，弃去加有MTT的培养液，再加入200μl DMSO，振摇数分钟后，用酶标仪在490nm处检测每孔吸光度(OD)值，以用药物处理组的OD值除以对照组OD值×100％获得的结果，绘制药物作用后的细胞生长曲线，得到图2A结果。

3.2、雷公藤提取物的抑制癌细胞生长作用与RXRα的相关性

为了进一步研究雷公藤提取物的抑制癌细胞生长作用是否和RXRα有关，取MGC803胃癌细胞，在各个不同浓度的(分别为0.125，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0μg/ml)雷公藤提取物(包括空白对照组)都同时加入RXRα的激动剂9cis-RA或者SR11247，然后，以上述同样的方法进行MTT实验，绘制雷公藤提取物作用后的细胞生长曲线，得到图2B结果。

根据图2A、2B的结果，雷公藤提取物对癌细胞有生长抑制作用，其中对胃癌细胞的作用最明显。

同时，由于RXRα的激动剂(9cis-RA和SR11247)均可以减低雷公藤提取物的生长抑制作用，说明雷公藤提取物的细胞生长抑制作用与RXRα密切相关。

实施例4、雷公藤提取物诱导癌细胞凋亡及与RXRα的相关性

4.1、雷公藤提取物诱导癌细胞凋亡

取H460肺癌细胞、MGC803胃癌细胞和SMMC7721肝癌细胞加入培养基后，置于24孔板组织培养板中，于37℃，5％的二氧化碳箱中，培养24小时后，分别用以下之一处理细胞：

(1)仅0.5％FBS；

(2)加有雷公藤提取物的0.5％FBS；

其中，(1)作为对照组；反应板中各孔溶液的总体积均为1ml，雷公藤提取物作用浓度1μg/ml。

处理24h后，细胞用0.5％胰酶消化，用0.1MPBS洗涤后，用4％多聚甲醛进行固定，以1μg/ml DAPI(购自Sigma)进行染色，用荧光显微镜进行观察细胞核的形态，结果如图3A所示。

根据图3A，在对照组中，细胞形态较为正常，但在雷公藤提取物处理的细胞，细胞核出现收缩、碎裂等凋亡的典型特征，说明雷公藤提取物具有显著诱导细胞凋亡的能力，其中对胃癌细胞诱导凋亡的作用最明显。

4.2、雷公藤提取物的诱导细胞凋亡作用与RXRα的相关性

为了进一步研究雷公藤提取物的诱导细胞凋亡作用是否和RXRα有关，取MGC803胃癌细胞加入培养液后，置于6cm组织培养板中，于37℃，5％的二氧化碳箱中，培养24小时后，分别用以下之一处理细胞：

(1)仅0.5％FBS；

(2)加有9cis-RA的0.5％FBS；

(3)加有雷公藤提取物的0.5％FBS

(4)雷公藤提取物和9cis-RA共加的0.5％FBS

其中，(1)、(2)作为对照组；反应板中各孔溶液的总体积均为5ml，雷公藤提取物作用浓度1μg/ml，9cis-RA作用浓度为0.1μM。

处理36h后，细胞用0.5％胰酶消化，收集细胞，用0.1M PBS洗涤后，用冰预冷的70％乙醇在4℃固定1小时，PBS重悬后，以400目的筛网过滤一次，用PI染液4℃避光染色30分钟，用流式细胞仪检测细胞凋亡，结果如图3B所示。

根据图3B结果，雷公藤提取物和9cis-RA共同作用后，能降低雷公藤提取物诱导凋亡的近50％，提示雷公藤提取物诱导细胞凋亡的能力与RXRα密切相关。

实施例2-4的结果提示，雷公藤提取物中与癌细胞起作用的成分与RXRα密切相关，因此，我们利用RXRα对雷公藤提取物进行了筛选和检测，从中获得了2种与RXRα相关的成分，分别为雷公藤甲素和雷藤酮，然后通过下述实验对其是否与癌细胞相关进行了检测。但为避免提取物中其它成分的干扰，在下述实验中，我们使用了购于ChromaDex的雷公藤甲素(TR01)和雷藤酮(TR02)。

实施例5、雷公藤甲素和雷藤酮对RXRα转录活性的调控及与癌细胞的关系

按实施例2的方法，分别检测雷公藤甲素和雷藤酮对RXRα转录活性的调控作用，结果如图4所示。

根据图4的结果，雷公藤甲素和雷藤酮均能够在10^-8M的低浓度下抑制RXR的转录活性，且呈浓度依赖性，其中，雷公藤甲素抑制RXR的转录活性的效果优于雷藤酮的效果。

由于，雷公藤提取物对胃癌细胞的作用最明显，因此，按实施例3、4的方法，分别检测雷公藤甲素和雷藤酮抑制胃癌细胞生长和诱导胃癌细胞凋亡的影响，检测结果如图5、6所示，根据图5和6所示，雷公藤甲素和雷藤酮具有抑制胃癌细胞生长和诱导胃癌细胞凋亡的作用，且诱导细胞凋亡与RXRα相关，故的确是雷公藤提取物中与RXRα蛋白相关的能抑制癌细胞生长和诱导癌细胞凋亡的活性成分。

实施例6、雷公藤甲素、雷藤酮对RXRα蛋白的降解作用

用Western Blot实验检测雷公藤甲素、雷藤酮对RXRα蛋白的降解作用，具体步骤如下：

取MGC803胃癌细胞，置于6孔组织培养板中，于37℃，5％的二氧化碳箱中，培养24小时，然后分别用浓度为0、10、20、40、80nM的雷公藤甲素、雷藤酮，处理培养好的MGC803胃癌细胞24h后，用0.5％的胰酶消化细胞，用细胞裂解液裂解消化好的细胞。

用同样的上样量进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白，测定裂解液蛋白浓度，接着用转膜仪把蛋白用电转方法转移到硝酸纤维素薄膜上。

之后，用含5％奶粉的TBST溶液，于37℃封闭半小时，然后加入1∶1000稀释的兔抗RXRα多克隆抗体(Santa Cruz，D-20)作为一抗，室温振荡作用2小时，吸掉一抗后，用TBST洗涤3次，每次洗涤5min；然后加入1∶10000稀释的偶联辣根过氧化物酶的抗兔二抗(购自Santa Cruz)，于37℃放置1小时后，吸掉二抗，用TBST洗涤3次，每次洗涤5min。

然后，用ECL试剂盒(购自Amersham)显色，在压片盒中压片得到胶片。结果如图7A、7B所示。

根据图7A、7B的结果，表明雷公藤活性成分雷公藤甲素、雷藤酮能够诱导RXRα蛋白的降解，且蛋白降解有浓度依赖性。

实施例7、雷公藤甲素对HSP70和RXRα蛋白的降解作用

按实施例6的方法，同时检测雷公藤甲素对HSP70和RXRα的降解作用，分为5个样品，分别为对照、9cis-RA、和三个浓度雷公藤甲素(50，100，200nM)，结果如图8所示。

根据图8的结果，雷公藤甲素能够诱导热休克蛋白HSP70的降解，且呈浓度依赖，规律和诱导RXRα的降解一致，暗示雷公藤甲素调控RXRα的活性可能通过抑制热休克蛋白HSP70。

实施例8、热休克蛋白HSP70、共分子伴侣BAG-1和RXRα结合

用GST-pull-down(参照Promega提供的方法)实验检测蛋白HSP70、BAG-1和RXRα的相互作用，具体步骤如下：

用常规表达的GST-RXRα蛋白和GST beads置于1.5ml离心管中，4℃摇床孵育过夜。把转染了HSP70和BAG-1的细胞裂解在细胞裂解液里，离心收集上清。将上清加入Beads中，混匀，4℃摇床3小时。取样按照实施例6进行Western Blot实验(HSP70和BAG-1抗体购自Santa Cruz)。结果如图9所示。

根据图9结果，阴性对照GST与HSP70蛋白没有相互作用，实验组GST-RXRα与HSP70有相互作用，加入BAG-1可以大大加强GST-RXRα与HSP70的作用，而且两者都可以与GST-RXRα结合。

实施例9、热休克蛋白HSP70和共分子伴侣BAG-1调控RXRα转录活性

按实施例2的方法，分别检测热休克蛋白HSP70和BAG-1对于RXRα转录活性的影响，结果如图10所示。

根据图10A的结果，在热休克蛋白HSP70的作用下，RXRα转录活性提高了近50％。

根据图10B的结果，同时转染了BAG-1之后，RXRα转录活性有提高，并且呈浓度依赖。

根据10A、10B的结果，热休克蛋白HSP70和共分子伴侣BAG-1都可以提高RXRα转录活性。

根据实施例7-10的结果提示，热休克蛋白HSP70及共分子伴侣BAG-1可以和RXRα相结合，并且可以调控RXRα转录活性。雷公藤甲素可以诱导HSP70蛋白和RXRα蛋白的降解，最终调控RXRα转录活性。这不但最终解释了雷公藤调控RXRα的方式，同时发现了一条通过热休克蛋白HSP70依赖的RXRα转录调控的新途径。

综上所述，本发明提供的雷公藤提取物可显著抑制多种癌细胞，如肺癌、肝癌、胃癌等的细胞的生长，以及诱导这些癌细胞发生凋亡；同时发现，雷公藤提取物能够抑制RXRα蛋白的转录活性，其对癌细胞生长的抑制和癌细胞凋亡的诱导与对RXRα蛋白的转录活性的抑制密切相关，进一步研究发现，雷公藤提取物中能够诱导RXRα蛋白的降解并抑制其转录活性的有效成分为雷公藤甲素、雷藤酮。

雷公藤活性成分调控RXRα的转录活性，是通过调控热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的降解实现。

本发明提供的RXR受体可以用于指导筛选雷公藤的活性成分，例如，可通过模拟雷公藤已知活性成分雷公藤甲素与雷藤酮和HSP70/RXR的作用，从而指导筛选雷公藤其他活性成分，从中获得具有抗肿瘤活性的化合物，并可将获得的化合物改造进而制备可调控HSP70/RXRα受体的活性与功能的药物。同时，本发明发现可以通过调控热休克蛋白HSP70依赖的核受体RXRα的转录活性，这为RXRα相关药物的筛选提供了新的通路。

Claims (8)

1.一种雷公藤提取物的应用，其特征在于，雷公藤提取物的制备：称取100g市售雷公藤根，磨碎后加入5倍量95％乙醇回流2次，每次3小时，将提取液合并，用氯仿萃取提取液，萃取液经浓缩干燥后，得到0.36g氯仿提取物，此为活性组分，再将得到的提取物溶于二甲基亚砜(DMSO)，制备成浓度为50mg/ml的雷公藤提取物溶液；

所述雷公藤提取物用于制备调控视黄醇X受体的活性与功能的药物，所述药物用于诱导癌细胞凋亡或抑制癌细胞的生长，所述癌细胞为肺癌细胞、胃癌细胞和肝癌细胞。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于抑制视黄醇X受体的转录活性。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于诱导视黄醇X受体蛋白的降解。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述视黄醇X受体蛋白的降解通过诱导热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的相互作用实现。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于诱导热休克蛋白HSP70的降解。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述热休克蛋白HSP70的降解通过诱导热休克蛋白HSP70和核受体RXRα的相互作用实现。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于诱导癌细胞凋亡或抑制癌细胞的生长。

8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述视黄醇X受体为热休克蛋白HSP70依赖的。

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