CN101566635A - 磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法,属于生物检测技术领域,其特征是:检测卡的正表面上有加样孔和上检测孔,卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔,检测卡内有内膜,内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。其方法是:将标本加到检测卡样品孔中,而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中,当反应完成后,多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁变化,进而测定出待测成分的浓度。有益效果是:结合现代物理学与生物学技术原理,研发生产的磁性检测方法,具有高灵敏度、灵活性强、干扰性低及经济实用等特点。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,涉及一种医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它工农业质量检测设备的改进。
背景技术
蛋白质测定是临床常规检查项目,对疾病的初步诊断具有一定的临床参考意义。蛋白质分析可分为湿式和干式化学系统两大类。湿式系统实际上是机械化了的试管法,采用光电比色分析,属于自动生化分析仪。自动生化分析仪具有检测速度快、准确和检测项目多的特点。适用于大、中型医院使用。干式系统即卡式蛋白质测定仪,它具有自动识别、扫描、数据分析及报告等功能,有较高检验灵敏度、特异性、准确性,测定时间为3-15分钟。检测卡均为一次性胶体金或荧光标记,目前只有德国、美国、日本等少数发达国家拥有此项技术和产品,由于检测卡的成本较高,国内目前仅有大、中型医院使用卡式蛋白质测定仪。
发明内容
本发明的目的是:
提供一种磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法,它是利用“抗体-抗原-抗体-磁”双夹心的免疫层析原理,制备一种蛋白质检测卡和与其配套使用的磁敏传感设备,建立一种对生物样品中蛋白质(抗原/抗体)含量进行测定的检测方法。通过检测磁卡测试区磁标记抗体(抗原)的磁强度来反映标记在样品区域的蛋白质含量,利用标记的免疫复合物-磁场强度的标准曲线,计算出待测生物样品中蛋白质的量。
发明内容
本发明技术方案是:
检测卡的结构是:
检测卡的正表面上有加样孔和前检测孔,卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的后检测孔,检测卡内有内膜,内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。
玻璃纤维素膜预先与磁标记单克隆抗体结合。
硝酸纤维膜预先已喷涂上多克隆抗体检测线和抗鼠单克隆抗体质控线。
检测方法是:
将标本加到检测卡样品孔中,而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中,标本由于毛细作用沿着膜渗透,标本中的待测定成分与磁标记抗体结合而形成抗原抗体复合物;此复合物和磁标记抗体随后在检测区和质控区被固定;当反应完成后,多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁变化,进而测定出待测成分的浓度。
本发明的有益效果是:
结合现代物理学与生物学技术原理,研发生产的磁性检测方法,具有高灵敏度、灵活性强、干扰性低及经济实用等特点,可广泛应用于医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它工农业质量检测领域。
附图说明
图1是本发明的立体剖视图;
图2是本发明主视图;
图3是本发明后视图;
图4是本发明检测卡检测前侧视图;
图5是本发明检测卡检测中侧视图;
图6是本发明空白检测卡图;
图7是本发明阳性检测卡图;
图8是本发明阴性检测卡图;
图9是本发明失效检测卡图;
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步描述:
如图所示,1是检测卡内膜、2是上检测孔、3是加样孔、4是多功能磁免疫蛋白质分析仪磁传感器、5是多功能磁免疫蛋白质分析仪偏置磁场、6是下检测孔、7是卡的正表面、8是卡的背表面;11是内膜样本吸收垫、12是内膜玻璃纤维素膜、13是内膜硝酸纤维膜、14是抗3α-HSD多克隆抗体检测线、15是抗鼠单克隆抗体质控线、16是内膜液体吸收垫。
检测卡为干片小包装单人份形式。每个检测卡均内置一个或多个检测项目特异的聚酯薄膜硝化纤维免疫层析带。检测反应及独立的内部质控反应均在该层析带上进行。通过调控检测间的各种变异而提供可靠的检测结果。最根本的特性是省去了标本的复杂预处理过程,在采样现场即刻进行分析,快速得到检验结果,这是其他检验方法无法实现的。
测定分析时,操作者将标本加到检测卡样品孔中,而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中,标本由于毛细作用沿着膜渗透,标本中的待测定成分与标记抗体结合而形成抗原抗体复合物。此复合物和标记抗体随后在检测区和质控区被固定。当反应完成后,多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析层析带并检测检测区和质控区磁的变化,进而测定出待测成分的浓度。
实施例1(以3α-HSD检测为例):
1.材料与方法
1.1抗原、抗体及实验材料的来源
3α-HSD抗原、3α-HSD单克隆及多克隆抗体均为自制;羊抗鼠IgG多抗、纳米磁粉和检测卡外壳、玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜外购。
1.2磁免疫抗体的制备方法
将空白磁珠用pH 3.6,0.05MHAc-NaAc缓冲液洗两遍后悬浮,每mg磁珠加入10mg碳二亚胺(CMC)和5μL3α-HSD单克隆抗体,于室温缓慢摇动2h,在磁场中去除上清,洗涤后除未结合的3α-HSD单克隆抗体,真空冷冻干燥备用。
1.3.磁标记免疫蛋白检测卡的制备
检测卡为干片小包装单人份形式。为一个7×3×0.6cm的塑料扁卡(图1),卡的正表面(图2)上(7)有加样孔(3)和上检测孔(2),卡的背表面(图3)上(8)有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔(6)。检测卡内膜(1)由四部分组成,其结构依次为样本吸收垫(11)、玻璃纤维素膜(12)、硝酸纤维膜(13)和液体吸收垫(16);其中样本吸收垫(11)负责吸收样品并为玻璃纤维素膜(12)提供样品;玻璃纤维素膜(12)预先与磁标记3α-HSD单克隆抗体结合,它可使样品在此与磁标记3α-HSD单克隆抗体进行反应,并使液体继续向硝酸纤维素膜(13)流动;硝酸纤维膜(13)(孔径0.45μm)预先已喷涂上抗3α-HSD多克隆抗体检测线(14)和抗鼠多克隆抗体质控线(15),它接受已在玻璃纤维素膜与磁标记3α-HSD单克隆抗体反应后的液体样品,使之在层析流动过程中与在膜上的抗3α-HSD多克隆抗体(14)和抗鼠多克隆抗体(15)结合,形成磁聚集区;液体吸收垫(16)负责吸收反应完成后多余的液体。将包被后的玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和样本/液体吸收垫按11、12、13、16顺序,衔接咬合组装成检测卡的内膜(1)。
下面以3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)检测为例介绍卡的基本原理:
检测卡的基本原理是“抗体-抗原-抗体-磁”夹心法。生成磁标记试剂的关键是筛选特异性强、灵敏度高的抗体以及磁标记抗体的制备。其原理是:在玻璃纤维素膜上(12)预包被磁标抗3α-HSD单抗(磁Ab1),硝酸纤维素膜上(13)检测线(14)和对照线上(15)分别包被抗3α-HSD多抗(Ab2)和抗鼠多克隆抗体。检测时,样本中3α-HSD可与磁-抗体(磁Ab1)结合形成复合物,由于层析作用复合物沿纸条向前移动。如为阳性样本,则与检测线预包被的抗体(Ab2)结合形成“磁-Ab1-3α-HSD-Ab2”夹心物而形成磁凝聚。滴加被检样本后,吸水材料使待检样品缓慢移动,反应体系开始启动。
空白:检测前在检测卡的检测区(14)和对照区(15)无磁沉积对照线出现(图6)。
阳性:若被检样品中3α-HSD浓度大于检测临界值,3α-HSD在玻璃纤维素膜(12)先与反应体系的磁标鼠抗人抗体(磁Ab1)发生反应,形成磁标抗原-抗体复合物。此复合物继续移动,再与反应体中包被在硝酸纤维膜(13)的抗体相遇,在硝酸纤维膜上形成磁Ab1-3α-HSD-Ab2的免疫复合物,在检测区有一条磁沉积反应线(14)出现。同时,过量的磁Ab1继续移动与反应膜包被的抗鼠多克隆抗体结合,在对照区形成第二条磁沉积反应线(15)。这表明被检样品中有3α-HSD特异性抗原,为阳性结果(图7)。
阴性:若被检样品中3α-HSD特异性抗原浓度小于检测临界值,反应体系中的磁标鼠抗3α-HSD抗体(磁Ab1)和包被在硝酸纤维膜(13)的抗体(Ab2)无法形成可测的夹心抗原抗体复合物,即在检测区无磁凝聚区(14)出现。这时,反应体系中的磁Ab1继续向膜前端移动,移至对照线位置时(15),磁Ab1即被包被的抗鼠多克隆抗体结合,在对照区形成一条磁沉积对照线(15)。这表明被测样品中3α-HSD浓度低于最低阳性判别水平,为阴性结果,同时说明检测卡整体反应系统工作正常(图8)。
(4)无效:若反应后,在对照区无磁沉积对照线(15)出现,说明整体反应系统工作不正常(图9)。
2.磁标记免疫蛋白检测卡的应用
取一定量生物样品(含有3α-HSD)置于加样孔中(3),标本由于毛细作用沿着膜渗透,标本中的待测定成分与磁标记抗体结合而形成抗原抗体复合物。此复合物和标记抗体随后在检测区(13)和质控区(14)被固定。当反应完成后,多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁的变化,进而测定出待测成分的浓度。
检测卡进入分析仪进行检测前,磁传感器(4)和偏置磁场(5)置于硝酸纤维膜(1)两侧,与硝酸纤维膜(1)有一定空间(图4)。检测卡进入检测仪进行检测时,磁传感器(4)和偏置磁场(5)将硝酸纤维膜(1)夹在中间,紧密接触,与几乎没有空间。通过卡的移动,测定硝酸纤维膜上的磁场分布。
Claims (4)
1、一种磁标记免疫蛋白检测卡,其特征是:检测卡的正表面上有加样孔和上检测孔,卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔,检测卡内有内膜,内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。
2、一种磁标记免疫蛋白检测卡的检测方法,其方法是:将标本加到检测卡样品孔中,而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中,标本由于毛细作用沿着膜渗透,标本中的待测定成分与磁标记抗体结合而形成抗原抗体复合物;此复合物和磁标记抗体随后在检测区和质控区被固定;当反应完成后,多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁变化,进而测定出待测成分的浓度。
3、根据权利要求1所述的一种磁标记免疫蛋白检测卡,其特征是:玻璃纤维素膜预先与磁标记单克隆抗体结合。
4、根据权利要求1所述的一种磁标记免疫蛋白检测卡,其特征是:硝酸纤维膜预先已喷涂上多克隆抗体检测线和抗鼠多克隆抗体质控线。
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CNA2008100506520A CN101566635A (zh) | 2008-04-25 | 2008-04-25 | 磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法 |
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CNA2008100506520A CN101566635A (zh) | 2008-04-25 | 2008-04-25 | 磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法 |
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103308671A (zh) * | 2013-05-22 | 2013-09-18 | 北京万泰生物药业股份有限公司 | 一种检测膜及检测系统 |
CN106290824A (zh) * | 2016-10-19 | 2017-01-04 | 中国科学院电子学研究所 | 双参数扇形免疫磁层析试条 |
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2008
- 2008-04-25 CN CNA2008100506520A patent/CN101566635A/zh active Pending
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN103308671A (zh) * | 2013-05-22 | 2013-09-18 | 北京万泰生物药业股份有限公司 | 一种检测膜及检测系统 |
CN103308671B (zh) * | 2013-05-22 | 2016-02-03 | 北京康彻思坦生物技术有限公司 | 一种检测膜及检测系统 |
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