CN101564681A - 一种氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱及其制备方法 - Google Patents

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一种氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱及其制备方法，它涉及一种氯霉素萃取柱及其制备方法。它为了解决目前氯霉素检测中样品前处理方法步骤繁琐、检出率低，导致样品中残留的低浓度CAP不能有效检出的问题。氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印迹聚合物作为固相萃取柱填料。制备方法：一、CAP与DEAEM预作用，再加入EGDMA和AIBN混匀；二、制氯霉素分子印迹聚合物；三、冷却、研磨；四、甲醇洗脱；五、干燥装柱。本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的填料对氯霉素具有高特异性吸附能力，对样品中残留的低浓度氯霉素仍具有优异的吸附率和高吸附量。采用本发明制备的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱进行样品前处理，步骤简单，分离、富集、净化效果好，方便快捷。

Description

一种氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种氯霉素萃取柱及其制备方法。
背景技术
氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是一种杀菌力极强的广谱抗生素，因其优良的抗菌性、稳定的药性、低廉的价格，而被广泛作为饲料添加剂用于治疗细菌性疾病。但研究发现CAP对骨髓和新生儿有较大的毒性，易引起人体血中毒，导致不可逆的再生障碍性贫血等严重的毒副作用，对人类的健康构成巨大的潜在威胁。因此，欧盟、美国均在法规中规定CAP的残留限量标准为“零容许量”。我国农业部规定CAP及其盐、脂等在食用动物的所有可食组织中不得检出。
目前痕量CAP检测的确证方法(如：微生物法、免疫分析法、色谱法、色谱质谱联用法、超临界流体色谱法等)已经比较成熟；但由于样品中CAP残留浓度低，基体成分复杂，加之常规样品前处理方法步骤繁琐、检出率低，严重限制了常规快速检测方法和仪器分析方法对样品中CAP残留的有效检测。
发明内容
本发明的目的是为了解决目前氯霉素检测中样品前处理方法步骤繁琐、检出率低，导致样品中残留的低浓度CAP不能有效检出的问题，而提供的一种氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱及其制备方法。
本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印迹聚合物作为固相萃取柱填料，氯霉素分子印迹聚合物由1mmol的氯霉素、2mmol的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氢呋喃、26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。
上述氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱按以下步骤制备：一、将1mmol氯霉素和2mmol甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氢呋喃，然后在震荡频率为100～120Hz的条件下震荡预作用0.5h，然后加入26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混匀；二、对步骤一获得的液体进行超声处理，再充入氮气除氧，然后密封置于60℃环境中恒温加热48±0.2h，制备氯霉素分子印迹聚合物；三、冷却至室温，然后将步骤二制备的氯霉素分子印迹聚合物取出研磨；四、将经过研磨的氯霉素分子印迹聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脱游离的氯霉素，至洗脱液中无氯霉素检出；五、干燥氯霉素分子印迹聚合物粉末，然后均匀装填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱。
本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印迹聚合物)是以氯霉素(CAP)为模板、甲基丙烯酸二乙氨基乙酯(DEAEM)为功能单体、四氢呋喃为溶剂、偶氮二乙丁腈(AIBN)为引发剂、乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂。本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印迹聚合物)对氯霉素具有高特异性吸附能力，因此对样品中残留的低浓度氯霉素仍具有优异的吸附率(94.5％～105.2％)和高吸附量(最高吸附量为4670μg/g)。本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的填料对氯霉素的衍生物(氯霉素的盐及氯霉素脂)具有与氯霉素同样的吸附效果。
本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的制备方法中填料(氯霉素分子印迹聚合物)采用本体聚合法合成。
本发明氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的填料(氯霉素分子印迹聚合物)以甲基丙烯酸二乙氨基乙酯做为功能单体，采用本体聚合法制备氯霉素分子印迹聚合物，具有吸附特异性和高效性，解决了目前固相萃取柱吸附普遍性和洗脱复杂性的缺点，集分子印迹聚合物和固相萃取柱的优点为一身。
采用本发明制备的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱进行样品前处理，具有步骤简单，分离、富集、净化效果好的优点，方便快捷。而且，采用本发明制备的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱进行样品前处理还具有有机溶剂使用量少的特点，复合当前环保的要求。
附图说明
图1是具体实施方式一中氯霉素分子印迹聚合物的扫描电镜显微照片；图2是具体实施方式六中加入氯霉素待测样品的检测结果图；图3是具体实施方式六中加入氟甲砜霉素或甲砜霉素待测样品的检测结果图，其中“■”曲线表示氟甲砜霉素检测结果，“◆”曲线表示甲砜霉检测结果。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印迹聚合物作为固相萃取柱填料，氯霉素分子印迹聚合物由1mmol的氯霉素、2mmol的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氢呋喃、26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。
本实施方式中氯霉素分子印迹聚合物对氯霉素和氯霉素衍生物具有高特异性吸附能力，对样品中残留的低浓度氯霉素具有优异的吸附率(吸附率为94.5％～105.2％)和高吸附量(氯霉素最高吸附量为4670μg/g)。
由于目前的固相萃取法常用的吸附剂存在选择性差的问题，所以在富集分析物的同时大量基体和干扰物质也被富集，导致洗脱液中仍含有基体和杂质，干扰最后的色谱分析。本实施方式中的氯霉素分子印迹聚合物是具有较强分子识别能力的新型高分子仿生材料，具有预定性、识别性和实用性等特点，所以具有优异的吸附特异性。
本实施方式中氯霉素分子印迹聚合物的扫描电镜显微照片如图1所示。
具体实施方式二：本实施方式氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱按以下步骤制备：一、将1mmol氯霉素和2mmol甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氢呋喃，然后在震荡频率为100～120Hz的条件下震荡预作用0.5h，然后加入26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混匀；二、对步骤一获得的液体进行超声处理，再充入氮气除氧，然后密封置于60℃环境中恒温加热48±0.2h，制备氯霉素分子印迹聚合物；三、冷却至室温，然后将步骤二制备的氯霉素分子印迹聚合物取出研磨；四、将经过研磨的氯霉素分子印迹聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脱游离的氯霉素，至洗脱液中无氯霉素检出；五、干燥氯霉素分子印迹聚合物粉末，然后均匀装填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱。
本实施方式中作为模板分子的氯霉素分子可以回收利用，减少了生产成本。
采用本发明制备的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱进行样品前处理，具有步骤简单，分离、富集、净化效果好的优点，方便快捷。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二的不同点是：步骤二中超声处理的频率为40KHz、超声功率为150W、超声处时间为10min。其它步骤及参数与实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三的不同点是：步骤三中将步骤二制备的高聚物研磨成粒径＜88μm的颗粒。其它步骤及参数与实施方式二或三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式二的不同点是：步骤四中用高效液相色谱检测洗脱液。其它步骤及参数与实施方式二相同。
具体实施方式六：本实施方式用具体实施方式二制备出的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱进行牛乳样品预处理：a、向100mL牛乳中加入2mL质量浓度为10％的高氯酸，混匀后以3500r/min的转速离心10min；b、弃去脂肪层，精密移取上清液10mL加入具体实施方式二制备出的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱；c、用2ml质量浓度为40％的甲醇分别洗脱2次，收集甲醇洗脱液用温度为60℃的氮气吹干，然后采用高效液相色谱检测氯霉素。
对比试验1：
在3组空白样品(不含氯霉素、氟甲砜霉素或甲砜霉素)中分别加入氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素，保证待测样品中试剂(氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素)的浓度都为1μg/mL；采用本实施方式方法进行检测，加入氯霉素待测样品的检测结果如图2所示，加入氟甲砜霉素或甲砜霉素待测样品的检测结果如图3所示。虽然氟甲砜霉素和甲砜霉素都是氯霉素的类似物，但是对比检测结果有着巨大差别，达到吸附平衡时氯霉素吸附量为165μg/g、氟甲砜霉素吸附量平均为1.44μg/g、甲砜霉素吸附量平均为1.44μg/g，说明具体实施方式二制备出的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱具有明显的吸附特异性。
对比试验2：
在2组空白样品中加入相同剂量的氯霉素，待测样品中氯霉素的浓度均为1μg/mL，分别采用具体实施方式二制备出的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱和非印迹聚合物固相萃取柱进行进行检测，检测结果如表1所示。
表1
柱型 氯霉素吸附率(％) 相对标准偏差(％)   氯霉素最大吸附量(μg/g)
  氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱 94.7～104.7 3.6 4670
  非印迹聚合物固相萃取柱 43.5 1.2 330
表1中的检测数据说明具体实施方式二制备出的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱具有吸附率高、吸附量大的优点。

Claims (5)

1、一种氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱、其特征在于氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱以氯霉素分子印迹聚合物作为固相萃取柱填料，氯霉素分子印迹聚合物由1mmol的氯霉素、2mmol的甲基丙烯酸二乙氨基乙酯、5mL的四氢呋喃、26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯、40.0mg的偶氮二乙丁腈制成。
2、如权利要求1所述氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的制备方法，其特征在于氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱按以下步骤制备：一、将1mmol氯霉素和2mmol甲基丙烯酸二乙氨基乙酯溶于5mL的四氢呋喃，然后在震荡频率为100～120Hz的条件下震荡预作用0.5h，然后加入26mmol的乙二醇二甲基丙烯酸酯和40.0mg的偶氮二乙丁腈混匀；二、对步骤一获得的液体进行超声处理，再充入氮气除氧，然后密封置于60℃环境中恒温加热48±0.2h，制备氯霉素分子印迹聚合物；三、冷却至室温，然后将步骤二制备的氯霉素分子印迹聚合物取出研磨；四、将经过研磨的氯霉素分子印迹聚合物粉末置于索氏提取器中，用甲醇洗脱游离的氯霉素，至洗脱液中无氯霉素检出；五、干燥氯霉素分子印迹聚合物粉末，然后均匀装填于固相萃取柱中，即得到氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱。
3、根据权利要求2所述的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的制备方法，其特征在于步骤二中超声处理的频率为40KHz、超声功率为150W条件下超声处理10min。
4、根据权利要求2或3所述的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的制备方法，其特征在于步骤三中将步骤二制备的高聚物研磨成粒径＜88μm的颗粒。
5、根据权利要求2所述的氯霉素分子印迹聚合物固相萃取柱的制备方法，其特征在于步骤四中用高效液相色谱检测洗脱液。
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