CN101530143B - 一种茶叶及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种新的茶叶，以及其制备方法和应用。以特有的茶组植物光萼厚轴茶[Camellia crassicolumna var.multiplex(Changet Tan)Ming]的新鲜叶片为原料，经杀青、揉捻、干燥等加工工艺制成的茶叶，以不含咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱为特色。其茶多酚的组成和含量与由通常的茶树(大叶茶和小叶茶)制成的茶叶相似，富含表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等茶多酚类成分，具有显著的抗氧化活性和抗菌作用。该茶叶可作为优质茶饮料、功能保健食品、特殊用途化妆品、以及天然药物的原料，也可作为食品添加剂用于食品加工工业。
Description
技术领域：
本发明涉及一种茶叶，其制备方法和应用。
技术背景：
茶叶为世界三大饮料之一。迄今为止，茶叶的基源为山茶科茶属茶组植物茶(小叶茶)(Camellia sinensis)及其变种大叶茶(C.sinensis var.assamica)的新鲜叶片。多酚类化合物是茶叶的主要特征成分，也是茶叶的主要生理活性物质。其中，以儿茶素类衍生物为主，包括表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等。
茶叶中含有大量的咖啡因。咖啡因对中枢神经系统有兴奋作用，不仅影响睡眠，对心血管系统和消化系统均有影响。因此，低咖啡因或无咖啡因的茶饮品已成为当今的热点。已开发成功脱咖啡因的制茶工艺，但工艺复杂、成本昂贵。
除咖啡因外，茶叶中还含有茶碱等嘌呤类生物碱。茶碱有扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、促进支气管粘膜的纤毛运动等作用。但其有效血浓度和中毒血浓度接近，易产生恶心、呕吐、心律失常等毒副作用，过多摄取不利于身体健康。
迄今，不含包括咖啡因、茶碱、可可碱等在内的嘌呤类生物碱的茶叶，及其天然资源至今尚未见报道。
发明内容：
本发明旨在提供一种茶叶，该茶叶不含咖啡因和茶碱以及其他嘌呤类生物碱，同时提供其制备方法和应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
一种茶叶，以光萼厚轴茶[Camellia crassicolumna var.multiplex(Chang et Tan)Ming]为原料，不含嘌呤类生物碱。
茶叶，以光萼厚轴茶为原料，经杀青、揉捻、干燥制成。
上述茶叶的制备方法，以光萼厚轴茶为原料，经杀青、揉捻、干燥制成。
茶叶用作抗氧化剂。
茶叶用作为抗菌剂。
茶饮料，含有上述的茶叶。
食品添加剂，含有上述的茶叶。
护肤品或护发品，含有上述的茶叶。
功能性保健食品，含有上述的茶叶。
药品，含有上述的茶叶。
本发明茶叶的制作具体为：采摘光萼厚轴茶的新鲜叶片，按制茶的常规工序，经过杀青、揉捻、干燥即可得到由茶树新资源光萼厚轴茶新鲜叶片制作的茶叶。光萼厚轴茶新鲜叶片可以加工制作绿茶，也可以制成普洱茶、红茶、花茶等多种茶类。还可作为各种茶饮料的原料，例如：罐装茶饮料、瓶装茶饮料、袋泡茶、速溶茶等。上述技术方案中提供的原料，为山茶科茶组植物光萼厚轴茶[Camelliacrassicolumna var.multiplex(Chang et Tan)Ming]的新鲜叶片。该植物分布于中国云南省东南部地区，特别是文山苗族壮族自治州境内，为该地区的特有植物。本发明使用的该植物原料可以是野生的，也可以是通过无性繁殖栽培的。
本发明的茶叶可用作为各种茶饮料和功能保健食品的原料；亦可作为食品添加剂用于食品工业；亦可作为特殊用途化妆品的原料用于各种护肤和护发的个人护理用品；亦可作为天然原料用于开发新型药物。
附图说明：
图1为本发明的光萼厚轴茶制作的绿茶与大叶茶制作的绿茶的HPLC比较；
图2.为本发明茶叶样品的HPLC和LC-MS分析图；
图3.为本发明的光萼厚轴茶制作的绿茶多酚类成分的液相色谱分析；
图中：(±)没食子儿茶素-3，5-O-二没食子酸酯(1)，(-)-表儿茶素-3-O-没食子酸酯(ECG)(2)，(-)-表儿茶素(EC)(3)，(-)表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯(EGCG)(4)，春枝紫萁甙(6)，阿福豆甙(7)，槲皮甙(8)，芦丁(9)，小木麻黄素(11)，1，3-二没食子酰基葡萄糖(12)，1，2，3，4-四没食子酰基葡萄糖(13)，3，5-二羟基-4-咖啡酰基奎宁酸(15)，没食子酸(16)，茶棓素(peak a)，茶棓素的差向异构体(peak d)，(-)表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯的差向异构体(peak e)。
具体实施方式：
下面结合附图，先用本发明的试验例来证明本发明产品的活性和效果：
试验例1：本发明茶叶的茶多酚组成与含量的测定试验：
采摘光萼厚轴茶[Camellia crassicolumna var.multiplex(Chang et Tan)Ming]的新鲜叶片，按制茶的常规工序，经过杀青、揉捻、干燥即可。
按上述技术方案制作的茶叶，用高压液相色谱法(HPLC)检测茶多酚的组成与含量。用光萼厚轴茶的新鲜叶片制作的茶叶，其多酚类成分以儿茶素类衍生物为主，包括：表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等，与通常由大叶茶和小叶茶制作的茶叶相类似(如图1所示)。
按上述技术方案以光萼厚轴茶的新鲜叶片制作的茶叶，经系统的化学研究证明，除儿茶素类衍生物外还含有，春枝紫萁甙(asiaticalin)，阿福豆甙(afzelin)，槲皮甙(quercetrin)，芦丁(rutin)，小木麻黄素(strictinin)，1，3-二没食子酰基葡萄糖(1，3-di-O-galloyl-β-D-glucopyranose)，1，2，3，4-四没食子酰基葡萄糖(1，2，3，4-tetra-O-galloyl-β-D-glucopyranose)，3，5-二羟基-4-咖啡酰基奎宁酸(3α，5α-dihydroxy-4α-O-caffeoyl-quinicacid)，没食子酸(gallic acid)，茶棓素(theogallin)，茶棓素的差向异构体(epimer of theogallin，peak d)，(-)表没食子儿茶素-3-O-没食子酸酯的差向异构体(epimers of EGCG，peak e)等多酚类成分。
试验例2：本发明茶叶含嘌呤类生物碱含量检测试验：
用试验例1制作的茶叶，用高压液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)检测嘌呤类生物碱。结果表明，用光萼厚轴茶的新鲜叶片制作的茶叶不含咖啡因、茶碱等嘌呤类生物碱(如图2所示)。
试验例3：本发明茶叶抗氧化活性检测试验：
按试验例1制作的茶叶，经DPPH清除自由基试验证明具有显著的抗氧化活性(见表1)。
表1.光萼厚轴茶茶叶的清除自由基活性
aSC50：半数清除自由基浓度.
bValues represent means±SD(n＝3)
试验例4：本发明茶叶抑菌试验：
按试验例1制作的茶叶，经抑菌圈试验证明具有显著的抗菌活性(见表2)。
表2.光萼厚轴茶茶叶的抑菌活性
按上述技术方案中制作的茶叶，可作为各种茶饮料的原料，亦可作为食品添加剂用于各种食品中，亦可作为特殊用途化妆品的原料用于各种护肤和护发的个人护理用品，亦可作为天然原料用于开发各种功能性食品和新型药物。
试验例5：用光萼厚轴茶的新鲜叶片制作茶叶，其制备步骤及试验如下：
(1)采摘光萼厚轴茶新鲜叶片，瞬时加热杀青，手工或机械揉捻，晒干、或烘干、或炒干，即得到光萼厚轴茶制作的厚轴绿茶。
(2)用光萼厚轴茶新鲜叶片制作的晒青毛茶，按常规渥堆工艺，可制作为厚轴熟茶。
(3)光萼厚轴茶新鲜叶片按常规加工工艺，经萎凋、揉捻、发酵、干燥等工序，即可制作为厚轴红茶。
(4)用光萼厚轴茶新鲜叶片制作的茶叶，经再加工工艺，可制作为袋泡茶、速溶茶等茶产品。
(5)用光萼厚轴茶新鲜叶片制作的茶叶，可作为各种茶饮料和功能保健食品的原料；亦可作为食品添加剂用于食品工业；亦可作为特殊用途化妆品的原料用于各种护肤和护发的个人护理用品。亦可作为天然原料用于开发新型药物。
(6)用光萼厚轴茶新鲜叶片制作的绿茶，其茶多酚的组成与含量用高压液相色谱法(HPLC)检测。检测方法按如下步骤实施，高压液相色谱法(HPLC)检测条件和结果如下(见图3)。
仪器与试剂：岛津10AT高效液相色谱仪，高压二元泵，SPD-10Avp二极管阵列检测器，CLASS-LC10工作站，色谱纯乙腈，超纯水。
色谱条件及检测波长的选择：
方法-：固定相为Agilent Zorbax SB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-0.34％磷酸水梯度洗脱(0-45min，4％-40％乙腈)，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长280nm。
方法二：固定相为Agilent Zorbax SB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-0.34％磷酸水梯度洗脱(0-45min，5％-15％乙腈)，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长280nm。
实验材料：精密称取以光萼厚轴茶新鲜叶为原料制备得到的茶叶样品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入70％的甲醇溶液90ml，放置过夜，间隔超声波提取两次，每次15min，定容至刻度线，摇匀，经0.45m微孔滤膜过滤，待测。
样品测定：进样量：10μl。重复测定3次，取平均值。
(7)用光萼厚轴茶新鲜叶片制作的绿茶，其咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱用液-质联用法(LC-MS)检测。检测方法按如下步骤实施：
仪器与试剂：API Qstar Pulsar LC/TOF液质联用仪，色谱纯甲醇，分析纯乙酸，超纯水。
色谱条件及检测波长的选择：固定相为Agilent Zorbax SB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇-0.5％乙酸水梯度洗脱0-20min，5％-20％甲醇；20-30min，20％-60％甲醇；30-31min，60％-100％甲醇和31-40min，100％甲醇)，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长280nm。
实验材料：精密称取以光萼厚轴茶新鲜叶片为原料制作的茶叶样品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入70％的甲醇溶液90ml，放置过夜，间隔超声波提取两次，每次15min，定容至刻度线，摇匀，经0.45m微孔滤膜过滤，待测。
样品测定：进样量：10μl。
根据液相色谱的保留时间和紫外图谱，结合质谱特征碎片分析，判断嘌呤生物碱的存在与含量。结果表明，厚轴绿茶不含茶碱。以甲醇-0.5％乙酸为移动相梯度洗脱系统，咖啡因的保留时间为18.77min，位于图3的A区域。采用乙腈-水梯度洗脱系统，将A区域的几个峰完全分开。其中，b和c两个峰的保留时间与咖啡因接近。结合紫外图谱的特征吸收峰分析，提示光萼厚轴茶不存在咖啡因。
LC-MS特征碎片离子的分析结果表明，保留时间分别为11.75和22.57min的d和e两个峰的分子量分别为m/z 343[M-H]-(peak d)和457[M-H]-(peak e)，其碎片离子峰分别为m/z191[M-153(galloyl)]-(peak d)，305[M-153(galloyl)]-(peak e)和169(galloyl)。因此，d和e两个峰分别指认为茶倍素(theogallin)和表没食子儿茶素3-O-没食子酰酯(EGCG)的差向异构体。分析结果进一步证明，以光萼厚轴茶新鲜叶片为原料制作的茶叶不含咖啡因、茶碱、可可豆碱等嘌呤类生物碱。
与现有技术相比，本发明具有下述优点：
(1)本发明提供的茶叶是以野生或人工栽培的光萼厚轴茶的新鲜叶片为原料，经杀青、揉捻、干燥等加工工艺制成。可以是绿茶，也可以加工为普洱茶、红茶、花茶等多种茶类。以光萼厚轴茶的新鲜叶片制成的茶叶，可作为优质茶饮料、功能保健食品、特殊用途化妆品、以及天然药物的原料，也可作为食品添加剂用于食品加工工业中，用途广泛。
(2)以光萼厚轴茶的新鲜叶片制作茶叶，制备方法简单，成本低廉，适合工业化生产，一般的茶叶加工厂均可采用，具有很高的实用性。
(3)以光萼厚轴茶的新鲜叶片制成的茶叶，以不含咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱为特色。其茶多酚组成和含量与由通常的茶树(大叶茶和小叶茶)制成的茶叶相似，并具有显著的抗氧化和抗菌作用。因此，本发明提供的茶树原料及由其制备的各种产品，具有很大的应用价值。
下面以本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1：以光萼厚轴茶的新鲜叶片为原料制备厚轴绿茶。
(1)按制茶的规范工序，采摘光萼厚轴茶新鲜叶片，瞬时加热杀青，手工或机械揉捻，炒干，即得到光萼厚轴茶制作的厚轴绿茶。
(2)采用高压液相色谱法(HPLC)检测茶多酚的组成和含量。HPLC分析条件及结果如下：
仪器与试剂：岛津10AT高效液相色谱仪，高压二元泵，SPD-10Avp二极管阵列检测器，CLASS-LC10工作站，色谱纯乙腈，超纯水。
(1)色谱条件：固定相为Agilent Zorbax SB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，流动相为乙腈-0.34％磷酸水梯度洗脱(0-45min，4％-40％乙腈)，流速1mL/min，柱温30℃，检测波采用高压液相色谱法(HPLC)和液-质联用法(LC-MS)检测咖啡因及茶碱等嘌呤类生物碱的组成和含量。
仪器与试剂：API Qstar Pulsar LC/TOF液质联用仪，色谱纯甲醇，分析纯乙酸，超纯水。
色谱条件及检测波长的选择：固定相为安杰伦zorbax SB-C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱，流动相为甲醇-0.5％乙酸水梯度洗脱(0-20min，5％-20％甲醇；20-30min，20％-60％甲醇；30-31min，60％-100％甲醇和31-40min，100％甲醇)，流速1mL/min，柱温30℃，检测波长280nm。
实验材料：精密称取以光萼厚轴茶为原料制备得到的茶叶样品2.5g，置于100ml容量瓶中，加入70％的甲醇溶液90ml，放置过夜，间隔超声波提取两次，每次15min，定容至刻度线，摇匀，经0.45m微孔滤膜过滤，待测。
样品测定：进样量：10μl。
分析结果如表3。
表3.厚轴绿茶的主要成分含量分析
实施例2：以光萼厚轴茶鲜叶片为原料制备厚轴晒青毛茶
(1)按制茶的规范工序，采摘光萼厚轴茶新鲜叶片，瞬时加热杀青，手工或机械揉捻，晒干，即得到光萼厚轴茶制作的厚轴晒青毛茶。
(2)高压液相色谱法(HPLC)和液质联用法(LC-MS)检测茶多酚、咖啡因及茶碱等成分。
分析表明，以光萼厚轴茶新鲜叶片制作的晒青毛茶含有丰富的多酚类成分，不含咖啡因及茶碱。HPLC分析条件同实施例1，结果见表4。
表4.厚轴晒青毛茶的主要成分含量分析
实施例3：以光萼厚轴茶叶为原料制备茶饮料。
(1)以光萼厚轴茶新鲜叶片制作的茶叶为原料，按常规的加工工艺，制作袋泡茶和速溶茶。
高压液相色谱法(HPLC)和液质联用法(LC-MS)检测结果表明，该茶饮料富含多酚类成分，不含咖啡因及茶碱。HPLC分析条件同实施例1，其结果表5：
表5.厚轴茶茶饮料的主要成分含量分析
实施例4：以光萼厚轴茶茶叶为原料制备食品添加剂
(1)以光萼厚轴茶茶叶为原料，按常规加工工艺制成食品添加剂。
(2)高压液相色谱法(HPLC)和液质联用法(LC-MS)检测该食品添加剂的茶多酚、咖啡因及茶碱等成分。分析结果表明，该产品富含多酚类成分，不含咖啡因和茶碱等嘌呤类生物碱。HPLC分析条件同实施例1，其结果见表6：
表6.厚轴茶食品添加剂的主要成分含量分析
实施例5：以光萼厚轴茶茶叶为原料制备药品
以光萼厚轴茶茶叶为原料，加入药品常用载体，按常规加工工艺制成药品。
Claims (4)
1.一种茶叶，以光萼厚轴茶[Camellia crassicolumna var.multiplex(Chang et Tan)Ming]为原料，不含嘌呤类生物碱。
2.如权利要求1所述的茶叶，以光萼厚轴茶为原料，经杀青、揉捻、干燥制成。
3.权利要求1所述的茶叶的制备方法，以光萼厚轴茶[Camelliacrassicolumna var.multiplex(Chang et Tan)Ming]为原料，经杀青、揉捻、干燥。
4.茶饮料，含有权利要求1所述的茶叶。
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