CN101503394A - 高哌嗪乙酰肼类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一类新颖的如式I或式II所示的高哌嗪乙酰肼类衍生物，式中各符号定义如说明书所述。本发明还涉及制备所述高哌嗪乙酰肼类衍生物的方法，所述高哌嗪乙酰肼类衍生物在制备用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的药物中的用途，包含所述高哌嗪乙酰肼类衍生物的药物组合物。本发明的高哌嗪乙酰肼类衍生物具有有效的抗肿瘤活性。

Description

高哌嗪乙酰肼类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一类新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物，本发明还涉及制备所述高哌嗪乙酰肼类衍生物的方法，所述高哌嗪乙酰肼类衍生物在制备用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的药物中的用途，以及包含所述高哌嗪乙酰肼类衍生物的药物组合物。

背景技术

目前临床上治疗晚期癌症所使用的化学药物基本上对癌细胞都没有选择性，药物的副作用给癌症患者的身心带来极大伤害。分子靶向治疗是选择性治疗肿瘤的一个新途径，分子靶向药物为癌症患者的个性化治疗提供了可行性，优点在于既减少毒副作用，又延长癌症患者的生命。

文献报道(参见，例如WO2006128173)哌嗪乙酰肼类杂环化合物是一类具有生物活性的小分子化合物，它在癌细胞中能够选择性地诱使癌细胞死亡，这种化合物可以作为潜在的抗肿瘤的分子靶向药物。但文献报道的化合物仅仅局限在哌嗪环取代的杂环化合物上，还没有文献报道高哌嗪乙酰肼类化合物作为诱使癌细胞死亡的靶向药物。另一方面，含氮杂环化合物高哌嗪是药物合成的重要中间体，在化学药物的结构修饰与结构改造中有着极其重要的作用，如文献[Carl B.Ziegler，et al.，J.Med.Chem.1990，33(1)，142]所述，在药物分子中，高哌嗪基团的存在使相关药物的活性显著提高。但文献报道所含高哌嗪的有机化合物并没有涉及与本发明有关的新颖化合物以及它们的可能用途。因此，在研究具有抗癌活性的药物分子中，合成具有新颖结构的含高哌嗪的衍生物仍是本领域技术人员努力研究的课题。

发明内容

本发明第一方面的目的是提供一类新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物。本发明第二方面的目的是提供所述新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物的制备方法。本发明人令人惊奇地发现，本发明提供的新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物具有有效的抗癌活性，本发明基于该发现而得以完成本发明，因而，本发明第三方面的目的是提供所述新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物在制药中的用途。此外，本发明第四方面提供包含本发明所述新颖的高哌嗪乙酰肼类衍生物的药物组合物。

概括地说，本发明第一方面提供式I或式II的化合物：

其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子或氮原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、C₂-C₆链烯基、C₁-C₆烷基、或C₁-C₆烷氧基，

或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面的化合物，其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、C₂-C₆链烯基、C₁-C₆烷基、或C₁-C₆烷氧基，

或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面的化合物，其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烯丙基、2-丁烯基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁基氧基，

或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面的化合物，其中：

n为1；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烯丙基、2-丁烯基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁基氧基，

或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面任一项所述的化合物，其选自以下化合物：

(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼[英文名：(4-Benzyl-[1，4]diazepan-1-yl)-acetic acid(3-allyl-2-hydroxy-benzylidene)-hydrazide]，和

(4-对甲基苯磺酰基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼[英文名：(4-(Toluene-4-sulfonyl-[1，4]diazepan-1-yl)-acetic acid(3，5-dichloro-2-hydroxy-benzylidene)-hydrazide]，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面任一项所述的化合物，其选自本发明任一实施例的合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

根据本发明第一方面任一项所述的化合物，其为(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。

本发明第二方面提供制备式I或式II化合物的方法，其包括以下步骤：

(1)在碱性条件下，使式或式的氯代芳香烃化合物与高哌嗪在有机溶剂中反应生成以下式Ib或式IIb化合物：

(2)在碱性条件下，使式Ib或式IIb化合物与氯乙酸乙酯反应生成以下式Ic或式IIc的化合物：

(3)在有机溶剂中，使水合肼与上述式Ic或式IIc的化合物反应生成以下式Id或式IId的化合物：

(4)在乙醇溶液中，步骤(3)得到的式Id或式IId的化合物与式

化合物反应得到，式I或式II的化合物；和任选的

(5)使式I或式II的化合物与酸反应，得到式I或式II的化合物的相应盐，

其中，n、A、B、C、D、E、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自的定义同本发明第一方面任一项的化合物。

根据本发明第二方面的方法，其中步骤(1)中所述的有机溶剂可以为乙醇，四氢呋喃；步骤(2)中所述的有机溶剂可以为丙酮并且所述碱可以为三乙胺、碳酸氢钠等；步骤(3)和(4)中所述的有机溶剂可以为乙醇；步骤(5)中所述的有机溶剂可以为甲醇。

根据本发明第二方面任一项所述的方法，其中步骤(5)中所述的酸为富马酸。根据本发明第二方面任一项所述的方法，其中步骤(5)是在回流加热下进行反应。

根据本发明第二方面任一项所述的方法，其中步骤(5)中所得的式I或式II的化合物的相应盐为以下式Ie或式IIe所示的化合物：

其中，n、A、B、C、D、E、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自的定义同本发明第一方面任一项的化合物。

根据本发明第二方面任一项所述的方法，其中所述式I或式II的化合物选自：

1、(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼，和

2、(4-对甲苯磺酰基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼，

或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

在本发明化合物中，与基团部分“[1，4]二氮杂环庚烷基”相应的化合物，即[1，4]二氮杂环庚烷，也可称为高哌嗪(homopiperazine)。

本发明的化合物可以一般性地称为“取代的高哌嗪乙酰(亚胺甲基苯)肼”，例如，本发明的某些化合物可以一般性地称为“4-苄基高哌嗪乙酰(亚胺甲基苯)肼”。

以上化合物(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼，也可以根据不同的命名体系将其命名为：4-苄基高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚氨甲基-3-烯丙基-2-羟基苯)肼。

根据本发明第二方面任一项所述的方法，其中所述式I或式II的化合物为(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。

在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐例如富马酸盐的合成方法图示如下：

在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中，所述式II化合物或其药学上可接受的盐例如富马酸盐的合成方法图示如下：

本发明第三方面提供本发明第一方面任一项所述化合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的药物中的用途。

根据本发明的第三方面的用途，其中所述的肿瘤和/或癌症可以是医学上已知的任何肿瘤和/或癌症。优选地，所述的肿瘤和/或癌症包括但不限于：

恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett′s氏淋巴癌；

骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；

间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；

中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及

其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderoma pigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。

本发明第四方面提供在有需要的受试者中治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述化合物。

根据本发明的第四方面的方法，其中所述的肿瘤和/或癌症可以是医学上已知的任何肿瘤和/或癌症。优选地，所述的肿瘤和/或癌症包括但不限于：

恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett′s氏淋巴癌；

骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；

间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；

中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及

其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderoma pigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。

本发明第五方面提供一种药物组合物，其包含治疗和/或预防有效量的本发明第一方面任一项所述化合物以及任选的药学可接受的稀释剂、载体、赋形剂、辅料或媒介物。

根据本发明的第五方面的药物组合物，其可用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症。根据本发明的第五方面的药物组合物，其中所述的肿瘤和/或癌症可以是医学上已知的任何肿瘤和/或癌症。优选地，所述的肿瘤和/或癌症包括但不限于：

恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett′s氏淋巴癌；

骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；

间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；

中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及

其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderoma pigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。

本发明使用的术语具有以下定义，除非另有描述：

本文所用的术语“烷基”包括含指定数目碳原子的直链和支链的饱和烃基，通常例如是甲基、乙基，以及直链和支链的丙基、丁基、戊基、己基等。术语“烷基”也包括环烷基，即环状C₃-C₆烃基，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。优选地，本文所用的术语“烷基”是指包含指定数目碳原子的直链和支链的链状烷基。

本文所用的术语“烯基”包括含指定数目碳原子的直链和支链的烯烃基，通常例如是乙烯基、烯丙基、丙烯基，以及直链和支链的包含一个或多个双键的并且双键位于任意可行位置的丁烯基、戊烯基、己烯基等。

本文所用的术语“烷氧基”单独或在组合中指烷基醚基团，其中术语“烷基”同上定义。合适的烷基醚基团的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。

术语“卤素”在本文中定义为包括氟、氯、溴或碘，还可以包括它们的同位素。

反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。或者，本领域技术人员也可以根据本发明的教导制备本发明方法未能涵盖的其它式I或式II化合物。

本发明式I或式II化合物可以立体异构体形式存在。本发明包括所有可能的立体异构体，即顺或反单一立体异构体、或二者任何所需比例的混合物。本发明考虑了所有这种异构体(例如对映异构体和非对映异构体)的纯化形式和混合形式，包括外消旋混合物。烯醇形式也包括在本发明范围内。

本发明式I或式II化合物既可以其本身也可以其药学可接受的盐或溶剂合物的形式使用。式I或式II化合物的药学可接受的盐包括与药学上可接受的无机酸或有机酸、或者无机碱或有机碱形成的常规盐。合适的酸加成盐的例子包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、鞣酸等形成的盐。药用盐包括其无机或有机酸盐，其中包括但不限于：氢碘酸盐、硫酸氢盐、磷酸氢盐、丁酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、苦味酸盐、天冬氨酸盐、葡糖酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、丙酮酸盐、乙醇酸盐、三氟乙酸盐、对氨基水杨酸盐、扑酸盐和抗坏血酸盐等。合适的碱加成盐的例子包括与钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因等形成的盐。本文中涉及到本发明化合物时，包括式I或式II化合物及其药学可接受的盐或溶剂合物。本发明化合物的游离碱形式与它们各自的盐形式在某些物理性质(如在极性溶剂中的溶解度)上稍有不同，但对于本发明目的，各酸式盐与它们各自的游离碱形式相当。(参见例如S.M.Berge，et al.，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.，66：1-19(1977)，其通过引用并入本文。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品，本领域技术人员根据该解释可类似明了“药物组合物”所具有的含义。

本发明的化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学可接受的盐的形式使用。词语“药学可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的效果/风险比相称的盐。药学可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge，et al.J.PharmaceuticalSciences，1977，66：1中对药学可接受的盐进行了详细描述。所述盐可通过使本发明化合物的游离碱官能度与合适的有机酸反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐，isothionate)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。同样，碱性含氮基团可用以下物质季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卤化物如苄基溴和苯乙基溴及其他。因此得到可溶于或分散于水或油的产品。可用来形成药学可接受的酸加成盐的酸实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

碱加成盐可通过使本发明化合物的含羧酸部分与合适的碱反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，所述的碱例如药学可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐，或者氨或有机伯胺、仲胺或叔胺。

药学可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等，以及无毒的季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、三乙基铵、二乙基铵和乙基铵等。可用于形成碱加成盐的其他代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。

本发明式I或式II化合物或其药学可接受的盐还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。

供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗或其他治疗时，治疗有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的盐、酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药学可接受的赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

发明人发现，本发明提供的新颖的式I或式II化合物具有有效的抗肿瘤和/或抗癌活性。在此基础上，本发明提供了一种在有需要的受试者中治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的方法，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的式I或式II化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。术语“受试者”是指患有或将会罹患或可能罹患本发明所述肿瘤和/或癌症的动物，优选例如脊椎动物，更优选例如哺乳动物，再更优选特别是例如人。术语“治疗有效量”是指一种剂量，其施用于该受试者后可产生期望的生理应答，特别是产生针对本发明所述肿瘤和/或癌症有关的生理应答。

本发明还提供包含任选地与一种或多种无毒药学可接受的稀释剂、载体、赋形剂、辅料或媒介物配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

在另一个方面，本发明提供包含本发明成分和生理可耐受稀释剂的药物组合物。本发明包括一种或多种上述化合物，其与一种或多种无毒生理可耐受或可接受的稀释剂、载体、辅料或媒介物(本文将它们统称为稀释剂)一起配制成组合物，以供胃肠外注射、鼻内传递、以固体或液体形式口服给药、直肠或局部给药等等。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药学可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。参见例如Prescott，Ed.，Methods in Cell Biology，Volume XIV，Academic Press，NewYork，N.Y.(1976)，p.33。

本文所用的术语“药学可接受的前药”代表本发明化合物的前药，其在可靠的医学判断范围内适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，与合理的效果/风险比相称且对其预定用途有效，在可能的情况下还代表本发明化合物的两性离子形式。本发明的前药可例如通过在血液中水解而在体内快速转化成上式的母体化合物。充分讨论提供于T.Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems，V.14 of the A.C.S.Symposium Series以及Edward B.Roche，ed.，BioreversibleCarriers in Drug Design，American Pharmaceutical Associationand Pergamon Press(1987)，其通过引用并入本文。

本发明式I或式II化合物，当然还包括由它们形成的药物组合物，在抗肿瘤和/或癌症方面是有用的。

本发明人对本发明提供的新颖的式I或式II化合物进行了抗肿瘤/抗癌活性试验的研究，结果表明，本发明的式I或式II化合物能够选择性地杀死某些癌细胞，具有很强的抗癌活性，并且能够抑制肿瘤的生长，与其它的抗癌药物相比，显示出具有高效、选择性和副作用较小等优点。

附图说明

图1是GPQ-cl(为本发明实施例1化合物的代号)对HL-60细胞存活率的影响。图中横坐标为处理时间；24h、48h、72h三个处理时间点的十个棒条，从左到右的1至10分别表示：空白对照(0μg/ml)、DMSO对照、顺铂(20μg/ml)、顺铂(10μg/ml)、顺铂(5μg/ml)、GPQ(80μg/ml)、GPQ(40μg/ml)、GPQ(30μg/ml)、GPQ(20μg/ml)、GPQ(10μg/ml)。实验结果表明：GPQ-cl对HL-60细胞生长有明显的抑制作用。

图2是GPQ-cl对NCI-H460细胞存活率的影响。图中横坐标为处理时间；24h、48h、72h三个处理时间点的十个棒条，从左到右的1至10分别表示：空白对照(0μg/ml)、DMSO对照、顺铂(20μg/ml)、顺铂(10μg/ml)、顺铂(5μg/ml)、GPQ(80μg/ml)、GPQ(40μg/ml)、GPQ(30μg/ml)、GPQ(20μg/ml)、GPQ(10μg/ml)。GPQ-cl对NCI-H460细胞生长有明显的抑制作用。

图3是GPQ-cl对HepG2细胞增殖抑制效果(570nm)。图中横坐标为处理时间；24h、48h、72h三个处理时间点的十个棒条，从左到右的1至10分别表示：空白对照、DMSO对照、GPQ-cl(80μg/ml)、GPQ-cl(40μg/ml)、GPQ-cl(30μg/ml)、GPQ-cl(20μg/ml)、GPQ-cl(10μg/ml)、顺铂(20μg/ml)、顺铂(10μg/ml)、顺铂(5μg/ml)。GPQ-cl对HepG2细胞生长有明显的抑制作用。

图4是GPQ-cl对A549细胞增殖抑制效果(570nm)。图中横坐标为处理时间；24h、48h、72h三个处理时间点的十个棒条，从左到右的1至10分别表示：空白对照、DMSO对照、GPQ-cl(80μg/ml)、GPQ-cl(40μg/ml)、GPQ-cl(30μg/ml)、GPQ-cl(20μg/ml)、GPQ-cl(10μg/ml)、顺铂(20μg/ml)、顺铂(10μg/ml)、顺铂(5μg/ml)。GPQ-cl对A549细胞生长有明显的抑制作用。

图5是GPQ-cl对人外周血单个核细胞生存率的影响。图中横坐标为处理时间；24h、48h、72h三个处理时间点的六个棒条，从左到右的1至6分别表示：顺铂(10μg/ml)、GPQ-cl(80μg/ml)、GPQ-cl(40μg/ml)、GPQ-cl(20μg/ml)、GPQ-cl(10μg/ml)、空白对照。结果表明，GPQ-cl对正常人外周血单个核细胞生长无明显抑制作用。

具体实施方式

下面通过具体的中间体和实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些中间体和实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。

本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。

实施例1、(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟 基-亚甲基苯)肼富马酸盐的制备

反应流程图示如下：

步骤1.在500毫升的反应烧瓶中加入50克(395毫摩尔)的氯化苄和40克(400毫摩尔)的高哌嗪，将其溶解在300毫升的四氢呋喃中，加热回流5小时。冷却，过滤，蒸除四氢呋喃到少量。加入300毫升的水，用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥。蒸除乙酸乙酯，得到粗产物，硅胶分离，得到纯的产物1-苄基高哌嗪，产率95％。

步骤2.在室愠、电磁搅拌的条件下，向装有9.5克(50毫摩尔)的1-苄基高哌嗪和7.35克(60毫摩尔)的2-氯乙酸乙酯和100毫升甲苯溶液反应瓶中，加入7.0克(70毫摩尔)的三乙胺。反应液加热回流8小时后，停止反应，蒸去溶剂。产物溶在100毫升的乙酸乙酯中，各用20毫升水洗两次。有机相经硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到的产物用柱色谱法分离，得到12.4克液体4-苄基高哌嗪-1-乙酸乙酯，产率90％。

氢谱(400MHz，CDCl₃)：7.15-7.27(m，5H)；4.06-4.11(q，2H)；3.57(s，2H)；3.31(s，2H)；2.78-2.81(m，4H)；2.61-2.65(m，4H)；1.73-1.76(m，2H)；1.19(t，3H)。

步骤3.在300毫升的圆底烧瓶中加入2.76克(10毫摩尔)的4-苄基高哌嗪-1-乙酸乙酯，搅拌条件下缓慢滴加0.56克(15毫摩尔)的85％水合肼。混合液加热回流，检测反应基本完成后，停止反应。浓缩反应液，加入少量饱和食盐水洗涤，用二氯甲烷萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥、过滤，浓缩，得到油状物2.3克，产率88％。氢谱(400MHz，CDCl₃)：8.31(s，1H)，7.22-7.33(m，5H)；3.89-4.00(br，2H)；3.65(s，2H)；3.63(m，10H)；1.75-1.81(m，2H)。

步骤4.将2.62克(10毫摩尔)4-苄基高哌嗪乙酰肼、1.6克(10毫摩尔)3-烯丙基-2-羟基苯甲醛和50毫升无水乙醇加入250毫升的烧瓶中，加入0.5毫升的盐酸。反应加热回流48小时(TLC检测)，停止反应，蒸去乙醇，得到的产物用柱色谱法分离，得到3.5克产物(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酸(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼[该化合物也可称为：4-苄基高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚氨甲基-3-烯丙基-2-羟基苯)肼]，产率85％。氢谱(400MHz，CDCl₃)：11.30(s，1H)；10.60(br，1H)；8.41(s，1H)；7.07-7.33(m，7H)；6.84-6.86(m，1H)；6.00(m，1H)；5.07(m，1H)；3.67(s，2H)；3.47(m，2H)；3.45(m，2H)；2.70-2.84(m，9H)；1.83(m，2H)。

质谱：406(M+1)。

步骤5.将4.06克(10毫摩尔)4-苄基高哌嗪乙酰(N-胺基亚胺甲基-3-烯丙基-2-羟基苯)肼、1.16克(10毫摩尔)富马酸溶解在50毫升无水甲醇中。混合液加热回流2小时，停止反应，冷却，有白色固体析出，过滤、干燥得到5.0克的(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。熔点155.4-156.4℃。

实施例2、(4-苯基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(2-羟基-亚甲基 苯)肼富马酸盐的制备

反应流程图示如下：

步骤1.在室愠、电磁搅拌的条件下，向装有8.6克(50毫摩尔)的1-苯基高哌嗪和7.35克(60毫摩尔)的2-氯乙酸乙酯和100毫升甲苯溶液反应瓶中，加入7.0克(70毫摩尔)的三乙胺。反应液加热回流8小时后，停止反应，蒸去溶剂。产物溶在100毫升的乙酸乙酯中，各用20毫升水洗两次。有机相经硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到的产物用柱色谱法分离，得到12.4克液体4-苯基高哌嗪-1-乙酸乙酯，产率92％。

氢谱(400MHz，CDCl₃)：7.18-7.30(m，5H)；4.08-4.13(q，2H)；2.78-2.81(m，4H)；2.61-2.65(m，4H)；1.73-1.76(m，2H)；1.19(t，3H)。

步骤2.在300毫升的圆底烧瓶中加入2.62克(10毫摩尔)的4-苯基高哌嗪-1-乙酸乙酯，搅拌条件下缓慢滴加0.56克(15毫摩尔)的85％水合肼。混合液加热回流，检测反应基本完成后，停止反应。浓缩反应液，加入少量饱和食盐水洗涤，用二氯甲烷萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥、过滤，浓缩，得到油状物2.2克，产率88％。氢谱(400MHz，CDCl₃)：8.31(s，1H)，7.22-7.33(m，5H)；3.89-4.00(br，2H)；3.63(m，10H)；1.75-1.81(m，2H)。

步骤3.将2.5克(10毫摩尔)4-苯基高哌嗪-1-乙酰肼、1.2克(10毫摩尔)2-羟基苯甲醛和50毫升无水乙醇加入250毫升的烧瓶中，加入0.5毫升的盐酸。反应加热回流48小时(TLC检测)，停止反应，蒸去乙醇，得到的产物用柱色谱法分离，得到3.2克产物(4-苯基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼[该化合物也可称为：4-苯基高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚氨甲基-2-羟基-苯)肼]，产率91％。质谱：353(M+1)。

步骤4.将3.53克(10毫摩尔)4-苯基高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚胺甲基-2-羟基苯)肼、1.16克(10毫摩尔)富马酸溶解在50毫升无水甲醇中。混合液加热回流2小时，停止反应，冷却，有白色固体析出，过滤、干燥得到4.2克的(4-苯基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。

实施例3、(4-苯乙基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二烯丙基- 2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐的制备

反应流程图示如下：

步骤1.在500毫升的反应烧瓶中加入50克(355毫摩尔)的2-氯乙基苯和40克(400毫摩尔)的高哌嗪，将其溶解在300毫升的四氢呋喃中，加热回流5小时。冷却，过滤，蒸除四氢呋喃到少量。加入300毫升的水，用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥。蒸除乙酸乙酯，得到粗产物，硅胶分离，得到纯的产物1-苯乙基高哌嗪，产率80％。

步骤2.在室愠、电磁搅拌的条件下，向装有10.2克(50毫摩尔)的1-苯乙基高哌嗪和7.35克(60毫摩尔)的2-氯乙酸乙酯和100毫升甲苯溶液反应瓶中，加入7.0克(70毫摩尔)的三乙胺。反应液加热回流8小时后，停止反应，蒸去溶剂。产物溶在100毫升的乙酸乙酯中，各用20毫升水洗两次。有机相经硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到的产物用柱色谱法分离，得到12.0克液体4-苯乙基高哌嗪-1-乙酸乙酯，产率83％。

步骤3.在300毫升的圆底烧瓶中加入2.90克(10毫摩尔)的4-苯乙基高哌嗪-1-乙酸乙酯，搅拌条件下缓慢滴加0.56克(15毫摩尔)的85％水合肼。混合液加热回流，检测反应基本完成后，停止反应。浓缩反应液，加入少量饱和食盐水洗涤，用二氯甲烷萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥、过滤，浓缩，得到油状物2.4克，产率86％。

步骤4.将2.76克(10毫摩尔)4-苯乙基高哌嗪-1-乙酰肼、2.02克(10毫摩尔)3，5-二烯丙基-2-羟基苯甲醛和50毫升无水乙醇加入250毫升的烧瓶中，加入0.5毫升的盐酸。反应加热回流48小时(TLC检测)，停止反应，蒸去乙醇，得到的产物用柱色谱法分离，得到4.1克产物(4-苯乙基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼[该化合物也可称为：4-苯乙基高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚氨甲基-3，5-二烯丙基-2-羟基苯)肼]，产率85％。

步骤5.将4.60克(10毫摩尔)4-苯乙基高哌嗪乙酰(N-胺基亚胺甲基-3，5-二烯丙基-2-羟基苯)肼、1.16克(10毫摩尔)富马酸溶解在50毫升无水甲醇中。混合液加热回流2小时，停止反应，冷却，有白色固体析出，过滤、干燥得到5.0克的(4-苯乙基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二烯丙基-2-羟基-亚苄基)肼富马酸盐。

实施例4、(4-对甲基苯磺酰基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5- 二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐的制备

反应流程图示如下：

步骤1.在500毫升的反应烧瓶中加入50克(262毫摩尔)的对甲基苯磺酰氯和40克(400毫摩尔)的高哌嗪，将其溶解在300毫升的甲苯中，加入30毫升的三乙胺，加热回流5小时。冷却，过滤，蒸除甲苯到少量。加入300毫升的水，用乙酸乙酯萃取，用Na₂SO₄干燥。蒸除乙酸乙酯，得到粗产物，硅胶分离，得到纯的产物1-对甲苯磺酰高哌嗪，产率85％。

步骤2.在室愠、电磁搅拌的条件下，向装有12.7克(50毫摩尔)的1-对甲苯磺酰高哌嗪和7.35克(60毫摩尔)的2-氯乙酸乙酯和100毫升甲苯溶液反应瓶中，加入7.0克(70毫摩尔)的三乙胺。反应液加热回流8小时后，停止反应，蒸去溶剂。产物溶在100毫升的乙酸乙酯中，各用20毫升水洗两次。有机相经硫酸镁干燥，蒸去溶剂，得到的产物用柱色谱法分离，得到12.4克液体4-对甲苯磺酰基高哌嗪-1-乙酸乙酯，产率85％。

步骤3.在300毫升的圆底烧瓶中加入3.4克(10毫摩尔)的4-对甲基苯磺酰高哌嗪-1-乙酸乙酯，搅拌条件下缓慢滴加0.56克(15毫摩尔)的85％水合肼。混合液加热回流，检测反应基本完成后，停止反应。浓缩反应液，加入少量饱和食盐水洗涤，用二氯甲烷萃取，将有机层用无水硫酸镁干燥、过滤，浓缩，得到油状物2.3克，产率86％。

步骤4.将3.26克(10毫摩尔)4-对甲基苯磺酰高哌嗪-1-乙酰肼、1.91克(10毫摩尔)3，5-二氯-2-羟基苯甲醛和50毫升无水乙醇加入250毫升的烧瓶中，加入0.5毫升的盐酸。反应加热回流48小时(TLC检测)，停止反应，蒸去乙醇，得到的产物用柱色谱法分离，得到4.0克产物(4-对甲基苯磺酰-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼[该化合物也可称为：4-对甲基苯磺酰高哌嗪-1-乙酰(N-胺基亚氨甲基-3，5-二氯-2-羟基苯)肼]，产率81％。

步骤5.将4.99克(10毫摩尔)4-对甲基苯磺酰高哌嗪乙酰(N-胺基亚胺甲基-3，5-二氯-2-羟基苯)肼、1.16克(10毫摩尔)富马酸溶解在50毫升无水甲醇中。混合液加热回流2小时，停止反应，冷却，有白色固体析出，过滤、干燥得到5.0克的(4-对甲基苯磺酰-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。

实验例1、生物学试验

通过MTT来检测GPQ-Cl(实施例1的化合物)对白血病细胞系HL60、K562、肝癌细胞系Hepa G2和肺癌细胞系A549、NCI-H460的增殖抑制效果。具体方法为：使用2×10⁴接种96孔板，贴壁生长过夜后，分别加入80、40、20、10和5μg/ml的GPQ-CI(溶于DMSO中)药物浓度处理细胞，设置3个复孔，以相同剂量的DMSO作为阴性对照，以10μg/ml的顺铂为阳性对照，并分别处理24、48、72小时后，每孔加入10μl MTT(5mg/ml，Sigma)，继续培养4小时，吸弃培养液，于每孔加入100μl的DMSO，摇床上溶解10分钟，于核酸/蛋白分析仪上检测570nm的吸收值，计算GPQ-Cl对细胞增殖抑制率。

另外，采正常人外周血10ml用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，取4×10⁴接种96孔板，分别加入80、40、20、10μg/ml的GPQ-Cl(溶于DMSO中)药物浓度处理细胞，设置3个复孔，以相同剂量的DMSO作为阴性对照，以10μg/ml的顺铂为阳性对照，并分别处理24、48、72小时后，每孔加入10μlMTT(5mg/ml，Sigma)，继续培养4小时，吸弃培养液，于每孔加入100μl的DMSO，摇床上溶解10分钟，于核酸/蛋白分析仪上检测570nm的吸收值，计算GPQ-Cl对细胞生长的影响。

实验结果表明：GPQ-cl药物在10μg/mL至80μg/mL浓度下，随着浓度的增加，HepG2及A549细胞的存活率均有所下降，顺铂也有同样的结果，分别计算IC50，结果表明，顺铂的IC50值低于GPQ-cl，而且随着处理时间的延长，顺铂对HepG2与A549细胞的IC50值有极大的下降，而GPQ-cl则下降幅度小于顺铂的下降幅度。

同时比较GPQ-cl对HepG2与A549细胞的抑制效果发现：在高浓度下，80μg/mL时，GPQ-cl对HepG2及A549细胞的抑制率大概在80％左右，在40μg/mL下，两者的差异也不大。但是在较低浓度时，比如30μg/mL时，GPQ-cl对HepG2的抑制作用明显强于对A549的抑制作用，计算出的IC50值也是A549高于HepG2细胞。

GPQ-cl药物在10μg/mL至80μg/mL浓度下，对白血病细胞HL60和肺癌细胞系NCI-H460细胞生长有明显的抑制效果，IC50值明显小于其他细胞株。

试验结果分别参见图1至图5以及附图说明部分中对它们的详细说明。

发明人还发现，本发明涉及的其它化合物也具有与上述实施例1化合物相同或相类似的结果。

Claims (10)

1、式I或式II的化合物：

其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子或氮原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、C₂-C₆链烯基、C₁-C₆烷基、或C₁-C₆烷基氧基，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

2、根据权利要求1的化合物，其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、C₂-C₆链烯基、C₁-C₆烷基、或C₁-C₆烷基氧基，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

3、根据权利要求1的化合物，其中：

n选自0、1、或2；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烯丙基、2-丁烯基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁基氧基，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

4、根据权利要求1的化合物，其中：

n为1；

A、B、C、D、和E各自独立地为碳原子；以及

R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢原子、羟基、卤素、烯丙基、2-丁烯基、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁基氧基，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

5、根据权利要求1的化合物，其选自以下化合物：

(4-苄基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼，和

(4-对甲苯磺酰基-[1，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3，5-二氯-2-羟基-亚甲基苯)肼，或其药学可接受的盐、溶剂合物、立体异构体或前体药物。

6、根据权利要求1的化合物，其为(4-苄基-11，4]二氮杂环庚烷-1-基)-乙酰(3-烯丙基-2-羟基-亚甲基苯)肼富马酸盐。

7、制备权利要求1至6任一项所述化合物的方法，其包括以下步骤：

(1)在碱性条件下，使式或式

的氯代芳香烃化合物与高哌嗪在有机溶剂中反应生成以下式Ib或式IIb化合物：

(2)在碱性条件下，使式Ib或式IIb化合物与氯乙酸乙酯反应生成以下式Ic或式IIc的化合物：

(3)在有机溶剂中，使水合肼与上述式Ic或式IIc的化合物反应生成以下式Id或式IId的化合物：

(4)在乙醇溶液中，步骤(3)得到的式Id或式IId的化合物与式

化合物反应得到，式I或式II的化合物；和任选的

(5)使式I或式II的化合物与酸反应，得到式I或式II的化合物的相应盐，

其中，n、A、B、C、D、E、R、R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自的定义同本发明第一方面任一项的化合物。

8、权利要求1至6任一项所述化合物在制备用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症的药物中的用途。

9、根据权利要求8的用途，其中所述的肿瘤和/或癌症选自：

恶性肿瘤，包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、头和颈癌、食管癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和皮肤癌(包括鳞状细胞癌)；

淋巴系统的造血肿瘤，包括但不限于白血病、急性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴癌、T-细胞淋巴癌、霍奇金淋巴癌、非-霍奇金淋巴癌、毛细胞淋巴癌、外套细胞淋巴瘤、骨髓瘤和Burkett′s氏淋巴癌；

骨髓系统的造血肿瘤，包括但不限于急性和慢性髓细胞性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；

间质成因的肿瘤，包括但不限于纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；

中枢和周围神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成纤维神经瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；以及

其他肿瘤，包括但不限于黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、外生性色素颈瘤(xenoderoma pigmentosum)、甲状腺滤囊癌和卡波氏肉瘤。

10、一种药物组合物，其包含治疗和/或预防有效量的权利要求1至6任一项所述化合物以及任选的药学可接受的稀释剂、载体、赋形剂、辅料或媒介物。

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