CN101497878B - 特异性高效亲和膜ⅰ型基质金属蛋白酶(mt1-mmp)的多肽、蛋白及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽序列；同时公开了特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶的多肽含有的基序。含有特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽序列或基序的多肽或蛋白可以经过化学修饰直接或间接连接发光基团，用来特异性高亲和的标记MT1-MMP或表达MT1-MMP的细胞或组织。同时，含有特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽序列或基序的多肽或蛋白可以用于MT1-MMP分子的定量检测。此外，含特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽序列或基序的多肽或蛋白还可以作为靶向药物的载体，应用于MT1-MMP过度表达的疾病的治疗。
Description
技术领域
本发明涉及含有特定序列或基序的膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的特异性高亲和力的多肽或蛋白，这种多肽或蛋白的用途，包括含有这些序列或基序的多肽或蛋白作为靶向药物的载体、生物标记物和检测手段，属于生物技术领域。
背景技术
基质金属蛋白酶即Matrix Metalloproteinases，简称MMPs，是由细胞分泌的Zn2+金属内肽酶家族的总称，参与细胞外基质(ECM)的降解。MMPs是一个Zn2+依赖性蛋白酶家族，主要由成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等合成与分泌，通常在中性条件下及Ca2+参与下发挥作用，目前已发现24种人源MMPs。这些MMP可以根据其结构分为膜型和分泌型，其中，膜型MMP有六种。
膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP，MMP-14)与其它膜型MMP有着很高的同源性，它们都含有一个前肽结构域，含有Zn2+离子结合位点的催化结构域，铰链结构域，血红素样结构域和一个胞质尾端结构域。而它本身又有着自身的特殊结构，MT1-MMP在C-末端含有一个胞浆区以及N-末端含有一个furin蛋白识别位点。MT1-MMP在膜型MMP中发挥着很重要的作用，主要与正常及肿瘤细胞的细胞外基质的降解和重塑相关。MT1-MMP可以降解细胞外基质中多种成分，如：I型和II型胶原，纤维连接蛋白，玻璃粘连蛋白，层粘连蛋白，纤维蛋白和蛋白聚糖等。同时MT1-MMP还可以活化与肿瘤迁移和浸润密切相关的MMP-2酶原和MMP-13酶原。另外，MT1-MMP还涉及到许多细胞表面分子的裂解，如：转谷氨酰胺酶，CD44在调控细胞外周蛋白，整和蛋白，低密度脂蛋白和L-聚糖等。MT1-MMP还可以介导细胞外的水解过程，调节细胞间的粘附和细胞的运动性，使细胞能够适应不断改变的组织微环境。MT1-MMP可以在哺乳动物中以活化形式广泛表达于细胞表面上，而酶原的活化却可能是在细胞质中完成的，然后再运输到细胞膜表面上的。
MT1-MMP对细胞外基质和细胞表面粘附分子的水解在生命的许多正常生理功能中(伤口愈合，骨骼的生长和重塑)和病理过程中(关节炎和癌症)都发挥着重要的作用。例如基因敲除MT1-MMP的小鼠模型中小鼠会表现为侏儒并且在成年后就会发生死亡。正常情况下，MT1-MMP在组织中低表达，而在肿瘤组织中MT1-MMP的表达均有不同程度的增加。在疾病方面，MT1-MMP在肺、结肠、头和颈部癌症中表达。在不同类型的癌症中MMP的过度表达是不同的，且原发肿瘤与其转移性癌中酶的表达也有差异。MT1-MMP在肿瘤中有过量的表达，并且这种高表达同时又伴随着肿瘤的高迁移，浸润和转移的增强，MT1-MMP在肿瘤细胞从正常到具有迁移能力转换过程中发挥着重要作用。MT1-MMP表达调节主要发生在转录水平，也可发生在mRNA稳定性水平，以适应肿瘤浸润细胞和肿瘤基质细胞分泌的生长因子和细胞因子的需要。MT1-MMP涉及原发性肿瘤生长和转移性肿瘤的生成。在肿瘤迁移过程中，都涉及到MMP-2的高表达，而MMP-2的活化又是由MT1-MMP来完成的。所以从促进肿瘤迁移和活化肿瘤浸润相关酶等方面，MT1-MMP作为关键因子，在科研和临床上都占据着重要位置。例如在人类鳞屑癌细胞A431中，MT1-MMP就有很高量的表达而同时促进了癌细胞的浸润能力。同样的，对于人纤维肉瘤细胞HT1080，采用热激法处理后，MT1-MMP的表达减少，进而表现出HT1080细胞浸润能力的下降。在对人卵巢癌的临床检测中，通过对不同时期卵巢癌病人癌变组织的免疫组化染色显示：MT1-MMP的表达量多少，关系到卵巢癌发展的阶段，MT1-MMP表达量的增多，也就加剧了卵巢癌的恶化，同时也促进了这种癌症迁移和组织学上的进一步恶化。在人类神经胶质瘤方面，通过对正常人脑和患病人脑的免疫组化染色比较显示，在正常人脑中MT1-MMP几乎没有表达，而在胶质瘤病人的脑中检测到了大量MT1-MMP的表达。在黑色素瘤细胞中，通过对MT1-MMP的mRNA的Northern blot研究发现MT1-MMP的mRNA的含量越高黑色素瘤的迁移能力越强。然而，并不是所有的肿瘤细胞都表达MT1-MMP，如western检测人乳腺癌细胞MCF-7中就观察不到MT1-MMP的表达。
如上所述，MT1-MMP在肿瘤中有较正常组织中高的表达，那么靶向MT1-MMP的细胞投递药物就可以作为一种治疗癌症的方法。而MMPs之间的同源性要求对MT1-MMP的亲和要有很高选择性。早期的关于诊断或标记肿瘤的方法主要集中于对抗体或其衍生物的研究，尽管这些试剂在肿瘤成像诊断上取得些许成功，但是它们的缺点同样限制了抗体类试剂在肿瘤诊断上的广泛应用：它们半衰期短或是容易产生免疫原性。因此找到新的标记肿瘤分子势在必行，而多肽类物质由于其出色的药物代谢和低或无免疫原性可能成为优秀的药物、药物载体或肿瘤标记物质。
发明内容
我们发明并证明了含有特定序列或基序的多肽对MT1-MMP的特异性高亲和作用。多肽的基序His-X-His(X为任意一种氨基酸)、His-Trp、Arg-Ser是和MT1-MMP产生结合作用的关键的氨基酸基序。含有这些特定序列或基序的一系列多肽或蛋白可以与MT1-MMP选择性特异性结合并具有高亲和力。本发明公布了含有特定序列或基序的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽、蛋白及其应用。对这些多肽和蛋白的应用包括：应用含有这些序列或基序的多肽或蛋白在细胞水平或组织水平标记MT1-MMP，定量的检测MT1-MMP表达；含有这些序列或基序的多肽或蛋白可以用来作为一种亲和试剂定量的检查MT1-MMP的含量和活性；含有这些序列或基序的的多肽或蛋白可作为一种靶向药物的载体，应用于包括癌症在内的疾病的靶向治疗。
一方面，本发明涉及含有特定序列的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽、蛋白及在特异性亲和标记MT1-MMP中的应用；含有特定基序的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽、蛋白在特异性亲和标记MT1-MMP中的应用，所述的特定MT1-MMP亲和多肽、蛋白含有的基序是His-X-His(X为任意一种氨基酸)，或His-Trp，或Arg-Ser，或包含这些基序的组合。含特定多肽序列或氨基酸基序的MT1-MMP的亲和多肽或蛋白用于检测MT1-MMP在细胞中的位置和含量；以及在正常或疾病组织中MT1-MMP的表达位置和含量。
另一方面，本发明还涉及含有特定序列或基序的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽、蛋白及在MT1-MMP定量方面的应用，所述的特定MT1-MMP亲和多肽、蛋白含有的基序是His-X-His(X为任意一种氨基酸)，或His-Trp，或Arg-Ser，或包含这些基序的组合。MT1-MMP的定量是指对MT1-MMP的浓度或活性的定量检测。
第三，本发明还涉及含有特定序列或基序的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)的多肽、蛋白作为药物载体的应用，所述的特定MT1-MMP亲和多肽、蛋白含有的基序是His-X-His(X为任意一种氨基酸)，或His-Trp，或Arg-Ser，或包含这些基序的组合。
具体实施方式
下列实施例更详细地说明本发明，但是并不是要将本发明限定为实施例。
我们合成了含有His-X-His(X为任意一种氨基酸)和His-Trp基序的一段氨基酸Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu，应用于下列实施例。
实施例1.Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对膜I型基质金属蛋白酶有特异性选择和高亲和作用。
实验步骤：
用100-200μl 100μg/ml的靶分子MT1-MMP，MMP-1，MMP-7，MMP-13，MMP-16，MMP-26和MMP-28(溶于0.1M pH8.6 NaHCO3中)包被ELISA板的每个孔，每个待鉴定克隆一排包被孔。在密封的湿盒(如：排有湿纸巾的封口塑料盒)中4℃包被过夜。
甩出多余靶分子溶液，并倒置平板在纸巾上拍甩除去残液。每孔加满封阻液。另外，每个待鉴定克隆的一排未包被孔也加入封阻液，以检测所选序列对BSA包被塑料板的结合力。在将多肽加入靶分子包被板前，还要再准备一个微量滴定板进行多肽的系列稀释，这个板也要封阻。单独在另外一个封阻板中进行稀释是为了避免稀释过程中有多肽吸附到靶分子上。最后，所有封阻板4℃封阻1-2hrs。
甩出封阻液，用1×TBS/Tween洗板6次，每次均倒置平板在干净纸巾上拍甩去洗液，Tween浓度应当与淘选清洗步骤中所用浓度相同。
在单独的封阻板中每孔预先加入200μl TBS，稀释各个不同多肽小肽到1/10或1/100。
用多通道移液器将每排稀释好的多肽加入包被有靶分子的板中。室温震荡作用1-2hrs。
用1×TBS/Tween洗板6次。
加入稀释好的HRP标记的亲和素抗体，每孔加入100μl，室温震荡作用1小时。
用1×TBS/Tween洗板6次。
每孔加200μl底物溶液，室温作用10-60min。
每孔加入50μl 1M H2SO4终止反应。
用读板仪记录450nm处的吸光值。OD值的大小表示多肽与MMPs的结合情况，OD值越大，多肽与MMP的结合力越强。
附图1是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu与MT1-MMP，MMP-13，-16，-26结合能力图。
附图2是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu与MT1-MMP，MMP-1，-7，-28得结合能力图。
结论：测试Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu与多种MT1-MMP同家族成员结合时，对MT1-MMP有很高的选择性和高的亲和力，与其它MMPs结合性和选择性很差。
实施例2.Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对膜I型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)在酶学和细胞水平上没有抑制作用。
实验步骤：
酶学上检测Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对MT1-MMP的抑制实验：
我们所用的底物为DQ-Gelatin和P126；在室温条件下测定，反应总体积为100ul。在加有抑制剂时，酶与抑制剂应在缓冲液体系中孵育30分钟，37℃然后再加底物测定。所有检测的仪器为FLX800荧光酶标仪(Bio-Tek)，对于DQ-Gelatin激发波长495nm，发射波长515nm，而对于P126，激发波长328nm，发射波长393nm。测定反应时间为8分钟，取荧光值的点所组成的线的斜率为速度，其中未加抑制剂的记为V0，加抑制剂的为Vi，以Vi/V0表示抑制剂的抑制程度；然后以所加抑制剂的浓度为横坐标，以Vi/V0的值为纵坐标，做出相应曲线；在Vi/V0为0.5处所对应的抑制剂的浓度为IC50。
在此，我们所用的底物DQ-Gelatin和P126均为荧光底物，其原理为一段MMP切割的小肽两端连有荧光基团和淬灭基团。随着MMP将其降解，荧光基团和淬灭基团分离，从而发出荧光，并且在一定范围内，荧光密度的增强速度与酶反应速度称正比关系，故可用荧光的增加速度来代表酶活性。
Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对MT1-MMP的抑制效果抑制都在20％以下，可以说对MT1-MMP的影响很小。
附图3是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对MT1-MMP的抑制能力图。
结论：Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu在酶学水平上对MT1-MMP的抑制作用很弱。
实施例3.细胞水平上Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对几种MT1-MMP表达量不同的细胞的标记：
实验步骤：
取出培养至80％左右的细胞，用胰酶消化下来，加入5ml培养基，反复吹打细胞液，将细胞吹成单个细胞，取200ul细胞悬液滴至灭菌后的盖玻片上，37℃细胞培养箱中培养过夜。
PBS清洗盖玻片三次后，加入DMEM/FBS，孵育30mins。
室温下加入Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu，4℃孵育过夜。
PBS洗涤三次，加入FITC-Avidin，避光孵育30min
PBS洗涤三次，95％乙醇后固定，甘油封片。
荧光显微镜下观察
附图4是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对三种表达不同量MT1-MMP的细胞的标记图。
其中HT1080人纤维肉瘤细胞高表达MT1-MMP，A549非小细胞肺癌细胞中度表达M％MMP，MCF-7人乳腺癌细胞不表达MT-MMP。柱形图代表三种细胞上的荧光强度。
附图5是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对三种表达不同量MT1-MMP的细胞的荧光标记图的量化柱形图。
结论：在高表达MT1-MMP的HT1080人纤维肉瘤细胞中，中度表达MT1-MMP的A549非小细胞肺癌细胞，不表达MT1-MMP的MCF-7人乳腺癌细胞中Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu可特异性的定量化标记MT1-MMP。
实施例4.荧光素异硫氰酸呱FITC标记的肽段在标记不同表达量MT1-MMP方面的应用：
实验步骤：
采用固相合成法合成His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu将肽从树脂上切下之前，根据欲标记的多肽总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素，用分析天平准确称所取所需的异硫氰酸荧光素粉末。
结合(或称标记)：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入蛋白溶液中，避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻棒上(大约5～10min内加完)，加毕后，继续搅拌12～18h。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故须及时添冰去水；可将结合装置安放在4℃冰箱或冰库中。
透析：结合完毕后，将蛋白的溶液离心(2500r/min)20min，除去其中少量之沉淀物，装入透析袋中后再置于烧杯中，用pH8.0缓冲盐水透析(0～4℃)过夜。
纯化：HPLC纯化荧光标记的多肽。
利用FITC-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu标记细胞中MT1-MMP的实验步骤如利用Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu标记细胞中MT1-MMP一致。
结论：利用FITC-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu可以用于标记细胞中MT1-MMP。
实施例5.利用花青素Cy5 FITC标记的肽段在标记不同表达量MT1-MMP方面的应用：
实验步骤：
固相合成法合成His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu后，切割下来溶于50mM Tris_HCl，pH7.4中与1.4倍摩尔浓度过量的溶于DMSO中的Cy5亚胺混合，孵育20分钟后，采用分子筛纯化。
用Cy5-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu标记细胞中MT1-MMP的实验步骤如利用Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu标记细胞中MT1-MMP一致。
结论：利用Cy5-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu可以用于标记细胞中MT1-MMP。
实施例6.利用Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu检测MT1-MMP的浓度：
实验步骤：
用100-200μl 100μg/ml的靶分子(溶于0.1M pH8.6 NaHCO3中)Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu包被ELISA板的每个孔，每个待鉴定克隆一排包被孔。在密封的湿盒(如：排有湿纸巾的封口塑料盒)中4℃包被过夜。
甩出多余靶分子溶液，并倒置平板在纸巾上拍甩除去残液。每孔加满封阻液。
甩出封阻液，用1×TBS/Tween洗板6次，每次均倒置平板在干净纸巾上拍甩去洗液，Tween浓度应当与淘选清洗步骤中所用浓度相同。
用多通道移液器将每排稀释好的已知浓度的MT1-MMP加入包被有靶分子Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu的板中。室温震荡作用1-2hrs。
用1×TBS/Tween洗板6次。
加入稀释好的HRP标记的山羊抗兔二抗，每孔加入100μl，室温震荡作用1小时。
用1×TBS/Tween洗板6次。
每孔加200μl底物溶液，室温作用10-60min。
每孔加入50μl 1M H2SO4终止反应。
用读板仪记录450nm处的吸光值。以OD值和MT1-MMP做出标准曲线。当要测定某一未知浓度的MT1-MMP时，单独以Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu包被两个复孔，加入待测样品，其他步骤与测定标准曲线的步骤一致，显色测定OD450后，在标准曲线上可以确定MT1-MMP的浓度。
附图6是Biotin-His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu对不同量MT1-MMP的浓度测定图。
我们有包被了另一个已知浓度的MT1-MMP来验证标准曲线的准确性，结果表明MT1-MMP浓度为0.045uM时，它的OD450为0.022，这与我们制定的标准曲线相符。
结论：利用含有亲和MT1-MMP的亲和基序得小肽，可以用于亲和测定MT1-MMP的浓度。
实施例7.以His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu为载体连接具有放射性治疗性的131I，在对肿瘤成像诊断及治疗方面的应用：
实验步骤：
放射性标记多肽的合成：我们采用氯胺-T法在N-末端达到连接放射同位素131I的目的。Fmoc法固相合成His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu后，从树脂上切割下来纯化前在连接131I，用Sephdex G-25柱纯化后，质谱检测分子量。
动物模型的构建：采用35只体重在237g左右的昆明小鼠做为实验对象检测合成的131I标记的亲和多肽在肿瘤成像和治疗方面的应用。无菌条件下，取HT1080黑色素瘤细胞悬液0.5ml(107细胞)，注射至昆明纯系小鼠右前肢腋下，定期观察瘤组织生长与荷瘤小鼠状况，10天后，待肿瘤直径至500mm左右，供体内实验用。
成像过程及对肿瘤杀伤效果分析：轻微麻醉后，鼠尾静脉注射50-100uCi的标记后多肽。成像前，每只小鼠按13mg/mg喂食甲苯噻嗪镇痛小鼠。在注射标记多肽后的1至2小时后，对小鼠全身利用gamma射线相机拍摄小鼠全身，之后在注射标记的多肽后每隔一天，三天，五天和六天后分别对小鼠拍照，分析131I标记的亲和多肽在体内分布及肿瘤大小的变化。
结论：131I标记的亲和多肽可以用在肿瘤成像方面和杀死肿瘤细胞方面。
本发明所涉及的氨基酸序列
| 序列号 | MT1-MMP特异性高效亲和多肽的氨基酸序列 |
| 1 | His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu |
| 2 | Ala-Ser-Ala-Lys-Met-Pro-His-Leu-His-His-Arg-Ser |
| 3 | His-Tyr-Ala-His-Asn-His-Ala-Arg-Leu-His-phe-Arg |
| 4 | His-Met-Leu-Ser-Arg-His-Asp-His-Ser-Tyr-Ser-Leu |
| 5 | His-Gly-Lys-Tyr-Leu-Gly-Ala-His-Leu-His-Lys-Tyr |
| 6 | Lys-His-Met-His-Trp-His-Pro-Pro-Ala-Leu-Asn-Thr |
| 7 | Val-Ser-Arg-His-Gln-Ser-Trp-His-Pro-His-Asp-leu |
| 8 | Leu-His-Lys-His-Hjs-Ser-Asn-Pro-Val-Phe-Ser-Asp |
| 9 | Ala-His-Ile-His-Trp-Lys-Pro-Arg-Pro-Pro-Pro-Leu |
| 10 | Leu-Pro-Gly-His-Arg-His-Pro-His-His-Pro-Pro-Pro |
| 11 | His-Gly-Lys-His-Ser-His-Thr-Ile-Pro-Asn-Arg-Tyr |
| 12 | Ser-His-His-His-His-His-Thr-Ser-Ser-Gly-Ser-Ser |
| 13 | Gly-His-Arg-His-Ile-His-His-Ala-Lys-Leu-Asn-Thr |
| 14 | Ser-Pro-His-His-His-Ala-Asn-Pro-Pro-Pro-Arg-Ser |
| 15 | Ser-Gln-Ser-His-Ser-His-Gly-Ala-Val-Gly-Ser-Arg |
| 16 | Ala-Leu-Arg-His-His-Ser-His-Thr-Gly-Leu-Ser-Met |
| 17 | His-Ser-Gly-Asn-His-Ser-Lys-Ser-His-Pro-Gln-Arg |
Claims (5)
1.含有特定基序的特异性高效亲和膜I型基质金属蛋白酶MT1-MMP的多肽或蛋白，所述的特定MT1-MMP亲和多肽或蛋白含有的基序是His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu。
2.如权利要求1所述多肽或蛋白在制备作为检测MT1-MMP含量的定量试剂方面的应用，所述的特定MT1-MMP亲和多肽或蛋白含有的基序是His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu。
3.如权利要求1所述多肽或蛋白在制备作为特异性亲和MT1-MMP的药物载体中的应用，所述的特定MT1-MMP亲和多肽或蛋白含有的基序是His-Trp-Lys-His-Leu-His-Asn-Thr-Lys-Thr-Phe-Leu。
4.如权利要求3中所述的应用，其中含有特定序列或基序的特异性亲和MT1-MMP的多肽或蛋白作为药物载体可经过化学修饰连接各种化合物或基团。
5.如权利要求4中所述的应用，其中含有特定序列或基序的特异性亲和MT1-MMP的多肽或蛋白作为药物载体所连接的基团或化合物是对MT1-MMP活性有抑制作用，或对能表达MT1-MMP的细胞或肿瘤有抑制或毒性作用，或是从天然产物中提取或化学方法合成的对肿瘤细胞有抑制或毒性的基团或化合物。
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