CN101481736A - 一种dna微阵列芯片及其检测方法和在检测cyp3a4、cyp3a5和mdr1基因多态性上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种DNA微阵列芯片及其检测方法和在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性上的应用，该芯片包括固相载体和探针，其探针的核苷酸序列如探针的核苷酸序列如SEQ ID No：1～SEQ ID No：49所示。本发明通过先将探针点载在固相载体上，然后标记并制备待测样品的目的核苷酸序列，接着将该目的核苷酸序列与芯片上的探针进行杂交，最后对杂交结果进行检测便可得到待测样品中CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因的信息。本发明的芯片可以一次性对多个样本同时进行多项基因的检测，操作简单，结果准确性高，通过一次检测即可获得患者的大量遗传信息，可用于指导制定合理用药方案，实现个性化医疗。
Description
技术领域
本发明涉及医学体外诊断技术，具体涉及一种DNA微阵列芯片及其检测方法和在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性上的应用。
背景技术
器官移植是治疗终末期肝病的最有效方法，临床常用免疫抑制剂他克莫司、环孢素和雷帕霉素的广泛应用改善了器官移植的临床效果，同时其毒副作用也日益受到关注。
临床应用中很可能因给药剂量不足导致“免疫抑制不足”造成移植物的免疫排斥导致移植失败，或者给药过量造成“免疫抑制过度”导致肝肾毒性及感染和肿瘤的发生。目前常用的是传统的“千人一药，千人一量”给药模式，即病人服用相同起始剂量，然而临床目前常用的免疫抑制剂他克莫司、环孢素和雷帕霉素口服生物利用度低，治疗窗窄，药代动力学表现出极大个体差异，常会出现血药浓度相同，患者疗效却相差甚远，用传统的药代动力学机制也无法解释的情况。临床应用时常需进行血药浓度监测，用药一段时间后测定药物浓度，医师需经过多次调整，方能找到适合每例患者的最佳药物方案及药物剂量。采用这种给药方式，难以真正做到个体化用药，更不能前瞻性预测药物的毒副作用或排斥反应的发生。因此，迫切需要新的方法指导临床合理用药，弥补以往只根据血药浓度进行个体化用药的不足，为临床个体化用药开辟新的途径。
不同个体对于药物治疗反应的差异可由多种因素造成，并产生不同的后果。其中20％～95％药物处置和效应差异由遗传因素所致，涉及药物靶体基因、药物代谢酶基因、药物转运相关基因、DNA修复酶基因以及一些辅基合成酶基因等。这些基因的遗传变异是形成药物疗效产生个体差异的基础，其他影响因素包括年龄、性别、疾病以及环境因素等。
药物代谢是药物在体内代谢和消除的主要决定因素。药物在体内代谢向两个方向发展：代谢解毒和代谢活化，其中大部分药物的代谢在肝脏进行。细胞色素P450(CYP)酶系是肝脏中主要的代谢酶之一，该酶活性存在明显个体差异，对不同个体的药效果、药物不良反应及药物毒性均产生重要影响。P450(CYP)是一类非常重要的药物代谢酶家族，CYP基因多态性以及对药物代谢的影响，也是药物遗传学研究的最早对象之一。其中CYP3A亚家族是人类最主要的CYP亚族，50％以上的药物由其介导进行I相代谢。
人的CYP3A亚家族主要有4种同工酶组成：CYP3A4(cytochrome P4503A4，细胞色素P450 3A4)，CYP3A5(cytochrome P450 3A5，细胞色素P4503A5)，CYP3A7和新近发现CYP3A43，均存在多种基因多态性，它们相互毗邻并定位于染色体7q21。CYP3A7是胚胎期肝内CYP3A的主要表现形式，出生后便显著降低。CYP3A43在成人肝脏中少量表达，但它在药物代谢中起的作用仍不明确。CYP3A4和CYP3A5则是CYP3A亚家族中最丰富最重要的酶，两者在结构和功能上非常相近，主要分布在肝脏和胃肠道。
已经发现CYP3A4基因有30多种多态性。CYP3A4*1B是最常见的突变，它不会导致CYP3A4底物代谢的改变，但是可能和前列腺癌、继发型白血病和青春期提前有关。有学者认为，CYP3A4*1B和CYP3A5*1之间的连锁不平衡是造成CYP3A表型多态性的主要因素。CYP3A5作为唯一表达于肝外的CYP3A，它的多态性表达可能与某些组织，如肺、肾、前列腺、乳腺、白细胞的疾病易感性以及类固醇和外源性物质在这些组织的代谢有关。CYP3A5的基因多态性影响药物的疗效，与CYP3A5*1等位基因携带者比较，CYP3A5*3/*3基因型个体需要较少量的他克莫司(Tacrolimus，FK506)便可达到治疗浓度。许多研究表明，CYP3A4和有CYP3A5参与多种药物的代谢，其基因多态性常导致不同个体间药效和毒副作用的差异，因此日益收到广泛关注。
此外，人MDR1(multi-drug resistance 1，多药耐药基因1)基因所编码基因产物P-gp是ABC运输系统的重要一员，属于ABCB1家族。P-gp是一种跨膜蛋白，作为泵将细胞内的一些药物转运到细胞外，它影响许多药物的吸收和代谢，在药物代谢转运中有重要作用。迄今发现编码P-gp的基因MDRI有48个单核苷酸多态性，且多态性的分布存在明显的种族差异。MDR1基因的多态性导致个体间基因表达的不同，造成P-gp将药物从细胞内转运到细胞外能力的差异，从而造成了多药耐药性个体差异性，因此对药物的生物利用度也不同。如研究表明，MDR1基因exon26的3435位点CC型患者与CT或TT突变型比较，需要服用更高剂量的他克莫司(Tacrolimus)才能达到与CT或TT型相似的血药浓度。此外，MDR1基因多态性相关研究热点还包括exon12的1236T>C，exon21的2677G>T/A，以及-129T>C等。
环孢素(Cyclosporin)、他克莫司(Tacrolimus)、雷帕霉素等是广泛用于器官移植患者的免疫抑制剂，具有治疗指数窄、个体差异大的特点。环孢素、他克莫司雷、帕霉素主要通过肝脏和小肠的CYP3A4、CYP3A5和MDR1代谢，同时它们又是药物转运体的底物。不同个体间药物代谢酶和转运体活性的差异，是造成不同器官移植患者对以上药物药代动力学差异的主要原因；而遗传因素即编码药物代谢酶和转运体基因序列的差异，是其产生活性差异的分子机制。因此，对编码药物代谢酶和转运体的基因多态性进行检测，可为器官移植患者提供最优的治疗方案。
目前国内外对于有关CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性的研究基本是针对单个基因单个SNP位点的检测，不能同时对多个位点检测而进行综合分析，因此往往要通过多次检测才能获得这些基因多态性的信息，检测过程繁杂且耗资耗时。由于所能分析的基因型有限，临床检测诊断的实用性较低；而且由于检测通量低，难以应用于个性化医疗中。
基因微阵列芯片技术，具有高通量、集约化、低成本、高准确性等特点，具有重大的基础研究价值，又具有明显的产业化前景。用该技术可以将大量的探针同时固定于支持物上，从而实现一次性对大量的生物分子进行检测分析。目前尚未见到针对CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性三项指标多样本一次性检测的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单，准确可靠，可用于同时分析CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性三项指标，并且能一次性检测多个样本的DNA微阵列芯片。
本发明的另一个目的在于提供上述DNA微阵列芯片检测基因的方法。
本发明的另一个目的在于提供上述DNA微阵列芯片在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性上的应用。
本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：
一种DNA微阵列芯片，采用固相载体，针对CYP3A和MDR1基因设计特异性的寡核苷酸探针，制备成DNA微阵列芯片，该芯片探针的核苷酸序列与待测CYP3A和MDR1基因的核苷酸序列相同或互补，探针可与待测CYP3A和MDR1基因的核苷酸序列或其互补序列进行杂交，对杂交结果进行检测并利用计算机进行分析后，便可得到目的材料中CYP3A和MDR1基因的各种信息。
上述DNA微阵列芯片中针对CYP3A基因的分析，优选CYP3A4和CYP3A5基因。
本发明的DNA微阵列芯片，其固相载体上分布有多个不同区域的微阵列，每个微阵区域中分别固定有针对CYP3A和MDR1基因设计的特异性寡核苷酸探针。
本发明的DNA微阵列芯片其探针优选为49个，其中包括CYP3A4基因多态性检测探针20个(其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：20所示)，CYP3A5基因多态性检测探针20个(其核苷酸序列如SEQ ID NO：21～SEQ IDNO：40所示)和MDR1基因多态性检测探针9个(其核苷酸序列如SEQ IDNO：41～SEQ ID NO：49所示)，将这49个探针点载到固相载体的特定区域上，每个载体上印制10个微阵列矩阵，每个微阵列矩阵都包含一组这49个探针，制备得到DNA微阵列芯片，该芯片可以检测8个临床样本以及一个阳性对照和一个阴性对照。
本发明的DNA微阵列芯片其探针上可设有连接臂，且所述探针可进行各种修饰，如巯基修饰、氨基修饰或poly T(A、G或C)等修饰。
本发明的固相载体片基可为玻片、硅片、醋酸纤维素膜、尼龙膜或高分子材料中的一种或它们的任意组合。
本发明的DNA微阵列芯片在制备时只需要在固相载体表面点载探针就可以得到DNA微阵列芯片。
一种应用本发明的DNA微阵列芯片检测基因的方法，包括如下步骤：
(1)抽提待测样品的核酸；
(2)标记并制备待测样品的目的核苷酸序列；
(3)将步骤(2)得到的标记目的核苷酸序列加到DNA微阵列芯片上，进行杂交反应；
(4)检测杂交反应结果。
上述步骤(1)中，待测基因核酸的抽提采用本领域常规抽提方法即可。
上述步骤(2)中，需要制备待测样品的目的核苷酸序列，即需要制备待测样品的CYP3A(优选CYP3A4和CYP3A5基因)和MDR1基因，并标记所得目的核苷酸序列。
上述待测样品目的核苷酸序列的制备需要通过PCR反应，优选多重PCR，其中PCR反应中所需引物可以采用如下设计：(1)设计CYP3A4基因PCR上游引物7条，下游引物7条，其引物核苷酸序列如SEQ ID NO：50～SEQ IDNO：63所示；(2)设计CYP3A5基因PCR上游引物7条，下游引物7条，其核苷酸序列如SEQ ID NO：64～SEQ ID NO77所示；(3)设计MDR1基因PCR上游引物4条，下游引物4条，其核苷酸序列如SEQ ID NO：78～SEQ ID NO85所示。
上述待测样品的目的核苷酸序列的标记可以采用荧光素标记(如CY3标记等)、生物素标记、放射性元素标记或酶标记等本领域常用方法。
上述步骤(3)中，杂交反应采用本领域的常规操作，其中杂交反应的反应温度优选42～52℃，反应时间优选20min～90min。
上述步骤(4)中，可采用放射自显影、荧光共聚焦显微镜或激光扫描仪等本领域常用仪器对杂交图谱进行检测，再利用计算机对杂交信号进行分析处理，便可以得到待测样品中CYP3A和MDR1基因的表达信息。
本发明的DNA微阵列芯片，在检测时还可包括一种固定化对照探针，该固定化对照探针一端可进行化学修饰，另一端带有可通过扫描进行检测的CY3标记，它是芯片表面化学修饰、点样和固定化过程的内部对照，且不与任何核酸序列杂交，该固定化对照探针可以为任意一段和人基因组无同源性的寡核苷酸序列。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明的DNA微阵列芯片具有制备简单、容易操作、高通量和高准确性的特点，它可以针对免疫抑制剂代谢相关基因(如CYP3A4、CYP3A5和MDR1)的多态性进行检测；
2.本发明的DNA微阵列芯片是针对CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因制备了大量探针并将这些探针同时固定于支持物上，因此可以对CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因同时进行基因多态性检测，与传统的检测方法相比，具有高通量、平行性和微量化的优点；
3.本发明的DNA微阵列芯片可以一次性对多个样本同时进行检测，通过一次检测便可以获得患者的大量遗传信息，有助于明确器官移植术后基因多态性与免疫抑制剂血药浓度、疗效及不良反应的关系，结合传统血药浓度检测，更新对器官移植患者的临床免疫抑制药物治疗模式，为器官移植术后免疫抑制剂个体化用药方案的制定提供可靠参考指标，从而实现个性化医疗。
附图说明
图1为本发明DNA微阵列芯片示意图；
图2为本发明DNA微阵列芯片中每个微阵列矩阵中探针的排列图；
图3为实施例3中样本8(SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49)的芯片杂交结果图；
其中，1为固相载体，2为微阵列矩阵。
具体实施方式
下列实施例旨在举例说明而不是限制本发明。
实施例1 DNA微阵列芯片探针及PCR引物设计
1、CYP3A4(细胞色素P4503A4)
设计CYP3A4基因多态性检测探针20种，涵盖10个基因多态性位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：20所示；目的样品中CYP3A4基因的PCR扩增，其上游引物设计7条，并用CY3荧光标记上游引物，下游引物设计7条，总共14条引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：50～SEQ ID NO：63所示。
2、CYP3A5(细胞色素P4503A5)
设计CYP3A5设计基因多态性检测探针20种，涵盖10个基因多态性位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：21～SEQ ID NO：40所示；目的样品中CYP3A5基因的PCR扩增，其上游引物设计7条，并用CY3荧光标记上游引物，下游引物设计7条，总共14条引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：64～SEQ ID NO：77所示。
3、MDR1(多药耐药基因1)
设计CYP3A4基因多态性检测探针9种，涵盖4个基因多态性位点，其核苷酸序列如SEQ ID NO：41～SEQ ID NO：49所示；目的样品中MDR1基因的PCR扩增，其上游引物设计4条，并用CY3荧光标记上游引物，下游引物设计4条，总共8条引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：78～SEQ ID NO：85所示。
实施例2 DNA微阵列芯片的制备
点样探针溶液：用5×SSC(含有0.05质量％SDS)溶液稀释探针，直到探针的终浓度为30μM；SSC缓冲液为本领域人员所常用的，其配制方法为本领域所共知的。
点样矩阵：采用基因芯片自动点样仪，将实施例1设计得到的49种检测探针和1种对照探针(用于芯片表面化学修饰、点样和固定化过程的内部对照)，点制到固相载体(玻片)的特定区域，如图1所示制备所得DNA微阵列芯片，其固相载体上有10个微阵列矩阵。
图2所示为每个微阵列矩阵中探针的排列情况，其中上述49种探针用它们的核苷酸序列编号SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：49来表示，矩阵中还含有1种对照探针(FC)。从图2上可以看出每个探针横向重复2次，每行10点，共10行，每个微阵列矩阵总共包含100个点。
本实施例制备的DNA微阵列芯片上的10个微阵列矩阵既是用来检测待测样品的杂交区，其中8个微阵列矩阵用来检测8份样本，另外两个微阵列矩阵分别用来做阳性对照区和阴性对照区。
实施例3 DNA微阵列芯片对临床样品的检测
取8份样本，采用本领域的常规方法提取样品的基因组DNA，并进行DNA测序，确定基因组中CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性突变结果，再使用实施例2制备所得DNA微阵列芯片对其进行检测验证。
采用实施例2制备所得DNA微阵列芯片对以上8份样本进行一次性检测。
将实施例1设计的用于扩增目的样品中CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因的总共36条引物合成后溶解混合，并分成10管，其中8管分别依次加入上述8份样本的基因组DNA，1管作为里面加入DNA溶解液(阴性对照)，1管里面加入CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因型已知的一份DNA(阳性对照)，10管中其余的PCR反应成分均按照本领域常用的PCR反应体系配制即可，每管PCR反应总体系为50ul。
上述作为阴性对照的DNA溶解液可以为任意一种，如TE缓冲液等本领域常用的试剂。
对上述10管进行多重PCR反应，PCR循环参数为：94℃ 5min；94℃ 30s，55℃ 1min，72℃ 1min，共45个循环；最后72℃ 10min。
取一张实施例2制备所得DNA微阵列芯片，分别取上述10管PCR反应产物各3ul，依次加到芯片的10个杂交区(微阵列矩阵)，再在各杂交区分别加入杂交液(5×SSC，5×denhardt’s，0.5质量％SDS，本领域通用配制方法)8μl，将芯片放到自动杂交洗涤仪的槽内，设定杂交温度45℃，杂交时间30分钟。杂交后自动洗涤和风干。
采用GenePix 4000B激光扫描仪对芯片进行扫描，得到杂交结果扫描图，并将图像转换成数据。采用分析软件，将以上数据自动分析转换成检测结果。以本发明DNA微阵列芯片上49种探针的核苷酸序列来代表各探针，那么本实施例中的DNA微阵列芯片检测结果与样本测序结果的比较如表1所示。
表1 芯片检测结果与样本测序结果的比较
由表1可以看出，本发明的DNA微阵列芯片不但可以一次性检测8个样本，而且可以同时检测样本中CYP3A4、CYP3A5和MDR1三项的基因多态性。扫描仪自带软件可将荧光扫描图像信息转换为荧光信号值数据信息，自编分析软件根据荧光信号值及各探针的CUTOFF值，判定这些探针为阳性探针，其余探针为阴性。对照探针FC不与任何核酸序列发生杂交，但带有CY3标记，经扫描后即显示较高荧光信号值，作为芯片表面化学修饰、点样和固定化过程成功的对照。
以8号样本为例，其芯片检测结果如图3所示，SEQ ID NO：2，SEQ IDNO：26，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：48和SEQ ID NO：49所代表的寡核苷酸探针为阳性探针；测序结果证实8号样本中CYP3A和MDR1基因的核苷酸序列与SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：26，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：48和SEQ IDNO：49所代表的寡核苷酸序列相同或互补(反义链与之相同，正义链与之互补)。由此可以看出本发明的DNA微阵列芯片检测结果与样本的DNA测序结果完全相符，说明本发明的DNA微阵列芯片检测结果可靠，准确性高。
一种DNA微阵列芯片及其检测方法和在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性上的应用序列表
SEQUENCE LISTING
<110>中山大学
<120>一种DNA微阵列芯片及其检测方法和在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态
性上的应用
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Claims (10)
1、一种DNA微阵列芯片，包括固相载体和探针，其特征在于所述探针的核苷酸序列与待测CYP3A和MDR1基因的核苷酸序列相同或互补。
2、根据权利要求1所述DNA微阵列芯片，其特征在于所述待测CYP3A基因为CYP3A4和CYP3A5基因。
3、根据权利要求1或2所述DNA微阵列芯片，其特征在于所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：49所示。
4、根据权利要求1所述DNA微阵列芯片，其特征在于所述探针设有连接臂。
5、根据权利要求1所述DNA微阵列芯片，其特征在于所述固相载体为玻片、硅片、醋酸纤维素膜、尼龙膜或高分子材料中的一种或它们的任意组合。
6、一种应用权利要求1所述DNA微阵列芯片检测基因的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
(1)抽提待测样品的核酸；
(2)标记并制备待测样品的目的核苷酸序列；
(3)将步骤(2)得到的标记目的核苷酸序列加到DNA微阵列芯片上，进行杂交反应；
(4)检测杂交反应结果。
7、根据权利要求6所述检测基因的方法，其特征在于步骤(2)中，所述目的核苷酸序列的制备包括PCR扩增反应，该PCR扩增反应所用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：50～SEQ ID NO：85所示。
8、根据权利要求6所述检测基因的方法，其特征在于步骤(2)中，所述目的核苷酸序列的标记采用荧光素标记、生物素标记、放射性元素标记或酶标记。
9、根据权利要求6所述检测基因的方法，其特征在于步骤(3)中，所述杂交反应的反应温度为42～52℃，反应时间为20min～90min。
10、权利要求1所述DNA微阵列芯片在检测CYP3A4、CYP3A5和MDR1基因多态性上的应用。
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Cited By (10)
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