CN101480400B

CN101480400B - 雌酚酮类衍生物ea303的医药新用途

Info

Publication number: CN101480400B
Application number: CN200910010215A
Authority: CN
Inventors: 付守廷; 朱岚; 陈国良; 周谦谦
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2009-01-21
Filing date: 2009-01-21
Publication date: 2012-10-17
Anticipated expiration: 2029-01-21
Also published as: CN101480400A

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是雌酚酮类衍生物EA303在制备肠管平滑肌解痉剂及止泻剂中的用途。在动物离体实验中，EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠、结肠。在整体实验中，EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。雌酚酮类衍生物EA303还可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型，用于治疗肠管平滑肌痉挛和止泻。

Description

雌酚酮类衍生物EA303的医药新用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，涉及雌酚酮类衍生物EA303的医药新用途，具体涉及其在制备治疗肠管平滑肌痉挛性疾病及腹泻药物中的用途。

背景技术

雌酚酮类衍生物EA303的化学名称是3-(3-dimethylaminol-yl)propoxy-estral-1，3，5(10)-trien-17-one hydrochloride，我们在美国专利中查到EA303于2005年由Cooperwood John S对其抗癌活性进行了初步考察，结果表明，该化合物有较弱的抗癌活性，但至今未见有关EA303舒张肠管平滑肌作用的报道，申请者经多方面实验筛选，首次发现该化合物具有肠管平滑肌解痉及止泻作用。

雌酚酮类衍生物EA303名称是3-[3-(二甲氨基)丙氧基]雌甾-1，3，5(10)-三烯-17-酮，其合成方法如下：

将14g雌酚酮溶于100ml甲苯中，加入8g KOH，100ml水，全部溶解后搅拌下加入1，3-二溴丙烷27ml，搅拌均匀后加入四丁基溴化铵1.7g，放入微波反应器中，90℃下功率500W，反应2h。反应液降至室温后，分出水层，甲苯萃取，合并甲苯层，水洗三次，无水MgSO4干燥，过滤蒸干得产物。

将原料溶于80ml THF中，加入二甲胺20ml，少量KI，40℃反应28小时。将溶剂蒸干后，加入乙酸乙酯80ml溶解后，用水洗三次，无水MgSO₄干燥后，过滤，用HCl的乙酸乙酯饱和溶液调PH值4，有白色固体析出，过滤后，干燥得EA-303。

核磁共振氢谱：

1H-NMR(300MHz，CDCl3)，0.91(s，3H)，1.47-2.90(m，1/H)，2.52(s，3H)，2.55(s，3H)，3.22(m，2H)，4.06(t，2H，J＝6Hz)，6.61(s，1H)，6.67(dd，1H，J＝2.7，J＝8.7)，7.21(d，2H，J＝8.7)，12.8(brs，12.8)

发明内容

本发明的目的是提供雌酚酮类衍生物EA303在制备肠管平滑肌解痉剂及止泻剂中的用途。

研究表明：肠管平滑肌强烈收缩致痉挛可引起多种疾病，如腹痛、腹鸣、腹胀、腹泻，所以研究肠平滑肌解痉药有很大的现实意义，对治疗胃肠痉挛性绞痛，肠易激综合症，溃疡性结肠炎等引起的胃肠功能紊乱等疾病均有指导意义和参考价值。

EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，EA303可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。对小鼠而言常规的有效剂量是29.74mg/kg，换算成成人有效剂量是1 00mg/50kg左右，EA303还可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型，用于治疗肠管平滑肌痉挛和止泻。

附图说明：

图1为EA303对家兔离体小肠平滑肌自主收缩活动的影响(n＝4)

图2为EA303对家兔离体降结肠平滑肌自主收缩活动的影响(n＝4)

图3为EA303对致痉剂收缩的家兔离体小肠舒张作用的量效曲线

BaCl2ACh

KCl

图4为EA303对致痉剂收缩的家兔离体结肠舒张作用的量效曲线

BaCl2AChKCl

具体实施方式

实施例1：急性毒性实验

灌胃给药实验

小鼠100只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为5组。给药前禁食12小时，用5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)将EA303配成溶液，以等比剂量(剂量分别为480.0mg/kg、600.0mg/kg、750.0mg/kg、938.0mg/kg)分别给4组小鼠灌胃给药，第5组为溶剂对照组，用等容积的5％CMC-Na灌胃。给药后观察动物的中毒症状，连续观察4小时，常规饲养一周，记录体重及一般状况，观察7天累计死亡率，用Bliss法计算半数致死量(LD₅₀)及95％可信限。

结果：给药后2小时高剂量组有小鼠死亡，主要集中在3小时到12小时。中毒反应主要表现为受试小鼠呼吸困难，眼球突出，步态忙碌，四肢及耳充血，抽搐，痉挛。尸检除胃肠胀气外未发现其它主要脏器的明显病变。未死亡小鼠继续饲养一周，无一死亡，一般状态、摄食饮水、自发活动、背毛光泽等均无异常，而且体重增加。LD₅₀值为594.8mg/kg，95％置信限为515.5～686.3mg/kg。Bliss法计算用表见表1。

表1.通过灌胃给药EA303的LD₅₀值

实施例2：离体实验

1 EA303对家兔离体小肠和结肠自发活动的作用

待标本张力稳定后，向浴管中分别加入不同终浓度的EA303(10^-5mol/L、3×10^-5mol/L、10^-4mol/L)0.1ml和溶剂水，观察并记录每种浓度下小肠和结肠收缩曲线的变化，记录给药前、给药后0、5、10分钟时的张力、振幅的变化。实验数据以均值±标准差表示，并作配对t检验，判定差异的显著性。2对致痉剂引起的家兔离体小肠和结肠收缩的作用

待标本张力稳定后，向浴管中加入致痉剂(氯化乙酰胆碱10^-4mol/L，氯化钡20％，氯化钾60mmol/L)，获得最大收缩后，充分冲洗组织，加入同浓度的致痉剂再次诱导对照收缩，当与前一次收缩基本一致后，分别累计加入EA303(10^-6mol/L～10^-4mol/L)，记录量效曲线。以致痉剂的最大收缩幅度为100％，绘制量效曲线，数据以平均值±标准误表示，并求出EC₅₀。

由表2～表7，图1～图4可知：EA303能够降低家兔离体小肠和结肠的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。

表2.EA303对家兔离体小肠自发活动振幅(g)的影响(x±S)

^*p＜0.05^**p＜0.01同给药前相比，Student’s t-test

表3.EA303对家兔离体小肠自发活动张力(g)的影响(x±S)

^*p＜0.05^**p＜0.01同给药前相比，Student’s t-test

表4.EA303对家兔离体结肠自发活动振幅(g)的影响(x±S)

^*p＜0.05^**p＜0.01同给药前相比，Student’s t-test

表5.EA303对家兔离体结肠自发活动张力(g)的影响(x±S)

^*p＜0.05^**p＜0.0 1同给药前相比，Student’s t-test

表6.EA303对致痉剂引起小肠平滑肌痉挛的舒张作用的EC₅₀值(x±S.E.M)

表7.EA303对致痉剂引起结肠平滑肌痉挛的舒张作用的EC₅₀值(x±S.E.M)

实施例3：整体实验

1对蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致腹泻的作用

取体重18～22g健康的雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，标记后称重，各组均为单次灌胃给药，第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA303 59.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg，给药容量均为0.2ml/10g，1小时后，各组分别灌胃蓖麻油(硫酸镁、液体石蜡)0.2ml/10g。给药后将每只小鼠放在垫有直径约15cm滤纸的鼠笼，每隔1h换一次垫纸，实验前不禁食水，实验过程中禁食水。以正常鼠便为0分，软便为0.5分，稀便或水样便为1.0分，计算小鼠腹泻指数，连续观察4h，统计数据。

2 EA303对正常小鼠小肠推进的影响

取体重18～22g健康雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，实验前禁食不禁水24h，标记后称重。第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA303 59.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg，给药容量均为0.2ml/10g，30分钟后，各组分别灌胃5％活性炭和10％阿拉伯胶的混合水溶液0.2ml/只，再过30分钟后，小鼠脱颈椎处死，打开腹腔，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部肠管，将小肠平铺于玻璃板上，测量肠管长度为小肠总长度，从幽门至活性炭前沿的长度为炭粉峰的移动距离，按照下式计算炭粉推进百分数，统计数据。炭粉移动百分率＝(炭粉移动距离/小肠总长度)×100％。

3 EA303对正常小鼠大肠推进的影响

取体重18～22g健康雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，实验前禁食不禁水24h，标记后称重，第一组生理盐水0.2ml/10g灌胃作为阴性对照；第二组盐酸洛哌丁胺2.2mg/kg灌胃作为阳性对照；第三、四、五组分别灌胃给予EA303 59.48mg/kg、29.74mg/Kg、14.87mg/kg，给药容量均为0.2ml/10g，30分钟后，各组分别灌胃5％活性炭和10％阿拉伯胶的混合水溶液0.2ml/只，并将小鼠分别单个置于铺有12.5×23.0cm的白色滤纸的塑料鼠笼内，观察并记录小鼠第一次排出黑便的时间，统计数据。

由表(表8～表12)，可知EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。

表8.EA303对蓖麻油致腹泻小鼠腹泻指数的影响

^***P＜0.001，^**P＜0.01，^*P＜0.05与模型组比较

表9.EA303对硫酸镁致腹泻小鼠腹泻指数的影响

^***P＜0.001，^**P＜0.01，^*P＜0.05与模型组比较

表10.EA303对液体石蜡致腹泻小鼠腹泻指数的影响

^***P＜0.001，^**P＜0.01，^*P＜0.05与模型组比较

表11.EA303对正常小鼠小肠推进的抑制作用

^***P＜0.001，^**P＜0.01，^*P＜0.05与NS比较

表12.EA303对正常小鼠大肠肠推进的抑制作用

^***P＜0.001，^**P＜0.01，^*P＜0.05与NS比较

以上实验结果说明EA303能够降低家兔离体小肠和结肠自发活动的张力和振幅，舒张乙酰胆碱、氯化钡、氯化钾收缩的家兔离体小肠和结肠。EA303灌胃给药可明显抑制蓖麻油、硫酸镁、液体石蜡所致的小鼠腹泻，还可明显抑制正常小鼠的小肠推进和大肠推进。因此，EA303可以用于制备治疗肠管平滑肌痉挛的解痉剂及止泻剂。

Claims

1.雌酚酮类衍生物EA303在制备治疗肠管平滑肌痉挛性疾病药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的肠管平滑肌痉挛性疾病包括胃肠痉挛性绞痛，肠易激综合症，溃疡性结肠炎，腹泻。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的腹泻包括高渗性腹泻、吸收不良性腹泻、分泌性腹泻、渗出性腹泻、运动性腹泻。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的雌酚酮类衍生物EA303可以与药学上可接受的载体结合制成临床可接受的剂型。