CN101480145B - 一种植物病害接种工具及其在针刺法接种中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种植物病害接种工具，它由钳体和接种带组成，接种带含有对应的A片和B片，其中：A片为接种垫，接种垫中设有针刺穿孔；B片含有垫板和接种板，接种板通过垫板与钳口连接，接种板上设有接种针，接种板上覆有菌液固定件。它在针刺法接种中是这样应用的：将植物病原细菌培养后，配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液；将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上，接种针的针尖穿过菌液固定件外露；将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间，并将钳口合拢，使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中，将稍加挤压，将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物病原细菌接种工具及其应用，尤其是一种通过将植物病原细菌通过针刺法接种的工具和其应用。
背景技术
植物病害的接种是植物病原菌毒力、病原菌鉴定及其寄主抗病性的重要方法。测定病原菌的毒力、病原菌的鉴定等均要用通过病原菌的接种来完成，其中高效简便的接种工具非常重要，对病原菌和寄主的抗性研究具有重要的意义。
其中针刺接种是植物病原菌重要的接种方法。针刺法接种是植物病原菌细菌接种的主要方法，但缺乏高效简便的接种工具。一些病害的接种技术并不成熟，缺乏精准高效的针刺接种工具。目前是要的接种技术接种程序繁杂，接种效率低，接种速度慢，不能满足病原菌的接种鉴定的工作需要，尤其大批量病原菌或寄主抗性研究，工作量大，接种效果差，影响了研究工作的进度和质量。设计方便快捷、高效的接种工具对研究病原菌具有重要的意义。
目前采用针刺接种病原菌有细菌性条斑病菌、柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病等病病原菌，这些病原菌是水稻、柑橘等作物的主要病原菌，对作物的产量、品种等影响大，发明和设计高效的病原菌接种工具意义重大。
传统的接种技术比较繁杂。下面以水稻细菌性条斑病菌的接种为例进行说明传统的接种方法。目前使用的接种方法没有固定的工具，一般将接种针固定在橡皮塞上，在橡皮塞的一侧铺上棉花，将接种菌液滴加到棉花上面，接种，采用手工措施在水稻叶片的双侧挤压，使针刺穿叶片，达到接种的目的。这种接种工具的接种效率低，接种效果不够稳定。通常用此方法进行病原菌接种鉴定、病原菌的致病性测定、品种抗病行鉴定，由于接种工具的问题，费时费力，使用很不方便，影响对品种和病原菌的抗性进行准确合适的评价。
发明内容
本发明的目的在于：针对目前针刺法接种的工具使用中存在的接种效率低，接种效果不够稳定，使用很不方便，影响对品种和病原菌的抗性进行准确合适的评价的实际问题，提供一种植物病害接种工具及其应用。
本发明的目的是这样实现的：一种植物病害接种工具，其特征在于：由钳体和位于钳体端部钳口中的接种带组成，接种带包括分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片，其中：A片为接种垫，接种垫中设有针刺穿孔；B片包括匹配的垫板和接种板，接种板通过垫板与钳口连接，接种板上设有与接种垫中针刺穿孔对应的接种针，接种板上覆有菌液固定件，所述的接种垫和接种板均为橡胶板。
在本发明中：接种垫中的针刺穿孔直径为1mm，接种针为昆虫解剖针，所述的接种垫和接种板均为矩形橡胶板。
在本发明中：接种垫的长对称中轴线与一个钳口重合；垫板的长对称中轴线与另一个钳口重合。
在本发明中：所述的菌液固定件为海绵或棉花。
在本发明中：接种垫中的针刺穿孔分布于5×4mm矩形的四个角。
一种上述接种工具在针刺法接种中的应用，其特征在于：
a)将植物病原细菌培养后，用无菌水洗下，将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液；
b)将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上，接种针的针尖穿过菌液固定件外露；
c)将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间，并将钳口合拢，使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中，将稍加挤压，将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
在具体应用的过程中：浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件可以接种3～5张叶片。
本发明的优点在于：结构简单，利于加工，使用中，便于操作，接种效率高，接种效果稳定。
附图说明：
图1是本发明实施例的结构示意图；
图2是图1中A片的结构示意图；
图3是图1中B片的结构示意图。
图中：1、钳体，2、接种垫，3、针刺穿孔，4、垫板，5、接种板，6、接种针，7、菌液固定件。
具体实施方式
附图非限制性地公开了本发明实施例的具体结构，下面结合附图对本发明作进一步的描述。
由图1～3可见，本发明由钳体1和位于钳体1端部钳口中的接种带组成，接种带包括分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片，其中：A片为接种垫2，接种垫中设有针刺穿孔3；B片包括匹配的垫板4和接种板5，接种板5通过垫板4与钳口连接，接种板5上设有与接种垫2中针刺穿孔3对应的接种针6，接种板5上覆有菌液固定件7，所述的接种垫2和接种板5均为橡胶板。
实施例1
利用医用钳制作植物病害接种工具：
A片部分的制作：
接种垫2为8×6×4mm(长×宽×厚)的矩形橡胶板，用穿孔机制作4个针刺穿孔3，针刺穿孔3为直径1mm的圆孔，它们分布在一个5×4mm(长×宽)的矩形角上，孔中心距离长边边缘为1.5mm，距离短边边缘为1mm。制作好后以A片长对称中轴线与一个钳口重合，固定在钳口前端。固定可以采用502胶水粘贴。如果工业化生产，可以将A片部分直接固定在医用钳的钳口。
B部分的制作：
垫板4为铜片或铝片裁剪的8×6×0.5mm(长×宽×厚)的矩形，接种板5为8×6×3mm(长×宽×厚)的矩形橡胶板，接种针6由昆虫解剖针制成，长度为9mm，4个接种针同样分布在接种板5中5×4mm(长×宽)的矩形四个角，使它们穿过接种板5，最后将带有接种针6的接种板5用502胶水固定在垫板4上。制作好后以B片长对称中轴线与一个钳口重合，固定在钳口前端，B片与钳口之间可以采用502胶水粘贴，也可以通过焊接固定。然后再在接种板5上配置菌液固定件7，菌液固定件7可以采用7×5×2mm的海绵或棉花，使用时，所述的接种针6应该穿过浸有菌液的菌液固定件7，浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件7可以接种3～5张叶片。
制作好后，应该保证钳口闭合时A片与B片完全重合，B片中的接种针6置于A片的针刺穿孔3中。
实施例2
植物病原细菌：
将细菌性条斑病菌JSb1-1移植在斜本氏培养基上，培养48小时后，用无菌水洗下，将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
接种方法：
针刺法
使用工具：
分别为传统的接种工具和实施例制作的工具
供试品种和接种时机：
水稻品种金刚30，品种生长处于分蘖盛期
调查时间：
在接种后21天的调查结果，调查结果参见表1
表1：两种接种工具接种病原菌JSB1-1后病菌发病情况
结论：本发明接种的发病情况和传统接种工具相当，且本发明接种后病情比较稳定，重复性好，比传统接种工具稳定，且接种株病情稳定，能够体现出病原菌的毒力水平。
实施例3
本实施例与实施例2的区别仅在于：植物病原细菌、供试品种和接种时机不同。其中：
植物病原细菌：
将细菌性条斑病菌GD414移植在斜本氏培养基上，培养48小时后，用无菌水洗下，将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
供试品种和接种时机：
郑选2号、金科3号、郑稻040285、D0J01(H040744)、D0J08(连粳05045)、迟粳12、迟粳生01，品种生长时期处于孕穗期。
调查结果参见表2
表2：两种接种工具接种病原菌GD414在不同品种上发病情况
| 接种方法 | 使用本发明接种(mm) | 原来接种工具接种(mm) |
| 郑选2号 | 11.3 | 10.4 |
| 金科3号 | 9.4 | 9.1 |
| 郑稻040285 | 7.3 | 7.0 |
| D0J01(H040744) | 8.3 | 7.9 |
| D0J08(连粳05045) | 6.6 | 6.5 |
| 迟粳12 | 7.0 | 6.8 |
| 迟粳生01 | 5.7 | 5.7 |
结论：同一病原菌在不同品种上的发病情况稳定，重复性好，说明实施例1制作的工具可以代替原来传统的接种工具。
实施例4
本实施例仅使用实施例1制作的工具，它与实施例2和实施例3的区别还在于：植物病原细菌、供试品种和接种时机不同。其中：
植物病原细菌：
将植物病原细菌YN11、YN18、HEN11、YN7、GD414、YN24、FUJ、YN1、Scrc-6等病原菌分别移植在斜本氏培养基上，培养48小时后，用无菌水洗下，将各病原菌分别配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
供试品种和接种时机：
水稻品种为金刚30，水稻处于孕穗期
调查结果参见表3
表3：使用本发明接种不同病原菌接种不同品种的效果。
| 菌株\接种方法 | 使用本发明接种(mm) | 原来接种工具接种(mm) |
| YN11 | 3.7 | 3.5 |
| YN18 | 3.6 | 3.3 |
| HEN11 | 3.7 | 3.5 |
| 菌株\接种方法 | 使用本发明接种(mm) | 原来接种工具接种(mm) |
| YN7 | 4.3 | 4.1 |
| GD414 | 1.2 | 0.9 |
| YN24 | 6.6 | 6.4 |
| FUJ | 3.5 | 3.3 |
| YN1 | 3.1 | 2.8 |
| Scrc-6 | 1.5 | 1.3 |
结论：采用实施例1的接种工具后，不同病原菌的接种结果发病况相当，但是实施例1的接种工具接种后重复性好，发病稳定，说明实施例1的接种工具可以代替原来传统的接种工具。
在实施例2和实施例3中：采用实施例1制作的接种工具，平均接种一张叶片需要时间为3-8秒钟，而传统的接种工具，平均接种一张叶片需要30-60秒。因此实施例1制作的接种工具可以大大加快接种速度，简化接种程序，同时具有较好的接种质量和较高的接种效率。
Claims (7)
1.一种植物病害接种工具，其特征在于：由钳体和位于钳体端部钳口中的接种带组成，接种带含有分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片，其中：A片为接种垫，接种垫中设有针刺穿孔；B片含有匹配的垫板和接种板，接种板通过垫板与钳口连接，接种板上设有与接种垫中针刺穿孔对应的接种针，接种板上覆有菌液固定件，所述的接种垫和接种板均为橡胶板。
2.根据权利要求1所述的植物病害接种工具，其特征在于：接种垫中的针刺穿孔直径为1mm，接种针为昆虫解剖针，所述的接种垫和接种板均为矩形橡胶板。
3.根据权利要求2所述的植物病害接种工具，其特征在于：接种垫的长对称中轴线与一个钳口重合；垫板的长对称中轴线与另一个钳口重合。
4.根据权利要求1或2或3所述的植物病害接种工具，其特征在于：所述的菌液固定件为海绵或棉花。
5.根据权利要求4所述的植物病害接种工具，其特征在于：接种垫中的针刺穿孔分布于5×4mm矩形的四个角。
6.一种如权利要求1所述接种工具在针刺法接种中的应用，其特征在于：
a)将植物病原细菌培养后，用无菌水洗下，将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液；
b)将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上，接种针的针尖穿过菌液固定件外露；
c)将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间，并将钳口合拢，使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中，将稍加挤压，将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
7.根据权利要求6所述接种工具在针刺法接种中的应用，其特征在于：浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件可以接种3～5张叶片。
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