CN101480145A - 一种植物病害接种工具及其在针刺法接种中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种植物病害接种工具,它由钳体和接种带组成,接种带含有对应的A片和B片,其中:A片为接种垫,接种垫中设有针刺穿孔;B片含有垫板和接种板,接种板通过垫板与钳口连接,接种板上设有接种针,接种板上覆有菌液固定件。它在针刺法接种中是这样应用的:将植物病原细菌培养后,配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液;将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上,接种针的针尖穿过菌液固定件外露;将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间,并将钳口合拢,使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中,将稍加挤压,将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物病原细菌接种工具及其应用,尤其是一种通过将植物病原细菌通过针刺法接种的工具和其应用。
背景技术
植物病害的接种是植物病原菌毒力、病原菌鉴定及其寄主抗病性的重要方法。测定病原菌的毒力、病原菌的鉴定等均要用通过病原菌的接种来完成,其中高效简便的接种工具非常重要,对病原菌和寄主的抗性研究具有重要的意义。
其中针刺接种是植物病原菌重要的接种方法。针刺法接种是植物病原菌细菌接种的主要方法,但缺乏高效简便的接种工具。一些病害的接种技术并不成熟,缺乏精准高效的针刺接种工具。目前是要的接种技术接种程序繁杂,接种效率低,接种速度慢,不能满足病原菌的接种鉴定的工作需要,尤其大批量病原菌或寄主抗性研究,工作量大,接种效果差,影响了研究工作的进度和质量。设计方便快捷、高效的接种工具对研究病原菌具有重要的意义。
目前采用针刺接种病原菌有细菌性条斑病菌、柑橘溃疡病菌和水稻白叶枯病等病病原菌,这些病原菌是水稻、柑橘等作物的主要病原菌,对作物的产量、品种等影响大,发明和设计高效的病原菌接种工具意义重大。
传统的接种技术比较繁杂。下面以水稻细菌性条斑病菌的接种为例进行说明传统的接种方法。目前使用的接种方法没有固定的工具,一般将接种针固定在橡皮塞上,在橡皮塞的一侧铺上棉花,将接种菌液滴加到棉花上面,接种,采用手工措施在水稻叶片的双侧挤压,使针刺穿叶片,达到接种的目的。这种接种工具的接种效率低,接种效果不够稳定。通常用此方法进行病原菌接种鉴定、病原菌的致病性测定、品种抗病行鉴定,由于接种工具的问题,费时费力,使用很不方便,影响对品种和病原菌的抗性进行准确合适的评价。
发明内容
本发明的目的在于:针对目前针刺法接种的工具使用中存在的接种效率低,接种效果不够稳定,使用很不方便,影响对品种和病原菌的抗性进行准确合适的评价的实际问题,提供一种植物病害接种工具及其应用。
本发明的目的是这样实现的:一种植物病害接种工具,其特征在于:由钳体和位于钳体端部钳口中的接种带组成,接种带包括分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片,其中:A片为接种垫,接种垫中设有针刺穿孔;B片包括匹配的垫板和接种板,接种板通过垫板与钳口连接,接种板上设有与接种垫中针刺穿孔对应的接种针,接种板上覆有菌液固定件,所述的接种垫和接种板均为橡胶板。
在本发明中:接种垫中的针刺穿孔直径为1mm,接种针为昆虫解剖针,所述的接种垫和接种板均为矩形橡胶板。
在本发明中:接种垫的长对称中轴线与一个钳口重合;垫板的长对称中轴线与另一个钳口重合。
在本发明中:所述的菌液固定件为海绵或棉花。
在本发明中:接种垫中的针刺穿孔分布于5×4mm矩形的四个角。
一种上述接种工具在针刺法接种中的应用,其特征在于:
a)将植物病原细菌培养后,用无菌水洗下,将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液;
b)将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上,接种针的针尖穿过菌液固定件外露;
c)将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间,并将钳口合拢,使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中,将稍加挤压,将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
在具体应用的过程中:浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件可以接种3~5张叶片。
本发明的优点在于:结构简单,利于加工,使用中,便于操作,接种效率高,接种效果稳定。
附图说明:
图1是本发明实施例的结构示意图;
图2是图1中A片的结构示意图;
图3是图1中B片的结构示意图。
图中:1、钳体,2、接种垫,3、针刺穿孔,4、垫板,5、接种板,6、接种针,7、菌液固定件。
具体实施方式
附图非限制性地公开了本发明实施例的具体结构,下面结合附图对本发明作进一步的描述。
由图1~3可见,本发明由钳体1和位于钳体1端部钳口中的接种带组成,接种带包括分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片,其中:A片为接种垫2,接种垫中设有针刺穿孔3;B片包括匹配的垫板4和接种板5,接种板5通过垫板4与钳口连接,接种板5上设有与接种垫2中针刺穿孔3对应的接种针6,接种板5上覆有菌液固定件7,所述的接种垫2和接种板5均为橡胶板。
实施例1
利用医用钳制作植物病害接种工具:
A片部分的制作:
接种垫2为8×6×4mm(长×宽×厚)的矩形橡胶板,用穿孔机制作4个针刺穿孔3,针刺穿孔3为直径1mm的圆孔,它们分布在一个5×4mm(长×宽)的矩形角上,孔中心距离长边边缘为1.5mm,距离短边边缘为1mm。制作好后以A片长对称中轴线与一个钳口重合,固定在钳口前端。固定可以采用502胶水粘贴。如果工业化生产,可以将A片部分直接固定在医用钳的钳口。
B部分的制作:
垫板4为铜片或铝片裁剪的8×6×0.5mm(长×宽×厚)的矩形,接种板5为8×6×3mm(长×宽×厚)的矩形橡胶板,接种针6由昆虫解剖针制成,长度为9mm,4个接种针同样分布在接种板5中5×4mm(长×宽)的矩形四个角,使它们穿过接种板5,最后将带有接种针6的接种板5用502胶水固定在垫板4上。制作好后以B片长对称中轴线与一个钳口重合,固定在钳口前端,B片与钳口之间可以采用502胶水粘贴,也可以通过焊接固定。然后再在接种板5上配置菌液固定件7,菌液固定件7可以采用7×5×2mm的海绵或棉花,使用时,所述的接种针6应该穿过浸有菌液的菌液固定件7,浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件7可以接种3~5张叶片。
制作好后,应该保证钳口闭合时A片与B片完全重合,B片中的接种针6置于A片的针刺穿孔3中。
实施例2
植物病原细菌:
将细菌性条斑病菌JSb1-1移植在斜本氏培养基上,培养48小时后,用无菌水洗下,将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
接种方法:
针刺法
使用工具:
分别为传统的接种工具和实施例制作的工具
供试品种和接种时机:
水稻品种金刚30,品种生长处于分蘖盛期
调查时间:
在接种后21天的调查结果,调查结果参见表1
表1:两种接种工具接种病原菌JSB1-1后病菌发病情况
结论:本发明接种的发病情况和传统接种工具相当,且本发明接种后病情比较稳定,重复性好,比传统接种工具稳定,且接种株病情稳定,能够体现出病原菌的毒力水平。
实施例3
本实施例与实施例2的区别仅在于:植物病原细菌、供试品种和接种时机不同。其中:
植物病原细菌:
将细菌性条斑病菌GD414移植在斜本氏培养基上,培养48小时后,用无菌水洗下,将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
供试品种和接种时机:
郑选2号、金科3号、郑稻040285、D0J01(H040744)、D0J08(连粳05045)、迟粳12、迟粳生01,品种生长时期处于孕穗期。
调查结果参见表2
表2:两种接种工具接种病原菌GD414在不同品种上发病情况
接种方法 | 使用本发明接种(mm) | 原来接种工具接种(mm) |
郑选2号 | 11.3 | 10.4 |
金科3号 | 9.4 | 9.1 |
郑稻040285 | 7.3 | 7.0 |
D0J01(H040744) | 8.3 | 7.9 |
D0J08(连粳05045) | 6.6 | 6.5 |
迟粳12 | 7.0 | 6.8 |
迟粳生01 | 5.7 | 5.7 |
结论:同一病原菌在不同品种上的发病情况稳定,重复性好,说明实施例1制作的工具可以代替原来传统的接种工具。
实施例4
本实施例仅使用实施例1制作的工具,它与实施例2和实施例3的区别还在于:植物病原细菌、供试品种和接种时机不同。其中:
植物病原细菌:
将植物病原细菌YN11、YN18、HEN11、YN7、GD414、YN24、FUJ、YN1、Scrc-6等病原菌分别移植在斜本氏培养基上,培养48小时后,用无菌水洗下,将各病原菌分别配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液供接种使用。
供试品种和接种时机:
水稻品种为金刚30,水稻处于孕穗期
调查结果参见表3
表3:使用本发明接种不同病原菌接种不同品种的效果。
菌株\接种方法 | 使用本发明接种(mm) | 原来接种工具接种(mm) |
YN11 | 3.7 | 3.5 |
YN18 | 3.6 | 3.3 |
HEN11 | 3.7 | 3.5 |
YN7 | 4.3 | 4.1 |
GD414 | 1.2 | 0.9 |
YN24 | 6.6 | 6.4 |
FUJ | 3.5 | 3.3 |
YN1 | 3.1 | 2.8 |
Scrc-6 | 1.5 | 1.3 |
结论:采用实施例1的接种工具后,不同病原菌的接种结果发病况相当,但是实施例1的接种工具接种后重复性好,发病稳定,说明实施例1的接种工具可以代替原来传统的接种工具。
在实施例2和实施例3中:采用实施例1制作的接种工具,平均接种一张叶片需要时间为3-8秒钟,而传统的接种工具,平均接种一张叶片需要30-60秒。因此实施例1制作的接种工具可以大大加快接种速度,简化接种程序,同时具有较好的接种质量和较高的接种效率。
Claims (7)
1、一种植物病害接种工具,其特征在于:由钳体和位于钳体端部钳口中的接种带组成,接种带含有分别固定在上下两个钳口上对应位置的A片和B片,其中:A片为接种垫,接种垫中设有针刺穿孔;B片含有匹配的垫板和接种板,接种板通过垫板与钳口连接,接种板上设有与接种垫中针刺穿孔对应的接种针,接种板上覆有菌液固定件,所述的接种垫和接种板均为橡胶板。
2、根据权利要求1所述的植物病害接种工具,其特征在于:接种垫中的针刺穿孔直径为1mm,接种针为昆虫解剖针,所述的接种垫和接种板均为矩形橡胶板。
3、根据权利要求2所述的植物病害接种工具,其特征在于:接种垫的长对称中轴线与一个钳口重合;垫板的长对称中轴线与另一个钳口重合。
4、根据权利要求1或2或3所述的植物病害接种工具,其特征在于:所述的菌液固定件为海绵或棉花。
5、根据权利要求4所述的植物病害接种工具,其特征在于:接种垫中的针刺穿孔分布于5×4mm矩形的四个角。
6、一种如权利要求1所述接种工具在针刺法接种中的应用,其特征在于:
a)将植物病原细菌培养后,用无菌水洗下,将病原菌配制成3亿细胞/毫升的细菌悬浮液;
b)将菌液固定件浸泡细菌悬浮液后覆盖在接种板上,接种针的针尖穿过菌液固定件外露;
c)将叶片置于接种带的A片接种垫和B片中的中间,并将钳口合拢,使接种针穿过叶片进入A片接种垫的针刺穿孔中,将稍加挤压,将菌液固定件中的植物病原细菌接种于叶片中。
7、根据权利要求6所述接种工具接种工具在针刺法接种中的应用,其特征在于:浸沾一次细菌悬浮液的菌液固定件可以接种3~5张叶片。
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