CN101466669B

CN101466669B - 苯基吡咯氨基胍衍生物

Info

Publication number: CN101466669B
Application number: CN200780021060XA
Authority: CN
Inventors: 阿尔内·博曼; 托马斯·恩格尔布雷希特·诺克尔德·约纳森; 托尔比约恩·伦斯泰兹
Original assignee: Action Pharma AS
Current assignee: Sai Ackert pharmaceuticals
Priority date: 2006-06-09
Filing date: 2007-06-11
Publication date: 2011-11-30
Anticipated expiration: 2027-06-11
Also published as: WO2007141343A1; US8058306B2; PL2348016T3; DE602007014363D1; ES2571253T3; CA2688485A1; EP2348016A1; CA2688485C; DK2348016T3; EP2035373A1; JP2009539809A; AU2007255366B2; AU2007255366A1; SI2348016T1; MX2008015454A; NZ573457A; HUE029016T2; ZA200810347B; US20110082183A1; HK1160136A1

Abstract

本发明涉及通式(I)苯基吡咯氨基胍衍生物：

Description

苯基吡咯氨基胍衍生物

发明领域

本发明涉及一种苯基吡咯氨基胍衍生物。本发明还涉及使用这种苯基吡咯氨基胍衍生物用于治疗与黑素皮质素(melanocortin)受体或有关系统例如促黑素细胞激素相关的疾病的用途。

发明背景

在本领域已知的是许多长直链或环状肽对黑素皮质素(MC)受体显示出了很高的特定结合性。这些肽具有兴奋和/或拮抗性质也是已知的，例如参见WO 99/21571。

而且，已知许多低分子量化合物例如异喹啉、螺吡啶和苯并咪唑对MC受体显示出了活性。例如参见WO 99/55679，WO 99/64002和WO 01/05401。还有文献公开了其它化合物也对MC受体有活性，例如参见WO 00/74679，WO00/58361，WO 02/18327，WO 02/12166，WO 01/55106，WO 01/55107，WO01/55109，WO 02/11715和WO 02/12178。

然而，仍然存在着提供对MC受体显示兴奋或拮抗性质的低分子量化合物的需求。本发明的化合物结构上不同于上述化合物，因此是一类对MC受体显示活性的新化合物。

与本发明化合物结构相关的一些现有技术的化合物包括在WO 98/23267中描述的那些化合物。

该羟基胍衍生物被证实具有抗黄嘌呤氧化酶/黄嘌呤脱氢酶活性。

同样地，在WO 03/013509中公开的化合物显示出抗炎性质和对MC受体显著的亲合力。在WO 03/013509中公开的化合物通式如下：

其中X是(CH₂)_n，n是0、1或2。

本发明的化合物不同于WO 03/013509中公开的那些化合物，WO03/013509中，吡咯环上的氨基胍取代基被修饰为更刚性的结构，仅允许围绕着氨基胍取代基上的碳原子最小程度旋转的自由度。

发明概要

因此，第一个方面本发明涉及一种通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，通式(I)包括其互变异构形式，

其中，n是1、2或3；

R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_3-6环烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_4-6二烯基、任选取代的C_2-6炔基、羟基、任选取代的C_1-6烷氧基、任选取代的C_2-6烯氧基、羧基、任选取代的C_1-6烷氧羰基、任选取代的C_1-6烷羰基、甲酰基、C_1-6烷基磺酰氨基、任选取代的芳基、任选取代的芳氧羰基、任选取代的芳氧基、任选取代的芳羰基、任选取代的芳氨基、芳基磺酰氨基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳氧羰基、任选取代的杂芳氧基、任选取代的杂芳羰基、任选取代的杂芳氨基、杂芳基磺酰氨基、任选取代的杂环基、任选杂环氧羰基、任选取代的杂环氧基、任选取代的杂环羰基、任选取代的杂环氨基、杂环磺酰氨基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、氨基-C_1-6烷基羰基氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基羰基氨基、氰基、胍基、脲基、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、氨基磺酰基、单和二(C_1-6烷基)氨基磺酰基、硝基、任选取代的C_1-6烷硫基和卤素，其中任意与氮键合的C_1-6烷基任选被羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素，C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰氨基或胍基取代；

R₆和R₇各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_4-6二烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的C_1-6烷氧羰基、任选取代的C_1-6烷基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳氧基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳氧基羰基、任选取代的杂芳基羰基、氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基和单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨羰基；或R₆和R₇可以一起形成五-或六元含氮环。

在另一个方面本发明涉及一种含有本发明化合物和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

进一步地本发明涉及含有本发明药物组合物的剂型。

还有一个方面本发明涉及本发明化合物用作药物。

进一步地，本发明涉及本发明化合物在制备治疗疾病的药物中的用途，所述疾病选自炎症，例如急性的或慢性的炎症，糖尿病，胰岛素抵抗(insulin-resistance)，性功能紊乱症包括男性勃起功能障碍，饮食失调症包括厌食症，肥胖症，精神错乱、内分泌系统功能紊乱，药物诱发的血液和淋巴系统紊乱，过敏反应紊乱(allergy disorders)，心血管系统紊乱和疼痛。

类似地，本发明还涉及一种治疗患有疾病或机能紊乱的哺乳动物的方法，所述疾病或机能紊乱选自炎症，例如急性或慢性炎症，糖尿病，胰岛素抵抗，性功能紊乱症包括男性勃起功能障碍，饮食失调症包括厌食症，肥胖症，精神错乱，内分泌系统功能紊乱，药物诱发的血液和淋巴系统紊乱，过敏反应紊乱，心血管系统紊乱和疼痛，所述方法包括对所述哺乳动物施加治疗有效量的本发明化合物。

本发明的其它方面将通过附加的权利要求书和下面的描述来体现。

附图说明

附图1显示了具体的苯基吡咯氨基胍衍生物。

附图2显示了本发明化合物2，[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉(allylidene)氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为19的结构)的合成路线。

附图3显示了本发明化合物3，[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为53的结构)的合成路线。

附图4显示了本发明化合物3，[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为53的结构)在参照本说明书实施例3的MC1受体测定中所获得的竞争曲线。其中X轴表示log[化合物]，Y轴表示具体的％结合率。

附图5显示了在对雄性大鼠单次静脉给药后血浆中本发明化合物1，[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为1的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

附图6显示了在对雄性大鼠单次静脉给药后血浆中本发明化合物3，[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为53的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

附图7显示了在对雄性大鼠单次静脉给药后血浆中本发明化合物2，[1-(2-硝基苯)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为19的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

附图8显示了在对雄性大鼠单次口服给药后血浆中本发明化合物1，[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为1的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

附图9显示了在对雄性大鼠单次口服给药后血浆中本发明化合物3，[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为53的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

附图10显示了在对雄性大鼠单次口服给药后血浆中本发明化合物2，[1-(2-硝基苯)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为19的结构)的平均浓度。靶标剂量：10mg/kg。结果以ng/mL表示。

具体实施方式

定义

在本发明范围内，术语″C_1-6-烷基″是指具有1-6个碳原子的直链或支链的烃基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基，术语“C_1-4烷基”是指包括具有1-4个碳原子的直链或支链烃基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

应理解的是，只要在这里使用的术语“C_1-6烷基”时，尤其有利的实施方案是其为“C_1-4烷基”。

在这里使用的术语“C_3-6环烷基”是指具有3-6个碳原子的环状烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

类似地，术语“C_2-6烯基”和“C_4-6二烯基”是指包括分别具有2-6个和4-6个碳原子并且分别含有一个和两个不饱和键的直链或支链的烃基。烯基的例子有乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基和己烯基。二烯基的例子包括丁二烯基、戊二烯基和己二烯基。优选的烯基的例子是乙烯基、烯丙基、丁烯基，尤其优选烯丙基。

在本发明范围内，术语“C_2-6炔基”是指具有2-6个碳原子且含有一个以上三键的直链或支链的烃基。可列举的C_2-6炔基的例子包括乙炔基、丙炔基、丁炔基以及它们的支链形式。不饱和(三键)的位置可以在碳链的任意位置。对本领域技术人员而言，″C_2-6炔基″可以不止一个键是不饱和的，例如是二炔基或烯二炔基。

这里所使用的术语“C_1-6烷氧基”是指C_1-6烷基-氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙基氧基、异丙基氧基、正丁基氧基、异丁基氧基、仲丁基氧基、叔丁基氧基、正戊基氧基、异戊基氧基、新戊基氧基和正己基氧基，术语“C_1-4烷氧基”是指C_1-4烷基-氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。

应理解的是，只要在这里使用术语“C_1-6烷氧基”时，尤其有利的实施方案是其为“C_1-4烷氧基”。

类似地，术语“C_2-6烯氧基”是指C_2-6-烯基-氧基。

这里，术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。尤其优选氟、氯和溴。

在本申请中，与术语“烷基”、“烯基”、“二烯基”和“炔基”相关的术语“任选取代的”是指这些基团可被下列取代基团一次或多次取代，优选1～3次，所述取代基团选自羟基(当其与不饱和碳原子相连时可以互变异构的酮式存在)、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、羧基、氧代(oxo)(形成酮或醛功能基)、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基羰基、甲酰基、芳基、芳氧羰基、芳氧基、芳氨基、芳羰基、杂芳基、杂芳氨基、杂芳氧羰基、杂芳氧基、杂芳羰基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、氰基、胍基、脲基、C_1-6烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、杂芳基磺酰氨基、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、硝基、C_1-6烷硫基和卤素，其中任一芳基和杂芳基可如“任选取代的芳基和杂芳基”所述被取代，任一烷基、烷氧基等所代表的取代基可被羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰氨基或胍基取代。

优选的是，上述取代基选自羟基(当其与不饱和碳原子相连时可以互变异构的酮式存在)、C_1-6烷氧基(即C_1-6烷基-氧基)、C_2-6烯氧基、羧基、氧代(形成酮或醛功能基)、C_1-6烷氧羰基、甲酰基、芳基、芳氧基、芳氨基、芳羰基、杂芳基、杂芳氨基、杂芳氧基、杂芳羰基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、胍基、脲基、C_1-6烷基磺酰氨基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷硫基和卤素，其中任一芳基和杂芳基可如“任选取代的芳基和杂芳基”所述被取代。

这类取代基尤其优选的是羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰基氨基和胍基，特别优选卤素。因此，特别优选的“任选取代的C_1-6烷基”包括卤素取代的烷基，例如三卤代C_1-6烷基，例如三溴甲基、三氯甲基或三氟甲基。

术语“任选取代的C_1-6烷氧基”是指可被下列取代基一次或多次取代，优选被1～3次取代的烷氧基，所述取代基团选自羟基(当其与不饱和碳原子相连时可以互变异构的酮式存在)，C_1-6烷氧基(即C_1-6烷基-氧基)，C_2-6烯氧基、羧基、氧代(形成酮或醛功能基)，C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基羰基、甲酰基、芳基、芳氧羰基、芳氧基、芳羰基、杂芳基、杂芳氧羰基、杂芳氧基、杂芳羰基、氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基氨羰基、氰基、胍基、脲基、C_1-6烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、杂芳基磺酰氨基、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、硝基、C_1-6烷硫基和卤素，其中任一芳基和杂芳基可如“任选取代的芳基和杂芳基”所述被取代。

这些取代基尤其优选带有下列取代基中的一个或两个：羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、羧基、卤素或C_1-6烷硫基。

在本申请中术语“芳基”是指完全或部分芳香性的碳环或环系，例如苯基、萘基、1，2，3，4-四氢化萘基、蒽基、菲基、芘基、苯并芘基、芴基和呫吨基，其中优选的例子是苯基。

术语“杂芳基”是指完全或部分芳香性的碳环或其中一个或多个碳原子被杂原子替换的环系，所述杂原子例如是氮(＝N-或-NH-)、硫和/或氧原子。所述杂芳基的例子有噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、香豆基(coumaryl)，呋喃基、噻吩基、喹啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并二唑基、苯并噁唑基(benzooxozolyl)，酞嗪基(phthalazinyl)、二氢异苯并呋喃基(phthalanyl)，三唑基、四唑基、异喹啉基、吖啶基、咔唑基、二苯并氮杂

基(dibenzazepinyl)，吲哚基、苯并吡唑基和吩噁嗪酮基(phenoxazonyl)。

特别有利的杂芳基是噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、喹啉基、三唑基、四唑基、异喹啉基和吲哚基，尤其优选吡咯基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、喹啉基、四唑基和异喹啉基。

在本申请中术语“杂环基”是指非芳香性的碳环或其中一个或多个碳原子被杂原子替换的环系，例如所述杂原子是氮(＝N或-NH-)，硫和/或氧原子。所述杂环基的例子有咪唑烷(imidazolidine)、哌嗪、六氢哒嗪、六氢嘧啶、二氮杂环庚烷(diazepane)、二氮杂环辛烷(diazocane)、吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷(azepane)、氮杂环辛烷(azocane)、氮丙啶、氮杂环丙烷(azirine)、氮杂环丁烷、吡咯啉(pyroline)、托品烷(tropane)、1，4-噁嗪烷(吗啉)、氮杂

(azepine)、二氢氮杂

四氢氮杂

六氢氮杂

噁唑烷(oxazolane)、氧氮杂环庚烷(oxazepane)、氧氮杂环辛烷(oxazocane)、噻唑烷、噻嗪烷、硫氮杂环庚烷(thiazepane)、硫氮杂环辛烷基(thiazocane)、氧氮杂环丁烷(oxazetane)、二氮杂环丁烷(diazetane)、硫氮杂环丁烷(thiazetane)、四氢呋喃、四氢吡喃、氧杂环庚烷(oxepane)，四氢噻吩、四氢硫吡喃、硫杂环庚烷基(thiepane)、二噻烷基、二硫杂环庚烷(dithiepane)、二噁烷、二氧杂环庚烷(dioxepane)、氧硫杂环己烷基和硫杂环庚烷(oxathiepane)。

优选的杂环基的例子是咪唑烷、哌嗪、六氢哒嗪、六氢嘧啶、二氮杂环庚烷(diazepane)、二氮杂环辛烷(diazocane)、吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷(azepane)、氮杂环辛烷(azocane)、氮杂环丁烷、托品烷、噁嗪烷(吗啉)，噁唑烷(oxazolane)、氧氮杂环庚烷(oxazepane)、硫噁唑烷(thiazolane)，噻嗪烷和硫氮杂环庚烷(thiazepane)，特别是咪唑烷、哌嗪、六氢哒嗪、六氢嘧啶、二氮杂环庚烷(diazepane)、吡咯烷、哌啶、氮杂环庚烷(azepane)、1，2-噁嗪烷(oxazinane)、1，4-噁嗪烷(吗啉)和噻嗪烷。

在本申请中，与术语“芳基”、“杂芳基”和“杂环基”相关的术语“任选取代的”是指这些基团可被下列取代基团一次或多次取代，优选取代1～5次，特别是1～3次，所述取代基团选自羟基(当存在于烯醇体系中时可以互变异构的酮式结构表示)、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氧代(其可以互变异构的烯醇式表示)、羧基、C_1-6烷氧羰基、C_1-6烷基羰基、甲酰基、芳基、芳氧基、芳氨基、芳氧羰基、芳羰基、杂芳基、杂芳氨基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基；氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)-氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、氰基、胍基、脲基、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、杂芳基磺酰氨基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、硝基、磺酰基、氨基、氨基磺酰基、单和二(C_1-6烷基)氨基磺酰基、二卤代C_1-4烷基、三卤代C_1-4烷基和卤素，其中芳基和杂芳基代表的取代基可被C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、硝基、氨基或卤素取代1～3次，并且任意烷基、烷氧基等等代表的取代基可被羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰氨基或胍基取代。

优选的是，上述取代基选自羟基、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氧代(其可以互变异构的烯醇式表示)，羧基、C_1-6烷基羰基、甲酰基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基；氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、胍基、脲基、C_1-6烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、杂芳基磺酰氨基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、磺酰基、氨基、氨基磺酰基、单和二(C_1-6烷基)氨基磺酰基或卤素，其中任意烷基、烷氧基等等代表的取代基可被羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰氨基或胍基取代。

这类取代基尤其优选的例子有C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、磺酰基、羧基或卤素，其中任意烷基、烷氧基等等代表的取代基可被羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、羧基、C_1-6烷基羰基氨基、卤素、C_1-6烷硫基、C_1-6烷基磺酰氨基或胍基取代。

术语“其盐”是指通过处理碱性官能团而能够获得的药学上可接受的酸式加成盐，例如胺与合适的酸性物，例如无机酸，例如氢卤酸，典型地有盐酸、氢溴酸、氢氟酸或氢碘酸，硫酸，硝酸，磷酸等等；或有机酸，例如乙酸，丙酸，羟基乙酸，2-羟基丙酸，2-氧代丙酸，乙二酸，丙二酸，丁二酸，(Z)-2-丁烯二酸，(E)-丁烯二酸，2-羟基丁二酸，2，3-二羟基丁二酸，2-羟基-1，2，3-丙三酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，4-甲基苯磺酸，环己基氨基磺酸，2-羟基苯甲酸，4-氨基-2-羟基苯甲酸以及本领域技术人员所已知的其它酸。

当术语“药学上可接受的”与术语“其盐”一起关联使用时，是指所述盐不会对给药的病人产生任何的副作用。类似的，当术语“药学上可接受的”与术语“载体”和/或“赋形剂”一起关联使用时，是指所述载体和/或赋形剂在以一定的剂量或浓度使用时，不会对给药的病人产生任何的副作用。

在本说明书和权利要求书内，任意与“a”有关的组分，例如在描述取代基等内容中，是指这类组分中的一个或多个，除非另有说明或除非从具体内容中很清楚地知道不是这种情况。

例如，“选自由A、B和C组成的组的组分”是指包括A、B和C的所有组合，即，A；B；C；A+B；A+C；B+C或A+B+C。

术语“治疗有效量”是指足以达到所需效果的剂量或数量。所需要的效果包括在接受所述剂量或数量后对受体客观的或主观的改善。

“预防性处置”是指对没有显示出疾病、病症或内科紊乱的征兆或症状或仅显示出疾病、病症或紊乱的早期征兆或症状的患者给药处置，这种给药处置是为了减弱、阻止或降低疾病、病症或内科紊乱不断发展的危险。预防性处置对疾病或紊乱起预防性处置的作用。“预防活性”是指药剂例如本申请所公开的化合物或其组合物的活性，所述药剂在对没有显示出疾病、病症或内科紊乱的征兆或症状或仅显示出疾病、病症或紊乱的早期征兆或症状的患者给药时，可使患者疾病、病症或内科紊乱不断发展的危险减弱、阻止或降低。

在本申请中术语“治疗性处置”或直接是“处置”是指对显示出疾病、病症或紊乱征兆或症状的患者给药处置，这种给药处置有助于减弱或消除患者所述疾病、病症或紊乱的那些症状。“治疗活性”是药剂例如本申请所公开的化合物或其组合物的活性，所述药剂在对遭受这种征兆或症状的患者给药时，其消除或减弱了所述疾病、病症或紊乱的那些征兆或症状。

这里所使用的术语“患者”包括但不限于，生物体；哺乳动物，包括，例如人类，非人类灵长类(例如，狒狒，猩猩，猴子)，鼠，猪，奶牛，山羊，猫，兔，鼠，豚鼠，仓鼠，马，猴子，羊，或其它非人类哺乳动物；非哺乳动物，包括，例如非哺乳动物脊椎动物，例如禽类(例如小鸡或鸭)或鱼，和非哺乳动物无脊椎动物。本发明的患者优选方案是人类。

在本申请内容内术语“其互变异构形式”或“互变异构体”是指平衡存在的一种或两种或多种结构异构体，它们很容易从一种异构形式转为另一种异构形式。不同的互变异构形式具有相同的分子式和可互换的形式，包括氢原子和电子的替换。因此，应理解的是当以化学结构举例描述本发明化合物时，其明确描述的分子的所有可能的互变异构形式也包括在本发明范围内。

本发明化合物

如上所述，本发明涉及一种通式(I)的化合物。由通式(I)可知，氨基胍取代基可连接在吡咯环的2位或3位，即通式(Ia)和(Ib)仅通过与吡咯环的连接位置不同而区别。

因此，在本发明的一个方面涉及一种通式(Ia)或(Ib)化合物或其药学上可接受的盐，所述通式包括其互变异构形式，

其中，n为1，2或3；

如上所述，通式(Ia)化合物中的氨基胍取代基连接在吡咯环的2-位，而通式(Ib)化合物的氨基胍取代基连接在吡咯环的3-位。在下面的描述中，仅对吡咯环2-位连接氨基胍取代基的化合物的优选取代基、制备方法等方面进行了描述。应该理解的是，对氨基胍取代基连接在吡咯环2-位的本发明化合物的所有陈述也适用于所述氨基胍取代基连接在吡咯环3-位的本发明化合物。此外，这里本申请通式(I)化合物全部以它们的反式异构的形式表示。应理解的是，通式(I)化合物也可以是以它们的顺式异构的形式存在。因此，尽管优选反式构型，但分子中双键的构型既可以是顺式的也可以是反式的。

本领域技术人员应该理解，通式(I)化合物可以下图所示的各种互变异构形式存在(仅列出了化合物(Ia))。显然，本发明化合物所有可能的互变异构形式都是预料的并因此包括在本发明范围之内。

本发明化合物具有碱性性质，因此，可通过用适当的药学可接受的酸性物处理将它们转变为它们的酸性加成盐。这种酸的例子包括无机酸，例如盐酸，氢溴酸，氢氟酸或氢碘酸，硫酸，硝酸，磷酸等等；或有机酸，包括乙酸，丙酸，羟基乙酸，2-羟基丙酸，2-氧代丙酸，乙二酸，丙二酸，丁二酸，(Z)-2-丁烯二酸，(E)-丁烯二酸，2-羟基丁二酸，2，3-二羟基丁二酸，2-羟基-1，2，3-丙三酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，4-甲基苯磺酸，环己基氨基磺酸，2-羟基苯甲酸，4-氨基-2-羟基苯甲酸以及本领域技术人员所已知的其它酸。

取代基R₁、R₂、R₃、R₄和R₅可分别选自上述取代基的组。然而，在本发明优选的实施方案中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_2-6炔基、羟基、任选取代的C_1-6烷氧基、任选取代的C_2-6烯氧基、羧基、任选取代的C_1-6烷氧羰基、任选取代的C_1-6烷羰基、甲酰基、氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基氨羰基、C_1-6烷基羰基氨基、氨基-C_1-6烷基羰基氨基、单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6烷基羰基氨基、氰基、脲基、C_1-6烷酰氧基、C_1-6烷基磺酰基、C_1-6烷基亚磺酰基、C_1-6烷基磺酰氧基、氨基磺酰基、单和二(C_1-6烷基)氨基磺酰基、硝基、任选取代的C_1-6烷硫基和卤素。

在本发明更优选的方案中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、羟基、任选取代的C_1-6烷氧基、氨基、氰基、硝基和卤素，例如溴，氯和氟。更优选的(未取代的)C_1-6烷基的具体例子包括C_1-4烷基，例如甲基或乙基，特别是甲基。更优选取代的C_1-6烷基的具体例子包括取代的C_1-4烷基，例如卤素取代的C_1-4烷基，例如三卤代C_1-4烷基，特别是三溴甲基、三氯甲基和三氟甲基，其中特别优选三氯甲基和三氟甲基。更优选的(未取代的)C_2-6烯基的具体例子包括C_2-4烯基，例如乙烯基、烯丙基和丁烯基，特别是烯丙基。更优选的(未取代的)C_1-6烷氧基的具体例子包括C_1-4烷氧基，例如甲氧基或乙氧基，特别是甲氧基。

关于取代基R₆和R₇，这些取代基可以各自独立地选自氢、任选取代的C_1-6烷基、任选取代的C_2-6烯基、任选取代的C_4-6二烯基、任选取代的C_2-6炔基、任选取代的C_1-6烷氧羰基、任选取代的C_1-6烷基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳氧基羰基、任选取代的芳基羰基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳氧基羰基、任选取代的杂芳基羰基、氨羰基、单和二(C_1-6烷基)氨羰基、氨基-C_1-6烷基氨羰基以及单和二(C_1-6烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨羰基；或R₆和R₇可以一起形成五元或六元含氮环。在本发明优选的方案中，至少R₆和R₇之一是氢。在本发明优选的方案中，R₆和R₇两个都是氢，即本发明化合物具有如通式(II)中所示的结构。

在本发明有利的具体实施方案中，R₄是氢，且R₁、R₂、R₃和R₅如上所定义。因此，根据本发明的这个具体实施方案，本发明化合物具有如通式(III)所示结构：

其中各取代基如上所定义。特别优选的是R₆和R₇都是氢。

在本发明有利的具体实施方案中，R₁和R₄是氢，且R₂、R₃和R₅如上所定义。因此，根据本发明的这个具体实施方案，本发明化合物具有如通式(IV)所示结构：

其中各取代基如上所定义。特别优选的是R₆和R₇都是氢。

在本发明有利的具体实施方案中，R₁、R₄和R₅是氢，且R₂和R₃如上所定义。因此，根据本发明的这个具体实施方案，本发明化合物具有如通式(V)所示结构：

其中各取代基如上所定义。特别优选的是R₆和R₇都是氢。

关于上述通式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物，应理解的是各个取代基可连接在环系的不同位置。尤其是，关于上述通式(V)，R₂和R₃的连接位点可以是如下方式：在本发明的一个具体实施方案中，R₂位于2-位且R₃位于3-位。在本发明的另一个具体实施方案中，R₂位于2-位且R₃位于4-位。在本发明的又一个具体实施方案中，R₂位于2-位且R₃位于5-位。在本发明的又一个具体实施方案中R₂位于2-位且R₃位于6-位。在本发明进一步的具体实施方案中，R₂位于3-位且R₃位于4-位。在本发明更进一步的具体实施方案中，R₂位于3-位且R₃位于5-位。在本发明的又一个具体实施方案中，R₂位于3-位且R₃位于6-位。

在本发明有利的具体实施方案中，R₁、R₂、R₄和R₅是氢，且R₃如上所定义。因此，根据本发明的这个具体实施方案，本发明化合物具有如通式(VI)所示结构：

其中各取代基如上所定义。特别优选的是R₆和R₇都是氢。

在本发明的一个具体实施方案中，R₃位于2-位。在本发明的另一个具体实施方案中，R₃位于3-位。在本发明的又一个的具体实施方案中，R₃位于4-位。

在本发明更进一步有利的具体实施方案中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅都是氢。应该理解的是，上述与本申请化合物有关的所有陈述同样适用于胍基取代基连接在吡咯环2-位或3-位的本发明化合物(虽然，通常仅描述和讨论了其中氨基胍取代基连接在吡咯环的2-位上的本发明化合物)。然而，在本发明的优选方案中优选的是氨基胍取代基连接在吡咯环的2-位，即，在优选的方案中本发明化合物具有如上述通式(Ia)和通式(II)-(VI)所示的立体化学结构。

如上所述，n是1、2或3的整数。在本发明优选的方案中n是1或2。在本发明最优选的方案中n是1。

目前认为特别有利的本发明化合物示于图1。

本发明化合物的制备方法

本发明化合物可通过本领域技术人员所已知的标准方法制备。因此，基本上，上述通式(Ia)或(Ib)可如在WO 03/013509中描述的那样来制备，即使通式(IIa)或(IIb)化合物与通式(III)的氨基胍衍生物在合适的有机溶剂中反应：

其中各取代基具有上述同样含义。优选的是，使通式(IIa)或(IIb)化合物与通式(III)的氨基胍衍生物反应，其中氨基胍衍生物以酸式加成盐，例如碳酸氢盐的形式存在。

化合物(IIa)可由原料化合物(IVa)通过著名的Wittig反应容易地制备。

中间化合物(Va)的形成是在适当的有机溶剂中一般是质子溶剂，例如二甲亚砜、二甲基甲酰胺、六甲基磷酸三酰胺，在强碱例如醇盐，如叔丁氧基钠或钾的存在下进行的。接着利用标准方法通过酸性水解使中间体(Va)转变成所需要的(IIa)。如同可理解的那样，通过使用起始化合物(IVb)代替起始化合物(IVa)，以类似的路线可以得到化合物(IIb)：

药学组合物

本发明化合物优选以包括药学上可接受的载体或赋形剂的组合物形式给药。术语“药学上可接受的”是指载体或赋形剂不会对给药的病人带来任何副作用。这些药学上可接受的载体和赋形剂是本领域技术人员已知的(Remington′sPharmaceutical Sciences，18th edition，A.R.Gennaro，Ed.，Mack出版公司[1990]；Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins(肽和蛋白质的药物制剂开发)，S.Frokjaer和L.Hovgaard，Eds.，Taylor & Francis出版社[2000]；和Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物辅料手册)，3rd edition，A.Kibbe，Ed.，Pharmaceutical Press(医药出版社)[2000])。

给药的精确剂量取决于环境。通常，所用剂量应能阻止或减弱要治疗的病症或症状的严重程度或扩展程度。显然，对本领域技术人员而言，本发明化合物的有效量尤其取决于病症、剂量、给药周期，本发明化合物是否单独给药或与其他治疗剂联合给药，患者的总体健康状况等等。通常，特别是如果经口服途径给药，在整个治疗周期内本发明化合物应该以每千克体重0.1至100mg的剂量给药。

所述药物组合物可以各种形式包括液体、胶凝、冻干的(lyophilised)、粉末、压缩的固体或其他合适的形式来配制。优选的形式取决于所治疗的具体症状，而且这对本领域技术人员而言是显而易见的。

所述药物组合物可以下列形式给药：口服、皮下、静脉、脑内、鼻内、经皮、腹膜内、肌内注射、肺内、阴道内、直肠、眼内或以其他可接受的方式，例如利用PowderJect或ProLease技术。所述组合物可利用本领域技术人员熟知的技术例如泵送或插入通过输注的方式连续给药，当然快速注射是可以接受的。在某些情况下可将所述组合物作为溶液或喷雾直接应用。优选的给药方式取决于所治疗的具体症状，而且这对本领域技术人员而言是显而易见的。然而，当前优选的给药方式是经口服途径给药。

本发明的药物组合物可与其他治疗剂联合给药。这些药剂可作为同一药物组合物的一部分加入，或与本发明组合物协同地或其它可接受的治疗程序分别给药。

口服给药

对于口服给药，药物组合物可以固体或液体形式，例如，以胶囊、片剂、悬浮液、乳剂或溶液的形式。所述药物组合物优选以一剂量单位包含一定量的活性成分的形式制备。人类或其它哺乳动物的合适的日剂量根据患者的症状或其它因素而广泛变化，但可通过本领域技术人员利用常规方法确定。

口服给药的固体剂型可包括胶囊、片剂、栓剂、粉剂和颗粒剂。在固体剂型中，可使活性化合物与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。根据通常的情况，这种剂型还可包括其它的物质，例如润滑剂如硬脂酸镁。在胶囊、片剂和丸剂的情况，所述剂型还可包含缓冲剂。另外，可用肠溶衣制备片剂和丸剂。

可使本发明化合物与助剂混合，例如乳糖、蔗糖、淀粉、烷酸纤维素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、阿拉伯胶、明胶、海藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷和/或聚乙烯醇，压片或形成胶囊以用于常规给药。或者，可使本发明化合物溶于盐水、水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、油类(例如玉米油、花生油、棉子油或芝麻油)、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其它助剂和给药方式在药学领域是所熟知的。载体或稀释剂可包括时间延迟物质，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯单独或与蜡一起使用，或其它本领域所熟知的物质。

所述药物组合物可进行常规的药品操作例如杀菌，和/或可包含常规助剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲剂、填料剂等等。

口服的液体剂型可包括药学上可接受的乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和包含本领域通常使用的惰性稀释剂例如水的酏剂。这种组合物还可含有助剂，例如润湿剂、甜料、调味剂和芳香剂。

本发明还涉及制造包含一种或多种本发明化合物的药物制剂的方法，以及它们用于各种医学和兽医实践的与促黑素细胞激素受体有关的用途。

治疗用途

本发明化合物已在黑素皮质素(melanocortin)体系中进行了测试并意外地显示出如在功能试验中显示的活性那样与MC受体结合的能力。本发明化合物既是一种特定MC受体或许多MC受体，例如MCI，MC3，MC4和/或MC5受体的激动剂也是拮抗剂。

所述MC-受体属于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor)类型，其是完全由单一多肽形成7跨膜区域(transmembrane domain)。已经记载了五种这样的受体类型，分别为MC1、MC2、MC3、MC4和MC5。所述MC受体信号主要通过cAMP介导，但其它的信号传导途径也是已知的。它们各自不同地分布在体内。

MC受体与各种生理作用相关联，它们通过不同MC-受体亚型来介导。然而在多数情况，不完全清楚哪种亚型对所述效果起作用，如同已例证的那样发现选择性的MC1受体具有显著的抗炎作用，但似乎缺乏如对不确定的MC受体激动剂例如α-MSH所描述的器官保护效应，其中已有建议另外的MC3和/或MC5受体刺激需要具有器官保护效应。另一个例子是黑素皮质素受体刺激的主要效果，其中对是否需要MC3和MC4受体都刺激或仅其中的一个受体刺激不清楚。

很久之前就已知MSH-肽可影响许多不同的过程，例如动机、认知、记忆、行为(包括进食和性欲)、炎症(包括免疫刺激和抑制免疫力)、体温、痛觉、血压、心率、血管紧张度、脑血流、不同器官中的营养效果、神经生长、胎盘发育、内分泌和外分泌功能、醛甾酮合成和释放、甲状腺素释放、精子发生、卵巢负荷、催乳激素和FSH分泌、效果或其它荷尔蒙、妇女子宫流血、皮脂和信息素分泌、血糖水平、尿钠排泄、子宫内胎儿发育以及其它有关分娩的现象，(例如参见Eberle：The melanotropins：Chemistry，physiology andmechanisms ofaction(促黑细胞激素：化学、生理学和作用机制).Basel：Karger，Switzerland.1988，ISBN 3-8055-4678-5；Gruber等人，Am.J.Physiol.(美国生理学杂志)1989，257，R681-R694；De Wildt等人，J.Cardiovascular Pharmacology(心血管药理学).1995，25，898-905)以及导致产生尿钠排泄(Tin et al.，Hypertension.1987，10，619-627)。

而且，还已知所述α-MSH的免疫调节作用包括免疫刺激和抑制免疫力效果。已有许多研究表明α-MSH对促炎细胞因子例如IL-1α、IL-1β、IL-6和TNFα起拮抗效果，并导致产生抗炎细胞因子IL-10(例如参见综述Catania & Lipton，Endocr Rev.1993 Oct；14(5)：564-76)。

进食行为通过生理学调节路径包括中枢神经系统和外周位置的复合网络来调节。已知控制食物摄入数量的因素有例如莱普亭定(leptin)、胰岛素、NPY(神经肽Y)、增食因子(orexins)、CRF(促肾皮素释放因子、释放荷尔蒙)和黑素皮质素肽(Schwartz，Nature Medicine(自然医学)1998，4，385-386)，它们可以影响体重、体脂质量和增长速度。近来有研究表明MC-受体尤其是MC4受体的角色在于控制摄入食物，有证据表明黑素皮质素和MC4受体是莱普亭定下游的重要因素。侧脑室注射黑素皮质素肽α-MSH和ACTH(1-24)显示出显著抑制进食(Poggioli等，Peptides(肽)，1986，7，843-848；Vergoni等人，Neuropeptides(神经肽)，1986，7，153-158)。

近来认为MC5-受体的作用在于控制外分泌腺功能5(van der Kraan等，Endocrinol.1998，139，2348-2355；Chen等人，Cell.1997，91，789-798)。

另外，已清楚的是黑素皮质素肽影响性功能在于它们导致了雄性勃起(Donovan，Psychol Med.，1978，8，305-316)，其大概由MC-受体主要竞争效果介导。它还表明MC-受体阻断剂可抑制黑素皮质素肽勃起因子起效果(Vergoni等Eur.J.Pharmacol.(欧洲药理学杂志)，1998，362；95-101)。

本发明化合物具有重要的治疗性质，可使它们用于治疗炎性病症，例如急性或慢性炎性病症，如关节炎，包括与关节炎有关的疾病，骨关节炎，类风湿性关节炎，脊椎关节炎疼(spondylarthropathies)(例如僵硬性脊椎痛)，反应性关节炎(包括风湿热性关节炎)，亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)和莱特尔氏病(Reiter′s disease)，结缔组织机能紊乱如系统性红斑狼疮，多肌炎/皮肌炎，系统性硬化，混合结缔组织病，结节病和初期舍古林综合征(Sjogrens syndrome)包括干燥性角膜结膜炎，风湿性多肌痛，和其它类脉管炎，晶粒沉淀病(crystal deposition disease)(包括痛风)，焦磷酸盐关节病，剂型钙化关节周炎；炎症性肠病(包括肖隆(Chrons)疾病)和溃疡结肠炎)，结肠憩室病，和过敏性肠综合征，胰腺炎，炎性上下呼吸道疾病如慢性阻碍性肺病(COPD)，过敏性和不过敏性哮喘，过敏性鼻炎，过敏性和不过敏性结膜炎，过敏性和不过敏性皮炎，外伤和外科手术后压力综合症，糖尿病，胰岛素抗力，新陈代谢综合症，性功能障碍包括男性勃起功能障碍，进食紊乱包括厌食，肥胖症，精神错乱，内分泌系统功能障碍，药引起的血液和淋巴系统紊乱，过敏紊乱，心血管系统紊乱和疼痛。

下面详细描述了本发明化合物用于处置的疾病和病症。

炎性病症

式(I)化合物和/或它们药学上可接受的盐具有重要的药理学性质，可使用它们用于处置发炎，炎性病症或炎性疾病例如与产生一氧化氮有关的炎症，与增加诱导型一氧化氮合酶的数量(增加对刺激的反应数量(upregulatedamount))的炎症，与转录激活物活化有关的炎症，与核转录因子κβ有关的炎症，与巨噬细胞、嗜中性白细胞、单核细胞、角质细胞、成纤维细胞、黑色素细胞、色素细胞和内皮细胞有关的炎症，与增加生产和/或释放炎性细胞因子有关的炎症，例如中间白细胞素，特别是中间白细胞素1(IL-1)，中间白细胞素6(IL-6)和肿瘤坏死因子a(TNF-α)。

在本说明书中，“增加产生”是指与在健康个体内内源性化合物的量相比，所述内源性化合物在患者局部、区域或全身增加形成、增加释放或增加数量。在本说明书内，“增加对刺激的反应(upregulated)”是指与健康个体相比，所述化合物增加活性或数量。

在本说明书中“减少产生”是指与在健康个体内内源性化合物的量相比，所述内源性化合物在患者体内减少形成、减少释放或减少数量。在本说明书中“抑制对刺激的反应(downregulated)”是指与在健康个体相比，所述化合物减少活性或数量。

尤其是可看到在病症中积极的治疗效果或预防效果，所述病症中的炎症或类炎性病症由下列中的一个或多个引起或与之相关：过敏，超敏，细菌感染，病毒感染，由毒性剂引起的炎症，发烧，自身免疫病，由任何来源包括紫外射线、X射线辐射、γ辐射、α或β粒子、太阳灼伤、高温导致的辐射损伤或机械损伤。而且，炎症由于缺氧，随后所述缺氧区域任意地再充氧，接着通常会产生严重的炎症，通过使用本发明化合物治疗这种病症有着积极的效果。

在本发明非常具体的实施方案中，可使用本发明化合物预防或治疗任意源于皮肤(包括真皮和表皮)的炎性病症，包括具有炎性成分的皮肤病。本发明这种实施方案的具体例子包括治疗皮肤接触性皮炎，皮肤晒伤，任何原因造成的灼伤，由化学剂引起的皮肤炎症，牛皮癣，血管炎，坏疽性脓皮病，盘状红斑狼疮，湿疹，掌趾脓疱病和寻常型天疱疮(phemphigus vulgaris)。

而且，炎性病症包括各种软组织风湿病包括类风湿性关节炎，滑囊炎，腱鞘炎或髌腱腱围炎(peritendonitis)，起止点炎(enthesitis)，神经压迫(nervecompression)，关节周炎或囊炎，肌张力和肌肉功能紊乱。此外，炎性病症包括各种儿童关节炎例如幼儿慢性关节炎包括斯提耳病(Still′s disease)，儿童类风湿性关节炎，儿童强直性脊柱炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗腹部的炎性疾病，包括具有炎性成分的腹部疾病。使用本发明化合物治疗这类疾病的具体例子有胃炎，包括不明原因的类型，萎缩性胃炎(gastritis pemiciosa)，溃疡性结肠炎(结肠炎溃疡)，克隆氏症(morbus Crohn)，系统性硬化，十二指肠溃疡(ulcus duodeni)，腹腔病，食管炎，胃溃疡，急性和慢性胃炎，螺旋幽门菌感染，腹腔病，谷蛋白敏感肠道病，疱疹样皮炎(dermatitis herpitiformis)，热带口炎性腹泻，惠普尔疾病(Whipple′s diease)，放射性肠炎，系统性淀粉样变(systemic amyloidosis)，嗜酸性胃肠炎，小肠淋巴管扩张(intestinallympangiectasia)，炎症性肠病，结肠憩室病和过敏性肠综合征。

本发明还包括用式(I)化合物或其药学可接受的盐治疗系统性或一般性和/或局部免疫性疾病，包括那些天生性自身免疫和其它常规性质的炎性疾病。具体的例子包括治疗类风湿性关节炎，牛皮癣关节炎，系统性硬化，风湿性多肌痛，眶坏死性肉芽肿病，结节病，嗜酸性筋膜炎(eosinophiolic fasceitis)，反应性关节炎，别赫捷列夫氏病，系统性红斑狼疮，颞动脉炎(arteritistemporalis)，贝切特氏病，Burger综合征，Good Pastures′综合症，嗜曙红细胞肉芽肿，纤维肌痛，肌炎和混合结缔组织病。其中还包括关节炎，包括不明原因的关节炎。

本发明还进一步包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及炎症的外围和/或中枢神经系统疾病。本发明这方面包括治疗脑血管炎，多发性硬化，自身免疫性眼炎和多神经元损害(polyneuropathia)。本发明还包括使用本发明化合物用于治疗中枢神经系统炎症以预防细胞凋亡(apoptoti celldeath)。而且，如同很多本发明化合物显示出明显的诱导神经再生的能力那样，常常对中枢神经系统疾病包括在该区域的细胞损伤显示出积极的治疗效果。本发明这方面还包括治疗对中枢神经系统的外部损伤，脑浮肿，多发性硬化，阿尔茨海默氏病，中枢神经系统中的细菌和病毒感染，中风和中枢神经系统内出血。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及炎症的眼部和泪腺疾病。这种疾病的具体例子包括前部的和后部的眼色素层炎，视网膜血管炎，视神经炎，视神经脊髓炎，眶坏死性肉芽肿病，舍格伦氏综合症(Sjogren′s syndrome)，巩膜外层炎，巩膜炎，影响视力的肉状瘤和影响视力的多软骨炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及炎症的耳部疾病，其中具体的例子包括影响听觉的多软骨炎和外部耳炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及炎症的鼻部疾病，其中具体的例子是鼻部肉状瘤，多软骨炎和中线肉芽瘤。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及口部、咽喉部和唾液腺部炎症的疾病。具体的例子包括眶坏死性肉芽肿病、中线肉芽瘤、舍格伦氏综合症和在该区域的多软骨炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及肺部和/或气管炎症的疾病，例如急性或慢性或亚慢性肺部和/或气管炎症。具体的例子包括治疗突发性肺泡炎，原发性肺动脉高压，支气管炎，慢性支气管炎，肉状瘤，炎症性系统病的肺泡炎，炎症性系统病的肺性高血压症，眶坏死性肉芽肿病，Good Pastures综合征，上和下呼吸管疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)，COPD恶化，过敏性和非过敏性哮喘，过敏性鼻炎，过敏和非过敏性结膜炎，急性呼吸系统疾病和/或慢性和/或亚慢性气管和肺部疾病。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及心脏炎症的疾病。具体的例子包括治疗心包炎，特发性心包炎，心肌炎，Takayasus氏动脉炎，川崎病(Kawasaki′disease)，冠状动脉血管炎，炎症性系统病的心包炎，炎症性系统病的心肌炎，心内膜炎和炎症性系统病的心内膜炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及肝脏炎症的疾病。具体的例子包括治疗肝炎，慢性活动性肝炎，胆汁性肝硬化，毒性剂导致的肝脏损伤，干扰素引起的肝炎，病毒感染引起的肝炎，由缺氧导致的肝脏损伤和由机械性创伤导致的肝脏损伤。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及胰腺炎症的疾病。具体的例子包括治疗(和预防)急性胰腺炎、慢性胰腺炎。

而且，本发明化合物还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗与增加LDL胆固醇耐量有关的疾病，与联合增加LDL胆固醇和三酸甘油酯耐量有关的病症，与增加三酸甘油酯耐量有关的病症，和与增加HDL胆固醇耐量有关的病症。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗有关甲状腺炎症的疾病。本发明这些实施方案的具体例子包括治疗甲状腺机能病(thyreoiditis)、自身免疫性甲状腺机能病和桥本甲状腺炎(Hashimoto′sthyreoiditis)。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及肾脏炎症的疾病。具体的例子包括治疗血管球性肾炎，系统性红斑狼疮的血管球性肾炎，结节性动脉周围炎，眶坏死性肉芽肿病，Good Pastures综合征，有关HLAb27的疾病，lgA肾炎(lgA＝免疫球蛋白A)，肾盂肾炎，慢性肾盂肾炎和间质性肾炎。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及关节的疾病。具体的例子包括治疗别赫捷列夫氏病(Bechterew′s disease)，牛皮癣关节炎，类风湿性关节炎，溃疡性结肠炎中的关节炎，Crohn病中的关节炎，系统性红斑狼疮中的关节病，系统性硬化，混合结缔组织病，反应性关节炎，瑞特氏综合征(Reiter′s syndrome)。而且，在本发明的实施方案中还包括治疗任何关节的关节病，特别是指关节、膝和臀的关节病。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及血管炎症的疾病。具体的例子包括治疗颞动脉炎(arteritis temporalis)，结节性动脉周围炎，动脉硬化，Takayasus氏动脉炎和川崎病(Kawasaki′s disease)。特别有利的是本发明的一些化合物具有对动脉硬化提供保护措施和预防作用的功效。这部分是由于式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有这样的能力：阻止由内皮细胞和血管壁上氧化低密度脂蛋白作用所引起的可诱使一氧化氮合成(iNOS)的诱导作用。

炎性疾病还包括各种引起背部疼痛(backpain)的病症，包括感染，脓毒性间盘炎(septic discitis)，肺结核，恶性肿瘤(例如次生肿瘤，骨髓瘤等等)，脊椎瘤，僵直性脊柱炎(ancylosing spondylitis)，急性椎间盘脱出，慢性椎间盘脱出/骨关节炎，骨质疏松症和骨软化症。还包括佩吉特氏病，甲状旁腺机能亢进，肾性骨营养不良，脊椎前移，先天性椎管狭窄(spinal senosis congenitalabnormalities)和纤维肌痛。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及所有原因感染的炎症。具体的例子包括治疗由病毒、细菌、寄生虫、原生动物和真菌导致感染的继发性炎症，包括这样的病症，例如AIDS，细菌性败血病，系统性真菌感染，立克次氏体疾病，中毒性休克综合症，传染性单核细胞增多症，沙眼衣原体(chlamydia thrachomatis)，鹦鹉热衣原体，巨细胞病毒感染，弯曲杆菌属细菌，沙门氏菌，流行性感冒，脊髓灰质炎，弓形体病，拉沙热病，黄热病，血吸虫病(billharziose)，埃希氏菌(colibacteria)，肠球菌，变形菌(preteus)，克雷伯氏杆菌，假单胞菌，金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，白色念珠菌，肺结核，腮腺炎，感染性单核细胞增多症，肝炎和柯萨奇病毒。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及所有原因导致的外伤和/或组织损伤的炎症，例如化学试剂损伤，包括一种或多种有毒物质和/或药物。这类药物包括三环抗忧郁药，锂盐，双苯丙胺，苯并噻嗪(phenothizine)衍生物，化学预防性药物包括阿霉素。身体损伤还包括电磁辐射可能造成的损伤。

胰岛素抵抗和糖尿病

本发明还包括使用式(I)或其药理学上可接受的盐用于治疗涉及这些疾病中的炎症：胰岛素抵抗、新陈代谢综合症、糖尿病，包括II型糖尿病，其中所述炎症是在脂肪组织和肌肉中的轻微性炎症，它在胰岛素信号传导中损伤的发生、进而的善胰岛素抵抗的产生以及最终的糖尿病中扮演了重要角色。本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗胰岛素抵抗，新陈代谢综合症，糖尿病，包括II型糖尿病。

进食紊乱

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及进食紊乱例如厌食和贪食症的炎症。本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗进食紊乱例如厌食和贪食症。

肥胖症

本发明还包括使用式(I)或其药理学上可接受的盐用于治疗涉及肥胖症的炎症，其中所述炎症是在脂肪组织和肌肉中的轻微性炎症，它在肥胖症并发症的发生，包括胰岛素抵抗的产生以及最终的糖尿病中扮演了重要角色，例如II型糖尿病、血脂障碍，高血压和动脉粥样硬化(aterosclerosis)。

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗肥胖症和/或新陈代谢综合症。

充血性心力衰竭

本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗涉及充血性心力衰竭的炎症，其中所述炎症是轻微性炎症，包括在心脏内产生TNF-α，它在心脏衰竭中的纤维化的产生和心肌重造中扮演了重要角色。本发明还包括使用式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于治疗充血性心力衰竭。

性功能障碍

本发明式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐具有重要的药理学性质，它们可用于治疗性功能/机能障碍，例如诱发男性勃起，在家畜繁育中诱发勃起，刺激难以配对的动物间交合，特别是珍稀物种或高贵的种族，宠物，猫类，狗类，马类，或减少动物中的性行为，例如宠物，猫类等等，治疗阳萎和与性冲动有关的紊乱，包括在男人和女人之间缺少性冲动或者不正常的性冲动。

精神错乱

式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐具有重要的药学性质，它们可用于治疗精神错乱例如精神病，抑郁，忧虑，老年性痴呆，阿尔茨海默氏病，药物滥用紊乱和进食紊乱例如厌食症和贪食症。

内分泌系统功能障碍

式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐具有重要的药学性质，它们可用于治疗内分泌系统和其它荷尔蒙系统功能障碍，例如月经过多，子宫内膜异位，与分娩有关的现象，与催乳激素有关的功能障碍，与生长激素有关的功能障碍，与睾丸激素有关的功能障碍，与雌激素有关的功能障碍，与糖皮质激素有关的功能障碍，与促黄体生成激素和促卵泡激素有关的功能障碍，由于预防流产和/或治疗与分娩有关的情况而引起的流产。

药物导致的血液和淋巴系统紊乱

本发明还包括使用本发明的化合物用于治疗由药物导致的血管和淋巴系统紊乱，包括治疗药物导致影响血细胞和血细胞形成器官(例如骨髓和淋巴组织)的过敏症(包括药物过敏症)。本发明在这方面的具体方案包括治疗贫血，颗粒细胞减少症，血小板减少症，白细胞减少症，再生障碍性贫血，自身免疫性溶血性贫血，自身免疫性血小板减少症和自身免疫性颗粒细胞减少症。

过敏反应紊乱

本发明化合物还可用于治疗快速过敏反应紊乱(I型过敏症)。在本发明的该方案中包括治疗过敏反应，类过敏性反应，哮喘，过敏类哮喘，不明原因的哮喘，鼻炎，花粉气喘和花粉过敏症。

心血管系统紊乱

式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有重要的药学性质，可使它们用于治疗心血管系统紊乱，例如与血压、心率、血管紧张度、尿钠排泄、出血、休克有关的紊乱，与局部缺血、梗塞、再灌注损伤、心律不齐有关的紊乱，特别是在局部缺血期间，或用于治疗与以前心脏局部缺血周期的再充氧作用有关的心律不齐。

疼痛

式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有重要的药学性质，可使它们用于治疗疼痛，例如中枢源的疼痛，CNS、中风、梗塞损伤后引起的疼痛，外周源的疼痛，慢性疼痛，神经病和由通过刺激在水管周围灰质区域的受体获得的治疗效应的紊乱。

其它用途

皮肤晒黑

由于本发明化合物具有刺激在表皮细胞中形成色素的功能，出于美容的原因，本发明的一些化合物也可用于诱导皮肤晒黑，用于治疗白斑病，或根据肤色变黑需要的任何其它病症。而且，因为本发明化合物的一些化合物具有禁止色素在皮肤细胞中形成的功能，因此出于美容的原因或任何需要使肤色变浅的情况，它们也可以用于诱导肤色变浅。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有重要的药理学性质，可使它们用于使皮肤晒黑，使肤色变深，诱导皮肤中黑色素的合成，减少皮肤晒黑，使肤色变浅，减少或阻止皮肤中黑色素的合成，使皮肤具有抗炎作用，控制表皮炎生长，改善伤口愈合，治疗粉刺，皮脂溢，酒糟鼻，特应性皮炎，干癣和与皮肤腺功能障碍有关的病症，例如脂肪腺和皮脂过量或供应不足。

体内第二信使的形成

本发明化合物用于阻止或刺激体内第二信使例如cAMP的形成。这种抑制/刺激用于细胞中或使体外细胞系统变形，例如，用于分析或诊断的目的。

标记和标签

出于分析和诊断的目的，本发明化合物可以放射形式使用，其中它们含有一种或多种放射性标记或γ或正放射同位素，在放射性配体结合中用于定量以及MC-受体的组织探测，用于分析分解/缔合常数，通过使用闪烁扫描、正电子发射层析成像(PET)或单光子发射计算机断层照相(SPECT)显像体内的结合度，或用于诊断疾病和治疗其中恶意细胞包含MC受体的任意恶性肿瘤。

或者本发明化合物可使用任何其它类型的可探测相应化合物的标记物来标记，标记物例如荧光，生物素，NMR，MRI或者由γ放射、可见光子或生物化学过程或光或紫外光(后者为了获得通过光亲和技术用于MC受体共价标记的化合物)激活的标记物。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐也可用毒性试剂(例如阿霉素、蓖麻毒素、白喉毒素或其它)标记，用于定位输送含MC受体的恶性细胞，或用能激活内在免疫系统触发免疫系统(例如能与T-细胞抗原例如CD3或其它结合的化合物、单克隆抗体或其它)的化合物标记，用于治疗恶性肿瘤和其它MC受体表达的疾病。这样形成的杂化化合物可引导细胞毒素细胞到恶性黑色素瘤细胞或含恶性细胞的MC1-受体并阻止肿瘤生长。

式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以通过共价键或非共价键化学性地附着于抗体。

本发明化合物可用于动物尤其是人类疾病、紊乱和/或病症的治疗和诊断。

本发明化合物可与一种或多种其它任意需求的结构的分子进行共价键或非共价键结合；这样形成的修饰化合物或络合物可以如说明书所描述的本发明化合物的同样目的来使用，并在下面的实施例中进行了公开。在本发明特别重要的具体实施方案中，放射性标记分子与式(I)化合物或其药学上可接受的盐以共价键结合，从而制得放射性标记得式(I)化合物或其药学上可接受得盐。

本发明的一些化合物对哺乳动物包括人类中的黄嘌呤氧化酶有影响。

通过以下非限制性的实施例进一步描述本发明。

实施例

实施例1-合成

[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为19的结构)的合成如下面所描述，附图2中描述了合成路线。

合成1-(2-硝基-苯基)-1H-吡咯(1a)

将1.37g(9.9mmol)2-硝基苯胺和1.3ml(11mmol)2，5-二甲氧基四氢呋喃在20ml乙酸中回流1小时。蒸发反应混合物，在EtOAc中稀释残余物并用水、NaHCO₃(饱和)、水洗涤，然后用Na₂SO₄干燥。蒸发溶剂，得到1.8g(96％)的1a，为油状物。

合成1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-甲醛(2a)

在室温下加入50ml的CCl₄后，将POCl₃加入到0-10℃的DMF中。在大约10℃1小时内，将4.5g(24mmol)1a在50ml CCl₄中的溶液慢慢加入到反应混合物中。将反应混合物回流15min，加入50g NaOAc，3H₂O在50ml H₂O中的溶液，保持回流15min。冷却混合物，用乙醚萃取，Na₂SO₄干燥，使用EtOAc：石油醚作为洗脱液通过色谱柱分离得到8.0g(65％)2a。

合成1-(2-硝基苯基)-2-(2-[1，3]二氧戊环-2-基-乙烯基)-1H-吡咯(3a)

将2.98g(13.8mmol)2a、1.2当量三丁基-[1，3]二氧戊环-2-基甲基-λ⁵-膦和1.5当量溶于DMSO中的KOtBu在60℃下搅拌24小时。通过TLC监控反应(EtOAc∶石油醚＝1∶2)。冷却后，将反应混合物倒入水中，用乙醚萃取，蒸发溶剂。用乙醚稀释半固体状的残余物，过滤并除去残余的Bu₃PO，产物用柱色谱法(EtOAc∶石油醚＝1∶2)纯化，得到2.6g(66％)的3a。

合成3-[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基]-丙烯醛(4a)

用10％HCl水溶液搅拌2.6g(9.1mmol)3a在50ml乙醚中的溶液1小时。用5％NaHCO₃洗涤反应混合物，用NaHCO₃干燥。蒸发溶剂后，获得2g(91％)的4a。

合成[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(5a)

将2g(8.3mmol)4a和1.1当量的碳酸氢氨基胍在THF中混合并回流30分钟。蒸发溶剂，用乙腈稀释残余物，使产物结晶。用乙腈重结晶纯化获得1.35g(55％)最终产品5a(m.p.192-194℃)。

¹ H NMR谱

(瓦里安200MHz)(DMSO-D₆)δ(ppm)：1.79(s，3H)；6.17-6.37(m，2H)；6.2-7-2(br s，5H)；6.45(dd，J＝9.1Hz and 15.8Hz，1H)；6.62-6.71(m，1H)；6.94-7.01(m，1H)；7.60(d，J＝9.1Hz，1H)；7.63(dd，J＝1.3Hz和7.6Hz，1H)；7.77(dt，J＝1.3Hz和7.6Hz，1H)；7.89(dt，J＝I.3Hz和7.6Hz，1H)；8.13(dd，J＝I.3Hz和8.2Hz，1H)

元素分析

测量值：C 53.7，H 5.1，N 23.3

计算值：C 53.6，H 5.1，N 23.5

实施例2-合成

[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(参见附图1编号为53的结构)的合成如下面所描述，附图3中描述了合成路线。

合成1-(2-溴-苯基)-2-(2-[1，3]二氧戊环-2-基-乙烯基)-1H-吡咯(3b)

将3.12g(12.5mmol)1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-甲醛、1.2当量三丁基-[1，3]二氧戊环-2-基甲基-λ⁵-膦和1.5当量溶于20mlDMSO中的KOtBu搅拌2小时。将反应混合物加热到47℃并搅拌一夜。将反应混合物冷却到室温并倒入200ml的水中，用乙醚萃取，Na₂SO₄干燥，蒸发溶剂。将获得的油状残余物过夜结晶。用乙醚洗涤沉淀物，过滤并干燥。获得E和Z异构体混合物。用柱色谱纯化获得2g(50％)E型异构体3b。

合成3-[1-(2-溴-苯基)-1H-吡咯-2-基]-丙烯醛(4b)

将1.74g(5.4mmol)3b溶于20ml的乙醚中并用20ml 10％的HCl水溶液搅拌40分钟。通过TLC监控反应(EtOAc∶石油醚＝1∶2)。用5％NaHCO₃洗涤反应混合物，用NaHCO₃干燥并蒸发溶剂。用柱色谱(石油醚＝1∶5)分离产物得到0.9g(60％)的4b。

合成[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐(5b)

将0.9g(3.26mmol)4b和1.2当量的氨基胍碳酸氢盐在10ml乙醇和2ml乙酸中混合并回流30分钟。蒸发溶剂并将油状残余物溶于乙腈中，滴加几滴乙醚。冷藏三天后形成沉淀，过滤，用乙醚洗涤并干燥。获得340mg(31％)的最终产物5b，为白色晶体(m.p.166-168℃)。

¹ H NMR谱

(瓦里安200MHz)(DMSO-D₆)δ(ppm)：1.75(s，3H)；6.21(d，J＝16.0Hz，1H)；6.28-6.33(m，1H)；6.42(dd，J＝9.2Hz和16.0Hz，1H)；6.5-8.0(br s，5H)；6.68(dd，J＝1.4Hz和3.8Hz，1H)；6.93(dd，J＝1.6Hz和2.6Hz，1H)；7.41-7.59(m，3H)；7.63(d，J＝9.2Hz，1H)；7.79-7.90(m，1H)

元素分析

测量值：C 48.6，H 4.5，N 18.2

计算值：C 49.0，H 4.6，N 17.9

实施例3-体外药理学和结合试验

应用方法描述

通过[¹²⁵I]-[Nle4，D-Phe7]α-MSH([¹²⁵I]-NDP-MSH)放射性配体结合进行MC受体结合亲合力测试。简而言之，使用鼠类B16-F1黑素瘤细胞表达的MC1，而不是其它的MC受体，对鼠类MC1受体进行结合亲合性研究(Siegrist等人，1988，J.Recept.Res.，8(1-4)：323-43)。亲合人类重组体CHO细胞用于人类MC3、MC4和MC5受体(Schioth等，1997，Neuropeptides(神经肽)31：565-71，1997)。将细胞悬浮在HEPES缓冲液中，用微孔板放置放射配位体，并且加入浓度范围为10^-10～10^-6的试验化合物。在37℃(MC1受体试样在22℃)中培育后，通过多次用缓冲液洗涤来分离结合体和游离的[¹²⁵I]-NDP-MSH。

结果以所获得试验化合物的控制特定结合度的百分比来表示。每种试样的平均值列于下表I中。通过利用Hill方程曲线拟合法通过竞争曲线非线性回归分析测定IC₅₀值(导致对照物特定结合最多一半被抑制时的浓度)和Hill系数(n_H)。由Cheng Prusoff方程(K_i＝IC50/(1+(L/K_D))计算抑制常数(K_i)，其中L＝放射配位体在试样中的浓度，K_D＝受体放射配位体的亲合性。

表I

试样	配体	浓度	无特定	培养
					MC₁	[¹²⁵I]NDP-MSH	0.05nM	NDP-MSH(1μM)	90min/22°C
MC₃(h)	[¹²⁵I]NDP-MSH	0.075nM	NDP-MSH(1μM)	60min/37°C
					MC₄(h)	[¹²⁵I]NDP-MSH	0.05nM	NDP-MSH(1μM)	120min/37°C
MC₅(h)	[¹²⁵I]NDP-MSH	0.05nM	NDP-MSH(1μM)	60min/37°C

三个参考化合物都属于在WO03/013509中公开的化合物类型，并且根据本发明的方法进行这三个化合物的测定。如上可知，本发明的试验化合物与相关的参考化合物仅在吡咯环氨基胍取代基的结构上不同。

参考化合物1：

[1-[4-氯苯基)-1H-吡咯-2-基-甲叉氨基]胍乙酸盐

参考化合物2：

[1-[2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基-甲叉氨基]胍乙酸盐

参考化合物3：

[1-[2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-甲叉氨基]胍乙酸盐

本发明化合物1(参见附图1，结构式编号1)：

[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐

本发明化合物2(参见附图1，结构式编号19)：

[1-(2-硝基苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐

本发明化合物3(参见附图1，结构式编号53)：

[1-(2-溴苯基)-1H-吡咯-2-基-烯丙叉氨基]胍乙酸盐

结果

令人吃惊地是，相对于参考化合物1本发明化合物1对鼠类MC1和人类MC4受体都表现出显著增加的结合亲合力(参见下面的表II)。结果表明，相对于在WO03/013509中所公开的化合物，本申请在吡咯环氨基胍取代基上所作的修饰导致了化合物对MC1和MC4受体的结合亲合力显著增加。

表II

K_i(nM)	MC₁	MC₃(h)	MC₄(h)	MC₅(h)
					参考化合物1	＞1,000	＞1,000	＞1,000	＞1,000
化合物1	88	＞1,000	620	＞1,000

相对于参考化合物2，本发明化合物2对鼠类MC1受体表现出显著增加的结合亲合力(参见下面的表III)。结果证实了在本发明化合物1中的惊人发现，即在吡咯环上氨基胍取代基的修饰导致对MC1受体结合亲合力的增加。令人吃惊地是，结果还表明2-位上用硝基(本发明化合物2)代替苯基环4-位上的氯原子(本发明化合物1)导致了对MC1受体的特定结合亲合力。

表III

Ki(nM)	MC₁	MC₃(h)	MC₄(h)	MC₅(h)
					参考化合物2	＞1,000	＞1,000	＞1,000	＞1,000
化合物2	360	＞1,000	＞1,000	＞1,000

令人吃惊地是，相对于参考化合物3本发明化合物3对鼠类MC1和人类MC3和MC4受体都表现出显著增加的结合亲合力(参见下面的表IV)。结果证实了在本发明化合物1和2中的惊人发现，即在吡咯环上氨基胍取代基的修饰导致对MC1受体结合亲合力的增加。令人吃惊地是，结果还表明在2-位用溴原子(本发明化合物3)取代苯基环4-位上的氯原子(本发明化合物1)或苯基环2-位上的硝基(本发明化合物2)导致了增加了对MC1、MC3和MC4受体的特定结合亲和力。

表IV

Ki(nM)	MC₁	MC₃(h)	MC₄(h)	MC₅(h)
					参考化合物3	＞1.000	＞1.000	＞1.000	＞1.000
化合物3	2.6	630	300	＞1.000

本发明化合物3在MC1受体试样中获得的竞争曲线如附图4中所示。

下面描述了用于测定本发明化合物体外和体内效果的实施例方法。该方法的目的在于测试本发明化合物的抗炎效果和抑制或预防细胞/组织/器官损伤或消除已发生的局部缺血、发炎或药物毒性影响的能力。

炎症反应或慢性炎症恶化的特征在于产生源于介质的细胞，例如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL-1β，IL-8，IL10)、一氧化氮(NO)和游离的氧自由基、其最后将引起普遍的内皮损伤，系统脉管中小动脉张力降低，增加毛细管渗透性，导致低血压和器官功能障碍，其中肺内与白血球积聚相关，包括在肺泡腔内的嗜中性白细胞和嗜酸性粒细胞。从传染剂中释放出的脂多糖(LPS)对由许多炎症介质包括TNF-α导致感染的炎症反应中起着重要作用。因此认为具有能抑制TNF-α产生的治疗方案具有显著的抗炎效果。本发明人在许多实验设备中利用LPS刺激产生炎性反应，初步表明根据本发明化合物的抗炎效果能够抑制TNF-α的产生。

实施例4体内效果-抑制LPS诱导的TNF-α和IL10在大鼠中产生

实验动物

将从德国Sulzfeld的Charles River公司获得的雌性Wistar大鼠(～250g)放在温度(22-24℃)和湿度(40-70％)受控制的具有12小时光暗周期(从上午6点到下午6点开灯)的房间内。将该大鼠保持标准啮齿类动物的饮食，即140mmol/kg钠，275mmol/kg钾和23％蛋白质(Altromin国际标准，Lage，德国)，并允许自由摄取水。

动物处理

将动物用异氟烷氧化亚氮麻醉，将不变形的医学级Tygon(商标)导管分别从股动脉和静脉植入腹主动脉和下腔静脉。植入操作后，将动物分别放置7-10天直至试验。

实验方案

在试验前，所有的大鼠都要通过训练以适应用于试验的监禁笼子。在试验当天，将动物转移到监禁的笼子，并开始静脉注射含有150mM葡萄糖的载体溶液。整个实验的注射速度是0.5ml/h。经过短暂的适应周期后，开始注射脂多糖(LPS)。以4mg/kg体重的剂量输送LPS(E coli血清0127B8，L 3129，西格玛(Sigma)公司，圣路易斯，美国)，静脉注射超过1小时。

开始LPS注射120分钟后取0.3ml动脉血样。

实验组：

除注射LPS之外，将所有的大鼠进行弹丸式注射(bolus injection)：载体(0.5ml 20％PEG200)，或试验化合物以如下剂量：0.1；1.0；5.0mg/kg，在LPS注射开始前5分钟进行静脉注射。

试验化合物：

本发明化合物1(附图1，结构编号1)，本发明化合物2(附图1，结构编号19)和本发明化合物3(附图1，结构编号53)。

测量血浆中的TNF-α和IL-10：

将血样收集在含有0.5mM EDTA、PH7.4和20×10⁶IU/ml抑肽酶aprotinin的预冷却试管中。在4℃离心分离后，将血浆样品转移到预先冷却的试管中并储藏在-20℃以用于后面TNF-α和IL-10的测量。通过ELISA(Biotrak，Amersham公司，英国)来测量血浆中的TNF-α和IL-10。

统计分析

结果以平均数±SE来体现。使用重复测量双向方差分析来测试组之间的差异。在P＜0.05的情况下，通过具有显著水平的Bonferroni校正的不成对t-检验来评价在相应时期之间的差异。

结果

如同开始注射LPS 120分钟后通过TNF-α血清水平所评价的那样，本发明化合物1和化合物3降低了LPS诱导的TNF-α的释放。与载体治疗(13950±486pg/ml)相比较，在5.0mg/kg剂量水平两种化合物都使TNF-α的血清水平降低了～60％(参见表V)。在0.1mg/kg剂量水平化合物2获得了最大的抗炎效果(参见表V)。

表V

开始注射LPS120分钟后测量TNF-α血清水平。所有的基团中N＝6。

	0.1mg/kg	1.0mg/kg	5.0mg/kg
				化合物1	10830±4031	6230±1786	5800±703
化合物2	5964±957	6130±601	8380±2694
				化合物3	10310±2728	5250±1113	5020±862

如同开始注射LPS 120分钟后由TNF-α血清水平所评价的那样，三个化合物都降低了LPS诱导的IL10的释放。对化合物no.2和化合物no.1，在5.0mg/kg剂量水平获得了最大的效果，其中与载体治疗(7402±1739pg/ml)相比较，所述化合物使IL10的血清水平降低了约46和25％(参见表VI)。在1.0mg/kg的剂量水平化合物no.3获得了最大的抗炎效果，其中与载体治疗相比，所述化合物使IL10的反应降低了约55％(参见表VI)。

表VI

开始注射LPS 120分钟后测量IL10的血清水平。所有的基团中N＝6。

	0.1mg/kg	1.0mg/kg	5.0mg/kg
				化合物no.1	8485±960	5978±890	5651±325
化合物no.2	7606±1313	4770±1387	4053±894
				化合物no.3	5658±1119	3452±1091	3856±973

实施例5

人类白细胞体外抑制LPS诱导的TNF-α生成

将20mL人血收集在含EDTA的真空管中。如安玛希亚(Amersham)公司指南71-7167-00AD，2002-06中所记载的那样利用Ficoll-Paque Plus试剂分离PBMC。用台盼蓝(Tryphan Blue)溶液(西格玛公司)计算PBMC，并在RPMI 1640中培养，(Applichem公司)，加入10mM Hepes(西格玛公司)、2mML-谷酰胺(西格玛公司)、0.1％BSA(西格玛公司)和50U/50μg/mL浓度为5×10⁵细胞/mL的青霉素/链霉素(西格玛公司)。将分离的PBMC在湿润的5％CO₂、95％大气环境和37℃的温度下在装有培养基、10ng LPS/mL(西格玛公司)和试验化合物的24孔板(Corning公司)中培养。18小时后将样品离心分离，使用来自Human Biotrak ELISA系统(安玛希亚公司)的肿瘤坏死因子α[(h)TNF-α]测量上层清液中的TNF-α。

每个供体如下培养所述样品。

在RPMI中的PBMC样品(时间对照)

含有10ng LPS/mL的PBMC样品(载体)

含10ng LPS/mL、10^-17M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

含10ng LPS/mL、10^-15M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

含10ng LPS/mL、10^-13M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

含10ng LPS/mL、10^-11M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

含10ng LPS/mL、10^-9M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

含10ng LPS/mL、10^-7M参考化合物或试验化合物的PBMC样品

将所有的样品从原料溶液稀释到1.4×10^-4M到1.8×10^-3M之间。将所有的溶液在涂有BSA的管形瓶中处理以防止化合物与管形瓶的表明相结合。

数据以平均数±SE来表示。试验化合物对LPS诱导TNF-α释放的效果用在LPS-载体组中聚积的TNF-α的百分比来表示。所有的比较都是根据不成对t检验来分析的。考虑在(p)0.05的概率水平的显著差异。

实施例6

在大鼠注入LPS后嗜中性白细胞和嗜曙红细胞渗透的抑制率

使用来自丹麦M&B A/S，DK-8680Ry的Sprague-Dawley雄性大鼠(重约200g)。将大鼠关进标准笼型号3的笼子中，放在温度(22-24℃)和湿度(40-70％)受控制的具有12小时光暗周期(从上午6点到下午6点开灯)的房间内。饲料是经蒸气灭菌过的饲料Altromin 1324专门配方，由丹麦Altromin公司，Chr Pedersen A/S，4100 Ringsted生产。饲料和水不限量供应。

经驯化后的大鼠随机地分配到实验组中，并在LPS诱导开始时用试验化合物静脉给药，LPS诱导之后8小时再给药一次。

将3组中的大鼠每100g用0.1ml芬太尼(hypnorm)/多美康(dormicum)麻醉，并用试验化合物静脉给药。给药之后立即将它们放到容器中，使它们经受雾化的LPS溶液处理。LPS的浓度为1mg/ml。给药时间为15分钟。用试验物质给药24小时后将大鼠安乐死。临终前大鼠用CO₂/O₂安乐死。

利用灌洗仪器用6×2.5ml PBS进行支气管肺泡灌洗。除去胸骨和肋后灌洗保留在胸腔内的肺。在此过程中将左肺接线打结。在4℃将支气管肺泡灌洗液(BALF)以1000rpm离心10分钟。除去上层清液后，将细胞小球悬浮在0.5mlPBS中，计算细胞总数。将每个大鼠用May-Gruwald Giemsa染色剂染色的BALF制作两个涂片。统计每个大鼠的BALF的总细胞数并对白细胞分类计数。

实验组：

除注入LPS之外，所有大鼠进行弹丸式注射：

载体(0.5mL等渗盐水)；

参考化合物：例如参考化合物no.1(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg/kg/bw)和/或参考化合物no.2(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg/kg/bw)和/或参考化合物No.3(0.1，0,2，1.0或5.0mg/kg/bw)和/或α-MSH(例如0.1，0,2，1.0或5.0mg/kg/bw)。最后一次没有注入LPS的对照组用载体处理。

统计

数据以平均数±S.E.来表示。通过单向分析后的Fishers最小显著差检验，进行组之间的比较。考虑在0.05级的显著差异。

实施例7

猪体内LPS诱导的细胞因子释放和肺部高血压的抑制率

使雌性长白猪(Landrace pig)(～30kg)整夜禁食，但允许自由摄取水。然后对猪进行肌内氯胺酮(10mg/kg)和咪达唑仑(0.25mg/kg)术前用药。用静脉内氯胺酮(5mg/kg)进行麻醉。将猪进行口部插管，用持续静脉输入芬太奴(fentanyl)(60μg/kg/h)和咪达唑仑(midazolam)(6mg/kg/h)保持麻醉。将动物用受体积控制的具有5cm H₂O的呼气末正压的通气机(Servo 900通气机；Siemens Elema公司，索尔纳，瑞典)通气。潮气量保持在10-15ml/kg，调节呼吸速率(20-25气息/分钟)以保持血碳酸正常(动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)在34-45mmHg范围)。用大气氧进行通气，其中预计合计达到动脉氧压力(PaO₂)高于105mmHg。将一个动脉和2静脉鞘放入用于颈动脉和对应静脉内用于输注，通过充液导管进行血压测量，插入导管采血。

将Swan-Ganz导管(Edwards Lifescience公司，Irvine，CA)由右腔上静脉插入肺动脉。通过观察在监视器上的压力跟踪指数以及X-射线决定末端带气囊导管的位置，按照这样由心脏正面进入肺动脉。将另一个导管(5French；St.Jude医药公司，圣保罗，明尼苏达州(MN))插入左颈动脉用于连续血压监视和采血。插入尿导管进行尿液收集。当评价心脏性能时，将临时协调导管经静脉鞘插入到右心房(X-射线引导)以标准校验心率。

血流动力学监控

连续观察动脉血压、心率(由心电图)和肺动脉压力(PAP)。

脂多糖输灌

在进行各实验前将大肠杆菌脂多糖内毒素(E coli_026：6，Bacto脂多糖；Difco实验室，底特律，密歇根州(MI))在盐水中溶解120分钟以使所有沉淀溶解。经过稳定期后，开始在基线时以2.5μg/kg/h的速度注入脂多糖，在30分钟内逐渐增加到15μg/kg/h。此后，在150分钟内保持2.5μg/kg/h的速度，随后停止。

干预组：在开始输注LPS之前，立即对对照组输入与干预组等同体积的载体。以单独静脉内弹丸式注射的方式给干预组输入一定剂量的参考化合物(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg/kg)或试验化合物(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg/kg)。

细胞因子

通过使用市售的酶联免疫吸附测定仪，根据厂家的指导，将从EDTA稳定的血中获得的新鲜冰冻血浆样品(-80℃)用于测量TNF-α。

统计

数据以平均数±S.E.来表示。通过单向分析后的Fishers最小显著差异检验，进行组之间的比较。考虑在0.05级的显著差异。

下面两个实施例描述了暂时局部缺血模型。由于降低/完全阻止动脉血供给而导致的局部缺血导致了多种组织反应，包括嗜中性白细胞聚集，其它炎性反应和细胞坏死。确认这些化合物能防止或阻止(完全或部分)许多由于局部缺血/炎症而导致的细胞/组织/器官损伤或损坏发生，是极其有益的。本发明人使用了两个暂时性局部缺血的模型：1)大鼠中心肌缺血再灌注模型，其中模拟急性心肌梗塞的发展，随后如通过纤维蛋白溶解疗法或者冠状血管成形术所实现的那样恢复血液供给(实施例8)；和2)两边肾动脉闭塞，其导致了急性肾衰竭(ARF)，与如在经过大外科手术(可以是由于腹主动脉动脉瘤导致的外科手术)的患者中所看到的由在肾血液供应中暂时性减少导致的AFR相比较(实施例9)。

实施例8

由大鼠冠状动脉左前降支阻塞60分钟导致的心肌梗塞面积的抑制率

从德国汉诺威Charles River获得障碍繁殖(Barrier-bred)的无特定病原体的雌性Wistar大鼠(250g)。将动物放在温度(22-24℃)和湿度(40-70％)受控制的具有12小时光暗周期(从上午6点到下午6点开灯)的房间内。所有的动物可自由摄取自来水和颗粒状的含有大约140mmol/kg钠、275mmol/kg钾和23％蛋白质的鼠料(Altromin分类第1310项，Altromin国际标准，Lage，德国)。用不变形的医学级Tygon导管从大鼠股静脉和动脉植入下腔静脉和腹主动脉。一周后，将大鼠在药物气熏室内用在O₂中含4％的异氟烷麻醉。插入气管内导管后，利用Hugo Basile Rodent通气机用在O₂中含1.0％的异氟烷使动物通气。潮气量为8-10ml/kg b.w.并且呼吸速率为75min^-1，维持动脉的pH值在7.35和7.45之间。在手术期间，将动物置于加热台上以使体温保持在37-38℃。使用Hugo Sachs ECG Coupler测量标准ECG(二导，second lead)并在powerlab系统中以4,000Hz在线记录。在胸骨旁开胸术打开心包膜后，通过视觉上定位冠状动脉(LAD)左前降支心包。将防止损伤的能缝合的6-0结扎丝线沿着LAD置入肺动脉干和左耳右下端之间，其允许结扎线再打开。10分钟后左前降支冠状动脉(LAD)阻塞。通过在ECG中的变化(ST分裂高度和R-波振幅增加)和图中的下降证实了成功阻塞。60分钟后打开闭合进行再灌注。对照大鼠实施假手术(sham-operated)。

对大鼠进行下面的静脉处理：

载体：0.5ml 150mM NaCl。

参考化合物：例如参考化合物no.1，参考化合物no.2或参考化合物no.3(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg/kg b.w.)或例如在0.5ml 150mM NaCl中的α-MSH(例如0.1，0.2，1.0或5.0mg α-促黑激素/kg b.w.)。

试验化合物：例如在0.5ml 150mM NaCl中的0.1，0.2，1.0或5mg试验化合物/kg b.w.。

在再灌注之前5分钟进行处理。

测量局部缺血和坏死心肌层的面积

在再灌注3小时后进行LAD局部缺血/再灌注和再封闭之后，使大鼠保持麻醉。在这期间，继续测量ECG和MAP。然后静脉输入埃文斯蓝(Evans Blue)染料(1ml；2％w/v)以测量局部缺血区域面积。除去心脏并切入水平分层以测量局部缺血区域的面积并从心肌非缺血区(nonischemic myocardium)中分离出局部缺血的心肌层。分离局部缺血区域并37℃下在0.5％三苯基四唑化氯溶液中培育10分钟。然后通过使用计算机化显像程序测量坏死组织的面积。手术后用丁丙诺啡处理动物的其它组织，并放回笼子用于在两周后测量左心室舒张末期压(LVEDP)，以便评价关于充血性心力衰竭发展方面的药学治疗效果。使用经右颈动脉插入左心室的2F微化探头导管测量LVEDP。调节异氟烷的浓度从而稳定平均动脉压(MAP)在85-90mmHg。

统计

数据以平均数±S.E.来表示。组之间的比较是根据Student成对t检验来分析的。通过单向分析接着进行Fishers最小显著差异测试进行组之间的比较。考虑在0.05级的显著差异。

实施例9

肾动脉双边阻塞40分钟导致大鼠肾衰竭的抑制率

从德国汉诺威Charles River获得障碍繁殖(Barrier-bred)的无特定病原体的雌性Wistar大鼠(250g)。将动物放在温度(22-24℃)和和湿度(40-70％)受控制的具有12小时光暗周期(从上午6点到下午6点开灯)的房间内。所有的动物可自由摄取自来水和颗粒状的含有大约140mmol/kg钠、275mmol/kg钾和23％蛋白质的鼠料(Altromin分类第1310项，Altromin国际标准，Lage，德国)。将降预先已经用慢性静脉导管仪表化的大鼠放入代谢笼内，经过两天的代谢笼驯化期后，通过阻塞两边的肾动脉60分钟引发试验性ARF。在手术期间，用异氟烷-氧化亚氮麻醉大鼠，并降其放置在体温保持在37℃的热工作台上。沿着侧面切开露出两个肾，通过切除肾周脂肪使其移出，然后将肾动脉的小部分逐渐从静脉中解剖出。用圆滑的平面的脉管夹(60g压力；英国世界精密仪器公司)封闭肾动脉40分钟。通过观察肾表面完全发白来确认总体局部缺血。在局部缺血期，暂时闭合伤口以维持体温。移开夹子后，再观察肾2-5分钟以确保变色，这表示血液流回。用3-0结扎丝线缝合伤口。将大鼠放回代谢笼，测量每天24小时尿量和饮水量5天。作为对照组，将大鼠与那些用来ARF的肾动脉没有阻塞的大鼠一样进行假手术。平行监视进行假手术的大鼠和ARF的大鼠。

对大鼠进行下面的静脉治疗：

载体：0.5ml 150mM NaCl。

试验化合物：例如在0.5ml 150mM NaCl中的0.1，0.2，1.0或5mg试验化合物/kg b.w.。在肾再灌注之前5分钟进行治疗，接着在6小时和24小时后。

统计

数据以平均数±S.E.来表示。组之间的比较是根据成对t检验来分析的。通过单向分析接着进行Fisher最小显著差异测试进行组之间的比较。考虑在0.05级的显著差异。

此外，给出了对顺铂诱导肾衰竭模型的实施例(实施例10)。肾中毒是顺铂治疗众所周知的副作用。然而控制肾毒性的非必要剂量仍然使多数患者受影响，在治疗期间观察到的肾小球过滤率显著缩小。顺铂的肾毒性可看作骨髓外部肾元上细胞毒素损伤的指示，特别是在近端小管S3节中和髓襻(loop ofHenle)厚升支中。因此顺铂治疗经常导致管状再吸收不足，包括消弱了稀释尿液的能力。在大约50％的用顺铂治疗的患者中观察到低镁症，这大概是由于在肾中镁(Mg)再吸收不足。最近的研究建议，在防止环孢菌素A肾中毒作用方面补充Mg是关键因素，近来有建议认为在Mg损失和顺铂导致肾中毒之间存在着潜在的联系。为防止低镁症而进行的治疗会具有有益的效果，这不仅出于减少补充Mg的需要，而且也为了减少顺铂的肾毒性。

实施例10

顺铂(cisplatin)诱导肾衰竭的抑制率

将预先已经安装慢性静脉导管的大鼠放入代谢笼内，经过一段时间代谢笼驯化后，腹膜内注射在0.5ml 150mM NaCl或载体(0.5ml 150mM NaCl)中的5.0mg/kg bw顺铂。5天后将大鼠放回代谢笼，测量每天24小时尿量和饮水量，并收集下一个5天的。然后将所有的大鼠在卤烷(halothan)/N₂O中麻醉，在预冷却的涂有EDTA的管形瓶中收集动脉血样。在装有0.5mM EDTA、pH 7.4和20×10⁶IU/ml抑肽酶的预冷却试管中收集血样。在4℃离心后，将血浆样品转移到预冷的试管中并在-20℃下储藏以用于后面肌酸酐和镁(Mg)的测量。除此之外，肌酸酐也可在最后24小时期间在血样采集之前采集的尿液中测量。用作肾小球过滤率(GFR)指标的肌酸酐廓清率(C_cr)可如下式中计算：C_cr＝V_u×U_cr/P_cr，其中V_u是24小时产生的尿液；U_cr是尿液中肌酸酐的浓度，P_cr是血浆中肌酸酐的浓度。利用临床化学系统VITROS 950(Ortho-ClinicalDiagnostics公司，强生(Johnson & Johnson)，新泽西(NJ))和Roche HitachiModular(罗氏诊断(Roche Diagnostics)公司，曼海姆，德国)来测量尿液和血浆中的肌酸酐。

使大鼠进行下面的静脉处理：

载体：0.5ml 150mM NaCl。

试验化合物：例如在0.5ml 150mM NaCl中的0.1，0.2，1.0或5mg试验化合物/kg b.w.。在肾再灌注之前5分钟进行处理，接着在6小时和24小时后。

统计

数据以平均数±S.E.来表示。组之间的比较是根据Student成对t检验来分析的。通过单向分析接着进行Fisher最小显著差异测试进行组之间的比较。考虑在0.05级的显著差异。

下列模型用于测试本发明化合物对关节炎的治疗效果。

实施例11

使用约150g的Lewis鼠(n＝10/组)。在0天通过在尾根的胶原皮(胶原类型II/IFA)内注射敏化。在11、14、16、18和21天评价足部。

终点(END POINTS)：

-足肿胀

-临床关节点(CLINICAL JOINT SCORE)

-体重

通过灌胃每天用化合物一次进行预防性给药(组b)或治疗性给药(组c)。

评价组是：

a)载体处理0天

b)预防性处理0天

c)治疗性处理0天

使用20％PEG200、40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)、25％拉布拉索(Labrasol)或30％羟丙基-α-环糊精作为载体，基于前期研究表明所述配方具有可很好地耐受性并且与大鼠中明显血浆暴露有关。

收集血样和制备血浆

用药第3天24小时后，第4天： 0.25ml血样；

用药第20天24小时后，第21天： 0.25ml血样；

用药第21天5小时后，第21天： 0.25ml血样；

将样品在-80℃中储藏直到测量细胞因子。

测量血浆中TNF-α

用ELISA(Biotrak，安玛希亚公司，英国)。

统计分析

结果以平均数±SE来体现。使用重复测量双向方差分析来测试组之间的差异。在P＜0.05的情况下，通过具有有效指标Bonferroni校正的不成对t检验来评价在相应时期之间的差异。

实施例12

研究目的

目标：

-测量用本发明化合物治疗至多32天后，对选择性繁殖的雄性Sprague-Dawley鼠和/或纯合子Zucker鼠在摄入食物、摄入水和体重方面的影响，其中所述鼠由饮食导致肥胖症(DIO)的可能性有增加的迹象。

-通过标准口服葡萄糖测试，测定用本发明化合物重复治疗是否改变葡萄糖处理和胰岛素抵抗力。

-测定用本发明化合物重复治疗是否改变在DIO和/Huo纯合子Zucker鼠中的身体构成。

-测定用本发明化合物重复治疗是否影响脂肪组织的炎症，如评价渗透巨噬细胞平均数目那样来评价。

除此之外，研究对象在于样品基线和研究血样的终点用于分析胰岛素和其它相应生化标志。

实验方案

动物

实验使用DIO和/或纯合子Zucker鼠。对DIO鼠，当动物长到22周并已经喂养高脂肪饮食3周到22周时开始进行实验(HF-饮食：高脂肪饮食(4.41千卡/g-能量％；碳水化合物51.4千卡％，脂肪31.8千卡％，蛋白质16..8千卡％；食谱#12266B；Research Diets，新泽西，美国)。

对纯合子Zucker鼠，在大鼠长到8周大时开始实验。

在受控制的低温条件下分别将大鼠放置在正常的光周期下。

随机分配和给药

所有动物根据体重随机分配参加下面的药物治疗组(n＝10)。

载体组：

通过口服、静脉或者皮下对大鼠进行每日一次或每日两次载体给药，其中通常载体的组成如下：20％PEG200，40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)，25％拉布拉索(Labrasol)或者30％羟丙基-β-环糊精。

治疗组：通过口服、静脉或者皮下对大鼠进行每日一次或者每日两次本发明化合物给药，其中每次剂量水平最高50mg/kg。

所有化合物在熄灯之前3小时给药直到32天。

对所有组，实验先直接进行假喂养训练3天以使动物习惯该程序。

在第3天根据体重将动物随机分配至6个治疗组。

化合物和给药

每周将本发明化合物(例如化合物no.1和化合物no.2)在载体(20％PEG200，40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)，25％Labrasol或者30％羟基丙基-β-环糊精)中溶解并经口灌服、静脉注射或皮下注射(体积最多到5ml/kg)每天给药一次或两次。

载体(20％PEG200，40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)，25％拉布拉索(Labrasol)或者30％羟丙基-β-环糊精)每周制备，并经口灌服、静脉注射或皮下注射(体积最多到5ml/kg)每天给药一次或两次。

实验方案

从第3天给药开始到实验结束，每天或每两周记录24小时食物和水的摄取量以及体重。

采集初期和末期血样用于测量葡萄糖、胆固醇、胰岛素、三酸甘油酯和游离脂肪酸。

口服葡萄糖耐量试验或者在治疗之前和两周治疗之后成对进行，或者仅在治疗至四周后进行一次。进行在结束时的身体组成和随后渗透巨噬细胞的组织结构/定量评价直至研究阶段结束(参见下面过程)。

口服葡萄糖耐量试验(OGTT)

将大鼠禁食正常摄入量的50％，即假如黑暗期从下午5点开始，在前一天中午12点提供50％的正常食品供应。在OGTT之前每天在常规时间点用化合物对动物PO给药。随后在上午8点对动物进行口服葡萄糖负载(oral glucoseload)2g/kg葡萄糖(葡萄糖500mg/ml)。口服葡萄糖后在时间点-15、0、15、30、60、120、180和240分钟将静脉血样采集在肝素化管内，用以测量葡萄糖和胰岛素。由连接到注射器的胃管进行口服葡萄糖负载(oral glucoseload)以确保精确用药。OGTT后，再给动物喂食和用相应化合物给药。

采集血样和血浆测量

在第3天开始给药前和研究结束时采集初期和结束时的血样(处理过的血浆大约0.4ml)。采样前使动物禁食正常摄入量的50％。在前一天中午12点提供食物。将血收集在标准Vacutainer肝素化管中，用于测量葡萄糖、胆固醇、三酸甘油酯和EDTA vacutainer，其中含1％NaF用于测量自由脂肪酸。用标准酶活性测定试剂盒(enzyme assay kits)测量开始/结束时的试样，所述试样是在OGTT期间采集用于分析血浆葡萄糖、三酸甘油酯和胆固醇。使用基于光敏ELISA分析的装置对每一取值点重复测量血浆胰岛素。使用Vako NEFA C试剂盒分析为测量FFA的血浆。

结束

处死之后，在研究结束时除去身体白色脂肪组织室并称重。储存脂肪分析包括隔膜(mesenterial)、腹膜(retroperitoneal)、附睾(epididymal)、皮下腹股沟白脂肪。最终将脂肪室(Fat compartments)保持在4％福尔马林缓冲多聚甲醛(PFA)中用于随后分析组织炎症。

数据、报告和统计评价

在确定了统计显著性的情况下，结合恰当的事后分析，在载体和治疗组之间利用单向方差分析(ANOVA)进行数据统计评价(p＜0.05；Fishers)。

实施例13

本发明化合物在大鼠静脉给药和口服给药的血浆动力学

根据对Sprague Dawley鼠以10mg/kg的剂量水平给药，该研究测定了本发明化合物化合物1(参见附图1结构no.1)、本发明化合物化合物2(参见附图1结构no.19)和本发明化合物3(参见附图1结构no.53)静脉内药物动力学和口服生物利用度。

对3只一组的6组大鼠以10mg/kg的剂量水平仅进行静脉内或仅口服化合物1、2或3给药。给药后获取各个时间点的血样。使用适当的LC-MS/MS方法对血浆样品进行未改变的试验项分析。根据各自血浆浓度评价药学动力学参数。

通过静脉内或口服给药，本发明化合物1、2或3注意到没有副作用。

静脉给药本发明化合物1后，平均血浆浓度慢慢下降，具有平均表观末端半衰期5.70小时。本发明化合物1的全身清除率(Systemic clearance)中等，容积分布超过了体内水分的总量，这表明广泛分布到组织。

口服本发明化合物1后，给药8小后观察到最大血浆浓度。此后平均血浆浓度慢慢衰退，具有表观末端半衰期4.61小时。化合物1的平均独立口服生物利用度为34.8％。

静脉内给药本发明化合物3后，平均血浆浓度快速下降，具有平均表观末端半衰期3.14h。

本发明化合物3的全身清除率(Systemic clearance)较高，容积分布超过了体内水分的总量，这表明广泛分布到组织。

口服本发明化合物3，给药4小后观察到最大血浆浓度。此后平均血浆浓度快速衰退，具有表观末端半衰期3.30小时。本发明化合物3的平均独立口服生物利用度为20.6％。

静脉内给药本发明化合物2后，平均血浆浓度快速下降，具有平均表观末端半衰期3.25小时。本发明化合物2的全身清除率(Systemic clearance)较高，容积分布超过了体内水分的总量，这表明广泛分布到组织。

口服本发明化合物2，给药2.5小后观察到最大血浆浓度。此后平均血浆浓度快速衰退，具有表观末端半衰期2.25小时。本发明化合物2的平均独立口服生物利用度为3.20％。

分析方法

使用适当的LC-MS/MS分析使用本发明化合物1、2或3的血浆样品。

动物和饲养

由Charles River(UK)公司获得十八只8-9周大的雄性Sprague Dawley鼠。

在用于研究之前将这些动物放在实验单元内至少5天。

在处理前的监禁期间，将动物成倍地关在Home Office允许的聚丙烯和不锈钢笼子内。在研究期间，将动物单独地关在具有升高的铁丝网层的聚丙烯和不锈钢笼子内。

这些动物可不限量获取标准的实验室配食(SDS，Rat and MouseMaintenance Diet(大鼠和小鼠饲养饮食)No.1，Special Diet Services(特定饮食提供)，Witham，UK)和自来水，每天监控室温和湿度。

至少每天监控这些动物的外形和行为以评价对治疗的任何反应。

配制药剂和给药

阶段1和4：用于静脉和口服给药的化合物1制剂

将化合物1(27.15mg)溶入适当体积的聚乙二醇200(2.7mL)。然后加入适当体积的无菌水(10.8mL)以获得2mg/mL的目标浓度(最终制剂的重量：13.4931g)。

阶段2和5：用于静脉和口服给药的化合物3制剂

将化合物3(27.83mg)溶入适当体积的聚乙二醇200(2.8mL)中。然后加入适当体积的无菌水(11.2mL)以获得2mg/mL的目标浓度(最终制剂的重量：13.81604g)。

状态3和6：用于静脉和口服给药的化合物2制剂

将化合物2(27.69mg)溶入适当体积的聚乙二醇200(2.8mL)中。然后加入适当体积的无菌水(11.2mL)以获得2mg/mL的目标浓度(最终制剂的重量：13.72737g)。

每种制剂用0.22μm过滤装置(Millipore)过滤。

对18只雄性大鼠各自以10mg/kg的剂量水平进行仅静脉内或仅口服化合物1、2或3给药。所述制剂对每只动物经胃灌服口服给药和对每只动物由尾部静脉静脉内给药。以5mL/kg的剂量体积进行药剂给药。根据下面表格中的详细描述对每只动物进行制剂给药。

根据当天给药的每只动物的体重来计算给药的剂量体积。记录要给药的动物的重量。

在附录2中给出了每只动物给药的确切剂量。

手术过程

动物用单独的体内股动脉导管(indwelling femoral cannula)进行外科制备。导管经皮下截断并形象地通过尾部腹表面。导管由盖住出口位置的金属尾部封套和弹簧组来保护。将动物放回单独关闭的笼子内，每个导管的活动端与笼子固定的旋转接头相接触。

作为术前用药以5mg/kg的剂量通过皮下途径用卡洛芬(Carprofen)(Zenecarp^TM，C-Vet VP，50mg/mL)对动物给药，并且在大约24小时后进行手术。

在满意的临床检查和体重增加的形态的基础上，至少五天的恢复期过后动物才被许可进入研究。

采血

从各个动物的股静脉中插入含有作为抗凝血剂的锂肝素的导管抽取血样(大约0.3mL)。

静脉内给药

在给药后，在下列时间点从3只大鼠中采集血样：

给药3，6，15，45分钟和1.5，2.5，4，6，8，24小时后。

口服给药

在给药后，在下列时间点从3只大鼠中采集血样：

给药5，15，45分钟和1.5，2.5，4，6，8，24小时后。

血样处理

一旦有可能就将血样在大约1200g大约4℃下离心10分钟。分析试验项浓度前将血浆样品大约-20℃下冷藏保存。

血浆样品分析

制备校准标准

将化合物1、2和3在5mM乙酸铵中稀释。当掺入对照血浆中时得到血浆浓度范围大约在1-5000ng/mL的溶液等分。

内标

将[1-(4-氯苯基)-1H-吡咯-2-yl-甲叉基氨基]胍乙酸盐用作化合物1、2和3的内标(IS)。将内标溶解在5mM乙酸铵中，并以血浆浓度大约100ng/mL加入。

样品制备和分析

对每一批次，制备化合物1、2和3浓度范围在1-15000ng/mL的标准品和重复质控样(replicate quality control sample)。

将药剂溶液用5mM乙酸铵稀释得到浓度大约为100ng/mL的目标血浆。一旦稀释，如质控样那样制备药剂溶液。

每一批次与新制备的空白样一起制备、萃取和分析这些标准、质量控制和试验样品。

试样测量浓度低于最低校准标准记为＜LLOQ。

主要分析设备

质谱仪(API4000)，应用生物系统公司(Applied Biosystems)

微HPLC泵&真空脱气设备(Series 200)，铂金-埃尔默公司(Perkin Elmer)

自动取样器(HTS Pal)，CTC分析仪器公司(CTC Analytics)

数据处理系统(Analyst Version 1.4)，应用生物系统公司

实验室信息管理系统，Watson 7.0，美国热电公司(Thermo Electron.)

分析柱：Synergi Fusion，20×2.0mm ID.2um.菲罗门公司(Phenomenex.)

保护柱：Guard column：KrudKatcher，0.5μm，菲罗门公司

主要质谱仪参数：

电离方式：涡轮离子喷射(TurboIonSpray)

Q1离解：单元

Q3离解：单元

离子监视：

化合物	Q1(M/Z)	Q3(M/Z)	极性	保留时间(ms)
					化合物1	288.4	228.9	正	75
化合物3	332.3	272.9	正	75
					化合物2	299.5	193.2	正	75
内标	262.2	202.9	正	75

主要色谱参数

流动相A：100％丙腈

流动相B：10mM乙酸铵+0.1％甲酸

时间(分钟)	％A
		0.0	15
0.6	15
		1.2	95
1.9	95
		2.0	15
2.5	15

验收标准

所述方法确定的验收标准是：包括的校准样品的75％必须反算到它们实际浓度的30％之内，且QC样品的试验准确度和精密度必须分别在100±30％且≤30％之内。

样品分析的验收标准是：包括的校准样品的75％必须反算到它们实际浓度的30％之内，且至少66％的QC样品必须在它们实际浓度的30％之内。

药物动力学分析

使用WinNonLin Pro version 5.0.1(Pharsight 2005)通过不分区分析化合物1、2和3的药物动力学。下列参数来自适当的相对于时间的各血浆浓度：

C₀ 由时间零点时2个初始浓度反推估算的理论浓度

C_max 最大观察浓度

T_max 出现C_max的时间

AUC_0-t 在浓度与时间的曲线下的从时间零点(通过线性梯度规则计算的)到最后测量样品浓度的时间的面积

AUC_0-∞ 在浓度与时间曲线下的从时间零点到无限时间的面积，由AUC_0-t+Clast/λz来计算

λz 表观终点(apparent terminal)的速率常数

t_1/2 表观终点的半衰期，由2/λz计算

CL 系统清除率，由剂量/AUC来计算

Vss 稳态分布的表观容积，由(AUMC/AUC)×CL计算，其中AUMC是在第一阶矩曲线(moment curve)下的面积

MRT 平均保留时间，由AUMC/AUC_0-∞计算

MAT 平均吸收时间，由MRT(口服)-MRT(静脉内)计算

F％绝对口服生物利用度，基于来自口服和静脉内给药后的平均值，由计算[AUC_0-t(口服)×剂量(静脉内)/AUC_0-t(静脉内)×剂量(口服)]×100

考虑给出λz和相应的t_1/2的估算值。要求在终点阶段内给出两个或更多的点用于估算λz和t_1/2。下面列出了其它的变量用于帮助确认可能不可靠的t_1/2和AUC的估算值：

#pts 在计算λ中使用的数据点的数目

λz下限 λz计算内所包括的值基于时间的下限

λz上限 λz计算内所包括的值基于时间的上限

λz周期由(λz上限-λz下限)/t_1/2来计算。如果值＜2，则表示λz和相应的t_1/2的估算值不可行(Purves 1992)。

％AUCextrap AUC0-∞的百分比，它是由从Clast到无限外延导致的。药动学参数用几何平均数报告，除非Tmax如中位数报告。几何偏离系数(coefficient ofvariation)如下式计算：

\sqrt{\exp ({SD}_{\ln}^{2}) - 1} * 100,

其中SD_In是自然对数转换数据的标准偏差。

将实际采样时间用于全部的药物动力学参数的计算。在表7中概括了血样的时间偏差。将低于定量极限的血浆浓度作为药物动力学分析的零点。

数值以小于或等于1000的数的三位有效数字和大于1000的最近的整数来表示。

结果

剂量给药

安全地进行剂量给药，对任何动物不出现副作用。在附录2中给出了动物体重和剂量给药信息。

生物分析

每一批次与新制备的空白样、校准标准和质量控制样品一起制备、萃取和分析这些研究的血浆样品。

在附录1中给出了符合验收标准的化合物1、2和3的校准数据和质量控制样品，以及结果。

确认由于转移导致化合物1质量控制批次失败，但这在分析样品之前进行。除验收标准之外，要控制高质量的总准确度和偏差，除非各个批次符合各个验收标准。

研究样品测量浓度低于最低校准标准记为＜LLOQ。

静脉内给药本发明化合物1后的药物动力学

表VII中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一静脉内给药的本发明化合物1在血浆中的浓度，并表示在附图5中。表XIII中显示了药物动力学参数估算值。

静脉内给药后，在给药3分钟时可观察到本发明化合物1在血浆中的最高平均浓度，平均值为2247ng/mL。此后本发明化合物1的平均血浆浓度衰退，平均表观终点半衰期为5.70小时。

平均起来，本发明化合物1在雄性大鼠血浆中的系统血浆清除率(CL)为2709mL/h/kg，其大约为大鼠中肝血流量的82％(3312mL/h/kg，Davies1993)。本发明化合物1在雄性大鼠中分布的平均表观容积为17521mL/kg，其明显大于在大鼠中体内水分总量(668mL/kg，Davies 2003)。较大的分布容积表明本发明化合物1广泛地分散到组织。

在雄性大鼠体系出现的动物之间对本发明化合物1的可变性较低(AUC_0-t的偏离系数(CV)低于20％)。

静脉内给药本发明化合物3后的药物动力学

表VIII中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一静脉内给药的本发明化合物3在血浆中的浓度，并表示在附图6中。表XIV中显示了药物动力学参数估算值。

静脉内给药后，在给药3分钟时可观察到本发明化合物3在血浆中的最高平均浓度，平均值为3170ng/mL。此后本发明化合物3的平均血浆浓度衰退，平均表观终点半衰期为3.14小时。

平均起来，本发明化合物3在雄性鼠血浆中的系统血浆清除率(CL)为4194mL/h/kg，其大于大鼠中的肝血流量(3312mL/h/kg，Davies 1993)。本发明化合物3在雄性鼠中分布的平均表观容积为13361mL/kg，其明显大于在大鼠中体内水分总量(668mL/kg，Davies 2003)。较大的分布容积表明本发明化合物3广泛地分散到组织。

在雄性鼠体系出现的动物之间对本发明化合物3的可变性较低(AUC_0-t的偏离系数(CV)低于30％)。

静脉内给药本发明化合物2后的药物动力学

表IX中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一静脉内给药的本发明化合物2在血浆中的浓度，并表示在附图7中。表XV中显示了药物动力学参数估算值。

静脉内给药后，在给药3分钟时可观察到本发明化合物2在血浆中的最高平均浓度，平均值为2353ng/mL。此后本发明化合物2的平均血浆浓度衰退，平均表观终点半衰期为3.25小时。

平均起来，本发明化合物2在雄性鼠血浆中的系统血浆清除率(CL)为5075mL/h/kg，其大于大鼠中的肝血流量(3312mL/h/kg，Davies 1993)。本发明化合物2在雄性鼠中分布的平均表观容积为18504mL/kg，其明显大于在大鼠中体内水分总量(668mL/kg，Davies 2003)。较大的分布容积表明本发明化合物2广泛地分散到组织。

在雄性鼠体系出现的动物之间对本发明化合物2的可变性较低(AUC0-t的偏离系数(CV)低于30％)。

口服给药本发明化合物1后的药物动力学

表X中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一口服给药的本发明化合物1在血浆中的浓度，并表示在附图8中。表XVI中显示了药物动力学参数估算值。

本发明化合物1以10mg/kg的目标剂量口服给药后，在用药8小时(tmax)观察到了本发明化合物1最大的血浆浓度，平均值为92.9ng/mL。此后本发明化合物1的平均血浆浓度衰退，表观终点半衰期为4.61h。平均吸收时间(MAT)为2.10小时，这表明本发明化合物1的吸收此时基本上完全。

本发明化合物1在雄性大鼠中的平均绝对口服生物利用度为34.8％。

口服给药本发明化合物3后的药物动力学

表XI中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一口服给药的本发明化合物3在血浆中的浓度，并表示在附图9中。表XVII中显示了药物动力学参数估算值。

本发明化合物3以10mg/kg的目标剂量口服给药后，在用药4小时(t_max)观察到本发明化合物3最大的血浆浓度，平均值为92.5ng/mL。此后本发明化合物3的平均血浆浓度衰退，表观终点半衰期为3.30小时h。在雄性鼠中的平均吸收时间(MAT)为3.52小时h，这表明本发明化合物3的吸收此时基本上完全。

本发明化合物3在雄性鼠中的平均绝对口服生物利用度为20.6％。

口服给药本发明化合物2后的药物动力学

表XII中显示了以10mg/kg的剂量水平进行单一口服给药的本发明化合物2在血浆中的浓度，并表示在附图10中。表XVIII中显示了药物动力学参数估算值。

本发明化合物2以10mg/kg的目标剂量口服给药后，在用药2.5小时(t_max)观察到了本发明化合物2最大的血浆浓度，平均值为17.1ng/mL。此后本发明化合物2的平均血浆浓度衰退，表观终点半衰期为2.25小时。

本发明化合物2在大鼠中的平均绝对口服生物利用度为3.20％。

结论

该研究目的在于测定本发明化合物1、2和3以10mg/kg的剂量水平对Sprague Dawley鼠给药后的静脉内药物动力学和口服生物利用度。

没有观察到本发明化合物1、2和3静脉内或口服给药后的副作用。

以10mg/kg的剂量静脉内给药后，本发明化合物1的平均血浆浓度慢慢衰退，平均表观终点半衰期为5.70小时。本发明化合物1的体系清除率中等，容积分布超过了体内水分的总量，表明广泛分散到组织。

以10mg/kg的目标剂量口服给药后，用药8小时观察到本发明化合物1的最大血浆浓度。此后，平均血浆浓度慢慢衰退，表观终点半衰期为4.61小时。本发明化合物1的平均绝对口服生物利用度为34.8％。

以10mg/kg的剂量静脉内给药后，本发明化合物3的平均血浆浓度快速衰退，平均表观终点半衰期为3.14小时。本发明化合物3的体系清除率较高，容积分布超过了体内水分的总量，表明广泛分散到组织。

以10mg/kg的目标剂量口服给药后，用药4小时观察到本发明化合物3的最大血浆浓度。此后，平均血浆浓度快速衰退，表观终点半衰期为3.30小时。本发明化合物3的平均绝对口服生物利用度为20.6％。

以10mg/kg的剂量静脉内给药后，本发明化合物2的平均血浆浓度快速衰退，平均表观终点半衰期为3.25小时。本发明化合物2的体系清除率较高，容积分布超过了体内水分的总量，表明广泛分散到组织。

以10mg/kg的目标剂量口服给药后，用药2.5小时观察到本发明化合物2的最大血浆浓度。此后，平均血浆浓度快速衰退，表观终点半衰期为2.25小时。本发明化合物2的平均绝对口服生物利用度为3.20％。

表VII

对雄性鼠大单一静脉给药后本发明化合物1的血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					001M002M003M	0.05	146016503630	2247	1202
001M002M003M	0.1	94112201200	1120	156
					001M002M003M	0.25	589830696	705	121
001M002M003M	0.75	441332402	392	55.2
					001M002M003M	1.5	347236340	308	62.2
001M002M003M	2.5	239202259	233	28.9
					001M002M003M	4	317208238	254	56.3
001M002M003M	6	140172168	160	17.4
					001M002M003M	8	1511355.04	97.0	80.1
001M002M003M	24	13.216.830.7	20.2	9.24

表VIII

对雄性大鼠单一静脉内给药后本发明化合物3的血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					004M005M006M	0.05	404025302940	3170	781
004M005M006M	0.1	97813001030	1103	173
					004M005M006M	0.25	481904954	780	260
004M005M006M	0.75	404445545	465	72.5
					004M005M006M	1.5	274327403	335	64.8
004M005M006M	2.5	240274240	251	19.6
					004M005M006M	4	179225171	192	29.1
004M005M006M	6	103129124	119	13.8
					004M005M006M	8	＜LLOQ62.3100	81.2	26.7
004M005M006M	24	3.08＜LLOQ2.55	2.82	0.375

＜LIOQ＝＜LLOQ＜2.50

表IX

对雄性大鼠单一静脉内给药后本发明化合物2血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					007M008M009M	0.05	315016402270	2353	758
007M008M009M	0.1	159010201410	1340	291
					007M008M009M	0.25	847612712	724	118
007M008M009M	0.75	264237334	278	50.1
					007M008M009M	1.5	250232168	217	43.1
007M008M009M	2.5	195183194	191	6.66
					007M008M009M	4	122158115	132	23.1
007M008M009M	6	83.911658.1	86.0	29.0
					007M008M009M	8	42.798.454.1	65.1	29.4
007M008M009M	24	＜LLOQ3.95＜LLOQ	3.95	N/A

＜LLOQ＝＜LLOQ＜2.50

表X

对雄性大鼠单一口服给药后本发明化合物1的血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					010M011M012M	0.08	^*＜LLOQ^＜LLOQ2.66	2.66	N/A
010M011M012M	0.25	6.535.929.43	7.29	1.88
					010M011M012M	0.75	11.815.924.1	17.3	6.26
010M011M012M	1.5	20.552.144.6	39.1	16.5
					010M011M012M	2.5	65.957.157.2	60.1	5.05
010M011M012M	4	10279.489.4	90.3	11.3
					010M011M012M	6	72.398.488.8	86.5	13.2
010M011M012M	8	68.8104106	92.9	20.9
					010M011M012M	24	5.357.5010.2	7.68	2.43

^**＜LLOQ＝＜LLOQ＜5.0(样品稀释2倍)

^**＜LLOQ＝＜LLOQ＜25(样品稀释10倍)

表XI

对雄性大鼠单一口服给药后本发明化合物3的血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					013M014M015M	0.08	＜LLOQ＜LLOQ2.53	2.53	N/A
013M014M015M	0.25	14.714.132.8	20.5	10.6
					013M014M015M	0.75	29.126.636.6	30.8	5.20
013M014M015M	1.5	61.419.237.0	39.2	21.2
					013M014M015M	2.5	82.537.268.4	62.7	23.2
013M014M015M	4	112^*33.4132	92.5	52.1
					013M014M015M	6	70.485.584.5	80.1	8.44
013M014M015M	8	50.176.156.2	60.8	13.6
					013M014M015M	24	＜LLOQ＜LLOQ＜LLOQ	＜LLOQ	N/A

^**＜LLOQ＝＜LLOQ＜2.50

^*＝不一致的结果，结果通过重新测试验证

表XII

对雄性的鼠单一口服给药后本发明化合物2的血浆浓度

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	时间点(h)	样品浓度(ng/mL)	平均浓度(ng/mL)	SD
					016M017M018M	0.05	＜LLOQ＜LLOQ4.68	4.68	N/A
016M017M018M	0.25	9.119.0158.4^*	25.5	28.5
					016M017M018M	0.75	9.0210.422.4	13.9	7.36
016M017M018M	1.5	9.569.8417.4	12.3	4.45
					016M017M018M	2.5	16.518.816.1	17.1	1.46
016M017M018M	4	12.64.796.35	7.91	4.13
					016M017M018M	6	2.763.744.94	3.81	1.09
016M017M018M	8	＜LLOQ＜LLOQ＜LLOQ	＜LLOQ	N/A
					016M017M018M	24	＜LLOQ＜LLOQ＜LLOQ	＜LLOQ	N/A

＜LLOQ＝＜LLOQ＜2.50

^*＝由于结果不一致重新分析的样品。记录的平均值在原始值的20％之内重新测试。

表XIII

静脉内给药后由本发明化合物1的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

动物003M用药后8小时的异常浓度5.04ng/mL不包括在分析之内。

表XIV

静脉内给药后由本发明化合物3的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

表XV

静脉内给药后由本发明化合物2的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

表XVI

口服给药后由本发明化合物1的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

NC＝未计算的；最终的一级指数状态不能清楚确定

表XVII

口服给药后由本发明化合物3的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

NC＝未计算的；最终的一级指数状态不能清楚确定

表XVIII

口服给药后由本发明化合物2的血浆浓度估算的药物动力学参数

目标剂量水平：10mg/kg

NC＝未计算的；最终的一级指数状态不能清楚确定

附录1

用于测定本发明化合物1、2和3浓度的分析方法的校准和质量控制结果

本发明化合物1的校准样品结果

^*＝在验收标准(100±20％)之外，包括在统计计算之内

附录1

用于测定本发明化合物1、2和3浓度的分析方法的校准和质量控制结果(续)

本发明化合物3的校准样品结果

^*＝在验收标准(100±20％)之外，包括在统计计算之内

附录1

本发明化合物2的校准样品结果

^*＝在验收标准(100±20％)之外，包括在统计计算之内

附录1

本发明化合物1的质量控制结果

重复	预过滤100ng/mL	过滤后100ng/mL	给药后100ng/mL
				122	98.285.995.8	88.296.194.9	88.286.289.9
平均值S.D.CV(％)偏差(％)N	93.36.527.0-6.73	93.14.264.6-6.93	88.11.852.1-11.93

本发明化合物3的质量控制结果

重复	预过滤100ng/mL	过滤后100ng/mL	给药后100ng/mL
				122	86.989.091.4	92.610075.4	90.285.783.2
平均值S.D.CV(％)偏差(％)N	89.12.252.5-10.93	89.312.614.1-10.73	86.43.554.1-13.63

本发明化合物2的质量控制结果

重复	预过滤100ng/mL	过滤后100ng/mL	给药后100ng/mL
				122	83.789.9133	77.168.372.4	81.982.884.4
平均值S.D.CV(％)偏差(％)N	10226.926.32.23	72.64.406.1-27.43	83.01.271.5-17.03

附录2

各动物用药概况

本发明化合物1静脉内给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						001M002M003M	303286280	1.53171.44281.4266	2.012	3.0822.9032.870	10.17110.15010.251

本发明化合物3静脉内给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						004M005M006M	292301305	1.50121.53251.5580	2.014	3.0233.0863.138	10.35410.25410.288

本发明化合物2静脉内给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						007M008M009M	296304281	1.48821.53721.4211	2.017	3.0023.1012.866	10.14110.19910.201

附录2

各动物用药概况

本发明化合物1口服给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						010M011M012M	297287305	1.53141.49331.5801	2.012	3.0813.0043.179	10.37410.46910.423

本发明化合物3口服给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						013M014M015M	314264297	1.61651.37351.5181	2.014	3.2562.7663.057	10.36810.47810.294

本发明化合物2口服给药

目标剂量水平：10mg/kg

动物编号	动物体重(g)	给药剂量重量(g)	药剂浓度(mg/g)	mg	mg/kg
						016M017M018M	283275237	1.46941.43681.2320	2.017	2.9642.8982.485	10.47310.53810.485

实施例14

将大约7周大(约180g)的雄性Sprague-Dawley鼠(manifeedwin)关在12/12/LD周期且温度和湿度受控制的房间里。将这些动物关在独立的笼子里面驯化一周，所述笼子配有粉末状食物和自来水。在驯化期间，每天训练大鼠以使它们习惯喂食程序。

在给药前将这些动物随机放到重量匹配的组中。在7天的药物消除周期内每只动物可至多给药4次。

每次给药后，在用药1、2、4、8、12、18和24小时后反复监视食物、水摄取量和运动行为。

化合物和剂量

每周将本发明化合物(例如化合物1、化合物2和化合物3)在载体(20％PEG200，40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)，25％拉布拉索(Labrasol)或者30％羟基丙基-β-环糊精)中溶解并经口灌服、静脉注射或皮下注射(体积最多到5ml/kg)每天给药一次或两次。

每周制备载体(20％PEG200，40％Cremophor RH40(聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油)，25％拉布拉索(Labrasol)或者30％羟基丙基-β-环糊精)，并经口灌服、静脉注射或皮下注射(体积最多到5ml/kg)，每天一次或两次。

Claims

1.通式(Ia)的化合物或其药学上可接受的盐，通式(Ia)包括其互变异构形式，

其中，n是1；

R₂和R₃各自独立地选自氢、羟基、氨基、氰基、硝基和卤素；

R₁、R₄、R₅、R₆和R₇是氢。

2.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于2-位，且R₃位于3-位。

3.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于2-位，且R₃位于4-位。

4.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于2-位，且R₃位于5-位。

5.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于2-位，且R₃位于6-位。

6.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于3-位，且R₃位于4-位。

7.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于3-位，且R₃位于5-位。

8.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂位于3-位，且R₃位于6-位。

9.根据权利要求1记载的化合物，其中，R₂是氢，且R₃如权利要求1中所定义。

10.根据权利要求9记载的化合物，其中，R₃位于2-位。

11.根据权利要求9记载的化合物，其中，R₃位于3-位。

12.根据权利要求9记载的化合物，其中，R₃位于4-位。

13.根据权利要求9记载的化合物，其中，R₁、R₂、R₃、R₄和R₅都是氢。

14.根据权利要求10记载的化合物，其中，R₃是溴。

15.根据权利要求10记载的化合物，其中，R₃是硝基。

16.根据权利要求12记载的化合物，其中，R₃是氯。

17.药物组合物，其中包括权利要求1-16任一项记载的化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。

18.一种制剂，含有权利要求17记载的药物组合物。

19.根据权利要求18记载的制剂，其中，所述制剂是固体制剂。

20.根据权利要求19记载的固体制剂，其中所述固体制剂是片剂或胶囊的形式。

21.权利要求1-16任一项记载的化合物用于制备治疗肥胖症的药物的用途。

22.权利要求1-16任一项记载的化合物用于制备治疗胰岛素抵抗的药物的用途。

23.权利要求1-16任一项记载的化合物用于制备治疗糖尿病的药物的用途。