CN101455657A - 丹参丹酚酸a和含有丹参丹酚酸a药物组合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A的药物组合物的一种新用途,其特征在于丹参丹酚酸A在制备治疗皮肤损伤药物中的应用,丹参丹酚酸A与雪草、半夏、黄柏、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢曲松钠等药物组合的药物组合物在制备治疗皮肤损伤药物中的应用;药理和临床研究表明,丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A的药物组合物对皮肤损伤具有很好的治疗作用。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域,涉及丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A药物组合物的一种新的药用用途。
本发明所述的皮肤损伤主要是指临床医院中皮肤科中常见病症。
本发明所述的皮肤损伤主要是指:(1)外界物理或化学原因导致的皮肤损伤,例如皮肤冻伤、烧伤、烫伤、日光损伤、疤痕等;(2)内在因素(生理机能的改变)导致的皮肤损伤,例如青春痘、脂溢性皮炎、皮肤湿疹、皮肤氧疹、荨麻疹、红斑狼疮的皮肤损伤、疥疮、疥癣、热疮毒等;(3)衰老导致的皮肤变化。
背景技术
皮肤作为天然免疫的第一道防线,在抵抗外来微生物感染中发挥着重要的作用,皮肤一方面构成了抵御病原体的物理屏障,另一方面,可分泌许多细胞因子、趋化因子和抗菌肽等,从而介导天然免疫和获得性免疫,利于病原体的清除。当皮肤组织受到损伤后,局部组织就会产生炎症和细胞的死亡,一方面,有吞噬细胞、嗜中性细胞和各种炎症性介质与水解酶清除炎症部位的渗出物或坏死组织;另一方面,由新生的细胞或结缔组织修复破坏和缺损的组织,使伤口愈合,如损伤或丧失的细胞、组织由结构功能相同的细胞组织所代替,称为再生;如由肉芽组织新生结缔组织代替正常组织,称修复皮肤损伤修复是一个复杂的生物学过程,涉及炎症反应和细胞外基质的合成和再塑等过程。
皮肤损伤会给人体带来进一步的损伤,因此,需要积极的进行治疗,临床上常常采用抗菌药或具有抑菌作用的中药进行治疗,虽然能够达到一定的治疗作用,但因为抗菌性的产生或反复感染,而导致皮肤损伤很难快速恢复,因此,临床上急需一种即具有抗菌作用,又能很好的修复损伤皮肤细胞的药物。
丹酚酸A【salvianolic acid A】是丹参有效成分之一,杜冠华【基础医学与临床,2000,20(5):10~14】等人对丹酚酸A的活性进行了大量研究,发现丹酚酸A对心脑血管疾病具有很好的治疗作用,迄今为止,未有任何文献报道,丹参丹酚酸A或含有丹参丹酚酸A具有治疗皮肤损伤的作用。
发明内容
基于上述原因,我们科研人员意外的发现丹参丹酚酸A或含有丹参丹酚酸A的药物组合物具有治疗皮肤损伤的作用,丹参丹酚酸A即具有抗菌作用,又能很好的修复损伤的皮肤细胞,达到治疗皮肤损伤的目的;通过实验验证,丹参丹酚酸A或含有丹参丹酚酸A的药物组合物在治疗皮肤损伤方面,具有优效、副作用小的特点。
本发明通过以下技术方案实现的。
丹参丹酚酸A在制备治疗皮肤损伤药物中的应用。
含有丹参丹酚酸A的药物组合物在制备治疗皮肤损伤药物中的应用。
其中皮肤损伤指的是烧、烫伤或是疤痕或是衰老导致的皮肤变化。
本发明所述的皮肤损伤主要是指临床医院中皮肤科中常见病症。
本发明所述的皮肤损伤主要是指:(1)外界物理或化学原因导致的皮肤损伤,例如皮肤冻伤、烧伤、烫伤、日光损伤、疤痕等;(2)内在因素(生理机能的改变)导致的皮肤损伤,例如青春痘、脂溢性皮炎、皮肤湿疹、皮肤氧疹、荨麻疹、红斑狼疮的皮肤损伤、疥疮、疥癣、热疮毒等;(3)衰老导致的皮肤变化。
本发明所述的含有丹参丹酚酸A的药物组合物,包括以丹参丹酚酸A为君药或臣药的组方,其中与丹参丹酚酸A配伍的包括积雪草、半夏、黄柏、麦冬、芦荟、石榴籽、薏苡仁、茶叶、大豆、马齿苋、黄精、金银花、紫草、蒲公英、五倍子、艾叶、黄芩、芒硝、苦参、射干、益母草、补骨脂、车前草、石膏、生地、丹皮、蜂王浆、沙棘、蛇床子、酸枣仁、硫磺等中药中有效成分或有效部位中的一种或几种;
本发明所述的含有丹参丹酚酸A的药物组合物,包括丹参丹酚酸A和抗生素或抗菌素中的一种或几种,抗生素包括头孢类或大环内酯类或青霉素类等抗生素,主要包括头孢呋辛、头孢氨苄、头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢西丁、头孢美唑、头孢替坦、头孢唑林、头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄、头孢克罗、头孢匹罗、拉氧头孢、红霉素、白霉素、阿齐红霉素、罗红霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、琥乙红霉素等中的一种或几种;抗菌素包括现有临床上用来治疗皮肤疾病的各种药物中有效成分中的一种或几种;
一、药理实验
1、抗紫外线所致皮肤损伤
实验动物:纯白豚鼠500~600g,雌雄各半。
光源:采用日光紫外灯,功率30W,含长波紫外线(UVA)和中波紫外线(UVB)。
实验药物:本发明丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A的药物组合物,按照药剂学常规要求,制备成乳膏剂。
实验方法:参照文献【李文兴、龚守良、栗学军等,《纳米氧化钛对紫外线所致皮肤损伤的作用》,中国科技论文在线,2004.5】有关研究,豚鼠随机分成丹参丹酚酸A干预组、含有丹参丹酚酸A药物组合物组、基质对照组和自身对照组,实验动物右侧背部照射,另一侧为遮盖侧(即自身对照组),照射前先将豚鼠背部照射侧皮肤剃毛,暴露3cm×5cm范围,均匀涂布药物后静置5min后,在距离动物皮肤10cm处进行紫外线光源照射。第一次正式照射前,先测定最小红斑及光照射强度。开始每日1次,每次照射量:UVB为0.124J/cm2,UVA为0.237J/cm2,以后视皮肤对最小红斑剂量适应情况逐渐增加。照射后,乙醚经呼吸道麻醉,即刻取两组背部对应双侧皮肤,进行组织学检查【罗东辉,《中波紫外线的免疫抑制作用研究进展》,国外医学皮肤性病学分册,1996,22(5):268;朱愉、多秀瀛,《实验动物的疾病模型》,天津:天津科技翻译公司出版,1991,557~559;杜卓民,《实用组织学技术》,北京:人民卫生出版社,2001,8-294】,观察皮肤色泽、粗糙变硬程度、弹性及脱屑情况。
组织学检查:将取下的皮肤用10%中性福尔马林固定、石蜡包埋和切片,HE染色(观察表皮厚度改变)、VanGieson(VG)胶原纤维染色(观察、比较各组间真皮层胶原纤维量变化)和过碘酸-雪夫反应(PAS)染色(观察、比较各组间基底膜厚度、均匀程度及结构完整性)。
实验结果:
外观表现:肉眼观察可见经紫外线照射豚鼠皮肤后,基质对照组1周后可见照射皮肤轻度红斑形成,尔后随累积剂量增加肤色渐渐加深,出现表皮增厚、脱屑、粗糙变硬、失去光泽及弹性等一系列皮肤老化症状。丹参丹酚酸A干预组、含有丹参丹酚酸A药物组合物干预组和自身对照组则无明显异常改变。
表皮厚度HE染色切片显示:
丹参丹酚酸A干预组、含有丹参丹酚酸A药物组合物干预组、自身对照组豚鼠皮肤较薄,由基底层、棘层、粒层和角质层组成,其中棘细胞常散在分布,真皮内主要细胞有成纤维细胞和巨噬细胞。基质对照组表皮呈中度增厚,且见少量炎细胞浸润。
真皮浅层成熟胶原纤维量VG染色切片显示:丹参丹酚酸A干预组、含有丹参丹酚酸A药物组合物干预组和自身对照组皮肤的真皮血管壁较薄,血管充盈,由结缔组织及毛发、皮脂腺等皮肤附属器官组成,胶原纤维是真皮结缔组织的主要成分,呈束状排列,在腺管周围,纤维纤细且排列疏松,基质对照组显示真皮浅层胶原纤维染色减弱,纤维变细且排列稀疏,提示成熟胶原纤维减少。
基底膜厚度PAS染色显示:丹参丹酚酸A干预组、含有丹参丹酚酸A药物组合物干预组和自身对照组镜下无明显变化;基质对照组表皮与真皮交界处为基底膜带,PAS阳性物质增多,基底膜带呈不规则增厚,间或有断裂。
2、对皮肤损伤促愈合作用
创伤局部的组织修复细胞(成纤维细胞、血管内皮细胞)以及各种细胞因子在创伤愈合过程中发挥着积极作用。放射复合伤可通过抑制伤口局部早期炎症反应[1]和成纤维细胞增殖而延迟伤口愈合。
动物损伤模型的制作和分组:健康SD大鼠(SPF级)NO.0037341)60只,10周龄,体重(220±10)g;于其背部固定部位作1.2cm×0.7cm的全厚皮肤创面。伤后立即行60Co γ射线创面照射;随机分组:生理盐水组、丹参丹酚酸A组、含有丹参丹酚酸A药物组合物组,大鼠创面采用药物治疗,生理盐水组只给予生理盐水处理作对照组。伤后5d内每日外敷创面2次,处理完毕后以无菌纱布包扎。
实验结果:术后动物分笼饲养,定期观察创面并测量创面面积;并于伤后3、5、7d,计算愈合率:创面愈合率=愈合面积/原伤口面积,实验结果见表1:
表1 皮肤创面愈合率
注:与生理盐水组比较**P<0.01.
3、对衰老模型小鼠皮肤的影响
实验动物:选用ICR一月龄小鼠。
实脸方法:动物分组、给药及造模:取小鼠随机分组:D—半乳糖组,每日颈背部皮下注射12.5%D—半乳糖1000mg/kg;正常对照组:每日颈背部皮下注射等容量生理盐水;丹参丹酚酸A组:每日颈背部皮下注射12.5%D—半乳糖1000mg/kg,同时用剃毛器剃去背部被毛,暴露约2cm,将丹参丹酚酸A用于背部皮肤;含有丹参丹酚酸A药物组合物组:每日每日颈背部皮下注射12.5%D—半乳糖1000mg/kg,同时用剃毛器剃去背部被毛,暴露约2cm,将含有丹参丹酚酸A的药物组合物用于背部皮肤。
10%皮肤组织匀浆的制备:各组小鼠均于42d后处死,取背部脱毛后皮肤组织块0.5g左右,经预冷生理盐水漂洗,除去皮下脂肪及其它结缔组织,滤纸试干,称重,量筒量取该组织块9倍重量预冷生理盐水,取2/3量倒入装有组织块烧杯中,眼科小剪剪碎组织块后倒人匀浆管中,用剩余1/3生理盐水冲洗烧杯壁,用电动玻璃匀浆机制成10%组织匀浆(在冰水中进行),然后反复冻融3次,使其完全破碎,细胞内容物完全游离在液相中。
衰老小鼠皮肤SOD活力和皮肤总羟脯氨酸的侧定:参照SOD试剂盒和总羟脯氨酸盒说明书方法测定,实验结果见表2。
衰老小鼠皮肤含水量测定:用打孔器取下脱毛后的背部皮肤组织0.5g左右,精密称皮肤湿重,干操箱中放48h,称皮肤干,计算皮肤含水百分率,实验结果见表3。
表2 对衰老小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸的影响
注:与半乳糖组比较**P<0.01.
表3 对衰老皮肤含水量的影响
注:与半乳糖组比较**P<0.01.
4、对皮肤成纤维细胞HSFb的影响
主要实验试剂:本发明丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A的药物组合物;DMEM细胞培养基、谷胺酰氨、HEPES和细胞增殖测定试剂盒(XTT);I型胶原酶;I、III型胶原的前胶原氨基肽原(P I INP、PIIINP)放射免疫试剂盒(RIAKit);胎牛血清(fetalcalfserum,FCS)。
实验方法:术后剩余人正常皮肤,采用胶原酶消化法培养HSFb,原代达到90%融合时,按1∶3比例传代实验选用第4~6代细胞。10%FCS的DMEM完全培养基在37℃,5%CO2培养。6孔培养板,每孔接种1×105/mlHSFb,2mlDMEM37℃5%CO2培养24h,细胞达70%~80%融合时,0.01MPBS(pH7.3)漂洗,无血清DMEM培养24h后,分别加入丹参丹酚酸A药物DMEM或含有丹参丹酚酸A药物组合物DMEM工作溶液(2%FCS,2ml/孔),对照孔内加入DMEM培养基2ml/孔,实验及对照组每个稀释度6个重复孔;培养48h后,收集上清液。根据P I INP和PIIINP提供的说明书进行操作,计算结果见表4。
表4 药物对成纤维细胞的影响结果
5、对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制实验
实验方法:小鼠随机分组,对照组、烧烫灵组、丹参丹酚酸A组、含有丹参丹酚酸A药物组合物物,分别涂抹给药,连续7天,对照组给药蒸馏水,第7天药后1小时,于小鼠右耳两面涂二甲苯25μl,左耳不涂为正常耳,2小时后,脱颈椎处死,用直径8mm打孔器打下左耳和右耳同一部位的圆片,于扭力天平上称重,计算耳肿胀率及抑制率。结果见表6
表6 对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制
注:与对照组比较**P<0.01.
6、抗炎实验研究
实验动物:昆明种小鼠,体重20—22g,雌雄不分。
实验方法:取小鼠,分为生理盐水组、湿疹膏组、本发明丹参丹酚酸A组、本发明含有丹参丹酚酸A药物组合物组,涂抹给药,每天给药三次,连续给药7天,于末次给药30分钟后,用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5s,15分钟后脱颈椎处死,以打孔器将小鼠双耳相同部位等面积切下,用电子天平精确称重,以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度,并求出抑制率。结果见表7。
表7 抗炎实验结果比较
注:与空白对照组比较:*P<0.05 **P<0.01
7、对皮肤止痒作用
实验动物:18~22g昆明种小鼠。
实验方法:取小鼠,颈背部由10%硫化钠溶液于给药前24h脱毛(2×3cm),脱毛后小鼠按照体重,性别均衡随机分组,分别于脱毛区给予去炎松尿素软膏50mg/只和0.5%羧甲基纤维素钠0.05mL只涂于脱毛区,给予本发明丹参丹酚酸A和含有丹参丹酚酸A药物组合物,1h后,于颈背部脱毛区中央皮下注射0.2%0.1mL/10g4-AP生理盐水,记录各组小鼠10min内舔体次数,实验结果见表8。
表8 对4-AP诱发的皮肤痒反应的影响
注:与对照组比较:**P<0.01
7、对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
实验动物:小白鼠,昆明种,体重18~22g,雌雄各半。
实验方法:取小鼠,随机分组:生理盐水组、皮炎宁组、本发明丹参丹酚酸A组和含有丹参丹酚酸A药物组合物组,小鼠给药每日3次,与第3日给药1小时后,iv1%伊文斯蓝(0.1ml/10g),同时ip0.7%醋酸,20min后脱臼处死,轻揉腹部,剪切腹部皮肤,用注射器加入5ml蒸馏水冲洗腹腔,并吸取3ml腹腔液,1000r/min1离心5min于590nm处测定吸收值,结果见表9。
表9 不同药物对小鼠皮肤毛细血管通透性的影响
注:与生理盐水组比较**P<0.01。
二、实施例
实施例1
丹参丹酚酸A在治疗下述疾病的药物中的应用:临床皮肤科中的疾病;外界物理或化学原因导致的皮肤损伤,例如皮肤冻伤、烧伤、烫伤、日光损伤、疤痕等;(2)内在因素(生理机能的改变)导致的皮肤损伤,例如青春痘、脂溢性皮炎、皮肤湿疹、皮肤氧疹、荨麻疹、红斑狼疮的皮肤损伤、疥疮、疥癣、热疮毒等;(3)衰老导致的皮肤变化。
实施例2
含有丹参丹酚酸A的药物组合物在治疗下述疾病的药物中的应用:临床皮肤科中的疾病;外界物理或化学原因导致的皮肤损伤,例如皮肤冻伤、烧伤、烫伤、日光损伤、疤痕等;(2)内在因素(生理机能的改变)导致的皮肤损伤,例如青春痘、脂溢性皮炎、皮肤湿疹、皮肤氧疹、荨麻疹、红斑狼疮的皮肤损伤、疥疮、疥癣、热疮毒等;(3)衰老导致的皮肤变化。
注:本发明所要求保护的具体技术方案,不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。
Claims (8)
1、丹参丹酚酸A在制备治疗皮肤损伤药物中的应用。
2、含有丹参丹酚酸A的药物组合物在制备治疗皮肤损伤药物中的应用。
3、根据权利要求1所述的应用,其中皮肤损伤指的是烧、烫伤。
4、根据权利要求1所述的应用,其中皮肤损伤指的是疤痕。
5、根据权利要求1所述的应用,其中皮肤损伤指的是衰老导致的皮肤变化。
6、根据权利要求2所述的应用,其中皮肤损伤指的是烧、烫伤。
7、根据权利要求2所述的应用,其中皮肤损伤指的是疤痕。
8、根据权利要求2所述的应用,其中皮肤损伤指的是衰老导致的皮肤变化。
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