CN101437849B

CN101437849B - 胰岛素衍生物

Info

Publication number: CN101437849B
Application number: CN200780016686.1A
Authority: CN
Inventors: F·休巴莱克; T·霍格-詹森; I·约纳森; P·W·加里贝; P·雅各森; S·哈夫伦德; J·T·克德拉
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2006-05-09
Filing date: 2007-05-08
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2027-05-08
Also published as: CN101437849A; ZA200808100B

Abstract

本发明涉及新型人胰岛素衍生物，其在生理pH值下是可溶解的并且具有延长的作用曲线。本发明还涉及提供上述衍生物的方法，含有它们的药物组合物，使用本发明胰岛素衍生物治疗糖尿病和高血糖症的方法以及所述胰岛素衍生物在治疗糖尿病和高血糖症中的用途。

Description

胰岛素衍生物

发明领域

本发明涉及在生理pH值下可溶解并具有延长的作用曲线的新型人胰岛素衍生物。本发明还涉及提供上述衍生物的方法，含有它们的药物组合物，使用本发明的胰岛素衍生物治疗糖尿病和高血糖的方法以及所述胰岛素衍生物在治疗糖尿病和高血糖中的应用。

发明背景

目前，对糖尿病，包括1型糖尿病和2型糖尿病的治疗越来越依赖于所谓的强力胰岛素治疗。按照该方案，患者每天要接受多次胰岛素注射治疗，包括每天使用长效胰岛素注射一次或两次，以覆盖基本胰岛素需求，并补充以大量浓注快速起效的胰岛素以覆盖与膳食相关的胰岛素需求。

长效胰岛素组合物在本领域中是众所周知的。因此，一种主要类型的长效胰岛素组合物包含有胰岛素晶体或非晶形胰岛素的可注射水混悬液。在这些组合物中，所用的胰岛素化合物一般为鱼精蛋白胰岛素、锌胰岛素或鱼精蛋白锌胰岛素。

应用胰岛素混悬液有某些缺陷。因此，为了保证精确给药，在从小瓶中抽取或从药筒中放出确定体积的混悬液之前必须进行轻度振摇以使胰岛素颗粒均匀混悬。此外，就胰岛素混悬液的存储而言，必须将温度保持在比胰岛素溶液更窄的范围内以避免成块或凝结。

尽管先前认为鱼精蛋白是非免疫原性的，但是目前已经证明鱼精蛋白在人体内可能是免疫原性的，并且其在医疗目的中的应用可能会导致抗体形成。此外，已有证据表明鱼精蛋白-胰岛素复合物自身为免疫原性的。因此，对某些患者而言，必须避免使用含有鱼精蛋白的长效胰岛素组合物。

另一种类型的长效胰岛素组合物为pH值低于生理pH值的溶液，在注射该溶液时，胰岛素将因pH值升高而从其中沉淀。这些溶液的缺陷在于注射时组织中形成的沉淀的颗粒物大小分布、进而该药物的释放特性会以某种不可预测的方式取决于注射部位处的血流量和其它参数。另一个缺陷在于胰岛素的固体颗粒可以起到局部刺激剂的作用，使注射部位处的组织产生炎症。

公开号为WO2005/012347的国际专利申请(Novo Nordisk A/S)涉及了侧链连接到B-链N-末端氨基酸残基上的α-氨基或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上的胰岛素衍生物。

国际专利申请No.EP2006/050593(Novo Nordisk A/S)公开了侧链上具有芳基的胰岛素衍生物。

专利申请No.EP2006/050594(Novo Nordisk A/S)公开了测链上具有PEG的胰岛素衍生物。

日本待审专利申请No.1-254699(Kodama Co.，Ltd.)和WO95/07931(Novo Nordisk A/S)中公开了其它胰岛素衍生物。

然而，仍然需要具有比迄今为止已知的胰岛素衍生物更加长效的作用曲线的胰岛素。

发明概述

在发明的一个方面中，胰岛素衍生物具有下式：

其中Ins是母体胰岛素片段并且Q₁-Q₂-[CH₂]_n-X₁-[CH₂]_n-Q₃-[CH₂]_n-X₂-[CH₂]_n-Q₄-[CH₂]_n-X₃-[CH₂]_n-Q₅-[CH₂]_n-Z是取代基，其中Ins通过Ins的B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或者Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基与取代基的Q₁或Q₂中CO基团之间的酰胺键连接到取代基上；

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者带有非荷电侧链的氨基酸，该残基用其羧酸基团与Ins的B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或与Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基一起形成酰胺基团，或者

·由二、三或四个如上所述的α-氨基酸酰胺或氨基酸残基通过酰胺键连接在一起所组成的链，该链通过酰胺键连接在Ins的B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上，或者

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃；或

·键

条件是

-Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且

-当n是0或1，X₁是键并且Q₃是(CH₂CH₂O)₂-，(CH₂CH₂O)₃-或(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-时，Q₂不是-CO-(CH₂)₂-CO-NH-，并且

-如果Q₁或Q₂中的胺与取代基的剩余部分形成键，则该胺必须通过羰基连接到取代基的剩余部分上；

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH₂-基团的数目足以使链中碳原子总数处于4到32的范围内；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·-(CO-(CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃；

·-CO-(CH₂)_0-3-Ar-(CH₂)_0-3-，其中Ar可以为亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；

·(CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；-(CH₂OCH₂)_y-，其中y是1-20；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；

·下式的链

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)

z^-

其中Ar如上所定义，Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S，S＝O，SO₂或键；其中s，w，t和z可以彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，并且v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连并且不存在结构-O-(CH₂)₁-O-；或者

·键；

条件是Q₃-Q₅中的至少一个不是键；

X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是X₁，X₂和X₃不能连接到Z上，并且当X₁，X₂和X₃是O时，则X₁，X₂和X₃不能直接连接到Q₃，Q₄和Q₅中的O上；

并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W1，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自四唑-5-基，-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONR³R⁴或-SO₂NR³R⁴的基团所取代，其中R³和R⁴可以彼此独立地为H，-(CH₂)_1-6-SO₃H或-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂；条件是当Z是-O-W₁时Q₁必须存在；

及其任意Zn²⁺复合物。

在发明的一个方面中，胰岛素衍生物中的Q₂选自如下的组

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；或

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃。

在发明的一个方面中，Q₃是-(CH₂)_m-，其中m是6到32或8到20的整数，或者m为12，13，14，15或16。

在发明的一个方面中，Q₁，Q₄，Q₅，X₁，X₂和X₃是键并且n是0。

在发明的一个方面中，Q₃是-(CH₂)_m-，其中m是6到32或8到20的整数，或者m为12，13，14，15或16，Q₁，Q₄，Q₅，X₁，X₂和X₃是键，n是0并且Z是-COOH。

在发明的一个方面中，Q₃，Q₄或Q₅其中之一是(CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；-(CH₂OCH₂)_y-，其中y是1-20。

在发明的一个方面中，Q₃是

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·-CO-(CH₂)_0-3-Ar-(CH₂)0_-3-，其中Ar可以为亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·键；

Q₄是

·-(CH₂)_m-，其中m是4到22的整数；

·包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH₂-基团的数目足以使链中碳原子总数处于4到22的范围内；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，

-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·下式的链

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)_z-

其中Ar如上所定义，Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S，S＝O，SO₂或键；其中s，w，t和z可以彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，并且v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连并且不存在结构-O-(CH₂)₁-O-；

X₁是

·O；

·-C＝O

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是当X₁是O时，则X₁不能直接连接到Q₄中的O上；

X₂，X₃和Q₅是键；

所有的n取值都为0；并且

Z是：

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W1，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自四唑-5-基，-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONR³R⁴或-SO₂NR³R⁴的基团所取代，其中R³和R⁴可以彼此独立地为H，-(CH₂)_1-6-SO₃H或-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂

及其任意Zn²⁺复合物。

在发明的一个方面中，Z是-COOH。

在发明的一个方面中，胰岛素衍生物的母体胰岛素是胰岛素类似物。

在发明的一个方面中，所述母体胰岛素选自desB30人胰岛素，GlyA21人胰岛素，GlyA21desB30人胰岛素，GlyA21ArgB31ArgB32人胰岛素，LysB3GluB29人胰岛素，LysB28ProB29人胰岛素和ThrB29LysB30人胰岛素。

在发明的一个方面中，提供了一种用于在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物。

在发明的一个方面中，提供了一种制备药物组合物的方法，所述药物组合物包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物，其中将至多约10个锌原子每6个胰岛素衍生物分子加入到药物组合物中。

在发明的一个方面中，提供了一种在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的方法，其包含向患者给予治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物。

在发明的一个方面中，所述胰岛素衍生物是经肺给药的。

在发明的一个方面中，提供了一种根据本发明的胰岛素衍生物和快速起效的胰岛素类似物的混合物，所述快速起效的胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素；LysB28ProB29人胰岛素和LysB3GluB29人胰岛素。

在发明的一个方面中，胰岛素衍生物选自：

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-天冬氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰desB30人胰岛素，

Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-(3-(3-{4-[3-(7-羧基庚酰基氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)-丙酰基-γ-谷氨酰胺)desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十一烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-{4-[10-(4-羧基-苯氧基)-癸酰基氨基]-丁酰基}desB30胰岛素，

Nε^B29-{4-[(14-羧基-十四烷酰基氨基)-甲基]-苯甲酰基}desB30胰岛素，

Nε^B29-[16-(4-羧基-苯氧基)-十六烷酰基]desB30胰岛素，

Nε^B29-{4-[(15-羧基十五烷酰基氨基)苯甲酰基]-desB30人胰岛素以及

Nε^B29-{4-[(15-羧基-十五烷酰基氨基)-甲基]-苯甲酰基}-desB30胰岛素。

定义

本文中所使用的“胰岛素类似物”指的是一种多肽，其具有在形式上可以通过缺失和/或交换天然存在的胰岛素中存在的至少一个氨基酸残基和/或通过添加至少一个氨基酸残基而衍生自天然存在的胰岛素例如人胰岛素结构的分子结构。

在发明的一个方面中，最多17个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多15个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多10个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多8个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多7个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多6个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多5个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多4个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多3个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多2个氨基酸被修饰。在发明的一个方面中，最多1个氨基酸被修饰。

“desB30胰岛素”、“desB30人胰岛素”指的是缺少B30氨基酸残基的天然胰岛素或其类似物。类似地，“desB29desB30胰岛素”、“desB29desB30人胰岛素”指的是缺少B29和B30氨基酸残基的天然胰岛素或其类似物。

“B1”、“A1”等分别指的是胰岛素B-链中1位上的氨基酸残基(从N-末端计数)和胰岛素A-链中1位上的氨基酸残基(从N-末端计数)。具体位置上的氨基酸残基还可以表示为例如PheB1，其表示B1位置上的氨基酸残基是苯丙氨酸残基。

本文中所使用的“胰岛素”指的是在CysA7和CysB7之间以及在CysA20和CysB19之间具有二硫桥键并且在CysA6和CysA11之间具有内二硫桥键的人胰岛素、猪胰岛素或牛胰岛素。

“母体胰岛素”指的是天然存在的胰岛素，例如人胰岛素和猪胰岛素。或者，母体胰岛素可以是一种胰岛素类似物。

表述形式“非电荷”指的是不存在在4到9的pH区间内被认为带电的基或基团。例如，不存在游离的羧酸。

“脂肪双官能片段”指的是6到32个碳原子的碳链，其包含选自羧基、氨基或羟基中的两个官能团。

术语“非连接性酰胺”指的是侧链中存在的酰胺官能团或者取代基中存在的残基的侧基团中存在的酰胺官能团，其中所述的酰胺键不是用来将取代基的残基连接在一起的。应当理解，除了非连接性酰胺以外，取代基的残基还可以包含其它酰氨基团，例如，连接到取代基其它残基上的酰胺。

“氨基酸酰胺残基”指的是氨基酸的α-羧酸酰胺，或者如果氨基酸在侧链中含有羧酸，则“氨基酸酰胺”指的是α-羧基的酰胺或者是上述侧链羧基的酰胺。

当根据本发明的胰岛素衍生物被指明是“在生理pH值下可溶”时，它指的是该胰岛素衍生物可以用于制备在生理pH值下完全溶解的胰岛素组合物。这类有利的溶解性可能仅是因胰岛素衍生物自身的内在特性所导致，或者是胰岛素衍生物与介质中包含的一种或多种成分之间有利的相互作用的结果。

本文中所使用的术语“非钝化”的意思是当将快速起效胰岛素和酰化胰岛素配制在一个制剂中时，其作用曲线与将快速起效胰岛素和酰化胰岛素在单独的制剂中给药时相同或基本相同。

表述形式“高分子量胰岛素”或“hmw”指的是人胰岛素复合物、胰岛素类似物或胰岛素衍生物的分子量大于人血清白蛋白的分子量，大于胰岛素类似物或胰岛素衍生物的十二聚复合物的分子量，或者大于约72k道尔顿。

表示形式“中分子量胰岛素”或“mmw”指的是人胰岛素复合物、胰岛素类似物或胰岛素衍生物分子量在约胰岛素六聚物到约胰岛素十二聚物之间，处于24到80k道尔顿之间。

表示形式“低分子量胰岛素”或“1mx”指的是人胰岛素、胰岛素类似物或胰岛素衍生物的分子量低于24k道尔顿。

说明书和实施例中使用了如下缩写：

CV 柱体积

HPLC 高效液相色谱

HSA 人血清白蛋白

LC 液相色谱

MALDI 基质辅助激光解吸电离(Matrix Assisted LaserDesorption Ionization)

MS 质谱

RT 室温

SEC 体积排阻色谱

SPA 闪烁迫近实验(Scitillation Proximity Assay)

Tris 三(羟甲基)氨基甲烷

O.D. 光学密度＝吸光率

X2单体 AspB9GluB27人胰岛素

DIEA： N，N-二异丙基乙胺

DMF： N，N-二甲基甲酰胺

Sar：肌氨酸(N-甲基-氨基乙酸)

tBu：叔丁基

TSTU： O-(N-琥珀酰亚胺基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓???四氟硼酸盐

THF：氢呋喃

EtOAc：酸乙酯

DIPEA：二异丙基乙胺

TEA：三乙胺

TFA：三氟乙酸

DCM：二氯甲烷

RT：室温

PEG：聚乙二醇

GIR：葡萄糖输注速率

本文中所引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利均被全文引入本文作为参考，如同每个参考文献均被单独且明确地显示被引入作为参考并且在此全文公开一样(致法律允许的最大程度)。

本发明中所使用的所有标题和副标题仅是为了方便，不应认为是对发明任何方式的限制。

除非另有声明，否则任何以及所有实施例，或本文中提供的示例性语言(比如，“例如”)的使用仅是用来更好地举例说明本发明的，而不是用来限制发明的范围的。说明书中的语言不应当被认为是表示任何对实施发明来说必不可少的非要求的元素。

本文中引用和引入专利文献仅是为了方便，而没有反映任何这些专利文献的正确性、专利性和/或强制性的意图。

本发明包括所附权利要求中主题对象在适用法律允许的范围内的所有改进和等价形式。

发明描述

本发明是以如下认识为基础的，即在胰岛素衍生物分子中具有仅在末端基团带电的取代基，对于长效胰岛素在体内的作用时间，以及长效胰岛素与速效胰岛素在不钝化条件下的混合性来说是至关重要的。

有利地，根本本发明的胰岛素衍生物在生理pH值下是可溶的，其具有与人胰岛素相当的效力，并且能够在不钝化的条件下与速效胰岛素混合。在含有Zn(II)浓度为至多或小于约3Zn(II)每胰岛素六聚体的制剂中，其中所述浓度限制了在制剂中产生沉淀的风险，混合的基础胰岛素和团块胰岛素的单独作用曲线与含有超过3Zn(II)每胰岛素六聚体的制剂相当。

以下段落中总结了本发明：

具有下式的胰岛素衍生物：

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；

·键

条件是

-Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)X-，其中m是6到32的整数；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·(CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-或

(CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；-(CH₂OCH₂)_y-，其中y是1-20；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·结构式如下的链

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)_z-

·键；

条件是Q₃-Q₅中的至少一个不是键；

X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

并且

Z是：

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

及其任意的Zn²⁺复合物。

2、具有下式的胰岛素衍生物：

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；

·键

条件是

-Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·结构式如下的链

·键；

条件是

-Q₃-Q₅中的至少一个不是键；

-当Q₃-Q₅中的一个是亚芳基或亚杂芳基或者如下结构的链

-(CH₂)_s-Y₁-(C₆H₄)_v1-Y₂-(CH₂)w-Y₃-(C₆H₄)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(C₆H₄)_v3-Y₆-(CH₂)_z-时，Q₂不是-CO-((CH₂)_1-6-NH-CO)_1-4-；

X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是

-X₁，X₂和X₃不能连接到Z上，并且

-当X₁，X₂和X₃是O时，则X₁，X₂和X₃不能直接连接到Q₃，Q₄和Q₅中的O上；

并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

及其任意的Zn²⁺复合物。

3、具有下式的胰岛素衍生物：

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，

-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，

-(CH₂)_1-6CH₃；或

·键

条件是

-Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且

-当n是0或1，X₁是键并且Q₃是(CH₂CH₂O)₂-，(CH₂CH₂O)₃-或(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-时，Q₂不是

-CO-(CH₂)₂-CO-NH-，并且

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·结构式如下的链

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)z^-

·键；

条件是

-Q₃-Q₅中的至少一个不是键；并且

-当Q₃-Q₅中的一个是亚芳基或亚杂芳基或者如下结构的

链

-(CH₂)_s-Y₁-(C₆H₄)_v1-Y₂-(CH₂)w-Y₃-(C₆H₄)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y5-(C₆H₄)_v3-Y₆-(CH₂)_z-时，Q₁或Q₂包含非连接性酰胺；

X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是

-X₁，X₂和X₃不能连接到Z上，并且

-当X₁，X₂和X₃是O时，则X₁，X₂和X₃不能直接连接

到Q₃，Q₄和Q₅中的O上；

并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

及其任意的Zn²⁺复合物。

4、具有下式的胰岛素衍生物：

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·键

条件是

-Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或

·结构式如下的链

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)z^-

·键；

条件是Q₃-Q₅中的至少一个不是键；

X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是

-X₁，X₂和X₃不能连接到Z上，并且

并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

及其任意Zn²⁺复合物。

5、根据段落1-4的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

6、根据段落1-5任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

7、根据段落1-4的胰岛素衍生物，其中Q₁是由二、三或四个α-氨基酸酰胺残基或具有非荷电侧链的氨基酸残基所组成的链。

8、根据段落1-4或7的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

9、根据段落1-8任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

10、根据段落1-3或5-8任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-。

11、根据段落10的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-CO-((CH₂)₂-NH-CO)₁-，-CO-((CH₂)₃-NH-CO)₁-和-CO-((CH₂)₄-NH-CO)₁-，-CO-((CH₂)₅-NH-CO)₁-。

12、根据段落1、3或10-11的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

13、根据段落1-3的胰岛素衍生物，其中

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；

·-(CO-(CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以是H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以是H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃；或

·键

条件是Q₁或Q₂中至少一个不是键，并且如果Q₁或Q₂中的胺与取代基的剩余部分形成键，则该胺必须通过羰基连接到取代基的剩余部分上；

Q₃是

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH₂-基团的数目足以使链中碳原子总数处于4到32的范围内；或

·结构式为-(CH₂)_sC₆H₄(CH₂)_w-的二价烃链，其中v和w是整数或者其中一个是零，从而使s和w的总和在6到30的范围内；

X₁可以是-C＝O或键；

Q₄，Q₅，X₂和X₃是键；

-n的所有取值均为0；并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基

及其任意的Zn²⁺复合物。

14、根据段落13的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

15、根据段落13-14任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

16、根据段落13的胰岛素衍生物，其中Q₁是由二、三或四个α-氨基酸酰胺残基和/或具有非荷电侧链的氨基酸残基所组成的链。

17、根据段落13或16的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

18、根据段落13-17任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

19、根据段落13-17任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；或

-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃。

20、根据段落19的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-COCH₂OCH₂CONH-，-CO-((CH₂)₂-NH-CO)₁-，-CO-((CH₂)₃-NH-CO)₁-，-CO-((CH₂)₄-NH-CO)₁-和-CO-((CH₂)₅-NH-CO)₁-。

21、根据段落13或19-21的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

22、根据段落13-21任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁是-C＝O。

23、根据段落13-22任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃是-(CH₂)_m-，其中m是6到32或8到20范围内的整数。

24、根据段落23的胰岛素衍生物，其中m是12、13、14、15或16。

25、根据段落13-22任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃是包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH₂-基团的数目足以使链中碳原子总数处于4到32的范围内。

26、根据段落13-25任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

27、根据段落13-25任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

28、根据段落13-25任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

29、根据段落13-25任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

30、根据段落13-25任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

31、根据段落13-30任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自：

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-天冬氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十一烷酰基-δ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素和

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素。

32、根据段落2或4的胰岛素衍生物，其中

Q₃是

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-；

·-CO-(CH₂)_0-3-Ar-(CH₂)_0-3-，其中Ar可以为亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·键；

Q₄是

·-(CH₂)_m-，其中m是4到22的整数；

·包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH2-基团的数目足以使链中碳原子总数处于4到22的范围内；

·结构式如下的链

X₁是

·O；

·-C＝O

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

条件是当X₁是O时，则X₁不能直接连接到Q₄中的O上；

X₂，X₃和Q₅是键；

n的所有取值都为0；并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自四唑-5-基，-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONR³R⁴或-SO₂NR³R⁴的基团所取代，其中R³和R⁴可以彼此独立地为H，-(CH₂)_1-6-SO₃H或-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂；

及其任意的Zn²⁺复合物。

33、根据段落2、4或32的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

34、根据段落2、4或33的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

35、根据段落2、4或34的胰岛素衍生物，其中Q₁是由二、三或四个氨基酸酰胺残基或具有非荷电侧链的氨基酸残基所组成的链。

36、根据段落2、4或35的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

37、根据段落2、4或32-36任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

38、根据段落2、4或32-36的胰岛素衍生物，其中Q₂是-CO-CH₂-(CHCONH₂)-NH-CO；-CO-(CH₂)₂-(CHCONH₂)-NH-CO)-或-CO-(CH₂)₃-(CHCONH₂)-NH-CO)-。

39、根据段落2、4或38的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

40、根据段落32-39的胰岛素衍生物，其中Q₃是

其中Ar如上所定义，Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S，S＝O，SO₂或键；其中s，w，t和z可以彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，并且v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连并且不存在结构-O-(CH₂)₁-O-。

41、根据段落40任意一项的胰岛素衍生物，其中v₁，v₂和v₃中的至少两个是0。

42、根据段落40-41任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆是键。

43、根据段落40-41任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆中至少一个是O或S。

44、根据段落40-41或43任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁是O或S并且v₁是1。

45、根据段落40-44任意一项的胰岛素衍生物，其中s是6、7、8、9或10。

46、根据段落40-45任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁，X₂，X₃，Q₄和Q₅是键并且Ar是C₆H₄。

47、根据段落32-46任意一项的胰岛素衍生物，其中n是0。

48、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

49、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

50、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

51、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

52、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

53、根据段落32-47任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-O-W₁，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自四唑-5-基，-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONR¹³R¹⁴或-SO₂NR¹³R¹⁴的基团所取代，其中R¹³和R¹⁴可以彼此独立地为H，-(CH₂)_1-6-SO₃H或-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂。

54、根据段落32-53任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物是Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素。

55、根据段落1的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

56、根据段落1或55的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

57、根据段落1的胰岛素衍生物，其中Q₁是由二、三或四个氨基酸酰胺残基或具有非荷电侧链的氨基酸残基所组成的链。

58、根据段落1或57的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

59、根据段落1或55-58任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

60、根据段落1或55-58任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-CO-(CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO-和-(CO-(CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃。

61、根据段落1或60的胰岛素衍生物，其中Q₂是-CO-((CH₂)₃-NH-CO)-，-CO-CH₂-(CHCONH₂)-NH-CO；-CO-(CH₂)₂-(CHCONH₂)-NH-CO)-或-CO-(CH₂)₃-(CHCONH₂)-NH-CO)-。

62、根据段落1或60-61的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

63、根据段落55-62的胰岛素衍生物，其中Q₃是

64、根据段落63的胰岛素衍生物，其中v₁，v₂和v₃中的至少两个是0。

65、根据段落63-64任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆是键。

66、根据段落63-64任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆中至少一个是O或S。

67、根据段落63-64或66任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁是O或S并且v₁是1。

68、根据段落63-67任意一项的胰岛素衍生物，其中s是6、7、8、9或10。

69、根据段落55-68任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁，X₂，X₃，Q₄和Q₅是键并且Ar是C₆H₄。

70、根据段落55-69任意一项的胰岛素衍生物，其中n是0。

71、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

72、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

73、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

74、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

75、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

76、根据段落55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-O-W₁，

77、根据段落1或55-70任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素。

78、根据段落3的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，其具有2到10个碳原子。

79、根据段落3或77的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

80、根据段落3的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

81、根据段落3或77-79任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

82、根据段落3或77-80任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；或

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃，条件是如果Q₁是键则Q₂包含非连接性酰胺。

83、根据段落3或82的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

84、根据段落78-83的胰岛素衍生物，其中Q₃是

-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)z^-

85、根据段落84的胰岛素衍生物，其中v₁，v₂或v₃中的至少两个是0。

86、根据段落84-85任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆是键。

87、根据段落84-85任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆中至少一个是O或S。

88、根据段落84-85或87任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁是O或S并且v₁是1。

89、根据段落84-88任意一项的胰岛素衍生物，其中s是6、7、8、9或10。

90、根据段落78-89任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁，X₂，X₃，Q₄和Q₅是键并且Ar是C₆H₄。

91、根据段落78-90任意一项的胰岛素衍生物，其中n是0。

92、根据段落78-91任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

93、根据段落78-91任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

94、根据段落78-91任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

95、根据段落78-91任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

96、根据段落78-91任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

97、根据段落78-9任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-O-W₁，

98、根据段落3或78-97任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自：

Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素和

Nε^B29-{4-[10-(4-羧基-苯氧基)-癸酰基氨基]-丁酰基}desB30胰岛素。

99、根据段落1或2的胰岛素衍生物，其中Q₁是在侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

100、根据段落1、2或99的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

101、根据段落1或2的胰岛素衍生物，其中Q₁是由二、三或四个α-氨基酸酰胺残基或具有非荷电侧链的氨基酸残基所组成的链。

102、根据段落1、2或101的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

103、根据段落99-102任意一项的胰岛素衍生物，其中Q2是键。

104、根据段落1、2或99-102任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)-和-(CO-(CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃；

105、根据段落1、2或99-104任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是-CO-CH₂-(CHCONH₂)-NH-CO；-CO-(CH₂)₂-(CHCONH₂)-NH-CO)-或-CO-(CH₂)₃-(CHCONH₂)-NH-CO)-。

106、根据段落1、2或104-105的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

107、根据段落99-106任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃、Q₄或Q₅中的一个是-(CH₂)_m-，其中m是1到32或1-12的整数。

108、根据段落107的胰岛素衍生物，其中m是4、5、6、8、9、10或11。

109、根据段落99-108任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃，Q₄或Q₅其中之一是(CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；-(CH₂OCH₂)_y-，其中y是1-20。

110、根据段落109的胰岛素衍生物，其中Q₃，Q₄或Q₅其中之一是(CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-，其中y在1-12、2-4或2-3的范围内。

111、根据段落109-110任意一项的胰岛素衍生物，其中y是1。

112、根据段落99-111任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁，X₂和X₃彼此独立地为

·O；

·-C＝O

·键；

·NCOR¹，其中R¹可以是H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基。

113、根据段落99-112任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁，X₂和X₃是

或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

114、根据段落99-113任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁是

其中R是H，并且其中X₂是

其中R是H。

115、根据段落99-114任意一项的胰岛素衍生物，其中n是0、1、2或3。

116、根据段落99-115任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

117、根据段落99-115任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

118、根据段落99-115任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

119、根据段落99-115任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

120、根据段落99-115任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

121、根据段落1-2或99-120任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物是Nε^B29-(3-(3-{4-[3-(7-羧基庚酰基氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)-丙酰基-γ-谷氨酰胺)desB30人胰岛素。

在发明的一个方面中，Q₁是侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者是带有非荷电侧链的氨基酸，所述氨基酸酰胺残基或氨基酸残基具有2到10个碳原子。

Q₁也可以是由二、三或四个侧链上具有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺和/或具有非荷电侧链的氨基酸所组成的链。所述氨基酸的链可以包含至少一个含有酰胺的氨基酸。因此，Q₁可以例如选自β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺，γ-D-Glu-酰胺和γ-L-Glu-酰胺。

在一个方面中，Q₁是由两个非电荷氨基酸残基所组成的链，其具有4到10个碳原子。所述氨基酸可以包含酰胺。这样的氨基酸残基的例子是β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

在发明的一个方面中，Q₁是由三个氨基酸残基所组成的链，它们独立地具有4到10个碳原子，其中所述链中的至少一个氨基酸残基选自具有酰胺的残基。三个氨基酸酰胺的组合可以是β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺的任意组合，其意味着可能存在64种不同的组合。

在进一步的方面中，Q₁是由四个氨基酸残基所组成的链，它们独立地具有4到10个碳原子，其中所述链中的至少一个氨基酸残基选自具有酰胺的残基。四个氨基酸酰胺的组合可以是β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺的任意组合，其意味着可能存在256种不同的组合。

122、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在desB30人胰岛素A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到desB30人胰岛素上，其中所述取代基包含至少一种具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和结构式为-CO-((CH₂)_1-6-NH-CO)_1-4的非电荷连接基，所述连接基将脂肪双官能片段连接到desB30人胰岛素上，其中所述脂肪双官能片段包含芳基。

123、根据段落122的胰岛素衍生物，其中所述非电荷连接基选自：-CO-CH₂-NH-CO，-CO-(CH₂)₂-NH-CO，-CO-(CH₂)₃-NH-CO和-CO-(CH₂)₁-NH-CO。

124、根据段落122或123的胰岛素衍生物，其中所述脂肪双官能片段是

T-(CH₂)_s-Y₁-(Ar)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(Ar)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(Ar)_v3-Y₆-(CH₂)_z-T

其中

·其中Ar可以为亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-CONR¹R²或-SO₂NR¹R²的基团所取代，其中R¹和R²可以彼此独立地为H，-CH₃或-(CH)_1-6-CH₃；

·Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S，S＝O，SO₂或键；

·s，w，t和z可以彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，

·v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连并且不存在结构-O-(CH₂)₁-O-；并且

·T是选自羧基、氨基和羟基的官能团。

125、根据段落122-₁₂₄的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物是Nε^B29-4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素。

126、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是如果所述胰岛素取代基包含芳基则所述非电荷连接基不包含-(CO-(CH₂)_1-6-NH-CO)_1-4-，以及所述取代基不包含一个或多个选自如下组的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-。

127、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是所述取代基不包含一个或多个选自如下的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂- ，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-。

128、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中出现存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是所述取代基不包含一个或多个选自如下的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-，其特征在于所述非电荷连接基选自：

·侧链上带有羧酸的氨基酸的氨基酸酰胺，或者带有非荷电侧链的氨基酸，该残基用其羧酸基团与Ins的B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基一起形成酰胺基，或者

·由二、三或四个如上所述的α-氨基酸酰胺或氨基酸残基通过酰胺键连接在一起所组成的链，该链通过酰胺键连接到Ins的B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上，

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-；或

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃，

条件是如果非电荷连接基中的胺与取代基的剩余部分形成了键，则该胺必须通过羰基与取代基的剩余部分连接。

129、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是如果所述胰岛素取代基包含芳基则所述非电荷连接基不包含-(CO-(CH₂)_1-6-NH-CO)_1-4-，以及所述取代基不包含一个或多个选自如下的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-，其特征在于所述非电荷连接基选自：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-；

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；或

130、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是所述取代基不包含一个或多个选自如下的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-，其特征在于所述非电荷连接基选自：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂OCH₂CONH-

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO)_1-4-；或

·-CO-((CR⁵R⁶)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R⁵可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂并且R⁶可以独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃

131、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是如果所述取代基包含芳基则所述连接基中存在非连接性酰胺，以及所述取代基不包含一个或多个选自如下的残基：-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂O)₂-，-CO-(CH₂)₂-CO-NH-(CH₂CH₂O)₃-和-CO-(CH₂)₂-CO-NH-CH₂-(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)-。

132、一种具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是所述脂肪双官能片段是脂肪链，所述连接基中存在非连接性酰胺。

133、根据段落121-129的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基上的。

134、根据段落121-129的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上的。

135、根据段落121-129或131的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素B链中B29位置上存在的Lys残基上的ε-氨基上的。

136、根据段落132的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到desB30人胰岛素B29位置的Lys残基上的ε-氨基上的。

137、根据段落121-129任意一项的胰岛素衍生物，其中所述连接基包含酰胺或结构式为-CONR⁷R⁸的N-取代酰胺，其中R⁷和R⁸可以彼此独立地为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。

138、根据段落134的胰岛素衍生物，其中R⁷和R⁸是氢。

139、根据段落121-129的胰岛素衍生物，其中所述连接基包含非连接性酰胺。

140、根据段落121-129任意一项的胰岛素衍生物，其中所述取代基包含一个或多个乙二醇、丙二醇和/或丁二醇的残基，其在各端基独立地含有选自-NH₂和-COOH的基团，以用于连接所述取代基的各个组成部分。

141、根据段落121-129任意一项的胰岛素衍生物，其中所述取代基包含至少一个芳基。

142、根据段落1-141任意一项的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是人胰岛素或猪胰岛素。

143、根据段落1-141任意一项的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是胰岛素类似物。

144、根据段落143任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B30位置上的氨基酸残基是Lys或者已经被删除。

145、根据段落143-144的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是desB30人胰岛素。

146、根据段落143-145任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B1位置上的氨基酸残基已经被删除。

147、根据段落143-146任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素A21位置上的氨基酸残基是Gly或Asn。

148、根据段落143-147任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B3位置上的氨基酸残基是Lys。

149、根据段落143-148任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B28位置上的氨基酸残基是Asp或Lys。

150、根据段落143-149任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B29位置上的氨基酸残基是Pro或Thr。

151、根据段落149的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是AspB28人胰岛素。

152、根据段落147的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是GlyA21人胰岛素或GlyA21desB30人胰岛素或GlyA21ArgB31ArgB32人胰岛素。

153、根据段落148的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是LysB3GluB29人胰岛素。

154、根据段落149-150的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是LysB28ProB29人胰岛素。

155、根据段落144和150的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是ThrB29LysB30人胰岛素。

156、根据前述段落任意一项胰岛素衍生物的锌复合物，其中每六个胰岛素衍生物分子结合两个锌离子、三个锌离子、四个锌离子、五个锌离子、六个锌离子、七个锌离子、八个锌离子、九个锌离子或十个锌离子。

157、一种用于在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，其包含治疗有效量的根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物，以及药学上可接受的载体。

158、一种用于在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，其包含治疗有效量的根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及药学上可接受的载体。

159、一种在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的方法，其包括给予患者治疗有效量的根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物以及药学上可接受的载体。

160、一种在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的方法，其包括给予患者治疗有效量的根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及药学上可接受的载体。

161、根据段落138或139的方法，其是用于通过肺部治疗糖尿病的。

162、根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物在制备用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和产生高血糖症的其它状态的药物组合物中的用途。

163、根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物在制备用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和产生高血糖症的其它病症的药物组合物中的用途。

164、一种根据段落1-155的胰岛素衍生物或者根据段落156的锌复合物与快速起效胰岛素类似物的混合物，所述快速起效胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素、LysB28ProB29人胰岛素和LysB3GluB29人胰岛素。

165、胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自：

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B299-ω-羧基-十三烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-天冬氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十一烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

Nε^B29-[16-(4-羧基-苯氧基)-十六烷酰基]desB30胰岛素，

Nε^B29-{4-[(15-羧基十五烷酰基氨基)苯甲酰基]-desB30人胰岛素和

166、如实施例中所描述的胰岛素衍生物。

以下段落进一步总结了本发明。

1a、具有取代基的胰岛素衍生物，所述取代基在母体胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基处或者在母体胰岛素片段B链中存在的Lys残基上的ε-氨基处连接到母体胰岛素片段上，其中所述取代基包含至少一个具有约6到约32个碳原子的脂肪双官能片段和将所述脂肪双官能片段连接到母体胰岛素上的非电荷连接基，条件是如果所述胰岛素取代基包含芳基，则所述非电荷连接基不包含-(CO-(CH₂)_1-6-NH-CO)_1-4-。

2a、根据段落1a的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基上的。

3a、根据段落1a的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上的。

4a、根据段落1a或3a的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到母体胰岛素B链中B29位置上存在的Lys残基的ε-氨基上的。

5a、根据段落4a的胰岛素衍生物，其中所述取代基是连接到LysB29desB30人胰岛素B29位置的Lys残基的ε-氨基上的。

6a、根据段落1a-5a任意一项的胰岛素衍生物，其中所述连接基包含酰胺或结构式为-CONR⁷R⁸的N-取代酰胺，其中R⁷和R⁸可以彼此独立地为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基。

7a、根据段落6a的胰岛素衍生物，其中R⁷和R⁸是氢。

8a、根据段落1的胰岛素衍生物，其中所述连接基包含酰胺。

9a、根据段落1a-7a任意一项的胰岛素衍生物，其中所述取代基包含一个或多个乙二醇、丙二醇和/或丁二醇的残基，其在各端基独立地含有选自-NH₂和-COOH的基团。

10a、根据段落1a-7a的胰岛素衍生物，其中所述取代基包含至少一个芳基。

11a、根据段落1a的胰岛素衍生物，其具有如下的结构式：

其中Ins是连接到取代基中Q₁或Q₂上的母体胰岛素片段，其是通过胰岛素片段B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或者胰岛素片段B链中存在的Lys残基上的ε-氨基进行连接的；

每个n独立地为0、1、2、3、4、5或6；

Q₁是：

·在取代基中具有羧酸基的α-氨基酸酰胺残基，该残基用其羧酸基团中的一个与母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或母体胰岛素B链中存在的Lys残基上的ε-氨基一起形成酰胺基，或者

·由二、三或四个α-氨基酸酰胺残基通过酰胺键连接在一起所组成的链，该链通过酰胺键连接到母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或母体胰岛素B链中存在的Lys残基上的ε-氨基上，氨基酸残基W选自具有中性取代基的氨基酸残基以及在取代基中具有羧酸基的氨基酸残基，从而使W具有至少一个在取代基中含有羧酸基团的氨基酸残基；或者

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-

·-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-

·-(CO-(CR₉R₁₀)_1-6-CO-NH)_1-4-，其中R₉和R₁₀可以彼此独立地为H，-CH₃，-(CH₂)_1-6CH₃或-CONH₂；或

·键

条件是Q₁或Q₂中至少一个不是键；

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是1到32的整数；

·-(CR₃R₄)_1-6-(NHCO-(CR₃R₄)_1-6-NHCO)_1-2-(CR₃R₄)_1-6或-(CR₃R₄)_1-6-(CONH-(CR₃R₄)_1-6-CONH)_1-2-(CR₃R₄)_1-6-，-(CR₃R₄)_1-6-(NHCO-(CR₃R₄)_1-6-CONH)_1-2-(CR₃R₄)_1-6-或-(CR₃R₄)_1-6-(CONH-(CR₃R₄)_1-6-NHCO)_1-2-(CR₃R₄)_1-6，其中R₃和R₄彼此独立并且对于每个碳来说都可以独立地为H，-COOH或OH，

·-(CR₅R₆)_1-6-，其中R₅和R₆彼此独立并且对于每个碳来说都可以独立地为H，-COOH，(CH₂)_1-6COOH；

·-((CR₁R₂)_1-6-NR₁₅-CO)_1-4-，其中R₁，R₂和R₁₅可以彼此独立地为H，-CH₃，-CH_1-6CH₃，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂或CONH₂并且R₁₅可以是亚芳基，其可以被一个或两个如上所定义的R₁、R₂中的基团所取代；

·NR₁₅，其中R₁₅如上所定义；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-COOH，-CH₃，-CH_1-6CH₃，-SO₃H，-(CH₂)_p-SO₃H，-CONR₁R₂或-SO₂NR₁R₂的基团所取代，其中R₁和R₂可以彼此独立地为H，-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂或CONH₂；

·结构式如下的二价烃链

-(CH₂)_s-Y₁-(C₆H₄)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(C₆H₄)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(C₆H₄)_v3-Y₆-(CH₂)_z-

其中Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S或键；其中s，w，t和z彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，并且v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连；或者

·键；

条件是Q₃-Q₅不同

X₁，X₂和X₃彼此独立地为：

·O；

·-C＝O

·键；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；

并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-CONR₁₃R₁₄或-SO₂NR₁₂R₁₄的基团所取代，其中R₁₃和R₁₄可以彼此独立地为H，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONH₂或四唑-5-基；

及其任意的Zn²⁺复合物。

12a、根据段落11a的胰岛素衍生物，其中Q₁是具有4到10个碳原子的氨基酸酰胺残基。

13a、根据段落11a-12a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

14a、根据段落11a的胰岛素衍生物，其中Q₁是氨基酸酰胺残基链。

15a、根据段落11a或14a的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

16a、根据段落11a-15a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

17a、根据段落11a-15a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-。

18a、根据段落17a的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-(CO-(CH₂)₂-NH-CO)₁-或-(CO-(CH₂)₃-CO-NH)_1-4-。

19a、根据段落17a-18a的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

20a、根据段落11a的胰岛素衍生物，其中

Q₁是：

·在取代基中具有羧酸基的α-氨基酸酰胺残基，该残基用其羧酸基团中的一个与母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或与母体胰岛素B链中存在的Lys残基上的ε-氨基一起形成酰胺基，或者

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；

·-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-；

·键

条件是Q₁或Q₂中至少一个不是键；

Q₃是

·-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

·结构式为-(CH₂)_sC₆H₄(CH₂)_w-的二价烃链，其中v和w是整数或者它们中的一个为0，从而使s和w的总和在6处于6到30之间；

X₁可以为-C＝O或键；

Q₄、Q₅、X₂和X₃是键；

n的所有取值都为0；并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H

-OSO₃H

-OPO₃H₂

-PO₃H₂或

-四唑-5-基

及其任意的Zn²⁺复合物。

21a、根据段落20a的胰岛素衍生物，其中Q₁是具有4到10个碳原子的氨基酸酰胺残基。

22a、根据段落20a-21a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

23a、根据段落20a的胰岛素衍生物，其中Q₁是氨基酸酰胺残基链。

24a、根据段落20a或23a的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

25a、根据段落20a-24a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

26a、根据段落21a-25a任意一项的胰岛素衍生物，其中X₁是-C＝O。

27a、根据段落20a-26a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自CO(CONH₂)CH-；-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-；

28a、根据段落20a或27a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-(CO-(CH₂)₂-NH-CO)₁-，-(CO-(CH₂)₃-NH-CO)₁-，-(CO-(CH₂)₄-NH-CO)₁-或-(CO-(CH₂)₅-NH-CO)₁-。

29a、根据段落27a或28a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

30a、根据段落20a-29a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃是-(CH₂)_m-，其中m是在6到32或8到20范围内的整数。

31a、根据段落30a的胰岛素衍生物，其中m是12、13、14、15或16。

32a、根据段落20a-31a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

33a、根据段落20a-31a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

34a、根据段落20a-31a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

35a、根据段落20a-31a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

36a、根据段落20a-31a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

37a、根据前述段落任意一项的胰岛素衍生物，其选自Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-ωω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰基desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-天冬氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰基desB30人胰岛素，Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰基desB30人胰岛素。

38a、根据段落11a的胰岛素衍生物，其中

Q₁是：

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；

·-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-；

·键

条件是Q₁或Q₂中至少一个不是键；

Q₃是

·NR₁₅，其中R₁₅如上所定义；

·键；

Q₄是

·-(CH₂)_m-，其中m是4到22的整数；

·包含1、2或3个-CH＝CH-基团的二价烃链，并且-CH₂-基团的数目足以使碳链中碳原子总数处于4到22的范围内；

·亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-COOH，-CH₃，-CH_pCH₃，-SO₃H，-(CH₂)_p-SO₃H，-CONR₁R₂或-SO₂NR₁R₂的基团所取代，其中R₁和R₂可以彼此独立地为H，-CH₃，-(CH)_1-6-CH₃，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_p-O-PO₃H₂或CONH₂；或

·结构式如下的二价烃链

X₁是

·O；

·-C＝O

·键；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；并且

X₂，X₃和Q₅是键；

n的所有取值都为0；并且

Z是：

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H；

-OSO₃H；

-OPO₃H₂；

-PO₃H₂或

-四唑-5-基或者

-O-W₁，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-CONR₁₃R₁₄或-SO₂NR₁₂R₁₄的基团所取代，其中R₁₃和R₁₄可以彼此独立地为H，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONH₂或-四唑-5-基；

及其任意的Zn2⁺复合物。

39a、根据段落38a的胰岛素衍生物，其中Q₁是具有4到10个碳原子的氨基酸酰胺残基。

40a、根据段落38a-39a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

41a、根据段落38a的胰岛素衍生物，其中Q₁是氨基酸残基链。

42a、根据段落38a或41a的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

43a、根据段落38a-42a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

44a、根据段落38a-42a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自CO(CONH₂)CH-；-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-和-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-。

45a、根据段落44a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

46a、根据段落38a、44a或45a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-(CO-(CH₂)₂-NH-CO)₁-或-(CO-(CH₂)₃-NH-CO)_1-4-。

47a、根据段落37a的胰岛素衍生物，其中Q₄是-(CH₂)_s-Y₁-(C₆H₄)_v1-Y₂-(CH₂)_w-Y₃-(C₆H₄)_v2-Y₄-(CH₂)_t-Y₅-(C₆H₄)_v3-Y₆-(CH₂)_z-

其中Y₁-Y₆可以彼此独立地为O，S或键；其中s，w，t和z彼此独立地为0或1到10的整数，从而使s，w，t和z的总和在4到30的范围内，并且v₁，v₂和v₃可以彼此独立地为0或1，条件是Y₁-Y₆彼此不相连。

48a、根据段落37a或46a任意一项的胰岛素衍生物，其中v₁，v₂或v₃中的至少两个是0。

49a、根据段落38a、47a或48a任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆是键。

50a、根据段落38a、47a或48a任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁-Y₆中至少一个是O或S。

51a、根据段落38a、47a-48a任意一项的胰岛素衍生物，其中Y₁是O或S并且v₁是1。

52a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

53a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

54a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

55a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

56a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

57a、根据段落38a-51a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-O-W₁，

其中W₁是亚芳基或亚杂芳基，其可以被一个或两个选自-COOH，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-CONR₁₃R₁₄或-SO₂NR₁₃R₁₄的基团所取代，其中R₁₃和R₁₄可以彼此独立地为H，-SO₃H，-(CH₂)_1-6-SO₃H，-(CH₂)_1-6-O-PO₃H₂，-CONH₂或-四唑-5-基。

58a、根据段落1a-19a或38a-57a任意一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自Nε^B29-10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素，Nε^B29-4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素。

59a、根据段落11a的胰岛素衍生物，其中

Q₁是：

·在取代基中具有羧酸基的α-氨基酸酰胺残基，该残基用其羧酸基团中的一个与母体胰岛素B链N-末端氨基酸残基的α-氨基或与母体胰岛素B链中存在的Lys残基上的ε-氨基一起形成酰胺基；

·键；

Q₂是：

·-COCH(CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CONH₂)COCH₂N(CH₂CONH₂)

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-COCH₂CH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂N(CH₂CH₂CONH₂)-

·-COCH₂CH₂N(CH₂CONH₂)-

·-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；

·-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-；

·键

条件是Q₁或Q₂中至少一个不是键；

n独立地为2或3；

Q₃，Q₄和Q₅可以彼此独立地为

·-(CH₂)_m-，其中m是1到32的整数；

·-(CR₅R₆)_1-6-，其中R₅和R₆彼此独立并且对于每个碳来说都可以独立地为H，-COOH，(CH₂)_1-6COOH；或者

·键；

条件是Q₃-Q₅不同；

X₁，X₂和X₃独立地为

·O；

·-C＝O

·键；或者

·或

其中R是氢，C_1-3-烷基，C_2-3-烯基或C_2-3-炔基；并且

Z是

-COOH；

-CO-Asp；

-CO-Glu；

-CO-Gly；

-CO-Sar；

-CH(COOH)₂；

-N(CH₂COOH)₂；

-SO₃H

-OSO₃H

-OPO₃H₂

-PO₃H₂或

-四唑-5-基

及其任意的Zn²⁺复合物。

60a、根据段落59a的胰岛素衍生物，其中Q₁是具有4到10个碳原子的氨基酸酰胺残基。

61a、根据段落59a-60a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁选自β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺，γ-L-Glu-酰胺和γ-D-Glu-酰胺。

62a、根据段落59a的胰岛素衍生物，其中Q₁是氨基酸酰胺残基链。

63a、根据段落59a或62a的胰岛素衍生物，其中Q₁是由两个氨基酸酰胺残基所组成的链，所述氨基酸酰胺残基选自β-L-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-L-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-L-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-L-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-L-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-β-D-Asp-酰胺，β-D-Asp-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-γ-D-Glu-酰胺，γ-D-Glu-酰胺-β-D-Asp-酰胺。

64a、根据段落59a-63a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂是键。

65a、根据段落59a-63a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自CO(CONH₂)CH-；-(CO-(CH₂)_2-6-NH-CO)_1-4-；-(CO-(CH₂)_2-6-CO-NH)_1-4-。

66a、根据段落59a或62a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₂选自-(CO-(CH₂)₂-NH-CO)₁-或-(CO-(CH₂)₃-NH-CO)_1-4-。

67a、根据段落65a或66a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₁是键。

68a、根据段落59a-67a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃、Q₄或Q₅中的一个是-(CH₂)_m-，其中m是1到32或1-12的整数。

69a、根据段落59a-67a任意一项的胰岛素衍生物，其中Q₃，Q₄或Q₅其中之一是(CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)_y-；-(CH₂OCH₂)_y-，其中y是1-20。

70a、根据段落69a的胰岛素衍生物，其中Q₃，Q₄或Q₅其中之一是(CH₂CH₂O)_y-或(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂CH₂O)，其中y在2-12、2-4或2-3的范围内。

71a、根据段落59a、69a或70a任意一项的胰岛素衍生物，其中y是1。

72a、根据段落59a-71a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-COOH。

73a、根据段落59a-71a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-CH(COOH)₂。

74a、根据段落59a-71a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-N(CH₂COOH)₂。

75a、根据段落59a-71a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-SO₃H。

76a、根据段落59a-71a任意一项的胰岛素衍生物，其中Z是-PO₃H。

77a、根据段落1a-19a或59a-76a任意一项的胰岛素衍生物，其选自Nε^B29-(3-(3-{4-[3-(7-羧基庚酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)-丙酰基-γ-谷氨酰胺)desB30人胰岛素。

78a、根据段落1a-77a任意一项的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是人胰岛素或猪胰岛素。

79a、根据段落1a-77a任意一项的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是胰岛素类似物。

80a、根据段落78a-79a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素在B30位置上的氨基酸残基是Lys或者已经被删除。

81a、根据段落80a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是desB30人胰岛素。

82a、根据段落78a-81a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B1位置上的氨基酸残基已经被删除。

83a、根据段落78a-82a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素A21位置上的氨基酸残基是Gly或Asn。

84a、根据段落78a-83a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B3位置上的氨基酸残基是Lys。

85a、根据段落78a-84a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B28位置上的氨基酸残基是Asp或Lys。

86a、根据段落78a-85a任意一项的胰岛素衍生物，其中母体胰岛素B29位置上的氨基酸残基是Pro或Thr。

87a、根据段落85a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是AspB28人胰岛素。

88a、根据段落83a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是GlyA21人胰岛素或GlyA21desB30人胰岛素或GlyA21ArgB31ArgB32人胰岛素。

89a、根据段落84a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是LysB3GluB29人胰岛素。

90a、根据段落85a-86a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是LysB28ProB29人胰岛素。

91a、根据段落80a和86a的胰岛素衍生物，其中所述母体胰岛素是ThrB29LysB30人胰岛素。

92a、根据前述段落任意一项胰岛素衍生物的锌复合物，其中每个胰岛素六聚体连接两个锌离子、三个锌离子或四个锌离子。

93a、用于在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，其包含治疗有效量的根据前述段落任意一项的胰岛素衍生物，以及药学上可接受的载体。

94a、用于在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，其包含治疗有效量的根据前述段落任意一项胰岛素衍生物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及药学上可接受的载体。

95a、在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的方法，其包括给予患者治疗有效量的根据段落1a-94a的胰岛素衍生物，以及药学上可接受的载体。

96a、在需要这种治疗的患者中治疗糖尿病的方法，其包括给予患者治疗有效量的根据段落1a-94a的胰岛素衍生物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及药学上可接受的载体。

97a、根据段落95a或96a的方法，其是用于通过肺部治疗糖尿病的。

98a、一种根据段落1a-92a任意一项的胰岛素衍生物与快速起效胰岛素类似物的混合物，所述快速起效胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素、LysB28ProB29人胰岛素和LysB3GluB29人胰岛素。

99a、实施例中所描述的胰岛素衍生物。

用于酰化的起始产品、母体胰岛素或胰岛素类似物或其前体既可以通过公知的肽合成方法制备，也可以在适宜的转录微生物中通过公知的重组生产方法制备。因此，胰岛素起始产品可以通过如下的方法制备，所述方法包括在允许表达肽的条件下在适宜的营养基中培养含有DNA序列的宿主细胞，所述DNA宿主序列编码了肽并且能够表达所述肽，然后从培养物中收集所产生的肽。

培养细胞所使用的培养基可以是适于宿主细胞生长的任何常规培养基，例如含有适当添加剂的基础或复合培养基。适宜的培养基既可以从供应商处获得也可以按照公开的配方(例如，在American TypeCulture Collection目录中的)制备。然后，可以通过常规方法从培养基中收集细胞所产生的肽，所述常规方法包括通过离心或过滤从培养基中分离宿主细胞，借助于盐，例如硫酸铵，沉淀出上层清液或滤液中的蛋白组分，根据所研究肽的类型通过各种色谱方法进行纯化，例如离子交换色谱、凝胶过滤色谱或亲和色谱等。

编码母体胰岛素的DNA序列可以适当地具有基因或cDNA起源，例如其是通过制备基因或cDNA库并且使用合成寡核苷酸探针按照标准技术筛选通过杂交编码了全部或部分多肽的DNA序列而获得的。(参见，例如，Sambrook，J，Fritsch，EF和Maniatis，T，MolecularCloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York，1989)。编码母体胰岛素的DNA序列也可以由已经确定的标准方法通过合成制备，例如由B eaucage和Caruthers，Tetrahedron Letters22(1981)，1859-1869描述的亚磷酰胺(phosphoamidite)方法，或由Matthes等人，EMBO Journal3(1984)，801-805描述的方法制备。DNA序列也可以通过使用特殊引物的聚合酶链式反应，例如US4,683,202或Saiki等人，Science239(1988)，487-491中所描述的方法而制备。

DNA序列可以被插入到任意的载体中，所述载体可以方便地接受重组DNA程序，并且所述载体的选择通常取决于其所要被引入的宿主细胞。因此，所述载体可以是自主复制载体，即以染色体外实体形式存在的载体，其复制与染色体的复制无关，例如质粒。或者，当引入到宿主细胞中时，所述载体可以是加入到宿主细胞基因组中并与所加入的染色体(复数)一起被复制的载体。

所述载体例如是一种表达载体，在其中编码母体胰岛素的DNA序列能够连接到需要DNA转录的其它部分例如启动子上。所述启动子可以是能在所选择的宿主细胞中显示转录活性的任何DNA序列，并且可以来源于编码了蛋白质的基因，所述基因既可以是宿主细胞的同源物也可以是宿主细胞的异源物。用于在各种宿主细胞中直接转录编码母体胰岛素的DNA的合适的启动子的例子是本领域中公知的，例如Sambrook等人，上文。

如果需要，编码母体胰岛素的DNA序列也能够连接到合适的终止子、聚腺苷酸化信号、转录增强子序列以及转录增强子序列上。本发明的重组体载体可以进一步包含能够使载体在所研究的宿主细胞中复制的DNA序列。

所述载体还可以包含选择性标记，例如其产品补充了宿主细胞中的缺陷或者能够赋予药物耐药性的基因，所述药物例如，氨苄青霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、新霉素、潮霉素或氨甲喋呤。

为了将本发明的肽引入到宿主细胞的分泌途径中，可以在重组体载体中提供一个分泌信号序列(也称作前导序列、前序列或预先序列)。所述分泌信号序列被连接到在正确的阅读框中编码了肽的DNA序列上。分泌信号序列通常在5’位置上连接到编码了肽的DNA序列上。所述分泌信号序列可以正常地与肽连接，或者可以通过编码了另一个分泌蛋白的基因与肽连接。

分别用于连接编码母体胰岛素的DNA序列、启动子和任选地终止子和/或分泌信号序列，以及用于将它们插入到含有复制所需信息的合适的载体中的方法，是本领域技术人员公知的(例如，Sambrook等人，上文)。

DNA序列或重组体载体被引入的宿主细胞可以是能够产生该肽的任何细胞，包括细菌、酵母菌、真菌和高级真核细胞。本领域公知且使用的合适的宿主细胞的非限定性例子是，大肠杆菌、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)或哺乳动物BHK或CHO细胞株。

然后，通过在B-链的B1位置或在所选择的Lys位置引入相关的取代基，将母体胰岛素分子转化成本发明的胰岛素衍生物。所述取代基可以通过任何便利的方法引入，许多方法公开在用于氨基酰化的现有技术中。更多细节将出现在以下实施例中。

根据本发明的胰岛素可以以基本上不含锌的化合物的形式或者以锌复合物的形式提供。当提供根据本发明的胰岛素衍生物的锌复合物时，每六个胰岛素衍生物分子可以连接两个Zn²⁺离子、三个Zn²⁺离子、四个Zn²⁺离子、五个Zn²⁺离子、六个Zn²⁺离子、七个Zn²⁺离子、八个Zn²⁺离子、九个Zn²⁺离子或十个Zn²⁺离子。胰岛素衍生物的锌复合物溶液将会含有这些物质的混合物。

在一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物，以及任选的药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂，所述组合物可以用于在需要这种治疗的患者中治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症。

在本发明的一个方面中，提供了一种在需要这种治疗的患者中治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。

在本发明的一个方面中，提供了一种药物组合物的生产方法，所述药物组合物是用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的，该组合物包含根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。

在本发明的一个方面中，提供了一种用于在需要这种治疗的患者中治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的药物组合物，所述组合物包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物与快速起效的胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或添加剂。

在本发明的一个方面中，提供了一种在需要这种治疗的患者中治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的方法，该方法包括给予患者治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。

在本发明的一个方面中，提供了一种药物组合物的生产方法，所述药物组合物是用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的，该组合物包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。

在一个方面中，本发明提供了一种药物组合物，其是根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物与快速起效胰岛素类似物的混合物，所述快速起效胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素；LysB28ProB29人胰岛素和LysB3GluB29人胰岛素。

本发明的一个方面涉及一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物，以及任选地包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂，所述组合物能够用于在需要这种治疗的患者中通过肺部治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症。

在一个方面中，本发明涉及一种药物组合物的施用，其用于在需要这种治疗的患者中通过肺部治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症，所述药物组合物包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物任选地与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或添加剂。

在本发明的一个方面中，提供了一种药物组合物的生产方法，所述药物组合物是用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和引起高血糖症的其它病症的，该组合物是通过肺部使用的并且包含治疗有效量的根据本发明的胰岛素衍生物或胰岛素衍生物的锌复合物任选地与快速起效胰岛素或胰岛素类似物的混合物，以及任选地还包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的添加剂。

根据本发明的胰岛素衍生物和快速起效胰岛素类似物可以以约90/10％；约70/30％或约50/50％的比例混合。

在一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含在生理pH值下可溶的根据本发明的胰岛素衍生物。

在一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含在约6.5到约8.5的pH值区间内可溶的根据本发明的胰岛素衍生物。

在一个方面中，本发明涉及一种具有延长的作用曲线的药物组合物，其包含有根据本发明的胰岛素衍生物。

在一个方面中，本发明涉及一种药物组合物，其是含有约120nmol/ml到约2400nmol/ml，约400nmol/ml到约2400nmol/ml，约400nmol/ml到约1200nmol/ml，约600nmol/ml到约2400nmol/ml，或约600nmol/ml到约1200nmol/ml根据本发明的胰岛素衍生物或根据本发明的胰岛素衍生物与快速起效胰岛素类似物的混合物的溶液。

药物组合物

给出结构式的本发明胰岛素衍生物可以例如通过皮下、口服或经肺给药。

对于皮下给药来说，结构式中的化合物可以按照与已知胰岛素制剂类似的方式制剂。而且，对于皮下给药来说，结构式中的化合物可以按照与已知胰岛素给药方式类似的方式给药，通常，医生是熟悉给药方法的。

本发明的胰岛素衍生物可以以剂量有效的方式通过吸入而进行给药，从而增加循环胰岛素的水平和/或降低循环葡萄糖的水平。这样的给药对于治疗例如糖尿病或高血糖症的障碍可能是有效的。为获得有效剂量的胰岛素，需要通过吸入超过约0.5μg/kg到约50μg/kg剂量的根据本发明的胰岛素衍生物来进行给药。治疗有效量可以由有知识的从业者确定，他将会考虑包括胰岛素水平、血糖水平、患者的身体条件、患者的肺部状态等的因素。

通过吸入进行给药可以产生与皮下给予胰岛素相当的药代动力学。当粒径类似并且肺部沉积水平也类似时，被比较的不同的吸入装置一般会提供类似的药代动力学。

根据本发明，本发明的胰岛素衍生物可以通过本领域已知的用于吸入治疗剂给药的各种吸入装置中的任意一种进行传递。这些装置包括定量剂量吸入器(metered dose inhalers)雾化器(nebulizers)、干燥粉末发生器(dry powder generators)、喷雾器(sprayers)等。本发明的胰岛素衍生物是通过干燥粉末吸入器或喷雾器传递的。用于本发明胰岛素衍生物给药的吸入装置具有几个合意的特点。例如，通过吸入装置进行传递在可靠性、可再生性和精确性方面是有利的。为了能够很好地适应呼吸，吸入装置应当传递小颗粒，例如小于约10μm，例如约1-5μm的颗粒。适于实施本发明的可商购获得的吸入装置的一些具体例子是Turbohaler^TM(Astra)，(Glaxo)，(Glaxo)，Spiros^TM吸入器(Dura)，由Inhale Therapeutics上市的装置，AERx^TM(Aradigm)，雾化器(Mallinckrodt)，雾化器(MarquestMedical Products)，定量剂量吸入器(Glaxo)，或粉末吸入器(Fisons)等。

如本领域技术人员所认识到的，本发明的胰岛素衍生物制剂、传递制剂的数量以及单剂给药的持续时间取决于所使用吸入装置的类型。对于一些气雾剂传递系统来说，例如雾化器，给药的频率以及系统激活的持续时间主要取决于气雾剂中胰岛素结聚物(insulinconjugate)的浓度。例如，在雾化器溶液中的胰岛素结聚物浓度较高时，可以使用较短的给药周期。一些装置例如定量剂量吸入器可以产生较高的气雾剂浓度，并且操作较短的一段时间就能够传递期望量的胰岛素结聚物。一些装置例如粉末吸入器只有在给定量的试剂被排出装置后才能传递活性试剂。在这种类型的吸入器中，在给定数量的粉末中含有的本发明胰岛素衍生物的量决定了单次给药所传递的剂量。

在通过吸入装置传递的制剂中，本发明胰岛素衍生物的粒径对于胰岛素进入肺部以及进入更下级的气道或肺泡中的能力来说是至关重要的。本发明的胰岛素衍生物可以以至少约10％，例如约10到约20％或更多所传递胰岛素结聚物被沉积在肺部的形式被制剂。已知，在约2μm到约3μm的粒径下能够获得人经口呼吸最大肺部沉积效率。当粒径大于约5μm时，肺部沉积明显降低。粒径低于约1μm会导致肺部沉积的降低，并且难以传递足够量的颗粒以达到治疗有效量。因此，通过吸入传递的胰岛素衍生物的颗粒粒径小于约10μm，例如在1μm到约5μm范围内。选择胰岛素衍生物的制剂，从而在所选择的吸入装置中产生期望的粒径。

以干燥粉末的形式进行给药是有利的，本发明的胰岛素衍生物以粒径小于约10μm，例如在1μm到约5μm范围内的颗粒形式制备。该粒径可以有效地传递到患者肺部的肺泡中。干燥粉末主要是由以能够使大多数颗粒具有期望范围内的尺寸的方式制备的颗粒组成的。有利地，至少约50％的干燥粉末是由直径小于约10μm的颗粒组成的。这样的制剂可以通过喷雾干燥、研磨或含有胰岛素结聚物和其它期望成分的溶液的临界点凝结而获得。适于产生本发明所使用的颗粒的其它方法也是本领域中已知的。

所述颗粒通常在容器中从干燥的粉末制剂中分离，然后通过载体气流输送到患者的肺部。一般地，在目前的干燥粉末吸入器中，破坏固体的力量仅是由患者的吸入而提供的。在另一种吸入器中，由患者吸入所产生的气流激活了将颗粒解聚的叶轮马达。

用于由干燥粉末吸入器给药的本发明胰岛素衍生物制剂一般包括含有所述衍生物的精细粉碎的干燥粉末，但是该粉末还可以包括填充剂、载体、赋性剂或其它添加剂等。例如，可以将添加剂引入到胰岛素结聚物的干燥粉末制剂中，从而按照特定粉末吸入器传递的需要来稀释粉末，促进制剂的加工，为制剂提供有利的粉末特性，促进来自吸入装置的粉末的分散，使制剂稳定(例如，抗氧化剂或缓冲剂)，或者为制剂提供味道等。有利地，所述添加剂不会对患者的气路造成不利的影响。胰岛素衍生物可以与添加剂在分子水平上混合，或者所述固体制剂可以包括与添加剂颗粒混合或者涂敷在添加剂颗粒上的胰岛素结聚物。一般的添加剂包括单-、二-或多糖；糖醇以及其它多元醇，例如，乳糖，葡萄糖，棉子糖，松三糖，乳糖醇，麦芽糖醇，海藻糖，蔗糖，甘露糖醇，淀粉或它们的组合物；表面活性剂，例如山梨糖醇，二磷脂酰胆碱或卵磷脂等。一般地，添加剂例如填充剂是以对上述目的有效的量存在的，通常为制剂重量的约50％到约90％。也可以向制剂中引入蛋白例如胰岛素类似物蛋白制剂领域中已知的其它药剂。

包括本发明胰岛素衍生物的喷雾可以通过迫使胰岛素结聚物的悬浮液或溶液在压力下通过一个喷嘴而产生。所述喷嘴的尺寸和构造、所施加的压力以及液体供料速率可以根据所要获得的期望输出量和粒径大小进行选择。电喷射可以通过例如与毛细管或喷嘴供料口连接的电场产生。有利地，通过喷雾器传递的胰岛素结聚物具有小于约10μm，例如在1μm到约5μm范围内的的粒径。

适用于喷雾器的本发明的胰岛素衍生物制剂一般包括在水溶液中浓度为约1mg到约20mg胰岛素结聚物每ml溶液的胰岛素衍生物。所述制剂可以包括例如赋性剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、表面活性剂以及例如锌的试剂。所述制剂还可以包括赋性剂或用于稳定胰岛素衍生物的制剂，例如缓冲剂、还原剂、填充蛋白或碳水化合物。在配制胰岛素结聚物中所使用的填充蛋白包括白蛋白、鱼精蛋白等。在配制胰岛素结聚物中所使用的一般的碳水化合物包括蔗糖、甘露糖醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。胰岛素衍生物制剂还可以包括表面活性剂，其可以减少或防止由于在形成气雾时溶液气化而引起胰岛素结聚物的表面聚合。各种常规的表面活性剂都可以使用，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。其用量通常在制剂重量的约0.001到约4％之间。

含有根据本发明的胰岛素衍生物的药物组合物还可以通过肠胃外的方式给药到需要这种治疗的患者中。肠胃外给药可以通过皮下、肌肉或静脉注射，借助注射器，任选地为笔型注射器的方式来进行。或者，肠胃外给药可以通过注射泵的方式进行。其它的择为通过鼻部或肺部，例如以特别为所述目的设计的组合物、粉末或液体的形式给予所述胰岛素。

可以使用制药工业的常规技术制备本发明胰岛素衍生物的可注射组合物，其包括根据需要溶解并混合组分从而得到所需终产品。因此，根据一种方法，本发明的胰岛素衍生物被溶于一定量的水中，其体积稍低于待制备组合物的最终体积。根据需要加入等渗剂、防腐剂和缓冲剂，并且如果必要，则根据需要使用酸例如盐酸，或碱例如氢氧化钠水溶液，来调节溶液的pH值。最终用水调节溶液的体积从而得到所需的组分浓度。

在本发明的另一个方面中，缓冲剂选自乙酸钠，碳酸钠，柠檬酸盐，甘氨酰甘氨酸，组氨酸，甘氨酸，赖氨酸，精氨酸，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，磷酸钠和三(羟甲基)-氨基甲烷，N-二(羟乙基)甘氨酸(bicine)，N-(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine)，苹果酸，琥珀酸盐，马来酸，富马酸，酒石酸，天冬氨酸或其混合物。这些具体缓冲剂中的每一种构成了本发明的一个可选方面。

在本发明进一步的方面中，所述制剂进一步包含药学上可接受的防腐剂，其可以选自苯酚，邻甲酚，间甲酚，对甲酚，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，2-苯氧基乙醇，对羟基苯甲酸丁酯，2-苯基乙醇，苄醇，氯丁醇和硫柳汞(thiomerosal)，溴硝丙二醇，苯甲酸，咪脲，氯己定(Chlorohexldine)，脱氢醋酸钠，氯甲酚，对羟基苯甲酸乙酯，苄索氯铵，氯苯甘醚(3p-氯苯氧基丙烷-1，2-二醇)或其混合物。在本发明进一步的方面中，防腐剂存在的浓度为0.1mg/ml到20mg/ml。在本发明进一步的方面中，防腐剂存在的浓度为0.1mg/ml到5mg/ml。在本发明进一步的方面中，防腐剂存在的浓度为5mg/ml到10mg/ml。在本发明进一步的方面中，防腐剂存在的浓度为10mg/ml到20mg/ml。这些具体防腐剂中的每一种构成了本发明的一个可选方面。在药物组合物中使用防腐剂是本领域技术人员公知的。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19^thedition，1995。

在本发明进一步的方面中，所述制剂进一步包括等渗剂，其可以选自盐(例如氯化钠)，糖或糖醇，氨基酸(例如氨基乙酸、L-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)，糖醇(例如甘油(glycerine)、1，2-丙二醇(丙二醇)、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇)，聚乙二醇(例如PEG400)或其混合物。可以使用任意的糖，例如单糖、二糖或多糖或水溶性葡聚糖，包括：例如果糖，葡萄糖，甘露糖，山梨糖，木糖，麦芽糖，乳糖，蔗糖，海藻糖，葡聚糖，普鲁兰，糊精，环糊精，可溶性淀粉，羟乙基淀粉和羧甲基纤维素-Na。在一个方面中，糖添加剂为蔗糖。糖醇被定义为具有至少一个-OH基团的C4-C8烃，其包括例如甘露糖醇，山梨醇，肌醇，半乳糖醇，卫矛醇，木糖醇和阿拉伯糖醇。在一个方面中，糖醇添加剂为甘露糖醇。上述糖或糖醇可以单独使用或组合使用。对用量没有固定的限制，只要所述糖或糖醇能溶于液体制剂且不会对使用本发明方法获得的稳定化作用产生不良影响即可。在一个方面中，糖或糖醇的浓度为约1mg/ml到约150mg/ml。在本发明进一步的方面中，等渗剂以1mg/ml到50mg/ml的浓度存在。在本发明进一步的方面中，等渗剂存以1mg/ml到7mg/ml的浓度存在。在本发明进一步的方面中，等渗剂以8mg/ml到24mg/ml的浓度存在。在本发明进一步的方面中，等渗剂以25mg/ml到50mg/ml的浓度存在。这些具体等渗剂中的每一种构成了本发明的一个可选方面。在药物组合物中使用等渗剂是本领域技术人员所公知的。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19^thedition，1995。

典型的等渗剂为氯化钠，甘露糖醇，二甲亚砜和甘油，典型的防腐剂为苯酚，间甲酚，对羟基苯甲酸甲酯和苄醇。

适宜的表面活性剂的实例为乙酸钠，甘氨酰甘氨酸，HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)和磷酸钠。

用于经鼻给药的根据本发明胰岛素衍生物的组合物可以，例如，按照欧洲专利No.272097(授予Novo Nordisk A/S)中的描述制备。

含有本发明胰岛素衍生物的组合物可以用于治疗对胰岛素敏感的状态。因此，它们可以用于治疗1型糖尿病，2型糖尿病和高血糖症，例如，正如有时在受到严重损伤的人和进行了重大外科手术的人中所观察到的。用于任意患者的最佳剂量水平取决于多种因素，包括所用具体胰岛素衍生物的功效，患者的年龄，体重，身体活动和膳食；取决于与其它药物的可能的组合；并取决于所治疗情况的严重程度。建议由本领域技术人员按照与已知胰岛素组合物类似的方式针对每个患者个体确定本发明胰岛素衍生物的每日剂量。

在方便时，可以使用本发明胰岛素衍生物与其它类型的胰岛素，例如具有更快速起效作用的胰岛素类似物的混合物。这样的胰岛素类似物的实例描述在例如公开号为EP214826(Novo Nordisk A/S)，EP375437(Novo Nordisk A/S)和EP383472(Eli Lilly & Co.)的欧洲专利申请中。

本发明通过以下实施例得到了进一步的解释，但这些实施例并不构成对保护范围的限定。

附图描述

图1：实施例2中胰岛素衍生物与天冬胰岛素(insulin aspart)(B28Asp人胰岛素)的混合物的体积排阻色谱图。各个单独的峰的胰岛素含量是通过HPLC量化的。不论在2.1Zn(II)每六聚体还是在6Zn(II)每六聚体的制剂中，胰岛素衍生物和天冬胰岛素都是作为两个单独的组分(分别为高分子量胰岛素和中分子量胰岛素)洗脱的。SEC实验是按照实施例20进行的。

图2：在皮下注射不同浓度和不同Zn(II)含量的实施例2所述胰岛素衍生物后的片钳作用曲线，其表明无论是以2.3或6个Zn(II)每六分子胰岛素制剂形式给药的胰岛素衍生物，还是以600μM或1200μM制剂形式给药的胰岛素衍生物，胰岛素衍生物的作用曲线都是相似的。所述片钳实验是按照实施例21进行的。

图3：在皮下注射实施例2所述胰岛素衍生物与天冬胰岛素的混合物，或者单独注射上述两种胰岛素后的片钳作用曲线，其表明单独注射后的胰岛素作用曲线没有出现明显的钝化。所述片钳实验是按照实施例21进行的。

图4：在皮下注射三种剂量的实施例2所述胰岛素衍生物的片钳作用曲线，其证明了胰岛素的长效作用。所述片钳实验是按照实施例21进行的。

实施例

实施例1

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素的合成

步骤1：十六烷二酸单叔丁酯

将十六烷二酸(40.0g，140mmol)悬浮在甲苯(250ml)中，并且将混合物加热至回流。在4小时的时间段内滴加N，N-二甲基甲酰胺二叔丁基乙缩醛(76.3g，375mmol)。将混合物回流过夜。在真空中在50℃下除去溶剂，将粗产物悬浮在DCM/AcOEt(500ml，1:1)中并且搅拌15分钟。通过过滤收集固体并且与DCM(200ml)一起研磨。真空蒸除滤液，从而得到粗十六烷二酸单叔丁酯，30克。将该产物悬浮在DCM(50ml)中，用冰冷却10分钟，并过滤。真空除去溶剂，从而得到25克粗十六烷二酸单叔丁酯，将其在庚烷(200ml)中重结晶，从而得到十六烷二酸单叔丁酯，15.9g(33％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.35(t，2H)，2.20(t，2H)，1.65-1.55(m，4H)，1.44(s，9H)，1.34-1.20(m，20H)。

步骤2：十六烷二酸琥珀酰亚胺基叔丁酯

将十六烷二酸单叔丁酯(2g，5.8mmol)溶于THF(20ml)中，用TSTU(2.1g，7.0mmol)和DIEA(1.2ml，7.0mmol)处理并且搅拌过夜。过滤混合物，并且对滤液进行真空蒸发。将残余物溶于AcOEt并且用冷0.1M HCl和水洗涤两次。通过MgSO₄进行干燥，真空蒸发，从而给出十六烷二酸琥珀酰亚胺基叔丁酯，2.02g(79％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.84(s，4H)，2.60(t，2H)，2.20(t，2H)，1.74(p，2H)，1.56(m，2H)，1.44(s，9H)，1.40(m，2H)，1.30-1.20(m，18H)。

步骤3：ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺

将十六烷二酸琥珀酰亚胺基叔丁酯(100mg，0.227mmol)溶于DMF(2ml)中，并用L-谷氨酰胺(37mg，0.25mmol)和DIEA(58μl，0.34mmol)进行处理，并且将混合物搅拌过夜。真空蒸除溶剂，将粗产品溶于AcOEt中，用0.2M的盐酸、水和盐水洗涤两次。通过MgSO₄进行干燥，真空蒸发，从而给出ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺，85mg(80％)。

¹H-NMR(CDCl₃.)δ：6.98(s，1H)，6.60(d，1H)，5.88(s，1H)，4.69(m，1H)，2.55-2.41(m，2H)，2.25-2.18(m，2H)，2.14(m，1H)，1.93(m，1H)，1.65-1.54(m，4H)1.44(s，9H)，1.27(br，20H)。

步骤4：ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺γ-琥珀酰亚胺基酯

将ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺(85g，0.181mmol)溶于THF(1ml)中，用TSTU(65g，0.217mmol)和DIEA(37μl，0.217mmol)处理并且搅拌过夜。过滤混合物，并且对滤液进行真空蒸发。将残余物溶于AcOEt中并且用冷0.1M HCl和水洗涤两次。通过MgSO₄进行干燥，真空蒸发，从而给出ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺γ-琥珀酰亚胺基酯，91mg(89％)。

¹H-NMR(CDCl₃)δ：6.59(s，1H)，6.41(d，1H)，5.56(s，1H)，4.62(m，1H)，3.02-2.94(dd，2H)，2.84(s，4H)，2.71-2.58(m，2H)，1.76(m，1H)，1.53-1.63(m，4H)，144(s，9H)，1.25(br，20H)。

步骤5：Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素

在室温下将DesB30人胰岛素(500mg，0.088mmol)溶于100mMNa₂CO₃(5ml，pH10.2)中。将ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-L-谷氨酰胺γ-琥珀酰亚胺基酯(57mg，0.105mmol)溶于乙腈(5ml)中，接着加入到胰岛素溶液中。30分钟之后，加入0.2M甲胺(0.5ml)。用HCl将pH调节到5.5，通过离心分离收集等电位沉淀物，并在真空下干燥得到423mg产物。偶合的产率为42％(RP-HPLC，C4柱；缓冲液A：在0.1％的TFA-水中的10％的MeCN，缓冲液B：在0.1％的TFA-水中的80％的MeCN；梯度为在16分钟内由20％变为90％B)。将被保护的产物溶解在95％的TFA(12ml)中，静置30分钟，并且在真空中蒸发。将粗产物溶于水中并且冻干。

通过C4柱上的RP-HPLC对Nε^B29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素进行纯化，缓冲液A：20％EtOH+0.1％TFA，缓冲液B：80％EtOH+0.1％TFA；梯度15-60％B，然后在C4柱上通过HPLC进行纯化，缓冲液A：20％EtOH中的10mM Tris+15mM硫酸铵，pH7.3，缓冲液B：80％的EtOH；梯度15-60％B。将收集的级份在Sep-Pak上用70％乙腈+0.1％TFA进行脱盐，通过加入氨进行中和，并且冷冻干燥。未优化的产率为50mg，12％。通过HOLC评价的纯度为>98％。LCMS6102.8；C₂₇₄H₄₁₂N₆₆O₈₀S₆计算值为6103.1。

实施例2：

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十六烷二酸和γ-氨基丁酸用类似于实施例1的方法制备的。

ω-叔丁基-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酸琥珀酰亚胺酯

¹H-NMR(CDCl₃)δ：5.80(m，1H)，3.36(dd，2H)，2.84(s，4H)，2.65(t，2H)，2.21-2.13(m，4H)，1.99(p，2H)，1.44(s，9H)，1.66-1.51(m，6H)，1.25(br，20H)。

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素

LCMS6059.9；C₂₇₃H₄₁₁N₆₅O₇₉S₆计算值为6060.1。

实施例3

Nε ^B29 -ω-羧基-十四烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十五烷二酸和L-谷氨酰胺用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6088.2；C₂₇₃H₄₁₀N₆₆O₈₀S₆计算值为6089.1。

实施例4

Nε ^B29 -ω-羧基-十三烷酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十四烷二酸和L-谷氨酰胺用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6075.3；C₂₇₂H₄₀₈N₆₆O₈₀S₆计算值为6075.1。

实施例5

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十六烷二酸和β-丙氨酸用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6044.8；C₂₇₂H₄₀₉N₆₅O₇₉S₆计算值为6046.1。

实施例6

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-天冬氨酰胺desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十六烷二酸和L-天冬氨酰胺用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6088.8；C₂₇₃H₄₁₀N₆₆O₈₀S₆计算值为6089.1。

实施例7

Nε ^B29 -ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十六烷二酸和ε-氨基-己酸用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6086.1；C₂₇₅H₄₁₅N₆₅O₇₉S₆计算值为6088.1。

实施例8

Nε ^B29 -m-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十六烷二酸和δ-氨基-戊酸用类似于实施例1的方法制备的。

LCMS6074.2，C₂₇₄H₄₁₃N₆₅O₇₉S₆计算值为6074.1。

实施例9

Nε ^B29 -10-(4-羧基苯氧基)-癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30人胰岛素的合成

步骤1：4-羟基-苯甲酸叔丁酯

将4-羟基-苯甲酸(3g，21.7mmol)在甲苯(35ml，通过分子筛干燥)中搅拌。在N₂下将溶液加热到80℃，在大约5分钟的时间段内加入N，N’-二甲基甲酰胺二叔丁基乙缩醛(10.42mL，43.4mmol)。将混合物在80℃下搅拌1小时10分钟并冷却到室温。用水洗涤溶液，用饱和NaHCO₃和饱和NaCl(每次15mL)洗涤两次，通过MgSO₄进行干燥，并且浓缩得到黄色油状物(2.77g)。产品通过快速色谱(380g氧化硅，洗脱液：4:6的AcOEt/庚烷(2L)和1:1的AcOEt/庚烷700mL)进行纯化，从而产生白色晶体(2.07g，产率49％)。

HPLC-MS m/z：217(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)7.90(d，2H)，6.85(d，2H)，6.10(s，1H)，1.59(s，9H)。

步骤2：4-(9-甲氧基羰基壬氧基)苯甲酸叔丁酯

将4-羟基-苯甲酸叔丁酯(500mg，2.57mmol)和10-溴代癸酸甲酯(683mg，2.57mmol)溶于乙腈中，并且加入K₂CO₃(712mg，5.15mmol)。将混合物在氮气下回流16小时，并冷却到室温。过滤出固体，并且将滤液真空浓缩。将所产生的残余物溶于AcOEt(50ml)和水(25mL)中。分相，通过MgSO₄干燥有机相并且浓缩，从而产生无色油状物(874mg，产率90％)。

HPLC-MS m/z：402(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)7.92(d，2H)，6.87(d，2H)，3.99(t，2H)，3.67(s，3H)，2.31(t，2H)，1.72-1.83(m，2H)，1.59-1.69(m，2H)，1.58(s，9H)，1.40-1.50(m，2H)，1.23-1.40(br，8H)。

步骤3：4-(9-羧基壬氧基)苯甲酸叔丁酯

将4-(9-甲氧基羰基壬氧基)苯甲酸叔丁酯(858mg，2.27mmol)溶于THF(5ml)，并且加入1N的NaOH(2.27mmo)。将混合物搅拌16小时。加入AcOEt(40mL)和水(25ml)中的1N HCl(2.38ml)。分相，通过MgSO₄干燥有机相并真空浓缩，从而产生白色固体(781mg，产率95％)。

HPLC-MS m/z：387(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)7.92(d，2H)，6.87(d，2H)，3.99(t，2H)，2.35(t，2H)，1.73-1.84(m，2H)，1.60-1.69(m，2H)，1.58(s，9H)，1.39-1.51(m，2H)，1.24-1.39(br，8H)。

步骤4：4-[9-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯

将4-(9-羧基壬氧基)苯甲酸叔丁酯(779mg，2.14mmol)溶于THF(15mL)中，并且加入DIEA(366μl，2.14mmol)。将混合物冷却到0℃，并置于氮气下，加入HSTU。在0℃下将混合物搅拌30分钟并且在室温下搅拌16小时。真空浓缩样品并加入AcOEt(40ml)。用0.2N的HCl(2×25ml)洗涤混合物，通过MgSO₄进行干燥，并真空浓缩，从而产生浅黄色固体。将该固体在AcOEt中重结晶，从而产生白色粉末(276mg，28％yield)。浓缩母液，从而产生晶体残余物.(430mg，产率43％)。白色粉末的数据：

HPLC-MS m/z：484(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)7.93(d，2H)，6.88(d，2H)，3.99(t，2H)，2.83(s，4H)，2.61(t，2H)，1.67-1.88(m，4H)，1.58(s，11H，theoret.9H+水)，1.27-1.52(m，10H)。

步骤5：4-[9-((S)-1-氨基甲酰基-3-羧基丙基氨基甲酰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯

将4-[9-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯(200mg，0.433mmol)在DMF(2mL)中搅拌，并且加入H-Glu-NH2(63mg)。将该非均匀混合物在室温下搅拌16小时。LC/MS分析表明反应没有结束。加入H-Glu-NH₂(20mg)和另外的DMF(2mL)，并且在室温下将混合物搅拌2天。真空浓缩样品并加入AcOEt(50mL)。溶液用0.2N的HCl(2×25mL)和水(25mL)洗涤，通过MgSO₄进行干燥，并且真空浓缩，从而产生白色固体(180mg，产率86％)。

HPLC-MS m/z：493(M+1)。

步骤6：4-{9-[(S)-1-氨基甲酰基-3-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)丙基氨基甲酰基]壬氧基}苯甲酸叔丁酯

HSTU反应是以类似于4-[9-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯中所描述的方式进行的。产物通过快速色谱(1:1的AcOEt:庚烷和AcOEt)进行纯化，从而产生18mg的产品。

HPLC-MS m/z：590(M+1)。

步骤7：Nε ^B29 -10-(4-羧基苯氧基)癸酰基-γ-L-谷氨酰胺desB30胰岛素

通过在10ml圆底烧瓶中加入100mM Na₂CO₃(1.5mL)和乙腈(1.5mL)而将DesB30胰岛素(126mg，0.022mmol)溶解。将4-{9-[(S)-1-氨基甲酰基-3-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)丙基氨基甲酰基]壬氧基}苯甲酸叔丁酯(14mg，0.022mmol)加入到乙腈(750uL)中并且加入Na₂CO₃(750uL)，从而使最终的溶液为50:50的100mM Na₂CO₃/乙腈。将所述溶液在室温下搅拌1小时。将该溶液转移到15ml的离心管中，用Milli-Q水(6ml)洗涤。将溶液在冰上冷却，并且通过加入1N的HCl将pH调节到5.1，从而产生沉淀。在10℃下将所述管在5000rpm下离心10分钟。从固体中倾倒出溶剂。向固体中加入95:5的TFA/水(2.5ml)。将溶液倒入圆底烧瓶中，用另外的95:5的TFA/水(2.5ml)进行洗涤。在室温下将该溶液搅拌30分钟，并且真空浓缩。加入DCM并且除去，进行两次，并将烧瓶在室温下置于真空中。产物通过制备HPLC(C18柱，乙腈/水/0.05％TFA)进行纯化。合并相关级份(两批次)并且用水以1:1的比例稀释。将溶液在冰上冷却，用1N的NaOH将pH调节到大约5，从而产生沉淀。样品进行离心分离(5000rpm，10分钟，5℃)。倾出液体并将球丸冻干，从而产生白色固体(22mg+12mg)。

MALDI-MS(α-氰基-4-羟基苯乙烯酸)m/z：6128.7(M＝6125.1)。

HPLC-MS m/z：1532.8((M+4)/4＝1532.2)。

实施例10

Nε ^B29 -4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素的合成

步骤1：4-碘代苯甲酸叔丁酯

将4-碘代苯甲酸(10g，40.3mmol)溶于干燥的甲苯(100ml，通过分子筛干燥)。在氮气流下将溶液加热到70℃。在大约30分钟的时间段内加入N，N’-二甲基甲酰胺二叔丁基乙缩醛(24.6g，121mmol)的甲苯(25mL)溶液。将反应物混合16小时。在某点加热装置失效，反应物从70℃冷却到室温。将溶液加热到70℃并混合5小时。真空浓缩样品，并加入AcOEt(400ml)。然后用1:1的饱和NaHCO₃/水(150ml)，和饱和NaHCO₃，水和饱和NaCl(每次75mL)洗涤溶液。干燥有机相(MgSO₄)并且真空浓缩，从而产生浅褐色油状物。

HPLC-MS m/z：327(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.77(d，2H)，7.69(d，2H)，1.58(s，9H)。

步骤2：11-碘代十一烷酸甲酯

将11-溴代十一烷酸甲酯(20.2g，72.3mmol)溶于丙酮(200ml)中。加入碘化钠(54g，361mmol)并且将反应物在氮气下回流16小时。冷却到室温之后，过滤掉盐。真空浓缩滤液并且加入水(200ml)。溶液用AcOEt(2×100ml)萃取，加入一些饱和NaCl以促进相分离。合并有机萃取物并且用水(100ml)加一点饱和NaCl，并且用饱和NaCl(50mL)进行洗涤。通过MgSO₄进行干燥。溶液为红-橙色。加入三茶匙活性炭。混合之后，通过硅藻土床过滤溶液。真空浓缩滤液，从而产生浅黄色油状物(20.96g，89％)。

HPLC-MS m/z：327(M+1)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)δ3.67(s，3H)，3.19(t，2H)，2.30(t，2H)，1.74-1.89(m，2H)，1.53-1.70(m，2H)，1.34-1.46(m，2H)，1.28(br，10H)。

步骤3：4-(10-甲氧羰基癸基)苯甲酸叔丁酯

将所有玻璃器具在使用之间进行干燥。THF通过分子筛进行干燥。LiCl在150℃下干燥1小时，然后储存在封闭瓶中。所有的反应溶液均在氮气下制备，并且溶液的转移均是通过注射器进行的。将4-碘代苯甲酸叔丁酯(1.2g，3.95mmol)溶于THF(3ml)中并冷却到-30℃。在5分钟的时间段内加入异丙基氯化镁(4.34mmol，2M，在THF中)，将溶液在-18℃到-25℃的温度范围内搅拌1小时。将溶液冷却到-22℃，然后加入CuCN(0.389g，4.34mmol)和LiCl(0.368g，8.68mmol)在THF(4.2ml)中的混合物。停止冷却反应容器并使其升温到室温(约10分钟)。加入三甲基亚磷酸酯(0.95mL)，在室温下搅拌5分钟之后，加入THF(3ml)中的11-碘代-十一烷酸甲酯(1.0g，3.16mmol)溶液。将溶液在室温下混合16小时。加入饱和NH₄Cl(3ml)，并将溶液倾入水(60mL)中。用AcOEt(3×35ml)萃取溶液。合并有机萃取物，并用水(30mL)洗涤，使用一些饱和NaCl促进相分离。真空除去溶剂，从而产生两段残余物。加入AcOEt(约2ml)并且轻轻旋转烧瓶。不是所有的粘稠白色残余物都会溶解。将溶解的部分加入到氧化硅柱(50g)上并用AcOEt:庚烷1:11进行洗脱。真空浓缩适当的级份，从而产生油状物(1.25g)。将该油状物溶于丙酮(30mL)中，加入哌啶(1mL)。加入NaI(0.8g)，搅拌混合物并回流16小时。真空浓缩混合物，并且在AcOEt(50mL)和1N HCl(25mL)之间分层。用1N的HCl(2x25mL)洗涤有机相，通过MgSO₄干燥并且真空浓缩，从而产生无色油状物(1.1g)。将产物通过快速色谱(洗脱液：AcOEt:庚烷1:11，150g氧化硅)进行纯化，从而产生无色油状物(0.72g，61％)。

HPLC-MSm/z：399(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.90(d，2H)，7.21(d，2H)，3.66(s，3H)，2.64(t，2H)，2.30(t，2H)，1.48-1.70(m，13H)，1.27(br，12H)。

步骤4：4-(10-羧基癸基)苯甲酸叔丁酯

该化合物是用与制备4-(9-羧基壬氧基)苯甲酸叔丁酯所使用的方法类似的方式制备的，从而产生白色固体(0.68g)。

HPLC-MS m/z：385(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，300MHz)δ7.90(d，2H)，7.21(d，2H)，2.64(t，2H)，2.34(t，2H)，1.53-1.71(m，13H)，1.28(br，12H)。

步骤5：4-[10-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)癸基]苯甲酸叔丁酯

该化合物是用与制备4-[9-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯所使用的方法类似的方式制备的。

HPLC-MSm/z：482(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.89(d，2H)，7.21(d，2H)，2.76-2.93(m，4H)，2.54-2.68(m，2H)，1.67-1.81(M，2H)，1.52-1.66(m，11H)，1.35-1.43(M，2H)，1.19-1.35(br，10H)。

步骤6：4-[10-(3-羧基-丙基氨基甲酰基)癸基]苯甲酸叔丁酯

将4-[10-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)癸基]苯甲酸叔丁酯(300mg，0.65mmol)溶于DMF(3ml)和4-氨基丁酸(67mg，0.65mmol)中。混合物在氮气下搅拌16小时。真空除去溶剂并加入AcOEt(35ml)。用0.2N的HCl和水(每次15ml)洗涤溶液。向有机相中加入饱和NaHCO₃(未计划的)。加入DCM(50ml)。除去一些有机相并向水相中加入DCM(100ml)，放置过夜。将混合物在冰上冷却，并且用4N的HCl将pH调节到1.9。分离有机相，通过MgSO₄进行干燥并真空浓缩，从而产生油状物(220mg，产率76％)。

HPLC-MS m/z：470(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.89(d，2H)，7.21(d，2H)，5.79(br，1H)，3.27-3.40(m，2H)，2.64(t，2H)，2.40(t，2H)，2.18(t，2H)，1.78-1.91(m，2H)，1.51-1.61(m，13H)，1.35-1.43(M，2H)，1.17-1.36(br，12H)。

步骤7：4-{10-[3-(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基氧基羰基)丙基氨基甲酰基]癸基}苯甲酸叔丁酯

该化合物是用与制备4-[9-(2，5-二氧代吡咯烷-1-基氧基羰基)壬氧基]苯甲酸叔丁酯所使用的方法类似的方式制备的，除了使用TSTU代替HSTU以外。沉淀(DCM/庚烷)产生了白色晶体(180mg，产率70％)。

HPLC-MS m/z：568(M+23)。

¹H-NMR(CDCl₃，400MHz)δ7.89(d，2H)，7.21(d，2H)，5.83(br，1H)，3.30-3.43(m，2H)，2.85(br，4H)，2.57-2.73(m，4H)，2.15(t，2H)，1.92-2.07(m，2H)，1.56-1.64(m，13H)，1.18-1.36(br，12H)。

步骤8：Nε ^B29 -4-[11-(4-羧基苯基)十一烷酰基氨基]丁酰基desB30人胰岛素

该化合物是用与实施例9的制备中所使用的方法类似的方式制备的，共制备得到30mg产物。

MALDI-MS(α-氰基-4-羟基苯乙烯酸)m/z：6067(M＝6080，对照标准(M＝5706)显示M-13)。

HPLC-MS m/z：1520.9((M+4)/4＝1521)。

实施例11

Nε ^B29 -(3-(3-{4-[3-(7-羧基庚酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)-丙酰基-γ-谷氨酰胺)desB30人胰岛素的合成

步骤1：N-{3-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-丁氧基]-丙基}琥珀酰胺酸

将1-(叔丁氧基羰基氨基)-4，9-二氧代-12-十二胺(5.0g，16.45mmol)溶于THF(30mL)中，加入乙腈(10mL)中的琥珀酸酐(1.81g，18.1mmol)并且将混合物加热到60℃持续4小时，接着在室温下搅拌过夜。

将混合物蒸发至干燥并加入EtAc(50mL)。

用HCl(0.1M)洗涤EtAc相3次，用MgSO₄进行干燥，然后将有机相蒸干，从而给出5.86g(88％)粘稠油状物。

LCMS：Rt2.86min；m/z(M+1)405。计算值：405。

该产物可以不经过进一步纯化而使用。

步骤2：辛二酸叔丁酯2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯

将辛二酸单叔丁酯(3.14g，13.63mmol)溶于THF(100mL)中。加入TSTU(4.9g，16.3mmol)并用DIPEA(2.85mL)将pH调节到8.5。

在氮气下将混合物搅拌过夜，蒸干，溶于EtAc(50mL)，接着用HCl(0.1M)萃取2次。有机相用MgSO₄进行干燥，过滤并蒸发，产生浅黄色油状物(5g，含有少量溶剂)。

LCMS：Rt6.56min；m/z(M+1)328。计算值：328。

步骤3：7-(3-{4-[3-(3-羧基丙酰基氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)庚酸叔丁酯

将N-{3-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基丙氧基)-丁氧基]-丙基}琥珀酰胺酸(4.60g，11.37mmol)与TFA(20mL)在室温下搅拌60分钟，蒸发后，残余物用DCM(30mL×2)进行汽提并蒸干。

将所产生的油状物溶解在乙腈(30mL)中，并加入DMF(20mL)中的辛二酸叔丁酯2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(4.46g，13.6mmol)。

用DIPEA将pH调节到8.5并且将混合物在氮气下搅拌过夜。接着将混合物蒸发至干燥并溶于EtOAc(50mL)中。EtOAc相用HCl(0.1M)萃取3次，通过硫酸镁干燥有机层，过滤并蒸发，从而产生浅黄色结晶油状物(6.5g，含有溶剂残余物)。

LCMS：Rt4.31min；m/z(M+1)517。计算值：517。

该产物可以不经过进一步纯化而使用。

步骤4：7-[3-(4-{3-[3-((S)-1-氨基甲酰基-3-羧基丙基氨基甲酰基) 丙酰基氨基]丙氧基}丁氧基)丙基氨基甲酰基]庚酸叔丁酯

将步骤3的粗产物7-(3-{4-[3-(3-羧基丙酰基氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)庚酸叔丁酯(2.4g)溶于THF(60mL)中，并加入TSTU(2，11g，6.97mmol)和DMF(10mL)，用DIPEA(0.8mL)将pH调节到8.2。混合物在氮气下搅拌过夜。

蒸发混合物并将残余物溶于EtOAc，用HCl(0.1M)萃取3次。有机层用硫酸镁进行干燥，过滤并且蒸发滤液，从而给出3.2g油状物。

LCMS：Rt4.57min；m/z614，相当于活性酸。

将该粗产物溶于乙腈(40mL)并加入L-谷氨酸酰胺(0.6g，4.1mmol)和DMF(5mL)，用DIPEA(1.4mL)将pH调节到8.2。

将混合物在室温下搅拌过夜；过滤接着进行蒸发，从而得到粘稠黄色油状物。

按照如上所述的方法将其在EtOAc和Cl(0.1M)之间进行萃取，蒸发后所产生的干燥EtOAc层给出1.66g粗产物。

LCMS：Rt3.62min；m/z(M+1)645。粗产物通过制备HPLC进行纯化，使用乙腈/水/0.1％TFA作为洗脱液，在C18柱(Jones，Kromasil RP185μm15×225mm)上进行。梯度：0.0-10.0分钟35％乙腈A；10.0-30.0分钟35-90％A；收集16-18分钟的级份中的产物。蒸发合并的级份，从而产生期望的产物(1.0g)。LCMS：Rt3.59min；m/z(M+1)645，计算值：645。

步骤5：Nε ^B29 -(3-(3-{4-[3-(7-羧基庚酰氨基)丙氧基]丁氧基}丙基氨基甲酰基)丙酰基-γ-L-谷氨酰胺)desB30人胰岛素

将步骤4的7-[3-(4-{3-[3-((S)-1-氨基甲酰基-3-羧基丙基氨基甲酰基)丙酰基氨基]丙氧基}丁氧基)-丙基氨基甲酰基]庚酸叔丁酯(1.0g，1.55mmol)溶于THF(20mL)中，加入TSTU(0.51g，1.7mmol)并用DIPEA(0.27mL)将pH调节到>8。

将混合物在氮气下搅拌过夜。蒸发，然后在EtOAc和HCl(0.1M)之间进行萃取，干燥有机相(MgSO₄)，接着蒸干，从而给出21mg油状物，LCMS：Rt.4.34min，m/z742。

将该粗产物溶于乙腈(10mL)，用Na₂CO₃(0.1M)将pH调节到8，并且加入到溶于Na₂CO₃溶液(15mL，pH10.2)中的desB30人胰岛素(1g)溶液中。

将混合物在氮气和室温下搅拌1小时。然后通过HCl(2M)的方式将pH调节到5.4，从而产生沉淀。将混合物过滤，滤液冻干，并将沉淀在真空中干燥过夜。

两个组分都在Gilson上进行纯化，纯化是使用乙腈/水/0.1％的TFA作为洗脱液在C18柱(Jones，Kromasil RP185μm15×225mm)上进行的。

梯度：0.0-5.0分钟35％乙腈(A)；5.0-25.0分钟35-90％A；收集12-15分钟的级份中的产物。蒸发合并的级份，再次在水中溶解，并冻干从而产生27mg期望的产物。

LCMS：Rt.7.76min，m/z1570。

MALDI-MS(sinnapinic acid)：6277；C₂₈₀H₄₂₂N₆₈O₈₄S₆计算值为6277。

实施例12

Nε ^B29 -ω-羧基-十三烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十四烷二酸和γ-氨基-丁酸以类似于实施例1的方式制备的。

LCMS6032.1，C₂₇₁H₄₀₇N₆₅O₇₉S₆计算值为6032.0。

实施例13

Nε ^B29 -ω-羧基-十一烷酰基-δ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十二烷二酸和γ-氨基-丁酸以类似于实施例1的方式制备的。

LCMS6003.8，C₂₆₉H₄₀₃N₆₅O₇₉S₆计算值为6004.0。

实施例14

Nε ^B29 -ω-羧基-十四烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素的合成

该化合物是由十五烷二酸和γ-氨基-丁酸以类似于实施例1的方式制备的。

LCMS6045.6，C₂₇₂H₄₀₉N₆₅O₇₉S₆计算值为6046.1。

实施例15

Nε ^B29 -{4-[10-(4-羧基-苯氧基)-癸酰基氨基]-丁酰基}desB30胰岛素的合成

该化合物是由4-(9-甲氧基羰基壬氧基)苯甲酸叔丁酯以类似于实施例9和10的方式制备的。

LCMS：6095.6，C₂₇₆H₄₀₉N₆₅O₇₉S₆计算值为6094.1。

实施例16

Nε ^B29 -{4-[(14-羧基-十四烷酰基氨基)-甲基]-苯甲酰基}desB30胰岛素的合成

该化合物是由4-氨基甲基苯甲酸以类似于实施例1的方式制备的。LCMS：6082.0，C₂₇₅H₄₀₆N₆₆O₈₁S₆计算值为6082.1。

实施例17

Nε ^B29 -[16-(4-羧基-苯氧基)-十六烷酰基]desB30胰岛素的合成

步骤1：16-溴代十六烷酸甲酯

将16-溴代十六烷酸(6g，17.9mmol)溶于甲醇(35mL)、甲苯(100mL)和三甲基邻甲酸酯(20mL)中。加入Amberlyst15并且将混合物在氮气下在55℃下搅拌16小时。浓缩混合物，并溶于甲醇(大约50mL)和DCM(30mL)中。滤除树脂，浓缩滤液。用甲醇将体积增加到大约40mL。冷却产生晶体，将其过滤，用冷甲醇洗涤并且干燥，从而产生白色结晶(5.61g，产率90％)。

¹H-NMR(DMSO，300MHz)3.57(s，3H)，3.52(t，2H)，2.28(t，2H)，1.78(m，2H)，1.50(m，2H)，1.37(m，2H)。

剩余的步骤按照类似实施例9的方式进行。

LCMS：6081.2，C₂₇₆H₄₁₀N₆₄O₇₉S₆计算值为6081.1。

实施例18

Nε ^B29 -{4-[(15-羧基十五烷酰基氨基)苯甲酰基]-desB30人胰岛素的合成

步骤1：4-(15-叔丁氧基羰基十五烷酰基氨基)-苯甲酸

将单叔丁基十六烷二酸酯十六烷二酸(400mg，1.17mmol)溶于NMP(6ml)中。加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二酰亚胺盐酸盐(223mg，1.17mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(156mg，1.17mmol)，并将混合物加热到50℃持续90分钟。加入4-氨基苯甲酸(320mg，2.34mmol)和DIEA(0.6mL，3.51mmol)并且将混合物在氮气流下搅拌过夜。将混合物转移并在饱和NaHCO₃水溶液(50mL)和二乙醚(100mL)之间进行分离。加入NaHSO₄(50mL，10％在水中)并且分离有机相，干燥(MgSO₄)并真空除去溶剂。将粗产物从乙醇中进行重结晶，从而给出4-(15-叔丁氧基羰基十五烷酰基氨基)-苯甲酸。

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ：10.18(s，1H)，7.87(d，2H)，7.69(d，2H)，2.33(t，2H)，2.15(t，2H)，1.58(t，2H)，1.46(t，2H)，1.38(s，9H)m1.31-1.20(m，20H)。

步骤2：4-(15-叔丁氧基羰基-十五烷酰基氨基)-苯甲酸2，5-二氧代- 吡咯烷-1-基酯

类似于上述方式，使用TSTU将4-(15-叔丁氧基羰基十五烷酰基氨基)-苯甲酸(29mg，0.063mmol)转化成琥珀酰亚胺基酯。

HPLC-MS，m/z＝559(M+23，M+Na)。

步骤3：Nε ^B29 -{4-[(15-羧基十五烷酰基氨基)苯甲酰基]-desB30人胰岛素

将DesB30人胰岛素(355mg，0.062mmol)溶于DMSO(3.5mL)中，加入三乙胺(0.622mmol，0.087mL)。将4-(15-叔丁氧基羰基-十五烷酰基氨基)-苯甲酸2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(28.3mg，0.051mmol)溶于DMSO(0.5mL并且是加入的)中。在室温下将混合物小心搅拌30分钟。通过冰浴冷却将混合物冷冻并加入水(7mL)，在室温下放置混合物直到结冻的混合物溶解。使用1N的HCl将pH调节到pH＝5.3并通过离心分离沉淀，水洗一次接着离心分离。加入三氟乙酸(15mL)并将混合物搅拌30分钟，倾倒入二乙醚(50mL)中，同时在冰浴上保持冷却。通过离心分离粗产物并溶解在20％EtOH中的、pH为7.3的10mM TRIS+15mM(NH₄)₂SO₄中，并且在KTA纯化器上使用反相HPLC，Jupiter5269，C4250/20mm，15M，300进行纯化。缓冲液由A-缓冲液和B-缓冲液所组成，A-缓冲液为在20％EtOH中的、pH为7.3的10mM TRIS+15mM(NH₄)₂SO₄，B-缓冲液为80％的EtOH。产物用梯度15-60％B以8ml/min进行洗脱。将pH调节到5.2，收集含有产物的级份。通过离心分离和冻干，分离得到Nε^B29-{4-[(15-羧基十五烷酰基氨基)苯甲酰基]-desB30人胰岛素。

LCMS：6092.0，C₂₇₆H₄₀₉N₆₅O₇₉S₆计算值为6094.1。

实施例19

Nε ^B29 -{4-[(15-羧基-十五烷酰基氨基)-甲基]-苯甲酰基}-desB30胰岛素的合成

步骤1：4-[(15-叔丁氧基羰基十五烷酰基氨基)甲基]苯甲酸

将十六烷二酸叔丁基酯2，5-二氧代-吡咯烷-1-基酯(370mg，0.842mmol)溶于NMP(8mL)中，加入4-氨基甲基苯甲酸(127，2mg，0.842mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜，接着在50℃下加热2小时。冷却到室温后，将混合物倾倒入水中。通过过滤分离产物，干燥，并在不进一步纯化的情况下用于下一步骤。

¹H-NMR(DMSO-d₆)(选定的信号)δ：7.88(d，2H)，7.34(d，2H)，4.31(d，2H)，2.15(m，4H)，1.47(m，4H)，1.38(s，9H)，1.23(br s，2H)，1.38(s，9H)。

HPLC-MS：m/z＝498(M+Na)。

步骤2：Nε ^B29 -{4-[(15-羧基-十五烷酰基氨基)-甲基]-苯甲酰基}-desB30胰岛素

按照类似于以上所述的方式，将4-[(15-叔-丁氧基羰基十五烷酰基氨基)甲基]苯甲酸转化成琥珀酰亚胺基酯并与DesB30人胰岛素进行反应。产物在KTA纯化器上使用反相HPLC，Jupiter5269，C4250/20mm，15M，300进行纯化。缓冲液由A-缓冲液和B-缓冲液所组成，A-缓冲液为在20％EtOH中的、pH为7.3的10mM TRIS+15mM(NH₄)₂SO₄，B-缓冲液为80％的EtOH。产物用梯度15-60％B以8ml/min进行洗脱。接着用RP-HPLC在Waters Prep LC2000上用C18，5cm×20cm进行纯化，流速为20ml/min，使用乙腈/水36-42％的梯度，含有0.1％的TFA。收集含有产物的级份并冻干。向冻干的材料中加入水(7.2mL)并用1N+0.1N NaOH将pH调节到8.98。用0.1N的HCl将pH调回到5.2-5.5。沉淀产物，通过离心进行分离并冻干，从而给出标题化合物。

LCMS6108.0，C₂₇₇H₄₁₁N₆₅O₇₉S₆₆108.1。

实施例20

长效和短效胰岛素的叔水性、蛋白亲合性、自身结合性和混溶性本发明胰岛素衍生物的自身结合性分析

使用SEC(体积排阻色谱)分析本发明胰岛素衍生物自身结合成大的但可溶的复合物的能力。

柱： Superose^TM6PC3.2/30，CV＝2.4ml

(Amerham Biosciences)

温度： 37℃

SEC缓冲液： 140mM NaCl，10mM TrisHCl，0.01％NaN₃，pH7.5

进样体积： 20μl

流速： 0.05ml/min

运行时间： 60分钟，并且用另外的100分钟进行平衡

为了进行该分析，本发明的胰岛素衍生物是在溶液中的，所述溶液由0.6mM衍生物，2.1Zn²⁺/六聚体，16mM苯酚，7mM磷酸盐pH7.8组成。然后将衍生物的保留时间与以下标准分子的保留时间进行比较：蓝色右旋糖苷(>5MDa，K_AV0.0)，甲状腺球蛋白(669kDa，K_AV0.28)，铁蛋白(440kDa，K_AV0.39)，卵清蛋白(44.5kDa，K_AV0.56)，核糖核酸酶(13.7kDa，K_AV0.69)以及第二对照白蛋白(66kDa，K_AV0.53)，Co(III)胰岛素-六聚体(35kDa，K_AV0.61)，和单体胰岛素X2(6kDa，K_AV0.73)。

使用如下等式确定衍生物的K_av：

K_av＝(t-t₀)/(V_t/(f+t_d-t₀))

其中t是给定峰的保留时间，t₀是蓝色右旋糖酐的保留时间，V_t是总柱体积(这里为2.4ml)，f是流量(这里为0.04ml/min)，并且t_d是系统中没有柱的蓝色右旋糖酐的保留时间。

K_av值表示衍生物自身结合的程度，即类似于Co(III)胰岛素六聚体和X2胰岛素单体K_av的大的K_av表示衍生物形成大的自身结合复合物的倾向较低或者没有，而接近于零甚至为负值的非常小的K_av表示衍生物自身结合成大且可溶的复合物的趋势很大。

根据本发明的胰岛素衍生物的疏水性数据

本发明胰岛素衍生物相对于人胰岛素的疏水性(疏水指数)k′_相对，是在LiChrosorb RP18(5μm，250×4mm)HPLC柱上通过40℃下的无梯度洗脱而测定的，洗脱使用A)和B)的混合物作为洗脱液，其中A)为0.1M的磷酸钠缓冲液，pH7.3，含有10％乙腈，B)为50％的乙腈水溶液。通过洗脱液在214nm下的UV吸收对洗脱进行监测。通过注射0.1mM的硝酸钠确定空白时间t₀。通过改变A和B溶液之间的比例将人胰岛素的保留时间t_人调节到至少2t₀。k′_相对＝(t_衍生物-t₀)/(t_人-t₀)。多个根据本发明胰岛素衍生物的k′_相对在表1中给出。

人血清白蛋白的亲合实验

在Minileak粒子上固定并且在23℃下测量125I-TyrA14-模拟人血清白蛋白的相对结合常数(detemir＝1，在盐缓冲液中)。

通过用体积排阻色谱分析胰岛素混合物而获得的长效胰岛素和短效胰岛素的混溶性：

SEC：天冬胰岛素(3Zn/6胰岛素，甘油1.6％，16mM苯酚和16mM间-甲酚，氯化钠10mM，磷酸盐7mM，pH7.4)和长效胰岛素(2.1或6Zn/6胰岛素)30:70的混溶性，其是通过收集来自SEC(如上所述)的级份并通过HPLC定量分别存在于高分子量级份(级份2，MW>HAS)和低分子量级份(级份3，MW＝HAS)中的长效和速效胰岛素而测量的。

在延迟后16分钟的地方收集四个级份，其中级份2[16-32分钟](1号峰)含有大于白蛋白(32分钟，相当于K_AV0.46)的结合形式，并且级份3(2号峰)含有双六聚、六聚、二聚和单聚形式的胰岛素。

HPLC：Zorbax Eclipse XDB-C182.1*15mm(1.8μm)上的反相色谱，使用缓冲液A：0.2M硫酸钠，0.04M磷酸钠，10％乙腈，pH7.2和缓冲液B：70％乙腈在30℃进行梯度洗脱，洗脱梯度为4.5分钟内19-34％B的线性梯度，在5分钟时迅速恢复到起始条件，运行时间为7分钟，流量为0.5ml/min.，进样体积为14μL，UV检测在276nm进行，两种类似物都使用609μM的Insulin Aspart参照物。

化合物	相对于人胰岛素的疏水性	相对于人胰岛素的胰岛素受体亲合性	相对于胰岛素detemir的人血清白蛋白结合性	自身结合：Kav(峰面积的％)
					实施例1	++1.366	++37％	++1.9	+++0.0(87％)0.74(13％)
实施例2	++1.933	++35％	++2.2	+++0.0(94％)0.75(6％)
					实施例3	++1.095	++30％	+0.37	+++0.08(76％)0.74(24％)
实施例4	+++0.716	+++52％	+0.069	++0.15(77％)0.74(23％)
					实施例5	++1.75	++30％	++1.93	+++0.02(93％)0.76(7％)
实施例6	++1.617	++33％	++1.36	+++0.01(90％)
					实施例7	++2.936	++37％	+++2.62	+++0.01(90％).
实施例8	++2.461	++38％	++1.95	n.a
					实施例9	+++0.738	++58％	+0.06	+++0.05(90％)0.75(10％)

实施例10	++1.803	++43％	+0.33	++0.26(48％)
					实施例11	+++0.435	++43％	n.a.	n.a.
实施例12	+++0.989	+++49％	+0.25	++0.17(44％)0.7(56％)
					实施例13	+++0.552	+++59％	+0.03	0.69(100％)
实施例14	++1.61	++48％	n.a.	n.a.
					实施例15	++1.09	++47％	+0.14	++0.28(42％)0.72(58％)
实施例16	++2.21	+++88％	++1.9	++0.3(28％)0.52(72％)
					实施例17	+15.9	++12％	+++2.97	++0.12(87％)0.79(13％)
实施例18	++4.16	++36％	+++5.83	++0.33(24％)0.5(76％)
					实施例19	++3.73	++42％	+++527	++0.33(24％)0.51(76％)

表格说明：

相对于人胰岛素的疏水性：k’_相对<1：+++，1-10：++，>10：+(HI＝1)

相对于人胰岛素的胰岛素受体亲合性：<5％：+，5-50％：++，>50％：+++

相对于胰岛素detemir的人血清白蛋白亲合性：<0.5：+，0.5-2：++，>2：+++

自身结合性：K_av<0.1：+++，K_av<0.55：++和K_av0.55：+

人血清白蛋白的K_av＝0.55，人胰岛素Co(III)六聚体的K_av＝0.63，

单聚胰岛素类似物X2的K_av＝0.72。

n.a.＝未分析。

实施例21：

对猪用胰岛素制品进行皮下注射给药后的血糖葡萄糖片钳 (Euglycaemic glucose clamp)

雌性猪，60-90kg，禁食18小时。在实验期间猪可以在它们的围栏中自由活动。将胰岛素制剂通过皮下注射进行给药，根据剂量的大小，其经常被分成两次。通过速度可变地静脉注射20％的葡萄糖溶液将每个猪的血糖(euglycaemic)保持在其单独禁食的葡萄糖水平直到24小时。所述灌输通过插入颈静脉的导管给予。根据在频繁血浆葡萄糖监视期间所观察到的血浆中葡萄糖浓度的变化，根据经验进行葡萄糖注射的必要调整。每15-30分钟，将血样收集在EDTA玻璃管中，为了葡萄糖和胰岛素的测量而分离血浆。在采血1.5分钟之内用YSI(Yellow Springs Instruments)葡萄糖分析仪(葡萄糖氧化酶法)测定葡萄糖。确定各个胰岛素制品的平均葡萄糖注射速率(GIR)曲线和平均血浆胰岛素曲线。(图2-4显示了平均值±SEM)。

药理学方法

实验(I)

本发明胰岛素衍生物的胰岛素受体结合

通过SPA实验(闪烁近似测定实验)微量滴定板抗体俘获实验测定本发明胰岛素类似物对人胰岛素受体的亲合性。将SPA-PVT抗体结合珠，抗-小鼠试剂(Amersham Biosciences，Cat No.PRNQ0017)与25ml结合缓冲液(100mM HEPES pH7.8；100mM氯化钠，10mMMgSO₄，0.025％Tween-20)混合。用于单一Packard Optiplate(PackardNo.6005190)的试剂混合物是由2.4μl的1:5000稀释的纯化重组人胰岛素受体-外显子11，相当于5000cpm每100μl试剂混合物量的A14Tyr[¹²⁵I]-人胰岛素储备溶液，12μl的1:1000的F12抗体稀释液，3ml的SPA-珠以及结合缓冲液所组成，总计12ml。然后加入总计100μl，由合适的样品制备的一系列稀释液。接着向该稀释液系列中加入100μl试剂混合物，将样品保温16小时，同时轻轻地振摇。然后通过离心分离1分钟分离各相，并在Topcounter中对平板计数。使用GraphPad Prism2.01(GraphPad Software，San Diego，CA)中的非线性回归算法拟合结合数据。

实验(II)

本发明胰岛素衍生物相对于人胰岛素的功效

将在实验当天称重为238-383g的Spraguo Dawley雄性大鼠用于片钳实验。使大鼠在受控的环境条件下自由摄食并在片钳实验前禁食过夜(从3pm开始)。

实验方案

在实施外科手术前使大鼠适应动物设施至少1周。在片钳实验(clamp experiment)前约1周，在氟烷麻醉条件下将Tygon导管插入颈静脉(用于注射)和颈动脉(用于采集血样)，由颈静脉或颈动脉抽出并固定在颈背上。手术后对大鼠给予Streptocilin vet.(Boehringerlngelheira；0.15ml/大鼠，肌内)，并在恢复期过程中将其放入动物护理装置内(25℃)。为了获得止痛作用，在麻醉过程中给予Anorphln(0.06mg/大鼠，皮下)，并在从麻醉状态完全恢复后(2-3小时)给予卡洛芬(1.5mg/kg，皮下)，并再每天一次给予2天。

采用来自(1)的片钳技术。将在实验当天上午7时，对禁食过夜(从前一天的下午3时开始)的大鼠称重，并与取样注射器和注射系统(Hatvard22BaSiC泵，Harvard，和Perfoctum皮下玻璃注射器，Aldrich)连接，然后将其放入各自的片钳笼，在那里使它们休息约45分钟，此后开始实验。在整个实验过程中大鼠能够在其常用的衬垫上自由运动，并可以自由饮水。30分钟的基础期后，在所述基础期过程中每隔10分钟测定一次血糖水平，以恒定速率注射(静脉内)测试的胰岛素衍生物和人胰岛素(1剂量水平/大鼠，n＝6-7/剂量水平)300分钟。自始至终每隔10分钟测定一次血糖水平，并相应地调节对20％葡萄糖水溶液的注射从而维持血糖(euglyceamia)。将来自每只大鼠的重悬浮红细胞样品合并，并通过颈动脉导管以约1/2ml的体积返回。

在每一实验天时，在片钳实验前和该实验结束时获取测试各胰岛素衍生物溶液和人胰岛素溶液的样品，并通过HPLC确定肽的浓度。在研究前和研究结束时的相关时间点处测定大鼠胰岛素和C-肽以及测试胰岛素衍生物和人胰岛素的血浆浓度。在实验结束时使用超剂量的戊巴比妥处死大鼠。

测试的化合物和剂量：由储备溶液稀释得到待测试的胰岛素，所述储备溶液含有在5mM磷酸盐中的、pH为7.7的97μM胰岛素衍生物。备用溶液的最终浓度为0.45μM胰岛素衍生物，5mM磷酸盐，100mM氯化钠，0.007％聚山梨酸酯20。pH为7.7，静脉内输注速率为15和20pmol.min^-1.kg^-1。

在类似介质中配制用作参比化合物的人胰岛素的储备溶液，并以6、15或30pmol.min^-1.kg^-1的速度进行静脉内注射。

将两种储备溶液储存在-20℃下，并在使用前于4℃下融化过夜。在转移到注射用注射器前15分钟时，将这些溶液轻轻地上下翻转几次。

实验(II)

本发明胰岛素衍生物在猪体内的T_50％的测定

T₅₀％是当50％注射量的A14Tyr[¹²⁵I]标记的测试胰岛素衍生物从注射部位消失时的时间，其是使用外部γ-计数器测定的。

遵循实验室动物的护理原则，使用特定的不含病原体的LYYD，非糖尿病型雌性猪，即Danish Landrace、Yorkshire和Duroc的杂交猪(Holmenlund，Haarloev，Denmark)进行药动学和药效学研究。这些猪是有意识的，具有4-5个月的月龄且体重为70-95kg。在实验前使动物禁食过夜18小时。

如上所述地，将用¹²⁵I在Tyr^A14上标记的胰岛素衍生物的配制制剂经皮下注入猪中(Ribel，U.，Jrgensen，K，Brange，J，和Henriksen，U.The pig as a model for subcutaneous insulin absorption in man.Serrano-Rios，M and Lefèbvre，P.J.891-896.1985.Amsterdam；NewYork；Oxford，Elsevier Science Publishers.1985(会刊))。

在实验开始时，将60nmol剂量的本发明胰岛素衍生物(测试化合物)和60nmol剂量的胰岛素detemir(均在Tyr A14上用¹²⁵I标记过)注射到每只猪颈部的两个不同部位上。

使用常规外部γ-计数法的改进方法监测放射标记从皮下注射部位上的消失(Ribel，U.Subcutaneous absorption of insulin analogues.Berger，M.和Gries，F.A.70-77(1993).Stuttgart；New York，Georg ThimeVerlag(会刊))。采用这种改进的方法，能够使用无线便携式装置(Scancys Laboratorieteknik，，DK-3500，Denmark)连续地测定放射性从皮下储存处的消失达数天之久。每隔1分钟测量一次，并将计数值用背景活性进行校准。

Claims

1.下式的胰岛素衍生物：

其中Ins是母体胰岛素部分，并且

Q₁-Q₂-[CH₂]_n-X₁-[CH₂]_n-Q₃-[CH₂]_n-X₂-[CH₂]_n-Q₄-[CH₂]_n-X₃-[CH₂]_n-Q₅-[CH₂]_n-Z是取代基，其中Ins通过Ins的A或B链中存在的Lys残基上的ε-氨基与取代基的Q₂中CO基之间的酰胺键连接到取代基上；

Q₁是键；

Q₂是-CO-(CR⁵R⁶)_1-6-NH-CO-,其中R⁵和R⁶为H；条件是Q₂中的胺与取代基的剩余部分形成键，则该胺必须通过羰基连接到取代基的剩余部分上；

Q₃为

-(CH₂)_m-，其中m是6到32的整数；

X₁为键；

Q₄、Q₅、X₂和X₃是键；

n为0；并且

Z是

-COOH；

及其任何Zn²⁺复合物。

2.根据权利要求1的胰岛素衍生物，其中Q₃是-(CH₂)_m-，其中m是8到20范围内的整数。

3.根据权利要求2的胰岛素衍生物，其中m是12、13、14、15或16。

4.根据权利要求1-3任一项的胰岛素衍生物，其中所述胰岛素衍生物选自：

N^εB29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

N^εB29-ω-羧基-十五烷酰基-β-丙氨酰基desB30人胰岛素，

N^εB29-ω-羧基-十五烷酰基-ε-氨基己酰基desB30人胰岛素，

N^εB29-ω-羧基-十五烷酰基-δ-氨基戊酰基desB30人胰岛素，

N^εB29-ω-羧基-十三烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素，

N^εB29-ω-羧基-十一烷酰基-δ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素和

N^εB29-ω-羧基-十四烷酰基-γ-氨基-丁酰基desB30人胰岛素。

5.一种用于需要治疗的患者中治疗糖尿病的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的权利要求1-4任一项的胰岛素衍生物以及药学上可接受的载体。

6.制备根据权利要求5的药物组合物的方法，其中按照每6个胰岛素衍生物分子至多10个锌原子比例将锌原子加入到药物组合物中。

7.根据权利要求1-4任一项的胰岛素衍生物在制备用于治疗糖尿病的药物中的应用。

8.一种根据权利要求1-4任一项的胰岛素衍生物与快速起效胰岛素类似物的混合物，所述快速起效胰岛素类似物选自AspB28人胰岛素、LysB28ProB29人胰岛素和LysB3GluB29人胰岛素。