CN101432287A

CN101432287A - 用作hsp90抑制剂的吡咯并嘧啶衍生物

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Publication number: CN101432287A
Application number: CNA2007800156499A
Authority: CN
Inventors: P·A·布拉夫; M·J·德赖斯代尔; N·G·M·戴维斯; N·N·福洛普; S·斯托克斯
Original assignee: Vernalis R&D Ltd
Current assignee: Vernalis R&D Ltd
Priority date: 2006-03-11
Filing date: 2007-03-09
Publication date: 2009-05-13
Also published as: ZA200808598B; GB0604944D0

Abstract

式(I)化合物具有HSP90抑制活性，因而适用于治疗癌症等疾病：式中，R₁是氢、氟、氯、溴、或式－X－Alk¹－(Z)_m－(Alk²)_n－Q的基团，其中X是－O－、－S－S(O)－、－SO₂－或－NH－，Z是－O－、－S－、－(C＝O)－、－(C＝S)－、－S(O)－、－SO₂－、－NR^A－、或者任一取向的－C(＝O)O－、－C(＝O)NR^A－、－C(＝S)NR^A－、－SO₂NR^A－、－NR^AC(＝O)－或－NR^ASO₂－，其中R^A是氢或C₁－C₆烷基，Alk¹和Alk²任选地被二价C₁－C₃亚烷基或C₂－C₃亚烯基所取代，m、n和p独立地是0或1，和Q是氢或任选取代的碳环或杂环基团；R₂是式－(Ar¹)_p－(Alk¹)_q－(Z)_r－(Alk²)_s－Q的基团，其中Ar¹是任选取代的芳基或杂芳基，Alk¹、Alk²、Z和Q如上所述，和p、q、r和s独立地是0或1；和R₃是氰基(－CN)、氟、氯、溴、一个或多个氢原子任选地被氟原子所取代的甲基、一个或多个氢原子任选地被氟原子所取代的乙基、环丙基、－OH、－CH₂OH、－C(＝O)NH₂、－C(＝O)CH₃或－NH₂。

Description

用作HSP90抑制剂的吡咯并嘧啶衍生物

本发明涉及具有HSP90抑制活性的取代的双环吡咯并嘧啶化合物，涉及该化合物在对抑制HSP90活性有反应的相关疾病如癌症治疗中的应用，还涉及包含该化合物的药物组合物。

发明背景

分子侣伴蛋白能维持蛋白质合适的折叠和构象，在调节蛋白质合成与降解之间的平衡具有关键作用。已证明它们对调节许多重要的细胞功能，例如细胞增殖和凋亡至关重要(Jolly和Morimoto，2000；Smith等，1998；Smith，2001)。

热激蛋白(Hsps)

当细胞接触许多环境应激，包括热激、醇、重金属和氧化应激时，可导致细胞蓄积许多侣伴蛋白，这些侣伴蛋白通常称为热激蛋白(Hsp)。诱导Hsps能保护细胞对抗最初的应激攻击，促进恢复和维持对应激的耐受状态。然而也很清楚，某些Hsp在正常无应激状态下也可通过调节生长期间重要细胞蛋白质的正确折叠、降解、定位和功能起着重要的分子侣伴蛋白作用。

Hsp存在许多多基因家族，各基因的产物在细胞表达、功能和定位上有所不同。根据分子量可分为Hsp70、Hsp90和Hsp27。人类获得的一些疾病可能是蛋白质错误折叠的结果(综述参见Tytell等，2001；Smith等，1998)。因此，开发能扰乱侣伴蛋白结构的疗法证明可能是有益的。在一些疾病中(如阿耳茨海默病、朊病毒病和亨廷顿病)，错误折叠的蛋白质可导致蛋白质凝集而引起神经变性疾病。并且，错误折叠的蛋白质可引起野生型蛋白质的功能丧失，导致细胞中分子和生理学功能失调。

Hsp也证明与癌症有关。例如，有证据表明Hsp表达差异可能与肿瘤进程的阶段有关(Martin等，2000；Conroy等，1996；Kawanishi等，1999；Jameel等，1992；Hoang等，2000；Lebeau等，1991)。由于Hsp90参与了多种关键的致癌路径，并且发现某些具有抗癌活性的天然产物靶向这种分子侣伴蛋白，提示抑制Hsp90的功能可用于治疗癌症。为此，第一类天然产物17AAG目前已进入II期临床试验。

Hsp90

Hsp90占细胞总蛋白质约1-2％。细胞中，它能与多种辅助蛋白(称为辅-侣伴蛋白)形成动态的多重蛋白复合物，这些辅助蛋白看来负责调节侣伴蛋白的功能。这是细胞存活所必需的，显示侣伴蛋白有双重功能(Young等，2001)。当细胞经受各种环境的细胞应激时，Hsp90的天然构象被改变后，通过与许多蛋白质相互作用而形成细胞应激反应的核心组分。环境应激，如热激、重金属或醇，导致局部蛋白质折叠展开。Hsp90(与其他侣伴蛋白一起)能结合这些展开的蛋白质，使其适当再折叠而防止非特异凝集(Smith等，1998)。此外，近年来的研究结果提示，Hsp90在缓冲对抗突变的作用中也起着一定的作用，推测是通过纠正突变蛋白质的不适当折叠(Rutherford和Lindquist，1998)。而且，Hsp90也具有重要的调控作用。在正常生理状态下，Hsp90与其内质网同系物GRP94一起，在细胞中起管家作用，维持许多对象蛋白的构象稳定和成熟。这些对象蛋白可细分为三组(a)甾体激素受体(例如雌激素受体、孕酮受体)(b)丝氨酸/苏氨酸或酪氨酸激酶(例如Her2、Raf-1、CDK4和Lck)和(c)看似不相关蛋白质的集合，例如突变蛋白p53与端粒酶hTERT催化亚基的集合。近年来还发现，Hsp90负责稳定和激活突变的激酶，而野生型激酶不是Hsp90的作用对象(例如，参见刊登da Rocha Dias等中的B-Raf故事，2005)。所有这些蛋白质在细胞的许多生理学和生物化学过程中都起着关键的调控作用。正不断鉴定到Hsp90作用的新对象蛋白质，参见http://www.picard.ch/downloads/Hsp90interactors.pdf，记载了迄今所知的多数对象。

人体中高度保守的Hsp90家族由四类基因组成，即胞液Hsp90α和Hsp90β同工型(Hickey等，1989)、内质网中的GRP94(Argon等，1999)和线粒体基质中的Hsp75/TRAP1(Felts等，2000)。除了亚细胞定位上的区别之外，关于Hsp90α/β、GRP94与TRAP1之间的功能差异的了解极少。最初报道提出某些对象蛋白由特定的Hsp90陪伴(例如，Her2仅由Grp94陪伴)看来是错误的。

Hsp90参与了许多对象蛋白和调节蛋白的一系列复杂相互作用(Smith，2001)。虽然仍待阐明其准确的分子细节，但过去几年进行的生物化学和X-射线晶体学研究(Prodromou等，1997；Stebbins等，1997)对Hsp90侣伴蛋白的功能提供了越来越深入的了解。

经过该问题的早期争论之后，现已明白Hsp90是ATP-依赖性分子侣伴蛋白(Prodromou等，1997)，其核苷酸结合域的二聚化是ATP水解所必需的，进而是侣伴蛋白功能所必需的(Prodromou等，2000a)。ATP结合导致形成环形二聚体结构，其中N末端结构域相互间紧密接触，导致称为“钳夹机制”的构象转换(Prodromou和Pearl，2000b)。这种构象转换部分地受到与Hsp90相关的各种辅-侣伴蛋白的调节(Siligardi等，2004)。

已知的Hsp90抑制剂

发现的第一类Hsp90抑制剂是苯醌安沙霉素类，包括化合物除莠霉素A和格尔德霉素。证明它们能够逆转v-Src癌基因转化成纤维细胞的恶性表型(Uehara等，1985)，然后在体外(Schulte等，1998)和体内动物模型(Supko等，1995)中显示具有强效抗肿瘤活性。

免疫沉淀反应和亲和基质研究表明，格尔德霉素的主要作用机制涉及与Hsp90结合(Whitesell等，1994；Schulte和Neckers，1998)。而且，X-射线晶体学研究发现，格尔德霉素竞争ATP结合位点而抑制Hsp90的内在ATP酶活性(Prodromou等，1997；Panaretou等，1998)。中断这种侣伴蛋白环(通过阻断ATP周转)可导致复合物中辅-侣伴蛋白p23丧失，靶向对象蛋白，使其经泛素蛋白酶体途径降解。17-烯丙基氨基，17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)能保留Hsp90的抑制活性，在细胞培养物和异种移植物模型中导致对象蛋白耗竭而产生抗肿瘤活性(Schulte等，1998；Kelland等，1999)，而且其肝脏毒性显著低于格尔德霉素(Page等，1997)。令人感兴趣的是，已证明17AAG对肿瘤细胞的活性比其对纯化的Hsp90的亲和力高得多。这就提示，肿瘤细胞(而不是非致瘤细胞)含有高亲和力构象的Hsp90，17AAG能与之更紧密地结合，而赋予Hsp90抑制剂对肿瘤的选择性(Kamal等，2003)。17AAG目前正处于II期临床试验中。

根赤壳菌素是大环类抗生素，能够逆转v-Src和v-Ha-Ras转化成纤维细胞的恶性表型(Kwon等，1992；Zhao等，1995)。已证明由于抑制Hsp90它能降解许多信号转导蛋白(Schulte等，1998)。X-射线晶体学数据证实，根赤壳菌素也结合Hsp90的N末端结构域而抑制内在ATP酶活性(Roe等，1998)。由于该化合物化学性质不稳定而致根赤壳菌素在体内缺乏抗肿瘤活性。

已知香豆素抗生素能结合细菌DNA回旋酶与Hsp90同源的ATP结合位点。香豆素、新生霉素能结合Hsp90的羧基末端，其结合位点与苯醌安沙霉素和根赤壳菌素结合N-末端不同(Marcu等，2000b)。然而，这仍能抑制Hsp90功能和降解许多Hsp90-侣伴蛋白的信号转导蛋白(Marcu等，2000a)。(结合)新生霉素后格尔德霉素不能结合Hsp90；这提示N末端与C末端域之间必然存在某种相互作用，此与两个末端位点对于Hsp90侣伴蛋白性能至关重要的观点相一致。

基于嘌呤的Hsp90抑制剂PU3能导致包括Her2在内的信号转导分子的降解，导致细胞周期停止和乳腺癌细胞分化(Chiosis等，2001)。近年研究发现了具有抗Her2活性和细胞生长抑制活性的其他基于嘌呤的化合物(Dymock等，2004；Kasibhatla等，2003；Llauger等，2005)。

专利公开WO 2004/050087，WO 2004/056782，WO 2004/072051，WO2004/096212，WO 2005/000300，WO 2005/021552，WO 2005/034950涉及Hsp90抑制剂。

Hsp90作为治疗靶标

由于Hsp90参与了在启动肿瘤表型过程中起着关键作用的许多信号转导途径的调节，以及发现了某些生物活性天然产物通过Hsp活性而发挥作用，目前正在评估分子侣伴蛋白Hsp90作为抗癌药物开发的新靶标(Neckers等，1999)。

格尔德霉素、17AAG和根赤壳菌素的主要作用机制包括结合Hsp90N-末端区域的ATP结合位点，导致Hsp90内在ATP酶活性的抑制(Prodromou等，1997；Stebbins等，1997；Panaretou等，1998)。

17AAG抑制Hsp90 ATP酶活性导致侣伴蛋白-对象蛋白复合物中p23的丧失而中断了侣伴蛋白环。这就导致能形成能靶向这些对象蛋白的Hsp-对象蛋白复合物形成，通过泛素蛋白酶体途径而降解(Neckers等，1999；Whitesell和Lindquist，2005)。用Hsp90抑制剂处理导致参与细胞增殖、细胞周期调节和凋亡、这些癌症发生的基础关键过程中的重要蛋白质(例如，Her2、Akt、雌激素受体和CDK4)选择性降解。

17AAG作为抗癌药的临床前研究已有很好的记载(Sausville等，2003)，目前正在进行II期临床试验。I期临床试验结果最近已发表(Banerji等，2005；Goetz等，2005；Ramanathan等，2005和Grem等，2005)。所有这些试验中，Banerji等进行的试验证明在大多数患者中用PD标记物的应答反应最大剂量为450mg/m2/周时活的了最佳效果，在两位患者中可能有抗肿瘤活性。

已证明抑制Hsp90功能可导致参与细胞增殖、细胞周期调节和凋亡、这些癌症发生的基础关键过程和常见的失调过程中的重要信号转导蛋白的选择性降解(Hostein等，2001)。开发可用于临床的针对该靶标的药物所以吸引人的基本原理是，能同时耗尽与转化表型相关的蛋白质，可获得强抗肿瘤效果，和实现对癌细胞的作用高于正常细胞的治疗效益。相信在细胞培养和动物模型中，Hsp90抑制的这些下游作用承担了Hsp90抑制剂的抗肿瘤活性(Schulte等，1998；Kelland等，1999)。

近年研究表明，Hsp90的乙酰化状态在控制侣伴蛋白环中也发挥了作用。利用小分子抑制剂或通过siRNA基因靶向抑制HDAC6可中断该侣伴蛋白环。这种处理导致对象蛋白以类似于小分子ATP位点抑制剂的方式降解(Kovacs等，2005；Aoyagi和Archer，2005)。

近年的报道(参见Cowen等，Science 309，2185(2005)和Heitman，Science 309，2175，2005)也表明，出现耐受抗真菌药的真菌分离株需要Hsp90，一旦产生持久耐药的菌株也需要Hsp。因此，Hsp90抑制剂能使耐受唑类抗真菌药(例如氟康唑)和较新药物如棘球白素的菌株重新敏感。

发明详述

一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

式中

R₁是氢、氟、氯、溴、或式(IA)的基团：

-X-Alk¹-(Z)_m-(Alk²)_n-Q (IA)

式中

X是-O-、-S--S(O)-、-SO₂-或-NH-，

Z是-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝S)-、-S(O)-、-SO₂-、-NR^A-、或者任一取向的-C(＝O)O-、-C(＝O)NR^A-、-C(＝S)NR^A-、-SO₂NR^A-、-NR^AC(＝O)-或-NR^ASO₂-，其中R^A是氢或C₁-C₆烷基，

Alk¹和Alk²任选地被二价C₁-C₃亚烷基或C₂-C₃亚烯基所取代，

m、n和p独立地是0或1，和

Q是氢或任选取代的碳环或杂环基团；

R₂是式(IB)的基团：

-(Ar¹)_p-(Alk¹)_q-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (IB)

式中

Ar¹是任选取代的芳基或杂芳基，

Alk¹、Alk²、Z和Q如式(IA)中所定义，和

p、q、r和s独立地是0或1；和

R₃是氰基(-CN)、氟、氯、溴、一个或多个氢原子任选地被氟原子所取代的甲基、一个或多个氢原子任选地被氟原子所取代的乙基、环丙基、-OH、-CH₂OH、-C(＝O)NH₂、-C(＝O)CH₃或-NH₂。

在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物、或其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物在制备用于抑制HSP90的体外或体内活性的组合物中的应用。

本发明还提供了治疗哺乳动物响应抑制HSP90活性的疾病的方法，该方法包括给予哺乳动物一定量如权利要求1所述的化合物以有效抑制所述HSP90活性。

本发明的体内应用和方法适用于治疗与HSP90活性相关的疾病，包括用于免疫抑制或治疗病毒疾病，耐药性真菌感染(因为HSP90抑制剂能重新敏化对唑类抗真菌药(例如氟康唑)以及较新的试剂如棘球白素耐药的菌株)，炎性疾病如类风湿性关节炎、哮喘、多发性硬化、I型糖尿病、狼疮、牛皮癣和炎性肠病；囊性纤维化病；血管新生-相关疾病如糖尿病视网膜病、血管瘤和子宫内膜异位；或用于保护正常细胞免于化疗诱导的毒性；或者不能凋亡是其潜在因素的疾病；或保护心脏和脑免于Hsp70升高导致的缺氧-缺血损伤；绵羊瘙痒病/CJD，亨廷顿病或阿耳茨海默病。尤其适用于治疗癌症。

本文所用术语“(C_a-C_b)烷基”(其中a和b是整数)指具有a-b个碳原子的直链或支链烷基。因此，当a为1，b为6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。

本文所用术语＂二价(C_a-C_b)亚烷基＂(其中a和b是整数)指具有a-b个碳原子和两个不饱和化学价的饱和烃链。

本文所用术语“(C_a-C_b)烯基”(其中a和b是整数)指具有至少一个适当时立体化学为E或Z的双键的具有a-b个碳原子的直链或支链烯基部分。该术语包括例如，乙烯基、烯丙基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。

本文所用术语＂二价(C_a-C_b)亚烯基＂指具有至少一个双键和两个不饱和化学价的具有a-b个碳原子的烃链。

本文所用术语＂环烷基＂指具有3-8个碳原子的饱和碳环基团，包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

本文所用术语＂环烯基＂指包含至少一个双键的具有3-8个碳原子的碳环基团，包括例如、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。

本文所用术语＂芳基＂指单环、双环或三环碳环芳族基团，包括与非芳族碳环或杂环稠合的芳族单环或双环碳环基团。该基团的例子是苯基、联苯基、萘基和下式基团：

式中，环A(i)任选地被取代，(ii)包含它所稠合的苯环碳的5或6元环，和(iii)具有至少一个杂原子O、S或N杂原子作为环原子。

本文所用术语＂碳环＂指环原子都是碳的环状基团，包括芳基、环烷基和环烯基。

本文所用术语＂杂芳基＂指包含一个或多个选自S、N和O的杂原子的单环、双环或三环芳族基团。这些基团的例子是噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。

本文所用术语＂杂环基＂或＂杂环＂包括上文限定的＂杂芳基＂，具体指包含一个或多个选自S、N和O的杂原子的单环、双环或三环非芳族基团，指包含一个或多个共价连接另一该基团或单环碳环基团的杂原子的单环非芳族基团构成的基团。该基团的例子是吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异噁唑基、苯并咪唑基、亚甲基二氧苯基、亚乙基二氧苯基、马来酰亚胺和琥珀酰亚胺基团。

除非说明书中另有说明，术语＂取代的＂可应用于本文任何部分，表示被至少一个取代基取代，所述取代基例如选自(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基(包括在碳环或杂环的相邻碳原子上的亚甲基二氧和亚乙基二氧取代)、羟基、羟基(C₁-C₆)烷基、巯基、巯基(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷硫基、具有3-6个环碳原子的单环碳环、具有5或6个环原子的单环杂环、卤素(包括氟和氯)、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、腈(-CN)、氧代、-COOH、-COOR^A、-COR^A、-SO₂R^A、-CONH₂、-SO₂NH₂、-CONHR^A、-SO₂NHR^A、-CONR^AR^B、-SO₂NR^AR^B、-NH₂、-NHR^A、-NR^AR^B、-OCONH₂、-OCONHR^A、-OCONR^AR^B、-NHCOR^A、-NHCOOR^A、-NRBCOOR^A、-NHSO₂OR^A、-NR^BSO₂OR^A、-NHCONH₂、-NR^ACONH₂、-NHCONHR^B、-NR^ACONHR^B、-NHCONR^AR^B或-NR^ACONR^AR^B，其中R^A和R^B独立地是(C₁-C₆)烷基。在任选的取代基包含烷基的情况下，该烷基可被3-6元单环碳环、或5或6元单环杂环基团所取代。在任选的取代基是或包含3-6元单环碳环、或5或6元单环杂环的情况下，该环本身可被任何上述非环状任选的取代基所取代。“任选的取代基”可以是上述内容中包含的取代基中的一种。

本文所用术语“盐”包括碱加成盐，酸加成盐和季铵盐。酸性的本发明化合物可与碱形成盐，包括药学上或兽药学上可接受的盐，所述碱包括：碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠和氢氧化钾；碱土金属氢氧化物，例如氢氧化钙、氢氧化钡和氢氧化镁；有机碱，例如N-乙基哌啶、二苄胺等。碱性的化合物(I)可与酸形成盐，包括药学上或兽药学上可接受的盐，所述酸包括无机酸，例如氢卤酸如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等；有机酸，例如醋酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸和对甲苯磺酸等。落在式(I)内的任何本文无限制参考的化合物都应解释为该化合物的参考形式，不论其是否是盐的形式。

合适的盐的综述参见Stahl和Wermuth的《药物盐的手册：性质、选择和应用》(Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use)(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。

与药物中使用的许多有机物一样，预计至少一些本发明的化合物可以结晶水合物和溶剂合物的形式重新获得。当然，这些水合物和溶剂合物仅仅是本发明活性化合物的特殊物理化学形式，因而构成本发明的一部分。落在式(I)内的任何本文无限制参考的化合物都应解释为该化合物的参考形式，不论其是否是水合物或溶剂合物的形式。本文所用术语“溶剂合物”用于描述包含本发明化合物和化学计量的一种或多种药学上可接受的溶剂分子如乙醇的分子复合物。所述溶剂是水时，采用术语“水合物”。

本发明化合物中存在的稠合嘧啶环中的氮可氧化形成N-氧化物。这些N-氧化物基本上保留了母体化合物的HSP90抑制活性，因而构成本发明的一部分。落在式(I)内的任何本文无限制参考的化合物都应解释为该化合物的参考形式，不论其是否是N-氧化物的形式。

因为不对称原子或旋转限制的存在，本发明考虑的化合物可以一种或多种立体异构体的形式存在，可以每个手性中心为R或S立体化学的许多立体异构体形式存在，或者以每个手性轴为R或S立体化学的阻转异构体形式存在。本发明包括所有这种对映异构体和非对映异构体以及它们的混合物。

式(I)化合物的所谓“前药”也落在本发明的范围内。因此，某些本身没有或几乎没有药理学活性的式(I)化合物的衍生物在给予人体或接触人体之后，例如通过水解裂解可转化成具有所需活性的式(I)的化合物。这些衍生物被称为“前药”。关于前药应用的进一步信息可参见《前药：新型递送系统》(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi和W.Stella)和《药物设计中的生物可逆运载体》(Bioreversible Carriers in Drug Design)，Pergamon Press，1987(E.B.Roche编，美国药学协会(American Pharmaceutical Association))。

本发明的前药例如可通过用某些本领域技术人员已知称为“前药基团(pro-moieties)”的部分来置换式(I)化合物中的合适的官能团来制备，例如参见H.Bundgaard的《前药的设计》(Design of Produrgs)(Elsevier，1985)。

本发明还包括式(I)化合物的代谢物，即给予药物后在体内形成的化合物。代谢物的一些例子包括：

(i)当式(I)化合物包含甲基时，是其羟甲基衍生物(-CH₃->-CH₂OH)；

(ii)当式(I)化合物包含烷氧基时，是其羟基衍生物(-OR->-OH)；

(iii)当式(I)化合物包含叔氨基时，是其仲氨基衍生物(-NR¹R²->-NHR¹或-NHR²)；

(iv)当式(I)化合物包含仲氨基时，是其伯氨基衍生物(-NHR¹->-NH₂)；

(v)当式(I)化合物包含苯基部分时，是其苯酚衍生物(-Ph->-PhOH)；和

(vi)当式(I)化合物包含酰胺基团时，是其羧酸衍生物(-CONH₂->COOH)。

基团R ₁

当R₁是式(IA)的基团时：

-X-Alk¹-(Z)_m-(Alk²)_n-Q (IA)

X可以是-O-、-S--S(O)-、-SO₂-或-NH-。目前优选-O-和-S-；

如果存在，Z可以是-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝S)-、-S(O)-、-SO₂-、-NR^A-、或是任一取向的-C(＝O)O-、-C(＝O)NR^A-、-C(＝S)NR^A-、-SO₂NR^A-、-NR^AC(＝O)-或-NR^ASO₂-，其中R^A是氢或C₁-C₆烷基。目前优选-NR^A-；

Alk¹(和Alk²，如果存在的话)可以是例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-，-CH(CH₃)CH₂-或-CH₂CH＝CH-；

m、n和p独立地是0或1。因此，在一类基团(IA)中，m和n都是0。在另一类基团(IA)中，m是1，n是0。在另一类基团(IA)中，m是0，n是1；

Q可以是氢或任选取代的碳环或杂环基团。碳环基团Q的例子包括苯基、环丙基、环丁基、环戊基和环己基。杂环基团Q的例子包括：杂芳基如吡啶基、噻吩基和呋喃基，和非芳族杂环基团如哌啶基、哌嗪基、四氢吡咯基和吗啉基。

目前优选Alk¹和Alk²未取代。Q(无论碳环还是杂环)可以未取代，但如果取代的话，任选的取代基可选自例如：甲基、乙基、正-或异丙基、乙烯基、烯丙基、甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、苄氧基、烯丙氧基、氰基甲氧基、氟、氯、溴、氰基、氧代、甲酰基、甲基-、乙基-或正-丙基-羰氧基、甲基-或乙基氨基羰基和式-O(CH₂)_aZ¹的取代基，其中a是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基、或C₁-C₆烷氧基；或式-(Alk³)_bZ¹的取代基，其中Alk³是二价直链或支链(C₁-C₃)亚烷基，b是0或1，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基、或C₁-C₆烷氧基。

一种R₁取代基具有式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹，其中n是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者可任选地被取代，或C₁-C₆烷氧基。R₁的具体例子包括氢、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、羟基乙硫基(hydroxyeththylthio)、甲基氨基、二乙基氨基甲硫基、甲基氨基羰基甲硫基和式(A)-(H)的基团：

其中W是-O-或-S-。

基团R ₂

R₂是式(IB)的基团：-(Ar¹)_p-(Alk¹)_q-(Z)_r-(Alk²)_s-Q。(IB)中：

Ar¹是任选取代的芳基或杂芳基，例如苯基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。目前优选Ar¹是任选取代的苯基。

Alk¹和Alk₂如果存在，可以是例如-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-，-CH(CH₃)CH₂-或-CH₂CH＝CH-；目前优选Alk¹和Alk₂(如果存在)是-CH₂-；

Z如果存在，可以是-O-、-S-、-(C＝O)-、-(C＝S)-、-S(O)-、-SO₂-、-NR^A-、或任一取向的-C(＝O)O-、-C(＝O)NR^A-、-C(＝S)NR^A-、-SO₂NR^A-、-NR^AC(＝O)-、或-NR^ASO₂-，其中R^A是氢或C₁-C₆烷基。目前优选Z(如果存在)是-O-或-NH-；

Q可以是例如苯基、环己基、吡啶基、吗啉代、哌啶基或哌嗪基环，如任选取代的苯基、2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-、3-或4-吡啶基、吗啉基或哌啶基。

在一类本发明的化合物中，基团R₂中，p是1，q、r和s各自是0，Q是氢。在另一类化合物中，p是1，q、r和s是0，Q是任选取代的碳环或杂环。在另一类化合物中，p、q、r和s各自是1，Q是氢。

在一类本发明的化合物(I)中，R₂是苯基，任选地被一个或多个选自以下的取代基所取代：甲基、三氟甲基、乙基、正-或异丙基、乙烯基、烯丙基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、亚甲基二氧、亚乙基二氧、正-丙氧基、苄氧基、烯丙氧基、氰基甲氧基、氟、氯、溴、氰基、甲酰基、甲基-、乙基-、或正-丙基-羰氧基、甲基-、或乙基氨基羰基、以及式-O(CH₂)_nZ¹的取代基，其中n是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基、或C₁-C₆烷氧基；或式-(Alk³)_mZ¹的取代基，其中Alk³是二价直链或支链(C₁-C₃)亚烷基，m是0或1，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者可任选地被取代，或C₁-C₆烷氧基。如果R₂是苯基，任选的取代基优选在苯环的2-和/或4-和/或5-位。

基团R ₃

目前，优选R₃是氰基(-CN)。

目前尤其优选式(II)的化合物：

R₁是(a)C₁-C₆烷硫基或C₁-C₆烷氧基，其中的一个或多个氢原子可被氟原子任选地取代，或(b)式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹的取代基，其中n是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者可任选地被取代。

R₁₀是H、Cl、Br或-CH₃；

R₁₁是氢、Cl、Br、CN、甲基、乙基、正-或异-丙基、甲氧基、乙氧基、乙烯基或烯丙基；和

R₁₂是(i)式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹的基团，其中n是1、2或3，Z¹是(i)伯、仲、叔氨基或环状氨基，或C₁-C₆烷氧基；或(ii)式-(Alk³)_mZ¹的基团，其中Alk³是二价直链或支链(C₁-C₃)亚烷基，m是0或1，Z1是伯、仲、叔氨基或环状氨基，或C₁-C₆烷氧基。

本发明化合物的具体例子包括本文实施例中的那些化合物。

本发明化合物(I)的合成存在许多合成方案，但都依赖于合成有机化学家已知的化学方法。因此，式(I)化合物可根据标准文献中所述的方法合成，是本领域技术人员所熟知的。常用文献来源是《高等有机化学》(“Advancedorganic chemistry”)，第4版(Wiley)，J March，《综合有机转化》(“Comprehensive Organic Tranformation”)，第2版(Wiley)，R.C.Larock，《杂环化学手册》(“Handbook of Heterocylic Chemistry”)，第2版(Pergamon)，A.R.Katritzky)，综述参见“Synthesis”，“Acc.Chem.Res.”，“Chem.Rev”，或标准文献在线检索识别的一次文献来源或二次文献来源如《化学文摘》(“Chemical Abstracts”)或“Beilstein”。这些文献方法包括本文的制备实施例以及类似的方法。

本发明化合物是HSP90抑制剂，适用于治疗与抑制HSP90活性相关的疾病，例如癌症；病毒疾病如丙型肝炎(HCV)(Waxman，2002)；免疫抑制如移植(Bijlmakers，2000和Yorgin，2000)；抗炎症疾病(Bucci，2000)如类风湿性关节炎、哮喘、MS、I型糖尿病、狼疮、牛皮癣和炎性肠病；囊性纤维化病(Fuller，2000)；血管新生-相关疾病(Hur，2002和Kurebayashi，2001)：糖尿病视网膜病、血管瘤、牛皮癣、子宫内膜异位和肿瘤血管新生。本发明Hsp90抑制剂还能保护正常细胞免于化疗诱导的毒性，适用于凋亡缺失是其潜在因素的疾病。这些Hsp90抑制剂还适用于宜诱导细胞应激或热激蛋白响应的疾病，例如避免心脏(Hutter，1996和Trost，1998)和脑(Plumier，1997和Rajder，2000)中Hsp70升高导致的缺氧-缺血性损伤。Hsp90抑制剂(诱导的Hsp70水平升高)也能用于蛋白质错误折叠或聚集是其主要原因因素的疾病，例如神经源性疾病如绵羊瘙痒病/CJD，亨廷顿病和阿耳茨海默病(Sittler，2001；Trazelt，1995和Winklhofer，2001)。

因此，本发明还包括：

(i)包含上述式(I)化合物以及药学上或兽药学上可接受的载体的药学或兽药学组合物。

(ii)上述式(I)化合物在制备用于在体外或体内抑制Hsp90活性的组合物中的应用。

(iii)治疗哺乳动物响应抑制Hsp90活性的疾病或病症的方法，该方法包括给予哺乳动物一定量的上述式(I)化合物以有效抑制所述Hsp90活性。

应理解，任何特定患者的具体剂量水平取决于许多因素，包括采用的具体化合物的活性、患者的年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄率、药物组合、原因机制以及正在进行治疗的特定疾病的严重性。一般，口服给药制剂适当的剂量为0.1-3000mg，每天一次、两次或三次，或通过输注或其他途径给予相当的日剂量。然而，最佳剂量水平和给药频率则通过本领域常规的临床试验来确定。

本发明考虑的化合物可通过与药动学性质相一致的任何途径进行给药。口服给药组合物可以是片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、锭剂、液体或凝胶制剂的形式，例如口服、外用、或无菌胃肠外溶液剂或混悬剂。口服给药的片剂和胶囊可以是单位剂量形式，可包含常用辅料，例如粘合剂，如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄芪胶或聚乙烯基-吡咯烷酮；填充剂，如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，如马铃薯淀粉；或可接受的湿润剂，如十二烷基硫酸钠。片剂可根据正常药学实践中众所周知的方法进行包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者可以是临用前用水或其他合适的运载体进行重建的干燥产物形式。这些液体制剂可包括常规添加剂，例如助悬剂，如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖糖浆、明胶氢化食用脂肪；乳化剂，如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯、或阿拉伯胶；非水运载体(可包括食用油)，如扁桃仁油、分馏椰子油、油酯如甘油、丙二醇、或乙醇；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯、或山梨酸，需要时还可包含常规的芳香剂或着色剂。

外用于皮肤时，可将药物制备成乳膏、洗剂或软膏的形式。乳膏或软膏制剂可是本领域公知的常规药物制剂，例如标准药学参考书中所述，例如英国药典。

活性成分还可以在无菌介质中通过胃肠外途径给予。根据所用运载体和浓度，药物可悬浮或溶解在运载体中。优选地，运载体中溶解有辅助试剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂。

本发明化合物可与其他类型的药学活性药物一起给予。例如，为治疗癌症，已认可和广泛实践了用两种或多种不同类型抗癌药的联合治疗。本发明化合物可用于这种联合治疗中，尤其当其他药物具有不同于Hsp90抑制的作用模式时。

下面的实施例显示了本发明特定化合物的制备和活性，而不是为了限制本发明的范围。

通用过程

所有商业来源的试剂无需进一步纯化即可使用。无水溶剂商业购得，无需进一步干燥即可使用。快速色谱法用预填充的硅胶色谱柱进行(Strata SI-1；

，Phenomenex，Cheshire UK或IST Flash II，

，Argonaut，Hengoed，UK)。薄层色谱法用涂覆有Merck Type 60 F₂₅₄硅胶的5 x 10cm色谱板进行。

本发明化合物的鉴定采用连接四极检测器的Hewlett Packard 1100序列LC/MSD通过LC/MS进行(电离模式：电喷雾正或负；柱：Phenomenex Luna3u C18(2)30 x 4.6mm；缓冲液A的制备：1.93g醋酸铵溶解在2.5L HPLC级H₂O中并加入2mL甲酸。缓冲液B的制备：132mL缓冲液A加入2.5LHPLC级乙腈中并加入2mL甲酸；洗脱梯度95:5到5:95的缓冲液A:缓冲液B，持续时间3.75分钟或7.5分钟。流速＝2.0mL/分钟)。保留时间(RT)以分钟表示。除非另有说明，电离为正。

核磁共振(NMR)分析用Brucker DPX-400MHz NMR波谱仪进行。波谱参比是已知的溶剂化学位移。质子NMR数据表示如下：化学位移(δ)以ppm表示，多裂数(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，m＝多重峰，dd＝双二重峰，br＝宽峰)，积分，偶合常数。

一些本发明的化合物通过制备型HPLC纯化。制备型HPLC纯化在Waters FractionLynx MS自动纯化系统上进行，具有来自Phenomenex的

5μM C18(2)，内径100mm×20mm的柱，在流速20mL/分钟下运行，带有UV二极管阵列检测器(210-400nm)和质量导向收集装置(mass-directed collection)。每种化合物采用的梯度如表1所示。

pH 4下：溶剂A：HPLC级水+10mM醋酸铵+0.08％v/v甲酸。

溶剂B：95％v/v HPLC级乙腈+5％v/v溶剂A+0.08％v/v甲酸。

pH9下：溶剂A：HPLC级水+10mM醋酸铵+0.08％v/v氨水溶液。

溶剂B：95％v/v HPLC级乙腈+5％v/v溶剂A+0.08％v/v氨水溶液.。

质谱仪是在正离子或负离子电喷射离子化模式下运行的WatersMicromass ZQ2000质谱仪，分子量扫描范围150-1000。

表1 制备型HPLC梯度

IUPAC化学命名采用AutoNom标准命名法产生。

一些本发明化合物可通过方案1所示途径进行制备(以例子的方式)(PG＝保护基团)。

方案1

一些本发明化合物可通过方案2所示途径进行制备(PG＝保护基团)。

方案2

一些本发明化合物可通过方案3所示途径进行制备(PG＝保护基团)。

方案3

合成诸如17的化合物的可选的合成路径如方案4所示。该过程包括采用本领域技术人员已知的方法和试剂，用合适的亲核物质来置换砜(18)。

方案4

可进一步操控芳基(方案1-4中的“Ar”)以产生更多本发明的例子，如方案5所示(PG＝保护基团)。

方案5

实施例1

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

0℃下，在氢化钠(276mg；6.89mmol)的DMF(10ml)混合物中，逐滴加入4-氯-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[如Davoll.J.J.Chem.Soc.1960，第131-138页所述制备](1.145g；5.74mmol)的无水DMF(20ml)溶液。滴加完成时，逐滴加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.32ml；7.46mmol)并将该反应混合物在0℃下搅拌1.5小时，然后升高至环境温度。反应混合物在水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)之间分配。将有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液真空中蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在硅胶(70g)上纯化，用梯度0-5％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色油状产物(2.04g)。

LC/MS：保留时间＝2.88分钟；m/z＝332，330[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

用氮气吹扫反应混合物5分钟，对4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.04g；6.19mmol)、1N碳酸氢钠(水溶液)18.6ml；18.6mmol)、DMF(41ml)和2，4-二甲基苯基硼酸的混合物进行脱气。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(217mg；0.309mmol)，并在氮气环境下将反应混合物加热至80℃持续2.25小时。使反应混合物冷却至环境温度，然后通过硅藻土滤垫过滤。滤饼用甲醇和乙酸乙酯洗涤，合并滤液在真空中除去溶剂，残留物在乙酸乙酯(100ml)和饱和氯化钠水溶液(100ml)之间分配。将有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在硅胶(50g)上纯化，用梯度0-10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到黄色油状产物(2.01g)。

LC/MS：保留时间＝3.06分钟；m/z＝400[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤3

5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

0℃下，在4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(步骤2)(100mg，0.25mmol)的CH₂Cl₂(3ml)溶液中，逐滴加入N-溴琥珀酰亚胺的CH₂Cl₂溶液(45mg，0.25mmol)。5分钟后，使该反应液升高至环境温度。真空蒸发溶液，残留物在EtOAc(2 x 20ml)和饱和硫代硫酸钠水溶液(20ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。将粗产物加载到SiO₂柱(20g)上，用己烷-5％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生无色油状的标题化合物100mg，84％。

LC/MS：保留时间＝5.92分钟；m/z＝480，478[M+H]⁺。总的运行时间7.5分钟。

步骤4

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

将5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(90mg，0.188mmol)、CuCN(67mg，0.753mmol)、dppf(17mg，0.03mmol)、Pd₂(dba)₃(7mg，0.04mmol)和1，4-二噁烷(1.5ml)进行合并，然后加热至100℃过夜。该反应尚未完全，因此再加入等量的CuCN、dppf和Pd₂(dba)₃，反应液再加热2小时。使该反应混合物冷却至环境温度，在EtOAc(2 x 20ml)和饱和NaHCO₃水溶液(20ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到粗产物固体(100mg)。该粗产物通过快速色谱法在SiO₂(20g)上纯化，用己烷到10％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到标题化合物10mg，13％。

LC/MS：保留时间＝2.94分钟；＝m/z＝425[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(10mg，0.024mmol)的THF(0.4ml)溶液中连续加入乙二胺(0.005ml，0.071mmol)和TBAF(1M在THF中，0.15ml，0.142mmol)。将该反应混合物在50℃下加热过夜。使反应液冷却至环境温度，然后在EtOAc(2 x 10ml)和水(10ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂(5g)上纯化，用己烷-40％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到所需固体产物5mg，72％。

LC/MS：保留时间＝2.44分钟；m/z＝295[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(CD₃OD)：δ 2.26(s，3H)；2.43(s，3H)；2.65(s，3H)；7.19(d，1H，J＝7.7Hz)；7.23(s，1H)；7.30(d，1H，J＝7.7Hz)；8.11(s，1H)NH未观察到。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例2

(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

5-溴-4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

0℃下，在4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.5g，1.516mmol)(实施例1步骤2)的DMF(14ml)溶液中，逐滴加入N-溴琥珀酰亚胺(270mg，1.516mmol)的DMF(6ml)溶液。5分钟后，使反应液升高至环境温度。该溶液在EtOAc(2 x 40ml)和水(40ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。粗产物通过快速色谱法在SiO₂(50g)上纯化，用己烷-5％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到白色固态的所需产物433mg，70％。

LC/MS：保留时间＝3.112分钟；m/z＝410，408[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤2

4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸

0℃下，在正-丁基锂(2.5M在己烷中，0.24ml，0.59mmol)的THF(0.5ml)溶液中，逐滴缓慢加入5-溴-4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(200mg，0.489mmol)的THF(2ml)溶液。2分钟后，加入碾碎的固体CO₂，使混合物升高至环境温度。加入乙酸，然后是水(20ml)，用EtOAc(2 x 20ml)萃取混合物。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到白色固态的所需粗产物167mg，91％。

LC/MS：保留时间＝2.664分钟；m/z＝374[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤3

4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

在4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸(100mg，0.268mmol)的CH₂Cl₂(1.5ml)溶液中，加入草酰氯(2M在CH₂Cl₂中，0.17ml，0.349mmol)，然后加入几滴DMF。10分钟后，将反应混合物真空蒸发，然后重新溶解在CH₂Cl₂(3ml)中。加入氨水溶液(2ml)并将混合物剧烈搅拌15分钟。加入水(10ml)和CH₂Cl₂(10ml)，分离各相。水相再用CH₂Cl₂(15ml)进行萃取。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。将粗产物加载到SiO₂柱上(20g)，用CH₂Cl₂-5％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生黄色固态的标题化合物77mg，77％。

LC/MS：保留时间＝2.47分钟；m/z＝373，375[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤4

4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

0℃下，在4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(73mg，0.196mmol)的CH₂Cl₂溶液中，加入Et₃N，然后缓慢滴加TFAA(0.03ml，0.21mmol)。使搅拌的反应混合物升高至环境温度。再加入CH₂Cl₂(5ml)，将有机相用饱和NaHCO₃溶液(15ml)洗涤。使有机层通过疏水玻璃料并真空蒸发。粗产物通过快速色谱法在SiO₂(20g)上纯化，用己烷-20％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物60mg，86％。

LC/MS：保留时间＝2.84分钟；m/z＝357，355[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

2-甲基硫烷基-4-苯基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

用氮气吹扫混合物5分钟，对4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(54mg，0.152mmol)、苯基硼酸(24mg，0.198mmol)、Pd₂Cl₂(PPh₃)₂(5mg，0.0076mmol)、NaHCO₃水溶液(1M，0.46ml，0.456mmol)和DMF的混合物进行脱气。然后将反应液在氮气环境中80℃下加热3小时。使混合液冷却，然后在EtOAc(2 x 15ml)和盐水(15ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。粗产物通过快速色谱法在SiO₂(20g)上纯化，用己烷-20％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到白色固态的所需产物50mg，83％。

LC/MS：保留时间＝2.912分钟；m/z＝397[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤6

2-甲基硫烷基-4-苯基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在2-甲基硫烷基-4-苯基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(50mg，0.126mmol)的THF(1ml)溶液中，加入乙二胺(0.025ml，0.378mmol)，再加入氟化四丁铵(1M的THF溶液，0.76ml，0.756mmol)。将该反应混合物在50℃下加热过夜。反应液冷却至环境温度，然后在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之间分配。合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂(20g)上纯化，用10％ EtOAc/己烷-40％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物17mg，51％。

LC/MS：保留时间＝2.313分钟；m/z＝267[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.60(s，3H)；7.5-7.6(m，3H)；7.8-7.9(m，2H)；8.50(s，1H)；13.21，(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例3

4-(4-氰基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤中采用4-氰基苯基硼酸，通过方案2所示路径并经由实施例2的方法，制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝3.56分钟；m/z＝290[M-H]^-(负电离)。总的运行时间7.5分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.61(s，3H)；8.05(d，1H，J＝8.2Hz)，8.07(d，1H，J＝8.2Hz)；8.56(s，1H)；13.32(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例4

4-(2-甲基-4-氟-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(交叉偶联(cross coupling))中采用2-甲基-4-氟苯基硼酸和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，通过方案2所示路径并经由实施例2的方法，制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.89分钟；m/z＝429[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤2

4-(2-甲基-4-氟-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

经由实施例1步骤5的方法来制备标题化合物(TBAF介导的SEM脱保护)。粗产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用乙酸乙酯和己烷混合物洗脱，产生灰白色固体。

LC/MS：保留时间＝2.40分钟；m/z＝299[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ，2.22(s，3H)；2.57(s，3H)；7.1-7.2(m，1H)；7.26(dd，1H，J＝10.1，2.2Hz)，7.46(dd，1H，J＝8.6，6.1Hz)；8.44(s，1H)；13.19(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例5

5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵处理5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(实施例1，步骤3)来制备标题化合物。通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用乙酸乙酯/己烷混合液洗脱。

LC/MS：保留时间＝4.44分钟；m/z＝350，348[M+H]⁺。总的运行时间7.5分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.06(s，3H)；2.35(s，3H)；2.57(s，3H)；7.08-7.20(m，3H)，7.62(s，1H)；12.48(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例6

4-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

步骤1

4-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

向在氮气环境下CO₂-丙酮浴中冷却的正-丁基锂(2.5M；0.10ml；0.253mmol)的无水THF(2ml)溶液中逐滴加入5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(110mg；0.23mmol)的无水THF(1.4ml)溶液中。加入完成后，加入甲基碘(72μL；1.15mmol)并将该反应混合物搅拌5分钟，除去冷却浴，使反应混合物升高至环境温度。反应混合物在饱和NH₄Cl水溶液和乙酸乙酯之间分配。有机相通过疏水玻璃料并真空除去溶剂，得到油，通过快速色谱法纯化，用0-10％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色油状的产物(80mg；84％)。

LC/MS：保留时间＝3.08分钟；m/z＝414[M+H]+。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵处理4-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶来制备标题化合物。通过快速色谱法在硅胶上纯化，用乙酸乙酯/己烷混合物洗脱；然后用二乙醚研磨，得到无色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.63分钟；m/z＝284[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 1.68(s，3H)；2.05(s，3H)；2.35(s，3H)；2.52(s，3H)；7.08-7.12(m，4H)；11.75(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例7

4-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-[(3-羟基-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(交叉偶联)中采用3-羟基苯基硼酸和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，通过方案2所示路径并经由实施例2的方法，制备标题化合物。

LC/MS保留时间＝2.746分钟；m/z＝413[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

4-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

将碳酸铯(73mg；0.225mmol)加入到4-[(3-羟基-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(37mg；0.09mmol)的DMF(1.5ml)溶液中，加入2-溴-N，N-二乙基乙胺氢溴化物(26mg；0.1mmol)，再加入催化量的KI，将该悬浮液在110℃下加热18小时。使所得悬浮液冷却并在乙酸乙酯和氨水之间分配。分离各相，倾倒通过疏水玻璃料，粗产物通过色谱法在硅胶上纯化，用二氯甲烷和甲醇的混合物(0-15％梯度甲醇的二氯甲烷溶液)洗脱，得到黄色固态的产物28mg；61％。

LC/MS：保留时间＝2.243分钟；m/z＝512[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤3

采用实施例1步骤5的方法，4-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与氟化四丁铵和乙二胺在THF中反应，得到标题化合物。通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用梯度1％三乙胺的二氯甲烷溶液到1％三乙胺；15％甲醇；84％二氯甲烷的溶液洗脱，得到淡黄色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.69分钟；m/z＝382[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.99(t，6H，J＝7.1Hz)；2.56-2.65(m，4H)，2.60(s，3H)；2.86(t，2H，J＝5.8Hz)；4.18(t，2H，J＝5.9Hz)；7.14(d，1H，J＝7.9Hz)；7.38-7.50(m，3H)；8.49(s，1H)；12.91(brs；1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例8

2-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

6-氨基-5-(2，2-二乙氧基乙基)-嘧啶-2，4-二醇

氮气环境下，在脲(5.24g；87.2mmol)的无水乙醇(200ml)溶液中，加入2-氰基-4，4-二乙氧基丁酸乙酯[根据Davoll.J.J.Chem.Soc.，1960，第131-138页所述制备](20g；87.2mmol)，再加入乙醇钠(11.88g；172.6mmol)。将该反应混合物回流加热过夜。反应液冷却至环境温度，加入水(500ml)和乙酸(5ml)。将该溶液冷却至约5℃，过滤收集得到淡褐色固体(8.4g；40％)。

LC/MS：保留时间＝1.37分钟；m/z＝198[M-EtOH]⁺。总的运行时间3.75分钟

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 1.07(t，3H)；2.40(d，2H)；3.39(m，2H)；3.60(m，2H)；4.45(t，1H)；10.08(s，1H)；10.8(br s，1H)。

步骤2

7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二醇

环境温度下，将6-氨基-5-(2，2-二乙氧基乙基)-嘧啶-2，4-二醇(2.57g；10.6mmol)在HCl(0.2M；80ml)中搅拌1.5小时。过滤悬浮液得到淡褐色固态的所需产物(1.28g；80％)。

LC/MS：保留时间＝0.54分钟；m/z＝152[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤3

2，4-二氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

将7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2，4-二醇(1.28g；8.5mmol)的苯基膦酰二氯化物(7ml)溶液在165℃下加热2小时。然后将该热的反应混合物缓慢倾倒到冰水上(150ml)，用乙酸乙酯(2 x 100ml)萃取。有机萃取物用水(100ml)，然后用饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤。有机相在Na₂SO₄上干燥，过滤，滤液真空蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在硅胶(20g)上纯化，用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到黄色固态的所需产物(0.45g；28％)。

LC/MS：保留时间＝1.98分钟；m/z＝188[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤4

2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

0℃下，在氢化钠(115mg；2.88mmol)的DMF(4ml)混合液中，逐滴加入2，4-二氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.45g；2.4mmol)的无水DMF(2ml)溶液。加入完全后，逐滴加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.55ml；3.12mmol)并将该反应混合物在0℃下搅拌1.5小时，然后升高至环境温度。该反应混合物在水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)之间分配。有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到黄色油状的产物(0.65g；85％)。

LC/MS：保留时间＝2.84分钟；m/z＝320，318[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

5-溴-2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

0℃下，在2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.81g；5.7mmol)的DMF(8ml)溶液中逐滴加入N-溴琥珀酰亚胺的DMF(1.02g；5.7mmol)溶液。1小时后，该溶液在EtOAc(100ml)和水(100ml)之间分配。有机萃取物用水(100ml)，然后是饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤。有机相在Na₂SO₄上干燥，过滤，滤液在真空中蒸发溶剂，得到橘色油。在己烷中研磨得到黄色固态的所需产物(1.39g；61％)。

LC/MS：保留时间＝2.94分钟；m/z＝400，398，396[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.00(s，9H)；0.92(t，2H)；3.61(t，2H)；5.64(s，2H)；8.26(s，1H)。

步骤6

2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸

-78℃下，在正-丁基锂(2.5M在己烷中；1.18ml；2.95mmol)的THF(10ml)溶液中，缓慢滴加5-溴-2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(980mg；2.46mmol)的THF(2ml)溶液。5分钟后，将CO₂吹扫到混合液中，混合液升高至环境温度。加入乙酸，再加入水(50ml)，用EtOAc(2 x 50ml)萃取混合物。合并的有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂，得到绿色固体。在己烷中研磨得到淡绿色固态的所需产物(431mg，48％)。

LC/MS：保留时间＝2.60分钟；m/z＝364/362[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟

步骤7

2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基_7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

在2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸(320mg；0.89mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液中，加入草酰氯(2M在CH₂Cl₂中，0.58ml；1.16mmol)，然后加入几滴DMF。20分钟后，在真空中蒸发反应混合物，然后重新溶解在CH₂Cl₂(10ml)中。加入氨水溶液(6ml)，将混合液剧烈搅拌3小时。加入水(50ml)和CH₂Cl₂(50ml)，分离所得各相。水相再用CH₂Cl₂(50ml)萃取。合并的有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。将粗产物加载到SiO₂柱(20g)上，用2％MeOH/CH₂Cl₂洗脱，产生白色固态的标题化合物(0.146g；46％)。

LC/MS：保留时间＝2.42分钟；m/z＝363，361[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.00(s，9H)；0.92(t，2H)；3.62(t，2H)；5.67(s，2H)；7.49(br s，1H)；7.88(br s，1H)；8.29(s，1H)。

步骤8

0℃下，在2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(146mg；0.405mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液中，加入Et₃N(0.12ml；0.87mmol)，再缓慢逐滴加入TFAA(0.06ml；0.43mmol)。使搅拌的反应混合物升高至环境温度。再加入CH₂Cl₂(10ml)，有机相用饱和NaHCO₃溶液(20ml)洗涤。有机层在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在SiO₂(10g)上纯化，用10％EtOAc/己烷洗脱，产生白色固态的标题化合物(92mg；66％)。

LC/MS：保留时间＝2.78分钟；m/z＝345，343[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.00(s，9H)；0.99(t，2H)；3.62(t，2H)；5.69(s，2H)；8.96(s，1H)。

步骤9

2-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气吹扫混合物5分钟，对2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(75mg；0.22mmol)、2，4-二甲基苯基硼酸(49mg；0.33mmol)、Pd(dppf)Cl₂(10mg；0.012mmol)、K₂CO₃(90mg；0.65mmol)和THF/H₂O(10:1；2ml)的混合物进行脱气。然后将反应液在120℃下微波加热20分钟。使混合物冷却，然后在EtOAc(2 x 20ml)和盐水(20ml)之间分配。合并的有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。粗产物通过快速色谱法在SiO₂(10g)上纯化，用10％ EtOAc/己烷洗脱，得到白色固态的所需产物(40mg；44％)。

LC/MS：保留时间＝2.91分钟；m/z＝415，413[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.00(s，9H)；0.94(t，2H)；2.27(s，3H)；2.45(s，3H)；3.68(t，2H)；5.73(s，2H)；7.25(d，1H)；7.30(s，1H)，7.40(d，1H)；8.89(s，1H)。

步骤10

2-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在2-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(40mg；0.097mmol)的THF(2ml)溶液中，加入乙二胺(0.019ml；0.29mmol)，再加入氟化四丁铵(1M的THF溶液；0.58ml；0.58mmol)。将该反应混合物在50℃下加热过夜。使反应液冷却至环境温度，然后在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之间分配。合并的有机相在Na₂SO₄上干燥，然后过滤，滤液在真空中蒸发溶剂。所得粗产物通过制备型HPLC(pH＝4)纯化，得到白色固态的所需产物(2.3mg；8.4％)。

LC/MS：保留时间＝2.36分钟；m/z＝283[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆丙酮)：δ 2.32(s，3H)；2.42(s，3H)；7.21(d，1H)；7.24(s，1H)，7.39(d，1H)；8.46(s，1H)，NH未见。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例9

4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

6-氨基-5-(2，2-二乙氧基-乙基)-嘧啶-4-醇

将6-氨基-5-(2，2-二乙氧基-乙基)-2-巯基-嘧啶-4-醇嘧啶3.0g(11.6mmol)[根据Davoll.J.，J.Chem.Soc.1960，第131-138页所述制备]溶解到水(150ml和氨水溶液(9ml)的混合液中，加热至90℃。将阮内镍(RaneyNickel)悬浮液的等分试样(2-3ml)加入到反应混合物中，直到TLC和LC/MS分析显示反应完全。反应混合物冷却至环境温度，过滤通过硅藻土滤垫。滤饼用水(2 x 25mL)洗涤，将合并的水性滤液冻干，产生灰白色粉末状的标题化合物2.23g(85％)

LC/MS：保留时间＝1.37分钟；m/z＝182[M-EtOH+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 1.07(brt，6H)；3.40(m，2H)；3.59(m，2H)；4.56(brt，1H)；6.07(brs，2H)；7.70(s，1H)；11.43(brs，1H)。

步骤2

7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-醇

将12.8M盐酸(1.2ml)加入到6-氨基-5-(2，2-二乙氧基-乙基)-嘧啶-4-醇(2.23g 9.8mmol)的水(60ml)悬浮液中，环境温度下搅拌2.5小时。然后将混合液用冰水浴冷却，然后过滤。滤过的固体在真空中干燥，得到黄色固态的标题化合物1.2g(90％)。

LC/MS：保留时间＝0.572分钟；m/z＝158[M+Na]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 6.40(dd，1H)；7.03(dd，1H)；7.82(s，1H)；11.74(brs，1H)；11.83(brs，1H)。

步骤3

4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

将磷酰氯加入到7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-醇(1.15g，8.5mmol)中，将该反应液在氮气下加热至100℃持续2.5小时。最初的悬浮液形成均质深色悬浮液，然后冷却至室温。真空去除过量磷酰氯，残留物在冰浴中冷却，搅拌下加入碎冰。将混合液用水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(2 x 30ml)萃取。合并的有机萃取物用饱和NaCl水溶液洗涤，然后在无水Na₂SO₄上干燥。将混合液过滤，滤液在真空中除去溶剂，得到白色固体(0.811g；(62％)。

LC/MS：保留时间＝1.619分钟；m/z＝154[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 6.60(dd，1H，J＝3.5，1.8Hz)；7.69(dd，1H，J＝3.6，2.3Hz)；8.59(s，1H)，12.57(brs1H)。

步骤4

4-氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

采用实施例1步骤1的方法，从4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.805g；5.24mmol)制备标题化合物。产物通过快速色谱法在硅胶(25g)上纯化，用2-25％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱。得到无色油状的标题化合物1.31g(87％)。

LC/MS：保留时间＝0.572分钟；m/z＝384[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ -0.66(s，9H)；0.90(t，2H)；3.51(t，2H)；5.64(s，2H)；6.66(d，1H)；7.38(d，1H)；8.66(s，1H)。

步骤5

4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

该化合物通过实施例1步骤2的方法制备。因此，4-氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.29g，4.54mmol)与2，4-二甲基苯基硼酸(0.818g；1.2当量)、二氯双(三苯基膦)钯(II)和碳酸氢钠的DMF/H₂O混合液反应，粗产物通过快速色谱法在硅胶(25g)上纯化，用梯度3-30％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物(1.29g；80％)。

LC/MS：保留时间＝2.87分钟；m/z＝354[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤6

5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

将N-溴琥珀酰亚胺(0.639g，3.59mmol)的DMF(10ml)溶液加入到冰浴冷却的搅拌的4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(1.27g，3.59mmol)的DMF溶液(20ml)中。然后将该反应混合物在环境温度下搅拌18小时。真空去除DMF，残留物在乙酸乙酯(150ml)和水(150ml)之间分配。分离各相，水相用乙酸乙酯(50ml)再次萃取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗涤，在Na₂SO₄上干燥。将混合液过滤，滤液去除溶剂，得到褐色油，通过快速色谱法在硅胶(50g)上纯化，用梯度0-30％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色油状的标题化合物(0.772g；49％)。

LC/MS：保留时间＝2.940分钟；m/z＝434，432[M+H]⁺(观察到的溴同位素分裂模式)。总的运行时间3.75分钟。

步骤7

4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸。

该化合物通过实施例2步骤2的方法制备。因此，0.77g，1.78mmol的5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶与正-丁基锂和二氧化碳反应，得到粗产物，通过快速色谱法在硅胶上(50g)纯化，用梯度25-100％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色固态的标题化合物(0.307g；43％)。

LC/MS：保留时间＝2.584分钟；m/z＝398[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤8

4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

该化合物通过实施例2步骤3的方法制备。因此，0.304g，0.76mmol的4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸与草酰氯和氨水反应，得到粗产物(褐色油)，通过快速色谱法在硅胶上纯化(25g)，用梯度50-100％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色固态的标题化合物(0.135g；45％)。

LC/MS：保留时间＝2.446分钟；m/z＝397[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤9

4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

该化合物通过实施例2步骤4的方法制备。因此，0.133g，0.34mmol的4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺与三氟乙酸酐反应，得到粗产物(褐色油)，通过快速色谱法在硅胶(25g)上纯化，用梯度20-70％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到无色固态的标题化合物(0.075g；59％)。

LC/MS：保留时间＝2.789分钟；m/z＝379[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤10

4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

该化合物通过实施例2步骤6的方法制备。因此，0.075g，0.20mmol的4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与TBAF反应，得到粗产物(褐色油)，通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用3:2的乙酸乙酯:己烷洗脱，得到无色固态的标题化合物(0.075g；59％)。

LC/MS：保留时间＝2.034分钟；m/z＝249[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.18(s，3H)；2.37(s，3H)；7.14(d，1H，J＝7.5Hz)；7.20(s，1H)；7.30(d，1H，J＝7.5Hz)；8.52(s，1H)；8.97(s，1H)；13.34(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例10

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-5-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

步骤1

4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-5-三氟甲基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

将5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(实施例1步骤3)(100mg，0.209mmol)、CuI(80mg，0.418mmol)、三氟乙酸钠(57mg，0.418mmol)、甲苯(0.5ml)和DMF(1ml)在氮气下混合，加热至170℃过夜。使该反应混合物冷却至室温，然后在EtOAc(2 x 15ml)和水(15ml)之间分配。有机相通过疏水玻璃料并在真空中蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂(20g)上纯化，用己烷-6％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，与脱卤产物一起得到所需保护的产物。

步骤2

采用实施例1步骤5的方法，使步骤1的产物脱保护。最终产物经HPLC(在pH4下进行)纯化，产生灰白色固态的标题化合物7mg，10％。

LC/MS：保留时间＝2.68分钟；m/z＝349[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.92(s，3H)；2.34(s，3H)；2.55(s，3H)；7.04-7.15(m，3H)；8.08(s，1H)；NH未观察到。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例11

5-环丙基-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶

将5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(实施例1，步骤3)(100mg，0.209mmol)、Pd(OAc)₂(3mg，0.01mmol)、P(Cy)₃(57mg，0.418mmol)、K₃PO₄(170mg，0.80mmol)、环丙基硼酸(25mg，0.30mmol)、甲苯(1.0ml)和水(0.05ml)在氮气下混合，氮气吹扫该5分钟使该混合液脱气。然后反应液在100℃下加热2小时。使反应混合物冷却至室温，然后在EtOAc(2 x 15ml)和水(15ml)之间分配。将有机相干燥(Na₂SO₄)并通过疏水玻璃料，真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂(10g)上纯化，用己烷-5％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到所需保护的一些脱卤产物(17mg)。采用实施例1步骤5的方法使该化合物混合物脱保护。粗产物通过HPLC(在pH 4下进行)纯化，产生灰白色固态的标题化合物4mg，6％。

LC/MS：保留时间＝2.70分钟；m/z＝310[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.36-0.40(m，4H)；1.06m，1H)；2.10(s，3H)；2.34(s，3H)；2.52(s，3H)；7.00(m，1H)；7.09(d，1H，J＝7.5Hz)；7.14(s，1H)；7.20(d，1H，J＝7.5Hz)；11.7(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例12

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4所示方法来制备标题化合物。

步骤1

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

0℃下，在4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(189mg，0.44mmol)(实施例4步骤1)的CH₂Cl₂(8.5ml)溶液中，逐滴加入mCPBA(396mg，1.76mmol)的CH₂Cl₂(8.5ml)溶液。加入完全后，使反应液升高至室温。1小时后，用5％Na₂S₂O₃溶液(20ml)洗涤反应混合液。水层再用CH₂Cl₂(20ml)萃取。然后将合并的有机相用饱和NaHCO₃水溶液(40ml)洗涤。然后让有机相通过疏水玻璃料，真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂(25g)上纯化，用20％ EtOAc/己烷-45％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生无色油状的标题化合物187mg，92％。

LC/MS：保留时间＝2.65分钟；m/z＝461[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气、0℃下，在KO^tBu(20mg，0.17mmol)的THF(1ml)混合液中加入MeOH(0.007ml，0.17mmol)，然后再逐滴加入4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(40mg，0.087mmol)的THF(0.5ml)溶液。30分钟后，使该反应混合液在EtOAc(2 x 10ml)和饱和NaHCO₃溶液(15ml)之间分配。有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到保护的粗产物。采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵使该产物脱保护。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用10％EtOAc/己烷-50％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物12mg，48％。

LC/MS：保留时间＝2.16分钟；m/z＝283[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.23(s，3H)；3.96(s，3H)；7.17(m，1H)；7.26(dd，1H，J＝10.4和2.3Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.4，6.0Hz)；8.37(s，1H)；13.06(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例13

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例12所示的方法，根据方案2和方案4的路径来制备标题化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2-吡咯烷-1-基-乙醇反应，然后用TBAF使所得产物脱保护。

LC/MS：保留时间＝1.63分钟；m/z＝366[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 1.68-1.74(brm，4H)；2.23(s，3H)；2.60-2.67(brm，4H)；2.93(brt，2H)；4.46(t，2H，J＝5.8Hz)；7.17(m，1H)；7.23(dd，1H，J＝10.2和2.5Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.6，6.0Hz)；8.37(s，1H)；12.7(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例14

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例12所示的方法，根据方案2和方案4的路径来制备标题化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2-吗啉-4-基-乙醇反应，然后用TBAF使所得产物脱保护。

LC/MS：保留时间＝1.62分钟；m/z＝382[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.23(s，3H)；2.41-2.49(m，4H)；2.72(t，2H，J＝5.8Hz)；3.55(t，4H，J＝4.5Hz)；3.60(t，2H，J＝5.5Hz)；4.52(t，2H，J＝5.8Hz)；7.17(m，1H)；7.23(dd，1H，J＝10.1和2.6Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.3，6.1Hz)；8.36(s，1H)；13.0(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例15

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-[2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例12所示的方法，根据方案2和方案4的路径来制备标题化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与1-(2-羟基-乙基-吡咯烷-2-酮反应，然后用TBAF使所得产物脱保护。

LC/MS：保留时间＝2.023分钟；m/z＝380[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 1.89(m，2H)；2.19(t，2H，J＝8.4Hz)；2.23(s，3H)；3.45(t，2H，J＝6.8Hz)；3.60(t，2H，J＝5.5Hz)；4.45(t，2H，J＝5.5Hz)；7.17(m，1H)；7.26(dd，1H，J＝10.2和2.6Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.6，6.1Hz)；8.38(s，1H)；13.0(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例16

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气下将4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例12步骤1)(50mg，0.11mmol)、1-甲基哌嗪(0.024ml，0.22mmol)和无水DMF(0.5ml)混合并在100℃下加热3小时。使反应液冷却至室温，在EtOAc(2 x 10ml)和饱和NaHCO₃溶液(10ml)之间分配。然后，让有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到保护的粗产物。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用10％ EtOAc/己烷-50％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生无色油状的标题化合物29mg，55％。

LC/MS：保留时间＝2.14分钟；m/z＝481[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵使4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈脱保护。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用CH₂Cl₂-6％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生黄色固态的标题化合物4mg，18％。

LC/MS：保留时间＝1.67分钟；m/z＝351[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.93(t，6H，J＝7.1Hz)；2.53(q，4H，J＝7.1Hz)；2.75(brt，2H，J＝8.0Hz)；3.28(m，2H)；7.17(m，1H)；7.25(dd，1H，J＝10.2和2.6Hz)；7.44(dd，1H，J＝8).13.0brs1H。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例17

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲基氨基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例16所示方法来制备标题化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与甲基胺反应，然后用TBAF使所得产物脱保护。

LC/MS：保留时间＝2.08分钟；m/z＝282[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.21(s，3H)；2.83(d，3H，J＝4.8Hz)；7.11(m，1H)；7.20(dd，1H，J＝10.1和2.5Hz)；7.12-7.21(brs，1H)；7.36(dd，1H，J＝8.3和6.0Hz)；8.02(s，1H)；12.44(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例18

2-乙基-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

0℃下，将EtMgBr(0.04ml，0.11mmol，3M的Et₂O溶液)加入4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例12步骤1)(50mg，0.11mmol)的溶液中。20分钟后，反应液在EtOAc(2 x 15ml)和水(15ml)之间分配。然后，有机相通过疏水玻璃料，真空蒸发，得到保护的粗产物。采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵使该产物脱保护。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用CH₂Cl₂-6％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生米色固态的标题化合物24mg，79％。

LC/MS：保留时间＝2.20分钟；m/z＝281[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.33(t，3H，J＝7.6Hz)；2.21(s，3H)；2.99(q，2H，J＝7.6Hz)；7.17(m，1H)；7.25(dd，1H，J＝10.1和2.5Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.5和6.0Hz)；8.50(s，1H)；13.18(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例19

2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-dJ嘧啶-5-腈

步骤1

2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气下将4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例12步骤1)(50mg，0.11mmol)、2-二乙基氨基乙硫醇盐酸盐(37mg，0.22mmol)、Et₃N(0.03ml，0.22mmol)和无水DMF(2.0ml)混合并在100℃下加热40分钟。使反应液冷却至室温，在EtOAc(2 x 15ml)和氨水溶液(15ml)之间分配。然后让有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到保护的粗产物。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用CH₂Cl₂-6％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生黄色油状的标题化合物40mg，/1％。

LC/MS：保留时间＝2.17分钟；m/z＝514[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵使2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈脱保护。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用CH₂Cl₂-13％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物20mg，67％。

LC/MS：保留时间＝1.73分钟；m/z＝384[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.93(t，6H，J＝7.1Hz)；2.53(q，4H，J＝7.1Hz)；2.75(brt，2H，J＝8.0Hz)；3.28(m，2H)；7.17(m，1H)；7.25(dd，1H，J＝10.2和2.6Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.3和6.1Hz)；8.43(s，1H)；12.91(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例20

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-羟基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例18的方法来制备标题化合物。

因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2-巯基乙醇反应，然后用TBAF使所得产物脱保护。

LC/MS：保留时间＝2.073分钟；m/z＝329[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.22(s，3H)；3.27(t，2H，J＝6.6Hz)；3.68(m，2H)；4.99(t，1H，J＝5.3Hz)；7.18(m，1H)；7.26(dd，1H，J＝10.1和2.1Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.3和6.1Hz)；8.43(s，1H)；13.17(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例21

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吗啉-4-基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吗啉-4-基-乙基硫烷基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-羟基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例20的前体)(100mg，0.22mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液中，加入DMP试剂(Dess-Martin periodinane)(111mg，0.26mmol)。将反应液在室温下搅拌5小时。然后真空蒸发混合液，得到保护的粗产物醛。通过快速色谱法在硅胶(20g)上部分纯化，用己烷-40％ EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到无色油状的醛73mg。将其与吗啉(0.03ml，0.308mmol)、AcOH(0.04ml，0.77mmol)、粉末化3A分子筛、MeOH(3ml)和Na(OAc)₃BH₃(65mg，0.31mmol)混合并在氮气中室温下搅拌2小时。然后过滤混合液，滤液在真空中蒸发。然后在CH₂Cl₂(2 x 10ml)和饱和NaHCO₃溶液(10ml)之间分配。然后让有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到保护的粗产物。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用20％EtOAc/己烷-70％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生无色油状的标题化合物47mg，41％。

LC/MS：保留时间＝2.25分钟；m/z＝528[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

采用实施例1步骤5的方法，用氟化四丁铵使4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吗啉-4-基-乙基硫烷基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈脱保护。通过快速色谱法在硅胶(10g)上纯化，用CH₂Cl₂-5％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物19mg，54％。

LC/MS：保留时间＝1.68分钟；m/z＝398[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 2.22(s，3H)；2.43(brm，4H)；2.65(t，2H，J＝7.5Hz)；3.30(t，2H，J＝7.5Hz)；3.55(m，4H)；7.18(m，1H)；7.26(dd，1H，J＝10.1和2.5Hz)；7.44(dd，1H，J＝8.7和6.0Hz)；8.44(s，1H)；13.17(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例22

4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

1-苄氧基-2，4-二氯-5-硝基-苯

将碳酸钾(12g，87mmol)加入2，4-二氯-5-硝基苯酚(英国兰开夏莫堪贝的兰开丝特合成公司(Lancaster Synthesis，Morecambe，Lancashire，UK))(15.6g，75mmol)的丙酮溶液中。加入苄基溴(9ml，76mmol)并将该悬浮液在75℃(油浴温度)下加热约3小时。使所得悬浮液冷却，加水(500ml)，用二氯甲烷(2 x 200ml)萃取混合液。将合并的萃取物用氢氧化钠水溶液(150ml，2M)、水(2 x 200ml)和饱和氯化钠水溶液(150ml)洗涤。将该溶液在无水硫酸钠上干燥，浓缩得到淡黄色固体(21.5g，96％)

R_f 0.73 CH₂Cl₂(SiO₂)

LC保留时间2.915分钟[M+H]⁺无电离(运行时间3.75分钟)

步骤2

5-苄氧基-2，4-二氯-苯基胺

将铁粉(21g，376mmol)加入1-苄氧基-2，4-二氯-5-硝基-苯(21.5g，72mmol)的乙酸(300ml)/水(150ml)悬浮液中，将该混合液在85℃(油浴温度)下加热约90分钟。过滤所得悬浮液。使滤液冷却，加水(750ml)，并用二氯甲烷(3 x 150ml)萃取混合液。将合并的萃取物用氢氧化钠水溶液(300ml，2M)、水(2 x 500ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)洗涤。该溶液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在真空中除去溶剂，得到淡褐色固体产物(18.6g，96％)

R_f 0.57 CH₂Cl₂(SiO₂)。

LC保留时间2.792分钟[M+H]⁺ 270/268(运行时间3.75分钟)

步骤3

1-苄氧基-2，4-二氯-5-碘-苯

将盐酸(60ml，6M)加入5-苄氧基-2，4-二氯-苯基胺(16.2g，60mmol)的乙酸(240ml)溶液中，并使所得悬浮液冷却(冰/水/盐)。缓慢加入亚硝酸钠水溶液(4.8g，69.5mmol，40ml)(保持温度<5℃)。加入完全后，将所得溶液搅拌约30分钟。将所得溶液倾倒到碘化钾(20g，120mmol)和碘(4g，16mmol)的水溶液(200ml)中，将该混合液搅拌约90分钟。加水(800ml)并用二氯甲烷(3 x 250ml)萃取该混合液。将合并的萃取物用硫代硫酸钠水溶液(2x150ml，10％)、氢氧化钠水溶液(250ml，2M)、水(2 x 250ml)和饱和氯化钠水溶液(200ml)萃取。溶液用无水硫酸钠干燥，浓缩得到淡褐色油，静置固化(20.6g，90％)。

R_f 0.82 CH₂Cl₂(SiO₂)

LC保留时间3.084分钟[M+H]⁺无电离(运行时间3.75分钟)

步骤4

2，4-二氯-5-碘-苯酚

0℃下，在1-苄氧基-2，4-二氯-5-碘-苯(3.0g，7.92mmol)的CH₂Cl₂(50ml)溶液中，逐滴加入BCl₃(23.8ml，23.8mmol，1M的CH₂Cl₂溶液)。加入完全后，使反应液升高至室温。然后让混合液在饱和NH₄Cl溶液(50ml)和CH₂Cl₂(2 x 50ml)之间分配。让合并的有机相通过疏水玻璃料并真空蒸发，得到粗产物油。通过快速色谱法在硅胶(70g)上纯化，用己烷-10％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生黄色固态的标题化合物1.83g，80％。

LC/MS：保留时间＝2.48分钟；m/z＝289，287[M-H]^-。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

2，5-二氯-2-碘-甲氧基-苯

在2，4-二氯-5-碘-苯酚(0.5g，1.73mmol)的DMF(10ml)溶液中，相继加入K₂CO₃(480mg，3.46mmol)和MeI(0.12ml，1.90mmol)，将所得混合液在氮气、室温下搅拌过夜。再加入等量的K₂CO₃(480mg，3.46mmol)、MeI(0.12ml，1.90mmol)和DMF(4ml)，室温下搅拌过夜。反应混合物在氨水溶液(30ml)和EtOAc(2 x 30ml)之间分配。干燥(Na₂SO₄)合并的有机相，真空蒸发，得到粗产物。通过快速色谱法在硅胶(50g)上纯化，用己烷洗脱，产生黄色固态的标题化合物1.83g，80％。

LC/MS：保留时间＝2.76分钟；m/z＝无质量。总的运行时间3.75分钟。

步骤6

4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

-78℃、氮气下，在2，5-二氯-2-碘-甲氧基-苯的THF溶液中，加入三异丙基硼酸酯(0.64ml，2.75mmol)，再逐滴加入ⁿBuLi(0.72ml，1.79mmol，2.5M在己烷中)。使反应液升高至室温，然后真空蒸发，并在EtOAc(2 x 50ml)和稀盐酸溶液(50ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发，得到白色固态的粗产物硼酸(320mg)。将其与4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(390mg，1.1mmol)、1M NaHCO₃溶液(4.1ml，4.1mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(48mg，0.07mmol)和DMF(12ml)混合。氮气吹扫5分钟使该混合液脱气，然后在氮气中在80℃下加热3小时。使反应液冷却，然后在EtOAc(3 x 50ml)和饱和NaHCO₃溶液(50ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发得到粗产物油。通过快速色谱法在硅胶上(70g)纯化，用己烷-20％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生黄色油状的标题化合物260mg，48％。

LC/MS：保留时间＝2.96分钟；m/z＝495，497[M-H]^-。总的运行时间3.75分钟。

步骤7

采用实施例1步骤5的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.52分钟；m/z＝365，367[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.59(s，3H)；3.90(s，3H)；7.39(s，1H)；7.81(s，1H)；8.48(s，1H)；13.23。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例23

4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例12、19和22的方法来制备标题化合物。因此，用mcpba氧化4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例22步骤6)，所得砜用2-二乙基氨基乙硫醇置换。用TBAF除去SEM保护基团，得到固体标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.84分钟；m/z＝450，452[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.98(t，6H，J＝7.0Hz)；2.61-2.76(m，4H)；2.86-2.95(m，2H)；3.26-3.35(m，2H)，3.90(s，3H)；7.41(s，1H)；7.85(s，1H)；8.49(s，1H)；12.2-12.9(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例24

4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例12和22的方法来制备标题化合物。因此，用mcpba氧化4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例22步骤6)，所得砜用2-二乙基氨基乙醇置换。用TBAF除去SEM保护基团，得到固体标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.75分钟；m/z＝434，436[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.97(t，6H，J＝7.0Hz)；2.57(q，4H，J＝7.0Hz)；2.82(t，2H，J＝6.4Hz)；3.90(s，3H)；4.41(t，2H，J＝6.4Hz)，7.37(s，1H)；7.80(s，1H)；8.38(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例25

4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-[2-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例22、实施例12的方法来制备标题化合物。因此，用mcpba氧化4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例22步骤6)，所得砜用1-(2-羟基-乙基-吡咯烷-2-酮置换。用TBAF除去SEM保护基团，得到固体的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.14分钟；m/z＝446，448[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.89(m，2H)；2.20(t，2H，J＝8.0Hz)；3.46(t，2H，J＝7.0Hz))；3.61(t，2H，J＝5.5Hz)；3.90(s，3H)；4.47(t，2H，J＝5.5Hz)；7.39(s，1H)；7.81(s，1H)；8.42(d，1H，J＝2.5Hz)；13.13(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例26

4-[2，4-二氯-5-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

1-[2-(2，4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-吡咯烷

氮气下将2，4-二氯-5-碘-苯酚(实施例22，步骤4)(1g，3.46mmol)、1-(2-溴乙基)吡咯烷氢溴酸(3.81mmol)、CsCO₃(2.8g，8.65mmol)和DMF(15ml)混合，并在110℃下加热3小时。然后使反应混合物在EtOAc(2 x 40ml)和氨水溶液(40ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发，得到粗产物油。通过快速色谱法在硅胶(25g)上纯化，用己烷-45％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生黄色固态的标题化合物1.08g，80％。

LC/MS：保留时间＝1.81分钟；m/z＝386，388[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

-78℃、氮气下，在1-[2-(2，4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-吡咯烷(200mg，0.518mmol)的THF溶液中加入三异丙基硼酸酯(0.24ml，1.04mmol)，再逐滴加入ⁿBuLi(0.27ml，0.67mmol，2.5M在己烷中)。使反应液升高至室温，然后真空蒸发，得到粗产物硼酸。将其与4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(92mg，0.26mmol)、1M NaHCO₃溶液(0.8ml，0.78mmol)、PdCl₂(PPh₃)₂(9mg，0.01mmol)和DMF(6ml)混合。氮气吹扫5分钟使混合液脱气，然后在氮气中80℃下加热2小时。使反应液冷却，然后在EtOAc(2 x 60ml)和氨水溶液(60ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发，得到粗产物油。通过快速色谱法在硅胶(50g)上纯化，用CH₂Cl₂-5％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，得到黄色油状的保护的产物160mg。采用实施例1步骤5的方法使该产物脱保护，产生黄色固态的标题化合物49mg，42％。

LC/MS：保留时间＝1.83分钟；m/z＝448，450[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.68(m，4H)；2.58(s，3H)；2.61(m，4H)；2.89(t，2H，J＝5.8Hz)；4.22(t，2H，J＝5.7Hz)；7.42(s，1H)；7.80(s，1H)；8.46(s，1H)；13.00(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例27

4-[2，4-二氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2和方案4的路径，采用实施例26的方法来制备标题化合物。因此，将[2-(2，4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-二乙胺(根据实施例26步骤1制备)转化为5-取代的硼酸，并与4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈反应。除去SEM保护基团，得到固体的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.86分钟；m/z＝450，452[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 0.99(t，6H，J＝7.1Hz)；2.59(s，3H)；2.62(q，4H，J＝7.0Hz)；2.90(t，2H，J＝5.1Hz)；4.18(t，2H，J＝5.1Hz)；7.42(s，1H)；7.80(s，1H)；8.47(s，1H)；12.8(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例28

2-{5-氰基-4-[2，4-二氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基}-N-甲基-乙酰胺

根据方案2和方案4的路径，采用实施例12、26和19的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.70分钟；m/z＝507，509[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 0.50(t，6H，J＝7.2Hz)；1.92(s，3H)；2.38(q，4H，J＝7.2Hz)；2.68(t，2H，J＝5.1Hz)；3.14(s，2H)；3.62(t，2H，J＝5.1Hz)；6.51(s，1H)；6.88(s，1H)，7.37(s，1H)；7.72(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例29

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

2-氯-4，5-二甲氧基苯基硼酸

在3，4-二甲氧基硼酸(364mg)的乙腈(4mL)悬浮液中加入TFA(50uL)和NCS(294mg)。将该反应混合液在室温下搅拌6小时，用AcOEt稀释并用盐水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，减压除去溶剂。将结晶粗产物用AcOEt/己烷研磨，得到2-氯-4，5-二甲氧基-硼酸(183mg，42％)。

步骤2

根据方案2的路径，采用实施例2的方法来制备标题化合物。因此，在铃木(Suzuki)交叉偶联反应条件下，使4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2-氯-4，5-二甲氧基苯基硼酸反应。用TBAF除去所得产物的SEM保护基团，得到固体。

LC/MS：保留时间＝2.24分钟；m/z＝361[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

2.58(s，3H)；3.80(s，3H)；3.86(s，3H)，7.14(s，1H)，7.19(s，1H)；8.44(s，1H)；13.20(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例30

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例12的方法来制备标题化合物。因此，用mcpba氧化4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例29)，产生淡褐色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.588分钟；m/z＝523，525[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

根据实施例19步骤1的方法来制备标题化合物。因此，4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2-二乙基氨基乙硫醇反应。反应所得粗产物通过实施例1步骤5的方法脱保护，得到无色固体产物，然后用快速色谱法纯化(硅胶；乙酸乙酯/己烷混合液洗脱)。

LC/MS：保留时间＝1.68分钟；m/z＝446[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

0.97(t，6H，J＝7.1Hz)；2.57-2.68(m，4H)；2.82-2.90(brm，2H，)；3.25-3.35(brm，4H)，3.80(s，3H)；3.86(s，3H)7.16(s，1H)，7.19(s，1H)；8.44(s，1H)；

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例31

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

乙酸-2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-2-氧代-乙酯

将4，4-二氟哌啶盐酸盐(600mg，3.8mmol)在含有Et₃N(11.4mmol，1.151g，1.59ml)的DCM(10ml)中搅拌，并使混合液冷却至0℃。逐滴加入用DCM(5ml)配制的乙酰氧基乙酰氯(5.7mmol，778mg，0.612ml)，将该反应混合液在室温下搅拌过夜。相继用饱和NaHCO₃溶液(x2)和盐水(x2)洗涤该反应混合液。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤，滤液在真空中除去溶剂。将残留物冷却，用己烷研磨，得到无色油状的标题化合物(773mg(92％)。

步骤2

2-(4，4-二氟-哌啶基-1-基)乙醇

室温下将LiAlH₄(15mmol，15ml 1M的THF溶液)在THF(20ml)中搅拌。逐滴加入用THF(15ml)配制的乙酸-2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-2-氧代-乙酯(5mmol，1.1g)。加入完全后，将反应液加热至40℃并保持4小时。室温下将反应液搅拌过夜，然后冷却至0℃。小心加入H₂O(2ml)、1M NaOH水溶液(1ml)和H₂O(1ml)来淬灭反应混合液。将混合液搅拌30分钟，然后通过硅藻土过滤，滤饼用EtOAc洗涤几次。真空浓缩滤液，得到标题化合物800mg(95％)。

步骤3

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例30，步骤1)和2-(4，4-二氟-哌啶基-1-基)乙醇，根据实施例12步骤2的方法来合成标题化合物。得到粗产物，通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用1:1的乙酸乙酯:己烷洗脱，得到灰白色固体产物(产率90％)。

LC/MS：保留时间＝2.33分钟；m/z＝608，610[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤4

根据实施例1步骤5的方法来制备标题化合物。因此，4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与TBAF和乙二胺在THF中反应，得到粗产物，通过快速色谱法在硅胶上纯化，用梯度1-5％的甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到灰白色固体产物(产率39％)。

LC/MS：保留时间＝1.646分钟；m/z＝478，480[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)： 1.87-2.00(m，4H)；2.59-2.68(m，4H)；2.83(brt，2H，J＝5.3Hz)；3.74(s，3H)；3.86(s，3H)，4.46(brt，2H，J＝5.3Hz)；7.13(s，1H)，7.19(s，1H)；8.37(s，1H)；13.02(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例32

4-(4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用合适的硼酸进行偶联，合适的醇进行砜置换，利用实施例2、12和31的方法，根据方案2和方案4的路径来制备该化合物。最终产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用梯度0-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到灰白色固体产物。

LC/MS：保留时间＝1.583分钟；m/z＝444[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.88-2.00(m，4H)；2.59-2.65(m，4H)；2.82(t，2H，J＝5.6Hz)；3.85(s，3H)；3.89(s，3H)，4.48(t，2H，J＝5.6Hz)；7.14(d，1H，J＝8.7Hz)，7.46-7.51(m，2H)；8.42(s，1H)；12.99(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例33

2-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-(3，4-二甲氧基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用合适的硼酸进行偶联，合适的醇进行砜置换，利用实施例2、12和31的方法，根据方案2和方案4来制备该化合物。最终产物通过制备型HPLC(pH4)纯化，得到无色固体。

LC/MS：保留时间＝1.736分钟；m/z＝430[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.17-2.28(m，2H)；2.80(t，2H，J＝6.8Hz)；2.88(t，3H，J＝5.6Hz)；3.00(t，2H，J＝13.5Hz)；3.85(s，3H)；3.90(s，3H)；4.47(t，2H，J＝5.6Hz)；7.14(s，1H)；7.46-7.51(m，2H)，8.42(s，1H)，13.00(brs1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例34

4-(3，4-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3(S)-氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用合适的硼酸进行偶联，合适的醇进行砜置换，利用实施例2、12和31的方法，根据方案2和方案4来制备该化合物。最终产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用梯度0-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到白色固体产物。

LC/MS：保留时间＝1.474分钟；m/z＝412[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.78-1.94(m，1H)，2.02-2.21(m，1H)，2.35-2.47(m，1H)；2.63-2.75(m，1H)，2.80-2.95(m，4H)，3.85(s，3H)，3.90(s，3H)，4.47(t，2H，J＝5.8Hz)；5.49(dm，1H)；7.14(d，1H，J＝8.3Hz)；7.49(m，2H)，8.42(s，1H)；13.01(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例35

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3(S)-氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用合适的硼酸进行偶联，合适的醇进行砜置换，利用实施例2、12和31的方法，根据方案2和方案4来制备该化合物。最终产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用梯度3-5％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到白色固体产物。

LC/MS：保留时间＝1.502分钟；m/z＝446[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：

1.76-1.93(m，1H)，2.04-2.19(m，1H)，2.40(m，1H)，2.62-2.77(m，1H)，2.80-2.88(m，4H)，3.79(s，3H)，3.86(s，3H)，4.46(t，2H，J＝5.8Hz)；5.20(dm，1H)；7.13(s，1H)，7.18(s，1H)，8.35(s，1H)；13.00(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例36

2-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-(2-氯-3，4-二甲氧基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用合适的硼酸进行偶联，合适的醇进行砜置换，利用实施例2、12和31的方法，根据方案2和方案4来制备该化合物。最终产物通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用梯度0-3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到白色固体产物。

LC/MS：保留时间＝1.816分钟；m/z＝464[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.17-2.28(m，2H)；2.80(t，2H，J＝6.7Hz)；2.88(t，3H，J＝5.6Hz)；2.99(t，2H，J＝13.4Hz)；3.74(s，3H)；3.86(s，3H)；4.40(t，2H，J＝5.6Hz)；7.14(s，1H)；7.18(s，1H)，8.36(s，1H)，13.00(brs1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例37

4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺

将4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(市售)(600mg，2.98mmol)加入磺酰胺(715mg；7.44mmol，2.5当量)中，然后将该混合物溶解在吡啶(2.9ml)中，氮气环境下加热2.5小时。使反应混合物冷却至环境温度，真空除去吡啶。所得固体用10％ MeOH的二氯甲烷溶液洗涤。过滤并干燥，得到乳膏固体550mg；92％。

步骤2

4-氨基-5-氯-2-甲氧基苄腈

将4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺加入乙腈中，在所得悬浮液中加入POCl₃(过量)，并将该混合液加热至80℃持续3小时(1.5小时后反应混合液是均质的)。使反应混合液冷却至室温，然后倒入冰水中。搅拌2小时后，过滤出黄色固体，50℃下干燥过夜。

步骤3

4-碘-5-氯-2-甲氧基苄腈

根据实施例22步骤3的方法来制备标题化合物(重氮化和用碘/碘化钠水溶液淬灭)。

步骤4

4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据实施例26步骤1的方法来制备标题化合物(形成硼酸，然后交叉偶联)。

LC/MS：保留时间＝2.884分钟；m/z＝486，488[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据实施例22步骤1的方法来制备标题化合物(用mcpba氧化)。

步骤6

根据方案4的路径，采用实施例19(砜置换)和实施例1步骤5(脱保护)的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.75分钟；m/z＝457[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 1.02(t，6H，J＝7.1Hz)；2.72-2.81(brm，4H)；2.94-3.03(brm，4H)，3.26-3.37(brm，4H)；3.96(s，3H)；7.56(s，1H)；8.19(s，1H)，8.51(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例38

2-[5-氰基-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-N-甲基-乙酰胺

根据方案2和方案4的路径，采用实施例12和实施例19的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.01分钟；m/z＝356[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例39

4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

步骤1

4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

采用实施例1步骤5的方法，使4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(实施例9步骤8)脱保护。因此，与TBAF和乙二胺在THF中反应，得到粗产物，通过制备型HPLC(pH4)纯化，得到无色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.987分钟；m/z＝267[M+H]⁺。总的运行时间7.5分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 1.91(s，3H)；2.33(s，3H)；6.81(brs，1H)；7.05(d，1H，J＝7.7Hz)；7.07(s，1H)；7.12(d，1H，J＝7.7Hz)；7.97(s，1H)；8.83(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例40

4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

根据方案2的路径，采用实施例2和实施例39的方法来合成标题化合物。

步骤1

4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺

根据实施例2步骤5的方法，使4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(实施例2，步骤3)与4-氟-2-甲基苯基硼酸交叉偶联。得到粗产物，通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用20-65％乙酸乙酯的己烷溶液(梯度)洗脱；得到无色油状的标题化合物(产率90％)。

LC/MS：保留时间＝2.676分钟；m/z＝447[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

采用实施例1步骤5的方法来制备标题化合物。因此，与TBAF和乙二胺在THF中反应，得到粗产物，通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用0-4％甲醇的二氯甲烷溶液(梯度)洗脱，得到无色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.920分钟；m/z＝317[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.56(s，3H)；6.68(brs，1H)；6.98-7.11(m，3H)；7.19-7.24(m，1H)；7.84(d，1H，J＝2.3Hz)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例41

4-(二氯-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2的路径，采用实施例2的方法来制备标题化合物。因此，4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与2，4二氯苯基硼酸反应，所得产物用TBAF和乙二胺在THF中脱保护。最终产物通过制备型HPLC(pH4)纯化，得到灰白色固态的标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.511分钟；m/z＝335，337[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.58(s，3H)；7.62(m，2H)；8.86(m，1H)；8.49(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例42

4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用实施例1步骤5的方法，使4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例37步骤4)脱保护。通过快速色谱法在硅胶上进行纯化，用20-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到固体产物。

LC/MS：保留时间＝2.33分钟；m/z＝356[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.59(s，3H)；3.96(s，3H)；7.54(s，1H)；8.19(s，1H)；8.51(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例43

4-(2，3-二氢-苯并[1，4]二噁烯(dioxin)-6-基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2的路径，采用实施例2的方法来制备标题化合物。因此，4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与1，4-苯并二噁烷-6-硼酸反应，所得产物用TBAF和乙二胺在THF中脱保护。最终产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用1:1的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到固体标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.26分钟；m/z＝325[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.58(s，3H)；4.30-4.37(m，4H)；7.03(dd，1H，J＝7.1，1.3Hz)；7.39(s，1H)；7.40(dd，1H，J＝7.1，2.4Hz)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“C”。

实施例44

4-(二甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

根据方案2的路径，采用实施例2的方法来制备标题化合物。因此，4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈与3，4-二甲氧基苯基硼酸反应，所得产物用TBAF和乙二胺在THF中脱保护。最终产物通过快速色谱法在硅胶上纯化，用1:1的乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到固体标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.17分钟；m/z＝327[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.60(s，3H)；3.86(s，3H)；3.89(s，3H)；7.15(d，1H，J＝8.4Hz)；7.46-7.51(m，2H)；8.50(s，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例45

4-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-异丙基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

5-溴-2-甲氧基-苯酚

在5-溴-2-甲氧基-苯甲醛(15g，69.8mmol)的CH₂Cl₂(200ml)溶液中，加入mCPBA(19.0g，82.4mmol)，将所得混合液在室温下搅拌48小时。然后在CH₂Cl₂(150ml)和饱和NaHCO₃溶液(400ml)之间分配。将有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。然后，将残留物溶解在最少量的EtOAc中，通过SiO₂柱塞，再用EtOAc洗涤。将滤液真空蒸发并重新溶解在MeOH(50ml)中。加入1MLiOH水溶液(50ml)，将混合液搅拌10分钟。然后小心加入2M HCl水溶液以酸化反应混合物至pH 6-7。用EtOAc(3 x 100ml)萃取，将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用己烷，然后是10％ EtOAc/己烷洗脱，产生白色固态的标题化合物10.21g，72％。

LC/MS：保留时间＝2.11分钟；m/z＝201，203[M-H]。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

5-溴-4-氯-2-甲氧基-苯酚

在5-溴-2-甲氧基-苯酚(10.08g，49.66mmol)的MeCN(110ml)溶液中，相继加入TFA(1.15ml，14.9mmol)和NCS(7.29g，54.63mmol)，将所得混合液在室温下搅拌16小时。然后在EtOAc(200ml)和盐水(400ml)之间分配。将有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上进行纯化，用己烷、然后是10％EtOAc/己烷洗脱，产生白色固态的标题化合物10.5g，89％。

LC/MS：保留时间＝2.28分钟；m/z＝235，237[M-H]。总的运行时间3.75分钟。

步骤3

1-溴-2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯

0℃、氮气下，向5-溴-4-氯-2-甲氧基-苯酚(1.0g，4.21mmol)的二甲氧基甲烷(28ml)和CHCl₃(28ml)的溶液中一次性加入P₂O₅(5.68g，40mmol)。5分钟后，使反应液升高至室温。然后将反应混合液倒在冰上，用CH₂Cl₂(2 x 50ml)萃取。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用己烷-10％ EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物1.03g，87％。

LC/MS：保留时间＝2.57分钟；未检测到质量。总的运行时间3.75分钟。

步骤4

4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(交叉偶联)中采用1-溴-2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，根据方案2的路径，采用实施例2和22的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.84分钟；m/z＝521，523[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤5

4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

采用4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，根据方案4的路径，采用实施例12(步骤1)的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.62分钟；m/z＝553，555[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤6

4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(亲核置换)中采用4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，根据方案4的路径，采用实施例12步骤2的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.96分钟；m/z＝549，551[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤7

4-(2-氯-5-羟基-4-甲氧基-苯基)-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气下将4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(94mg，0.17mmol)、对甲苯磺酸吡啶鎓(9mg，0.034mmol)和ⁱPrOH混合并在85℃下加热5小时。使反应液冷却，在EtOAc(20ml)和盐水(20ml)之间分配。将有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用己烷-30％EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物85mg，99％。

LC/MS：保留时间＝2.86分钟；m/z＝505，507[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤8

4-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(烷基化)中采用4-(2-氯-5-羟基-4-甲氧基-苯基)-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈和(2-溴-乙基)-二乙基-胺，根据方案5的路径，采用实施例26步骤1的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.37分钟；m/z＝604，606[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤9

采用4-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-异丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3d]嘧啶-5-腈，和用THF配制的TBAF/乙二胺，根据实施例1步骤5的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.90分钟；m/z＝474，476[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 0.96(t，6H，J＝7.1Hz)；1.41(d，6H，J＝6.8Hz)；2.58(q，4H，J＝7.1Hz)，2.84(t，2H，J＝6.0Hz)；3.86(s，3H)，3.94(sept，1H，J＝6.8Hz)；4.06(t，2H，J＝6.0Hz)；7.18(s，1H)，7.19(s，1H)；8.43(s，1H)；NH未观察到。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例46

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙烷亚磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

0℃下，在4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例30)(30mg，0.067mmol)的MeCN溶液中，逐滴加入MeCN:BF₃复合物(0.85ml，16％ BF₃在MeCN中)。然后缓慢加入mCPBA(15mg，～0.067mmol)的MeCN(0.5ml)溶液，使反应液升高至室温。1小时后，反应混合液在EtOAc(15ml)和硫代硫酸钠溶液(15ml)之间分配。有机相用饱和NaHCO₃溶液(15ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发。所得粗产物通过制备型HPLC纯化，得到白色固态的标题化合物2mg，6％。

LC/MS：保留时间＝1.54分钟；m/z＝462，464[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例47

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲烷亚磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

0℃下，在4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例29)(50mg，0.139mmol)的CH₂Cl₂溶液中，加入mCPBA(31mg，～0.139mmol)的CH₂Cl₂(2.5ml)溶液，使反应液升高至室温。然后，反应混合液在CH₂Cl₂(2 x 15ml)和硫代硫酸钠溶液(15ml)之间分配。有机相用饱和NaHCO₃溶液(15ml)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用CH₂Cl₂-5％MeOH/CH₂Cl₂(梯度)洗脱，产生白色固态的标题化合物27mg，52％。

LC/MS：保留时间＝1.81分钟；m/z＝377，379[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 2.94(s，3H)；3.81(s，3H)；3.88(s，3H)；7.24(s，1H)；7.25(s，2H)；8.77(s，1H)；13.8(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例48

4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

在合适的步骤(氧化)中采用4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例29)，根据方案4的路径，采用实施例12(步骤1)的方法来制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝1.97分钟；m/z＝393，395[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

¹H NMR(d₆ DMSO)：δ 3.49(s，3H)；3.87(s，3H)；3.89(s，3H)；7.26(s，1H)；7.27(s，2H)；8.90(s，1H)；14.0(brs，1H)。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

实施例49

(4-{2-氯-5-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸乙酯。

步骤1

[4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯。

采用巯基乙醇酸乙酯、氢化钠和4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(实施例45，步骤6)，根据方案2和方案4的路径，采用实施例12(步骤2)的方法来制备标题化合物。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用己烷、然后是30％ EtOAc/己烷洗脱，产生油状标题化合物240mg，81％。

LC/MS：保留时间＝2.82分钟(270nm)；m/z＝593，595[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟(短位置(short pos))。

步骤2

[4-(2-氯-5-羟基-4-甲氧基-苯基)-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯。

在合适的步骤(MOM脱保护)中采用[4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯和吡啶对甲苯磺酸盐，根据实施例45步骤7的方法来制备标题化合物。全水后处理(full aqueous work up)之后，分离乳膏状有色泡沫形式的标题化合物，无需进一步纯化即可使用，172mg，81％。

LC/MS：保留时间＝2.73分钟(270nm)；m/z＝549，551[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟(短位置)。

步骤3

[4-{2-氯-5-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯。

在化合物2(164mg，0.298mmol)的THF(5ml)溶液中加入三苯基膦(118mg，0.448mmol)和2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙醇(根据2-(4，4-二氟-哌啶基)-乙醇的实施例32步骤1和2制备)(68mg，0.448mmol)。反应液在室温下搅拌15分钟，然后冷却至0℃。逐滴加入用THF(3ml)配制的二异丙基偶氮二羧基酯(91mg，0.448mmol)，加入后使反应液在15分钟内升高至室温。将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后在EtOAc和水之间分配。分离有机层，再用另一部分EtOAc萃取水相，将合并的有机层相继用饱和碳酸氢钠溶液和饱和盐水溶液洗涤。将有机相干燥(Na₂SO₄)并真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用30％EtOAc/己烷-50％ EtOAc/己烷(梯度)洗脱，产生油状标题化合物120mg，60％。

LC/MS：保留时间＝2.79分钟(270nm)；m/z＝682，684[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟(短位置)。

步骤4

采用[4-{2-氯-5-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯、氟化四丁铵溶液1M和用THF配制的1，2-二氨基乙烷，根据实施例1步骤5的方法来制备标题化合物。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，先用50％ EtOAc/己烷，再用50％ EtOAc/DCM洗脱，产生淡黄色固态的标题化合物30mg，31％。

LC/MS：保留时间＝2.12分钟(270nm)；m/z＝552，554[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟(短位置)。

¹H NMR(d₄ MeOH)：δ 1.15(t，3H)；2.15-2.27(七重峰，2H)；2.82-2.91(m，4H)；3.04(t，2H)；3.88(s，3H)；4.01(s，2H)；4.08-4.16(m，4H)；7.09(s，1H)；7.11(s，1H)；8.07(s，1H)NH未见。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

实施例50

(4-{2-氯-5-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸。

在(4-{2-氯-5-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸乙酯(20mg，0.0362mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入KOH(8mg，0.145mmol)的水(1mL)溶液，将反应液回流1.5小时。反应液冷却至室温，真空浓缩。将残留物溶解在最少量的水中，用2MHCl小心酸化至pH4。所得水性溶液用EtOAc(3 x 10mL)萃取，将合并的萃取物用饱和盐水溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)，真空浓缩，产生白色固态的标题化合物15.5mg，82％。

LC/MS：保留时间＝1.77分钟(270nm)；m/z＝524，526[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟(短位置)。

¹H NMR(d₄ MeOH)：δ 2.29-2.41(七重峰，2H)；3.01-3.09(m，4H)；3.23(t，2H)；3.98(s，3H)；4.09(s，2H)；4.25(t，2H)；7.19(s，1H)；7.21(s，1H)；8.15(s，1H)；NH和OH未见。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“A”。

本发明的其他化合物如表1所示。这些化合物根据方案1-5的途径，采用实施例1-50的方法制备。

表1

^＊下述FP结合分析中的活性

实施例93

4-(1，3-二氢-异吲哚-2-羰基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

步骤1

5-氰基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-羧酸

将4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(100mg，0.282mmol)、三乙胺(0.083ml，0.592mmol)、MeOH(0.16ml，3.93mmol)、1，3-双(二苯基膦基)丙烷(96mg，0.23mmol)、Pd(OAc)₂(48mg，0.214mmol)和无水DMF(2ml)混合。然后将CO通入混合液持续2分钟。将反应液在CO气氛中70℃下加热4小时。反应混合液在EtOAc(2 x 15ml)和饱和NH₄Cl溶液(20ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发，得到粗产物油。通过快速色谱法在硅胶(20g)上纯化，用己烷-30％ EtOAc/己烷(梯度)洗脱，得到黄色油状的不纯甲酯。将其溶解在DMA(1ml)中，加入2N NaOH(0.1ml，0.212mmol)。室温下搅拌2小时之后，加水(15ml)，小心加入1N HCl水溶液使溶液酸化至pH 4-5。用EtOAc(3 x 20ml)萃取，将有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发，产生黄色油状标题化合物50mg。LC/MS：保留时间＝2.50分钟；m/z＝365[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤2

4-(1，3-二氢-异吲哚-2-羰基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈

氮气下，将5-氰基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-羧酸(25mg，～0.05mmol)、异二氢吲哚(0.106mmol)、HBTU(40mg，0.106mmol)、DIPEA(0.018ml，0.106mmol)和DMA(1mL)混合并在室温下搅拌1小时。然后使该反应液在EtOAc(2 x 15ml)和饱和NH₄Cl溶液(20ml)之间分配。将合并的有机相干燥(Na₂SO₄)，真空蒸发。所得粗产物通过快速色谱法在SiO₂上纯化，用己烷-乙酸乙酯混合物(梯度)洗脱，产生黄色油状标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.84分钟；m/z＝466[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

步骤3

采用4-(1，3-二氢-异吲哚-2-羰基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈、氟化四丁铵溶液1M和用THF配制的1，2-二氨基乙烷，根据实施例1步骤5的方法制备标题化合物。

LC/MS：保留时间＝2.19分钟；m/z＝336[M+H]⁺。总的运行时间3.75分钟。

该化合物在下述荧光偏振分析中的活性为“B”。

荧光偏振分析

荧光偏振{也称为荧光各向异性}测定溶液中发荧光基团的旋转，较大的分子荧光发射的偏振较高。当荧光团受到偏振光激发时，其发射的光也偏振。分子大小与荧光发射的偏振程度成比例。

荧光素-标记的探针-

结合HSP90{全长人，全长酵母或N-末端区域HSP90}，测定各向异性{探针的旋转：蛋白质复合物}。

在试验板中加入试验化合物，静置平衡，再次测定各向异性。各向异性的任何变化是因为化合物与HSP90的竞争性结合，从而释放探针。

材料

将市售纯度最高的化学物质和所有水性溶液配制在AR水中。

1)Costar 96-孔黑色试验板#3915

2)试验缓冲液：(a)100mM Tris pH7.4；(b)20mM KCl；(c)6mM MgCl₂。室温下储存。

3)BSA(牛血清白蛋白)10mg/ml(新英格兰生物实验室(New EnglandBiolabs)# B9001S)

4)20mM探针的100％ DMSO储备液。室温下黑暗中储存。使用浓度为AR水中稀释的200nM，4℃下储存。试验中的最终浓度为80nM。

5)表达人全长HSP90蛋白质的大肠杆菌，纯度>95％(参见例如，Panaretou等，1998)，以50μL等分试样在-80℃下储存。

方法

1)将100μl 1x缓冲液加入孔11A和12A(＝FP BLNK)

2)制备试验混合液-所有反应液在冰上保持，因为探针光敏感，所有冰桶加盖。

i.终浓度ⁿ

· 1x Hsp90 FP缓冲液 10ml 1x

· BSA 10mg/ml(NEB) 5.0μl 5μg/ml

· 探针200μM 4.0μl 80nM

· 人全长Hsp90 6.25μl 200nM

3)将等分试样100μl试验混合物加入所有其他孔中

4)密封板，室温下黑暗中静置20分钟使其平衡。

化合物稀释板-1x3稀释系列

1)在干净的96-孔v形底试验板中-{# VWR 007/008/257}，向孔B1-H11加入10μl 100％DMSO。

2)向孔A1-A11加入17.5μl 100％DMSO。

3)向孔A1加入2.5μl cpd。得到2.5mM{50x}储备cpd-假定cpd 20mM。

4)对孔A2-A10重复上述操作。列11和12作为对照。

5)将5μl从行A转移至行B-列12除外。混合各孔。

6)将5μl从行B转移至行C。混合各孔。

7)重复至G。

8)对行H不添加任何化合物-这是0行。

9)这就产生了从50μM到0.07μM的1x3稀释系列。

10)在孔B12中制备20μl 100μM的标准化合物。

11)首次孵育后，在Fusion^TM α-FP读板仪(PB生物科学公司(PackardBioScience，Pangbourne)，Berkshire，UK)上读取试验板。

12)第一次读取后，将2μl稀释的化合物加入列1-10的各孔中。在列11中{提供标准曲线}仅加入化合物B11-H11。将2μl 100mM标准cpd加入B12-H12各孔中{作为阳性对照}

13)从零对照和阳性孔计算Z’因子。通常值为0.7-0.9。

上述试验中测试的化合物归属于以下三种活性范围之一，即A＝<0.5μM；B＝0.5μM-10μM；C＝>10μM，这些归属如上所述。

也采用生长抑制实验来评价试验化合物：

硫代罗丹明(SRB)试验评价细胞毒性：计算50％抑制浓度(IC ₅₀ )

第1天

1)血球计测定细胞数。

2)使用8通道移液器向96-孔微量滴定板的各孔中加入160μl细胞悬浮液(3600个细胞/孔或2 x 10⁴个细胞/ml)。

3)在CO₂培养箱中37℃下孵育过夜。

第2天

4)制备药物储备液，用培养液配制每种药物的系列稀释液，得到各孔中的终浓度。

5)采用多通道移液器，将40μl药物(5x终浓度)加入四复孔中。

6)对照孔在96孔板的任一侧，加入40μl培养液。

7)将板在CO₂培养箱中孵育4天(48小时)。

第6天

8)将培养液倒入池中，将板缓慢浸渍到10％冰冷的三氯乙酸(TCA)中。在冰上静置约30分钟。

9)通过将板浸渍到自来水浴中和倾倒，用自来水洗涤各板三次。

10)在培养箱中干燥。

11)将100μl用1％乙酸配制的0.4％SRB加入各孔中(96孔板的最后一行(右手)除外，这是0％对照，即无药物无染色。第一行是无药物但进行染色的100％对照)。静置15分钟。

12)1％乙酸洗涤四次，除去未结合的SRB染料。

13)在培养箱中干燥板。

14)用100μl 10mM的Tris碱溶解SRB，将板置于振荡仪上震摇5分钟。

15)用读板仪测定540nm处的吸光度。计算四复孔的平均吸光度，以对照未处理孔的百分比表示。

16)将百分吸光度值与药物对数浓度作图，测定GI₅₀.，即抑制细胞生长50％时所需的试验化合物的浓度。

上述试验中测试的化合物归属于以下三种活性范围之一：即A＝<0.5μM；B＝0.5μM-10μM；C＝>10μM，本发明六种化合物的结果如表2所示。

表2

GI₅₀：所述BT474细胞中的生长抑制

参考文献

上文引用了许多出版物以更全面地阐述和描述本发明和本发明所属领域的状态。下面提供了这些参考文献的全面信息。这些参考文献各自的全部内容结合在本文中作为参考。

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Claims

1.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

式中，

R₁是氢、氟、氯、溴、或式(IA)的基团：

-X-Alk¹-(Z)_m-(Alk²)_n-Q (IA)

式中，

X是-O-、-S- -S(O)-、-SO₂-或-NH-，

m、n和p独立地是0或1，和

Q是氢或任选取代的碳环或杂环基团；

R²是式(IB)的基团：

-(Ar¹)_p-(Alk¹)_q-(Z)_r-(Alk²)_s-Q (IB)

式中，

Ar¹是任选取代的芳基或杂芳基，

Alk¹、Alk²、Z和Q如式(IA)中所定义，和

p、q、r和s独立地是0或1；和

2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R₃是氰基(-CN)。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，R₁是氢、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、羟基乙硫基、甲基氨基、二乙基氨基甲硫基、甲基氨基羰基甲硫基或式(A)-(H)的基团：

其中W是-O-或-S-。

4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其特征在于，基团R₂中如果存在Alk¹和Alk²，则它们是-CH₂-。

5.如前述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，基团R₂中如果存在Ar¹，它是任选取代的苯环。

6.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其特征在于，基团R₂中p是1，q、r和s各自是0，Q是氢。

7.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其特征在于，基团R₂中p是1，q、r和s是0，Q是任选取代的碳环或杂环。

8.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，基团R₂中，Q是任选取代的苯基、环己基、吡啶基、吗啉代、哌啶基或哌嗪基环。

9.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其特征在于，R₂是任选取代的苯基、2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-、3-或4-吡啶基、吗啉基或哌啶基。

10.如权利要求9所述的化合物，其特征在于，R₂是苯基，任选地被一个或多个选自下组的取代基所取代：甲基、三氟甲基、乙基、正-或异丙基、乙烯基、烯丙基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、亚甲基二氧、亚乙基二氧、正-丙氧基、苄氧基、烯丙氧基、氰基甲氧基、氟、氯、溴、氰基、甲酰基、甲基-、乙基-、或正-丙基-羰氧基、甲基-、或乙基氨基羰基、以及式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹的取代基，其中n是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者任选地被取代，或C₁-C₆烷氧基；或式-(Alk³)_mZ¹的取代基，其中Alk³是二价直链或支链(C₁-C₃)亚烷基，m是0或1，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者可任选地被取代，或C₁-C₆烷氧基。

11.如权利要求10所述的化合物，其特征在于，所述任选的取代基位于苯环的2-和/或4-和/或5-位。

12.式(II)的如权利要求1所述的化合物：

式中，

R₁是(a)C₁-C₆烷硫基或C₁-C₆烷氧基，其中的一个或多个氢原子可任选地被氟原子取代，或(b)式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹的取代基，其中n是1、2或3，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，后者可任选地被取代。

R₁₀是H、Cl、Br或-CH₃；

R₁₂是(i)式-O(CH₂)_nZ¹或-S(CH₂)_nZ¹的基团，其中n是1、2或3，Z¹是(i)伯、仲、叔氨基或环状氨基，或C₁-C₆烷氧基；或(ii)式-(Alk³)_mZ¹的基团，其中Alk³是二价直链或支链(C₁-C₃)亚烷基，m是0或1，Z¹是伯、仲、叔氨基或环状氨基，或C₁-C₆烷氧基。

13.如权利要求1所述的化合物，所述化合物是本文任一实施例中的主题。

14.一种药学或兽药学组合物，所述组合物包含如权利要求1-13中任一项所述的化合物，以及一种或多种药学上或兽药学上可接受的载体和/或赋形剂。

15.如权利要求1-13中任一项所述的化合物在制备用于在体外或体内抑制HSP90活性的组合物中的应用。

16.一种治疗哺乳动物的响应HSP90活性抑制的疾病的方法，所述方法包括给予哺乳动物一定量的如权利要求1-13中任一项所述的化合物以有效抑制所述HSP90活性。

17.如权利要求15所述的应用或权利要求16所述的方法，用于免疫抑制或治疗病毒疾病，耐药性真菌感染，炎性疾病如类风湿性关节炎、哮喘、多发性硬化、I型糖尿病、狼疮、牛皮癣和炎性肠病；囊性纤维化病；血管新生-相关疾病如糖尿病视网膜病、血管瘤和子宫内膜异位；或用于保护正常细胞免于化疗诱导的毒性；或者不能凋亡是其潜在因素的疾病；或保护心脏和脑免于Hsp70升高导致的缺氧-缺血损伤；绵羊瘙痒病/CJD，亨廷顿病或阿耳茨海默病。

18.如权利要求15所述的应用或权利要求16所述的方法，用于治疗癌症。