CN101407531B

CN101407531B - 二聚体可水解鞣质衍生物用于治疗肥胖的药物和饮食添加剂的应用

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Publication number: CN101407531B
Application number: CN2007101639243A
Authority: CN
Inventors: 刘宏伟; 赵文华; 宋晓红; 夏颖; 张英侠
Original assignee: Capital Medical University
Current assignee: Capital Medical University
Priority date: 2007-10-11
Filing date: 2007-10-11
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2027-10-11
Also published as: CN101407531A

Abstract

本发明涉及一种二聚体可水解鞣质衍生物Gemin G，其具有如右的结构。所述化合物在体外显示了很强的抗脂肪酸合酶，在动物实验中也表现了很好的减肥作用，可单独或与其他药物配合，配可药用载体，用于制备治疗、预防肥胖的各种药物剂型，如胶囊剂、颗粒剂、口服液或者片剂；也可用于制备预防肥胖食品添加剂。

Description

二聚体可水解鞣质衍生物用于治疗肥胖的药物和饮食添加剂的应用

技术领域

本发明涉及医药、食品技术领域，特别是涉及具有抑制脂肪酸合酶活性和减肥作用的一种二聚体可水解鞣质衍生物。

背景技术

近年来，随着人类生存年龄的提高，饮食生活的改变，运动不足及生活环境的变化引起的精神压力和应激反应的增加，致使患肥胖、癌症及慢性、老年性疾病的人数大幅增多，已成为一种迫切亟待解决的问题。肥胖是一种复杂的，多因素决定的代谢失调症，如基因、调节能量平衡的激素、环境、生活方式以及饮食都是可能引起肥胖的因素。但从根本上来说，肥胖源于食物摄入与能量消耗之间的平衡的破坏。肥胖严重影响生活质量，会导致很多疾病，如高血脂、高血压、高血糖等疾病。目前临床应用疗效确切的减肥药物多为化学合成药物，如去甲肾上腺素摄取抑制剂等，长期服用毒副作用大。因此迫切需要开发疗效确切、毒副作用低的减肥产品。

脂肪酸合酶(FAS)是人类和动物体内脂肪合成的关键酶，通过抑制脂肪酸合酶的活性可以有效预防和减轻肥胖症状。2000年J.Hopkins大学的Loftus等通过给小鼠腹膜内注射FAS抑制剂C75，观测到小鼠体重明显减轻。这种体重的减轻呈剂量依赖性，并随剂量的增加而延长作用的时间。小鼠停药后随药物作用的消失均能恢复失去的体重，而不会持续消瘦。这种药物对小鼠来说有良好的耐受性，且未见明显的毒性，饥饿后机体的正常反应是能量消耗的减少，而C75的作用则不同：通过C75给药和饥饿疗法的比较表明，C75给药尽管导致摄食量的减少，但是并不影响机体正常的能量代谢。抑制FAS的活性，既能阻滞生脂通路，减少脂肪的合成，又能够造成丙二酰辅酶A浓度的升高，抑制中枢系统调控饮食的神经肽从而达到降低食欲的目的，具有一举两得的作用。因此FAS很可能是体内调节能量消耗和储存的重要位点之一，也是一个很好的调节靶位。合适的FAS抑制剂既能调节脂肪的代谢和储存，又能降低食欲减少食物摄入，特别是其作用并不依赖于特定的基因缺陷，使得此项研究具有广泛而深远的意义，已引起极大关注。我国学者田维熙教授等人报道绿茶中的成分-表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCG)是有效的FAS抑制剂，它和C75有不同的抑制表现及作用部位，研究表明绿茶和中药何首乌都具有抑制脂肪酸合酶和减肥的作用。(李丽春等，中国生物化学与分子生物学学报，200319(3)：297-304；张睿等，云南大学学报，2004，26(6A)：42-47。)另有报道EGCG能减轻小鼠食欲和体重(Kao JH.，Endocrinology，2000，141(3)：980～987)。大量的科学研究已经证实了脂肪酸合酶抑制剂在治疗和预防肥胖方面的潜在的应用。

1982年Takashi Yoshida和Takuo Okuda等人从日本水杨梅的叶子中首次分离得到一个二聚体可水解鞣质衍生物Gemin A(Takashi Yoshida et al.Journal of chemicalSociety.PERKIN TRANS.I.1985，315-320)。Gemin A是自然界中第一个具有α-glucose和β-glucose的二聚体鞣花酸鞣质。我们从柔毛水杨梅(GeumjaponicumThunb.var.chinense F.Bolle.)的甲醇提取物中分离鉴定了Gemin A、B、C和一个新的二聚体鞣质Gemin G，从龙牙草(Agrimonia pilosa)中分离得到已知化合物agrimoniin，从马桑(Coriariajaponica)分离得到已知化合物coriariin A。另外有学者从翻白草(Potentilla discolor Bunge.)中分离得到过Gemin A(冯卫生，天然产物研究与开发，1996，8(3)：26-29)。Gemin A，agrimoniin，coriariin曾报道具有抗肿瘤作用(Nakashima，Hideki，et al.Antiviral Research，1992，18(1)，91-103；Miyamoto，Kenichi，et al.Chemical & Pharmaceutical Bulletin，1987，35(2)，814-822)。通过Science finder scholar检索未见有关这类二聚体可水解鞣质衍生物对脂肪酸合酶的抑制作用和减肥作用。我们的研究揭示了这类二聚体可水解鞣质具有很强的脂肪酸合酶的抑制活性，化合物Gemin A和Gemin G的减肥作用在体内试验中获得证实。

发明内容

本发明的目的是提供所述二聚体可水解鞣质衍生物在制备治疗或预防肥胖药物及食品添加剂中的应用。

所述可水解鞣质衍生物具有如下通式I的结构：

其中，R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈相同或不同，各自彼此独立地选自氢、甲基、乙基、乙酰基、丙酰基、没食子酰基或六羟基联苯二甲酰基，其中任意两个相邻的取代基可来自同一个六羟基联苯二甲酰基，前提是R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，R₈之中至少有一个是没食子酰基或六羟基联苯二甲酰基，式I中的糖基可以是相同或不同的α-葡萄糖或β-葡萄糖。

根据二聚体可水解鞣质衍生物所定义的通式结构，本发明首选的化合物结构如下：

本发明所提供的化合物还有：

本发明是关于含有通式I的化合物或gemin A、B、C、G、agrimoniin和coriariin A的药物和药物组合物及这些药物和药物组合物在治疗治疗和预防肥胖中的用途。所述药物是指上述化合物或其组合物，配以医药上可接受的赋形剂，制备的胶囊剂、颗粒剂、口服液或者片剂；所述食品添加剂是指上述化合物或其组合物。

本发明所涉及的二聚体可水解鞣质衍生物可以从柔毛水杨梅(Geumjaponicum Thunb.var.chinense F.Bolle.)、日本水杨梅(Geum japonicum Thunb)、龙牙草(Agrimonia pilosa)、蛇含(Potentilla kleiniana)或马桑(Coriariajaponica)等植物中利用大孔吸附树脂、凝胶色谱法等方法分离制备。由于这些植物资源丰富，可保证本发明所涉及的化合物有丰富的来源。

具体实施方式

实施例1：化合物Gemin A，B，C和G的制备：取日本水杨梅干燥药材100克，加入500毫升甲醇室温浸提48小时，提取3次，过滤合并提取液，40摄氏度浓缩干燥获得提取物9.0克，收率9％。将提取物溶于100毫升50摄氏度热水中，保温电动搅拌2个小时，冷却到室温，然后离心或过滤，上清液或滤液通过D101大孔吸附树脂柱(Φ2.5×15cm)，先用3个保留体积的水洗脱除去无机盐、糖、蛋白质等水溶性杂质，然后以体积比10％，30％，50％，70％，90％，100％乙醇-水混合溶液梯度洗脱，每个比例洗脱3个保留体积。10％乙醇-水洗脱部分再经HW-40色谱分离(Φ2.5×50cm)分离，以体积比10％，30％，50％，70％，90％乙醇-水，100％乙醇，100％乙酸乙酯溶液梯度洗脱，，每个比例洗脱3个保留体积，70％乙醇-水洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物Gemin G(40mg)，90％乙醇-水洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物Gemin C(10mg)，100％乙醇洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物Gemin B(10mg)，100％乙酸乙酯洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物Gemin A(100mg)。

Gemin A：

浅黄色粉末，加FeCl₃试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+148.1°(c1.0 in methanol)；IR中3425，1716，1620，1458，1188，1006cm^-1；ESI-MS给出m/z1895[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z 1871[M-H]^-。NMR数据如表-1，表-2，与文献值一致(Takashi Yoshida et al.Journal of ChemicalSociety.PERKIN TRANS.I.1985，315-320)。

表-1Gemin A的氢谱数据(400MHz，氘代丙酮)

表-2Gemin A的碳谱数据(400MHz，氘代丙酮)

Gemin B：浅黄色粉末，加FeCl3试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+65°(c1.0 in methanol)；IR中3425，1725，1610，1510，1445，1188，1060cm^-1；ESI-MS给出m/z1593[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z1569[M-H]^-。¹H-NMR的数据与文献值一致(Takashi Yoshida et al.Journal ofChemical Society.PERKIN TRANS.I.1985，315-320)：δ7.04，7.00，7.25，7.30，6.86，6.75，6.67，6.50，6.42，6.16，5.83，5.60，5.28，5.21，5.13，4.52，4.03，3.80。

Gemin C：浅黄色粉末，加FeCl3试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+130.6°(c1.0 in methanol)；IR中

3450，1720，1610，1440，1360，1210，1180，1060cm^-1；ESI-MS给出m/z1593[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z 1569[M-H]^-。¹H-NMR的数据与文献值一致(Takashi Yoshida et al.Journal of Chemical Society.PERKIN TRANS.I.1985，315-320)：δ7.05，7.01，7.30，7.24，6.80，6.66，6.60，6.52，6.37，6.55，6.00，5.57，5.50，5.36，5.15，5.20，4.47，4.00，3.80，3.60。

Gemin G：浅黄色粉末，加FeCl₃试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+128.3°(c1.0 in methanol)；IR中

3425，1716，1620，1458，1350，1188，1006cm^-1；ESI-MS给出m/z1593[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z1569[M-H]^-。经系统文献检索为一个新的二聚体可水解鞣质。NMR数据如表-3，表-4(编号参照Gemin A)。

表-3Gemin G的氢谱数据(400MHz，氘代丙酮)

表-4Gemin G的碳谱数据(400MHz，氘代丙酮)

实施例2：化合物agrimoniin的制备：取龙牙草(Agrimonia pilosa)干燥药材100克，加入500毫升甲醇室温浸提48小时，提取3次，过滤合并提取液，40摄氏度浓缩干燥获得提取物8.5克，收率8.5％。将提取物溶于100毫升50摄氏度热水中，保温电动搅拌2个小时，冷却到室温，然后离心或过滤，上清液或滤液通过D101大孔吸附树脂柱(Φ2.5×15cm)，先用3个保留体积的水洗脱除去无机盐、糖、蛋白质等水溶性杂质，然后以体积比10％，30％，50％，70％，90％，100％乙醇-水混合溶液梯度洗脱，每个比例洗脱3个保留体积。10％乙醇-水洗脱部分再经HW-40色谱分离(Φ3×50cm)分离，以体积比10％，30％，50％，70％，90％乙醇-水，100％乙醇，每个比例洗脱3个保留体积，100％乙醇洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物agrimoniin(10mg)。

Agrimoniin：浅黄色粉末，加FeCl₃试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+158°(c1.0 in methanol)；IR中3450 1720，1620，1520，1440，1188，1060cm^-1；ESI-MS给出m/z1893[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z1869[M-H]^-。¹H-NMR的数据与文献值一致(Takuo okuda et al.Journal ofSociety Chemical Communication，1982，163-164)：δ6.36，6.37，6.38，6.41，6.44，6.54，6.60，6.71，7.27，6.85，7.39，6.50，6.61，3.50-6.00(糖上其他氢信号)。通过甲基化和甲醇解进一步确定了化合物的结构。

实施例3：化合物coriariin的制备：取马桑(Coriaria japonica)干燥药材100克，加入500毫升甲醇室温浸提48小时，提取3次，过滤合并提取液，40摄氏度浓缩干燥获得提取物10.6克，收率10.6％。将提取物溶于100毫升50摄氏度热水中，保温电动搅拌2个小时，冷却到室温，然后离心或过滤，上清液或滤液通过D101大孔吸附树脂柱(Φ2.5×15cm)，先用3个保留体积的水洗脱除去无机盐、糖、蛋白质等水溶性杂质，然后以体积比10％，30％，50％，70％，90％，100％乙醇-水混合溶液梯度洗脱，每个比例洗脱3个保留体积。10％乙醇-水洗脱部分再经HW-40色谱分离(Φ2.0×40cm)分离，以体积比10％，30％，50％，70％，90％乙醇-水，100％乙醇，每个比例洗脱3个保留体积，100％乙醇洗脱部分经40摄氏度减压真空干燥得到化合物coriariin A(10mg)。

Coriariin A：浅黄色粉末，加FeCl₃试剂显蓝色，并有沉淀产生；与稀酸共沸无鞣红沉淀产生。[α]_D+65°(c1.0 in methanol)；IR中

3430，1720，1620，1520，1445，1010，1030cm^-1；ESI-MS给出m/z1897[M+Na]⁺，ESI-MS给出m/z1873[M-H]^-。¹H-NMR的数据与文献值一致(Hatano Tsutomu，et al.Chemical ＆Pharmaceutical Bulletin，1986，34(10)，4092-4097)：δ7.31，7.28，7.03，6.98，6.85，6.62，6.64，6.13，5.58，5.80，5.20，4.48，3.65。通过甲基化和甲醇解进一步确定了化合物的结构。

实施例4：在37℃下，在2毫升石英比色皿中加入该酶底物：0.2mM乙酰辅酶A溶液25微升，0.4mM丙二酰辅酶A溶液50微升和1.3mM NADPH溶液50微升，再加入0.1M，pH7.0磷酸盐缓冲液1.85毫升及FAS溶液30微升混匀，启动酶促反应。用分光光度计监测单位时间内340nm波长处吸光值A的变化(ΔA/min)来表示FAS的活力。在一定浓度抑制剂存在下，FAS全酶反应的活力下降，当其活力下降一半时所需化合物的浓度即为IC50，用该数值表示化合物对FAS的抑制能力，上述测活体系中FAS的终浓度为7微克/毫升。结果表明：化合物Gemin A，B，C，G具有非常强的抗脂肪酸合酶的活性，IC₅₀为0.21μM，0.81，0.95，0.79μM。

实施例5：小鼠减肥实验，将雌性小鼠随机分组(10只每组，1只每笼)，每只大鼠体重约20克。将Gemin A、G、B、C分别加水溶解，可以适当加热，超声，配成浓度0.5mg/mL的溶液。对照组饲喂双蒸水，试验组分别饲喂化合物GeminA、G、B、C，每公斤25毫克。实验中饲料为标准配方。饲喂方法为用圆头灌注器插入大鼠食道向胃内灌注，每天一次，每只2ml，上午10～11时喂药.饲料和饮水为自主取食.实验时间20天，每2天测量一次每只大鼠的体重和摄食量，并观察其排泄物状况。减肥结果如下表：

实施例6：胶囊剂的制备

取实施例1所得的化合物Gemin A 20mg和微粉硅胶280mg，充分混合均匀，过筛，加入适量的硬脂酸镁，混匀，用干法造粒机制粒，过筛，筛取40-80目之间的颗粒，装入胶囊，每粒装0.3g。

实施例7：片剂的制备

取实施例1所得的化合物Gemin A 10g、微粉硅胶42g、无水乳糖38g、氧化硅3g，混合30分钟后，再筛入20g硬脂酸镁，继续混匀，最后用12/32英寸标准凹冲压成片，100mg/片。

Claims

1.一种具有下面结构式的二聚体可水解鞣质衍生物或其可药用的盐

。

2.包含一种或多种权利要求1中所述二聚体可水解鞣质衍生物或其可药用的盐与可药用载体的药物。

3.如权利要求2所述的药物，其特征在于其为胶囊剂、颗粒剂、口服液或者片剂形式。

4.如权利要求2所述二聚体可水解鞣质衍生物或其组合在制备治疗或预防肥胖的药物中的应用。

5.如权利要求4所述的药物，其中所述药物为胶囊剂、颗粒剂、口服液或者片剂形式。

6.如权利要求2所述二聚体可水解鞣质衍生物或其组合物在制备治疗或预防肥胖的食品添加剂中的应用。