CN101333522B - 将多种细胞有序地粘附到同一基底上的装置及粘附方法 - Google Patents

Abstract

一种将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置，包括：基底上表面上依次镀有钛粘附层、金层和平行间隔附着在金层上的硫醇疏水单分子膜条带和硫醇亲水单分子膜条带；下表面上具微凹槽单元的第二聚二甲基硅氧烷印章；微凹槽单元由三条平行的直线型凹槽组成，其槽端处设与凹槽相通的垂向通孔；印章下表面贴覆于基底的具有平行硫醇疏水单分子膜条带和硫醇亲水单分子膜条带的表面上；直线型凹槽与疏水单分子膜条带和亲水单分子膜条带垂直；基底的金表面形成细胞选择性粘附区域；微流管道中通入促进细胞粘附的物质(如细胞外基质蛋白质溶液，多聚赖氨酸溶液等)，待选择性吸附后，再往不同管道中通不同种细胞悬液，细胞只粘附在疏水单分子膜表面，拿开印章，几种不同种细胞阵列有序地吸附于基底。

Description

将多种细胞有序地粘附到同一基底上的装置及粘附方法

技术领域

本发明涉及将多种细胞粘附到同一基底上的装置及粘附方法，特别涉及一种将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置及粘附方法。

背景技术

在药物筛选、生物检测芯片和基础的细胞生物学的研究中，需要在同一表面以阵列方式固定多种细胞，而且更精确和复杂的控制细胞在体外培养，对于人工器官的构建也具有重大意义。尽管难度很大，人们已经做了一些方法。

例如在文献1：Chiu，D.T.；Jeon，N.L.；Huang，S.；Kane，R.S.；Wargo，C.J.；Choi，I.S.；Ingber，D.E.；Whitesides，G.M.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.2000，97，(6)，2408-2413中，Whitesides实验小组公开了一种运用三维结构的微流管道在同一表面固定多种细胞，而且可以形成由多种细胞组成的复杂图案的方法。这种方法首先制备出三维结构的聚二甲基硅氧烷的“印章”，然后在“印章”与细胞培养盘基底结合后，往不同的管道入口通入不同的细胞，这样不同种细胞被运送到基底的不同位置，待培养一段时间后，细胞长满，就可以出现设计好的图案。所以设计出棋盘式的图案，把多种细胞通入，培养成阵列结构。但是，这种方法得到的粘附了多种细胞的基底，在实验过程中如果把含有三维结构的PDMS的“印章”拿开，粘附在管道中的细胞会自由爬动，使得固定的细胞图案被破坏。另一方面，如果始终不能去掉“印章”，不同种细胞间不能够相互作用，不利于进一步研究细胞间的相互作用。此外，这种方法将多种细胞粘附到基底上时，需要复杂的微加工方法。

本申请人的申请号为200710098280.4(其在先申请号200610089251.7，在先申请日为2006.08.11)的申请构建了一种将多种细胞粘附到同一基底上的装置及粘附方法；但是它的不足之处在于不能够把多种细胞阵列方式在基底表面排列。

本发明与以前的不同之处在于结合微流控和微接触印刷方法建立将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置及粘附方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术在将多种细胞粘附到同一基底表面时，不容易的构建细胞阵列，使得固定的细胞图案被破坏或是根本不能相互作用，以及需要复杂的微加工方法或是复杂的化学合成的缺陷，从而提供一种简单和易操作的技术，以便用于药物筛选和生物芯片制备。将多种细胞以阵列的方式粘附到同一基底上的装置及粘附方法。

本发明的目的是通过如下的技术方案实现的：

本发明提供的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置，包括：

一基底；所述基底的上表面上依次蒸镀有钛粘附层、金层和间隔附着在所述金层上的若干条平行间隔布置的长为2cm的以甲基结尾的硫醇形成的平行硫醇疏水单分子膜条带和以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带；所述平行硫醇疏水单分子膜条带宽20～300μm；所述平行亲水单分子膜条带宽20～300μm；

一下表面上具有至少一组微凹槽单元的经氧化处理后的具亲水表面的由聚二甲基硅氧烷材质制做的第二聚二甲基硅氧烷印章；所述微凹槽单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凹槽组成，每一条直线型凹槽宽100～300μm，长1.2～1.5cm；在每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的凹槽相通的垂向通孔；

所述第二聚二甲基硅氧烷印章的下表面贴覆于所述基底的具有平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带的表面上；所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的直线型凹槽与所述基底的平行硫醇疏水单分子膜条带及平行亲水单分子膜条带垂直。

所述基底为玻璃基底；其上表面上的钛粘附层厚2～10nm，金层厚20～50nm。

本发明提供的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，包括如下的步骤：

1)在干净的基底上表面上先蒸镀一钛粘附层，然后再在其上蒸镀一金层；

2)使用光刻技术，在一硅片上制备具有若干条宽为20～300μm，长度为2cm，间隔为20～300μm的平行凸型条带的阵列结构；

3)用聚二甲基硅氧烷对步骤2)得到的具有若干条宽为20～300μm，长度为2cm，间隔为20～300μm的平行凸型条带的阵列结构的硅片进行翻膜，得到一与所述平行凸型条带的阵列结构相对应互补的具有若干平行凸型条带的阵列结构的第一聚二甲基硅氧烷印章；

将得到的第一聚二甲基硅氧烷印章放入10mM的以甲基结尾的硫醇的乙醇溶液里，然后取出，用氮气或压缩空气吹干，让其具有若干平行凸型条带的阵列结构的一面与步骤1)制备的基底的金层接触，使得第一聚二甲基硅氧烷印章表面的硫醇分子转移到基底的金层上，在基底的金层上形成一组宽20～300μm，长为2cm，间隔为20～300μm的具有疏水性质的平行硫醇疏水单分子膜条带；然后将该具有平行硫醇疏水单分子膜条带的基底放入1～5mM以聚乙二醇结尾的硫醇的乙醇溶液里浸泡1～10h后取出，并立即用乙醇的水溶液(浓度为：50％～100％)浸泡，再用氮气或压缩空气吹干备用；在基底的平行硫醇疏水单分子膜条带之外的地方，组装有具有抗拒蛋白质吸附能力的以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带，所述平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带间隔地附着于所述基底的金层表面上；

以上表面修饰不同硫醇分子的方法叫做微接触印刷；

4)使用光刻技术，在另一硅片上制备至少一组微凸型线结构单元，该凸型线型微结构单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凸型线组成，每一条直线型凸型线长度为1.2～1.5cm，宽度为100～300μm；

5)用聚二甲基硅氧烷对步骤4)得到的具有至少一组凸型条微结构单元的硅片进行翻膜，得到一与所述凸型条微结构单元相对应的具有至少一组微凹槽单元的第二聚二甲基硅氧烷印章；

所述第二聚二甲基硅氧烷印章的微凹槽单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凹槽组成，每一条直线型凹槽宽为100～300μm，长为1.2～1.5cm；在每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的凹槽相通的垂向通孔；

然后将第二聚二甲基硅氧烷印章的微凹槽单元的面朝上，在等离子清洗器中氧化2min，制成具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章；

6)将步骤5)制备的第二聚二甲基硅氧烷印章的具有微凹槽单元的面朝下与基底上的具有平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带的表面接触，所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的直线型凹槽与所述基底的平行硫醇疏水单分子膜条带及平行亲水单分子膜条带垂直，以形成封闭的流通管腔；然后10min内把促进细胞粘附的物质的溶液通入流通管腔中；待2h后，在流通管腔内疏水的硫醇分子膜区域吸附有促进细胞粘附的物质；

7)制备不同种的粘附细胞的悬浮溶液，细胞密度为10⁶个/ml，然后把不同种细胞通入相应的流通管腔中，再放入细胞培养箱，在37℃，二氧化碳体积浓度5％，培养40min，细胞粘附在流通管腔内的金表面上；揭掉第二聚二甲基硅氧烷印章，将金表面上生长有细胞的玻璃基底放入普通细胞培养液中，24h后，细胞在各自限定区域内生长，完成多种细胞以有序的阵列方式粘附到同一基底上。

所述步骤6)的促进细胞粘附的物质(如细胞外基质蛋白质-纤维结合蛋白、胶原蛋白或层粘连蛋白；多聚赖氨酸等)。

所述基底为玻璃基底；其上表面上的钛粘附层厚为2～10nm，金层厚为20～50nm。

本发明通过微接触印刷的方法在金表面做硫醇分子修饰；所述微接触印刷的方法用得两种溶液；步骤3)中所述的10mM的以甲基结尾的硫醇的乙醇溶液，溶质分子可以是HS(CH2)₁₁CH₃、HS(CH2)₁₇CH₃、HS(CH2)₁₅CH₃；

步骤3)中所述的1～5mM以聚乙二醇结尾的硫醇的乙醇溶液中自组装在所述金层表面上的具有抗拒蛋白质吸附作用的平行亲水性单分子膜条带为通过在1～5mM的HS(CH2)₁₁(OCH₂OCH₂)₆OH、HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₅OH或HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₃OH的乙醇溶液中自组装在所述金层表面上的亲水性单分子膜条带。

本发明提供的装置和方法可以将将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上；允许粘附的细胞间通过分泌的可溶性生物分子相互作用。

本发明的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法及装置可以用于药物筛选，在粘附的细胞培养的条件下加入待筛选的药物，然后对比加入药物的样品和没有加入药物的样品之间的细胞移动的不同，可以了解哪种药物可以影响这几种细胞之间的相互作用，从而为新药筛选，提供一种极为便利的方法；另外，现在一种药物，作用于不同种细胞往往具有不同的结果，因此本方法也为高通量的药物疗效评价，提供了新的途径。

本发明提供的方法首先是在基底表面先用微接触印刷方法修饰金表面，形成细胞选择性粘附的区域，其他位置细胞不会粘附。然后在聚二甲基硅氧烷的微流管道中通入促进细胞粘附的物质，待其选择性吸附后，再往不同管道中通入不同种细胞的悬液，细胞只粘附在疏水性质的单分子膜表面。最后，把聚二甲基硅氧烷块拿开，几种不同的细胞便以阵列方式有序的吸附在表面。

与现有技术相比，本发明的装置及方法的优点在于：

1、本发明利用表面化学和微流控的结合，来构筑复杂的细胞培养体系，可以让多种细胞在可调控的空间和时间，有序地以阵列方式在表面的粘附、生长。

2、在这种方法得到的粘附了多种细胞的基底为细胞生物学、组织生物学的基本研究提供了平台，可以单细胞水平高精度的在时间和空间上对细胞生物学进行分析，同时，还可以作为基于细胞和细胞之间作用的药物检测，为发现药物和有毒物质的分析提供了新的途径。

3、这几种细胞的密度和相间的距离可以精确调控，以便检测几种细胞之间的反应。因为可以控制细胞密度、几种细胞之间的间隔，所以分析的精度是前所未有。

附图说明

图1为本发明的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置的结构示意图；

图2-1至图2-6为本发明将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的步骤示意图。

具体实施方式

下面结合实施例进一步描述本发明。

实施例1

请参见图2-1、图2-2、图2-3、图2-4、图2-5和图2-6：

1)在干净的玻璃基底1上表面上先蒸镀2～10nm厚的钛粘附层，然后再在其上蒸镀20～50nm厚的金层；

2)使用光刻技术，在一硅片上制备具有50条宽为100μm(20～300μm均可)，长度为2cm，间隔为200μm的平行凸型条带的阵列结构；

3)用聚二甲基硅氧烷对步骤2)得到的具有50条平行凸型条带的阵列结构的硅片进行翻膜，得到一与所述平行凸型条带的阵列结构相对应的具有49条平行凸型条带的阵列结构的第一聚二甲基硅氧烷印章；

将得到的印章放入10mM以甲基结尾的硫醇(分子式：HS(CH₂)₁₁CH₃)的乙醇溶液里；然后取出，用氮气或压缩空气吹干，让有图案的一面与玻璃基底1上的金层接触，使得印章表面的硫醇分子转移到金层上，形成线宽200μm，间隔100μm的平行硫醇疏水单分子膜条带11，其表面性质为疏水，能够吸附水溶液的蛋白质；然后把该基底1放入2mM以聚乙二醇结尾的硫醇(分子式：HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₆OH)的乙醇溶液里，使得这些小分子在印章没有接触到的地方，组装成单分子膜，其表面性质为亲水，具有抗拒溶液中蛋白质吸附的能力；在基底浸泡1～10h后取出，立即用乙醇的水溶液(浓度为：50％～100％)浸泡一会，再用氮气或压缩空气吹干备用；在基底1的平行硫醇疏水单分子膜条带11之外的地方，组装有具有抗拒蛋白质吸附能力的以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带12，所述平行硫醇疏水单分子膜条带11和平行亲水单分子膜条带12间隔地附着于所述基底1的金层表面上；

以上表面修饰不同硫醇分子的方法叫做微接触印刷；

4)使用光刻技术，在另一硅片上制备至少一组凸型线型微结构单元，该凸型线型微结构单元包括三条平行放置的间距为100μm的直线型凸型线，每一条直线型凸型线长1.2～1.5cm，宽100μm；

5)用聚二甲基硅氧烷对步骤3)得到的具有至少一组凸型线型微结构单元的硅片进行翻膜，得到一与所述凸型线型微结构单元相对应的具有至少一组微凹型单元的第二聚二甲基硅氧烷印章2；

所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的微凹槽单元包括三条平行放置的间距为100μm直线型凹槽，每一条直线型凹槽的宽为100～300μm，长为1.2～1.5cm；在每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的直线型凹槽相通的垂向通孔3；

然后将该第二聚二甲基硅氧烷印章的具有微凹型单元的面朝上，在等离子清洗器中氧化2min，制成具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章2；

6)将具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章2的具有微凹型单元的面朝下与基底1上的平行硫醇疏水单分子膜条带11和平行亲水单分子膜条带12的表面接触；所述第二聚二甲基硅氧烷印章2的微凹型单元的直线型凹槽与基底1上的平行硫醇疏水单分子膜条带11及平行亲水单分子膜条带12垂直，形成封闭的流通管腔；然后10min内把100μg/ml细胞外基质蛋白质(纤维结合蛋白(fibronectin))的PBS磷酸缓冲液通入流通管腔中；待2h后，在流通管腔内疏水的硫醇分子膜区域吸附有细胞外基质蛋白质；

7)制备不同种的粘附细胞的悬浮溶液，细胞密度为10⁶个/ml，然后把不同种细胞通入相应的流通管腔中，再放入细胞培养箱，在37℃，二氧化碳体积浓度5％，培养40min，细胞粘附在流通管腔内的金表面上；揭掉第二聚二甲基硅氧烷印章，将生长有细胞的金表面放入普通细胞培养液中，24h后，细胞在各自限定区域内生长，以完成多种细胞以阵列方式粘附于同一基底上。

实施例2

1)在干净的玻璃载玻片(厚度为0.15mm)上表面上先蒸镀5nm(2～10nm均可)厚的钛粘附层，然后再在其上蒸镀40nm(20～50nm均可)厚的金层，制得一试验用基底1；

2)使用光刻技术，在一硅片上制备具有100条宽为100μm(20～300μm均可)，长度为2cm，间隔为100μm(20～300μm均可)的平行凸型条带的阵列结构；

3)用聚二甲基硅氧烷对步骤2)得到的具有100条平行凸型条带的阵列结构的硅片进行翻膜，得到一与所述平行凸型条带的阵列结构相对应的具有99条平行凸型条带的阵列结构的第一聚二甲基硅氧烷印章；

将得到的印章放入10mM以甲基结尾的硫醇(分子式：HS(CH₂)₁₅CH₃或HS(CH2)₁₇CH₃)的乙醇溶液里；然后取出，用氮气或压缩空气吹干，让有图案的一面与玻璃基底1上的金层接触，使得印章表面的硫醇分子转移到金层上，形成线宽200μm，间隔100μm的平行硫醇疏水单分子膜条带11，其表面性质为疏水，能够吸附水溶液的蛋白质；然后把该基底1放入2mM以聚乙二醇结尾的硫醇(分子式为HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₅OH或HS(CH2)₁₁(OCH₂OCH₂)₆OH)的乙醇溶液里，使得这些小分子在印章没有接触到的地方，组装成单分子膜，其表面性质为亲水，具有抗拒溶液中蛋白质吸附的能力；在基底浸泡1～10h后取出，立即用乙醇的水溶液(浓度为：50％～100％)浸泡一会，再用氮气或压缩空气吹干备用；在基底1的平行硫醇疏水单分子膜条带11之外的地方，组装有具有抗拒蛋白质吸附能力的以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带12，所述平行硫醇疏水单分子膜条带11和平行亲水单分子膜条带12间隔地附着于所述基底1的金层表面上；

以上表面修饰不同硫醇分子的方法叫做微接触印刷；

4)使用光刻技术，在另一硅片上制备至少一组凸型线型微结构单元，该凸型线型微结构单元包括三条平行放置的间距为100μm(100～500μm均可)的直线型凸型线，每一条直线型凸型线长1.2～1.5cm，宽100～300μm；

5)用聚二甲基硅氧烷对步骤3)得到的具有至少一组凸型线型微结构单元的硅片进行翻膜，得到一与所述凸型线型微结构单元相对应的具有至少一组微凹型单元的第二聚二甲基硅氧烷印章；

所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的微凹槽单元包括三条平行放置的间距为100μm直线型凹槽，每一条直线型凹槽的宽为100～300μm，长为1.2～1.5cm；在每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的直线型凹槽相通的垂向通孔3；

然后将该第二聚二甲基硅氧烷印章的具有微凹型单元的面朝上，在等离子清洗器中氧化2min，制成具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章2；

6)将具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章2的具有微凹型单元的面朝下与基底1上的平行硫醇疏水单分子膜条带11和平行亲水单分子膜条带12的表面接触；所述第二聚二甲基硅氧烷印章2的微凹型单元的直线型凹槽与基底1上的平行硫醇疏水单分子膜条带11及平行亲水单分子膜条带12垂直，形成封闭的流通管腔；然后10min内把100μg/ml细胞外基质蛋白质(纤维结合蛋白(fibronectin))的PBS磷酸缓冲液通入流通管腔中；待2h后，在流通管腔内疏水的硫醇分子膜区域吸附有细胞外基质蛋白质；

7)制备不同种的粘附细胞的悬浮溶液，细胞密度为10⁶个/ml，然后把不同种细胞通入相应的流通管腔中，再放入细胞培养箱，在37℃，二氧化碳体积浓度5％，培养40min，细胞粘附在流通管腔内的金表面上；揭掉第二聚二甲基硅氧烷印章，将生长有细胞的金表面放入普通细胞培养液中，24h后，细胞在各自限定区域内生长，以完成多种细胞以阵列方式粘附于同一基底上。

Claims (7)

1.一种将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置，其特征在于，包括：

一基底；所述基底的上表面上先蒸镀钛粘附层，然后在所述钛粘附层上蒸镀金层，再蒸镀间隔附着在所述金层上的若干条平行间隔布置的长度为2cm的以甲基结尾的硫醇形成的平行硫醇疏水单分子膜条带和以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带，所述平行硫醇疏水单分子膜条带和所述平行亲水单分子膜条带之间无间隙；所述平行硫醇疏水单分子膜条带宽20～300μm；所述平行亲水单分子膜条带宽20～300μm；

一下表面上具有至少一组微凹槽单元的经氧化处理后的具亲水表面的由聚二甲基硅氧烷材质制做的第二聚二甲基硅氧烷印章；所述微凹槽单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凹槽组成，每一条直线型凹槽宽100～300μm，长1.2～1.5cm；在第二聚二甲基硅氧烷印章的每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的凹槽相通的垂向通孔；

所述第二聚二甲基硅氧烷印章的下表面贴覆于所述基底的具有平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带的表面上；所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的直线型凹槽与所述基底的平行硫醇疏水单分子膜条带及平行亲水单分子膜条带垂直。

2.按权利要求1所述的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的装置，其特征在于，所述基底为玻璃基底；其上表面上的钛粘附层厚2～10nm，金层厚20～50nm。

3.一种将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，其特征在于，包括如下的步骤：

1)在干净的基底上表面上先蒸镀一钛粘附层，然后再在其上蒸镀一金层；

2)使用光刻技术，在一硅片上制备具有若干条宽为20～300μm，长为2cm，间隔为20～300μm的平行凸型条带的阵列结构；

3)用聚二甲基硅氧烷对步骤2)得到的具有若干条宽为20～300μm，长2cm，间隔为20-300μm的平行凸型条带的阵列结构的硅片进行翻膜，得到一与所述平行凸型条带的阵列结构相对应互补的具有若干平行凸型条带的阵列结构的第一聚二甲基硅氧烷印章；

将得到的第一聚二甲基硅氧烷印章放入10mM的以甲基结尾的硫醇的乙醇溶液里，然后取出，用氮气或压缩空气吹干，让其具有若干平行凸型条带的阵列结构的一面与步骤1)制备的基底的金层接触，使得第一聚二甲基硅氧烷印章表面的硫醇分子转移到基底的金层上，在基底的金层上形成一组宽20～300μm，长为2cm，间隔为20～300μm的具有疏水性质的平行硫醇疏水单分子膜条带；然后将该具有平行硫醇疏水单分子膜条带的基底放入1～5mM以聚乙二醇结尾的硫醇的乙醇溶液里浸泡1～10h后取出，并立即用浓度为50％～100％的乙醇水溶液浸泡，再用氮气或压缩空气吹干备用；在基底的平行硫醇疏水单分子膜条带之外的地方，组装有具有抗拒蛋白质吸附能力的以聚乙二醇结尾的硫醇形成的平行亲水单分子膜条带，所述平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带间隔地附着于所述基底的金层表面上；

以上表面修饰不同硫醇分子的方法叫做微接触印刷；

4)使用光刻技术，在另一硅片上制备至少一组微凸型线结构单元，该凸型线型微结构单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凸型线组成，每一条直线型凸型线长度为1.2～1.5cm，宽度为100～300μm；

5)用聚二甲基硅氧烷对步骤4)得到的具有至少一组凸型条微结构单元的硅片进行翻膜，得到一与所述凸型条微结构单元相对应的具有至少一组微凹槽单元的第二聚二甲基硅氧烷印章；

所述每一组第二聚二甲基硅氧烷印章的微凹槽单元由三条平行放置的间距为100～500μm的直线型凹槽组成，每一条直线型凹槽宽度为100～300μm，长度为1.2～1.5cm；在第二聚二甲基硅氧烷印章的每一条直线型凹槽的槽端处分别设有与相应的凹槽相通的垂向通孔；

然后将第二聚二甲基硅氧烷印章的微凹槽单元的面朝上，在等离子清洗器中氧化2min，制成具有亲水表面的第二聚二甲基硅氧烷印章；

6)将步骤5)制备的第二聚二甲基硅氧烷印章的具有微凹槽单元的面朝下与基底上的具有平行硫醇疏水单分子膜条带和平行亲水单分子膜条带的表面接触，所述第二聚二甲基硅氧烷印章上的直线型凹槽与所述基底的平行硫醇疏水单分子膜条带及平行亲水单分子膜条带垂直，以形成封闭的流通管腔；然后10min内把促进细胞粘附的物质的溶液通入流通管腔中；待2h后，在流通管腔内疏水的硫醇分子膜区域吸附有促进细胞粘附的物质；

7)制备不同种的粘附细胞的悬浮溶液，细胞密度为10⁶个/ml，然后把不同种细胞通入相应的流通管腔中，再放入细胞培养箱，在37℃，二氧化碳体积浓度5％，培养40min，细胞粘附在流通管腔内的金表面上；揭除第二聚二甲基硅氧烷印章，将金表面上生长有细胞的玻璃基底放入普通细胞培养液中，24h后，细胞在各自限定区域内生长，完成多种细胞以有序的阵列方式粘附到同一基底上。

4.按权利要求3所述的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，其特征在于，所述步骤6)的促进细胞粘附的物质为纤维结合蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白或多聚赖氨酸。

5.按权利要求3所述将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，其特征在于，所述基底为玻璃基底；其上表面上的钛粘附层厚为2～10nm，金层厚为20～50nm。

6.按权利要求3所述的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，其特征在于，所述步骤3)中所述的10mM的以甲基结尾的硫醇的乙醇溶液，溶质分子为HS(CH2)₁₁CH₃、HS(CH2)₁₇CH₃或HS(CH2)₁₅CH₃。

7.按权利要求3所述的将多种细胞以有序阵列方式粘附到同一基底上的方法，其特征在于，所述步骤3)中所述的1～5mM以聚乙二醇结尾的硫醇的乙醇溶液中自组装在所述金层表面上的具有抗拒蛋白质吸附作用的平行亲水性单分子膜条带为通过在1～5mM的HS(CH2)₁₁(OCH₂OCH₂)₆OH、HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₅OH或HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₃OH的乙醇溶液中自组装在所述金层表面上的亲水性单分子膜条带。

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