CN101322501B - 菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂。该剂型中主要成份是菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌，其中菜青虫颗粒体病毒包涵体含量1-3万个/mg、苏云金杆菌含量25-88％，它由白炭黑、云母粉、亚甲基二萘磺酸钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠、二氧化钛按一定比例组成。本发明对环境生物、人畜无害，无环境污染，无农药残留，能有效控制菜青虫的发生和危害，适于在蔬菜上大量施用，又加快病毒杀虫速度，使病毒杀虫剂的杀虫时间缩短到2-3天。

Description

菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂

技术领域

本发明涉及生物杀虫剂，更具体涉及一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，适用于生物防治。

背景技术

菜青虫是我国农业上的重要害虫，主要危害大白菜、花菜、绿花菜、紫甘蓝、榨菜、油菜等十字花科蔬菜，给菜农和农民造成重大经济损失。菜青虫幼虫啃食叶肉，留下一层透明的表皮，3龄以上的幼虫食量显著增加，将叶片吃成孔洞或缺刻，严重时仅存叶脉、叶柄、苗期受害时整株枯死。幼虫排出的粪便污染叶球和叶片，遇雨可引起腐烂。被害的伤口易诱发软腐病。近年来，随着全球气候变暖和其它因素的影响，菜青虫的发生和危害呈逐年加重的趋势。

目前，国内菜青虫的防治主要依赖化学农药，以有机磷和拟除虫菊酯类农药为主，有机磷农药主要有马拉硫磷、敌敌畏、辛硫磷、乙酰甲胺磷和毒死蜱等，拟除虫菊酯农药主要有氰戊菊酯、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯和高效氯氟氰菊酯等。化学农药杀虫谱广，见效快，因此得到大量使用。但菜青虫繁殖速度快，每年发生多代，世代重叠，加上化学农药的持效期短，一般为3-5天。为达到防治效果，不得不频繁使用化学农药，进而导致菜青虫对多种化学农药产生了很强的抗药性。另外，在蔬菜田中长期大量使用化学农药不仅严重污染环境，而且农药残留直接威胁人类的健康。

菜青虫颗粒体病毒是一种新型活体病毒杀虫剂，其杀虫机理是颗粒体病毒经害虫取食后直接作用于害虫幼虫的脂肪体和中肠细胞核，并迅速复制，导致幼虫染病死亡。菜青虫感染颗粒体病毒后，很快体色由青绿色逐渐变为黄绿色，最后变为黄白色，体节肿胀，食欲不振，直至死亡。该病毒通过病虫粪便及死虫感染其他健康菜青虫，在田间引起“瘟疫”，导致大量幼虫死亡。该病毒专一性强，只对靶标害虫有效，不影响害虫的天敌，不污染环境，持效期长，是防治目标害虫的主要生物制剂之一。但与化学农药相比，颗粒体病毒杀虫剂杀虫速度慢，田间施用5-7天才能看到明显效果。颗粒体病毒杀虫剂的这一缺陷是制约该病毒杀虫剂发展的主要因素。菜青虫颗粒体病毒与苏云金杆菌混配，由于颗粒体病毒中有一种特殊的增效蛋白，该蛋白能够迅速溶解害虫中肠的围食膜，使病毒和苏云金杆菌快速通过围食膜，作用于相应位点，加快杀虫速度；该配合物不仅保留了苏云金杆菌杀虫剂安全广谱等优点，而且发挥了病毒的持效性。在防效上出现两个显著的杀虫峰值，即施药后的第2-3天出现第一次死虫高峰，施药后的第9-10天出现第二次死虫高峰；本产品安全环保，不杀伤害虫天敌，如草蛉、瓢虫、马蜂等，从而达到长期有效控制害虫种群增长的目的，持效期长，而且还扩大了使用范围，还可用于防治小菜蛾、银纹夜蛾、甜菜夜蛾、菜螟等害虫，持效期长达10-15天。

菜青虫颗粒体病毒与苏云金杆菌混配，按照1.0、1.5、2.0、2.5、3.0万个/mg菜青虫颗粒体病毒与25％、40％、50％、60％、65％、70％、75％和80％苏云金杆菌任意混配，其共毒系数均大于161，表现为增效。

目前，可湿性粉剂在加工过程中不需要有机溶剂，这样既降低生产成本，又减少了环境污染。在加工过程中加入了高质量的白炭黑、云母粉、亚甲基二萘磺酸钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠和二氧化钛助剂，以及超微粉碎机的使用，可使可湿性粉剂在作物上有较强的粘着力、耐雨水冲刷和风吹，有助于提高药效、减少环境污染，方便包装、贮藏和运输。

发明内容

本发明的目的在于提供一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫剂，配方合理，操作方便，杀虫效果好，能有效的控制了菜青虫的发生和危害。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：主要成份为菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌。菜青虫颗粒体病毒，属于杆状病毒属，属杆状病毒科，属于单粒包埋，少量有多粒包埋的函体病毒，其包函体形态在电镜下呈双折光性，卵形、椭圆形、卵椭圆性形。大小约330-500nm×200-290nm，直径约0.3～0.5μ，比核型多角体病毒小。病毒由蛋白质、核酸、膜、水及微量元素组成，病毒核酸属于双链脱氧核糖核酸(dsDNA)。菜青虫颗粒体病毒与苏云金杆菌都是世界粮农组织推荐的可以用于生物防治的安全生物农药。

菜青虫被病毒感染后，在潜伏期不表现任何症状。在22℃温度条件下，数小时后即滞食和停食、行动迟钝，发育缓慢，两天后虫体体节略显肿胀，体色由深绿渐变黄绿、黄白，腹部表面变为白色。最后，病虫爬至叶缘，叶面多以腹足或尾足附着倒悬或呈“∧”形而死。

菜青虫颗粒体病毒极易感染初孵-2龄期幼虫，虫体感染后生长极慢，发育不良，食量极少，虫体也很小，很难进入3龄就全部死亡。因此，该龄期是病毒防治的最佳虫龄。该杀虫剂也易感染2-3龄菜青虫幼虫，使大量病虫发育滞后化脓而死，也有少量化蛹死于茧中。这段时期也是病毒防治的最佳有效时期。其一，2-3龄幼虫已经在造成损害、蔬菜叶片上出现了小孔或缺刻，必须尽快进行打药防治；其二，2-3龄幼虫尚属于轻危害期，一旦感染菜青虫病毒后，即食量减少或停食直至死亡，死虫体内流出的病毒将继续发挥注行传播作用。直接感染因交替重叠出现的次代初孵虫和低龄幼虫，也就是后效作用。4-5龄期幼虫则因食量增大，尤其进入5龄后，幼虫食量暴增，占幼虫总食叶面积的84.19％。这个虫龄每头幼虫将食掉40cm²的甘蓝叶。因此，这时用药防治效果不显著，虽也能使大部分幼虫感病而死、化蛹后呈畸形、成虫产无精卵等现象。因此，防治应杜绝在4-5龄幼虫期，尽量在害虫初孵-2龄幼虫期喷药防治。

菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂对目标昆虫的杀虫速度明显优于其它病毒农药，具有很好的应用价值。剂型中菜青虫颗粒体病毒含量1-3万个/mg、苏云金杆菌含量25-88％。一种菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下重量配比的原料制成：

菜青虫颗粒体病毒        1-3万个/mg

苏云金杆菌含量          25-88％

白炭黑                  3-15％

云母粉                  5-40％

亚甲基二萘磺酸钠        1-6％

十二烷基硫酸钠          1-3％

木质素磺酸钠            1-6％

二氧化钛                1-5％。

配制时依次在菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌中加入云母粉、白炭黑、十二烷基硫酸钠、二氧化钛、木质素磺酸钠和亚甲基二萘磺酸钠，预混，搅拌均匀，用气流粉碎机粉碎后，过筛，然后用超微粉碎机粉碎后，检验分装，即可得到可湿性粉剂(参考刘步林2003年10月出版《农药剂型加工技术(第二版)》)。

一种菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下重量配比的原料制成，其优选范围是：

菜青虫颗粒体病毒        1-2.5万个/mg

苏云金杆菌含量          40-83％

白炭黑                  3-14％

云母粉                8-30％

亚甲基二萘磺酸钠      2-5％

十二烷基硫酸钠        1-3％

木质素磺酸钠          2-4％

二氧化钛              1-4％。

配制时依次在菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌中加入云母粉、白炭黑、十二烷基硫酸钠、二氧化钛、木质素磺酸钠和亚甲基二萘磺酸钠，预混，搅拌均匀，用气流粉碎机粉碎后，过滤，然后用超微粉碎机粉碎后，检验分装，即可得到可湿性粉剂(参考刘步林2003年10月出版《农药剂型加工技术(第二版)》)。

所述的菜青虫颗粒体病毒含量不占本发明的百分重量比，加了所述的菜青虫颗粒体病毒含量使本发明的产品更加好，杀虫优势非常好。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

(1)菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂是一种新型的生物农药，由专一性病毒和广谱性的苏云金杆菌和化学助剂经筛选研究复配而成，显示出病毒与苏云金杆菌协同作用防治菜青虫的优势，克服了单纯用病毒潜伏期长和单独用苏云金杆菌防效期短的缺陷。

(2)能防、治结合，有利于控制害虫种群的数量。

(3)对人畜、家禽、害虫天敌、植物无毒无害，对环境无不良影响，是一种安全无毒，又不使害虫产生抗药性的高效生物农药。

(4)用量少，药效期长，即经济实惠，又可以达到在较长时间内控制害虫的目的。这都是化学农药不能相比的。首先，一般化学农药都是有机磷、有机氯、氨基甲酸酯等类的高毒或中毒性农药。现在大部分地区已经禁止在蔬菜上使用高毒化学农药，而能用的部分中毒农药产品已使菜青虫产生了抗性、使用浓度和剂量越来越大，农药残留大，对人蓄不安全，污染环境。

(5)由菜青虫颗粒体病毒、苏云金杆菌和助剂组合复配而成，在防治过程中，出现明显的两个杀虫峰，施药4小时后，苏云金杆菌的作用使幼虫厌食或者拒食，危害明显减少。第三天出现第一次杀虫高峰，这是苏云金杆菌的作用，第8天出现第二个死亡高峰，这个峰是病毒的作用，可延续到15天，而且病毒死虫液化后残留在菜叶上，继续流行传播，引起昆虫的流行病，长期抑制害虫的危害。因此，菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂最大优势是高效杀灭害虫的同时，可有效保护天敌，从而达到长期控制害虫的目的，延长了产品的持效期、减少施药次数；同时还可减少农药残留，提高蔬菜品质。在实际应用中具有明显的优势。

附图说明

图1为一种菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂方框示意图

具体实施方式

菜青虫颗粒体病毒

苏云金杆菌含量

白炭黑

云母粉

亚甲基二萘磺酸钠

十二烷基硫酸钠

木质素磺酸钠

二氧化钛

质量含量

实例1

1.0万个/mg

80％

5％

5％

2％

2％

3％

3％

100％

实例2

1.5万个/mg

80％

3％

7％

4％

1％

4％

1％

100％

实例3

2.0万个/mg

75％

7％

8％

5％

1％

2％

2％

100％

实例4

2.5万个/mg

70％

6％

14％

3％

3％

2％

2％

100％

实例5

1.5万个/mg

75％

6％

9％

2％

3％

2％

3％

100％

实例6

1.0万个/mg

75％

5％

10％

3％

2％

3％

2％

100％

实例7

2.0万个/mg

80％

5％

5％

2％

3％

3％

2％

100％

实例8

2.5万个/mg

80％

4％

6％

4％

1％

2％

3％

100％

实例9

2.5万个/mg

75％

9％

10％

2％

1％

2％

1％

100％

实例10

2.0万个/mg

70％

6％

17％

2％

1％

3％

1％

100％

实例11

1.0万个/mg

65％

10％

15％

2％

3％

4％

1％

100％

实例12

1.5万个/mg

65％

14％

11％

3％

3％

2％

2％

100％

实例13

2.0万个/mg

65％

3％

22％

4％

2％

3％

1％

100％

实例14

2.5万个/mg

65％

11％

15％

5％

1％

2％

1％

100％

实例15

1.0万个/mg

60％

3％

30％

2％

1％

3％

1％

100％

实例16

1.5万个/mg

60％

14％

20％

2％

1％

2％

1％

100％

实例17

2.0万个/mg

60％

10％

20％

4％

1％

2％

3％

100％

实例18

2.5万个/mg

60％

5％

25％

2％

3％

4％

1％

100％

实例19

2.0万个/mg

50％

10％

30％

4％

1％

4％

1％

100％

实例20

2.5万个/mg

40％

14％

30％

5％

3％

4％

4％

100％

一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂的制备步骤如下：

下面结合附图1对本发明作进一步描述：

1.在菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌中，按顺序按比例依次加入白炭黑、云母粉、亚甲基二萘磺酸钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠和二氧化钛助剂1，预混2，混匀。

2.混匀后，经过气流粉碎机粉碎3。

3.粉碎后过筛4，98％以上通过325目筛。

4.然后进行超微粉碎5，98％以上可通过800目筛。

5.抽样检验6菜青虫颗粒体病毒和苏云金杆菌含量。

6.产品合格后，分装，打包后入库。

所述的助剂为白炭黑、云母粉、亚甲基二萘磺酸钠、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸钠和二氧化钛。即可得到可湿性粉剂(参考刘步林2003年10月出版《农药剂型加工技术(第二版)》)。

试验例1：田间药效试验报告

为验证菜青虫颗粒体病毒·苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂的防治效果、使用剂量，为该产品登记和进一步推广应用提供依据。

1试验条件

1.1作物品种及防治对象：试验作物为白菜(品种：广东高脚里叶)，防治对象为菜青虫。

1.2试验条件：试验地为肥力中等的菜园土，白菜移栽后14天，菜青虫为2龄以下幼虫占90％以上。

2试验设计与安排

2.1药剂

2.1.1试验药剂：1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂(武汉武大绿洲生物技术有限公司产品)

2.1.2对照药剂：2000IU/微升苏云金杆菌悬浮剂(山东省济南科贝尔生物工程有限公司)

2.2小区安排

2.2.1小区排列：试验药剂、对照药剂和空白对照的小区处理均按随机区组排列。

2.2.2小区面积和重复：

小区面积为每小区5m²，每处理4次重复。

2.3施药方式

2.3.1施药方式：叶面喷雾。

2.3.2器械类型：工农-16型手动喷雾器。

2.3.3施药时间和次数：施药时间为12月2日下午4时后进行，共1次。

2.3.4药剂的剂量和容量

1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂1500mg/ha，每ha用药液750L

1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂2250mg/ha，每ha用药液750L

1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂3000mg/ha，每ha用药液750L

2000IU/微升苏云金杆菌悬浮剂3750ml/ha，每ha用药液750L

3调查、记录和测量方法

3.1气象及土壤资料

3.1.1气象：试验期间气温22-31℃，无降雨，以晴到多云为主。

3.1.2土壤资料：肥力中等的砂壤菜园地

3.2调查面积、时间和次数

3.2.1调查方法：每小区查10株，自下而上查全部叶片的虫口数。

3.2.2调查时间和次数：药前和第2、7、12天各一次，共4次。

3.2.3药效计算方法

防效(％)＝〔1-(药前对照区虫口×药后处理区虫口)/(药前处理区虫口×药后对照区虫口)〕×100

4结果与分析

4.1结果：见表一、二、三

4.2分析：用生物统计学方法分析试验结果，表二纵行中不同字母表示显著差异水平和极显著差异水平。

4.3据表一可知，每ha用1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂1500mg、2250mg、3000mg，药后第2天的防效分别为78.49％、84.73％、90.71％，药后7天的防效分别为82.81％、89.54％、92.89％，药后12天的防效分别为77.49％、80.55％、79.58％。可见药后12天的防效明显下降。对照药剂2000IU/微升苏云金杆菌悬浮剂3750ml/ha药后2、7、12天的防效分别为80.25％、86.06％、77.56％。经方差计算分析，1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂2250mg/ha与3000mg/ha处理间的差异不显著，而与1500ml/ha处理间的差异显著。

4.4田间观察各种处理均未发现药害

5结论与建议：1万个/毫克菜青虫颗粒体病毒·16000IU/毫克苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂对菜青虫有较好的防效，施药间隔期在10天左右，可推广在白菜上防治菜青虫，推荐用量为每ha2250-3000mg，每ha喷药750L。

表一防治菜青虫药效试验统计表

表二Duncan’s新复极差测验的多重比较结果

药剂处理	防效平均	5％显著水平	1％极显著水平
				PrGV·Bt3000mg/ha	92.89	a	A
PrGV·Bt2250mg/ha	89.54	a	A
				Bt3750mL/ha	86.06	a	A
PrGV·Bt1500mg/ha	82.81	b	A

试验例2：毒理学试验报告

菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂毒理学试验委托湖北省卫生防疫站进行。

实验动物Wistar大鼠、封闭群白色豚鼠和大耳白兔由湖北省医学实验动物中心提供，实验前经一周健康观察，符合动物实验要求。

根据农业部《农药登记资料要求》和《农药登记毒理学试验方法》(GB15670-1995)，并参照国内外关于生物杀虫剂类安全性检测及评价方法，进行了急性经口LD₅₀、急性经皮LD₅₀、30天致病性观察、皮肤刺激试验和眼刺激试验。

试验结果是：

急性经口LD₅₀：该受试样品对雌雄大鼠急性经口LD₅₀＞5000mg/kg。

急性经皮LD₅₀：该受试样品对雌雄大鼠急性经皮LD₅₀＞4000mg/kg。

30天致病性观察：在剂量5000mg/kg染毒情况下，所有观察指标与对照组比较，说明该样品对大鼠无明显致病作用。

皮肤刺激试验：用涂敷法及划痕后涂敷法共3次刺激，反复激发致敏，对所有豚鼠致敏率为10％，属轻度刺激性。

眼刺激试验：大耳白兔经滴眼后经观察，24小时后结膜呈半闭合，有少许分泌物，充血明显；48h上述症状明显减轻；72h后基本恢复；角膜虹膜未见明显异常，4～7天完全恢复。I.A.O.I.积分指数为10分；M.I.O.I，48h后小于5，眼刺激强度为轻度刺激性。

Claims (10)

1.一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫剂，它由以下含量的原料制成：

2.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫剂，其特征在于，它由以下含量的原料制成：

3.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

4.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫剂，其特征在于它由以下含量的原料制成：

5.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

6.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

7.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

8.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

9.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

10.根据权利要求1所述的一种菜青虫颗粒体病毒苏云金杆菌杀虫可湿性粉剂，它由以下含量的原料制成：

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